חסינות מולדת והזדקנות ספציפית למין אצל צבי מים מתוקים ארוכים (Kinosternon Favescens: Kinosternidae)

תַקצִיר

רקע כללי

הסרת הוויסות המתקדמת של מערכת החיסון עם הגיל, המכונה חיסונית, נחקרה היטב במערכות יונקים, אך מחקרים על תפקוד מערכת החיסון באוכלוסיות ארוכות חיים, פראיות, שאינן יונקות, הם נדירים. במחקר זה, אנו ממנפים מחקר של 38-לכידה מחדש של שנה כדי לכמת את היחסים בין גיל, מין, הישרדות, תפוקת רבייה ומערכת החיסון המולדת של זוחל וארוך-חיים, צבי בוץ צהובים (Kinosternon favescens;טסטודינים; Kinosternidae).

תוסף תוסף cistanche-הגברת חסינות

שיטות

הערכנו שיעורי הישרדות ותמותה ספציפית לגיל לפי מין בהתבסס על נתוני כיבוש מחדש של 1530 נקבות בוגרות ו-860 גברים בוגרים מעל 38 שנות לכידה. ניתחנו יכולת קוטל חיידקים (BC), ושתי תגובות חיסוניות לתאי דם אדומים זרים - הגלוטינציה טבעית בתיווך נוגדנים (NAbs), ויכולת המוליזה מתווכת השלמה (Lys) - ב-200 מבוגרים (102 נשים; 98 גברים) שנעו בין גילאי 7 עד 58 שנתפסו במאי 2018 במהלך הופעתן מברום, ואשר לגביהם היו זמינים תפוקת רבייה ונתונים ארוכי טווח של לכידת סימנים חוזרת.

תוצאות

מצאנו שהנקבות קטנות יותר וחיות יותר מזכרים באוכלוסייה זו, אך שיעור התמותה המואצת לאורך הבגרות זהה עבור שני המינים. לעומת זאת, זכרים הפגינו חסינות מולדת גבוהה יותר מאשר נקבות עבור כל שלושת המשתנים החיסונים שמדדנו. כל התגובות החיסוניות השתנו גם הן בהיפוך עם הגיל, מה שמעיד על חיסונית. עבור נקבות שהתרבו בעונת הרבייה הקודמת, מסת הביצים (ולכן מסת המצמד הכוללת) גדלה עם הגיל. בנוסף ליכולת חיסונית של יכולת קוטל חיידקים, לנקבות שייצרו מצמדים קטנים יותר הייתה יכולת קוטל חיידקים נמוכה יותר.

מסקנות

בניגוד לדפוס החולייתנים הכללי של תגובות חיסוניות נמוכות יותר אצל זכרים מאשר נקבות (המשקף אולי את ההשפעות המדכאות של אנדרוגנים), מצאנו רמות גבוהות יותר של כל שלושת המשתנים החיסונים אצל גברים. בנוסף, בניגוד לעבודה קודמת שלא מצאה עדות להופעת חיסון בצבים צבועים או צבים עם אוזניים אדומות, מצאנו ירידה ביכולת קוטל חיידקים, יכולת תמוגה ונוגדנים טבעיים עם הגיל בצבי בוץ צהובים.

מילות מפתח

תפקוד חיסוני מולד, זוחל, הזדקנות, ספציפי למין, הזדקנות

תוסף תוסף cistanche-הגברת חסינות

רקע כללי

ההזדקנות במערכות חוליות רבות מאופיינת בהזדקנות אורגניזמית - ירידה ביעילות ובביצועים של תהליכים פיזיולוגיים ותאיים [1] המובילה לירידה בהישרדות ובפוריות ספציפיות לגיל עם העלייה בגיל [2]. מחקרים על הזדקנות באוכלוסיות בר של בעלי חוליות התמקדו לעתים קרובות בכימות שינויים הקשורים לגיל בפוריות ובתמותה [3], אך לעתים רחוקות יותר במנגנונים פיזיולוגיים שעשויים לתרום להזדקנות דמוגרפית כזו (למשל, [4-6]). מנגנון פיזיולוגי מועמד כזה הוא תפקוד מערכת החיסון, אשר ממלא תפקיד קריטי בהישרדות. הוכח כי תפקוד חיסוני מופחת משפיע לרעה על הישרדות ורבייה [6-8]. הסרת הוויסות המתקדמת של מערכת החיסון עם הגיל, המכונה חיסונית, נחקרה היטב בבני אדם הן עבור חסינות מולדות (שחוסר ויסות שלהן עם הגיל יכול להוביל לדלקת כרונית [9]), והן חסינות נרכשת, כאשר השינויים הנחקרים ביותר הם עלייה בתאי T זיכרון וירידה בתאי T נאיביים עם העלייה בגיל (אך גם כאן, החיסונית נותרת חידתית [10]). עם זאת, שינויים ספציפיים לגיל במערכת החיסון של אוכלוסיות ארוכות-חיים, פראיות, שאינן יונקות, אינם מתוארים היטב בספרות, ומחקרים המתמקדים בחיסון החיסוני של זוחלים הם אפילו נדירים (נסקרו ב-[8]). הזדקנות אורגניזמית, המולידה הזדקנות דמוגרפית באוכלוסיות, התפתחה בטבע. לפיכך, מחקרים על אוכלוסיות טבעיות ממוקמים היטב לחשוף תהליכי הזדקנות שנשמרו מבחינה אבולוציונית שהם אילוצים אפשריים לאופן ההזדקנות. יחד עם זאת, חקר הזדקנות האורגניזמית והדמוגרפית בטבע מספק הקשרים אקולוגיים מציאותיים וחושף את מידת הגמישות של מנגנוני ההזדקנות. בפרט, לזוחלים יש תכונות רבות הממליצות עליהם למחקרים על מנגנוני ההזדקנות, כולל חיסון. ראשית, הם האחות של היונקים, שיחד יוצרים את הקליפה המונופילטית של מי השפיר; תפקוד מערכת החיסון ומסלולי איתות של תאים נשמרים מאוד על פני מי שפיר (נסקרו ב-[11]). שנית, זוחלים מציגים מספר פנוטיפים המאפשרים מחקר של הזדקנות על פני מגוון הקשרים פיזיולוגיים ומורפולוגיים, דבר שאינו אפשרי ברוב מיני היונקים (למשל, עמידות להיפוקסיה, סבילות להקפאה, ארס, שריון, סבילות לחום, שנסקרו ב-[8 ]). מלבד ציפורים, זוחלים הם פויקילותרמיים, ורבים ממשיכים לגדול כבוגרים (למשל, [12] אך ראה [13]) ולהגדיל את הפוריות שלהם עם הגיל המתקדם ([14–17], נסקר ב-[8]). יתר על כן, לשושלות זוחלים רבות יש תכונות מורפולוגיות ייחודיות. דוגמאות לאלו האחרונים כוללות פנוטיפים מגנים - כמו צלעות חיצוניות בצבים וארס בנחשים מסוימים. ניתוחים פילוגנטיים עדכניים של שיעורי הזדקנות התמותה הראו תמיכה חזקה להשערה שלשושלות זוחלים עם פנוטיפים מגן יש חיים ארוכים יותר והזדקנות איטית יותר מאשר יונקים בגודל דומה, במיוחד על פני צבים [18], (ראה גם [19, 20]). ואכן, על פני 300 מינים של טטרפודים שנדגמו בטבע [18], הצבים היו ייחודיים בכך שכל השושלת התאפיינה במינים עם הזדקנות תמותה כמעט זניחה ותוחלת חיים ארוכה - תחושה המשתקפת בשבי [21]. בהתחשב בכך שהצמיחה (ולכן, הפוריות) עשויה להימשך לאורך החיים הבוגרים, הברירה נגד מוטציות מזיקות עם פנוטיפים בגיל מאוחר עשויה להיות חזקה יותר בגילאים מבוגרים יותר בצבים וזוחלים אחרים בעלי מאפיינים אלה ביחס ליונקים (כמו ב-[22]). תכונות אלו מצביעות על כך שהחיסוניות עשויה שלא להתבטא באותו אופן אצל זוחלים בהשוואה לבעלי חוליות מי שפיר אחרים, כגון יונקים או ציפורים, ואף עשויה להיעדר עקב לחצים סלקטיביים על שמירה על תפקוד מערכת החיסון עם רבייה מוגברת (למשל, [5]) . כאן אנו מתמקדים בהרחבת הנוף ההשוואתי של מחקרי הזדקנות בצבים כדי לקדם את השימוש בהם כמודלים להזדקנות איטית. המערכת החיסונית של צבים, כמו מי שפיר אחרים, כוללת מרכיבים מולדים ונרכשים (נסקרו ב- [23]), אך ניתוחים עדכניים מראים כי זוחלים עשויים להסתמך ביתר שאת על הגנות מולדות ביחס ליונקים וציפורים [24]. באופן ספציפי, למרות שלזוחלים יש תאי B ו-T הקשורים לחסינות אדפטיבית, התגובה המהירה ההסתגלותית המסורתית בחשיפה משנית לפתוגנים עשויה להסתמך ביתר שאת על חסינות מולדת [24]. ישנה ספרות הולכת וגדלה על דפוסים הקשורים לגיל של חסינות מולדת אצל זוחלים אקטרמיים [4, 25-27], המאפשרת קו הגנה ראשון מפני פתוגנים זרים. במקביל, המחקר של הבדלי מין הן בהזדקנות האורגניזמית והן בהזדקנות הדמוגרפית התרחב לכיסוי פילוגנטי טוב יותר, כולל זוחלים [28]. חשוב לציין, מחקרים אלה אפשריים באוכלוסיות בר רק עם יכולת להזדקן במדויק של פרטים, מה שמצריך מחקר ארוך טווח עבור מינים ארוכי טווח ([29, 30], נסקר ב-[31]). כמו כן, אנו מוסיפים לספרות זו על ידי חקירת היבטים של סגוליות מין וגיל של חסינות מולדת, הישרדות, רבייה נשית ומערכות יחסים ביניהן אצל זוחל וארוך ימים. אנו ממנפים מחקר של 38-לכידת סימן מחדש של צבי בוץ צהובים בגילאים ידועים (Kinosternon favescens) לכמת את היחסים בין גיל, מין, הישרדות ותפוקת רבייה על מערכת החיסון המולדת כגישה אינטגרטיבית להבנת חיסוניות. כמו צבים אחרים, נמצא כי למין זה הזדקנות איטית כאשר המינים נחשבים יחד [18]. באופן ספציפי, הערכנו שלושה מדדים חיסוניים מולדים - מחזור נוגדנים טבעיים, יכולת תמוגה בתיווך משלים ויכולת קוטל חיידקים של פלזמה - באוכלוסיית המחקר ארוכת הטווח שלנו בנברסקה (ארה"ב). לפי הפרדיגמה הקיימת של חיסוניות מולדת, חזינו שמדדים של חסינות מולדת יירדו עם הגיל, למרות כמה ראיות להיפך [5, 32].

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

תוצאות

מאתיים בעלי חיים נדגמו בשנת 2018 עבור משתנים חיסוניים (N=98 זכרים, N=102 נקבות) והתצפיות הללו מהוות את נתוני החיסון שלנו. מתוך 102 הנקבות הללו, 85 התרבו בשנת 2017 ואלה מהווים את נתוני הרבייה הנשיים שלנו. לבסוף, לצורך ניתוח הזדקנות התמותה באוכלוסיה כולה, השתמשנו במסד הנתונים לטווח ארוך שלנו של N=2380 פרטים ייחודיים בגילאים ידועים (N=860 זכרים, N=1530 נשים ). במדגם שלנו של מידע חיסוני (200 מבוגרים), גיל היה מתאם מאוד עם גודל הגוף; בעלי חיים מבוגרים היו גדולים יותר הן במסה והן באורך (למשל, מסת גוף, r=0.58, Pr.<0.0001; plastron length, r=0.60, Pr. <0.0001). Therefore body size was not included in models where age was an explanatory factor. In the immune data individuals, adult females were smaller than males and tended to be older (Table 1, Fig. S2), a result that is mirrored in the population as a whole (see Fig. 5 in [33]). Because adult females in our immune sample were significantly older than males, we z-transformed age for all analyses of innate immune function to dissociate the confound of age and sex. This allowed for a comparison of relatively old and young adult males and females.

טבלה 1 הזדקנות גודל, גיל ותמותה בצבי בוץ צהובים

באוכלוסיה כולה, לנקבות היה תוחלת חיים חציונית ומקסימלית גבוהה יותר (גילאים שבהם 50 ו-95% מהמבוגרים מתו). זכרים ונקבות צבים בוגרים הפגינו עליות מוסריות הקשורות לגיל, דבר המעיד על הזדקנות. שיעור התמותה הראשונית של מבוגרים היה גבוה יותר אצל גברים מאשר נקבות, אך שיעורי האצת התמותה היו שווים (טבלה 1, איור 1). בתת-הדגימה החיסונית שלנו של אנשים, שלושת המדדים של תפקוד חיסוני מולד היו בקורלציה מובהקת (חיובית) זה עם זה (המוגלוטינציה טבעית בתיווך נוגדנים, המוליזה בתיווך משלים ויכולת חיידקית, טבלה S1). אבל בגלל המתאמים היו חלשים (כל |r|< 0.28), we analyzed each variable separately. For all three variables, batch represents the reagents used. For bactericidal competence, five individual lyophilized pellets of Escherichia coli were used to generate control plates across the experiment; as control plates decreased in their colony count, a fresh control solution was made. For natural antibodies and cell lysis capability, two separate bottles of rabbit red blood cells were used sequentially. Significant variation among E. coli pellets and individual rabbits (that generate the red blood cells) is expected, and we controlled for it here as a batch effect in our models. All three immune variables declined with advancing age (BC and Lysis, Pr< 0.05; Nabs, Pr=0.08, Table 2, Fig. 2) and were higher in males than females (Table 2, Fig. 3). For the 85 females in our data for which we had both most-recent reproductive output and immune measures, clutch size did not change with age, whereas egg mass increased with age (Tables 3, S2, Fig. 4). Because clutch size did not change with age, a third measure of reproductive effort, total clutch mass followed the identical trend as egg mass and was not considered further. Interestingly, the three females greater than 50 years old had lower age-corrected egg mass (age>50 שנים) מאשר נקבות במרווח הגילאים הנמוך הבא (N=13 גיל 40-50 שנים (t=2.45, Pr.=0.014)), מה שמצביע על אפשרות של הזדקנות בתפוקת הרבייה אצל נקבות מבוגרות מאוד (ראה איור 4). עבור 85 נקבות הרבייה הללו, נקבות מבוגרות עקבו אחר אותה מגמה שנצפתה עבור כל המבוגרים: מופחתת יכולת קוטל חיידקים והמוליזה בתיווך משלים עם הגיל (טבלה 3, ראה איור 1). בנוסף, לנקבות עם מצמדים גדולים יותר - ללא קשר לגיל - הייתה יכולת קוטל חיידקים גבוהה יותר מאלה עם מצמדים קטנים יותר (איור S1). בניגוד לגודל המצמד, לא מצאנו השפעות של מסת ביצים על תפקוד מערכת החיסון (נתונים לא מוצגים).

דִיוּן

יתרונות תוסף cistanche-איך לחזק את המערכת החיסונית

לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche Enhance Immunity

【בקש עוד】 דוא"ל:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

תמותה והזדקנות רבייה

נקבות צבי בוץ צהובות חיות יותר מזכרים באוכלוסייה זו; עם זאת, הם מזדקנים בשיעורים דומים (איור 1), ותמותה ספציפית לגיל עולה עם הגיל בשני המינים (איור 1), אם כי באיטיות. נתונים אלה מדגימים הזדקנות תמותה איטית במין זה, אך לא מצאנו עדות להזדקנות רבייה בדגימות הנקבות שלנו. האצה קטנה בתמותה ספציפית לגיל בוגרים בצבים דווחה במחקר הפילוגנטי הגדול של טטרפודים [18] וכן במחקרים ארוכי טווח בודדים עבור צבי ענק [34], וצבים צבועים ([35, 36] אך ראה [ 37, 38] ומינים של צבים גב ציר [39]); עם זאת, במינים אחרים של צבים, התמותה לרוב נשארת קבועה עם הגיל הבוגר המתקדם [40], או פוחתת עם הגיל [3, 15, 41]. על פני אוכלוסיות שבויות של צבים (למשל, תיעוד גן חיות) da Silva et al. [21] מצא שרוב מיני הצבים הפגינו ירידה איטית או זניחה בתמותה עם הגיל. הזדקנות הרבייה של נקבות (כלומר, ירידה בתפוקת הרבייה הספציפית לגיל) אינה נראית במיני צבים עד כה (צבים מצוירים [30], צבי בלנדינג [15, 41], צבי מדבר [3], וצבי קופסה [42]) . וורנר ועמיתיו [30] ציינו ירידה בהישרדות בקיעת צבים מצוירים מהנקבות המצוירות העתיקות ביותר, למרות שאין ירידה בתפוקת הרבייה. בנוסף, מחקרי רבייה רבים של צבים הראו מתאמים חיוביים בין גודל המצמד, גודל הביצה ו/או מסת המצמד עם גודל הגוף בצבים ([43]; סקירה [44]), כאשר גודל הגוף קשור לעתים קרובות באופן חיובי לגיל ב- צבים (למשל, המחקר הנוכחי, [17, 32], אך ראה [41]). נתונים אלה מצביעים על כך שהזדקנות רבייה מתרחשת רק לעתים נדירות בצבים, אם בכלל.

איור 1 הישרדות ותמותה ספציפית לגיל בזכר ובנקבה K. favescens בוגרים. תוחלת החיים החציונית (50% בחיים) והמקסימלית (5% בחיים) גדולה יותר אצל נקבות בוגרות (קווים שחורים מקווקוים) בצבי בוץ צהובים מאשר אצל זכרים בוגרים (קווים מוצקים אפורים). ציר ה-Y הוא הישרדות Lx למבוגרים, החל מגיל 11. קווים היורדים לציר ה-x מציגים את החציון הספציפי למין ואת תוחלת החיים המקסימלית בגיל כרונולוגי. התוספת מציגה את המודלים של Gompertz של האצת תמותה לאורך הבגרות; התמותה הראשונית של מבוגרים אצל זכרים גבוהה משמעותית מאשר אצל נקבות (הגבהה של קווים), עם עליות מקבילות (שיפועים של קווים) (טבלה 1). ציר ה-Y הוא הלוגריתם הטבעי של תמותה ספציפית לגיל ממודל ההאצה המותאם של Gompertz

אורך חיים והזדקנות ספציפיים למין

מחקרים על הבדלי מין בהזדקנות האורגניזמית והדמוגרפית נותרו נדירים במינים שאינם יונקים. סביר להניח שיש לכך שתי סיבות: דיווחים ראשוניים של דמוגרפיה על אוכלוסיות בר מאגדות לעתים קרובות נתונים כדי להעריך את האצת התמותה; ובמינים רבים המין של הצעירים אינו ידוע עקב חוסר באיברי מין חיצוניים ועליו להסתמך על התפתחותם של פנוטיפים מיניים משניים כדי להקצות מין בחיות בוגרות לאחרונה. בסקירה של נתוני אריכות ימים בשבי, דה סילבה ועמיתיו [21] דיווחו שתוחלת החיים הממוצעת של זכר בוגר עלתה על זו של נקבות בכ-20%, בניגוד לתוצאות שלנו לגבי צבי בוץ צהובים. עם זאת, נראה כי אורך חיים רב יותר אצל נקבות באוכלוסיות פרא של צבים הוא הדוגמה (צבים מצוירים [28, 45]), צבים מנומרים [46, 47], צבי עץ [48], צבי מפה [49] צבים [50], צבי קופסה [51], ומחוונים אדומי אוזניים [52]). לעומת זאת, אנו מודעים לשני מחקרים בלבד שדיווחו כי צבים זכרים חיים יותר מנקבות בטבע (צבי גופר [53] אך ראו [54], ואוכלוסיית צבים מצוירים [36]. יש צורך בנתונים נוספים, אך אלו נתוני שדה מנוגדים לרישומים השבויים המסוכמים על ידי [21], ומציעים אינטראקציה אפשרית בין מין לפי סביבה הקשורה לאריכות ימים והזדקנות.

טבלה 2 ניתוח השונות למשתנים חיסוניים עבור זכר ונקבה בוגרים של צבי בוץ צהובים

תפקוד חיסוני ספציפי למין

מצאנו רמות גבוהות יותר של תפקוד חיסוני אצל זכרים מאשר נקבות, ההפך מהדפוס הכללי בבעלי חוליות [55, 56], ונראה כי היא קשורה לפחות בחלקה לדיכוי מערכת החיסון על ידי אנדרוגנים [57, 58]. מינים רבים של צבים הם מודלים מתאימים לשאלה זו מכיוון שהם חסרים כרומוזומי מין, ולכן למינים יש ארכיטקטורת גנום זהה בעת ההתעברות. במקום זאת יש ל-Tey קביעת מין תלוית טמפרטורה (TSD), לפיה המין נקבע על ידי הסביבה התרמית שחווית בתקופה הקריטית של ההתפתחות העוברית, ומסיר כל בלבול בין גנומים ספציפיים למין והתפתחות מינית ספציפית [59]. לופז-פרז ועמיתיו [60] לא מצאו הבדל בכשירות קוטל חיידקים בין זכרים ונקבות במין של צב מושק (צב קינוסטרני נוסף עם TSD). כמו כן, צימרמן ועמיתיו [32, 61, 62] לא מצאו הבדל בין המינים במדדים של חסינות מולדת בצבים אדומי אוזניים (גם עם TSD). לעומת זאת, בצבים מצוירים [5] - מין אחר עם TSD - דווח על יכולת המוליזה מתווכת משלים גבוהה יותר בזכרים, וטירי נוגדנים טבעיים גבוהים יותר בנקבות, ללא השפעה מינית על יכולת קוטל חיידקים. בנוסף, פרידברג ועמיתיו [63] מצאו שטמפרטורות דגירה קרירות ומייצרות זכר בצב TSD אחר הגבירו את היכולת החיסונית אצל זכרים יותר מאשר נקבות, אך לא מצאו השפעות כאלה אצל קוגננר קרוב. למרות שנראה כי הנתונים הראשוניים הללו מרמזים על כך שצבים עשויים שלא לעקוב אחר דפוס החולייתנים הכללי של תגובות חיסוניות נמוכות יותר אצל זכרים, ברור שיש צורך במחקר נוסף. בעקבות תיאוריית האימונולוגיה האקולוגית המעמידה קשרים בין הגנות חיסוניות ואסטרטגיות היסטוריות חיים [64, 65], היינו מצפים שהמין הארוך יותר ישקיע יותר בחסינות נרכשת יחסית לחסינות מולדת [66]; נתונים מוגבלים על אורך חיים ספציפי למין מונעים בדיקה מקיפה בין המינים.

מערכת חיסון מגבירה צמח cistanche

הבדלים התנהגותיים ודפוסי פעילות עשויים להכפיף נקבות צבי בוץ צהובים ללחצי זיהום גבוהים יותר מאשר זכרים, מה שעשוי לדכא את תפקוד החיסון הנשי [55, 56]. למין המחקר שלנו יש מחזור פעילות שנתי יוצא דופן (ראה שיטות). באתר המחקר שלנו זכרים בוגרים יוצאים מהברומה בממוצע 5 ימים לפני הנקבות באביב [איברסון וגרין, נתונים שלא פורסמו], נשארים פעילים במים ביוני במהלך גיחות הקינון הממושכות של נקבות, ובממוצע עוברים לאיירת קיץ מאוחר יותר מהנקבות [67]. מכאן שתקופת הפעילות השנתית של מין זה קצרה בצורה יוצאת דופן, כאשר זכר טיפוסי פעיל במים ארוך אולי ב-25% מנקבה טיפוסית. עם זאת, לא ברור מדוע עונת הפעילות הקצרה יותר של הנקבות תחשוף אותן ללחצים גדולים יותר של מערכת החיסון. כמו כן, פעילות הרבייה שונה בין זכרים לנקבות, כאשר ההזדווגות וההפריה מתרחשים בעמוד המים, ולאחר מכן הנקבות צריכות לצאת מהמים אל האדמה כדי להפקיד את הביצים שלהן (ולכן לזכרים אין גיחה חובה כזו אל האדמה) [67]. עונתי (למשל, [ריכוזי סטרואידים במחזור זוחלים הם גבוהים של 68, 69]), ולפיכך ניתן לייחס את הדפוס שצפינו של תפקוד חיסוני גבוה יותר אצל זכרים לדגימה רק במהלך הופעת האביב - כלומר מוקדם מאוד בעונה. שונות עונתית באנדרוגנים של צבים נחקרו היטב, ורמות הטסטוסטרון במחזור של צבים זכרים בדרך כלל נמוכות מאוד בתחילת האביב (סקירה ב- [69]), בעוד שהיא מגיעה לשיא באביב עבור נקבות כשהן מתכוננות לביוץ [69– 74]. ידוע כי טסטוסטרון מדכא את תפקוד החיסון ([57], אך ראה [58]) וזה עשוי להסביר את התגובות החיסוניות הנמוכות יותר אצל נשים בהשוואה לגברים. עם זאת, אסטרדיול ידוע כמשפר את התפקוד החיסוני [23], ובדרך כלל הוא מוגבר אצל נקבות בתחילת האביב, ואחריו שיא זמן קצר לאחר מכן בקשר עם הביוץ והביצה ([75], נסקר ב-[69]). לפיכך, בהתבסס על הדגימה המוקדמת שלנו באביב, דפוסי אסטרדיול וטסטוסטרון אינם סבירים הסברים לתגובות החיסוניות הנמוכות יותר שנצפו אצל הנקבות שלנו. למרבה הצער, חסרים לנו נתונים לגבי רמות ההורמונים במחזור במין המחקר שלנו, אבל בהתחשב בדפוסים הכלליים שתוארו זה עתה, ההשפעה של סטרואידים במחזור על תפקוד מערכת החיסון עדיין לא ברורה.

איור 2 החסינות המולדת יורדת עם הגיל ב-K. favescens בוגר. יכולת קוטל חיידקים ותמוגה מתווכת B ירדו עם הגיל באופן דומה עבור צבי בוץ צהובים מבוגרים ונקבות (ראה טבלה 2 לתפוקה סטטיסטית). C נוגדנים טבעיים (NAbs) הראו את אותה מגמה. בכל הלוחות, ציר ה-Y מייצג שאריות ממודלים ליניאריים עם הגיל שהוסר מהמודל (טבלה 2). ציר ה-X הוא עידן שעבר טרנספורמציה ב-Z עם קווים משובצים לציון גיל בשנים עבור זכרים ונקבות צבים בוגרים. רגרסיות: שיירי BC=-{{10}}.138(zAge), R2=0.06; שאריות ליזה=-0.01(zAge), R2=0.02; שאריות NAbs=-0.01(zAge), R2=0.01

רבייה נשית ותפקוד חיסוני

לא מצאנו עדות לעלות חיסונית לרבייה נשית. גם גודל המצמד (טבלה 3) וגם מסת הביצים (הנתונים לא מוצגים) לא השפיעו לרעה על משתנה חיסוני כלשהו. ואכן, לנקבות שהטילו ביצים גדולות יותר הייתה יכולת קוטל חיידקים גבוהה יותר (איור S1). תיאוריית תולדות החיים חוזה שאנשים חייבים להקצות משאבים לתכונות כגון אלו התומכות בתחזוקה עצמית ורבייה על מנת למקסם את הכושר [76]. עם זאת, רבייה מייצגת עלות אנרגטית משמעותית לנקבות, ולפיכך משאבים המוקצים לרבייה עשויים לבוא על חשבון תכונות אחרות [77]. נקבות שמשקיעות רבות ברבייה נוכחית עשויות להיות צפויות לחוות פשרות עם היעילות החיסונית הנוכחית [78]. הפשרה הזו בין רבייה ותפקוד חיסוני נבדקה אצל זוחלים אחרים עם תוצאות מעורבות. נחשי בירית יבשתיים מערביים (Tamnophis elegans) הציגו יכולת שגשוג נמוכה יותר של לימפוציטים מסוג T בתגובה למיטוגן ביחס לבני מינו שאינם גרביים, אך לא הראו הבדלים ב-BC בין מצבי הרבייה [27]. לעומת זאת, נחשי רעשן פיגמיים בהריון (Sistrurus milarius) הפגינו יכולת BC מופחתת ביחס לנחשים שאינם כבדים [79]. מדדים של חסינות מולדת בין מצבי רבייה בצבים צבועים (Chrysemys picta) היו תלויי גיל [5]. באופן ספציפי, נקבות צעירות יותר שהיו להן קלאצ'ים גדולים הפגינו יכולת תמוגה גדולה יותר מאשר נקבות מבוגרות עם מידות קלאץ' גדולות דומות. עם זאת, אותו מחקר מצא BC מוגבר אצל נשים מבוגרות, בניגוד לממצאים במחקר זה של ירידה בתפקוד החיסוני עם העלייה בגיל. בנוסף, ללא קשר לגיל, מצאנו כי גדלי מצמד גדולים יותר היו בקורלציה עם BC גבוה יותר וכי לא הייתה השפעה של רבייה על ייצור נוגדנים טבעיים או יכולת תמוגה. תוצאות אלו מצביעות על כך שהחליפות בין תפקוד מערכת החיסון לרבייה הן כנראה ספציפיות לרכיב החיסון.

איור 3 החסינות המולדת גבוהה משמעותית אצל זכר מאשר נקבה בוגרת K. favescens. חזרה שעברה טרנספורמציה קטנה בריבוע פירושו ±1 SE עבור A) יכולת קוטל חיידקים (ציר y הוא השיעור של מושבות E. coli שנהרגו) ו-B) נוגדנים טבעיים (ציר y הוא טיטר דילול מקסימלי שבו מתרחשת ההאגלוטינציה של תאי דם אדומים של ארנבת ) ותמוגה בתיווך משלים (טיטר דילול מרבי שבו מתרחשת תמוגה של תאי דם אדומים של ארנב). כוכביות מייצגות הבדל מיני משמעותי עבור מדד חיסוני נתון. (ראה טבלה 2 לתפוקה סטטיסטית). LS פירושו: BC=0.37, 0.62; NAbs=4.0, 4.6; Lys=8.2, 9.0

טבלה 3 ניתוח של משתנים חיסוניים ומאמץ רבייה עבור נקבות בוץ צהובות רבייה

איור 4 מסת ביצה, לא גודל המצמד, עולה עם הגיל בהתרבות נקבת K. favescens. ציר ה-Y מייצג שאריות מהמודל הליניארי בטבלה 3 עם הגיל שהוסר מהמודל. שאריות מסת ביצה=0.025(גיל) – 0.73, R2=0.40

חיסונית

מבין המשתנים החיסוניים המולדים שבדקנו בצבי בוץ צהובים, מצאנו עדויות להופעת חיסון בכל השלושה (איור 2; טבלה 2). תוצאות ממחקרים אחרים מעורבות. לדוגמה, מחליקים גדולים יותר (ככל הנראה מבוגרים יותר) בעלי אוזניים אדומות לא הראו שינוי ב-BC בהשוואה לפרטים קטנים יותר [32, 61], בדומה לממצאים לגבי יכולת קוטל חיידקים בצבים מצוירים שבהם הגיל היה ידוע [5]. מחקר אחרון זה דיווח גם על עלייה בהאגלוטינציה בבעלי חיים מבוגרים. ברור שעדיין לא ניכר דפוס של שינויים הקשורים לגיל במערכת החיסון המולדת אצל צבים. בין זוחלים אחרים שאינם עופות, התוצאות משתנות גם כן (נסקרו ב-[8, 26]). לדוגמא באוכלוסיות של נחשי בירית, הן ההאגלוטינציה והן יכולת ההמוליזה יורדות בנחשים מבוגרים [27, 80], וכך גם התגובה החיסונית למיטוגן phytohaemagglutinin בלטאות הצווארון של דיקרסון [81]. בעוד בפיתוני מים, ההאגלוטינציה עולה עם הגיל [82]. מחקר נוסף יהיה נחוץ כדי להבין את השונות הזו בכיוון של שינויים הקשורים לגיל בחסינות מולדת אצל זוחלים באופן כללי, וצבים באופן ספציפי. לעומת זאת, נתונים של יונקים וציפורים מראים באופן כללי ירידה בתפקוד החיסוני עם הגיל. יתר על כן, בטקסיות אלו, רוב החיסוניות שנצפו התרחשה במערכת החיסונית ההסתגלותית [83-85] עם שינויים פחות בולטים שנמצאו בחסינות המולדת (נסקרו ב- [6]), אם כי גם כאן, הדפוסים אינם בהכרח עקביים בכל מדדי חסינות מולדת [ 86]. עם זאת, אצל זוחלים, מערכת החיסון האדפטיבית מגיבה לאט יותר לאתגרים ואינה מציגה תגובות חזקות במהלך חשיפה חוזרת ונשנית של פתוגנים (נסקרה ב- [24, 87]). לפיכך, תפקוד חיסוני מולד ושינויים הקשורים לגיל בתפקוד כזה עשויים להיות קריטיים לבריאות החיסונית הכוללת אצל זוחלים.

מסקנות

כאן ניסינו להרחיב את השיקולים ההשוואתיים של חיסוניות מולדת, והאינטראקציות שלה עם תמותה והזדקנות רבייה. בחרנו אוכלוסיית בר שנחקרה זמן רב של צבים (בוץ צהוב) כדי לבדוק את האסוציאציות בין מדדי ההזדקנות הללו, מכיוון שמחקרים השוואתיים נרחבים לאחרונה זיהו את צבי הצב כבעל הזדקנות איטית במיוחד ותוחלת חיים ארוכה. עם זאת, מדדי מנגנוני הזדקנות דורשים גילאים ידועים, דבר שניתן להשיג רק באמצעות מחקר ארוך טווח עבור מינים פראיים וארוכים. מצאנו כי לתמותה ולחסינות היו מאפיינים ספציפיים למין; הנקבות חיו זמן רב יותר והיו להן תפקוד חיסוני מולד נמוך יותר מאשר לזכרים. תוצאה זו בולטת בהתבסס על תלות הטמפרטורה של קביעת מין, ובכך שוללת תרומות של כרומוזומי מין להזדקנות ספציפית למין. כל שלושת המדדים של חסינות מולדת ירדו עם העלייה בגיל. אצל נקבות, מסת המצמד גדלה עם העלייה בגיל אצל נקבות, ותפוקת הרבייה לא ניבאה תפקוד מולד של מערכת החיסון, מלבד העובדה שלנקבות עם מצמדים גדולים יותר יש יכולת קוטל חיידקים גבוהה יותר, מה שמצביע על עלות ברורה של מאמץ הרבייה לחסינות מולדת אצל נקבות. זהו המחקר הראשון שבוחן שלושה צירי הזדקנות בצבים, קבוצה המאופיינת בהזדקנות איטית עד זניחה. ממצאים אלו על חיסוני, תמותה ורבייה מציעים לצבים כמודל חדש להבנת מנגנוני ההזדקנות האיטית, או ליתר דיוק, חקר מנגנוני ההזדקנות האוניברסליים (כגון חיסוני) בקבוצה מונופילטית המאופיינת בהאצת תמותה איטית של מבוגרים. הזדקנות רבייה זניחה.

שיטות

דגימת שדה

דגימת רקמות עבור צבי הבוץ הצהובים (YMT) עבור מחקר זה התקיימה ב-2 במאי 018 באגם Gimlet באתר המחקר ארוך הטווח שלנו ב-Crescent Lake National Wildlife Refuge (CLNWR), במחוז גארדן, נברסקה , ארה"ב (41 מעלות 45.24′N, 102 מעלות 26.12′W). מתחם הביצות של אגם גימלט הוא אגם חול רדוד (עומק ממוצע 0.8 מ') עם בית גידול ביצות [88]. YMTs מציגים קביעת מין תלוית טמפרטורה (TSD) עם נקבות המיוצרות בתנאי דגירה חמים והן זכרים ונקבות המיוצרים בתנאים קרירים יותר [59]. מחקרים אקולוגיים של לכידת סימנים וקינון נמשכו כאן משנת 1981 עד 2018. באתר זה, YMTs בדרך כלל חורפים יבשתיים קבורים בגבעות חול גבוהות בצמוד לשטחי ביצות, מגיחים באפריל ומאי, ונודדות למים, ואז רוב הנקבות חוזרות למים. אותן גבעות חול לקנן ביוני, אם כי חלקן אינן מתרבות כל שנה [67, 87]. ביולי כל הצבים מתחילים לעזוב את אזורי הביצות כדי לברוח בגבעות החול למשך שארית הקיץ (ראה גם [89]). בעונות השדה הוקמו גדרות סחיפה במקביל לחוף בין שלושה אתרי חורף לאגם, ונוטרו ברציפות מדי יום. במהלך שנים (כולל 2017) שבהן הגדרות היו במקומן בעונת הקינון, כל נקבה שנלכדה צולמה כדי לקבוע את גודל המצמד, ונמדדה רוחב של כל ביצה בכל צילום רנטגן. משוואת רגרסיה המתייחסת לרוחב הממוצע של צילומי הרנטגן למסת הביצים הממוצעת בפועל מתת-קבוצה של קנים שנחפרו לאחר מכן, אפשרה לנו להעריך את מסת הביצה ומסת המצמד (שניהם ב-g) עבור כל נקבה בהריון ב-2017 (n{{24} }). המשוואות עבור קשרים אלה ו-ft הן כדלקמן: רוחב ביצה בפועל=0.98(רוחב ביצה משוער)+1.52, R2=0.89; מסת ביצה בפועל=0.64(מסת ביצה משוערת) – 6.07, R2=0.85; ובמדגם של N=1795 ביצי YMT שנאספו במשך מספר שנים ניתן להשתמש בצורה מהימנה ברוחב הביצה כדי להעריך את מסת הביצים (ולכן מסת הביצה הכוללת) מסת הביצה=0.68(ביצית רוחב) – 6.77, R2=0.85 (איברסון, נתונים שלא פורסמו). זה איפשר לנו לבחון את ההשפעות של אותם מדדים של תפוקת רבייה על חסינות באביב 2018, כאשר 85 נקבות הצבים הללו יצאו מהברומציה. לאחר לכידתו, הצבים הועברו חזרה למעבדת השדה, שם תועדו נתונים מורפומטריים, כולל אורך השדרה המקסימלי (CL במ"מ), אורך הפלסטרון המרבי (PL במ"מ), ומסת הגוף (BM in g). עד 0.5 מ"ל של דם מלא נאסף מהסינוס הצווארי באמצעות מזרק 26 גאוג' הפריניזציה, ובוצע בצנטריפוגה (7000 סל"ד) ב-cryotube למשך 5 דקות להפרדת מרכיבי הדם. פלזמת דם הועברה לפיפטה לצינור קריוטוק נפרד. גם פלזמה וגם תאי דם אדומים ארוזים הוקפאו מיד בחנקן נוזלי עד שהועברו לאוניברסיטת איווה סטייט לאחסון ב-80 מעלות. צבים שנדגמו (98 זכרים ו-102 נקבות) הועברו חזרה למקום הלכידה הראשוני שלהם ושוחררו בצד הנגדי של הגדר כדי להמשיך אל האגם.

קביעת גיל

מאז החל מחקר זה בשנת 1981, הגיל בשנים עם לכידה ראשונית של כל צב נאמד כמספר החורפים שלאחר הבקיעה. הערכת הגיל זהה מדי שנה, ולכן, השיטות שלנו לקביעת גיל חלות על כל הנתונים הנחשבים כאן (אוכלוסיה ותת מדגם חיסוני). כיוון שרק טבעת סקוטית אחת נוצרת בכל שנה באוכלוסייה זו, גילם של צבים לא בוגרים בדרך כלל שווה למספר הכולל של הטבעות הקיימות. עם זאת, במהלך שנים קשות ביותר, ייתכן שלא תהיה צמיחה כלשהי, ושתי טבעות עשויות להופיע כאחת. לפיכך, ספירות של טבעות הן גילאי מינימום ועשויות להמעיט בהערכת טבעות אם לא סופרים ומוערכים בהקשר של דפוסי גידול קונכיות כלליים בכל האוכלוסייה. על ידי השוואת דפוס הגידולים בגדילת הצבים של צב צעיר שטרם התבגר עם הדפוס הכללי של צמיחת הסקוט באוכלוסיה, ניתן היה לקבוע באופן מהימן את גיל הלכידה הראשונה עד 12 שנים לפחות. ספרנו את המספר המינימלי של טבעות על צבים בוגרים שנלכדו בשנים הראשונות של המחקר, והגיל נאמד עבור כל הצבים הללו אם מספר הטבעות היה פחות מ-20. עם זאת, רוב הצבים סומנו בתחילה בנפרד והתיישנו לפני החורף השישי שלהם, ולאחר מכן התיישנו על סמך מרווח הלכידה מחדש בפועל. נקבות בוגרות היו מבוגרות יותר (וקטנות יותר) מזכרים בדגימות שלנו (טבלה S3; מבחן t לא מזווג, P=0.0003, ראה איור S2 ואיור 5 ב-[33]). לכן הגיל השתנה ב-z בתוך כל מין לממוצע של 0 עם שונות יחידה. משתנה זה "גיל" שימש בכל הניתוחים הסטטיסטיים. לא כללנו נתונים מ-26 נערים ללא מין.

ניתוח רבייה

תפוקת הרבייה - גודל המצמד, מסת המצמד הכוללת - גדל עם הגדלת הגודל והגיל. לכן, עבור הניתוחים שכללו תפוקת רבייה נשית יחד עם גיל במודל, השתמשנו בערכים גולמיים של תפוקת רבייה ללא תיקון לגודל הגוף. כל המודלים הליניאריים בוצעו ב-SAS v. 9.4 (SAS Institute, Cary, NC, ארה"ב).

ניתוח הישרדות

שיעורי הישרדות ותמותה ספציפיים לגיל של קנוסטרנון בוגרים ממערב נברסקה נאמדו בהתבסס על מודל Gompertz (טבלה 1) [18, 90, 91] אשר מעריך הסתברות לתמותה ראשונית בגיל ההתחלה, ואת שיעור התמותה המואצת לאורך כל אורך חיים, משך חיים. מודלים מסובכים יותר (למשל, כולל מונח מקהאם קבוע לתמותה בלתי תלויה בגיל, כולל פרמטר האטה) לא נתמכו על ידי נתונים אלה על סמך השינוי ב-AIC (מחושב בחבילת BaSTA R [90]). מודלים של Gompertz יושמו על סט הנתונים ארוכי הטווח שלנו לכידת סימנים מאגם Gimlet, כולל נתונים מ-1530 נקבות בודדות ו-860 זכרים בודדים. גיל בגרות היה ממוצע של 11 שנים לשני המינים, הידוע ממעקב ארוך טווח של גיל ורבייה באוכלוסייה זו [88, 92, 93]. מכיוון שההתבגרות תלויה בגודל, הערכות אלו של גיל ההתבגרות (כלומר, 11 שנים) הן הערכות מקסימליות (לדוגמה, ניתן לזהות צב זכר מזדמן בגילאים צעירים יותר). בדקנו את הרגישות של שימוש בגיל התבגרות ממוצע של 10 שנים ללא השפעה ניכרת על הערכות תוחלת חיים ותמותה הזדקנות (לא מוצגים נתונים). תוחלת החיים המקסימלית והחציונית למבוגרים חושבו כמספר השנים לאחר גיל ההתרבות הראשונה עד 95 ו-50% מהמבוגרים בקבוצה הסינתטית הוערכו כמתו. מערכי נתונים נותחו באמצעות הפונקציה 'באסטה' מחבילת BaSTA עבור R [90].

אמצעים חיסוניים

דווח כי הגלוטינציה טבעית בתיווך נוגדנים ויכולת המוליזה מתווכת משלים (NAbs, Lysis) הם קו ההגנה הראשון מפני פתוגנים בבעלי חוליות (נסקרו ב- [94]), ומדדים אלה של תפקוד חיסוני מולד נחקרו אצל זוחלים רבים. מינים (למשל, [4, 5, 32, 80, 82, 95]). השלמנו את המבחנים עבור NAbs ויכולת תמוגה על פי מבחן המוליזה-האגלוטינציה המותאם מ- [96] לשימוש בצבים צבועים [5, 97]) באמצעות תאי דם אדומים של ארנב. השתמשנו בשני בקבוקים של תאי דם אדומים של ארנב (HemoStat HemoStat Laboratories, Dixon, CA, ארה"ב) כדי להשלים את כל המבחנים. הרצנו את כל הצלחות עם בקרות חיוביות ושליליות ודגימות בכפולות. טיטר גבוה יותר להאגלוטינציה מצביע על שפע גדול יותר של נוגדנים טבעיים בדגימת הפלזמה, שכן טיטר גבוה הם אינדיקציה לכך שהנוגדנים הטבעיים נמצאים בריכוז גבוה אפילו בפלזמה מדוללת יותר ויותר [96]. באופן דומה, טיטר גבוה יותר עבור המוליזה מצביע על כך שהפלזמה מסוגלת לרזות RBC אפילו בריכוזים מדוללים יותר [96]. לפיכך, עלייה ברמות נוגדנים טבעיים ויכולת תמוגה קשורות לתפקוד חיסוני מוגבר. הערכנו את יכולת החיידקים (BC) של פלזמה על ידי כימות יכולתה לעכב את הצמיחה של Escherichia coli באמצעות הפרוטוקול שפורסם עבור צבים צבועים [5, 97], מותאם מ- [98]. בניסוי הנוכחי נעשה שימוש בחמש כדוריות ליופיליות של E. coli (Microbiologics, ATCC#8739), כאשר כל כדור חדש שימש לייצור תמיסת בקרה חדשה ככל שהתקדמנו בדגימות. יכולת מוגברת של קוטל חיידקים תואמת לתפקוד חיסוני מוגבר. כל מבחני החיסון נערכו באביב 2019 על דגימות שנאספו באביב 2018.

מדד חיסוני: ניתוחים סטטיסטיים

משתנים תלויים נותחו באמצעות מודלים ליניאריים כלליים עם משתנים מסבירים של zAge (גיל מתוקנן בכל מין); מין (זכרים בוגרים ונקבות בוגרות); האינטראקציה הדו-כיוונית בין zAge למין; ואת אצווה הניסוי המשתנה של מטרד (BC: N=4; NAbs ו-lysis: N=2) כדי לקחת בחשבון את כדורי הבקרה (BC) או בקבוק של תאי דם אדומים של ארנב (NAbs ו-lysis). יכולת קוטל חיידקים עברה טרנספורמציה של Arcsine כדי לתת מידע פרופורציונלי ולעמוד בתנאים של נורמליות. NAbs וליסיס הומרו ביומן-10 כדי לעמוד בתנאים של נורמליות. כל המודלים הליניאריים בוצעו ב-SAS v. 9.4 (SAS Institute, Cary, NC, ארה"ב). גרפים נעשו ב-ggplot2 [99].

הפניות

1. Harman D. Aging: סקירה כללית. Ann NY Acad Sci. 2001;928:1–21.

2. Ricklefs RE. האבולוציה של הזדקנות מנקודת מבט השוואתית. פונקציה Ecol. 2008;22:379–92.

3. Jones OR, Scheuerlein A, Salguero-Gómez R, Camarda CG, Schaible R, Casper BB, et al. מגוון ההזדקנות על פני עץ החיים. טֶבַע. 2014;505(7482):169–73.

4. Schwanz L, Warner DA, McGaugh S, Di Terlizzi R, Bronikowski AM. תחזוקה פיזיולוגית תלוית מצב באקותרמיה ארוכת חיים, הצב הצבוע (Chrysemys picta). J Exp Biol. 2011;214:88–97.

5. Judson JM, Reding DM, Bronikowski AM. חיסונית והשפעתה על רבייה אצל חולייתנים ארוכי חיים. J Exp Biol. 2020;223:jeb223057.

6. Peters A, Delhey K, Nakagawa S, Aulsebrook A, Verhulst S. Immunosenescence בחיות בר: מטה-אנליזה והשקפה. אקול לט. 2019;22:1709–22.

7. Schmid-Hempel P. וריאציה בהגנה החיסונית כשאלה של אקולוגיה אבולוציונית. Proc R Soc B. 2003;270(1513):357–66.

8. Hoekstra LA, Schwartz TS, Sparkman AM, Miller DA, Bronikowski AM. הפוטנציאל הבלתי מנוצל של המגוון הביולוגי של זוחלים להבנה כיצד ומדוע בעלי חיים מזדקנים. פונקציה Ecol. 2020;34:38–54.

9. Franceschi C, Capri M, Monti D, Giunta S, Olivieri F, Sevini F, et al. הסברה ומניעת הדבקה: פרספקטיבה מערכתית על הזדקנות ואריכות ימים עלתה ממחקרים בבני אדם. Mech Age Develop. 2007;128:92–105.

10. Pawelec G, Bronikowski AM, Cunnane SC, Ferrucci L, Franceschi C, Fülöp T, Gaudreau P, Gladyshev VN, Gonos ES, Gorbunova V, Kennedy BK, Larbi A, Lemaître JF, Liu GH, Maier AB, Morais JA, Nóbrega OT, Moskalev A, Rikkert MO, Seluanov A, Senior AM, Ukraintseva S, Vanhaelen Q, Witkowski J, Cohen AA. החידה של מערכת החיסון האנושית היא "הזדקנות". Mech Age Develop. 2020;192.

11. שוורץ TS, ברוניקובסקי AM. מסלולי מתח מולקולרי והתפתחות הרבייה וההזדקנות אצל זוחלים. בתוך (T. Flatt & A. Heyland, eds.) מנגנונים מולקולריים של אבולוציה של היסטוריית החיים. אוקספורד: Oxford Univ Press; 2011. עמ'. 193–209

12. ארמסטרונג DP, Keevil MG, Rollinson NJ, Brooks RJ. שונות אינדיבידואלית עדינה בצמיחה בלתי מוגדרת מובילה לשונות גדולה בהישרדות ובתפוקת רבייה לכל החיים אצל זוחל מאריך ימים. פונקציה Ecol. 2007;32:752–61.

13. Omeyer LCM, Fuller WJ, Godley BJ, Snape RTE, Broderick AC. צמיחה נחושה או בלתי מוגדרת? ביקור מחדש באסטרטגיית הצמיחה של צבי ים. Mar Ecol Prog Ser. 2018;596:199–211.

14. ברוניקובסקי AM, ארנולד SJ. האקולוגיה האבולוציונית של תולדות החיים בנחש הבירית Thamnophis elegans. אֵקוֹלוֹגִיָה. 1999;80:2314–25.

15. Congdon JD, Nagle RD, Kinney OM, van Loben Sels RC. השערות להזדקנות אצל חולייתן ארוכות חיים, צב בלנדינג (Emydoidea blandingii). Exp Gerontol. 2001;36:813–27.

16. Wilkinson PM, Rainwater TR, Woodward AR, Leone EH, Carter C. קביעת גדילה ותוחלת רבייה בתנין האמריקאי (Alligator mississippiensis): עדויות מלכידות חוזרות ארוכות טווח. Copeia. 2016;104:843–52.

17. Hoekstra LA, Weber RC, Bronikowski AM, Janzen FJ. צמיחה ספציפית למין, צורה והשפעותיהן על היסטוריית חייו של חולייתן ארוכות ימים. Evol Ecol Res. 2018;19(6):639–57.

18. Reinke BA, Cayuela H, Janzen FJ, Lemaître JF. Gaillard JM, ועוד 110 אחרים. קצבי הזדקנות מגוונים בטטרפודים אקטרמיים מספקים תובנות לגבי התפתחות ההזדקנות ואריכות החיים. מַדָע. 2022;376:1459–66.

19. Berkel C, Cacan E. ניתוח אריכות ימים בצ'ורדטה מזהה מינים עם אורך חיים יוצא דופן בין הטסים ומצביע על התפתחות תוחלת חיים ארוכה יותר. ביוגרונטול. 2021;22:329–43.

20. Stark G, Tamar K, Itescu Y, Feldman A, Meiri S. אקטותרמים קרים ומבודדים: מניעים של אריכות ימים זוחלים. Biol J Linn Soc. 2018;125:730–40.

21. da Silva R, Conde DA, Baudisch A, Colchero F. הזדקנות איטית וזניחה בקרב Testudines מאתגרת תיאוריות אבולוציוניות של הזדקנות. מַדָע. 2022;376:1466–70.

22. צ'רלסוורת' ב' פישר, מדוואר, המילטון והתפתחות ההזדקנות. גנטיקה. 2000;156:927–31.

23. צימרמן LM, Vogel LA, Bowden RM. הבנת מערכת החיסון של בעלי החוליות: תובנות מנקודת המבט של הזוחלים. J Exp Biol. 2010;213:661–71.

24. צימרמן ל.מ. נקודת המבט של הזוחלים על חסינות בעלי חוליות: 10 שנים של התקדמות. J Exp Biol. 2020;223(Pt 21):jeb214171.

25. Palacios MG, Ganglof EJ, Reding DM, Bronikowski AM. רקע גנטי וסביבה תרמית משפיעים באופן דיפרנציאלי על האונטוגניות של רכיבים חיסוניים במהלך החיים המוקדמים של חולייתן אקטרמי. J Anim Ecol. 2020;89:1883–94.

26. Field EK, Hartzheim A, Terry J, Dawson G, Haydt N, Neuman-Lee LA. אימונולוגיה מולדת של זוחלים ואקואימונולוגיה: מה אנחנו יודעים ולאן אנחנו הולכים? אינטגרה קומפ ביול. 2022;62:1557–71.

27. Palacios MG, Bronikowski AM. שונות חיסונית במהלך ההריון מרמזת על עלויות ספציפיות לרכיבים חיסוניים של רבייה בנחש חיסוני עם אסטרטגיות היסטוריות חיים שונות. J Exp Zool Part A. 2017;327:513–22.

28. Bronikowski AM, Meisel RP, Biga PR, Walters JR, Mank JE, Larschan E, et al. הזדקנות ספציפית למין בבעלי חיים: פרספקטיבה וכיוונים עתידיים. תא מזדקן. 2022;21:e13542.

29. Reed TE, Kruuk LE, Wanless S, Frederiksen M, Cunningham EJ, Harris MP. הזדקנות רבייה בציפור ימית ארוכה: שיעורי הירידה בביצועים מאוחרים בחיים קשורים בעלויות משתנות של רבייה מוקדמת. אני נאט. 2008;171:E89–E101.

30. Warner DA, Miller DA, Bronikowski AM, Janzen FJ. עשרות שנים של נתוני שטח מגלים שצבים שורדים בטבע. Proc Natl Acad Sci US A. 2016;113(23):6502–7.

31. Reinke BA, Miller DAW, Janzen FJ. מה לימדו אותנו מחקרי שטח ארוכי טווח על דינמיקת אוכלוסיה? Ann Rev Ecol Evol Sys. 2019;50(1):261–78.

32. צימרמן LM, Bowden RM, Vogel LA. לצבים אדומי אוזניים אין תגובה לחיסון עם המוציאנין של חור המנעול, אך יש להם רמות גבוהות של נוגדנים טבעיים. גן החיות של ISRN. 2013א;2013:1–7.

33. אייברסון ג'יי.בי. כשל גיוס בתיווך אקלים באוכלוסיית צבים והשפעתה על גבולות התפוצה הצפוניים. חסרונות צ'לוני ביול. 2022;21(2):181–6.

34. Gibson CWD, Hamilton J. תהליכי אוכלוסייה בזוחל אוכל עשב גדול: הצב הענק של אלדאברה אטול. אוקולוגיה. 1984;61:230–40.

35. Miller DAW, Janzen FJ, Fellers GM, Kleeman PM, Bronikowski AM. ביודמוגרפיה של טטרפודים אקטרמיים מספקת תובנות לגבי האבולוציה והפלסטיות של דפוסי תמותה. בתוך: ויינשטיין מ', ליין MA, עורכים. חברתיות, היררכיה, בריאות: ביודמוגרפיה השוואתית. וושינגטון די.סי.: National Academies Press; 2014. עמ'. 295–313.

36. Reinke BA, Hoekstra L, Bronikowski AM, Janzen FJ, Miller DAW. הערכה משותפת של צמיחה והישרדות מנתוני סימן-לכידה חוזרת כדי לשפר הערכות של הזדקנות באוכלוסיות בר. אֵקוֹלוֹגִיָה. 2020;101(1):e02877. https://doi.org/10.1002/ecy.2877.

37. Keevil, MG 2020. הערכה משותפת של צמיחה והישרדות מנתוני סימן-לכידה חוזרת כדי לשפר הערכות של הזדקנות באוכלוסיות בר: הערה. אקולוגיה e03232. https://doi.org/10.1002/ecy.3232.

38. ברוניקובסקי AM, Reinke BA, Hoekstra L, Janzen FJ, Miller DAW. הערכה משותפת של צמיחה והישרדות מנתוני סימן-לכידה חוזרת כדי לשפר הערכות של הזדקנות באוכלוסיות בר: תשובה. אֵקוֹלוֹגִיָה. 2022:103:e03571. https://doi.org/10.1002/ecy.3571.

39. Cayuela H, Akani GC, Hema EM, Eniang EE, Amadi N, Ajong SN, et al. היסטוריית חיים ותהליכי תמותה תלויי גיל בזוחלים טרופיים. Biol J Linn Soc. 2019;128:251–62. 40. Gibbons JW. למה צבים חיים כל כך הרבה זמן? מדע ביולוגי. 1987;37:262–9.

41. קונגדון JD, ואן לובן סלס RC. יחסים של תכונות רבייה וגודל גוף עם השגת בגרות מינית וגיל בצבים של בלנדינג (Emydoidea blandingii). J Evol Biol. 1993;6:547–57.

42. מילר ג'יי קיי. הזדקנות בורחת: נתונים דמוגרפיים מצב התיבה עם שלוש אצבעות (Terrapene Carolina Triunguis). Exp Gerontol. 2001;36(4–6):829–32.

43. מול EO. מחזורי רבייה והסתגלות. בתוך: Harless M, Morlock H, עורכים. צבים: נקודות מבט ומחקר. מלאבר, פלורידה: ג'ון ווילי ובניו; 1979. עמ'. 305–20.

44. Iverson JB, Lindeman PV, Lovich J. הבנת אלומטריית רבייה בצבים: מדרון חלקלק. Ecol Evol. 2019;9:11891–903.

45. אייברסון ג'יי.בי. Chrysemys picta bellii (צב צבוע מערבי). אֲרִיכוּת יָמִים. Herpetol Rev. 2022;53:484.

46. ​​ליצגוס JD. הבדלים בין המינים באורך החיים של הצב המנוקד (Clemmys guttata). Copeia. 2006;2006:281–8.

47. ארנסט צ'. גידול הצב המנוקד (Clemmys guttata). J Herp. 1975;9:313–8.

48. בראון DJ, Schrage M, Ryan D, Moen RA, Nelson MD, Buech RR. Glyptemys insculpta (צב עץ) אריכות ימים בטבע. Herpetol Rev. 2015;46:243–4.

49. Iverson JB, Smith GR, Rettig JE. גודל גוף, גדילה ואריכות ימים בצב המפה הצפוני (Graptemys גיאוגרפי) באינדיאנה. J Herp. 2019;53:297–301.

50. Munscher E, Campbell K, Hauge JB, Hootman T, Osborne W, Butterfeld BP, et al. Pseudemys foridana peninsularis (Cooter חצי האי) ו- Pseudemys nelsoni (Cooter אדום-בטן פלורידה). אֲרִיכוּת יָמִים. Herpetol Rev. 2020;51:111–3.

51. Lewis EL, Iverson JB. Terrapene ornata (צב קופסה מקושט). אֲרִיכוּת יָמִים. Herpetol Rev. 2018;49:530.

52. Lewis EL, Iverson JB, Smith GR, Rettig JE. גודל הגוף והגדילה במחוון האדום (Trachemys scripta) בקצה הצפוני של הטווח שלו: האם הכלל של ברגמן חל? Herp Conserv Biol. 2018;13:700–10.

53. Curtin AJ, Zug GR, Spotila JR. אסטרטגיות אריכות ימים ואסטרטגיות גדילה של צב המדבר (Gopherus agassizii) בשני מדבריות אמריקאים. J Arid Environ. 2009;73:463–71.

54. Medica PA, Nussear KE, Esque TC, Saethre MB. גידול ארוך טווח של צבי מדבר (Gopherus agassizii) באוכלוסיית דרום נבאדה. ג'יי הרפטול. 2012;46:213–20.

55. קליין SL. הורמונים ומערכות הזדווגות משפיעים על הבדלים בין המינים והמינים בתפקוד החיסוני בקרב בעלי חוליות. Behav Proc. 2000;51:149–66.

56. קליין SL. מנגנונים הורמונליים ואימונולוגיים המתווכים הבדלי מין בזיהום טפיל. טפיל אימונול. 2004;26:247–64.

57. Foo YZ, Nakagawa S, Rhodes G, Simmons LW. ההשפעות של הורמוני המין על תפקוד מערכת החיסון: מטה-אנליזה. Biol Rev. 2007;92:551–71.

58. Kelly CD, Stoehr AM, Nunn C, Smyth KN, Prokop ZM. דימורפיזם מיני בחסינות בין בעלי חיים: מטה-אנליזה. אקול לט. 2018;21:1885–94.

59. Janzen FJ, Paukstis GL. קביעת מין סביבתית אצל זוחלים: אקולוגיה, אבולוציה ועיצוב ניסיוני. Q Rev Biol. 1991;66(2):149–79.

60. López-Pérez JE, Meylan PA, Goessling JM. סחר מבוסס מין במערכות החיסון המולדות והנרכשות של Sternotherus minor. J Exp Zool. 2021;333:820–8.

61. צימרמן LM, Paitz RT, Vogel LA, Bowden RM. וריאציה בדפוסים העונתיים של חסינות מולדת וסתגלנית במחוון אדום האוזניים (Trachemys scripta). J Exp Biol. 2010;213:1477–148358.

62. Zimmerman LM, Clairardin SG, Paitz RT, Hicke JW, LaMagdeleine KA, Vogel LA, et al. התגובות החיסוניות ההומורליות נשמרות עם הגיל באקטותרמה ארוכת חיים, צב המחליק האדום. J Exp Biol. 2013ב;216:633–40.

63. Freedberg S, Greives TJ, Ewert MA, Demas GE, Beecher N, Nelson CE. סביבת הדגירה משפיעה על התפתחות מערכת החיסון בצב עם קביעת מין סביבתית. ג'יי הרפטול. 2008;2008(42):536–41.

64. לי ק.א. קישור הגנות חיסוניות והיסטוריית חיים ברמות הפרט והמין. אינטגר קומ ביול. 2006;46:1000–15.

65. Sheldon BC, Verhulst S. אימונולוגיה אקולוגית: הגנות טפילים יקרות וסחר באקולוגיה אבולוציונית. טרנדים Ecol Evol. 1996;11:317–21.

66. Palacios MG, קאניק JE, ברוניקובסקי AM. יחסי הגומלין המורכבים של מצב, היסטוריית חיים והסביבה השוררת מעצבים את ההגנות החיסוניות של נחשים בטבע. Physiol Biochem Zool. 2013;86:547–58.

67. אייברסון ג'יי.בי. קינון וטיפול הורים בצב, Kinosternon favescens. יכול ג'יי זוול. 1990;68:230–233.

68. Licht P. דפוסים אנדוקריניים במחזור הרבייה של צבים. Herpetologica. 1982;38:51–61.

69. Graham SP, Ward CK, Walker JS, Sterrett S, Mendonça MT. דימורפיזם מיני וריאציה מינית של הורמוני רבייה בצב המפה של Pascagoula, גיבונים של Graptemys. Copeia. 2015;103:42–50.

70. Shelby JA, Mendonça MT, Horne BD, Seigel RA. וריאציה עונתית בסטרואידי רבייה של זכר ונקבה של צבי מפה צהובי כתמים, Graptemys favimaculata. Gen Comp Endocrinol. 2000;119:43–51.