זיהוי של תגובה חיסונית הומורלית ותאית לחיסון נגד SARS-CoV-2 BNT162b2 בנשים מניקות ובאנשים נאיביים ונדבקים בעבר

מחקר זה חקר תגובות הומוראליות ותאיות לחיסון האנטי-SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA בנשים מניקות ובאנשים תמימים וסרו-חיוביים בששת החודשים הראשונים לאחר החיסון. 61 מתנדבים שחוסנו בשתי מנות של חיסון mRNA BNT162b2 נרשמו למחקר. ELISA שפותח בבית שימש לכימות של נוגדנים ספציפיים ל-SARS-CoV-2 ל-RBD. ביטוי סמן משטח התא וניתוח IFN- תוך תאי בוצעו על ידי ציטומטריית זרימה. הריכוזים של IFN-, IL-6 ו-TNF נקבעו על ידי ELISA. עלייה משמעותית ברמות נוגדני IgG נגד RBD נצפתה 14 ימים לאחר מנת החיסון הראשונה (p< 0.0001) in serum and milk. The expression of CD28 on CD4+ T cells was significantly higher compared to baseline (p< 0.05). There was a significant increase (p≤ 0.05) in the B cell lymphocyte subset after revaccination and an increased percentage of CD80+ B cells. The expression of IFN-γ in peripheral blood lymphocytes, CD3+ T cells, and serum was significantly increased (p< 0.05). No significant difference in immune response was observed between breastfeeding women and other study participants. The anti-SARS CoV-2 BNT162b2 mRNA vaccine induced measurable and durable immune response in breastfeeding women and naïve and previously infected individuals. 

יתרונות cistanche לגברים - מחזקים את המערכת החיסונית

לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche Enhance Immunity

【בקש עוד】 דוא"ל:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. הקדמה 

התפוצה העולמית של נגיף SARS-CoV-2 לאחר שהמקרה המיוחד הראשון נרשם ב-31 בדצמבר 2019 בווהאן, סין, הובילה למגיפה עולמית של מחלת הקורונה-19 (COVID{{ 5}}), עם כ-648 מיליון מקרים ו-6.6 מיליון מקרי מוות עד 18 בדצמבר 20221. תמותה ב-COVID-19 נקשרה לייצור יתר של ציטוקינים פרו-דלקתיים כגון IL-6, TNF- ו- IL-1, מה שמכונה "סערת ציטוקינים", שעלולה להוביל לתסמונת מצוקה נשימתית חריפה ולנזק נרחב לרקמות הגורם לאי ספיקת איברים רבים2. עם זאת, שיפורים מהירים באבחון, בטיפול והכנסת החיסון היו צפויים לתרום לירידה מתמדת במספר הנדבקים, לצורך באשפוז ובסופו של דבר להפחתה בשיעור התמותה. בסרביה, המקרה הראשון הרשום הרשמי אירע ב-6 במרץ 2020, והחיסון החל ב-24 בדצמבר 2020. נכון לעכשיו, ישנם ארבעה חיסונים זמינים לאוכלוסייה הכללית, Vero Cell-Inactivated (Sinopharm), Vaxzevria (ChAdOx{{ 22}}S [רקומביננטי], AstraZeneca), Sputnik V (Gam-COVID-Vac, Gamaleya) ו-Comirnaty (BNT162b2, BioNTech–Pfizer). בנוסף לייצור של נוגדנים ספציפיים, התגובה החיסונית היעילה נגד SARS-CoV-2 דורשת הפעלה של חסינות תאית. המרכיבים של חסינות תאית, כולל תאי תקליטור מסייע4+ ותאי CD8+ ציטוטוקסיים, תאי רוצח טבעי (NK) ותאי B, במהלך השעות והימים הראשונים לאחר החשיפה לנגיף זה צפויים להפחית את תסמיני המחלה, למנוע התקדמות המחלה, אשפוז ומוות. תאי T-helper (T) פעילים יכולים להרוג באופן עקיף תאים נגועים, ולתמוך בתפקוד תאי B ובתגובת נוגדנים, על ידי ייצור אינטרפרון (IFN-)3,4. הוכח שהפנוטיפ T1 קשור בחומרה נמוכה יותר של מחלת COVID-195, ולכן אסטרטגיות לפיתוח חיסוני COVID-19 צריכות לשקול גם את האפשרות של הפעלה של תאי T לייצור IFN. דווח כי חסינות סלולרית ל-SARS-CoV-2 ניתנת לזיהוי עד 6 חודשים לאחר ההדבקה בלמעלה מ-90% מהאנשים6. לפיכך, היה צפוי שחיסון יגרום לחסינות תאית מדידה שתתרום למאבק במגיפה. תוצאות חדשות הראו שמלבד הפעלת תאי B במרכזי נבט7, חיסוני mRNA נגד SARS-CoV-2 צריכים ליצור תגובות CD4+ ו-CD8+ ספציפיות לחלבון תאי T8. למרות שטיטר נוגדנים בדרך כלל מתאם עם יעילות החיסון, תאי B ו-T חשובים בהגנה בעת חשיפה חוזרת לאנטיגנים של וירוסים. תאי זיכרון B ו-T אלו צפויים להיווצר על ידי חיסוני mRNA SARS-CoV-2 וצריכים להיות להם תפקיד בשליטה על שכפול הנגיף, תוך הגבלת הפצת נגיפי9. למרות שלא דווחו תופעות לוואי חמורות, התגובה הספציפית לחיסון נגד SARS-CoV-2 בנשים הרות ומניקות ותינוקות שאמהותיהם קיבלו את החיסון במהלך ההנקה עדיין בהערכה ונשארת נושא שנוי במחלוקת10,11. מחקר זה נועד לחקור לראשונה את התגובות ההומורליות והתאיות החודשיות לחיסון נגד SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA בנשים מניקות ובאנשים נאיביים וסרו-חיוביים, בששת החודשים הראשונים לאחר החיסון בסרביה, וכן מעקב עצמי של שנתיים אחר בטיחות לטווח ארוך.

חומר ושיטות

לימוד עיצוב ואיסוף ועיבוד דוגמאות.

סך של 61 מתנדבים (45 SARS-CoV-2 תמימים, 16 SARS-CoV-2 התאוששו לפי דיווחים שאושרו PCR) נרשמו למחקר ונוטרו בתקופה מינואר עד 2 בנובמבר{ {11}}21. הזמן הממוצע בין ההדבקה הטבעית לחיסון באנשים שנדבקו בעבר היה 3.18±0.98 חודשים, עם טווח של 2-5 חודשים. כל המשתתפים היו מבוגרים מגיל 18 ולא הראו סימנים לזיהומים בדרכי הנשימה בזמן החיסון. רוב המשתתפים היו עובדי בריאות מהמכון לאונקולוגיה ורדיולוגיה של סרביה (44; 72%). המשתתפים חוסנו בשתי מנות של חיסון ה-BNT162b2 mRNA (בהפרש של 3 שבועות). כל בדיקות הדם בוצעו במרכזים רפואיים מאושרים תחת פרוטוקולים והשגחה קפדנית. ארבע משתתפים היו אמהות מניקות שהתנדבו לדגימות דם וחלב תואמות. דגימות נאספו ב6-נקודות זמן: נקודה 1 - חיסון קדם (בסיסי), נקודה 2-14 ימים לאחר חיסון ראשוני, נקודה 3-1 חודש לאחר חיסון ראשוני, נקודה 4-2 חודשים לאחר חיסון ראשוני, נקודה 5-3 חודשים לאחר חיסון ראשוני, ונקודה 6-6 חודשים לאחר חיסון ראשוני. נדגמו 10-20 מ"ל של דם היקפי עבור כל נקודת זמן, וכן 1 מ"ל חלב עבור 4 נשים מניקות משתתפות. סרום התקבל מדם היקפי על ידי צנטריפוגה מיד עם הוצאת הדם ונשמר ב-20 מעלות. תאים חד-גרעיניים בדם היקפיים (PBMC) בודדו מדם בהפרין באמצעות שיפוע צפיפות לימפופרפ (Nypacon, אוסלו, נורבגיה), עברו צנטריפוגה ב-500 גרם למשך 40 דקות, ונשטפו שלוש פעמים במצע תרבית RPMI 1640 (CM) (Sigma, St. Louis , MO) בתוספת 10% סרום עגל עוברי (FCS) (Sigma, St. Louis, MO). לאחר הכביסה, PBMC שימש מיד לניתוח אימונופנוטיפי. המחקר אושר על ידי ועדת האתיקה של המכון לאונקולוגיה ורדיולוגיה של סרביה (מס' 899-01 מתאריך 01.04.2021), וכל המשתתפים חתמו על הסכמה מדעת. כל המשתתפים רואיינו על ידי צוות רפואי מנוסה. מעקב עצמי מדווח ארוך טווח של תופעות לוואי לאחר החיסון נערך במהלך שנתיים לאחר מנת החיסון הראשונה.

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

איתור וכימות של נוגדנים ספציפיים ל-SARS-CoV-2 RBD.

ביטוי של RBD של חלבון ספייק SARS-CoV-2 (NCBI: YP_009724390, AA319-541) בוצע בקו תאי T HEK-293 בעקבות הליך שפורסם בעבר12 . החלבון הרקומביננטי טוהר עד להומוגניות, והתשואה שהתקבלה הייתה 5{{20}}0 מ"ג לליטר של תרבית התא. בקצרה, החלבון הרקומביננטי RBD שימש לציפוי צלחות תחתית השומן 96-בבאר (Thermo Scientific NUNC-MaxiSorp, ארה"ב) בריכוז סופי של 10 ug/mL (50 μL/well) במאגר ציפוי (15 mM) Na2CO3/35 mM NaHCO3, pH 9.5) ב-4 מעלות למשך הלילה. הצלחות נשטפו עם TBS המכיל 0.05% Tween 20 (TBST) ונחסמו עם 1% BSA ב-TBST למשך שעתיים ב-37 מעלות. סרה מדוללת הודגרה ב-37 מעלות למשך שעה אחת ב-TBST המכיל 0.1% BSA, ולאחר מכן נשטפו הצלחות עם TBST. לקביעת IgG ספציפית הכוללת, נוגדן מצומד של עז נגד-Human-IgG-AP (Novus Biologicals, ארה"ב) היה מדולל 1/1000 בתמיסה חוסמת והוסף לבארות. לאחר דגירה של שעה אחת ב-37 מעלות, הצלחות נשטפו 5 פעמים עם TBST ופותחו עם 4-Nitrophenyl phosphate למשך שעה אחת ב-37 מעלות. הספיגה נמדדה ב-450 ננומטר (A450).

ניתוח ציטומטרי זרימה.

אימונוטיפ משטח התא של תאים מונו-גרעיניים בדם היקפי (PBMCs) זוהה באמצעות השילובים הבאים של נוגדנים חד שבטיים המסומנים ישירות (mAbs): CD3FITC/CD28PE/CD4PerCP, CD80PE/CD19PerCP, CD80PE/CD14PerCP (Becton Dickinson, ארה"ב). הדגימות הוכנו כמתואר קודם 13 באמצעות 1×105 PBMCs טריים מבודדים ב-100 μL RPMI 1640 בתוספת 10% סרום עגל עוברי (FCS, Sigma), דגירה למשך 30 דקות ב-4 מעלות עם 20 μL של שילוב mAb מתאים, נשטף פעמיים עם תמיסת מלח קרה כקרח פוספט (PBS), ומקובע עם 1% פרפורמלדהיד לפני ניתוחי FACS. ביטוי סמן פני השטח כמת על ציטומטר הזרימה FACSCalibur (Becton-Dickinson, San Jose, ארה"ב). סך של 10,000–50,000 אירועים סגורים מאומתים כלימפוציטים בדם היקפיים (PBLs) ומונוציטים, בהתאם למאפיינים הפיזיים שלהם, מאפייני פיזור קדימה (FSC) ומאפייני פיזור צדדי (SSC) ), נאספו לכל דגימה ונותחו באמצעות תוכנת CellQUEST. תת-קבוצות התאים הובעו כאחוז בדם היקפי.

ניתוח IFN-תוך תאי.

עבור צביעה תוך תאית של IFN 1×, 106 PBMCs הודגרו עם Phorbol 12-myristat 13-אצטט (PMA) (50 ng/mL) בתוספת יונומיצין (500 ng/mL) למשך 4 שעות ב-37 מעלות עם Brefeldin A (10 ug/mL) במשך 3 השעות האחרונות, כפי שתואר קודם לכן14. תאים נצבעו לראשונה עבור אנטיגן פני השטח עם נוגדן CD3 PerCP, קבוע ולאחר פרמיביליזציה עם BD FACS permeabilizing solution 2 (BD Biosciences) נצבע עבור אנטי-IFN-PE (Becton Dickinson). IFN תוך תאי מבוטא כאחוז ב-PBLs, כמו גם בלימפוציטים מסוג CD3 T.

אליסה.

הריכוזים של IFN-, IL-6 ו-TNF בסרום של המשתתפים שנחקרו נקבעו על ידי ערכות ELISA לא מצופות מסחריות, בהתאם להוראות היצרן (Invitrogen). ריכוזי הציטוקינים נקבעו בנקודות 1 (לפני החיסון), נקודה 3 (חודש לאחר חיסון ראשוני) ונקודה 4 (חודשיים לאחר חיסון ראשוני). בקצרה, צלחות ELISA צופו בנוגדני לכידה מתאימים במאגר ציפוי והודגרו למשך הלילה ב-4 מעלות. ראשית, הצלחות נשטפו ונחסמו עם ELISA/ELISAASPOT Diluent. לאחר דגירה של שעה אחת, הצלחות נשטפו, ודגימות סרום וסטנדרטים נוספו לבארות. לאחר הדגירה, השטיפה והשאיבה, לפי הוראות היצרן, נוספה תמיסת הנוגדנים לזיהוי לכל באר. לאחר מכן, הצלחות נשטפו ושואבו; תמיסת אבידין-HRP נוספה לבארות והודגרה למשך 30 דקות. לאחר מכן, הצלחות נשטפו, ותמיסת TMB (3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine) נוספה לכל באר. הצלחות הודגרו במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר, והתגובה האנזימטית הופסקה על ידי הוספת תמיסת עצור. הספיגה נמדדה ב-450/520 ננומטר באמצעות קורא הלוחות של Multiskan EX Termo Labsystems15. ניתוח סטטיסטי. התוצאות מוצגות כערכים בודדים עם טעות סטנדרטית של הממוצע (SEM). הבדלים בין ערכים הושוו באמצעות מבחן t לא מזווג ומבחן דרגה חתומה של Wilcoxon והתוצאות נחשבו מובהקות סטטיסטית אם p<0.05. The analysis was performed using GraphPad Prism 9.0 (GraphPad, La Jolla, CA, USA).

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

תוצאות

3.1 משתתפי המחקר ועיבוד סרום/חלב.

מאפיינים של משתתפי המחקר מוצגים בטבלה 1. מ-61 מתנדבים שקיבלו את החיסון נגד SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA, סה"כ 344 דגימות נסיוב נאספו ב-6 נקודות זמן, החל מנקודת ההתחלה שלפני החיסון. עד 6 חודשים לאחר נקודת החיסון הראשונה. רוב משתתפי המחקר (97%) דיווחו על תגובות שליליות מקומיות לחיסון בצורה של כאב קל בזרוע/כתף ועייפות, שנמשכו 1-2 ימים. רק שלושה משתתפים קיבלו את מנת החיסון השנייה באיחור, שניים עקב השפעות שליליות בחיסון ראשוני (פריחה בעור, אלרגיה), ואחד עקב ממצא של הריון לאחר המנה הראשונה. לא דווח על זיהום בין שתי מנות החיסון. לאחר שישה חודשים של ניטור, רק 3 (5%) מהמשתתפים נדבקו ב-SARS-CoV-2, ולא זוהתה צורה חמורה של מחלה שהצריכה אשפוז. שבעה משתתפות נכנסו להריון לאחר חיסון, אחת שבועיים לאחר המנה הראשונה, אחת 4 חודשים לאחר המנה הראשונה, ו-5 במשך 12 חודשים לאחר המנה הראשונה. מעקב מדווח עצמי ארוך טווח לא גילה תופעות לוואי הקשורות לחיסון עד שנתיים לאחר המנה הראשונה, בנשים מניקות או כל משתתף אחר במחקר.

כימות של נוגדנים ספציפיים ל-SARS-CoV-2 RBD בסרום ובחלב של משתתפי המחקר.

בניתוח רמות הנוגדנים נגד RBD IgG לאחר החיסון בסרום, נצפתה עלייה משמעותית ברמות האנטי-RBD IgG אפילו 14 ימים לאחר מנת החיסון הראשונה בכל הקבוצה המנותחת בהשוואה לרמות IgG לפני החיסון (17.47±51.49 AU) /מ"ל לעומת 7828.28±24,157.29 AU/mL, p<0.0001) (Fig. 1a). Te serum levels of anti-RBD IgG continued to rise to 2 months post-vaccination, when a decrease was detected, which lasted up to 6 months, steadily. The levels of anti-RBD IgG antibodies were compared at each time point between naïve and previously infected individuals (Fig. 1b-c), and it was determined that the difference was statistically significant at baseline (point 1), as previously infected individuals had a higher level of antibodies before vaccination (7.23±0.77 AU/mL vs. 54.47±101.40 AU/mL, p<0.01). The difference was statistically significant also in points 2 (3979.48±3277.27 AU/mL vs. 22,581.99±49,570.63 AU/mL, p<0.05), 5 (2369.16±1934.31 AU/ mL vs. 6366.83±6875.85 AU/mL, p<0.01), and 6 (461.96±375.41 AU/mL vs. 766.04±317.35 AU/mL, p<0.05). The decline in antibody levels had the same dynamics in both groups but remained at higher levels in previously infected individuals for up to 6 months. No other analyzed parameters were correlated with a significantly different level of antibodies in serum (age, gender, smoking status). When comparing levels of anti-RBD IgG antibodies in other participants and breastfeeding women (Fig. 1d-e), no significant differences in serum antibody levels were observed in any of the comparisons. Anti-RBD IgG antibodies were also detected in the milk of 4 breastfeeding women (Fig. 1f). In lower levels, they presented with the same dynamics of rising and decline as detected in the serum. Comparing the levels of anti-RBD IgG antibodies in milk at each time point to baseline, (Fig. 1f), it was determined that the difference was statistically significant at points 2 (6.57±0.77 AU/mL vs. 152.13±35.83 AU/ mL, p<0.01) and 6 (6.57±0.77 AU/mL vs. 117.31±25.64 AU/mL, p<0.01).

טבלה 1. מאפיינים של משתתפי המחקר.

איור 1. רמות נוגדנים נגד RBD IgG בסרום ב-(א) הקבוצה המנותחת כולה, (ב נאיביות, ג) אנשים שנדבקו בעבר, (ד) קבוצה שלמה ללא נשים מניקות, (ה) נשים מניקות ו-(ו) ב- חלב של נשים מניקות. התוצאות מוצגות כערכים בודדים עם שגיאת תקן של הממוצע (SEM) של שלושה שכפולים בלתי תלויים. הבדלים בין ערכים הושוו באמצעות מבחן t לא מזווג והתוצאות נחשבו מובהקות סטטיסטית אם p<0.05. * p<0.05; **p<0.01; *** p<0.0001.

ניתוחי זרימה ציטומטריים ואינטר-תאיים של IFN.

נתונים שהתקבלו על ידי ניתוח ציטומטרי של Fow הראו שהביטוי של CD28 על תאי CD4+ T בדם היקפי של חודשיים לאחר מנת החיסון השנייה היה גבוה משמעותית בהשוואה לערכים לפני החיסון (42.84±5.37% לעומת 37.75 ±5.96%, עמ'<0.05, Wilcoxon signed-rank test) (Fig. 2a). Tere was a signifcant increase (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) in the prevalence of B cell lymphocyte subset (CD19+) from 6.87±1.17% to 8.73±1.54%, two months afer revaccination, as well as an increased percentage of CD80+ B cells from 1.72±0.28% to 1.99±0.28% (Fig. 2b). Furthermore, fve weeks afer revaccination, a signifcant (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) increase in the percentage of CD14+CD80+ cells from 1.15±0.38% to 5.87±0.95% was detected in the monocyte gate (Fig. 2c). Te expression of IFN-γ in PBLs, as well as in CD3+ T cells was signifcantly (p < 0.05, Wilcoxon signed rank test) increased at 1 week afer the second vaccine dose (1.84 ± 0.13% in PBL and 1.32 ± 0.10% in CD3+ T cells) compared to pre-vaccination baseline values (0.88 ± 0.13% in PBL and 0.72 ± 0.12% in CD3+ T cells) (Fig. 3a). Furthermore, serum levels of IFN-γ were signifcantly increased in all participants from the initial value of 16.69±0.29 pg/mL to 17.72±0.41 pg/mL (p<0.05, Wilcoxon signed rank test) (Fig. 3b), as well as in naive from 16.55±1.77 pg/mL to 17.26±2.53 pg/mL and in a group and previously infected individuals, from 15.93±2.01 pg/mL to 19.90±4.32 pg/mL at 1 week afer revaccination (Fig. 3c). Tere was no signifcant (p>הבדל 0.05, Wilcoxon signed rank test) ברמות הסרום של IL-6 ו-TNF- 1 בשבוע וחמישה שבועות לאחר מנת החיסון השנייה בהשוואה לערכי טרום החיסון בכללותו קבוצה, כמו גם באנשים תמימים או שנדבקו בעבר (איור משלים 1a-d).

דִיוּן

להתפרצות זיהום ה-SARS-CoV-2 בדרכי הנשימה הייתה השפעה שלילית עמוקה על היבטים שונים של חיי היומיום, כולל נושאים חברתיים, חינוכיים ובריאותיים שאינם קשורים ישירות למחלת ה-COVID-19 עצמה16–18 . גישת חיסונים גלובלית הייתה נחוצה כדי להשלים את צעדי התרחקות במאבק במחלה, ומחקרים רבים בחנו את היעילות והיעילות של סוגי חיסונים שונים שהופצו ברחבי העולם במהלך 2021. בסרביה, זמינים כיום רק דוחות ביניים על חסינות הומורלית 2 ו-3 חודשים לאחר החיסון19 ,20 והם בהתאם לנתונים שדווחו במחקר זה. בקבוצה המנותחת שלנו של עד 6 חודשים לאחר החיסון, זוהה שיעור המרת סרוק של 100% לאחר מנת החיסון הראשונה. רק 5% מהמשתתפים היו צריכים לקבל את מנת החיסון השנייה באיחור. לא היו דיווחים על זיהום ב-SARS-CoV-2 בין שתי מנות חיסון. עד שישה חודשים של ניטור, רק 5% מהמשתתפים נדבקו, ללא צורך באשפוז. טיטרים של נוגדני IgG anti-RBD SARS-CoV-2 היו גבוהים משמעותית בהשוואה לבסיס אפילו לאחר מנת החיסון הראשונה, מה שתורם לתפיסה ששימוש בחיסון ה-mRNA BNT162b2 הוא גישה יעילה לתגובות הומורליות מהירות כנגד התרופה המקורית. זני וירוסים. רמות ה-IgG בסרום המשיכו לעלות עד חודשיים לאחר החיסון כאשר זוהתה ירידה מתמדת עד לתקופה המנותחת של 6 חודשים. אנשים שנדבקו בעבר נמצאו בעלי טיטרי IgG גבוהים יותר בהשוואה לאנשים תמימים עד 6 חודשים, וזה היה הגורם היחיד שתרם לרמות נוגדנים שונות. נוגדנים נגד RBD IgG זוהו גם בחלב של נשים מניקות במחקרים שלנו ובכמה מחקרים קודמים21, עם דינמיקה תואמת של טיטר כמו בסרום. דיווחים דומים פורסמו לגבי נוגדני IgA לאחר זיהום טבעי22. מאחר שקיימים כיום נתונים מוגבלים על הסיכונים והיתרונות של חיסון נשים מניקות, תוצאות אלו מבטיחות לאור חיסון פסיבי אפשרי של תינוקות שניזונו מחלב אם, גם לאחר 6 חודשים לאחר חיסון האמהות. לא נצפו הבדלים משמעותיים ברמות הנוגדנים בסרום בין אנשים תמימים או שנדבקו בעבר לנשים מניקות, מה שמחזק תצפיות לפיהן התגובה לחיסונים נגד SARS-CoV-2 אינה מושפעת מהנקה. ההמלצות הנוכחיות קובעות שיש לשקול חיסון עבור כל האנשים בגילאי 6 חודשים ומעלה, כולל אלו שנמצאים בהריון או מנסים להרות כעת או בעתיד ומניקים, ללא קשר למצב הזיהום הקודם שלהם ב-COVID-1923. המחקר שלנו תורם לנטל הראיות24 המצביע על כך שלא היה נזק מיידי לנשים מניקות שקיבלו חיסון נגד SARS-CoV-2 או לתינוקות היונקים שלהן. כמו כן, שבע משתתפות במחקר נכנסו להריון לאחר חיסון, אחת שבועיים לאחר המנה הראשונה, אחת 4 חודשים לאחר המנה הראשונה, ו-5 מעל 12 חודשים לאחר המנה הראשונה. ראיונות מעקב ארוכי טווח שנערכו לאחרונה עם משתתפי המחקר אישרו שלא היו גם נזקים בלתי צפויים לנשים מניקות או לתינוקות היונקים שלהן, או לכל משתתף אחר, שנתיים לאחר קבלת החיסון נגד SARS-CoV-2.

איור 2. אחוז (א) CD3+CD28+ ו-CD4+CD28+ לימפוציטים מסוג T, (ב) CD19+ ו-CD{{6 }}CD80+ לימפוציטים B, (ג) מונוציטים CD14+CD80+ בדם היקפי. התוצאות מוצגות כערכים בודדים עם ממוצע ± טעות תקן של הממוצע (SEM). הבדלים בין ערכים הושוו באמצעות מבחן דרגה חתומה של Wilcoxon והתוצאות נחשבו מובהקות סטטיסטית אם p<0.05. * p<0.05.

הופעתן של גרסאות חדשות של דאגה, כמו גם קיומם של דיווחים על ירידה מהירה ברמות הנוגדנים נגד SARS CoV-2 לאחר זיהום טבעי וחיסונים25 העלו אי ודאות לגבי תפקידם של מרכיבי החסינות התאית. כמה מחקרים שבדקו את התגובה האימונולוגית של אנשים מחוסנים בסרביה דיווחו רק על חסינות הומורלית19,20. במחקר זה, ביטוי מוגבר של קולטנים קוסטימולטוריים CD28 על תאי CD4+ T ו-CD80 על תאי B זוהה חודשיים לאחר מתן מנת החיסון השנייה. יתר על כן, הביטוי של CD80 על מונוציטים עלה 1-חודש לאחר חיסון מלא.

התפשטות והתמיינות של תאי T לתאי אפקטור או זיכרון דורשים הצגת אנטיגן, גירוי משותף וציטוקינים. הממריצים המגנים הטובים ביותר של תאי T הם זוגות של מולקולות, B7-1 (CD80) ו-B7-2 (CD86). הם מתבטאים בדרך כלל על תאים מציגי אנטיגן (APCs) כגון תאים דנדריטים, תאי B, מקרופאגים, מונוציטים ותאי T. הביטוי שלהם על מונוציטים חשוב גם להפעלת לימפוציטים וחסינות אדפטיבית26. שני הקולטנים העיקריים הקיימים על פני השטח של לימפוציטים T הקושרים CD80 ו-CD86 הם CD28, וחלבון 4 של לימפוציטים ציטוטוקסי T-לימפוציטים (CTLA-4). קישור ל-CD28 מפעיל לימפוציטים וכתוצאה מכך משפר את התגובה החיסונית27. התוצאות שהתקבלו במחקר זה מראות שתאי CD4+ T מופעלים על ידי האפיטופים שמקורם באנטיגן S המוצגים על תאי B פעילים ומונוציטים חודשיים לאחר המנה השנייה של החיסון. נתונים שונים העלו כי תאי CD4 T הופעלו בעיקר לאחר חיסון mRNA28,29, בעוד שבמחקרים מסוימים מדווחים כי תאי CD4 ו-CD8 T מוצגים ומופעלים באופן שווה30. Tan et al. לאחרונה הבחינו כי 3 חודשים לאחר החיסון, הכמות הממוצעת של תאי T ספציפיים ל-Spike הייתה שוות ערך למה שזוהה בחולים בהחלמה בזמן דומה לאחר זיהום ב-SARS-CoV-231. יתר על כן, נראה כי מרכיבי החסינות הסתגלותית (הן בנגועים בעבר והן מחוסנים) מוסדרים באופן עצמאי 6,32,33 ויש חוסר מתאם בין ייצור נוגדנים אנטי ויראליים ותדירות תאי T. בנוסף, חיסוני mRNA הנוכחיים מעוררים תגובות חיסוניות מוגבלות לחלבון Spike. עם זאת, יהיה צורך להעריך את התפקיד העלול להגן של תאי T ספציפיים לחלבונים מבניים ולא מבניים אחרים34. לרעיון שחיסונים פולי אנטיגנים עשויים להפעיל שליטה רבה יותר נגד וריאנטים ויראליים מאשר לחיסונים חד-אנטיגניים, כמו חיסונים מבוססי חלבון Spike, עשוי להיות רציונל טוב35,36.

איור 3. (א) ביטוי של IFN- בכל ולימפוציטים בדם היקפיים CD3+ T. רמת הסרום של IFN- ב-(ב) הקבוצה המנותחת כולה, (ג) אנשים נאיביים ונדבקים בעבר. התוצאות מוצגות כערכים בודדים עם טעות סטנדרטית של הממוצע (SEM). הבדלים בין ערכים הושוו באמצעות מבחן דרגה חתומה של Wilcoxon והתוצאות נחשבו מובהקות סטטיסטית אם p<0.05. * p<0.05.

במחקר זה זוהו רמות מוגברות של IFN- בכל הלימפוציטים ובתאי CD3+ T 7 ימים לאחר חיסון מלא. כמו כן, נצפתה רמה מוגברת של IFN- בנסיוב של כל האנשים המחוסנים, הן בנאיבי SARS-CoV-2 והן באנשים שנדבקו בעבר 7 ימים לאחר חיסון מלא. לפיכך, תאי T ספציפיים ל-Spike המבוססים על mRNA מבוססי-mRNA המייצרים בשפע IFN-. IFN- הוא ציטוקין מפתח בעל תכונות אנטי-ויראליות והוכח כמעכב את השכפול של SARS-CoV-28. העלייה המהירה של IFN- על ידי חיסון BNT162b2 שהודגם במחקר זה מעידה על תגובה חיסונית חיובית של תאי T כנגד נגיף SARS-CoV-2. התגובה האימונולוגית המופעלת על ידי SARS-CoV-2 כוללת גם ייצור של ציטוקינים פרו-דלקתיים רבים, בעיקר IL-6 ו-TNF- ושינויים ברמות שלהם עשויים להיות קשורים לפרוגנוזה של המחלה. מקרים חמורים וקטלניים של COVID-19 דווחו אצל אנשים עם רמות ציטוקינים מוגברות37. עם זאת, במחקר זה, לא זוהה הבדל משמעותי ברמות הסרום של IL-6 ו-TNF-7 ימים ועד חודש לאחר חיסון מלא, מה שעשוי לנבוע ממאפייני עוקבה ספציפיים ומתזמון הדגימה.

נתונים אלה מייצגים את הדיווחים הראשונים שפורסמו על חסינות עמידה תוך התחשבות במרכיב ההומוראלי והסלולרי, המתמקד בנשים מניקות. זה עשוי להיות שימושי במיוחד עבור מטה-אנליזות עתידיות של תת-קבוצות אוכלוסיות רגישות אחרות, שכן נתונים מאזור הבלקן על האוכלוסייה הסלאבית חסרים בדרך כלל במאמצים רב-לאומיים גדולים יותר.

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

מסקנות

החיסון נגד SARS-CoV-2 BNT162b2 mRNA גרר תגובות הומוראליות ותאיות ניתנות למדידה ועמידות בנשים מניקות ובפרטים נאיביים ונדבקים בעבר בששת החודשים הראשונים לאחר החיסון בסרביה. לא דווחו תופעות לוואי חמורות לחיסון, ורק 5% מהמשתתפים נדבקו ב-SARS-CoV-2 בששת החודשים הראשונים לאחר החיסון, ללא צורך באשפוז. לא דווח על נזקים בלתי צפויים לנשים מניקות או לתינוקות היונקים שלהן שנתיים לאחר קבלת החיסון נגד SARS-CoV{10}}. המחקרים הבאים בתחום צריכים להתמקד באסטרטגיות מחקר ופיתוח של חיסונים שעשויות לשמור על נגיף הקורונה-19 ומגיפות פוטנציאליות דומות תחת שליטה מהירה יותר וארוכת טווח. כמו כן, יש להשקיע מאמצים כדי לספק הנחיות מבוססות ידע, לטפל כראוי במידע שגוי במיוחד סביב תת-אוכלוסיות רגישות כמו נשים מניקות, להקל על הגישה לחיסונים בזמנים של צורך רב ולחזק את האמון הכללי במדע.

יתרונות cistanche-מחזק את המערכת החיסונית

הפניות

1. לוח המחוונים של WHO, ארגון הבריאות העולמי של ארגון הבריאות העולמי (COVID-19). https://covid19.who.int/ (2022).

2. Hojyo, S. et al. כיצד COVID-19 גורם לסערת ציטוקינים עם תמותה גבוהה. אינפאם. ריגן. 40, (2020).

3. van Eeden, C., Khan, L., Osman, MS & Tervaert, JWC תפקוד לקוי של תאי רוצח טבעי ותפקידו ב-COVID-19. Int. י.מול. Sci. 21, 6351 (2020).

4. Sette, A. & Crotty, S. חסינות מסתגלת ל-SARS-CoV-2 ו-COVID-19. תא 184, 861–880 (2021).

5. חן, ג' ואח'. מאפיינים קליניים ואימונולוגיים של מחלת נגיף קורונה קשה ומתונה 2019. J. Clin. להשקיע. 130, 2620–2629 (2020).

6. Dan, JM et al. זיכרון אימונולוגי ל-SARS-CoV-2 הוערך עד 8 חודשים לאחר ההדבקה. מדע 80, 371 (2021).

7. Turner, JS et al. חיסוני mRNA של SARS-CoV-2 מעוררים תגובות מתמשכות של מרכז הנבט האנושי. נאט. 596, 109–113 (2021).

8. צייר, מ.מ. וחב'. אינדוקציה מהירה של תאי CD4+ ספציפיים לאנטיגן קשורה לחסינות הומורלית ותאית מתואמת לחיסון SARS-CoV-2 mRNA. Immunity 54, 2133-2142.e3 (2021).

9. גואל, RR et al. חיסון mRNA משרה זיכרון חיסוני עמיד ל-SARS-CoV-2 עם התפתחות מתמשכת לגרסאות של דאגה. bioRxiv Prepr. שרת. ביול. https://doi.org/10.1101/2021.08.23.457229, (2021)

10. Muyldermans, J., De Weerdt, L., De Brabandere, L., Maertens, K. & Tommelein, E. Te effects of covid-19 חיסון על נשים מניקות: סקירה שיטתית של הספרות. חֲזִית. אימונול. 13, 1498 (2022).

11. גולן, י' ועוד. חיסון ל-Covid-19 mRNA בהנקה: הערכה של תופעות לוואי ונוגדנים הקשורים לחיסון בדיאדות אם-תינוק. חֲזִית. אימונול. 12, 777103 (2021).

12. ארבייטמן, CR וחב'. השוואה מבנית ותפקודית של תחום קושרת קולטן ל-SARS-CoV-2- המיוצר ב-Pichia pastoris ותאי יונקים. Sci. רפ' 10, 21779 (2020).

13. Konjevic, G. et al. הערכת היכולת התפקודית של תאי NK של חולי מלנומה במודל חוץ-גופני של מגע של תאי NK עם קווי תאים גידוליים K562 ו- femx. J. Membr. ביול. 250, 507–516 (2017).

14. Konjević, G. et al. ירידה בהפעלת CD161 והגברה של ביטוי קולטן מעכב CD158a על תאי NK עומדים בבסיס הפגיעה בציטוטוקסיות של תאי NK בחולים עם מיאלומה נפוצה. ג'יי קלין. פאתול. https://doi.org/10.1136/jclinpath-2016-203614 (2016).

15. Stanojković, TP et al. הערכת ביטוי ציטוקינים ותתי קבוצות של תאי חיסון במחזור כפרמטרים פוטנציאליים של רעילות קרינה חריפה בחולי סרטן הערמונית. Sci. רפ' 10, 19002 (2020).

16. Cavic, M. et al. בחינת ההשפעה האמיתית של מגיפת ה-SARS-CoV-2 על האבחון המולקולרי של חולי סרטן ואנשים בסיכון גבוה. המומחה כומר מול. דיאגן. 21, 101–107 (2021).

17. Hassan, I., Mukaigawara, M., King, L., Fernandes, G. & Sridhar, D. Hindsight is 2020? שיעורים בממשל בריאות עולמי שנה לתוך המגיפה. נאט. Med. 27, 396–400 (2021).

18. Cavic, M., Grahovac, J., Zec, R., Stefanovic, M. & Aleksic, E. סקירה כללית של השנה הראשונה של מגיפת SARS-CoV-2 בסרביה ובמחוז Pirot. פירוט. זב. 46, 1–23 (2021).

19. Lijeskić, O. et al. מחקר עוקבה פרוספקטיבי של הקינטיקה של נוגדנים ספציפיים לזיהום sars-cov-2 ולארבעה חיסוני SARS-CoV-2 הזמינים בסרביה, ויעילות החיסון: דו"ח ביניים של 3-חודש. Vaccines 9, (2021).

20. Petrović, V., Vuković, V., Patić, A., Marković, M. & Ristić, M. Immunogenicity of BNT162b2, BBIBP-CorV ו-Gam-COVID-Vac חיסונים וחסינות לאחר SARS-CoV טבעי{{7 }} זיהום-מחקר השוואתי של נובי סאד. סרביה. PLoS One 17, e0263468 (2022).

21. Yeo, KT et al. פעילות מנטרלת ו-mRNA של חיסון SARS-CoV-2 התמדה בסרום ובחלב אם לאחר חיסון BNT162b2 בנשים מניקות. חֲזִית. אימונול. 12, (2022).

22. פייס, RM וחב'. חלב מנשים שאובחנו עם COVID-19 אינו מכיל SARS-CoV-2 RNA אך יש לו רמות מתמשכות של נוגדני IgA ספציפיים ל-SARS-CoV-2-. חֲזִית. אימונול. 12, 5566 (2021).

23. חיסונים CDC, C. עבור DC ו-P. COVID-19 בזמן הריון או הנקה. https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/vacci nes/recommendations/pregnancy.html (2022).

24. Bethesda (MD), NI של CH ו-HD Drugs and lactation database (LactMed). חיסונים נגד COVID-19. (2022).

25. Jo, DH et al. ירידה מהירה ברמות נוגדנים ל-SARS-CoV-2 תוך 4 חודשים לאחר חיסון BNT162b2. Vaccines 9, (2021).

26. Carreno, BM & Collins, M. Te B7 משפחת הליגנדים והקולטנים שלה: מסלולים חדשים לסטימולציה ועיכוב של תגובות חיסוניות. אננו. כומר אימונול. 20, 29–53 (2002).

27. Esensten, JH, Helou, YA, Chopra, G., Weiss, A. & Bluestone, JA CD28 קוסטימולציה: ממנגנון לטיפול. חסינות 44, 973–988 (2016).

28. גירס, ד' ואח'. גרסאות הדאגה של SARS-CoV-2 בורחות חלקית מתגובות הומורליות אך לא מתגובת תאי T בקרב תורמי החלמה ומתחסנים של COVID-19. Sci. אימונול. 6, (2021).

29. Tarke, A. et al. ההשפעה של גרסאות SARS-CoV-2 על תגובת תאי ה-CD4 + וה-CD8 + הכוללת אצל אנשים נגועים או מחוסנים. דוחות תא. Med. 2, (2021).

30. Sahin, U. et al. חיסון BNT162b2 משרה נוגדנים מנטרלים ותאי T פולי-ספציפיים בבני אדם. נאט. 2021 5957868 595, 572–577 (2021).

31. Tan, AT et al. מדידה מהירה של תאי T ספייק SARS-CoV-2 בדם מלא מאנשים מחוסנים ונדבקים באופן טבעי. ג'יי קלין. להשקיע. 131, (2021).

32. Chia, WN et al. דינמיקה של SARS-CoV-2 מנטרלת תגובות נוגדנים ומשך חסינות: מחקר אורך. Te Lancet Microbe 2, e240–e249 (2021).

33. Reynolds, CJ et al. תגובות נוגדנים מנטרלים ותאי T בחוסר התאמה בזיהום SARS-CoV-2 אסימפטומטי ומתון. Sci. אימונול. 5, (2020).

34. Lopandić, Z. et al. IgM ו-IgG immunoreactivity של חלבון m רקומביננטי SARS-CoV-2. Int. י.מול. Sci. 22, (2021).

35. Altmann, DM, Boyton, RJ & Beale, R. Immunity to SARS-CoV-2 וריאנטים של דאגה. מדע 371, 1103–1104 (2021).

36. Matchett, WE et al. חוד החנית: חיסון נוקלאוקפסיד מעורר חסינות הגנה ללא ספייק של SARS-CoV-2. J. Immunol. 207, 376–379 (2021).

37. Costela-Ruiz, VJ, Illescas-Montes, R., Puerta-Puerta, JM, Ruiz, C. & Melguizo-Rodríguez, L. SARS-CoV-2 זיהום: תפקידם של ציטוקינים ב-COVID{{ 7}} מחלה. Cytokine Growth Factor Rev. 54, 62 (2020).