צד 1: תכונות אנטי דלקתיות ונוגדי חמצון של דוחן אצבע (Eleusine Coracana (L.) Gaertn.) זנים מטופחים בסרי לנקה

למידע נוסף. איש קשרtina.xiang@wecistanche.com

השכיחות של מחלות הקשורות ללחץ חמצוני בתיווך דלקתי הולכת וגוברת ברחבי העולם, ויוצרת ביקוש הולך וגובר למקורות חדשים שלאנטי דלקתיסוכנים ונוגדי חמצון. מחקר זה התמקד בקביעת ה-archidonate {{0}}in vitro archidonate {{0}}lipoxygenase (A5-LOX), xanthine oxidase (XO), hyaluronidase, פעילויות מעכבות פרץ חמצוני ותכונות נוגדות חמצון של Ravi, Rawana , ו-Oshadha אצבע דוחן זני שימוש בתמציות אתנוליות ומתנוליות. מבין כל התמציות, התמצית המתנולית של Oshadha הציגה את הפעילויות המעכבות הגבוהות ביותר של A5-LOX (ICsvalue∶ 484.42ug/ml) ו-XO (ICsvalue∶764.34ug/ml). כל התמציות הראו פחות מ-50 אחוז פעילות מעכבת היאלורונידאז בריכוז של 1 מ"ג/מ"ל, תמציות מתנוליות הראו פוטנציאל מעכב בינוני על מיני חמצן תגובתיים (ROS) שנוצרו מפגוציטים בדם מלא, עם ערכי ICs0 בין 26.9 ל-27.7 ug/ml, בהשוואה לאיבופרופן (IC.value:11.18ug/ml). כל התמציות הראו עיכוב חזק של ROS המופק מנויטרופילים פולימורפו-גרעיניים שבודדו מדם אנושי בהשוואה לאיבופרופן (ערך IC: 2.47 ug/ml) וערכי IC של תמציות מתנוליות ואתנוליות נעו בין 0.29 ל-0.47 ug/ml ו-1.35 ל-1,705 ug/ml. בהתאמה. בכל התמציות היו כמויות גבוהות משמעותית של תרכובות פנוליות כוללפלבנואידיםוהפוטנציאל לנקות חומצה 2,2'-אזינו-ביס(3-אתיל-בנזותיאזולין-6-סולפונית (ABTS)קטיון,2,2-דיפניל-1-פיקריל-הידראזיל( DPPH), ורדיקלי חמצן. חוץ מזה, הם הצליחו לצמצם את יוני מתכת ולקלוט יוני מתכת תוך הפסקת תגובות יוצרות רדיקלים. זהו הדו"ח הראשון של תכונות מעכבות A5-LOX, XO, היאלורונידאז ופריצות חמצון של כל תמצית מכל זן דוחן אצבעות שתורבת בסרי לנקה. הממצאים חשפו את הפוטנציאל של שימוש בתמציות דוחן אצבעות אלה כמקורות טבעיים של מועמדים לתרופות אנטי דלקתיות. בנוסף, הממצאים הצביעו על כך שזני Ravi, Rawana ו-Oshadha הם מקורות טובים לנוגדי חמצון. לכן, צריכה של זני דוחן אצבעות אלה על בסיס קבוע עשויה למלא תפקיד חשוב במניעה ובניהול תזונתי של מחלות הקשורות ללחץ חמצוני.

לחץ כאן כדי ללמוד מוצרים נוספים

1. הקדמה

דַלֶקֶתהיא תגובת הגנה שלחֲסִיןמערכת לסילוק גירויים מזיקים כגון פתוגנים, תאים פגומים וגירויים אלרגיים או כימיים וכן כדי להתחיל בתהליך הריפוי. למרות שדלקת היא תגובה נורמלית אם לא מבוקרת, דלקת מוגזמת מובילה למחלות אקוטיות וכרוניות רבות. נכון לעכשיו, השכיחות של מחלות מתווכות דלקתיות עולה ברחבי העולם, מה שיוצר ביקוש הולך וגובר לחומרים אנטי דלקתיים חדשים ויעילים [1, 2].

Arachidonate 5-lipoxygenase(A5-LOX) הוא אנזים מפתח המעורב בביוסינתזה של מתווכים חזקים של הפרעות דלקתיות ותגובות אלרגיות. זה מזרז היווצרות לויקוטריאנים מחומצה ארכידונית [3]. לוקוטריאנים הם מתווכים אנדוגניים בפתוגנזה של מספר מחלות דלקתיות כולל אסטמה, נזלת אלרגית, ברונכיטיס כרונית, דלקת מפרקים שגרונית, מחלות מעי דלקתיות ותגובות אלרגיות [3,4]. לכן, עיכוב A5-LOX חשוב במניעה וטיפול בהפרעות דלקתיות שונות.

Xanthine oxidase(XO) מזרז את החמצון של היפו-קסנטין לקסנטין וקסנטין לחומצת שתן[5]. מעכבי XO חוסמים את הביוסינתזה של חומצת שתן וכתוצאה מכך מפחיתים את רמות חומצת השתן וכן מתח חמצוני בכלי הדם. במהלך הפעולה הקטליטית של XO, נוצרים מיני חמצן תגובתיים (ROS), ולכן, XO ממלא תפקיד פתוגני גם בהפרעות דלקתיות אחרות. כתוצאה מכך, מעכבי XO חשובים בטיפול בהפרעות דלקתיות שונות המלוות בפעולה הקטליטית של XO [2,5].

Hyaluronidase הוא אנזים ליזוזומלי המזרז את ההידרוליזה של mucopolysaccharides כגון חומצה היאלורונית. בדלקת מפרקים שגרונית, היאלורונידאז מפרק יתר על המידה את החומצה ההיאלורונית ומפחית את כמותה ומשקלה המולקולרי, מה שגורם לתסמינים של מפרקים [6]. עיכוב פירוק חומצה היאלורונית הוא קריטי והכרחי בשליטה במצבים פתולוגיים בתיווך היאלורונידאז[7].

במצבי דלקת, תאי מערכת החיסון נמשכים לאתר הדלקת. במהלך תגובות הגנה ואימונולוגיות, אוקסידאזים של NADPH השוכנים בתאי החיסון מופעלים ומייצרים ROS בכמויות גדולות ויוצרים פרץ חמצוני [1, 8]. כמויות נמוכות ומתונות של ROS מועילות בתהליכים פיזיולוגיים שונים. עם זאת, ייצור יתר של ROS מבטל את הוויסות של התפקודים התאיים אשר בתורו משפר את המצב הדלקתי [8,9]. לכן, עיכוב של פרץ חמצוני המושרה על ידי ROS הוא פתרון פוטנציאלי למניעה וניהול של מחלות מתווכות דלקתיות.

במהלך זרחן חמצוני,רדיקלים חופשייםכולל ROS נוצרים כתוצרי לוואי [10]. בנוסף למטבוליזם תאי תקין, ישנם גורמים רבים נוספים המובילים ליצירת רדיקלים חופשיים, ואם קצב יצירת הרדיקלים החופשיים עולה על קצב הנטרול, עקה חמצונית נוצר, והוא תורם באופן משמעותי לכל המחלות הדלקתיות. מאחר שנוגדי חמצון מסוגלים למנוע היווצרות של רדיקלים חופשיים ולכבות רדיקלים חופשיים, איזון בין נוגדי חמצון לרדיקלים חופשיים חיוני לשמירה על תפקודים פיזיולוגיים כראוי [8,11,12].

דוחן אצבע (Eleusine coracana(L.)Gaertn.) הוא הדוחן הקטן החשוב ביותר באזורים הטרופיים, ומספר תכונות טיפוליות של דוחן אצבע דווחו בעבר [13-17]. עם זאת, עבור זני דוחן האצבעות אשר מעובדים ונצרכים כיום בסרי לנקה, יש חוסר ראיות מדעיות על התכונות הטיפוליות

ויתרונות בריאותיים פוטנציאליים לצרכנים. כתוצאה מכך, הכרחי ללמוד את התכונות האנטי דלקתיות והנוגדות חמצון של זני דוחן אצבע סרי לנקה ולהכיר בפוטנציאל שלהם לשפר את המצב התזונתי והבריאותי של הצרכנים. השכיחות של מחלות הקשורות לסטרס חמצוני מתווכות דלקתיות הולכת וגוברת ברחבי העולם, ויוצרת ביקוש מתעורר למקורות חדשים של חומרים אנטי דלקתיים ונוגדי חמצון[1, 2]. על רקע זה, המחקר הנוכחי התמקד בהערכת זני דוחן אצבע סרי לנקה עבור תכונות אנטי דלקתיות חוץ גופיות במונחים של A5-LOX, XO, היאלורונידאז, פעילויות מעכבות פרץ חמצוני ותכונות נוגדות חמצון באמצעות מבחני נוגדי חמצון שונים. .

2. חומרים ושיטות

2.1.איסוף והכנת דגימות. זני דוחן אצבע המומלצים לגידול בסרי לנקה על ידי משרד החקלאות, כלומר, Ravi, Rawana ואושהה, נאספו מהמכון למחקר ופיתוח גידולי שדה (FCRDI), Mahailuppallama, סרי לנקה. זנים אלה טופחו בחלקות ניסוי באזור היבש במדינה הנמוכה, ב-FCRDI, Mahailuppallama, והזרעים אושרו על ידי שירות אישור הזרעים של משרד החקלאות, סרי לנקה.

זרעי דוחן אצבע סולקו (TM 05C, Satake Corp-poration, יפן), וקמחים מדגנים מלאים הושגו בטחינה (Pulverisette 14, Fritsch, גרמניה) ומעבר דרך מסננת 0.5 מ"מ. קמחים של דגנים מלאים חולצו עם אתנול ומתנול בנפרד. קמח דגנים מלאים (100 גרם) חולץ עם הממס (400 מ"ל) למשך הלילה בטמפרטורת החדר (28±2 מעלות) באמצעות בוחש מגנטי וצנטריפוגה ב-4000 סל"ד למשך 20 דקות. הסופרנטנט נאסף בנפרד, והשארית חולצה מחדש פעמיים באותם תנאים. הסופרנטנטים אוחדו ואודו ליובש בלחץ מופחת ב-40 מעלות באמצעות מאייד סיבובי (R-114, Büchi Labortechnik AG, שוויץ). התמציות נטולות הממס אוחסנו במיכלי זכוכית אטומים בדרגה -20 עד לשימוש לניתוח.

2.2. אנזימים, כימיקלים וציוד. מגיב לפנול Folin-Ciocalteu, אלומיניום כלוריד,2,4,6-Tri(2-pyridyl)-s-triazine (TPTZ), 2,2'-אזוביס (2-amidinopropane) דיהידרוכלוריד (AAPH),2,2-דיפניל-1-פיקרילהידראזיל (DPPH), קוורצטין,6-הידרוקסי-2,5,7,8-טטרה-מתילכרומן{{19} }חומצה קרבוקסילית (טרולוקס), חומצה אתילן-דיאמין-טטרה-אצטית (EDTA), 2,2'-אזינו-ביס(3-אתיל-בנזותיאזולין-6-חומצה סולפונית) מלח דיאממוניום (ABTS), פלואורסצין,3-( 2-פירידיל)-5,6-דיפניל-1,2,4-triazine-p,pdisulfonic acid מלח מונוסודיום

הידרט (פרוזין), ארכידונט 5-ליפוקסיגנאז, חומצה לינולאית, בייקלאין, קסנטין אוקסידאז, קסנטין, אלופורינול, היאלורונידאז, מלח נתרן חומצה היאלורונית, p-dimethylaminobenzaldehyde, חומצה גאלית, חומצה טאנית, דימתיל סולפן, ואיבדו. Sigma-Aldrich, MO, ארה"ב. HBSs* plus ו-HBSS נרכשו מ-Thermo Fisher Sci-entific Inc., מסצ'וסטס, ארה"ב. Zymosan נרכשה מחברת Wako Pure Chemical Industries Ltd., אוסקה, יפן.

Luminol (3-aminophthalhydrazide) נרכש מחברת Alfa Aesar GmbH & Co KG, Karlsruhe, גרמניה. מדיום הפרדת לימפוציטים נרכש מ-MP Biomedicals, Inc., אוהיו, ארה"ב. כל הכימיקלים והריאגנטים האחרים ששימשו בניסויים היו של ACS, HPLC ודרגות אנליטיות. כדי לקבוע את יכולת ספיגת רדיקלי החמצן, נעשה שימוש בקורא מיקרו-צלחות פלואורסצנטי (SpectraMax-Gemini EM, Molec-ular Devices Inc., ארה"ב). עבור מבחני כימילומינסנציה, נעשה שימוש ב-luminometer (Luminoskan RS, Labsystems, פינלנד). עבור כל הבדיקות הביולוגיות האחרות, נעשה שימוש בקורא מיקרו-לוחיות (Spectra-Max Plus384, Molecular Devices Inc, ארה"ב).

2.3. קביעת התוכן הפנולי הכולל. התוכן הפנולי הכולל (TPC) נקבע על פי שיטת Folin-Ciocalteu 【18】. תמצית דוחן אצבע (20ul) עורבבה עם 110 ul של ריאגנט Folin-Ciocalteu טרי שהוכן פי 10 ו-70 ul של תמיסת נתרן קרבונט (10 אחוזים w/v) והודגרה בטמפרטורת החדר (RT) למשך 30 דקות. הספיגה נמדדה ב-765 ננומטר. נעשה שימוש בחומצה גאלית כדי לשרטט את העקומה הסטנדרטית (y=0.0532x בתוספת 0.0339;r=0.9992), ו-TPC חושב כמ"ג שווה ערך לחומצה גאלית (GAE) לכל 100 גרם קמח על גבי חומר יבש. בסיס משקל.

2.4. קביעת תכולת הפלבנואידים הכוללת. תכולת הפלבנואידים הכוללת (TFC) נקבעה לפי השיטה הקולורימטרית של אלומיניום כלוריד [19]. תמצית דוחן אצבע (100 ul) עורבבה עם תמיסת אלומיניום כלוריד (2 אחוזים w/v,100 ul), הודגרה למשך 10 דקות ב-RT, והספיגה נמדדה ב-415nm. נעשה שימוש ב-Quercetin כדי לשרטט את העקומה הסטנדרטית（y=0.0349x-0.2091; r²=0.9974）, ו-TFC חושבו כמ"ג שוות ערך קוורצטין לכל 100 גרם קמח על בסיס משקל יבש.

2.5. קביעת פעילות סילוק רדיקלית של DPPH. היכולת לנקות רדיקלי DPPH נקבעה לפי השיטה שתוארה על ידי Blois [20]. תמצית אצבע מיל-לט (50 ul) עורבבה עם 90 ul של מתנול ו-60 ul של תמיסת DPPH (0.02% w/v) והודגרה ב-RT בחושך למשך 10 דקות. ערכי הספיגה של הדגימה (As) והבקרה (Ac) נמדדו ב-517nm. Trolox שימש כסטנדרט. פעילות סילוק רדיקלים של DPPH כאחוז עיכוב חושבה באמצעות משוואה(1). ערך ICs חושב באמצעות גרפים של מינון-תגובה.

2.6. קביעת פעילות סילוק קטיונים רדיקלית של ABTS. היכולת לנקות רדיקלי קטיון ABTS נקבעה על פי השיטה שתוארה על ידי Re et al. [21] עם כמה שינויים. תמיסת קטיון רדיקלי ABTS הוכנה על ידי דגירה של 10 מ"ג של ABTS ב-2.5 מ"ל של אשלגן פרסולפט בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בחושך למשך 16 שעות ודילול 7 פעמים עם מלח 50 מ"מ חוצץ פוספט (pH 7.4). תמצית דוחן אצבע (12.5 ul) עורבבה עם מי מלח חיץ פוספט (147.5 ul) ותמיסת קטיון רדיקלי ABTS שהוכנה טריה (40 ul) והודגרה ב-RT בחושך למשך 10 דקות. ערכי הספיגה של המדגם (As) והבקרה (Ac) נמדדו ב-734nm. Trolox שימש כסטנדרט. פעילות סילוק רדיקלים של ABTS כאחוז עיכוב חושבה באמצעות משוואה (2). ערך ICs חושב באמצעות גרפים של מינון-תגובה.

2.7. קביעת כושר ספיגת רדיקלי חמצן (ORAC). ORAC הוערך על פי השיטה שתוארה על ידי Ou et al.[22] עם כמה שינויים. תמיסות פלואורססאין (4.8uM) ו-AAPH (40mg/ml) הוכנו במאגר פוספט 75mM (pH 7.4). תמצית דוחן אצבע (10 ul) עורבבה עם 40 ul של חיץ פוספט ו-100 ul של fluorescein והודגרה ב-37 מעלות למשך 10 דקות. AAPH(50ul) נוספה, והדעיכה של הפלואורסצין נמדדה באורכי גל של עירור ופליטות של 494 ננומטר ו-535 ננומטר, בהתאמה, ב-37 מעלות למשך 35 דקות במרווחים של 1 דקות באמצעות קורא מיקרופליטות פלואורסצנטי. Tro-lox שימש כסטנדרט. השטח מתחת לעקומת (AUC) ערכי המדגם (AUCs), בקרה (AUC) ו-Trolox (AUC-) נרשמו. ערך ORAC חושב באמצעות משוואה (3) שבה conc. מייצג ריכוז. התוצאות הובעו כמ"ג שווה ערך לטרולוקס ל-100 גרם קמח על בסיס משקל יבש.

2.8. קביעת פעילות של יון ברזל (FIC) Chelating. היכולת לקלוט יוני ברזל נקבעה לפי השיטה שתוארה על ידי קרטר [23]. תמצית דוחן אצבע (100 ul) עורבבה עם תמיסת 1 מ"ל סולפט ברזל (20 ul) ו-40 ul של מים מזוקקים. לאחר מכן נוספה תמיסת פרוזין (40 ul) 1 mM והודגרה במשך 10 דקות ב-RT. ערכי הספיגה של המדגם (As) והבקרה (Ac) נרשמו ב-562nm. EDTA שימש כסטנדרט. פעילות FIC כאחוז קלציה חושבה באמצעות משוואה (4).

2.9. קביעת כוח נוגד חמצון מפחית ברזל (FRAP). FRAP נקבע על פי השיטה שתוארה על ידי Benzine and Szeto [24] עם כמה שינויים. ריאגנט FRAP הוכן על ידי ערבוב של 300mM אצטט חיץ (pH 3.6),20mM ברזל כלוריד ו-10mM TPTZ ביחס של 10:1:1 ודגירה ב-37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. תמצית דוחן אצבע (20 ul) מעורבבה עם 30 ul של חיץ אצטט ו-150 ul של ריאגנט FRAP שהוכן טרי, הודגרה ב-RT למשך 8 דקות, והספיגה נרשמה ב-600nm. Trolox שימש כדי לשרטט את העקומה הסטנדרטית（y=0.17x פלוס 0.15;产=1.00）, ו-FRAP חישב כ-mg Trolox שווה ערך לכל 100 גרם קמח על בסיס משקל יבש.

2.10. קביעת פעילות מעכבת A5-LOX. A{{0}}פעילות מעכבת LOX הוערכה לפי השיטה שתוארה על ידי Tappel [25] עם כמה שינויים. תמצית דוחן אצבע (10ul) עורבבה עם 115ul של חיץ נתרן פוספט 100mM (pH 8.0) ו-50ul של תמיסת A5-LOX (5000U/ml) והודגרה ב-RT למשך 10 דקות. התגובה התחילה עם תוספת של 25ul של 0.08mM חומצה לינולאית. השינוי בספיגה נרשם ב-234nm במרווחים של 1 דקות למשך 10 דקות ב-RT, וערכי המהירות המקסימלית (Vmxk) של הדגימה (Vmaxs) והבקרה (Vmaxc) תועדו. Baicalein שימש כתקן. פעילות מעכבת 5-LOX כעיכוב אחוזי גיל חושבה באמצעות Equation(5).ICs.value חושב באמצעות גרפים של מינון-תגובה.

2.11. קביעת פעילות מעכבת XO. פעילות מעכבת XO נקבעה על פי השיטה שתוארה על ידי Lee et al. [26] עם כמה שינויים. תמצית דוחן אצבע (10ul) עורבבה עם 150ul של חיץ נתרן פוספט 50 mM (pH 7.4) ו-20 ul של XO (0.15U/ml) והודגרה למשך 10 דקות ב-RT. התגובה התחילה עם תוספת של 20 ul של 0.1 mM xanthine. השינוי בספיגה נרשם ב-295nm במרווחים של דקות למשך 15 דקות ב-RT, וערכי Vmax של הדגימה (Vmaxs) והבקרה (Vmaxc) תועדו. Allopurinol שימש כסטנדרט. פעילות מעכבת XO כאחוז עיכוב חושבה באמצעות משוואה(6). ICs.value חושב באמצעות גרפים של מינון-תגובה.

2.12. קביעת פעילות מעכבת Hyaluronidase. פעילות מעכבת Hyaluronidase הוערכה לפי השיטה שתוארה על ידי Sahasrabudhe ו-Dedhar [27] עם כמה שינויים. תמצית דוחן אצבע (50ul) עורבבה עם 10ul של hyaluronidase （8400U/ml） והודגרה ב-37 מעלות למשך 10 דקות. האנזים הופעל על ידי הוספת 20 ul של סידן כלוריד (12.5mM) ודגירה ב-37 מעלות למשך 10 דקות. התגובה התחילה עם הוספת נתרן היאלורונט (50ul) והודגרה ב-37 מעלות צלזיוס למשך 40 דקות. לאחר מכן, נוספו 10 ul של 0.9 M נתרן הידרוקסיד ו-20 ul של 0.2M נתרן בוראט והודגרו ב-100 מעלות למשך 3 דקות. לאחר קירור ל-RT, נוספו 50 ul של 67mM p-dimethylaminobenzaldehyde והודגרו ב-37 מעלות למשך 10 דקות. ערכי הספיגה של המדגם (As) והבקרה (Ac) נמדדו ב-585nm. חומצה טאנית שימשה כסטנדרט. פעילות מעכבת Hyaluronidase כאחוז עיכוב חושבה באמצעות משוואה (7).

2.13. קביעת פעילויות מעכבות פרץ חמצוני. פוטנציאל אנטי דלקתי במונחים של פעילויות מעכבות פרץ חמצוני בדם אנושי מלא ונויטרופילים פולימורפו-גרעיניים מבודדים נקבעו באמצעות מבחן הכימילומינסנציה המשופרת של luminol [28, 29] עם כמה שינויים. ניסויים נערכו במרכז לרפואה מולקולרית וחקר תרופות של ד"ר פנג'ואני, המרכז הבינלאומי למדעי הכימיה והביולוגיה, אוניברסיטת קראצ'י, פקיסטן, ולמכון יש את האישור האתי למחקרים על דם אנושי מוועדת האתיקה העצמאית, ICCBS, UoK . No:ICCB-S/IEC-008-BC-2015/Protocol/1.0.

2.13.1. קביעת פעילות מעכבת התפרצות חמצונית בדם אנושי מלא. דם אנושי (1 מ"ל) נאסף באופן אספטי על ידי ניקוב ורידים לתוך צינור שעבר הפרין ממתנדב בריא ללא עישון, שלא נטל תרופות או תוספי מזון במשך יותר משבוע אחד, ומדולל (דילול 1:20) עם HBSs פלוס *(האנקס מאוזן תמיסת מלח, המכילה סידן ומגנזיום). תמצית דוחן אצבע (25 ul) עורבבה עם דם מלא מדולל (25 ul) והודגרה ב-37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. לאחר מכן, נוספו 25 ul של זימוזן בסרום אופסוניזציה ו-25 ul של luminol. ייצור ROS פרץ חמצוני נוטר במשך 50 דקות באמצעות מד luminometer עם סריקות חוזרות ונשנות במרווחים של 30 שניות וזמן מדידה של 1 שניות. איבופרופן שימש כתרופה הסטנדרטית. אחוז העיכוב חושב באמצעות משוואה (8).

כאשר RLU הוא קריאת luminometer במונחים של יחידות אור יחסיות (RLU) עבור בקרה ו- RLU הוא קריאת מד luminometer ב-RLU עבור המדגם. ערך ICs חושב באמצעות גרפים של מינון-תגובה.

2.13.2. קביעת פעילות מעכבת פרץ חמצוני בנויטרופילים פולימורפונוקלאריים מבודדים. דם אנושי מלא (10 מ"ל) מעורבב עם נפחים שווים של HBSS (Hanks Balanced Salt Solution, ללא סידן ומגנזיום) ומדיום הפרדת לימפוציטים (LSM) ואיפשר לאריתרוציטים להתיישב במשך 30 דקות ב-RT. לאחר מכן, הפלזמה הונחה בזהירות על LSM וצנטריפוגה ב-400 × גרם למשך 20 דקות ב-RT. הסופרנטנט הוסר; כדוריות דם אדומות בגולה שהתקבלה עברו ליטוש על ידי ערבוב עם מים קרים דה-יונים, ערבבו עם HBSS7 קר, וצנטריפוגה ב-300×g למשך 10 דקות ב-4 מעלות. הכדור נשטף פעמיים, וכדאיותם של הנויטרופילים הפולימורפו-גרעיניים שהתקבלו נבדקה בשיטת אי הכללת Trypan blue. ריכוז התאים הותאם ל-1×10 מעלות תאים/מ"ל. נויטרופילים פולימורפו-גרעיניים מבודדים (25 山l) עורבבו עם תמצית דוחן אצבע (25ul) והודגרו במשך 15 דקות ב-37 מעלות. לאחר מכן, נוספו 25 ul של זימוזן בסרום ו-25 ul של luminol, וייצור ROS פרץ חמצוני נוטר במשך 50 דקות באמצעות מד luminometer עם סריקות חוזרות במרווחים של 30 שניות וזמן מדידת נקודות ls. איבופרופן שימש כתרופה הסטנדרטית. אחוז העיכוב חושב באמצעות משוואה(8).

2.14. ניתוח סטטיסטי. הנתונים של כל ניסוי נותחו סטטיסטית באמצעות תוכנת IBM SPSS Statistics (גרסה 20), והתוצאות הובעו כממוצע ± שגיאה רגילה (SE). מובהקות סטטיסטית נקבעה לרמת ביטחון של 95 אחוז. נעשה שימוש בניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) ובמבחן של Tukey כדי לקבוע את ההבדלים בין הזנים והתמציות. מקדם המתאם של פירסון שימש לניתוח המתאם.

סיווג של דלקת

דלקת חריפה: מאופיינת בעיקר באדמומיות, נפיחות, כאב וכדומה, כלומר דלקת המורכבת בעיקר מתגובת מערכת כלי הדם.

דלקת כרונית: בעיקר כמה מחלות דלקתיות כרוניות, כגון גסטרואנטריטיס כרונית, הפטיטיס כרונית, דלקות גינקולוגיות חוזרות ומחלות נוספות.

גורם לדלקת

כל גורם שיכול לגרום נזק לרקמות יכול להיות גורם לדלקת, כלומר, ניתן לקבץ גורמים דלקתיים לקטגוריות הבאות:

(1) גורמים ביולוגיים

חיידקים, וירוסים, מיקופלזמות, פטריות, ספירוצ'טים וטפילים הם הגורמים השכיחים ביותר לדלקת. דלקת הנגרמת על ידי פתוגנים ביולוגיים נקראת גם זיהום. אקזוטוקסינים ואנדוטוקסינים המיוצרים על ידי חיידקים יכולים לפגוע ישירות ברקמות; שכפול ויראלי בתאים נגועים מוביל לנמק תאים; פתוגנים אנטיגנים מסוימים פוגעים ברקמות באמצעות תגובות חיסוניות המושרות לאחר זיהום, כגון זיהומים טפיליים ושחפת.

2) גורמים פיזיים

טמפרטורה גבוהה, טמפרטורה נמוכה, חומרים רדיואקטיביים, קרניים אולטרה סגולות וכו' ונזק מכני.

(3) גורמים כימיים

כימיקלים אקסוגניים כגון חומצה חזקה, אלקלי חזק וטרפנטין. חומרים רעילים אנדוגניים כגון תוצרי פירוק של רקמה נמקית ומטבוליטים כגון אוריאה שהצטברו בגוף בתנאים פתולוגיים מסוימים.

(4) גוף זר

גופים זרים הנכנסים לגוף האדם באמצעים שונים, כגון מתכות שונות, פסולת עץ, אבק באוויר, תפרים כירורגיים ועוד, עלולים לגרום לדרגות שונות של תגובות דלקתיות בשל אנטיגניותם השונה.

(5) רקמה נמקית

גורמים כגון איסכמיה או היפוקסיה עלולים לגרום לנמק רקמות, שהוא גורם דלקתי פוטנציאלי. פסי דימום גודשים וחדירה של תאים דלקתיים בקצוות של אוטמים טריים הם שניהם ביטויים של דלקת.

(6) אלרגיות

כאשר התגובה החיסונית של הגוף חריגה, היא עלולה לגרום לתגובה חיסונית לא מתאימה או מוגזמת, לגרום לנזק לרקמות ולתאים ולהוביל לדלקת. כגון נזלת אלרגית, קוליטיס, אורטיקריה, שחפת, גלומרולונפריטיס ומחלות אחרות.

אנטיביוטיקה היא קוטל חיידקים ואנטי דלקתי, שימוש ארוך טווח יהרוס את הפלורה התקינה של גוף האדם, יהרוג חיידקים טובים, יגרום לחוסר איזון של פלורת המעיים, יגרום למגוון של הפרעות בתפקוד המעי ותגובות שליליות, ויגרום לזיהום משני, יפחית את הגוף. הִתנַגְדוּת. בנוסף, אנטיביוטיקה עוברת בעיקר חילוף חומרים בכבד ובכליות, ושימוש לרעה באנטיביוטיקה עלול לגרום לפגיעה בתפקוד הכבד והכליות. ניתן לשים לב למילים "שימוש בזהירות בחולים עם תפקוד לקוי של כבד וכליות" בהוראות כל התרופות האנטי דלקתיות. בנוסף, אנטיביוטיקה יכולה גם להגביר תגובות אלרגיות לתרופות. בשנים האחרונות, השכיחות הגבוהה של נזלת אלרגית ואסטמה אלרגית קשורה לשימוש לרעה באנטיביוטיקה.

ניסויים הראו כי לתמצית של Cistanche pipiensis עשירה באכינאקוסיד יש אפקט שיפור טוב על קוליטיס; ל-Cistanche glycoside K ול-piposide B יש השפעה מעכבת טובה על הפרשת תחמוצת החנקן בתאים, מה שמראה שהאפקט האנטי דלקתי הטוב שלו.Cistancheהוא חומר מרפא סיני עם מקור זהה לתרופה ומזון. זוהי אחת מעשרת תרופות הצמחים הסיניות המובילות במדינה שלי. זהו אוצר ממעמקי המדבר וטוניק טבעי. ל-Cistanche ל-Cistanche היסטוריה רפואית של כמעט 2,000 שנים. זה הוקלט לראשונה ב"Materia Medica של שן נונג". בשנת 2005, Cistanche נכלל ב"פרמקופאה של הרפובליקה העממית של סין" כחומר מרפא אמיתי. Cistanche היה טוניק טוב מאז ימי קדם, ללא כל תיעוד רעילות, אשר מוכיח לחלוטין את בטיחותו.