פעילות אנטי-נוציספטיבית ואנטי דלקתית הנגרמת על ידי Cistanche Deserticola במכרסמים

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Li-Wei Lin, et al

תַקצִיר

במחקר הנוכחי, קני שורש שלCistancheמדברית(Orobanchaceae, בקיצור CD) חולצו עם 50 אחוז אתנול ובודדו בצורה מסודרת על ידי אתיל אצטט, n-בוטנול ומים. משכך כאבים ואַנְטִי-דַלַקתִיההשפעות של תמצית CD ושלוש שכבות הוערכו במספר מודלים של בעלי חיים. CD(CistancheDeserticola)תמציות עיכבו ביעילות את תגובת התפתלות הנגרמת על ידי 1 אחוז חומצה אצטית ותגובת ליקוק דו-פאזית שנגרמה על ידי 1 אחוז פורמלין, וכן הפחיתו את הבצקת שנגרמה על ידי 1 אחוז קרגנין אך לא זימוזן. יתר על כן, השכבות הבוטנואיות והמימיות של CD(CistancheDeserticola)תמצית לא רק הפחיתה את הכאב המושרה על ידי חומצה אצטית ופורמלין, אלא גם הפחיתה את הבצקת שנגרמה על ידי קרגינן. השפעות של השכבה הבוטנואית של CD(CistancheDeserticola)תמצית טובה יותר מזו של השכבה המימית. בנוסף, השפעת השכבה הבוטנואית של CD(CistancheDeserticola)תמצית לא בוטלה על ידי נלוקסון. תוצאות אלו גילו כי יש משכך כאבים ואַנְטִי-דַלַקתִיהשפעות, והשכבות הבוטנואיות והמימיות הן בעיקר מרכיבים פעילים. יתר על כן, משכך כאבים ואַנְטִי-דַלַקתִיהשפעות של השכבה הבוטנואית של CD(CistancheDeserticola)התמצית לא הייתה קשורה לקולטנים לאופיואידים ולמערכת החיסון.

מילות מפתח:Cistanche deserticola; פעילות משכך כאבים; פעילות אנטי דלקתית

1. הקדמה

Cistancheמדבריתאִמָא. (Orobanchaceae, בקיצור CD), צמח מקומי בסין נמצא בשימוש נרחב ברפואה המסורתית לטיפולים טיפוליים שונים כולל התוויות הרגעה, משככי כאבים ומשפרות את מערכת החיסון (Lee, 1986). מחקרים פרמקולוגיים מודרניים הצביעו על CD(CistancheDeserticola)לתמצית יש שיפור ב-Immuno (Chin and Su, 1993), אפקט ניקוי רדיקלים חופשיים (Hsu et al., 1995), והגברת פעילות SOD (Chang et al., 1995). במחקר שנערך לאחרונה, תגובה של רדיקלים חופשיים מילאה תפקיד משמעותי בתהליכים דלקתיים (Arrigoni-Martelli, 1985). לכן, המחקר הנוכחי ניסה לחקור את ההשפעות המשככות כאבים המשוערות של CD(CistancheDeserticola)תמצית בעכברים עם בדיקת התפתלות הנגרמת על ידי חומצה אצטית (Taber et al., 1969) ובדיקת ליקוק הנגרמת על ידי פורמלין (Shibata et al., 1989). שנית, למדנו גם את האפשריאַנְטִי-דַלַקתִיפעילויות של CD(CistancheDeserticola)תמצית על התהליך הדלקתי הקלאסי עם בדיקת בצקת הנגרמת על ידי קרגנין (Winter et al., 1962) ותהליך דלקתי חלופי עם בדיקת בצקת הנגרמת על ידי זימוזן (Tarayre et al., 1989). לבסוף, חקרנו שכבות פעילות של תמצית CD המופרדות בממסים שונים. '

2. חומרים ושיטות

2.1. חומר צמחי ותמציות

קני שורש של CD(CistancheDeserticola)נרכשו משוק טייוואן ואושרו על ידי פרופסור MT Hsieh. דגימת שובר (מס' CMC-ICPS-000626) נשמרה בעשבייה של המכון למדעי התרופות הסיניים, המכללה הרפואית של סין לעיון עתידי. חילוץ ובידוד של CD(CistancheDeserticola)עקבו אחר הדוחות הקודמים (Lu, 1998). CD(CistancheDeserticola)תמצית (התשואה ב-34.2 אחוזים) ושלוש שכבות*/שכבת אתיל אצטט, שכבה בונולית ושכבה מימית (התשואות שלהם ב-3.4, 10.2, 30.6 אחוזים) (בקיצור של CDE, CDB ו-CDW, בהתאמה)*/שימשו עבור הכנת תמציות.

2.2. הכנת תמציות ותרופות

CD(CistancheDeserticola)תמצית ({{0}}.1, 0.3, 1 גרם/ק"ג) ושלוש שכבות של CD(CistancheDeserticola)תמציות ({{0}}.03, 0.1, 0.3 גרם/ק"ג) הומסו ב-0.5 אחוזים קרבוקסימילצלולוזה וניתנו דרך הפה 60 דקות לפני כן להזרקת משרה. חומצה אצטילסליצילית (ASA) (100, 300 מ"ג/ק"ג) ואינדומטצין (IN DOL) (10 מ"ג/ק"ג) הוכנו כתרחיף עם 0.5 אחוז קרבוקסיתילצלולוזה וניתנו תוך-צפקי לפני הזרקת גורם מעורר. נלוקסון (1 מ"ג/ק"ג) הומס עם מי מלח רגיל.

2.3. חיות

חולדות Sprague-Dawley זכרים (200-250 גרם) שימשו למחקר שלאַנְטִי-דַלַקתִיפעילויות. עכברי ICR זכרים (20-25 גרם) שימשו לבדיקת השפעות משכך כאבים. כל בעלי החיים שימשו בניסויים על פי העקרונות המנחים עם טיפול ושימוש בחיות מעבדה. הם אוכסנו במשך שבוע לפחות לפני תחילת הניסוי בסביבה מווסתת טמפרטורה של 239/1 8C ו-60 אחוזי לחות עם גישה חופשית למזון סטנדרטי בכדורים (סופק ותוכנן על ידי Fwusow Industry Co. LTD., Taiwan ) ומי ברז, שבהם נשמר מחזור אור/חושך של 12-12 שעות (שלב אור: 08:00-20:00 שעות). לאחר מכן, ניתנו תרופות ומשכך כאבים ואַנְטִי-דַלַקתִימבחני הופעלו בשיטה כפולה סמיות. לאחר מדידה התנהגותית, כל בעלי החיים נהרגו על ידי פחמן דו חמצני.

2.4. מחקר אנטי-ציספטיבי

2.4.1. תגובת התפתלות בטן הנגרמת על ידי חומצה אצטית בעכברים

עכברים חולקו באופן אקראי למספר קבוצות. כל עכבר קיבל תמיסת חומצה אצטית תוך צפקית (10 מ"ל/ק"ג משקל גוף). העכברים הונחו בקופסאות התצפית האישיות. התסמינים של התפתלות הבטן הנגרמת על ידי חומצה אצטית היו דומים לאלה שתוארו על ידי Taber et al. (1969). חיות בקרה קיבלו פתרונות כלי רכב באותם ניסויים. חמש דקות לאחר הזרקת חומצה אצטית, מספר תגובות התפתלות לכל עכבר נספר במשך 10 דקות במהלך התפתלות בטן הנגרמת על ידי חומצה אצטית. לבסוף, מספר התגובות המתפתלות אפשר לנו לבטא את אחוז ההגנה באמצעות היחס הבא: (ממוצע מטופל בביקורת) /100/ ממוצע ביקורת.

2.4.2. תגובת ליקוק הנגרמת על ידי פורמלין בעכברים

שיטה זו ייצגה שינוי של זה שתואר על ידי Shibata et al. (1989). כל עכבר הונח בתא התצפית על רצפת צלחת שקופה אקרילית למשך 5 דקות לפני הזרקת הפורמלין. מתחת לרצפה, מראה גדולה נוטה בזווית של 458 על מנת לאפשר תצפית ברורה על כפות החיה. החיות קיבלו 25 מ"ל של 1 אחוז פורמלין לתוך תת הצמח הימני. לאחר מכן, כל חיה הוחזרה לתא ונצפו שתי התקופות הנבדלות של תגובת הליקוק האינטנסיבית. המחזור הראשון (שלב מוקדם) נרשמה 0 /5 דקות לאחר הזרקת פורמלין והמחזור השני (שלב מאוחר) תועד 10/35 דקות לאחר ההזרקה. הזמן (ים) שהושקע בתגובות הליקוק של הכפה המוזרקת נמדד כאינדיקטור לתגובת הכאב.

2.5. מחקר אנטי דלקתי בחולדות

האַנְטִי-דַלַקתִיהפעילות נקבעה בחולדות על ידי מדידת העלייה הממוצעת בנפח הכפה האחורית לאחר הזרקה תת-צמחית של גורמים דלקתיים כגון Carrageenan (Winter et al., 1962) או zymosan (Tarayre et al., 1989). החיות הוזרקו עם 0.1 מ"ל 1 אחוז קרגנין או 2 אחוז זימוזן ברגל האחורית הימנית מתחת לאפונורוזיס פלנטר. הדלקת נמדדה במונחים של מיליליטר באמצעות plethysmometer (7150 Ugo Basile), אשר רשם הבדלים קטנים בגובה המים שנגרמו כתוצאה מעקירת נפח. לפני כל טיפול, הנפח הממוצע של הכפות האחוריות של כל חיה נקבע (Vo) עם שלוש מדידות שלא היו שונות מיותר מ-4 אחוז (דיוק המנגנון). לאחר מכן 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 דקות לאחר הזרקת חומרי הדלקת, נקבע הנפח הממוצע של הכפות האחוריות של כל חיה (Vt) עם שלוש מדידות שלא היו שונות מיותר מ 4 אחוז.

אחוזי הבצקת בכל רישום חושבו על ידי השוואת הנפח הממוצע של הכפות האחוריות של כל חיה (Vt) לאחר הזרקת חומרי הדלקת עם הנפח הממוצע של הכפות האחוריות של כל חיה (Vo) לפני כל טיפול (Palanichamy ו-Nagarajan, 1990). אחוזי עיכוב הושגו עבור כל קבוצה באמצעות היחס הבא: [(Vt-Vo)control /(Vt-Vo)treated]-100/ (Vt-Vo)control.

2.6. ניתוח סטטיסטי

כל הנתונים שהתקבלו במהלך משכך כאבים ואַנְטִי-דַלַקתִיהפעילות באה לידי ביטוי במונחים של שגיאות ממוצעות וסטנדרטיות ונותחה עוד יותר על ידי שימוש באנליזה חד כיוונית של שונות של ANOVA, ולאחר מכן המבחן של Scheff. כאשר ההסתברות (P) הייתה קטנה מ-0.05, ההבדל נחשב למובהק.

3. תוצאות ודיון

החיות לטיפול מקדים עם מנות פומיות של CD(CistancheDeserticola)תמצית (0.1-1 גרם/ק"ג) הביאה לעיכוב תלוי מינון ומשמעותי של תגובת התפתלות הנגרמת על ידי חומצה אצטית (טבלה 1) ולשלבים הדו-פאזיים של תגובות ליקוק הנגרמות על ידי פורמלין בעכברים ( איור 1(א)). העיכוב הנגרמת על ידי CD(CistancheDeserticola)תמצית ב-1 גרם/ק"ג בתגובת התפתלות הנגרמת על ידי חומצה אצטית ותגובת הליקוק הנגרמת על ידי פורמלין היו כ-54 ו-45 אחוזים, בהתאמה. הביקורת החיובית של חומצה אצטילסליצילית ב-0.1-0.3 גרם/ק"ג הפחיתה גם את תגובת ההתפתלות הנגרמת על ידי חומצה אצטית עם עיכוב של 45-64 אחוזים (טבלה 1). עם זאת, הביקורת החיובית האחרת אינדומתצין ב-10 מ"ג/ק"ג עיכבה רק את השלב המאוחר אך לא המוקדם של תגובת הליקוק הנגרמת על ידי פורמלין בעכברים עם עיכוב מקסימלי של 32 אחוז (איור 1(א)). יתר על כן, רק שכבות בונוליות ומימיות בין שלוש שכבות של CD(CistancheDeserticola)תמצית ב-0.1-0.3 גרם/ק"ג יצרה גם אנטי-ציספציה משמעותית, והשפעות משכך כאבים אלו של השכבה הבוטנולית היו טובות יותר מאלו של השכבה המימית (טבלה 1 ואיור 1(B)) . שנית, הערכנו אתאַנְטִי-דַלַקתִיפעילות של CD(CistancheDeserticola)תמצית ושלוש שכבות נגד היווצרות בצקת קלאסית (הנגרמת על ידי קרגינן) וחלופית (הנגרמת על ידי זימוזן). מצאנו את התקליטור הזה(CistancheDeserticola)תמצית ב-0.1-1g/kg גם עיכבה באופן משמעותי את היווצרות בצקת הנגרמת על ידי קרגנין באופן הקשור למינון, ואינדומטצין ב-10 מ"ג/ק"ג גם עיכבה ביעילות את היווצרות בצקת הנגרמת על ידי קרגנין בחולדות (איור. 2). עם זאת, היווצרות בצקת הנגרמת על ידי זימוזן לא נבלמה על ידי CD(CistancheDeserticola)לחלץ ב-0.1-1 גרם/ק"ג בחולדות (נתונים לא מוצגים). יתר על כן, רק השכבה הבוטנולית בין שלוש שכבות של CD(CistancheDeserticola)תמצית ב-0.1-0.3 גרם/ק"ג גם עיכבה באופן משמעותי היווצרות בצקת הנגרמת על ידי קרגנין בחולדות (איור 2). על פי דיווחים פיטוכימיים, אקטאוזיד וחומצה סוקסינית, השייכים למרכיבים של שכבה בונולית של CD(CistancheDeserticola)תמצית (Hsu et al., 1994, 1995), החזיקה באַנְטִי-דַלַקתִיפעילות על היווצרות בצקת הנגרמת על ידי כימיקלים (Murai et al., 1995; Kabachnyi et al., 1987). מהנתונים הנוכחיים שלנו ומדיווחים קודמים אחרים, הצענו קני שורש של CD(CistancheDeserticola)בעל משכך כאבים ואַנְטִי-דַלַקתִיפעילות במכרסמים, והמרכיבים הפעילים יוצאים בעיקר בשכבה הבוטנולית של CD(CistancheDeserticola)לחלץ. האם אקטאוזיד וחומצה סוקסינית הם מרכיבים פעילים של CD(CistancheDeserticola), נבודד ונעריך את משכך הכאבים שלהם ואַנְטִי-דַלַקתִיפעילות בעתיד.

איור 1. השפעת CD(CistancheDeserticola)תמצית ({{0}}.1, 0.3 ו-1 גרם/ק"ג), אתיל אצטט, שכבות בוטנוליות ומימיות של CD(CistancheDeserticola)תמצית (CDE, CDB ו-CDW) ({{0}}.03, 0.1 ו-0.3 גרם/ק"ג) ואינדומטצין (INDOL, 10 מ"ג/ק"ג) בשלב מוקדם (0/5 דקות) ומאוחר (10/35 דקות) של תגובת ליקוק הנגרמת על ידי פורמלין בעכברים. כל ערך מיוצג כ- mean9/SE (N /7). *PB/0.05, *** PB/0.001, בהשוואה לקבוצת VEH.

איור 2. השפעת CD(CistancheDeserticola)תמצית ({{0}}.1, 0.3 ו-1 גרם/ק"ג), אתיל אצטט, שכבות בוטנוליות ומימיות של CD(CistancheDeserticola)תמצית (CDE, CDB ו-CDW) ({{0}}.03, {{10}}.1 ו-0.3 גרם/ק"ג) ואינדומטצין (INDOL, 10 מ"ג/ק"ג) על בצקת בכפות הנגרמת על ידי קרגנין בחולדות. כל ערך מיוצג כ- mean9/SE (N /6). *PB/0.05, ** PB/0.01, בהשוואה לקבוצת VEH

יתר על כן, Shibata et al. (1989) מציעים שהשלב המוקדם של תגובת הליקוק הנגרמת על ידי פורמלין היה קשור לברדיקינין ולחומר P, והשלב המאוחר היה קשור לברדיקינין, אוטוקריני ופרוסטאגלנדין. הנתונים הנוכחיים שלנו הצביעו על כך שנלוקסון לא ביטל אתאַנְטִי-דַלַקתִיפעילות שכבת הבוטנול של CD(CistancheDeserticola)תמצית על שני השלבים של תגובת ליקוק הנגרמת על ידי פורמלין (איור 3) ועל ההשפעה משכך כאבים על תגובת התפתלות הנגרמת על ידי חומצה אצטית (טבלה 1). לכן, משכך כאבים ואַנְטִי-דַלַקתִיייתכן שהשפעות של שכבת הבוטנול של תמצית CD אינן קשורות לקולטנים לאופיואידים. יתר על כן, CD(CistancheDeserticola)התמצית והשכבה הבוטנולית שלה רק עיכבו היווצרות בצקת הנגרמת על ידי קרגנין בחולדות. בצקת הנגרמת על ידי קרגנין באמצעות חדירת לויקוציטים פולימורפו-גרעיניים ומערכת קינין פעילה, במיוחד ברדיקינין, שונה מבצקת הנגרמת על ידי זימוזן באמצעות זרימת מונוציטים ומערכת חיסון פעילה (Damas et al., 1990; Dawson et al., 1991). חומצה סוקסינית, מרכיב בשכבה בונולית של תמצית CD, עיכבה תפקוד לויקוציטים פולימורפו-גרעיניים (Rotstein et al., 1985). תוצאות אלו גילו כי משכך כאבים ואַנְטִי-דַלַקתִיהשפעות של שכבת הבוטנול של CD(CistancheDeserticola)התמצית עשויה להיות קשורה למערכת הקינין אך לא לקולטנים לאופיואידים ולמערכת החיסון למרות CD(CistancheDeserticola)היו בעלי אפקט משפר את החיסון (Chin and Su, 1993). למפורט את המנגנון של משכך כאבים ואַנְטִי-דַלַקתִיפעילות, נמשיך לחקור עם שכבות פעילות או מרכיבים של תמצית CD.

Cistanchetubulosaיש השפעות רבות, לחץ כאן כדי לדעת יותר

הפניות

Arrigoni-Martelli, E., 1985. פרמקולוגיה של סילוק רדיקלים חופשיים בדלקת. International Journal of Tissue Reactions 7, 513/519.
Chang, Y., Wu, H., Wang, SN, Cheng, HC, 1995. מחקר על ההשפעות החזקות שלCistancheמדבריתMa., Cistanche Salsa (CA Mey) G. Beck ו- Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight. China Journal of Chinese Materials and Medicine 26, 143/146.
Chin, HL, Su, YC, 1993. מחקר על ההשפעות הפרמקולוגיות שלCistancheמדבריתאִמָא. China Journal of Chinese Materials and Medicine 19, 143/146.
Damas, J., Bourdon, V., Remacle-Volon, G., Adam, A., 1990. Kinins ו exudates פריטוניאלי המושרה על ידי carrageenin ו-zymosan בחולדות. British Journal of Pharmacology 101, 418/422.

Dawson, J., Sedgwick, AD, Edwards, JC, Lees, P., 1991. מחקר השוואתי של התגובות התאיות, האקסודטיביות וההיסטולוגיות לקרגנין, דקסטרן וזימוזן בעכבר. International Journal of Tissue Reactions 13, 171/185.

Hsu, WH, Chu, SH, Chao, CH, Hsu, Y., Yuan, KW, Yen, CH, Chi, CY, Chan, C., 1994. מחקר על המרכיבים הכימיים שלCistancheמדבריתאִמָא. China Journal of Chinese Materials and Medicine 25, 509/513.
Hsu, WH, Chu, SH, Sheng, LC, Yuan, KW, Mao, CN, 1995. מחקר על המרכיבים הכימיים וההשפעות הפרמקולוגיות שלCistancheמדבריתאִמָא. וסלסה Cistanche (CA Mey) G. Beck. תרופות צמחיות סיניות מסורתיות 26, 143/146.
Kabachnyi, VI, Chernykh, VP, Drogovoz, SM, Golubenko, Iu.A., Bogutskaia, EE, 1987. Search forאַנְטִי-דַלַקתִיתכשירים בין הנגזרות של חומצה סוקסינית הטריל אמידים. Farmakologiia i Toksikologiia 50, 94/97.
לי, SL, 1986. פן-טסאו-קון-מו. מכון המחקר הלאומי לפרסומי רפואה סינית, טאיפיי, עמ'. 20.
Lu, MC, 1998. מחקרים על השפעת הרגעה שלCistancheמדברית. Journal of Ethnopharmacology 59, 161/165.
Murai, M., Tamayama, Y., Nishibe, S., 1995. Phenylethanoids in the herb of Plantago lanceolata והשפעה מעכבת על בצקת באוזן העכבר הנגרמת על ידי חומצה ארכידונית. פלנטה מדיקה 61, 479/480.
Palanichamy, S., Nagarajan, S., 1990. פעילות משככת כאבים של תמצית עופרת Cassia alata ו-Kemp Eerol 3-0-Sophoroside. Journal of Ethnopharmacology 29, 73/78.
Rotstein, OD, Pruett, TL, Fiegel, VD, Nelson, RD, Simmons, RL, 1985. חומצה סוקסינית, תוצר לוואי מטבולי של מיני Bacteroides, מעכבת תפקוד לויקוציטים פולימורפו-גרעיניים. זיהום וחסינות 48, 402/408.
Shibata, M., Ohkubo, T., Takahashi, H., Inoki, R., 1989. מבחן הפורמלין המשתנה: תגובת כאב דו-פאזית אופיינית. כאב 38, 347/ 352.
Taber, RI, Greenhouse, DD, Rendell, JK, Irwin, S., 1969. אינטראקציות אגוניסטים ואנטגוניסטים של אופיואידים על מתיחת בטן הנגרמת על ידי חומצה אצטית בעכברים. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 169, 29/38.
Tarayre, JP, Delhon, A., Aliaga, M., Barbara, M., Bruniquel, F., Caillol, V., Puech, L., Consul, N., Tisne-Versailles, J., 1989.
מחקרים פרמקולוגיים על דלקת זימוזן בחולדות ועכברים. 1: בצקת בכפות הנגרמת על ידי זימוזן בחולדות ובעכברים. מחקר פרמקולוגי 21, 375/384.
Winter, CA, Risley, EA, Nuss, GW, 1962. בצקת הנגרמת על ידי קרגינן בכפה האחורית של החולדה כבדיקה עבוראַנְטִי-דַלַקתִיסמים. הליכים החברה לביולוגיה ורפואה ניסויית 111, 544/547.