חיסון מבוסס MRNA ל-COVID-19: הם חדשים אבל לא ידועים!

תַקצִיר:

חיסוני mRNA מנצלים את המנגנון שבו משתמשים התאים שלנו לייצור חלבונים. התאים שלנו מייצרים חלבונים על סמך הידע הכלול ב-DNA שלנו; כל גן מקודד לחלבון ייחודי. המידע הגנטי חיוני, אך תאים אינם יכולים להשתמש בו עד שמולקולות mRNA ממירות אותו להוראות לייצור חלבונים ספציפיים. חיסוני mRNA מספקים הוראות mRNA מוכנות לשימוש לבניית חלבון ספציפי. BNT162b2 (Pfizer-BioNTech) ו-mRNA-1273 (Moderna) שניהם הם חיסוני COVID-19 מבוססי mRNA שאושרו לאחרונה שהראו הגנה ויעילות מצוינות. בסך הכל, ישנם עוד חמישה מועמדים לחיסון מבוססי mRNA ל-COVID-19 בשלבים שונים של התפתחות קלינית. סקירה זו מתמקדת במיוחד בחיסונים מבוססי mRNA עבור COVID-19 המכסה את הפיתוח, המנגנון וההיבטים הקליניים שלו.

יתרונות cistanche לגברים - מחזקים את המערכת החיסונית

מילות מפתח:

חיסון נגד COVID-19; חיסוני mRNA; פיתוח חיסון; חיסונים מבוססי וקטור

1. הקדמה

מגפת מחלת הקורונה{{0}} (COVID-19) הנגרמת על ידי נגיף קורונה של תסמונת נשימתית חריפה-2 (SARS-CoV-2) התפשטה ברחבי העולם. נכון לעכשיו, ברחבי העולם, היו 662 מיליון מקרים מאושרים של COVID-19, כולל 6.6 מיליון מקרי מוות שדווחו לארגון הבריאות העולמי (WHO) [1]. הנגיף משפיע על יותר מ-200 מדינות ברחבי העולם, כאשר עיקר המקרים דווחו בברזיל, רוסיה וארצות הברית [2]. הדיווח הראשון על התפרצות של נגיף הקורונה-19 היה מהעיר ווהאן, מחוז הוביי שבסין ב-30 בדצמבר 2019. קבוצות של מקרים של דלקת ריאות נרשמו בווהאן. מאוחר יותר ב-7 בינואר 2020, נמצא כי נגיף קורונה חדש (2019-nCoV) הוא הגורם הסיבתי. בסופו של דבר, ארגון הבריאות העולמי קרא למחלה COVID-19 [3,4]. שיעור התמותה המוערך נע בין 0.5-1.5%. SARS-CoV-2 שייך למשפחהCoronaviridaeוהסדרNidovirales. SARS-CoV-2 שייך ל-Betacoronavirus שיש לו קשר גנומי הדוק עם שני וירוסים, SARS-CoV וקורונה של תסמונת הנשימה המזרח תיכונית (MERS CoV). בהשוואה ל-SARS ו-MERS, SARS-CoV-2 מדבק מאוד. COVID-19 היא מחלה קשה בעלת משמעות עולמית. לא ניתן לטפל במחלה באמצעות תרופה אנטי-ויראלית ספציפית, המפתח למניעת התפשטות המחלה הוא שבירת שרשרת ההדבקה [5]. כדי להפחית את שיעורי השכיחות והתמותה, נעשה שימוש בחיסון המוני נגד המגיפה [6,7]. מאז שוחרר רצף הגנום של SARS-CoV-2 ב-11 בינואר 2020, נחקרו יותר מ-150 פרויקטים של חיסונים של הרשויות. המטרה העיקרית של החיסון היא לגרום לתגובה חיסונית המספקת הגנה ארוכת טווח מפני חומרת המחלה [8]. כפי שהוערך על ידי Paddy Ssentongo ועמיתיו [9], יעילות החיסון (VE) נגד כל זיהומי SARS-CoV-2 ירדה מ-83% בחודש הראשון לאחר השלמת סדרת החיסונים הראשונה ל-22% לאחר 5 חודשים או יותר . באופן דומה, VE נגד COVID סימפטומטי-19 ירד מ-94% בחודש הראשון ל-64% במהלך החודש הרביעי שלאחר החיסון. בסך הכל, VE נגד COVID-19 היה חזק בכל הגילאים, עם רמה של 90% (95% CI, 87-92%) חמישה חודשים או יותר לאחר חיסון מלא.

לקורונה יש חלבון (S) על פני השטח שלו; חלבון S זה יקיים אינטראקציה עם תחום קושרת הקולטן של הקולטן לאנזים הממיר אנגיוטנסין (ACE) [10,11]. רוב המועמדים לחיסון מכוונים לחלבון S זה של הנגיף [12]. החיסון Pfizer BioNTech COVID-19-BNT162b2 הוא החיסון הראשון שאושר על ידי מינהל המזון והתרופות (FDA). הוא מבוסס על RNA שליח (mRNA) מתוצרת פייזר שקיבלה אישור לשימוש חירום לגילאי 12-15 ומעלה למניעת מחלת ה-COVID{11}}. מינהל המזון והתרופות האמריקאי (USFDA) אישר את חיסון פייזר ב-23 באוגוסט 2021 [13]. מחקרים שונים דיווחו שלחיסון יש יעילות של 89.1% במניעת זיהום SARS-CoV-2; בנוסף, חיסונים גם הפחיתו את האשפוזים הקשורים לקורונה, מקרי המוות ומניעת אשפוז נמרץ. התפשטות ניתנת לשליטה של ​​SARS-CoV-2 יכולה להתבצע מוקדם יותר כאשר חלק גדול מהאוכלוסייה מחוסנת (למשל, 70-80%). חיסון מפחית משמעותית את שכיחות הקורונה-19. החיסון מספק תגובה חיסונית חזקה ויעילה למיגור זיהום ה-SARS-CoV-2 מגוף האדם. לאנשים שנדבקו הייתה תגובה חזקה של תאי T לנגיף, אשר עשויה לסייע ביכולתם להחלים מהזיהום [14,15]. ניטרול נשאר בקורלציה חזקה עם הגנה מפני זיהום סימפטומטי עם וריאנטים של SARS-CoV-2 של דאגה [16]. לפיכך, חיסון הוא האסטרטגיה לשלוט במגיפה.

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

חיסוני COVID-19 מפותחים במגוון פלטפורמות. וירוס חי מוחלש, חיסונים מומתים, וקטורים ויראליים שאינם משתכפלים, RNA ו-DNA הם דוגמאות לכך. סוגים שונים של חיסונים עם דוגמאות מפורטים באיור 1. אסטרטגיה לפיתוח חיסונים היא להשתמש בנגיף ה-SARS-CoV-2 המומת, הוא אינו מסוגל להשתכפל אך הוא יכול להישאר שלם בגוף. מערכת החיסון תפעיל את התגובה שלה נגד הנגיף על ידי יצירת נוגדנים נגדו. COVAXIN® (BBV152) המיוצר על ידי Bharat Biotech, Hyderabad, הודו, ו- CoronaVac הידוע גם בשם sinovac® שפותח על ידי Sinovac Biotech, בייג'ינג, סין השתמש בגישה של וירוס מומת כדי לפתח את החיסון [17]. הווקטור הנגיפי שאינו משתכפל הוא גם טכניקה שאומצה על ידי חברות לייצור חיסונים. ה-adenovirus (Ads) הוא וקטור ויראלי בשימוש נרחב שיש לו גנום דו-גדילי הפועל כגורם סיבתי להצטננות. CanSino Biologics Tianjin, סין פיתחה את Ad5-nCoV (Convidecia®) המקודדת לכל האורך של חלבון S של וירוס SARS-CoV-2. הווקטור הנגיפי אינו בעל תכונות שכפול ולכן אינו גורם למחלה ממשית. לאחר הכניסה לגוף ה-DNA הנגיפי מוצג על תאים המציגים אנטיגן ונוצרת תגובה חיסונית נגדו. אוקספורד/אסטרזנקה השתמשה באדנו-וירוס מהשימפנזה (ChAdOx1) שיש לו פוטנציאל למזער אינטראקציה עם נוגדנים נפוצים נגד אדנו-וירוס. החיסון נקרא AZD122 (Vaxzevria™). מכון המחקר גמלייה, מוסקבה, רוסיה פיתח את החיסון Sputnik V™ הוא גם וקטור ויראלי בעל סרוטיפ Ad26 אנושי רקומביננטי. חיסון Janssen יוצר על ידי Johnson and Johnson, ניו ג'רזי, ארה"ב תוך שימוש באותה גישה [18].

mRNA נחשבת גם לגישה חדשה לניסוח חיסון. חיסוני mRNA הם חדשים לציבור, אבל מדענים חוקרים אותם במשך זמן רב. חיסוני mRNA אלה מסונתזים מתבנית ה-DNA המקודדת לחלבון הספייק ונארזים בנשא המבוסס על ליפופרוטאין כדי להאיץ את כניסת ה-mRNA לתוך הגוף ולמנוע פירוק [19]. כאשר החיסון ניתן בדרך התוך-שרירית, הוא מוזרק לרקמות עמוקות יותר ומולקולות ה-mRNA ייכנסו לתוך התא, מה שמקל על תהליך התרגום [20]. עם הכניסה לגוף, ה-mRNA יזוהה כאנטיגן ותופעל תגובה חיסונית הומורלית אשר תמריץ תאי B להתפתח לתאי B בזיכרון. ובכך בחשיפה משנית לאנטיגן; תאי זיכרון B ינטרלו ויחסמו את האנטיגנים [21]. ה-FDA אישר חיסונים מבוססי mRNA, אחד מהם הוא Pfizer-BioNTech's, ניו יורק, ניו יורק, ארה"ב BNT162b2 (Comirnaty®) ואחד נוסף הוא Moderna™, Cambridge, MA, ארה"ב mRNA-1273 הידוע גם בשם Spikevax. ה-FDA אישר את mRNA-1273 לאישור שימוש חירום (EUA) לשימוש באנשים מגיל 18 ומעלה. הסקירה הנוכחית תספק מידע מפורט על חיסונים ועובדות על COVID-19, פיתוח חיסונים מבוססי mRNA, אופן הפעולה של חיסוני mRNA, הניסוח והמרכיבים שבהם נעשה שימוש, בטיחות ויעילות, והאתגרים הרגולטוריים עבור חיסונים.

איור 1. סוגים שונים של חיסון לזיהום COVID-19. (נוצר עם BioRender.com שאליו נגישה ב-31 בדצמבר 2022)

2. חיסונים ועובדות על נגיף הקורונה-19

בדצמבר 2019 דווח בסין על קבוצה של אנשים שסבלו מהפרעות ריאות מסיבה לא מזוהה. המרכז הסיני לבקרת מחלות ומניעתן (CDC) חקר אז את אי הוודאות במקרים הקשורים לדלקת ריאות ואת מקורם על ידי איסוף דגימות מגופו של המטופל אשר זוהו באמצעות תגובת שרשרת פולימראז בזמן אמת [22]. מאוחר יותר, הגורם להפרעת הריאות נודע ונמצא כי היא נגרמת על ידי נגיף קורונה, אשר זכה לכינוי SARS-CoV-2 (תסמונת נשימה חריפה חמורה) או COVID-19. מאז, זה הפך למגיפה עולמית. הוא שייך לקבוצה של נגיפי קורונה. מבחינה מבנית, מדובר במעטפת, לא מפולחת, השייכת לתת-הסוג של Sarbecovirus, ותת-משפחת Orthocoronavirinae. החומר הגנומי הקיים במבנה שלו הוא רצף RNA בעל חוש חיובי חד-גדילי [23]. הם נמצאים בעיקר במארחי עופות ויונקים. המבנה הגנומי של נגיף הקורונה תואר באיור 2, המייצג שהמבנה הנגיפי מכיל חלבוני ספייק, בעלי יחידות משנה, S1 ו-S2, על הממברנה החיצונית. הגנום הנגיפי של ה-RNA מוקף בתוך הממברנה יחד עם הנוקלאוקפסיד. לפיכך, אנו יכולים לומר שיש ארבעה חלבונים מבניים, כלומר חלבון הספייק (S), חלבון נוקלאוקפסיד (N), חלבון ממברנה (M) וחלבון מעטפת (E) [24]. בנוסף לכך, קיימים גם חלבונים לא מבניים (Nsp) שהם שישה עשר בסך הכל. חלבוני הספייק הם אתרי הקישור הבולטים לקולטן, שבהם החלבונים יכולים לקיים אינטראקציה עם קולטנים הנמצאים בגוף [25]. תת-יחידת ה-S1 כוללת את תחום מקשר הקולטנים (RBD), שבו האנזים II הממיר אנגיוטנסין נקשר לחלבון הספייק. הוא מורכב גם מהתחום N-terminal (NDT). תת-יחידת S2 מכילה את חלבוני ההיתוך (FP) ואת החלבונים הטרנסממברניים (TM) [26]. עם כניסת הנגיף לתאי המאכסן, הוא מוביל לאיחוי וביטול ציפוי של הממברנה הנגיפית, ולאחר מכן שעתוק ותרגום של mRNA, שהוא חיוני ליצירת מכלול ויראלי, אשר לאחר מכן יוצא החוצה מהמארח דרך אקסוציטוזיס כדי להדביק. תאים אחרים. כניסת חלקיקים ויראליים לתאי הגוף האחרים מובילה לגירוי התגובה החיסונית וליצירת נוגדנים [27].

איור 2. מבנה גנומי של נגיף הקורונה. (נוצר עם BioRender.com שאליו נגישה ב-31 בדצמבר 2022).

בעולם, נעשה שימוש נרחב בחיסונים והם יעילים בהפחתת שיעורי התמותה. בהתבסס על מדע וידע מעמיקים, ניתן לשפר את הערכת הבטיחות והיעילות של חיסונים והערכת ספיגתם [28]. החיסונים התפתחו מחיסונים מסורתיים כמו חיסונים חיים מוחלשים או מומתים לחיסונים של תת-יחידות ולבסוף, אסטרטגיות חיסון ראשוניות הומולוגיות או הטרולוגיות [29]. אסטרטגיות חיסון שונות תוארו באיור 3. בעת העתיקה, חיסונים חיים מוחלשים הוכחו כמצילים נגד נגיפים פתוגניים שונים ונחשבים בטוחים בפני מיליוני אוכלוסיות, אך לעתים קרובות הם מוזנחים. חיסונים רבים, כולל MMR (חצבת, חזרת, אדמת) וחיסוני אבעבועות רוח הם חיסונים חיים מוחלשים [25,30]. ניתן להשיג את הצורות המוחלשות של הנגיף על ידי חשיפתו לתנאים שליליים או על ידי שינויים גנטיים. סוג זה של חיסון, במיוחד חיסון פוליו פומי (OPV) יכול להינתן בדרכים לא פולשניות. לעומת זאת, לחיסונים מומתים, שהם הגרסאות המומתות של הנגיפים, יש יישום מוגבל מבחינת התגובה האימונולוגית, אך החיסון ההודי הנמצא כיום בשימוש, COVAXIN®, המיוצר על ידי Bharat Biotech International Limited, Hyderabad, Telangana, הודו משתמש בגרסה המושבתת של הנגיף בניסוח החיסון שלו [31]. הנגיף המומת מסוגל לשמור על התאמת התגלמות שלו המסייעת בוויסות התגובה החיסונית ההומורלית [32].

איור 3. אינטראקציה של חיסונים עם התאים המארח וחלקיק הנגיפי. (נוצר עם BioRender.com שאליו נגישה ב-31 בדצמבר 2022)

טכנולוגיות עדכניות כמו חיסונים מבוססי mRNA או חיסונים מבוססי וקטור מפיקים מהם את המרב לבטיחות וליעילות של חיסוני COVID-19 [33]. החיסונים המבוססים על וקטורים ידועים גם כחיסון prime-boost heterologous, המסייע בהשראת תגובות חיסוניות תאיות והומורליות, בעוד שחיסוני תת-היחידה החיים מעוררים תגובה הומורלית בלבד [34-39]. על פי מחקר, עלייה של פי 5-10 בתגובה חיסונית מתווכת תאי T במקרה של חיסון מבוסס וקטור הטרולוגי בהשוואה לאותה ניסוח, שהוכן בגישה הומולוגית [40]. לפיכך, חיסונים מבוססי וקטור, כלומר מבוססי DNA ו-RNA מועדפים יותר על פני תת-יחידות, לרוב נחשבים חזקים יותר בהשוואה לחיסוני RNA, ויעילים מכיוון שהם מקודדים את חלבון הספייק של מבנה הנגיף. במקרה של נגיף Chikungunya, אסטרטגיית החיסון המשותפת באמצעות DNA וחלקיקים דמויי וירוס יצרה תגובה חיסונית טובה יותר במחקרים בבעלי חיים [41]. לפעמים, חיסוני DNA דורשים מערכות מסירה מיוחדות כגון אלקטרופורזה, מערכי מיקרו-מחטים ומערכות מבוססות נשא כגון ליפוזומים כדי לשפר את החדירות. מיקרוספירות מבוססות חומצה פולילקטית-קו-גליקולית פותחו עבור מתן חיסון DNA ל-HIV-1 בדרך התוך-שרירית [42]. עם זאת, חיסונים מבוססי DNA מייצרים תגובה חיסונית דלה ולעיתים דורשים מינון נוסף. ניתן להתגבר על כך על ידי שימוש בחיסונים מבוססי mRNA [25,43].

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

3. פיתוח חיסון מבוסס mRNA

בעבר, צורות שונות של RNA שימשו לניסוח החיסון, כולל mRNA מתומלל במבחנה, siRNA (RNA התערבות קטנה), aptamers מבוססי RNA, ריבוסוויצ'ים, מולקולות אנטי-סנס, ומאוחר יותר, mRNA. המודעות לחומצה ריבונוקלאית שליח, כלומר, mRNA מקורה ביצירתה הבסיסית, יתרה מכך, חסכונית, תנועתה החולפת ופירוק איטי בתאי המטרה, והיתרונות הביטחוניים שלה בניגוד לטיפולי DNA שכן היא אינה מתאמת את הגנום האנושי, ומעכבת את ההחדרה שלה. מוטגנזה, והיא נגישה מיידית לפרשנות לחלבון בציטופלזמה של התא [44]. בתחילת שנות ה-90, חוקרים עבדו בשפע כדי להצליח בפיתוח חיסונים מבוססי mRNA. ניסויים שונים בוצעו במבחנה והתוצאות הראו ייצור לאחר מכן של חלבונים רצויים; לכן, הגיע למסקנה שמכיוון ש-mRNA מסוגל לייצר חלבונים, אז זה יכול להיות משטר טיפולי סביר לטיפול במחלה [45]. לפי Martinon וחב', חיסון ה-mRNA המבוסס על נוקלאופרוטאין לטיפול בשפעת סונתז על ידי שעתוק חוץ גופית ושולב בשלפוחיות ליפוזומליות. התוצאות הדגימו אינדוקציה של תאי T ציטוטוקסיים ונוגדנים, in vivo [46]. מאז, חלה התפתחות מתקדמת בשימוש ב-mRNA ככלי טיפולי בשל יעילותו המשמעותית, הגדלה קלה וחסכוניות, שהיא דרישה עיקרית לטיפול במחלות מדבקות מאוד ובטיפול בסרטן. מחקרים אחרונים גילו שטיפולים מבוססי mRNA הגנו באופן משמעותי על עכברים מפני תסמיני Chikungunya ושמרו על רמות רצויות של נוגדנים לאחר שתי מנות [47]. חיסונים מבוססי RNA מכוונים לתאי החיסון של הגוף על ידי שינוי תפקודיהם, מכוונים לריבוזומים לתרגום, ובכך יוצרים תגובה חיסונית [19].

חיסונים מבוססי mRNA כוללים mRNA חד-גדילי, המקודד לאנטיגן הרצוי. ניתן להעביר אותם כ-mRNA עירום או לכלול אותם במערכות נשאות מתאימות כדי להקל על המסירה לתוך התאים. ברגע שה-mRNA נכנס לתא, הוא מתורגם למבנים מבוססי חלבון על ידי המנגנונים הטבעיים של התא. זה נתון עוד לשינויים שלאחר תרגום כדי להשיג חלבון מעניין ויוצר תגובה חיסונית כפי שנקבע על ידי פפטידי האות [44,48]. חיסונים מבוססי mRNA עומדים בפני מינימום של שני מכשולים: פירוק גרעיני בעת הזרקה לבעלי חיים ואימונוגניות מולדת הדומה לזו של אנטיגן [49]. כדי לעקוף בעיה זו, פסאודו-אורידין (Ψ) הוא שינוי RNA ידוע. Ψ להחליף את האורידין ב-mRNA מתומלל במבחנה (IVT), שהוא נוקלאוטיד נפוץ מאוד ומופיע באופן טבעי בכל התאים עם RNAs. חיסון נגד COVID-19, המיוצר על ידי שתיהן, Moderna ו-Pfizer-BioNTech מורכב מ-Ψ חדשני עם יעילות של עד 90% נגד תסמינים [50]. לפיכך, חיסון שפותח על ידי CureVac NV חסר mRNA עם שינוי ב-Ψ וניסויים קליניים אישרו את היעילות של 48% בלבד [51].

במהלך תהליך התרגום, קיימות בעיקר שתי קטגוריות שונות של חיסוני mRNA, כלומר, mRNA לא מגביר (NMR) ו-mRNA מגביר עצמי (SMR). מנגנון העבודה של mRNA שאינו מגביר ו-mRNA מגביר עצמי מוסבר באיור 4. מבחינה מבנית, כפי שמוצג באיור 5, לשני המבנים יש CAP, 50 ו-30 אזורים לא מתורגמים (UTR), מסגרת פתיחה (ORF), וקוקו משותף [52,53].

איור 4. קטגוריות של mRNA. (נוצר עם BioRender.com שאליו נגישה ב-31 בדצמבר 2022)

בנוסף לכך, ל-SMR יש רפליקז כמקטע המסייע בהגברה של mRNA תוך תאי. יתר על כן, המקטעים מתורגמים על ידי ריבוזומים לייצור חלבונים בעלי עניין. החלבונים המופרשים מובילים ליצירת תגובה חיסונית [54]. SMRs גדולים יחסית מ- NMRs ומולקולות אניוניות. מחקרים אחרונים של RNA משכפל עצמי הראו ביטוי טוב יותר של תת-גנום במבחנה של חלבונים לא מבניים של רפליקון וונצואלה סוסי אנצפליטיס (VEE) כאשר נצפו מוטציות שונות. מחקר ניסוי קליני דומה נערך במטרה למקד את הגליקופרוטאין של הכלבת באמצעות RNA מגביר עצמי של וירוס VEE-Sindbis שנוסח לננו-אמולסיות, נמשך כעת [55]. מאפייני האיכות הקריטיים העיקריים (CQAs) המגדירים את היעילות של טיפולי mRNA מסוכמים בטבלה 1 [54].

איור 5. אופטימיזציה של רצף mRNA. (מותאם מ-[56] עם זכויות והרשאות).

טבלה 1. CQAs עבור חיסוני mRNA.

ייצור ה-mRNA הוא תהליך דו-שלבי, הכולל ייצור וטיהור. אין זיהומים במערכות ייצור mRNA מכיוון שהוא אינו מכיל חומרי גלם מבעלי חיים או תאים, הייצור בטוח יותר יחסית [65]. ייצור רצף mRNA עשוי להיות תהליך אנזימטי חד-שלבי או תהליך אנזימטי דו-שלבי. אנלוגי מכסה משמש במקרה של תהליך ייצור חד-שלבי, המשמש בדרך כלל בקנה מידה מעבדתי. לאחר מכן, התהליך מתבצע על ידי טיהור, הכולל הפרדה באמצעות טכניקות כרומטוגרפיות כפי שמוצג באיור 6. התגובה האנזימטית הדו-שלבית לייצור mRNA כוללת שעתוק חוץ גופית של תבנית ה-DNA ליצירת רצף RNA פולימראז [66]. ניתן לכסות את תבנית ה-mRNA שנוצרה כך באמצעות אנזים מכסת vaccinia ותורם מתיל. ייצור ה-mRNA גבוה יחסית ובקנה מידה תעשייתי, קשה להגיע לשחזור [67].

איור 6. תהליך הייצור של רצף mRNA. (נוצר עם BioRender.com שאליו נגישה ב-1 בינואר 2023)

4. כיצד פועלים חיסוני mRNA?

mRNA היא מולקולה לא יציבה בעלת מטען שלילי שמכוסה בננו-חלקיקים ליפידיים. באמצעות אנדוציטוזיס, חלקיקים ליפידיים אלה נכנסים לתאים. ברגע שנכנסים לציטופלזמה, האנדוזומים הללו מופנים מיד לליזוזומים לפירוק. מחקרים מגלים כי ליפידים הניתנים למינון תפקיד חשוב בבריחת האנדוזומים ושחרור ה-mRNA. קבוצת הראש של השומנים פרוטונרית בתוך הסביבה החומצית של האנדוזומים, ומצב קטיוני זה נצמד לאחר מכן לראש האניוני של הפוספוליפיד בקרום האנדוזומלי. לאחר מכן הזנב ההידרופובי של שומנים קטיוניים ופוספוליפידים מתרחב, משבש את מבנה הפוספוליפיד הדו-שכבתי ומאפשר ל-mRNA לברוח לתוך התא הציטופלזמי. ריבוזומים הופכים mRNA לחלבונים כאשר הוא משתחרר. חלבון זה יכול להפעיל תגובה חיסונית בשתי דרכים: (1) הפרוטאזום מפרק חלבונים אלה לפפטידים, אשר מוצגים לאחר מכן כאנטיגן על פני התא על ידי מולקולות MHC (Major Histocompatibility Complex) Class I, אשר נקשרות ל-TCR (T) קולטן תאים) כדי להפעיל תאי CD8+ T, אשר הורגים תאים נגועים; החלבון עצמו יכול להפעיל תגובה חיסונית בשתי דרכים. (2) חלבונים המופרשים מחוץ לתא נבלעים על ידי APCs (תאים מציגי אנטיגן) ומפורקים לפפטידים המוצגים על פני התא על ידי MHC Class II ומוכרים על ידי תאי CD4+ T, אשר מפרישים ציטוקינים לייצור תאי תגובה והפעלה משותפת של תאי B כדי לייצר תגובה חיסונית הומורלית, כפי שמוצג באיור 7. יתר על כן, חיסוני mRNA סיפקו RNA דו-גדילי וחד-גדילי שנקשר ל-TLR (קולטן דמוי-Toll-like) באנדוזום, וכתוצאה מכך גירוי של גנים רבים מעוררי IFN-1 (סוג I אינטרפרון), ומכאן הפעלת תגובות חיסוניות מולדות אנטי-ויראליות.

איור 7. המנגנון שדרכו חיסון mRNA מעורר חסינות למארח. (נוצר עם BioRender.com שאליו נגישה ב-1 בינואר 2023)

5. היבטי ניסוח של חיסונים מבוססי mRNA

לאחר הזרקת ה-mRNA המתועתק, הוא יבטא חלבונים בתוך הגוף. נצפית תגובה אימונולוגית עקב החלבון המבוטא מה-mRNA. תהליך זה הוא בעיקר הבסיס לפיתוח חיסון mRNA [68].

5.1. תבנית DNA

זיהוי האנטיגן מפתוגן המטרה הוא השלב הראשון. פיתוח חיסון mRNA מצריך תוספת של האנטיגן המקודד בתבנית DNA, שתסייע בתרגום של mRNA במבחנה. האנטיגן הספציפי ייוצר in vivo על ידי שעתוק ה-mRNA המתועתק, שיגיע רק לציטופלזמה; זה יעזור לעורר תגובה חיסונית. ה-DNA הפלסמיד (pDNA) מכיל רצף פרומטור עם זיקה חזקה לפולימראז RNA תלוי DNA, כגון T7, SP6 או T3, וכן את הרצף המתאים למבנה ה-mRNA. האנזים יעבור לאורך התבנית, וירחיב את תמליל ה-RNA עד שיגיע לקצה התבנית [69].

5.2. אנזים מכסה

לתרגום יעיל של mRNA מכסת תבנית ה-DNA בקצה ה-50 של ה-mRNA חשוב מאוד. יתר על כן, 50 מכסים ב-mRNA בוגר נדרשת להגנה על mRNA מפני השפלה, ביטוי גנים וגיוס ריבוזומים. גשר 5 0 -50 -טריפוספט מחבר את 50 הכובעים של mRNA אוקריוטי ל-7-מתילגואנוזין (m7G) (m7GpppN). טכניקת תעתוק משותפת חדשה שהשתמשה בערכת מכסה נקייה כדי להוסיף במדויק מבנה טבעי של 50 cap1 לאתר ההתחלה במהלך תגובות IVT, הפכה את יצירת ה-mRNA של 50 מכסים על ידי T7 פולימראז לשיטת מכסה נפוצה עם תרגום טוב וריאקטוגניות מינימלית. בחיסוני COVID-19 BNT162b1 mRNA, נוספו 5 0 מכסים בשיטת ה-clean cap [70]. ל-mRNA המתומלל אנלוגי cap יש זנב פולי 1 וזנב 30 (פולי-A) קיים ב-30 הקצוות של mRNA איקריוטי. זנב פולי A זה מבצע פונקציות של הובלה, תרגום ויציבות של mRNA. זנב 30 פולי A וכובע 50 ייצרו מבנה לולאה סגורה יציב עם קומפלקס eIF4F לתחילת תהליך התרגום. בגלל 120 הנוקלאוטידים (nt) שלו בזנב 30 poly(A), לחיסון ה-BioNTech mRNA יש יציבות ויעילות תרגום מעולים [71].

5.3. תשתיות נוקלאוטיד טריפוספט (NTP)

כאשר פלסמידים של DNA משולבים עם T7 פולימראז ונוקלאוטיד טריפוספטים, mRNA מתורגם ביעילות רבה יותר ומופקות יותר תפוקות. לאחר מתן החיסון, חשש שהועלה הוא אימונוגניות. עם הפעלת האיתות במורד הזרם, הגוף יזהה ויגיב ל-RNAs ויראליים. זיהוי זה של RNA חד ודו גדילי הוא על ידי קולטנים אנדוזומליים כגון קולטנים דמויי Toll (TLR3), TLR7 ו-TLR8. RNA דו-גדילי ו-50 -מתונה בטריפוספט מזוהה על ידי הגן-I (RIG-1 הניתן להשראת חומצה רטינואית של הקולטן הציטוסוליים וחלבון 5 (MDA{12}} הקשור בהתמיינות מלנומה). תגובות אלרגיות והלם אנפילקטי דווחו כאשר מערכת החיסון של הגוף הופעלה בצורה לא מבוקרת. גירוי יתר זה של מערכת החיסון ברמה מולקולרית יגביל את תרגום החלבון, ביטוי של אנטיגנים ויעילות החיסון. ניתן להתגבר על מגבלה זו על ידי שינויים ב- Nucleobase. N1-methyl pseudouridine, נוקלאובסיס שונה, יגדיל את תפוקת החלבון ויקטין את ההפעלה של TLR3. נוקלאוטידים שהשתנו באמצעות RIG-1 לא רק משפיעים על אינטראקציה בין חלבון ל-RNA אלא גם מפחיתים את היכולת של mRNA להפיץ אותות אימונולוגיים. יעילות התרגום של mRNA לחלבון משופרת בגלל N1-methylpseudouridin. התחלת תרגום המתרחשת במהירות תגדיל באופן קואורדינציאלי את זמן מחצית החיים של mRNA [50].

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche Enhance Immunity

【בקש עוד】 דוא"ל:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

5.4. רכיבי ננו-חלקיקים ליפידים להעברת mRNA

בהשוואה לכל שאר החיסונים, חיסוני mRNA מפותחים מהר יחסית והם יעילים יותר. עם זאת, האתגר הגדול ביותר בייצור חיסוני mRNA הוא היציבות הירודה שלהם. היציבות והיכולת של החיסון לטפל בזיהום ה-COVID-19 מופחתות מכיוון שהחיסון מתפרק במהירות על ידי ריבונוקלאזים לאחר הלידה, ומייצר רכיבים מפורקים אשר מסולקים דרך הכליה. כדי להתמודד עם אתגר זה, ניתן לגבש mRNA עם ננו-חלקיקים שומנים (LNPs). חיסון mRNA-LNP יגן על ה-mRNA מפני התפרקות מוקדמת ויקל על משלוח ציטופלזמה לתאים המציגים אנטיגן [72]. ליפידים הם סוכנים מושלמים להעברת mRNA באתר הציטוזולי, שכן ההיתוך שלהם תואם את ממברנות תאי השומנים; מה שמוביל לשחרור ממוקד ויעיל של ה-mRNA. LNPs הם חלקיקים בגודל ננו בקוטר של פחות ממיקרון אחד המכילים שניים או יותר שומנים בפרופורציות משתנות. LNPs שונים מליפוזומים בגלל נוכחותם של רכיבי שומנים בליבה כתערובת לא רציפה. ל-LNPs שעברו ניסוח יש מבנה שלפוחית ​​רב-שכבתית, מעטפת ליבה הומוגנית וליבה בעלת ננו-מבנה [73]. יש נוכחות של מים בתוך הליבה של ה-LNP, אשר חושף mRNA לאינטראקציה עם מדיום מימי. כפי שמוצג באיור 8, mRNA ממוקם בתוך ה-LNPs, אשר מגן עליו מפני הסביבה החיצונית. ההרכב הנפוץ ביותר, המרכיב את מערכות ה-mRNA LNP הם שומנים קטיוניים/מייננים, פוספוליפיד ("שומני עוזר"), כולסטרול ופולי-אתילן-גליקול (PEG). ניתן לשנות בקלות מאפיינים פיזיקוכימיים בתוך מערכת האספקה ​​של LNP, כגון יעילות המעטפת, מטען פני השטח החיצוני, גודל החלקיקים והצורה על ידי התאמת הרכב השומנים. יחסי הרכיבים מותאמים בהתאם לרקמת המטרה הרצויה [74].

איור 8. מבנה של ננו-חלקיקים ליפידים המשמשים לאספקת mRNA יעילה. (נוצר עם BioRender. com שאליו ניתן לגשת ב-1 בינואר 2023)

5.4.1. הליפידים הקטיונים

עם קבוצת אמינים המקנה מטען חיובי נטו, שרשרת הידרופובית וקבוצת הצמדה המאפשרת את ההתקשרות של החלק ההידרופילי לשרשרת ההידרופובי, שומנים קטיוניים מציגים את התכונה האמפיפילית. יש להם מטען חיובי קבוע בראש הקוטב שלהם, מה שמסייע באינטראקציה עם חומצות גרעין טעונות שלילי, ומשפר את היעילות של לכידה. הבריחה האנדוזומלית של מערכת LNP והספיגה התאית מוגברת גם בגלל המטען החיובי נטו. עבור מתן mRNA, שומנים קטיוניים, שומנים מייננים וסוגי שומנים אחרים נחקרו. בהשוואה לשומנים קטיוניים שאינם ניתנים למינון, ליפידים הניתנים למינון, הטעונים חיובית ב-pH נמוך וב-pH פיזיולוגי נשארים ניטרליים, פחות רעילים יחסית בגלל שינויים ב-pH. בתוך קרום התא, הם טעונים באופן חיובי ובזרם הדם, יש להם תכונות לא טעונות. חיסון BNT162b2 כולל שומנים קטיוניים ALC-0315 ואילו mRNA-1273 מורכב מ-SM-102; ב-pH נמוך, שני הליפידים פרוטונים שיצרו בקלות קומפלקס עם mRNA. זרם של mRNA במים משולב עם תערובת שומנים באתנול באמצעות מכשיר מיקרופלואידי. על מנת ללכוד את ה-mRNA הטעון שלילי, המרכיבים של שני הזרמים הללו מתחברים במהירות ליצירת ננו-חלקיקים [75]. עבור החיסון BNT162b2 היחסים המולאריים של השומנים הקטיוניים: PEG-lipid: כולסטרול: DSPC הם (46.3:1.6:42.7:9.4) ועבור ה-mRNA-1273 הוא (50:1.5:38.5:10). הננו-חלקיקים הם בעלי קוטר של 80-100 ננומטר וכ-100 מולקולות mRNA נמצאות עבור ננו-חלקיק שומני אחד [73].

5.4.2. ליפידים של פוליאתילן גליקול (PEG).

ליציבות הקולואידים ומניעת קשירת חלבון לננו-חלקיק משתמשים בשומני פוליאתילן גליקול. הם מקנים מחזור מערכתי ארוך יותר על ידי מזעור פינוי הננו-חלקיקים. LNPs עלולים לגרום להצטברות פיזית בתמיסה, מה שיכול להגדיל את גודל החלקיקים של ה-LNPs, ושומני PEG יכולים להתגבר אולי אפילו על שחרור מוקדם של ה-mRNA המובלע. יתר על כן, יציבות האחסון של ה-LNPs תשופר גם היא [76].

5.4.3. כולסטרול

להעברה של תאים ולייצב LNP לכולסטרול יש תפקיד חיוני. טמפרטורת מעבר נמוכה יותר מושגת כאשר תכולת הכולסטרול מוגברת ב-LNPs, זה יעזור בשחרור mRNA מה-LNP ובטרנסלוקציה שלו על פני הממברנה האנדוזומלית [77]. במחקר שנערך על ידי Zhang וחב', ליפוזומים שעברו ניסוח באמצעות פפטיד קטיוני שעבר שינוי בכולסטרול DP7 יחד עם Dioleoyl-3- trimethylammonium propane (DOTAP) כנשא לאספקת mRNA. הליפוזומים הוכנו על ידי טכניקת הידרציה בסרט ולאחר מכן הוערכו לגבי יעילות ההעברה שלהם. במבחנה, מחקרי טרנספקציה גילו עלייה ביעילות ההעברה עם עלייה בריכוז הפפטיד DP7. בנוסף לכך, in vivo, מחקרים נגד גידולים הראו שלקומפלקס יעילות טובה יותר נגד הגידול [78].

5.4.4. חומרי עזר אחרים

חיסוני ה-mRNA מורכבים מייצבים, למשל. Tromethamine, אשר חוסם לשמירה על pH של 7-8, מלחים: עוזר לאיזון החומציות בגופך, סוכר שעוזר למולקולות לשמור על צורתן במהלך ההקפאה פועל כמגן קריו ושומר על היציבות לטווח ארוך של ניסוח ננו-חלקיקי ליפידים-mRNA. [73]. סיכום של מרכיבי מפתח המשמשים בחיסונים מבוססי mRNA מסופק בטבלאות 2 ו-3.

טבלה 2. מרכיבי מפתח המשמשים בחיסונים מבוססי mRNA.

טבלה 3. מרכיבי ניסוח של חיסוני mRNA של פייזר ומודרנה.

5.5. מערכת מסירה אחרת עבור mRNA

5.5.1. ננו-חלקיקים פולימריים

ניתן לסנתז ננו-חלקיקים פולימריים מפולימרים סינתטיים או טבעיים כגון PLGA [פולי (חומצה לקטית-קו-גליקולית)], כיטוזן, PLA (חומצה פולילקטית), פולי-קפרולקטון, ג'לטין ופולי-אלקיל-ציאנואקרילטים. חלקיקי ננו פולימריים אלה יכולים להכיל תרכובות וחלבונים הידרופוביים והידרופיליים, חיי מדף ארוכים; ויכול לשנות את האספקה ​​של תרכובות טיפוליות. RNA יכול להיות מובלע בפולימרים קטיוניים בהרכבה עצמית עם שינוי הידרופובי [80,81].

5.5.2. ננו-תחליב קטיוני

ננו-תחליב קטיוניים הוכחו ככלי מסירה יעיל להעברת חומצות גרעין. שומנים קטיוניים הקיימים בננו-אמולסיות חשובים לקומפלקסים עם חומצת גרעין באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות ומשפרים את יעילות ההעברה של חומצת גרעין ואת יציבותה. מחקרים מגלים שמערכת אספקת ננו-תחליב קטיוניים של mRNA משפרת את התגובה החיסונית על ידי גיוס תאי חיסון והנעת תגובות תאיות לנוגדנים ופרימטים T במינונים נמוכים יחסית [80,82].

5.5.3. סיליקה ננו-חלקיקים

חלקיקי סיליקה מזופוריים מורכבים ממטריצת סיליקה אמורפית עם נקבוביות מסודרת היטב בתחום המזופורי. לננו-חלקיקים אלה יש שטחי פנים גדולים עם נפחי נקבוביות גדולים וניתן לשנות את פני השטח שלהם בקלות על ידי חלקים מסוימים בעלי מטען חיובי כדי להעביר ביעילות RNA טעון שלילי. יתר על כן, משלוח ממוקד של RNA יכול להיות אפשרי על ידי הצמדת ליגנדים ספציפיים על פני השטח [81]. על פי מחקר שנערך על ידי Adam וחב', חיסון לאף מבוסס על מיקרו-חלקיק סיליקון נקבובי (mPSM) שונה נגד COVID-19. הניסוח הוביל לעלייה בתאי T עוזרים (Th1) ותגובות חיסון ו-mPSM גרמו לקליטת אנטיגנים במסלול האף. נמצא שהעומס הנגיפי מופחת באופן משמעותי [83].

5.5.4. ננו-חומרי פחמן וזהב

ננו-צינוריות פחמן, ננו-חלקיקי זהב, תחמוצת ננוגרפן ונקודות קוונטיות, הם ננו-מבנים מסונתזים שיש להם גם פוטנציאל לספק RNA לאתר היעד וגם להגן עליו מפני השפלה [81].

6. אתגרים לאחסון חיסון

היציבות ודרישות האחסון הן הדאגה העיקרית עבור חיסוני mRNA. היציבות תלויה בגורמים כגון חומרי עזר, pH וטמפרטורה. חיסון ה-COVID-19 מבית BioNTech/Pfizer צריך להיות מאוחסן ב-80 ◦C ובעל חיי מדף של עד 6 חודשים, בעוד שחיסון ה-COVID-19 של Moderna צריך להיות מאוחסן ב-20 ◦C ובעל אותו חיי מדף. חיסון BioNTech/Pfizer דורש אריזה עם קרח יבש בזמן ההובלה. ההפצה של שני החיסונים במדינות עניות בעולם היא מאתגרת, שכן יש לאחסן חיסוני mRNA בטמפרטורות קרות במיוחד. הדרישות הללו יקרות ובאזורים בעולם עם משאבים מוגבלים, הסדרים קשים. הפיתוח של חיסון mRNA יציב תרמי, יעיל קלינית וניתן לשמור אותו לזמן ממושך יותר מבלי לגרור עלויות אחסון גדולות הוא אחת הבעיות. על פי המלצות האחסון של EMA, חיסוני mRNA מתוצרת Moderna ו-BioNTech יציבים כשהם מוקפאים עד 6 חודשים ב-25 מעלות צלזיוס, עד 30 ימים בטמפרטורת המקרר (4 מעלות צלזיוס), ועד 6 שעות בטמפרטורת החדר [ 84].

7. בטיחות ויעילות של חיסוני mRNA

7.1. בטיחות חיסונים מבוססי mRNA

בוצעה הערכה של תוצאות הקשורות לבטיחות עבור חיסוני mRNA. ניסוי ניסוי פתוח של mRNA-1273 עם העלאת מינון שלב 1, בוצעו על משתתפים בגיל שבין 18 ל-70 שנים ומעלה [85]. המחקר בוצע בשתי קבוצות שבהן משתתפים בגילאי 18-55 קיבלו מינון חיסון של 250 מיקרוגרם ולנבדקים מבוגרים יותר ניתנו 25 מיקרוגרם או 100 מיקרוגרם מהמינון. תופעות לוואי מקומיות ומערכתיות מבוקשות, תופעות לוואי לא רצויות, תופעות לוואי חמורות והתפתחות של מצבים רפואיים כרוניים חדשים נצפו לאחר החיסון. התוצאות לא הראו התפתחות של תופעות לוואי חמורות. תגובות הלוואי האופייניות ביותר שדווחו היו כאבי ראש, עייפות, מיאלגיה, צמרמורות וכאבים באתר ההזרקה. רמות נוגדנים מנטרלים הוכחו כמתואמות עם הגנה מפני מגוון וירוסים בבני אדם ועם הגנה מפני SARS-CoV-2 באתגרים של בעלי חיים. חיסון mRNA-1273 במבוגרים יותר יצר רמות גבוהות של נוגדנים קושרים ומנטרלים, והמגמות התלויות בזמן ובמינון היו דומות לתגובות במבוגרים צעירים יותר. התגובות לאחר החיסון השני היו דומות לאלו שנראו בחולים שהחלימו מ-COVID-19 ותרו נסיוב הבראה, כולל חולים קשים. חולים מבוגרים יותר שקיבלו מינון של 100 מיקרוגרם הראו תגובות גבוהות יותר של נוגדנים ותאי T בהשוואה לאלה שקיבלו 25 מיקרוגרם והתגובה הייתה זהה לתגובה במשתתפים בגילאי 18 עד 55 שקיבלו את המינון של 100 מיקרוגרם. חולים מעל גיל 56 צריכים לקבל מנה שנייה של החיסון כדי להשיג נוגדנים מנטרלים. עם קבלת מנת דחף, טיטר הנוגדנים עולים במהירות. תוצאות מפתח הבטיחות של חיסוני Moderna ו-Pfizer שנצפו במהלך ניסויים קליניים שונים פורטו בטבלה 4.

טבלה 4. מחקרי בטיחות ויעילות של חיסוני mRNA בניסויים קליניים

טבלה 4. המשך.

לאחר המנה השנייה של החיסון, אירועי ריאקטוגניות מקומית ומערכתית עלו בתדירותם והיו בעיקר בחומרה בינונית. שכיחות אריתמה נמצאה בשלושה משתתפים ונמשכה 5 עד 7 ימים. תופעות לוואי מערכתיות מבוקשות כגון חום ועייפות התרחשו בתת-הקבוצה המבוגרת יותר באופן בולט. כל הממצאים הללו מצביעים על כך שאירועי הלוואי שהתבקשו או שלא התבקשו היו קלים עד בינוניים. לפיכך, mRNA-1273 נבדק עוד עבור ניסויי שלב 2/3 כדי להעריך בטיחות ויעילות באוכלוסיות גדולות יותר [95]. ניסוי קליני שלב 3 היה מחקר אקראי, מרובד, עיוור צופה ומבוקר פלצבו, שכלל 30,420 מתנדבים מגיל 18 ומעלה, שהוקצו באופן אקראי לקבלת חיסון (0.5 מ"ל עם 100 מיקרוגרם של מינון) או פלצבו. תגובות מקומיות במשך 7 ימים לאחר החיסון, תופעות לוואי סיסטמיות, תגובות לוואי בלתי צפויות לאחר 28 ימים של מתן מינון, וכל אירוע לוואי משמעותי כלשהן עוקב להערכת בטיחות. תופעות לוואי מבוקשות היו דומיננטיות ב-mRNA- 1273 בהשוואה לקבוצת הפלצבו (84.2%, לעומת 19.8%). חלק מהאירועים הנצפים ביותר היו כאבים במקום ההזרקה לאחר החיסון, אריתמה, רגישות והתקשות. אירועים אלו נפתרו תוך 4-5 ימים לאחר החיסון. לאחר המנה השנייה, קבוצת ה-mRNA-1273 ביקשה אירועים מערכתיים שהפכו חמורים יותר. נוכחות של תגובות רגישות יתר הייתה אצל 1.5% ו-1.1% מהמשתתפים בקבוצות החיסון והפלצבו, בהתאמה. מלבד תלונות אלו, לא הועלו חששות בטיחות לאחר מתן חיסון [106].

מנה שלישית של חיסון נדרשה עקב ירידה בהגנה בעקבות שתי הזרקות SARS CoV-2 mRNA והכנסת וריאציות. לאחר מתן מנה שלישית של חיסון ה-mRNA לאנשים שקיבלו בעבר את סדרת ה-mRNA-1273 הראשונית במחקר שלב 1, הוערכו הבטיחות המוקדמת והאימונוגניות שלהם. מחקר חתך שנערך בנאפולי (איטליה) העריך את המוכנות ללקיחת מגבר החיסון נגד COVID-19. בקבוצה זו, הקבלה של מינון הדחף הייתה כמעט 86%. יתר על כן, אנשים מבוגרים במצב בריאותי טוב יותר לאחר סדרת החיסונים הראשית, אלה שחיים עם חברים או בני משפחה שנבחנו חיובי ל-COVID-19, ואלו שקיבלו מידע הקשור למחלה ממוסדות ציבוריים רשמיים היו מוכנים לקבל את החיזוק מינון [107].

החיסון הדו ערכי הכיל 25 מק"ג מכל mRNA-1273 ו-mRNA-1273.351, בעוד שניסוחי החיסון המאיץ הכילו 100 מק"ג של mRNA-1273 ו-50 מק"ג של mRNA-1273 .351, המקודד לחלבון ה-Spike Variant Beta. מנה שלישית של חיסון mRNA הראתה ריאקטוגניות ובטיחות נאותים. בהשוואה לתגובות שיא לאחר המינון השני, עליות הנגרמות על ידי חיסון בטיטרי נוגדנים קושרים ומנטרלים לגרסאות D614G, Beta ו-Delta היו דומות או גדולות יותר. הבחין כי נוגדנים מנטרלים ומקשרים הצטמצמו כל הזמן. עם זאת, זיהוי של נוגדנים היה קיים לאחר 10-11 חודשים (לפני המנה השלישית) במשתתפים ללא קשר לגיל ולמינון הראשוני של הסדרה הראשונית (למשל, 25, 50, 100 ו-250 מיקרוגרם). כאבים באתר ההזרקה, עייפות, כאבי שרירים וצמרמורות היו ההשפעות השליליות שדווחו בתדירות הגבוהה ביותר לאחר המינון השלישי של חיסון ה-mRNA, ותדירות האירועים הללו הייתה דומה בין שלושת משטרי החיסון המאיץ (אב טיפוס חד ערכי, וריאנט חד ערכי וקבוצות דו ערכיות ). עם השימוש בחיסוני וריאנט בטא חד ערכי או דו ערכי, לא נראה יתרון או חסרון ספציפיים בתגובות התאיות לאפיטופים בתוך הפפטידים שעברו מוטציה בטא. כל הממצאים הללו תומכים בהצעה הנוכחית לפיה יש להשתמש בחיזוק אב-טיפוס של mRNA-1273 כדי לספק הגנה צולבת אימונולוגית נרחבת בין גרסאות [95]. לפי סקר, מתן הטרולוגי של BNT162b2 (BNT) במשתתפים עם דריכה של ChAdOx1 (ChAd) (ChAd/BNT) הוכיח אימונוגניות לא נחותה למתן BNT הומולוגי (הן הפריים והן הבוסטר היו חיסוני BNT, BNT/BNT), עם ריאקטוגניות נסבלת. ותגובות גדולות יותר של תאי T. בהשוואה לחיסון הומולוגי ChA dOX1 (ChAd/ChAd), חיסון הטרולוגי ChAd/BNT העלה אימונוגניות חזקה יותר (ChAd/BNT לעומת ChAd/ChAd, יחס כיתרות נוגדנים: 9.2) [108].

ניסוי שלב 1 עבור BNT162b2 נערך על 76 משתתפים; הם חולקו אקראית לקבלת מינוני חיסון של 10 מיקרוגרם, 30 מיקרוגרם ו-100 מיקרוגרם, והקבוצה השנייה קיבלה פלצבו. 58.3% מהנבדקים שקיבלו 10 מיקרוגרם ו-100% מ-30 מיקרוגרם ו-100 מיקרוגרם חוו כאב תגובה מקומית מבוקשת באתר ההזרקה לאחר המנה הראשונה. חומרת כל התגובות המקומיות הייתה קלה עד בינונית. עייפות וכאבי ראש ב-BNT162b2 היו אירועים מערכתיים שכיחים. בנוסף, נצפו גם צמרמורות, כאבי שרירים וכאבי מפרקים. במינונים גדלים, דווח על אירועים מערכתיים יותר לאחר מתן המנה השנייה. בסך הכל 50.0 אחוז מהמשתתפים שקיבלו 10 או 30 גרם של BNT162b1, 58.3 אחוז מהאנשים שקיבלו 100 גרם של BNT162b1 ו-11.1 אחוזים ממקבלי הפלצבו דיווחו על תופעות לוואי. לא דווח על תופעות לוואי חמורות [109].

בניסוי קליני של חיסון Pfizer/BioNTech (BNT162b2) שהיה רב לאומי, מבוקר פלצבו, סיוור צופה, אקראי ומחקר יעילות מרכזי, 43,548 משתתפים בני 16 שנים ומעלה הוקצו אקראית. סך של 21,720 מתנדבים קיבלו 30 מיקרוגרם לכל מנה של BNT162b2 ו-21,728 עם פלצבו. כדי לקבוע את פרופיל הבטיחות של מאפייני BNT162b2 כגון כאב באתר ההזרקה, שהוא לטווח קצר, קל עד בינוני במקרה של חומרה, עייפות וכאב ראש. שתי זריקות של BNT162b2 או פלצבו ניתנו לכל המשתתפים, לפי אקראי בהפרש של 21 יום, בשריר הדלתא [98]. תגובות מקומיות באלה שקיבלו את החיסון BNT162b2 דווחו יותר בהשוואה לקבוצת הפלצבו. כאב קל עד בינוני במקום ההזרקה היה התלונה השכיחה ביותר שנרשמה בקרב מקבלי BNT162b2 בתוך שבוע אחד. כאב חמור דווח בפחות מ-1% מהאוכלוסייה. הכאב נצפה פחות אצל משתתפים מבוגרים בהשוואה לזה של צעירים יותר. אדמומיות או נפיחות נצפו פחות. לאחר מתן המנה השנייה, תגובות מקומיות דווחו פחות [110].

משתתפים צעירים יותר שקיבלו את החיסון נתקלו באירועים מערכתיים יותר מאשר מבוגרים יותר. עייפות וכאבי ראש (59% ו-52%) היו האירועים השכיחים ביותר שדווחו, ונבדקים פחות מחוסנים (<2%) experienced any severe systemic events. After the second dose of the vaccine, 16% of younger groups and 11% of older age reported fever (temperature ≥ 38 ◦C), which increased the use of antipyretic or painkillers. However, post-delivery of the first dose cases of fever were reported very less [110]. Lymphadenopathy was noticed as an adverse event in BNT162b2 receivers in comparison to the placebo group. A shoulder injury related to the vaccination, right axillary lymphadenopathy, paroxysmal ventricular arrhythmia, and right leg paresthesia were among the unfavorable events recorded among BNT162b2 recipients [98]. Rare adverse effects observed are Bell's palsy, acute myocardial infarction, cerebral venous sinus thrombosis, pulmonary embolism, Guillain–Barré syndrome, lymphadenopathy, herpes zoster reactivation, stroke, neurological complications, and thrombosis with thrombocytopenia syndrome, and autoimmunity (e.g., autoimmune peripheral neuropathies and autoimmune hepatitis). Among these certain adverse effects such as anaphylaxis, myocarditis, and appendicitis were common in younger people while Guillain–Barré syndrome and myocardial infarction increased with age. These vaccine-associated adverse effects are less frequent than the additional serious adverse effects that occur after severe COVID-19. A recent study reveals the risk of neurological complications in COVID-19 vaccine receivers. The molecular foundation of these adverse effects is unknown. We hypothesize that, since most of these are also apparent in severe COVID-19, it may be associated with acute inflammation produced by both the vaccine and the virus, as well as in the common SARS-CoV-2 S protein. In the BNT162b2 and mRNA-1273 vaccines encoded antigen (S protein) is stabilized it is therefore probable that, if entering the circulation and systemically distributed throughout the body, it can contribute to these adverse effects in susceptible individuals [111].

7.2. יעילות חיסוני mRNA

להערכת היעילות של mRNA-1273, נקודות הסיום העיקריות של החיסון היו היעילות למניעת זיהום COVID-19 סימפטומטי לאחר 14 ימים של מנת החיסון השנייה. כנקודת קצה משנית, נעשה שימוש במניעה של זיהום חמור ב-COVID-19 עם תסמינים מתמשכים. תוצאות לאחר החיסון מראות ש-11 מקרים של COVID-19 היו בקבוצת המחוסנים ו-185 מקרים בקבוצת הפלצבו, מה שמצביע על יעילות של 94.1% של חיסון mRNA-1273 לטיפול ב-COVID סימפטומטי-19 . עבור נקודות קצה משניות של יעילות, בוצעה הערכה של מניעת COVID{11}} חמורה. התוצאות הצביעו על יעילות של 100% של החיסון שכן 30 משתתפים עם זיהום ויראלי היו בקבוצת הפלצבו. מחקר שנערך בקטאר הראה את יעילות החיסון (VE) של mRNA-1273 95.7% נגד זיהום חמור, קריטי או קטלני ב-COVID-19. לאחר יותר או שווה ל-14 ימים מהמנה הראשונה, היעילות הייתה 88.1% מול וריאנט B.1.1.7 (אלפא) והייתה 100% לאחר המנה השנייה. 61.3% ו-96.4% של VE דווחו לאחר המנה הראשונה והשנייה של החיסון נגד זן B.1.351 (בטא). לכן, החיסון מוצלח למדי הן נגד הזן, בין אם הוא סימפטומטי או אסימפטומטי, והן נגד כל אשפוז ומוות של COVID-19, אפילו לאחר מנה בודדת [112].

היעילות של חיסון BNT162b2 (VE) נגד COVID-19 מאושרת עם הופעה של לפחות 7 ימים לאחר המנה השנייה באנשים שהיו נקיים מראיות וירולוגיות או סרולוגיות לזיהום ב-SARS-CoV-2 הייתה המחלה הראשונית הראשונה נקודת קצה. נקודת הסיום העיקרית השנייה מדדה את היעילות במשתתפים עם וללא עדות לזיהום קודם ומניעת זיהום חמור ב-COVID-19. במחקר עם סך של 36,523 אנשים, 8 מקרים של COVID-19 שהחלו ב-7 ימים לאחר המינון השני התרחשו בקבוצת החיסון, בהשוואה ל-162 מקרים בקבוצת הפלצבו. זה מראה 95% מיעילות החיסון. עם זאת, ה-VE שנצפה נגד המחלה הנגיפית היה 52% בין המנה הראשונה לשניה, והוא היה 91% ב-7 הימים הראשונים שלאחר מנה 2, והשגת יעילות מלאה נגד המחלה עם התחלה לפחות 7 ימים לאחר מנה 2. רק 1 מתוך 10 מקרים חמורים של COVID-19 שנראו לאחר המינון הראשון התרחש בקבוצה שקיבלה את החיסון. תצפית זו עולה בקנה אחד עם היעילות הכוללת המצוינת כנגד כל חולי הקורונה-19. שני מקרים של זיהום היו אצל מקבלי חיסון בקרב חולי יתר לחץ דם ו-44 מקרים בקבוצת הפלצבו. מקרה זה מדווח על 94.6% מיעילות החיסון בחולי יתר לחץ דם. לפיכך, חיסון BNT162b2 עומד בנקודות קצה ראשוניות ומשניות כאחד בקרב משתתפים מחוסנים [113]. מלבד זיהום ב-SARS-CoV-2, עם מנה בודדת של החיסון BNT162b2, יעילות החיסון החזויה נגד מחלה סימפטומטית עם וריאנט הדלתא (B.1.617.2) הייתה כ-36%. לאחר שתי מנות, VE היה בערך 88 אחוז [114].

מערכת חיסון מגבירה צמח cistanche

8. אתגרים רגולטוריים

מדע הרגולציה הוא הבסיס שעליו מתקבלות החלטות רגולטוריות. מטרתו העיקרית היא לפתח שיטות, כלים ותקנים חדשים להערכת הבטיחות, היעילות, האיכות והביצועים של מוצרים בפיקוח בכל שלבי מחזור החיים שלהם [115]. חיסוני mRNA עומדים בפני אותם סוגים של מכשולים רגולטוריים כמו כל סוג אחר של חיסון, כולל הצורך להראות הוכחה לבטיחות ויעילות במחקרים פרה-קליניים, ניסויים קליניים ומעקב לאחר שיווק, כמו גם שמירה על סטנדרט גבוה עבור חומרי גלם המשמשים בייצור ועקביות של ייצור. בדיקת חיסונים מסתמכת במידה רבה על המהימנות והשחזור של אנזימים, נוקלאוטידים ותבניות DNA ליניאריות [116]. יש להסדיר בקפדנות רכיבים גולמיים, כגון שומנים, ולהוכיח את טוהרם. יש לעקוב אחר שיטות ייצור נוכחיות (cGMPs) בעת יצירת תבנית ה-DNA הליניארית. כדי להבטיח שחומר התרופה יהיה באיכות הגבוהה ביותר, חיוני לפקוח עין על אחוז ה-mRNA המכוסה ופוליאדניל, מספר התמלולים הקצרים והנוכחות של RNA דו-גדילי. פוליאדנילציה ומכסה את קצה ה-50 של mRNA מבטיחים יציבות ותרגום יעיל [21]. יעילות התרגום קשורה קשר הדוק לזנב הפולי (A) [114]. כימות כמות ה-mRNA המובלעת בחלקיק וקביעת התפלגות הגודל של החלקיקים היא קריטית למוצר התרופה מכיוון שהיא מאפשרת ליצרן להבטיח אחידות ייצור. ניטור מבוצע בדרך כלל על מספר מאפיינים, כולל אלה הנוגעים ליציבות, זהות וסטריליות. אחת הבעיות עבור מפתחי חיסונים, הרגולטורים והמשתמשים היא היציבות התרמית של חיסוני mRNA [115]. החיסונים הקונבנציונליים עוברים בדיקות מאמץ, כולל חשיפה ממושכת לטמפרטורות גבוהות, על מנת לקבוע את יציבותם במגוון נסיבות אחסון. זה חייב להתבצע גם עבור חיסוני mRNA, שבהם יש צורך להעריך לא רק את היציבות של מולקולת ה-mRNA אלא גם את שימור המבנה של חלקיק החיסון עצמו. פרוטוקולי בדיקת תקינות עבור רכיבי mRNA בודדים בחיסוני mRNA מרובי רכיבים עדיין זקוקים לפיתוח. הזיהוי של חיסון חומצת גרעין נקבע לפי הרצף שלו. באופן כללי, הרצף של פלסמיד ה-DNA הראשון המשמש כתבנית מספיק עבור חיסוני mRNA. הסיבה לכך היא שה-DNA מתורגם באופן מיידי ל-RNA. לא ידוע שרצף ה-mRNA, בין אם באופן ישיר או על ידי המרתו ל-cDNA ולאחר מכן ריצוף של אותו DNA, מספק מידע נוסף. למרות ששיעורי השגיאות של פולימראזות RNA גדולות משמעותית מאלה של פולימראזות DNA, שיעורי השגיאה המוצהרים של שגיאה אחת כל 104-105 נוקלאוטידים יהיו קשים לזיהוי ב-RNA בשל האופי האקראי של השגיאות. בהתבסס על מחקרים עדכניים המצביעים על כך שחיסוני mRNA מספקים חסינות מגן במודלים של בעלי חיים, נראה ששיעור שגיאות זה אינו משנה את היווצרותו של אנטיגן אימונוגני. ניתן לבצע כימות ליפידים על ידי LC-MS/MS [116]. אם החלבון מתורגם מהר מדי, ייתכן שהוא לא מתקפל כראוי לאנטיגן פונקציונלי, מה שעלול לגרום לתוצאה בלתי מכוונת של הפחתת יעילות החיסון.

9. דיון

בשנת 2021, חיסוני mRNA זכו לתשומת לב בשל מיקומם הקריטי בתגובת תעשיית התרופות ל-COVID-19. שלא כמו חיסונים נגיפיים מסורתיים, המשתמשים בעותקים מוחלשים ולא משכפלים של וירוסים כדי להציג אנטיגנים ולעורר תגובה חיסונית, אסטרטגיית ה-mRNA משתמשת במולקולות mRNA חד-גדיליות אופטימליות שיכולות לספק אינדוקציה ביולוגית. ברגע שיש לך את החיסון, התאים יקלטו אותו, 'יקראו' את רצף ה-mRNA וייצרו את חלבון הספייק. מכיוון שלגוף שלך חסרים חלבונים הדומים לשפיץ הזה, מערכת החיסון שלך מפרשת אותו כמזיק ופותחת נגדו תקיפה. בנוסף, אם נדבקתם בנגיף הקורונה מאוחר יותר, המערכת החיסונית זוכרת את חלבון הספייק ואף מזהה אותו. הקצב המדהים שבו פותחו שני החיסונים הראשונים ל-COVID-19 והפכו זמינים לציבור בארה"ב מגבה את הרעיון שחיסוני mRNA מפייזר ומודרנה קיבלו אישור שימוש חירום מה-FDA בדצמבר 2020-פחות מ- שנה לאחר שמדענים סינים הכריזו על הרכב הגנים של נגיף הקורונה. היתרון העיקרי של טכנולוגיות חיסונים מבוססות mRNA הוא הפוטנציאל שלהן להשתנות במהירות עבור מחלות שונות, שכן העיבוד של אנטיגן המטרה הוא 'במיקור חוץ' לתאי מארח, מה שאומר שרק הקוד הגנטי של האנטיגן משמש לעיצוב חיסון מוּעֲמָד. הזמן בין החלפת המבנה הגנטי של ה-SARS-CoV-2 של ממשלת סין לבין העברת מועמד החיסון שלה ל-National Institutes of Health (NIH) בארצות הברית למחקרי שלב ראשון של Moderna היה 44 ימים בלבד. חיסוני חיסון mRNA לא זכו היסטורית לאישור רגולטורי לשימוש באנושות עקב חוסר נתפס בניסויים קליניים לשיטה זו, כמו גם אתגרים טכניים הקשורים ליציבות המוצר ולהפצה. עם עלייה כזו של חיסוני mRNA בשוק, ייעוץ מדויק יותר שיעזור בפיתוח והערכה של חיסוני mRNA חדשים אפשרי. בקרה היא תחום נוסף שבו מדע חיסוני mRNA נמצא בחיתוליו. כרגע אין הנחיות רשמיות ממינהל המזון והתרופות האמריקאי או מסוכנות התרופות האירופית לחיסוני mRNA, למרות שהתרופות בטוחות מספיק לניסויים קליניים גדולים.

10. דברי סיכום וצפי עתיד

לפני 2020, mRNA לא היה מונח מדעי ידוע בעולם החיסונים. יותר משנה מאז החלה מגיפת הקורונה העולמית הקטסטרופלית-19, תוכניות קליניות מבוססות mRNA ראו עלייה משמעותית בתמיכה, הן מהציבור הרחב והן מהפארמה הגדולה. יותר מ-80 מיליון אמריקאים חוסנו נגד SARS CoV-2-הנגיף שגורם ל-COVID-19, תוך שימוש באפשרויות משנות המשחק של טכנולוגיית mRNA. "תחום החיסונים השתנה לנצח והתקדם לנצח בגלל COVID-19", אומר דן ברוך, MD, Ph.D., מנהל המרכז לחקר וירולוגיה וחיסונים בבית הספר לרפואה של הרווארד. בעיקר במצב של חיסון COVID-19, גדיל ה-mRNA מתוכנן לייצר את "חלבון השפיץ" הייחודי של וירוס הקורונה, אשר מייצר תגובה חיסונית שיכולה להגן מפני הידבקות בנגיף בפועל. החיסונים שפותחו על ידי Moderna ו-Pfizer/BioNTech היו החיסונים היחידים המבוססים על mRNA שקיבלו אישור חירום מהרגולטורים המרכזיים, וראיות בעולם האמיתי מההשקה העולמית של COVID-19 יהיו קריטיות בהצדקת יעילותם ארוכת הטווח ותכונות בטיחות נגד נגיף הקורונה וכמה סוכנים ויראליים אחרים. אספקת mRNA מבוססת אקזוזום תהיה גם העתיד של טיפולים מבוססי mRNA [117,118]. בעיקר עם השלכות של טכנולוגיה מבוססת mRNA שמתגלים כאשר חיסוני הדור הראשון הללו מתחילים להיפרס ברחבי העולם, יש כיום פריחה במחקר הקליני של mRNA למחלות זיהומיות, וחוקרים בתעשייה צופים עלייה בעניין בפלטפורמות mRNA לתחומים טיפוליים אחרים , במיוחד אונקולוגיה, אבל אפילו מצבים אוטואימוניים לא שכיחים וגנים נוירודים.

הפניות

1. מי. לוח המחוונים של WHO Coronavirus (COVID-19) 2023. זמין באינטרנט: https://covid19.who.int/ (נגישה ב-17 בינואר 2023).

2. פאל, ר.; Yadav, U. COVID-19 מגיפת הודו: תרחיש נוכחי וטיפוס תלול קדימה. ג'יי פרים. Care Community Health 2020, 11, 2150132720939402. [CrossRef] [PubMed]

3. קני, ר.; אלכסנדר, א.; Nayak, PG; מודגל, ג'; Nandakumar, K. COVID-19: הופעה, התפשטות, טיפולים אפשריים ועומס עולמי. חֲזִית. בריאות הציבור 2020, 8, 216. [CrossRef] [PubMed]

4. חבדה, סמנכ"ל; פינג, פ.-פ.; חן, ז.-ש. ההשפעה של COVID-19 על הטיפול בסרטן: עדכון. Vaccines 2022, 10, 2072. [CrossRef] [PubMed]

5. חרפן, ח.; Itoh, N.; יופיקה, א.; Winardi, W.; Keam, S.; Te, H.; מגוואטי, ד.; חייתי, ז; Wagner, AL; Mudatsir, M. Coronavirus Disease 2019 (COVID-19): סקירת ספרות. J. Infect. בריאות הציבור 2020, 13, 667–673. [CrossRef] [PubMed]

6. חבדה, סמנכ"ל; Chhabria, MT; אפוסטולופולוס, V. אוכלוסיה מבוגרת וחולים מוכפלים חיסונית: השפעה על גרסאות SARS-CoV-2 ותוצאות טיפול. ביולוגים 2022, 2, 165–170. [CrossRef]

7. חבדה, סמנכ"ל; Redwan, EM SARS-CoV-2: Immunopeptidomics ומחקרים אימונולוגיים אחרים. Vaccines 2022, 10, 1975. [CrossRef]

8. קיריאקידיס, צפון קרוליינה; לופז-קורטס, א.; González, EV; Grimaldos, AB; Prado, EO SARS-CoV-2 אסטרטגיות חיסונים: סקירה מקיפה של מועמדי שלב 3. Npj Vaccines 2021, 6, 28. [CrossRef]

9. Ssentongo, P.; Ssentongo, AE; וולטי, נ.; גרוף, ד.; שמש, א.; בא, DM; נוניז, ג'; הורה, LJ; צ'ינצ'ילי, VM; Paules, CI SARS CoV-2 יעילות החיסון נגד זיהום, COVID סימפטומטי וקשה-19: סקירה שיטתית ומטה-אנליזה. BMC Infect. Dis. 2022, 22, 439. [CrossRef]

10. חבדה, סמנכ"ל; וורה, ל.ק; חיסון Vihol, DR COVAX-19®: חוסם לחלוטין העברת וירוסים לאנשים שאינם חסינים. קלינ. משלים מד. פרמקול. 2021, 1, 100004. [CrossRef]

11. חבדה, סמנכ"ל; וורה, ל.ק; Pandya, AK; Patravale, VB Vaccines intranasal for SARS-CoV-2: מאתגרים לפוטנציאל בניהול COVID-19. Drug Discov. היום 2021, 26, 2619–2636. [CrossRef]

12. קאור, SP; Gupta, V. COVID-19 חיסון: דוח סטטוס מקיף. Res. 2020, 288, 198114. [CrossRef]

13. Vasireddy, D.; אטלורי, פ.; Malayala, SV; ונפארתי, ר.; Mohan, G. סקירה של חיסוני COVID-19 שאושרו בארצות הברית לשימוש חירום. ג'יי קלין. Med. מילון 2021, 13, 204. [CrossRef] [PubMed]

14. Zheng, C.; שאו, ו.; חן, X.; ג'אנג, ב.; וואנג, ג'; Zhang, W. Real-World Effectiveness of COVID-19 Vaccines: A Literature Review and Meta-Analysis. Int. J. Infect. Dis. 2022, 114, 252–260. [CrossRef]

15. אלגוז, או.; Sethi, AK; Patterson, BW; צ'ורפק, מ.; Alhanaee, G.; סקריה, E.; Safdar, N. The Impact of vaccination to control COVID-19 Belden in the United States: A Simulation Modeling Approach. PLoS ONE 2021, 16, e0254456. [CrossRef]

16. קרומר, ד.; שטיין, מ.; ריינלדי, א.; Schlub, TE; וויטלי, AK; Juno, JA; קנט, SJ; Triccas, JA; חורי, DS; Davenport, MP מנטרל כותרות נוגדנים כמנבאים להגנה מפני וריאנטים של SARS-CoV-2 והשפעת החיזוק: מטה-אנליזה. Lancet Microbe 2022, 3, e52–e61. [CrossRef]

17. ז'או, ג'; ז'או, ש.; או, ג'; ג'אנג, ג'; לאן, ו.; גואן, ו.; וו, X.; יאן, י.; ז'או, ו'; וו, ג'; et al. COVID-19: עדכונים לפיתוח חיסון נגד נגיף הקורונה. חֲזִית. אימונול. 2020, 11, 2256. [CrossRef] [PubMed]

18. Chung, YH; בייס, ו.; Fiering, SN; Steinmetz, NF COVID-19 מובילי חיסונים והעיצוב הננוטכנולוגי שלהם. ACS Nano 2020, 14, 12522–12537. [CrossRef] [PubMed]

19. ג'יין, ש.; Venkataraman, A.; וכסלר, ME; חיסונים מבוססי RNA של Peppas, NA Messenger: כיווני עבר, הווה ועתיד בהקשר של מגיפת COVID-19. עו"ד Drug Deliv. Rev. 2021, 179, 114000. [CrossRef] [PubMed]

20. ארשקיה, א.; Jalilvand, S.; מוהאג'ל, נ.; אפצ'נגי, א. אזדמנש, ק.; סאלחי-וזירי, מ.; פאזלליפור, מ.; Pouriayevali, MH; ג'לאלי, ט.; מוסאווי נסאב, ס"ד; et al. מועמדים לחיסון המבוסס על חלבון ספייק (S) חמורה של תסמונת נשימה חריפה-קורונה-2: מצב האומנות וצפי עתידי. כומר מד. וירול. 2021, 31, e2183. [CrossRef]

21. פארק, JW; לגניטון, PNP; ליו, י.; Xu, RH MRNA Vaccines for COVID-19: מה, למה ואיך. Int. ג'יי ביול. Sci. 2021, 17, 1446. [CrossRef]

22. ז'ו, נ.; ג'אנג, ד'; וואנג, ו.; לי, X.; יאנג, ב.; שיר, ג'; ז'או, X.; הואנג, ב.; שי, ו.; לו, ר.; et al. נגיף קורונה חדש מחולי דלקת ריאות בסין, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [CrossRef] [PubMed]

23. וואנג, MY; ז'או, ר.; גאו, LJ; גאו, XF; וואנג, DP; Cao, JM SARS-CoV-2: מבנה, ביולוגיה ופיתוח טיפולי מבוסס מבנה. חֲזִית. תָא. לְהַדבִּיק. מיקרוביול. 2020, 10, 7269. [CrossRef] [PubMed]

24. חבדה, סמנכ"ל; חוסיין, חבר הכנסת; בלדיה, י. Apostolopoulos, V. Nucleic Acid Vaccines for COVID-19: A פרדיגמה בזירת פיתוח החיסונים. ביולוגים 2021, 1, 337–356. [CrossRef]

25. חבדה, סמנכ"ל; פנדיה, ר.; Apostolopoulos, V. DNA Vaccines for SARS-CoV-2: Toward Third-Generation Vaccination Era. מומחה כומר חיסונים 2021, 20, 1549–1560. [CrossRef] [PubMed]

26. יאנג, ה.; Rao, Z. Structural Biology of SARS-CoV-2 והשלכות על התפתחות טיפולית. נאט. Rev. Microbiol. 2021, 19, 685–700. [CrossRef]

27. קומאר, ש.; ניודו, ר.; מאוריה, VK; Saxena, SK; קומאר, ש.; ניודו, ר.; מאוריה, VK; Saxena, SK מארח תגובה חיסונית ואימונוביולוגיה של זיהום SARS-CoV-2 אנושי. וירוס קורונה דיס. 2019 (COVID-19) 2020, 43–53. [CrossRef]

28. Asturias, EJ; דוקלוס, פ.; מקדונלד, ניו יורק; Nohynek, H.; למברט, PH השכלה מתקדמת לחיסונים: גינון הצמיחה שלה וטביעת הרגל העולמית. חיסון 2020, 38, 4664–4670. [CrossRef]

29. קרדני, ק.; בולחסני, א.; Shahbazi, S. Prime-Boost חיסון אסטרטגיית נגד זיהומים ויראליים: מנגנונים ויתרונות. חיסון 2016, 34, 413–423. [CrossRef]

30. Chen, JM האם העולם צריך לשתף פעולה במיידי כדי לפתח חיסונים מוחלשים חי מוזנחים נגד COVID-19? J. Med. וירול. 2022, 94, 82–87. [CrossRef]

31. חבדה, סמנכ"ל; Vihol, DR; סולנקי, HK; Apostolopoulos, V. The Vaccine World of COVID-19: התרומה של הודו. Vaccines 2022, 10, 1943. [CrossRef]

32. אשרף, MU; קים, י.; קומאר, ש.; Seo, D.; אשרף, מ.; חיסוני Bae, YS COVID-19 (Revisited) ו-Oral-Rucosal Vector System כפלטפורמת חיסונים פוטנציאלית. Vaccines 2021, 9, 171. [CrossRef]

33. לסר, ק.; Whittaker, GR חיסון ל-COVID-19: מדדים בבריאות הציבור והעברת וירוסים. בריאות הציבור 2021, 197, e23. [CrossRef] [PubMed]

34. חבדה, סמנכ"ל; Apostolopoulos, V. האם אסטרטגיית מינון מאיץ מספיקה עבור וריאנט Omicron של SARS-CoV-2? Vaccines 2022, 10, 367. [CrossRef] [PubMed]

35. חבדה, סמנכ"ל; בזברוה, ר.; אתליה, מ.; פאריך, פ"ק; Chhipa, AS; פאטל, ש.; Apostolopoulos, V. שכפול חיסונים מבוססי וקטור נגיפיים עבור COVID-19: שדרת פוטנציאל בזירת החיסונים. וירוסים 2022, 14, 759. [CrossRef]

36. חבדה, סמנכ"ל; Apostolopoulos, V. COVID-19 עיצוב חיסונים ואסטרטגיית חיסונים עבור גרסאות מתפתחות. מומחה כומר חיסונים 2022, 21, 1359–1361. [CrossRef] [PubMed]

37. חבדה, סמנכ"ל; וופו, ש.; מישרא, ט; קמראג', ש.; פאטל, א.ב; שארמה, נ.; חן, ז.-ש. סקירה אחרונה של ניהול COVID-19: אבחון, טיפול וחיסון. פרמקול. נציג 2022, 74, 1120–1148. [CrossRef]

38. חבדה, סמנכ"ל; חן, י.; דייב, ג'יי; חן, ז'-ש; Chauhan, SC; יאלפו, מ"מ; Uversky, VN; בזברוה, ר.; פאטל, ש.; אפוסטולופולוס, V. COVID-19 וחיסונים: מיתוסים לעומת מדע. מומחה כומר חיסונים 2022, 21, 1603–1620. [CrossRef]

39. חבדה, סמנכ"ל; בזברוה, ר.; דקה, ק.; נונגראנג, ל.; Kalita, T. גרסאות הדלתא והאומיקרון של SARS-CoV-2: מה שאנחנו יודעים עד כה. Vaccines 2022, 10, 1926. [CrossRef]

40. פיוריטי, ד'; Iurescia, S.; פאציו, VM; Rinaldi, M. DNA Vaccines: פיתוח אסטרטגיות חדשות נגד סרטן. J. Biomed. ביוטכנולוגיה. 2010, 2010, 174378. [CrossRef]

41. ז'או, ז'; דנג, י.; ניו, פ.; שיר, ג'; וואנג, ו.; דו, י.; הואנג, ב.; וואנג, ו.; ג'אנג, ל.; ז'או, פ.; et al. חיסון משותף עם חיסוני CHIKV VLP וחיסוני DNA משרה תגובה הומורלית מבטיחה בעכברים. חֲזִית. אימונול. 2021, 12, 925. [CrossRef]

42. קלמס, ס"א; פארקר, SD; אליזגה, מ.; מטש, ב.; Edupuganti, S.; הוראל, ג'; דה רוזה, ש.; קרטר, DK; ריבצ'יק, ק.; Frank, I. בטיחות ואימונוגניות השוואתית של חיסון DNA-1 ל-HIV בשילוב עם פלסמיד אינטרלוקין 12 והשפעה של אלקטרופורציה תוך שרירית למסירה. J. Infect. Dis. 2013, 208, 818–829. [CrossRef]

43. בזברוה, ר.; חבדה, סמנכ"ל; נונגראנג, ל.; אלום, ש; דקה, ק.; קליטה, ט; עלי, פ.; בהטצ'רג'י, ב'; Vora, L. מערכות אספקה ​​מבוססות ננו-חלקיקים עבור חיסונים. Vaccines 2022, 10, 1946. [CrossRef] [PubMed]

44. כראם, מ.; דאוד, ג. חיסוני MRNA: עבר, הווה, עתיד. אסייתי ג'יי פארם. Sci. 2022, 17, 491–522. [CrossRef] [PubMed]

45. Dolgin, E. ההיסטוריה הסבוכה של חיסוני MRNA. טבע 2021, 597, 318–324. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Hoerr, I.; אבסט, ר.; Rammensee, HG; Jung, G. undefined יישום In Vivo של RNA מוביל לאינדוקציה של לימפוציטים ונוגדנים מסוג T ציטוטוקסיים ספציפיים. יורו J. Immunol. 2000, 30, 1–7. [CrossRef]

47. קוס, נ.; פוקס, JM; Saparapu, G.; לומברדי, ר.; Tennekoon, RN; דרשאן דה סילבה, א.; אלבשיר, SM; תאיזן, מ.א.; Humphris-Narayanan, E.; סיארמלה, ג'; et al. MRNA מכוסה בליפידים המקודד לנוגדן מונוקלונלי אנושי בעל עוצמה מנטרל, מגן מפני זיהום Chikungunya. Sci. אימונול. 2019, 4, eaaw6647. [CrossRef]

48. Sahin, U.; Karikó, K.; Tureci, Ö. טיפולים מבוססי MRNA-פיתוח סוג חדש של תרופות. נאט. Rev. Drug Discov. 2014, 13, 759–780. [CrossRef]

49. Moss, P. התגובה החיסונית של תאי T נגד SARS-CoV-2. נאט. אימונול. 2022, 23, 186–193. [CrossRef] [PubMed]

50. ננס, ק"ד; Meier, JL שינויים בשעת חירום: תפקידו של N1-Methylpseudouridine בחיסוני COVID-19. ACS Cent. Sci. 2021, 7, 748–756. [CrossRef]

51. קרמסנר, פ"ג; Ahuad Guerrero, RA; ארנה-ארי, ע.; Aroca Martinez, GJ; בונטן, מ.; צ'נדלר, ר.; קורל, ג.; דה בלוק, EJL; אקר, ל. Gabor, JJ; et al. היעילות והבטיחות של CVnCoV SARS-CoV-2 מועמד לחיסון MRNA בעשר מדינות באירופה ובאמריקה הלטינית (HERALD): ניסוי אקראי, עיוור צופה, מבוקר פלצבו, שלב 2b/3. Lancet Infect. Dis. 2022, 22, 329–340. [CrossRef]

52. בלקני, א"ק; איפ, ס.; Geall, AJ עדכון על פיתוח חיסון MRNA מגביר עצמי. Vaccines 2021, 9, 97. [CrossRef] [PubMed]

53. Yılmaz, E. תקוות חדשות בטכנולוגיית חיסונים: חיסוני mRNA. מיקרוביול. בול. 2021, 55, 265–284. [CrossRef]

54. ג'קסון, NAC; קסטר, KE; קאסמירו, ד.; Gurunathan, S.; DeRosa, F. ההבטחה של חיסוני MRNA: מבט ביוטק ותעשייתי. Npj Vaccines 2020 51 2020, 5, 11. [CrossRef] [PubMed]

55. בלום, ק.; ואן דן ברג, פ.; Arbuthnot, P. חיסוני RNA מגבירים עצמיים למחלות זיהומיות. גֵן. ת'ר. 2021, 28, 117–129. [CrossRef]

56. קון, ע.; אליה, יו.; פאר, ד' עקרונות לתכנון חיסון אופטימלי ל-MRNA ליפידים לננו-חלקיקים. Curr. דעה. ביוטכנולוגיה. 2022, 73, 329. [CrossRef] [PubMed]

57. לי, י.; טיג, ב.; ג'אנג, י.; סו, ז; פורטר, ע.; דובוש, ב.; וגנר, ט.; אירווין, DJ; Weiss, R. In Vitro Evolution of Enhanced RNA Replicons for Immunotherapy. Sci. נציג 2019, 9, 6932. [CrossRef] [PubMed]

58. Linares-Fernández, S.; לקרויה, סי; Exposito, JY; Verrier, B. התאמת חיסון MRNA לאיזון תגובה חיסונית מולדת/סתגלנית. טרנדים מול. Med. 2020, 26, 311–323. [CrossRef]

59. מדגם, PJ; וואנג, ב.; ריד, DW; פרסניאק, ו.; McFadyen, IJ; מוריס, ד"ר; Seelig, G. Human 50 UTR עיצוב וחיזוי אפקט וריאציות ממבחן תרגום מקביל מסיבי. נאט. ביוטכנולוגיה. 2019, 37, 803–809. [CrossRef]

60. קומאר, פ.; Sweeney, TR; סקאבקין, מ.א.; סקאבקינה, OV; Hellen, CU; Pestova, עיכוב התרגום בטלוויזיה על ידי בני משפחת IFIT נקבעת על פי יכולתם לקיים אינטראקציה סלקטיבית עם 50 -אזורי הטרמינל של Cap0-, Cap1-ו-50 Ppp-MRNAs. Nucleic Acids Res. 2014, 42, 3228–3245. [CrossRef]

61. סטרנקובסקה, מ.; גרצלה, ר.; מג'בסקי, מ.; ונק, ק.; קובלסקה, י. לוקשביץ', מ.; צוברק, י. דרז'ינקביץ', ע. קון, אן; Sahin, U.; et al. אנלוגי כובע שהשתנו עם 1,2-Dithiodiphosphate Moiety מגנים על MRNA מפני ניקוי כיסויים ומשפרים את הפוטנציאל התרגום שלו. Nucleic Acids Res. 2016, 44, 9578–9590. [CrossRef]

62. Rydzik, AM; וורמינסקי, מ.; סיקורסקי, PJ; ברנובסקי, מ.ר; וולצ'ק, ש.; קובלסקה, י. צוברק, י. לוקשביץ', מ.; נובק, ע.; Claridge, TDW; et al. אנלוגים של MRNA Cap שהוחלפו בשרשרת הטטרפוספט ב-CX2: זיהוי של O-to-CCl2 כשינוי הגישור הראשון המקנה התנגדות לניקוי כיסויים ללא פגיעה בתרגום. Nucleic Acids Res. 2017, 45, 8661–8675. [CrossRef] [PubMed]

63. ניקולסון, אל; Pasquinelli, AE Tales of Detailed Poly (A) Tails. טרנדים Cell Biol. 2019, 29, 191–200. [CrossRef] [PubMed]

64. Pelletier, J.; Sonenberg, N. העקרונות הארגוניים של גיוס ריבוזומים אוקריוטיים. אננו. כומר כם. 2019, 88, 307–335. [CrossRef]

65. Pascolo, S. המסר הגדול של השליח לחיסון. מומחה כומר חיסונים 2014, 14, 153–156. [CrossRef]

66. רוזה, SS; Prazeres, DMF; Azevedo, AM; Marques, MPC ייצור חיסוני MRNA: אתגרים וצווארי בקבוק. Vaccine 2021, 39, 2190. [CrossRef] [PubMed]

67. Pascolo, S. Messenger RNA: The Inexpensive Biopharmaceutical. J. Multidiscip. Eng. Sci. טכנול. JMEST 2017, 4, 2458–9403.

68. Thanh Le, T.; אנדראדאקיס, ז.; קומאר, א.; גומז רומן, ר.; טולפסן, ש.; סאוויל, מ.; Mayhew, S. The COVID{1}} Vaccine Development Landscape. נאט. Rev. Drug Discov. 2020, 19, 305–306. [CrossRef]

69. מרוגי, ג.; ג'אנג, סי; לי, ג'; Ulmer, JB; Yu, D. MRNA כטכנולוגיה טרנספורמטיבית לפיתוח חיסונים לשליטה במחלות זיהומיות. מול. ת'ר. 2019, 27, 757–772. [CrossRef]