מחלת כליות: כיצד ניקל גורם לאוטופגיה בכליות?

למידע נוסף:Ali.ma@wecistanche.com

חלק Ⅰ: ניקל משרה אוטופגיה באמצעות מסלולי PI3K/AKT/mTOR ו-AMPK בכליות עכבר

Heng Yin, Zhicai Zuo & et al.

1. הקדמה

ניקל(Ni), יסוד טבעי, מופץ באופן נרחב בתאים סביבתיים כולל אדמה, מים ואוויר (Schrenk et al,2020). ני (ניקל)תרכובות ו Ni מתכתי (ניקל)יש יישומים תעשייתיים ומסחריים רבים, כגון ייצור סגסוגות, ציפוי אלקטרוני, סוללות ניקל-קדמיום וזרז בתעשיית הכימיקלים והמזון (Genchi et al., 2020). עם זאת, השימוש התעשייתי העצום של Ni (ניקל)מוביל לזיהום סביבתי נרחב, אשר מגביר את הסיכון לחשיפה של בני אדם ל-Ni דרך מזון ומי שתייה (Das et al,2018). למרות Ni (ניקל) הוא מיקרו-נוטריינט חיוני לבני אדם ובעלי חיים, חשיפת יתר ל-Ni מסוכנת ביותר לבריאות האדם (Das et al.,2018).

עם השכיחות הגוברת של Ni (ניקל)זיהום בשנים האחרונות, רעילות Ni, לרבות רעילות אימונו, רעילות בכבד, רעילות נפרוטוקסיות ורעילות ריאתית, משכה תשומת לב גוברת (Gathwan et al.,2013; Deng et al.,2016; Hasanein and Felegari, 2017; Guo et al., 2020a . 2020ב). הכִּליָה, כאיבר מטרה חשוב בני (ניקל)טוקסיקולוגיה, עם הצטברות של Ni (ניקל)ו-Ni (ניקל)תרכובות שבהן באמצעות חשיפה כרונית יכולות לגרום לנזק כלייתי משמעותי (Elangovan et al, 2018). מחקר קיים של צוות המחקר שלנו הוכיח אינדוקציה של עקה חמצונית, אפופטוזיס, דלקת ועצירת מחזור התא בכִּליָהשל ברילרים על ידי NiCl2 (ניקלכלוריד 2) במזון העולה על 300 מ"ג/ק"ג (Guo et al, 2014, 2016a,2016b). מספר מחקרים העלו כי המנגנון של טוקסיקולוגיה כלייתית Ni כולל נזק חמצוני, שבירת גדילי DNA ואפופטוזיס (Lee et al,2001; Chen et al.,2010).

ממלא תפקיד מכריע בהומאוסטזיס תאי,אוטופגיהנמצא שיש קשר עם שכיחות ופתוגנזה של מחלות מגוונות (Martin et al,2019). מחקרים אחרונים הראו שמוות תאים עשוי להיות מתווך על ידי יציאה משליטה או גירוי יתר שלאוטופגיה(Denton and Kumar,2019). כתהליך תוך תאי מורכב ומסודר מאוד,אוטופגיהמתחיל מיצירת שלפוחיות כפולות ממברנות הידועות כאוטופגוזומים הבולעות חלק מציטוזול ואברונים (Martin et al,2019). לאחר מכן, האוטופגוזומים לוקחים חלק בפרוטאוליזה של חומרים נבלעים לאחר מעבר לליזוזומים.

אוטופגיההוא רגיש לסוגים שונים של מתח תאי, כגון גדילה או מניעת גורמים תזונתיים, היפוקסיה, נזק ל-DNA, מיני חמצן תגובתיים (ROS), צבירת חלבונים, פתוגנים תוך-תאיים או נזק לאברונים (Dodson et al,2013). זהו תהליך מורכב ביותר לוויסותאוטופגיה, הכוללים הרבה מסלולי איתות, כולל חלבון קינאז המופעל על ידי אדנוזין מונופוספט (AMPK), phosphatidylinositol 3-kinase-I(PI3K), ומטרת יונקים של מסלולי rapamycin (mTOR) (Cao et al2021). וכן, למסלול mTOR יש השפעה מרכזית באוטופגיהחניכה. פעילות mTOR היא מחסום ליבה שלאוטופגיה, שההשפעה המעכבת שלו מובילה לדה-פוספורילציה של ULK1 להקלהאוטופגיהעיכוב (Parzvch and Klionsky, 2014). יתר על כן, PI3K/Akt ו-AMPK הם הרגולטורים העיקריים במעלה הזרם של mTOR (Gong et al,2020; Xu et al,2020). מחקרים חוזרים קודמים העלו שמתכות כבדות (כגון Cd, Hg, Cu ו-Pb) יכולות לגרום להופעה שלאוטופגיה(Su et al,2017). אמנם Huang et al.(2016) ו-Son et al. (2017) מצאו כי Ni (ניקל)חשיפה יכולה לגרום ביעילותאוטופגיהבתאי אפיתל הסימפונות, המנגנון המדויק עדיין לא ברור,

ההשפעה של Ni (ניקל)עַלאוטופגיהדווח רק לעתים רחוקות, ורק מחקרים בודדים זמינים לגבי ההשפעות של Ni על הכליהאוטופגיהשל עכברים in vivo. לפיכך, העבודה הנוכחית שואפת לאשר האם NiCl2 (ניקלכלוריד 2)טיפול יכול לגרוםאוטופגיהולהעריך את המנגנון הפוטנציאלי של NiCl (ניקלכלוריד)-מושרהאוטופגיה, כולל מסלולי AMPK ו-PI3K/AKT/mTOR.

Nickel affects kidney and cause kidney disease

ניקל משפיע על הכליות וגורם למחלת כליות

לחץ ל- Cistanche למחלת כליות

2. חומרים ושיטות

2.1. כימיקלים ונוגדנים

ניקלכלוריד(NiCl) סופק על ידי Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd (Chengdu, סין). בניתוח האימונובלוט, כל הנוגדנים נרכשו מ- Cell Signaling Technology (CST, ארה"ב), כולל שרשרת קלה של חלבון1 הקשורות למיקרו-צינוריות נגד ארנב 3B(LC3B)(Cat no.43566T),anti-rabbit p62(SQSTM1)(Cat no.5114D), נגד ארנב Beclin1 (חתול מספר 3495T), נגד ארנבאוטופגיהחלבון 12 קשור (Atg12)(חתול מספר 4180T), אנטי-ארנב Atg5(חתול מספר 12994T), אנטי-ארנב Atg16L1(חתול מספר 8089T), אנטי-ארנב Atg7 (חתול מספר 8558T), אנטי-ארנב Atg3 ( חתול מס' 3415T), יעד יונק נגד ארנב של rapamycin (mTOR) (חתול מס' 2983T), נגד ארנב p-mTOR (חתול מס' 5536T), אנטי-ארנב unc-51 כמו קינאז 1 (ULK1 )(חתול מספר 8054D), נגד ארנב p-UIK1(חתול מס.5869T), נגד ארנב PI3K(חתול מס.4292S), נגד ארנב p PI3K(חתול מס.4228T,אנטי ארנב Akt(חתול מס. .9272S), אנטי-ארנב p-Akt (חתול מס' 4060T), אנטי-ארנב mTOR (חתול מס' 2972S), אנטי-ארנב p-mTOR (חתול מס' 5536S), אנטי-ארנב AMPK (חתול מס' 5831S ), אנטי-ארנב p-AMPK (חתול מס' 2535S), ו-אקטין (חתול מס' 4970T).

best herb for kidney

2.2.בעלי חיים וטיפולים

בסך הכל 160 עכברי ICR זכרים בריאים בני שמונה שבועות סופקו על ידי Dashuo Biological Technology Company (צ'נגדו, סין). כל החיות הוחזקו בתנאים קבועים (טמפרטורה 25±2C;12-שעות מחזור אור-חושך) בסביבות אספטיות, והוזנו בתזונה רגילה של גלולה ומים באופן חופשי. העכברים סווגו לארבע קבוצות באופן אקראי, שכל אחת מהן מכילה ארבעים מיקרופונים לאחר התאקלמות במשך שבעה ימים. מים מזוקקים ניתנו תוך קיבה לבקרה, בעוד Ni (ניקל)(NiCl2 (ניקלכלוריד 2).6H2O) במינונים של 7.5,15 ו-30 מ"ג/ק"ג סופקו תוך קיבה לבעלי חיים בקבוצות ניסוי. ה-Ni אכן מאמץ כאן נקבע על פי ערך המינון הקטלני החציוני (LD50, 306.11 מ"ג/ק"ג) שהושג במחקר על רעילות אוראלית חריפה של עכברים זכרים. NiCl (ניקלכלוריד),.6HZO דילל באמצעות מים מזוקקים לפני ביצוע ניסויים. ארבע הקבוצות קיבלו מינון של 1 מ"ל לכל 100 גרם משקל גוף פעם ביום במשך 28 ימים. לאחר טיפול במשך 14 ו-28 ימים, כל החיות הוקרבו באופן אנושי כדי לאסוף אתכִּליָהדוגמאות לניתוח בסעיפים שלהלן. כל חיות הניסוי וההליכים נערכו בעקבות ההסכם שקיבל את אישור הוועדה לטיפול בבעלי חיים וועדת האתיקה באוניברסיטה החקלאית של סצ'ואן (מספר אישור:2012-024, צ'נגדו, סין).

2.3. קביעת אינדקס כליות ותפקודים

כל העכברים נשקלו מדי שבוע והוקרבו באופן אנושי בסיום הטיפול, ולאחר מכןכליותנחתכו ונשקלו. הכִּליָההמדד שנעשה בו שימוש היה יחס ביןכִּליָהמשקל ומשקל גוף.

חוקרים מדדו חנקן אוריאה בדם (BUN) ורמות של קריאטינין בסרום (CRE) בהתאם להוראות של הערכות המסחריות המיוצרות על ידי המכון הביו-הנדסי של Naniing Jiancheng של סין (נאנג'ינג, סין),

2.4. קביעת הצטברות של Ni בכליות (ניקל)

כִּליָהדגימות נלקחו ביום ה-28 במהלך הניסוי. לאחר מכן, 1 מ"ל HCiO ו-9 מ"ל HNO. (Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd., China) שימשו לעיכול רטוב של 0.5 גרם של דגימות במשך 24 שעות בשפופרות עם עמידות לטמפרטורות גבוהות. לאחר מכן, הצינורות הללו הונחו על צלחת חמה כדי לאדות את כל הנוזל החוצה, ולאחר מכן השעיה של השאריות באמצעות 10 מ"ל 0.1 M/L HNO. לאחר מכן, חוקרים ניתחו דגימות במונחים של Ni (ניקל)בעזרת ספקטרופוטומטר בליעת אטום להבה (AAS700, PerkinElmer, ארה"ב).

2.5. תצפית היסטופתולוגית ואולטרה מבני

לאחר שנאסף ולאחר מכן קבוע ב-4 אחוז פרפורמלדהיד, הכִּליָהדגימות התייבשו עם אלכוהול, הוטבעו בפרפין, פרוסות ב-5 אום, ועובדו להכתמה עם המטוקסילין ואאוזין. מצלמה דיגיטלית (Nikon DS-Ri1, יפן) שימשה כדי לצפות בפרוסות ולצלם תמונות לשינויים היסטופתולוגיים. עשרה שדות מיקרוסקופיים מכל אחדכִּליָהנבדקו. התמונות שהוצגו בעיתון היו המייצגות.

לצורך הערכה אולטרה-סטרוקטורלית, 2.5 אחוז גלוטראלדהיד יושם לקיבועכִּליָהרקמות (בערך 1 מ"מ5) בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, לאחר קיבוע הרקמות הללו ב-1% אוסמיום טטרוקסיד, מיובש באצטון ומוטבע בשרף אפוקסי. הפרוסות הדקות במיוחד שהוכנו הונחו על רשתות נחושת ולאחר מכן הוכתמו באמצעות אורניל אצטט ואצטאט עופרת. תמונות אולטרה-מבנה נלכדו באמצעות JEM-1400מיקרוסקופ אלקטרונים להעברת פלאש (JEOL, יפן).

restore kidney function: cistanche

לשחזר ולשפר את תפקוד הכליות: cistanche

2.6. אימונוהיסטוכרמי

לאחר שחרור מהשעווה באמצעות קסילן, פרוסות פרפין הוזרמו מחדש באמצעות סט מדורג של תמיסת אתנול. לאחר מכן רחיצה עם מים מזוקקים ו-PBS, וחסימת 15 דקות של פעילות פרוקסידאז אנדוגנית (EPA) באמצעות דגירה באמצעות 3 אחוז H,O. במתנול לכיבוי ה-EPA. כדי להקל על שליפת אנטיגן, טיפלנו בפרוסות באמצעות חימום במיקרוגל למשך 15 דקות ב-0.01 M חיץ נתרן ציטראט עם pH של 6.0. לאחר הרוויה בסרה רגילה של 10 אחוז עיזים למשך 30 דקות, לאחר מכן, הפרוסות עברו דגירה באמצעות נוגדנים ראשוניים למשך הלילה ב-4 מעלות. נוגדן IgG משני של עז בעלות ביוטיניל 1% נגד ארנב/עכבר (בוסטר, ווהאן, סין) שימש לדגירה של פרוסות שנשטפו עם PBS ב-37 מעלות למשך שעה אחת, ולאחר מכן ב-37 מעלות, קומפלקס סטרפטווידין-ביוטין (SABC;Boster) , ווהאן, סין) היה בשימוש במשך 30 דקות. לאחר מכן טבילה פרוסות בדיאמינובנזידין הידרוכלוריד (DAB; בוסטר, ווהאן, סין) לצורך ויזואליזציה של תגובה חיסונית. לבסוף, לאחר צביעה נגדית קלה באמצעות המטוקסילין, הפרוסות התייבשו באתנול, נוקו עם קסילן והותקנו ברציפות.

צפיפות אופטית משולבת (IOD) שימשה לכימות של רמות פרוטאין של LC3B ו-p62. השיטה האנליטית לערך IOD התייחסה ל-Fanget al.(2018). מערכת מצלמות מיקרוסקופ דיגיטליות של Nikon DS-Ril (יפן) אומצה לצילום תמונות. לאחר מכן בחרו החוקרים חמישה שדות (0.064 מ"מ) בכל אזור של תמונות של כל פרוסה לניתוח בעזרת תוכנת Image-Pro Plus v6.0 (Media Cy-bernetics Inc, Bethesda, MD, ארה"ב ).

how to treat kidney disease

2.7. סופג מערבי

מיצוי חלבון מכִּליָהדגימות בוצעו באמצעות חיץ תמוגה RIPA, ומגיב בדיקת חלבון BCA (P0010S, Beyotime Technology, סין) שימש למדידת ריכוז. לאחר מכן בוצע SDS-PAGE עבור דגימות חלבון, שהועברו לאחר מכן לממברנות ניטרוצלולוזה. הממברנות נחסמו באמצעות 5 אחוז חלב רזה למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר, והודגרו עם נוגדן ראשוני ב-4 מעלות למשך הלילה. לאחר שימוש בנוגדן משני מצומד חזרת פרוקסידאז לדגירה במשך שעה אחת, נעשה שימוש ב-Chemidoc XRS כדי לזהות רצועות חלבון על הממברנות באמצעות ערכת ECL (P0018A, Beyotime Technology, סין).

2.8. תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת (qRT-PCR)

כליותנלקחו ונטחנו עם חנקן נוזלי במכתש באמצעות עלי ולאחר מכן נשמרו בטמפרטורה נמוכה (-80 מעלות ), RNA סך הכליות הופק באמצעות RNAiso Plus (9108/9109, Takara, Otsu, יפן) בעקבות המלצות של היצרן. לאחר מכן, סינתזה של DNA משלים (cDNA) עם ערכת ריאגנטים RR047A Prim-ScriptTM RT המיוצרת על ידי Takara ביפן בעקבות הוראות. לאחר מכן, qRT-PCR נערך באמצעות מערכת LightCycler ⑩ 480 Real-Time PCR (Bio-Rad, ארה"ב) וערכת SYBR Premix Ex TaqTMII (DRR820A, Takara, יפן). הפריימרים המשמשים ל-PCR מפורטים בטבלה 1. -אקטין שימש לנורמליזציה של ביטוי גנים, והביטוי היחסי של mRNA חושב בשיטת 2-4ac (Livak and Schmittgen, 2001).

2.9. ניתוח סטטיסטי

הנתונים הובעו בצורה של סטיית תקן ממוצעת ונותחו באמצעות LSD או ניתוח שונות T3 של Dunnett. תוכנת SPSS (גרסה 22.0, IBM Corp, Armonk, NY, ארה"ב) שימשה עבור כל הניתוחים הסטטיסטיים עבור Windows. פ<0.05 represents="" a="" significant="">

טבלה 1: רצף הפריימרים בשימוש במחקר,

3. תוצאות

3.1.NiClz (ניקלכלוריד)פוגע בתפקוד הכליות

כפי שמוצג באיור 1A, משקל הגוף ירד בשלוש קבוצות שטופלו ב-NiCl2 (ניקלכלוריד 2). וכן, נמצאה ירידה משמעותית גם במשקל היחסי של ה-כִּליָה(P<0.05) in="" the="" 30="" mg/kg="" group="" at="" 28="" days="" (fig.="">

סרום CRE ו-BUN שימשו כסמנים ביולוגיים סטנדרטיים לתפקוד כליות. התוצאות של תפקוד הכליות הוצגו באיור 1C ו-D, והריכוזים של CRE ו-BUN עלו באופן משמעותי (P<0.05)in the=""> (ניקלכלוריד 2)-קבוצות טיפול בימים 14 ו-28 קרובי משפחה לבקרה.

איור 1E הראה ששלושת ה-Ni (ניקל)לקבוצות הטיפול יש ריכוזים גדולים יותר משמעותית של Ni בכליה (P<0.05)compared to="" the="">

3.2. NiCl (ניקלכלוריד)- מעורר שינויים היסטופתולוגיים של הכליה

איור 2 מראה כי NiClz (ניקלכלוריד)הטיפול גרם לשינויים היסטופתולוגיים שלכִּליָהעם מינונים וזמן, הכוללים גלומרולוס נפוח יחד עם חלל קפסולרי מצטמצם, ניוון ואקוולרי וניוון גרעיני באפיתל הצינורי הכלייתי.

איור 2. NiCl2 (ניקלכלוריד 2)גורם לשינויים היסטופתולוגיים בכליה.

הנגעים ההיסטופתולוגיים כללו גלומרולוס נפוח יחד עם חלל קפסולרי מצומצם (*), ניוון ואקוולרי (חצים שחורים) וניוון גרגירי (חצים לבנים) באפיתל הצינורי הכלייתי. מכתים HE, פס קנה מידה=50 מיקרומטר.

3.3.NiCl (ניקלכלוריד)מעורר אוטופגיה ומגביר גנים וחלבונים הקשורים לאוטופגיה בכליה

LC3 ו-p62 הם הסמנים הביולוגיים החיוניים שלאוטופגיה(Gomez-San-chez et al..2016). בהשוואה לבקרה, שלושת NiCl2 (ניקלכלוריד 2) קבוצות טיפול היו עדות לעלייה משמעותית ברמת החלבון של LC3-I/I (P< 0.05)on="" days="" 14="" and="" 28,="" and="" a="" significant="" decrease="" in="" the="" protein="" level="" of="">< 0.05)(fig.3a-c).="" inconsistent="" with="" the="" protein="" experiment="" results,="" relative="" to="" the="" control="" group(fig.="" 3d="" and="" e),="" the="" treatment="" groups="" showed="" significantly="" increased="" mrna="" expression="" level="" of="" lc3=""><0.05)and significantly="" decreased="" mrna="" expression="" level="" of=""><0.05). otherwise,="">אוטופגיההיא גם קביעת TEM במחקר זה. כפי שמוצג באיור, 3F, תצפיות TEM הראו שמספרי האוטוליזוזומים גדלו ברקמת הכליה בעקבות NiCl2 (ניקלכלוריד 2)חשיפה.

איור 3. NiCl2 (ניקלכלוריד 2)מגביר אוטופגיה בכליות של עכברים.

(א) תוצאות הכתם המערבי של LC3 ו-p62. (ב, ג) הכימות של LC3-II/I ו-p62. (DE) ביטוי ה-mRNA של LC3 ו-p62. (ו)

המבנה האולטרה-סטרוקטורלי של תא האפיתל של צינורית מפותלת פרוקסימלית (הדמויות הימניות מציגות את הגדלה חלקית של הדמויות השמאליות; החצים השחורים המציינים מבנים אוטוליזוזומים).

הערכים מוצגים עם הממוצע ± סטיית תקן (n {{0}}). העמודות המסומנות באותיות שונות מהוות הבדלים משמעותיים (P <>

יתר על כן, אימונוהיסטוכימיה שימשה למדידת רמות חלבון של LC3B ו-p62 בכִּליָהרקמה במחקר הנוכחי. כפי שמוצג באיור 4, התאים החיוביים נצבעו בחום, וה-LC3B ו-p62 באו לידי ביטוי בעיקר בציטופלזמה של תאי אפיתל צינורית הכליה. בהשוואה לבקרה, ערכי IOD של LC3B הראו עלייה משמעותית (P< 0.05)in="" the="" three="" groups="" treated="" with=""> (ניקלכלוריד) בימים 14 ו-28. בנוסף, ערכי IOD של p62 ירדו באופן משמעותי (P< 0.05)in="" these="" three="" treatment="" groups="" on="" days="" 14="" and="" 28="" when="" in="" comparison="" with="" the="">

איור 4. תוצאות אימונוהיסטוכימיה של LC3B ו-p62 בכליות של עכברים.

(א) תמונות האימונוהיסטוכימיה של LC3B. (סרגל קנה מידה=50 מיקרומטר) (ב) תמונות האימונוהיסטוכימיה של p62 (סרגל קנה מידה=50 מיקרומטר)

(ג) הצפיפות האופטית המשולבת (IOD) של LC3B. (ד) הצפיפות האופטית המשולבת (IOD) של p62.

הערכים מוצגים עם הממוצע ± סטיית תקן (n {{0}}). העמודות המסומנות באותיות שונות מהוות הבדלים משמעותיים (P <>

גנים וחלבונים הקשורים לאוטופגיהומעורב באוטופגיההשטף נמדד כדי לאמת עוד יותר את ההשפעות של NiCl (ניקלכלוריד) עַלאוטופגיה. אלה כללו את Beclin1, Atg5, Atg12, Atg16L1, Atg7 ו-Atg3 (Li and Zhang.2019; Nishimura and Tooze,2020). כפי שמוצג באיור.5A-C, בהשוואה לביקורת, קבוצות הטיפול של Ni (ניקל)מראים רמות גבוהות יותר משמעותית של חלבונים של Beclinl, Atg5, Atg12, Atg16L1, Atg7 ו-Atg3(P<0.05)on days="" 14="" and="" 28.="" additionally,="" the="" treatment="" groups="" of="" ni="" also="" exhibited="" significantly="" elevated="" mrna="" expressions="" of="" beclin1,="" atg5,="" atg12,="" atg16l1,="" atg7,="" and=""><0.05)on days="" 14="" and="" 28="" of="" the="" experiment="" (fig.6d-e)relative="" to="" the="">

איור 5. NiCl2 (ניקלכלוריד 2)מגביר גנים וחלבונים הקשורים לאוטופגיה בכליות של עכברים.

(א) תוצאות הכתם המערבי של Beclin1, Atg5, Atg12, Atg16L1, Atg7 ו-Atg3. (B&G) הכימות של ביטוי חלבון Beclin1, Atg5, Atg12, Atg16L1, Atg7 ו-Atg3.

(HM) ביטוי ה-mRNA של Beclin1, Atg5, Atg12, Atg16L1, Atg7 ו-Atg3. הערכים מוצגים עם הממוצע ± סטיית תקן (n=8). העמודות המסומנות באותיות שונות הן הבדלים משמעותיים (P <>

3.4.NiCl2 (ניקלכלוריד 2)גורם למסלולי PI3K/Akt/mTOR ו-AMPK בכליות

mTOR הוא רגולטור חיוני שלאוטופגיה(Wang et al.,2017). ומסלולי הרגולטורים המבוססים במעלה הזרם של mTOR כוללים את PI3K/Akt ו-AMPK (Gong et al..2020:Xu et al..2020). לפיכך, מחקר זה מדד את החלבון של מסלולי AMPK ו-PI3K/Akt.

כפי ש-Fg.6Aand B מראים שלרמות החלבון של p-PI3K, p-AKT ו-p-mTOR נמצאה ירידה משמעותית (P< 0.05)in="" the="" three="" groups="" treated="" with=""> (ניקלכלוריד 2)בימים 14 ו-28 של הניסוי ביחס לבקרה. קבוצות הטיפול הציגו רמות חלבון של p-AMPK ו-p-ULK1 גבוהות משמעותית (P<0.05)than those="" of="" the="" control="" on="" days="" 14="" and="" 28.="" it="" can="" be="" seen="" from="" fig.6="" chat,="" compared="" to="" the="" control.="" the=""> (ניקלכלוריד 2)נמצא כי לקבוצות טיפול נמצאה ירידה משמעותית בביטויי mRNA של PI3K, AKT ו-mTOR (P<0.05)on days="" 14="" and="" 28.="" ampk="" and="" ulk1="" of="" the="" treatment="" groups="" showed="" significant="" increases="" in="" mrna="">< 0.05)on="" days="" 14="" and="" 28="" in="" comparison="" with="" the="" control.="">תוצאות אלו מגלות זאתאוטופגיההמושרה על ידי NiCl2 (ניקלכלוריד 2)במסלולי AMPK ו-PI3K/Akt/mTOR מעורבים בכליה של עכבר.