חקירה של ההשפעה של פעילות יתר של בלוטת התריס על מתח רשתית אנדופלזמית ופוטנציאל רצפטור חולף קנוני ערוץ 1 בכליה

למידע נוסף:ali.ma@wecistanche.com

Nuriye Ezgi BEKTUR AYKANAT^1,*,Erhan ŞAHİN², Sedat KAÇAR², Rıdvan BAĞCI³, שריפה KARAKAYA²,דילק BURUKOĞLU DÖNMEZ², Varol ŞAHİNTÜRK²

¹המחלקה להיסטולוגיה ואמבריולוגיה, הפקולטה לרפואה, אוניברסיטת Atılım, אנקרה, טורקיה²המחלקה להיסטולוגיה ואמבריולוגיה, הפקולטה לרפואה, אוניברסיטת אוסמנגאזי, אנקרה, טורקיה ³מעבדה לאנדרולוגיה של יחידת הפריה חוץ גופית, בית החולים לחינוך ומחקר בעיר אדנה, עדנה, טורקיה

רקע/מטרה:יתר פעילות בלוטת התריסקשורה לתוצאות של קצב סינון גלומרולרי מוגבר וכן הפעלה מוגברת של רנין-אנגיוטנסין-אלדוסטרון. ההפרעה של Ca2 בתוספת הומאוסטזיס ברטיקולום האנדופלזמי (ER) קשורה למחלות רבות, כולל נפרופתיה סוכרתית ויתר פעילות בלוטת התריס. הערוץ הקנוני 1 (TRPC1) של פוטנציאל הקולטן החולף הוא החלבון המשובט הראשון של משפחת TRPC. למרות שזה בא לידי ביטוי במקומות רבים בכִּליָה, תפקידו אינו ודאי. TRPC1 מעורב בוויסות Ca2 פלוס הומאוסטזיס, ווויסות העל שלו מגביר את רמת ER Ca2 פלוס, מפעיל את תגובת החלבון הנפרשת, מה שמוביל לנזק תאי בכִּליָה. מחקר זה חקר את תפקידו של TRPC1 ב-כליותשל חולדות יתר בלוטת התריס במונחים של סמני סטרס של ER שהם חלבון 78 (GRP78) מווסת גלוקוז), גורם שעתוק מפעיל 6 (ATF6), (דמוי חלבון קינאז R (PKR) אנדופלזמי קינאז רטיקולום) (PERK), אינוזיטול הדורש אנזים 1 (IRE1).

חומרים ושיטות: 20 חולדות זכר חולקו לקבוצות בקרה וקבוצת יתר בלוטת התריס (n=10).יתר פעילות בלוטת התריסהושרה על ידי הוספת 12 מ"ג/ליטר תירוקסין למי השתייה של חולדות במשך 4 שבועות. נמדדו רמות T3 ו-T4 ללא סרום (fT3, fT4), TSH, חנקן אוריאה בדם (BUN) וקריאטינין. הניתוח ההיסטוכימי שלכִּליָהבוצעו קטעים לשינויים מורפולוגיים וגם ניתוח אימונוהיסטוכימי ו-Western blot של קטעי כליה עבור נוגדנים GRP78, ATF6, PERK, IRE1, TRPC1.

תוצאות: רמות TSH, BUN וקריאטינין ירדו בעוד שרמות fT3 ו-fT4 עלו בחולדה עם יתר בלוטת התריס. הניתוח המורפולוגי הביא לעיבוי הממברנה הבסיסית הנימים בגלומרולי וגם ב-Western blot, ותוצאות אימונוהיסטוכימיות הראו עלייה ב-TRPC1, GRP78 ו-ATF6 בחולדה היפר-תירואיד (p <>

מסקנה: לסיכום, במחקר שלנו, הראינו לראשונה שהקשר בין מתח ER לבין TRPC1, והביטוי המוגבר שלהם גרם לנזק כלייתי בחולדות יתר של בלוטת התריס.

מילות מפתח:יתר פעילות בלוטת התריס, מתח רשתית אנדופלזמית (ER), פוטנציאל קולטן חולף קנוני 1 (TRPC1),כִּליָה, עכברוש

1. הקדמה

Triiodothyronine (T3) ו-thyroxine (T4) הם הורמוני בלוטת התריס הנחוצים להתפתחות איברים תקינים ולתפקודים מטבוליים [1]. חוץ מזה, הם מווסתים את קצב הגדילה, תפקוד משאבת נתרן/אשלגן, קצב לב, לחץ דם, נשימה, צריכת חמצן, עיכול, חילוף חומרים של שומנים, פחמימות וחלבונים, תפקוד מערכת העצבים המרכזית, תנועות ותפקודים מטבוליים של בלוטות אנדוקריניות אחרות [2] .

יתר פעילות בלוטת התריסיש השפעות רבות על כולסטרול, טריגליצרידים, שומנים, חמצון, נוגדי חמצון, מלונדיאלדהיד (MDA), אנזים קטליזרי קטליזטור (CAT), אנזימי כבד, חומצת שתן, אוריאה, קריאטינין ושינויים היסטופתולוגיים בכבד ובכליות [3]. תפקוד לקוי של בלוטת התריס משפיע על הפיזיולוגיה וההתפתחות של הכליות. במקרה של תת פעילות של בלוטת התריס שבו בלוטת התריס עובדת פחות, מסת הכליה (יחס מסת כליה/גוף) יורדת, בעוד שבמקרה שליתר פעילות בלוטת התריסשבהם הבלוטה עובדת קשה, מסת הכליה עולה [4]. עם זאת, יתר פעילות חמורה של בלוטת התריס מביאה לפירוק חלבון ובסופו של דבר לניוון כליות. פעילות יתר של בלוטת התריס גורמת לעלייה בזרימת הדם הכלייתית (RBF) וקצב הסינון הגלומרולרי (GFR) [5]. עם פעילות יתר של בלוטת התריס, ספיגה חוזרת של נתרן באבובית הפרוקסימלית, basolateral Na plus /K plus ATPase [6], Na plus /H plus modifier apical [7], והפעלה Na plus /Pi cotransporter [8] מוגברת. כמו כן, הורמון בלוטת התריס מפעיל את המשנה Na plus /Ca2 plus, אולי דרך המסלול המקושר ל-cAMP, ובכך מגביר את ספיגת הסידן ב-כליות[9].

סידן הוא שליח שני המווסת את רוב התפקודים התאיים, כולל ביטוי גנים והומאוסטזיס תאי [10], שחרור נוירוטרנסמיטר ותפקוד עצבי [11], חילוף חומרים ומודולציה של חיי התא [12]. משפחת תעלות הקולטנים החולפים (TRP) היא אחת המשפחות הגדולות ביותר של תעלות קטיון. משפחת ה-TRP מחולקת לתת-קבוצות TRPC (קנוני), TRPM (מלסטטין), TRPP (פוליציסטין), TRPV (ונילואיד), TRPML (בוקולי), TRPA (אנקירין) ו-TRPN (דומה ל-NOMPC). ידוע שחלבוני TRPC יוצרים תעלות קטיון חדירות ובלתי סלקטיביות של Ca2 פלוס ולכן ממלאים תפקיד חשוב בהעברות אותות Ca2 פלוס. למשפחת ה-TRPC של היונקים יש שבעה חברים הנקראים TRPC1-TRPC7 [13]. בני משפחת TRPC מתבטאים בחלקים שונים שלכִּליָה. TRPC1, הממלא תפקיד במיוחד בנפרופתיה סוכרתית, מתבטא כמעט בכל מקום, בתאי כליות מנזגיאליים, גלומרוליים, תאי אבובים פרוקסימליים ובחלק היורד הדק של לולאת הנלה, אך תפקידו המדויק עדיין אינו ידוע [14].

הפרעות Ca2 פלוס חמורות עלולות לגרום לנזק לתאים הנגרם על ידי מתח רשתית אנדופלזמית (ER) בתגובה למצבים פתולוגיים שונים [5,15]. הפרעות ב-Ca2 בתוספת הומאוסטזיס ב-ER קשורות למחלות רבות [16]. ER הוא אברון תוך תאי שחשוב לוויסות Ca2 בתוספת הומאוסטזיס וסינתזה וקיפול חלבונים. מודולציה של הביטוי/תפקוד של תעלות חדירות Ca2 פלוס משפיעה גם על ריכוזי Ca2 פלוס תוך-תאיים, וכתוצאה מכך על תהליכים הקשורים ל-Ca2 פלוס כגון התפשטות תאים, מתח ER, אפופטוזיס ואוטופגיה. מתח ER הוא מצב שמשבש את איזון החיזור ואת Ca2 הלומינלי פלוס הומאוסטזיס, הגורם להצטברות של חלבונים לא מקופלים/מקופלים לא נכון. ההפעלה של תגובת חלבון לא מקופלת (UPR) גורמת לעלייה בחלבון 78 מוסדר גלוקוז (GRP78), המלווה ER, מה שמגביר את יכולת קיפול החלבון של ה-ER [17]. הפעלה של מתח ER יוזמת את ה-UPR הנשמר מבחינה אבולוציונית על ידי שלושת מתמרי האותות העיקריים של ממברנת ER: PERK, IRE1 ו-ATF6. חוסר תפקוד תאי ומוות תאי מתרחשים בתנאים שבהם הלחץ של ER ממושך באופן כרוני ועומס החלבון על ER עולה באופן משמעותי. ידוע שאחד המסלולים הגורמים למוות תאי שנצפה במחלות כרוניות כגון היפוקסיה, פציעת איסכמיה/פרפוזיה מחדש, ניוון עצבי, מחלות לב וסוכרת נובע מלחץ ER [12].

לאור כל המידע הזה, שאפנו לחקור את הקשר בין המסלולים של העברת אותות TRPC1 ו-ER-stress בכליות, המושפעים בדרך כלל ביתר פעילות בלוטת התריס.

לחץ כדיCistanche שימושים לתסמיני מחלת כליות

2. חומרים ושיטות

2.1. חיות

המחקר שלנו אושר על ידי הוועדה המקומית לאתיקה לבעלי חיים של אוניברסיטת אסקישהיר אוסמנגאזי (החלטה מס' 634 בישיבה מס' 117 ב-30.11.2017) ועקב אחר המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שפורסם על ידי המכון הלאומי לבריאות. עשרים מבוגרים (בני 7-8 שבועות) חולדות זכר לבקן ויסטאר, שהתקבלו מהמרכז למחקר ניסויים רפואי וכירורגי (TICAM), נשמרו על 24 ± 2 מעלות ו-55 ± 5 אחוזי לחות במשך 12 שעות בסביבה אור/חושך במהלך הניסוי. בעלי חיים הוכנסו לכלובי פוליקרבונט למשך שבועיים לפני הניסוי ואפשרו להם להסתגל לתנאי הסביבה, ולאחר מכן חולקו באופן אקראי לקבוצות בקרה וקבוצת יתר בלוטת התריס. קבוצת הביקורת (איתירואיד) הוזנה במהלך הניסוי במזון רגיל של חולדות ובמי ברז. קבוצת יתר בלוטת התריס הוקמה עם הזנת חולדות סטנדרטית למשך 4 שבועות ושתיית מי ברז המכילים 12 מ"ג/ליטר תירוקסין [18]. בסוף השבוע הרביעי, חולדות הורדמו על ידי הזרקה תוך שרירית של קטמין (45 מ"ג/ק"ג) וקסילאזין (5 מ"ג/ק"ג). מיד נלקחו דגימות דם תוך לבביות מכל החיות. כֹּלכליותהוסרו בתהליך כריתת הכליה. ואז, ימין ושמאלכליותשל חולדות נחתכו לאורך לשני חלקים. שני חלקי כליה ימין ושמאל שימשו לניתוח מיקרוסקופיית אור וסטרן כתם

2.2. ניתוחים ביוכימיים

דגימות דם בוצעו בצנטריפוגה ב-11,000 סל"ד למשך 10 דקות. הסרה הונחו בצינורות ואוחסנו ב--80 מעלות עד ליום הניתוח. לאחר מכן נמדדו רמות T3 ללא סרום (fT3), T4 חופשי (fT4) והורמון מגרה בלוטת התריס (TSH) בטכניקת ELISA לפי פרוטוקול היצרן. רמות הביטוי של צפיפות אופטית (OD) נקראו ב-450 ננומטר על ידי BioTek microplate reader 800 (BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, ארה"ב), ולאחר מכן חושבו התוצאות. הערכות המסחריות עבור fT3 (YLA0127RA), fT4 (YLA0239RA) ו-TSH (YLA0047RA) נרכשו משנגחאי YL Biotech, סין. כמו כן, רמות חנקן אוריאה בדם בדם (BUN) וקריאטינין נמדדו בשיטת הפוטומטריה ספיגה על ידי Cobas Integra 400 Plus Roche (Roche Diagnostics Ltd., שוויץ).

2.3. הערכה היסטולוגית

כִּליָהחלקים שנלקחו לבדיקה ברמת מיקרוסקופ האור היו קבועים ב-10 אחוז פורמלדהיד למשך 48 שעות. לאחר עיבוד רקמות שגרתי, התקבלו בלוקי פרפין. לאחר מכן, נלקחו חתכים סדרתיים בגודל 5 מיקרון והוצבעו בטכניקת חומצה-שיף מחזורית (PAS). הערכה מיקרוסקופית בוצעה עבור גלומרולי וצינוריות תחת מיקרוסקופ Olympus BX-51 (Olympus America, Inc., ניו יורק, ארה"ב). קטעים ניקוד בצורה עיוורת, חצי כמותית באמצעות סולם ניקוד מבוסס. עבור כל חולדה בקבוצות, נבדקו לפחות 10 שדות בהספק גבוה (×1000). אחוז הגלומרולי שהציגו עיבוי קרום הבסיס הגלומרולרי נרשם כדלקמן: 0=ללא, 1 פחות או שווה ל-25 אחוז, 2=25 אחוז עד 50 אחוז, 3 =50 אחוז עד 75 אחוז , 4 גדול או שווה ל-75 אחוז [19]. עובי ממברנת הבסיס הגלומרולרית (מיקרומטר) נמדד על ידי תוכנת ZEISS ZEN 3.0 Microscope (Carl Zeiss Microscopy GmbH ZEISS Group, מינכן, גרמניה).

2.4. הערכה אימונוהיסטוכימית

קטעי בלוק פרפין מכל אחדכִּליָהרקמות נלקחו על שקופיות טעונות חיוביות. לאחר דה-פראפיניזציה, השקופיות הועברו דרך סדרת אתנול מפורקת ולאחר מכן קסילול. החתכים הודגרו עם 3 אחוז מי חמצן כדי למנוע פעילות פרוקסידאז אנדוגנית. לאחר החזרת אנטיגן עם חיץ ציטראט, המקטעים הוגדרו על ידי עט פאפ, נשטפו 3 × 5 דקות עם מלוחים מלוחים בפוספט (PBS), ולאחר מכן נחסמו עם בלוק Ultra V למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. החתכים הודגרו עם נוגדן פולישבטי ATF6 ארנב (ab203119, Abcam Inc., קיימברידג', ארה"ב), נוגדן פוליקלונלי IRE1 ארנבת (YID5384, Shanghai YL Biotech Co., Ltd, סין), נוגדן PERK חד שבטי עכברים (sc377400, Santa Cruz Biotechnology Inc. ., Heidelberg, גרמניה) ונוגדן TRPC1 חד שבטי של עכבר (sc133076, Santa Cruz Biotechnology Inc.) למשך הלילה ב-4 מעלות פלוס בתנאי לחות. לאחר שטיפה של 3 × 5 דקות עם PBS, החתכים הודגרו עם נוגדנים משניים מתאימים (sc2359, sc2781, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, הם שטפו שוב במשך 3 × 5 דקות עם PBS וצבעו נגד עם המטוקסילין. שקופיות הוחלו כיסוי באמצעות מדיה על בסיס מים. בדיקה מיקרוסקופית בוצעה באמצעות מיקרוסקופ Olympus BX51 ומערכת הדמיה בעזרת מחשב (Olympus America, Inc., ניו יורק, ארה"ב).

כל הקטעים המוכתמים חיסוניים הוערכו באופן מקודד על ידי המחבר הראשי, שהיה עיוור לשם הקבוצה של הניסויים. ביטויי TRPC1, ATF6, IRE1 ו-PERK זוהו בעיקר בצינוריות ו/או בגלומרולי. הביטויים נקבעו באופן חצי כמותי לפי אחוז החיוביםכִּליָהמקטעים. עוצמת הצביעה סווגה לארבע דרגות: ללא ({{0}}), חלשה (1), בינונית (2) וחזקה (3). אחוז החתכים ההיסטולוגיים החיוביים של הכליות סווג כ-4 דרגות: 0 (0 אחוז), 1 (1 אחוז –10 אחוז), 2 (11 אחוז –49 אחוז) ו-3 (50 אחוז –100 אחוז). הציון הכולל היה תוצר של שני ציונים והציון הסופי של דגימה אחת היה הממוצע של 10 שדות מיקרוסקופיים. TRPC1, ATF6, IE1 ו-PERK הוערכו לפי השיטה המדווחת [20].

תפקוד Cistanche-כליות

2.5. ניתוח כתם מערבי

כדי לקבוע את השינויים בכמות החלבון הספציפי בכִּליָהרקמות שליתר פעילות בלוטת התריסוקבוצות ביקורת, הכליות נחתכו לחתיכות קטנות, וההומוגניזציה בוצעה על ידי הוספת חיץ תמוגה RIPA לצינורות 2 מ"ל חרוזים. לאחר הומוגניזציה, הצינורות הודגרו ב-4 מעלות למשך 30 דקות לפחות, ולאחר מכן בוצעו צנטריפוגה של lysates של רקמות ב-4 מעלות, 15,000 גרם למשך 20 דקות. הסופרנטנט המכיל חלבון כולל הועבר לצינור חדש. קביעת חלבון בוצעה מהסופרנטנט עם מכשיר Qubit 2.0 (Invitrogen Inc., Waltham, MA, ארה"ב). חמישים מיקרוגרם של חלבון הועמסו לכל באר, עבר אלקטרופורזה עם SDS-PAGE Bio-Rad MiniTrans Blot (Bio-Rad Laboratories, Inc., קליפורניה, ארה"ב), ולאחר מכן הועבר לממברנת PVDF עם מכשיר Bio-Rad Trans Turbo. הממברנות נחסמו עם 5 אחוז אלבומין בסרום בקר (BSA) למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר ולאחר מכן, הודגרו עם נוגדן חד שבטי GRP78 של עכבר (sc166490, Santa Cruz Biotechnology Inc.), נוגדן פוליקלונלי ATF6 ארנבת (ab203119, Abcam Inc., Cam. ברידג', ארה"ב), נוגדן IRE1 polyclonal ארנבת (YID5384, Shanghai YL Biotech Co. Ltd., סין), נוגדן PERK חד שבטי עכברים (sc377400, Santa Cruz Biotechnology Inc.), נוגדן TRPC1 חד שבטי עכבר (sc133076, Santa Cruz Biotechnology, Inc. ) ונוגדן אקטין חד שבטי עכבר (sc47778, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) (לבקרת טעינה) למשך הלילה ב-4 מעלות. לאחר מכן, הממברנות נשטפו במשך 3 × 10 דקות עם תמיסת כביסה (TBST), ולאחר מכן דגירה עם נוגדנים משניים מתאימים (sc2005, sc2030, Santa Cruz Biotechnology Inc.). לאחר שטיפת הממברנות במשך 3 × 10 דקות עם TBST, רמות הביטוי של חלבונים בלהקות האימונראקטיביות נוטרו על ידי מערכת ההדמיה (C-Digit, Licor, Cambridge, בריטניה). תוצאות התמונה נותחו עם תוכנית Image J 1.49v.

2.6. ניתוח סטטיסטי

כל הניתוחים הסטטיסטיים בוצעו עם IBM SPSS 21.0 תוכנית החבילה הסטטיסטית (IBM Corp., Armonk, NY, USA). ניסוי ה-Western blot חזר על עצמו שלוש פעמים עבור כל קבוצה. רמת המובהקות התקבלה כ-p < 0.05.="" בדיקת="" shapiro–wilk="" שימשה="" לקביעת="" ההתפלגות="" הנורמלית="" של="" הנתונים.="" מבחן="" ההומוגניות="" של="" השונות="" (מבחן="" levene)="" שימש="" כדי="" להעריך="" אם="" לקבוצות="" יש="" שונות="" שוות.="" בדיקת="" t="" דגימות="" בלתי="" תלויות="" בוצעה="" עבור="" הנתונים="" המראים="" התפלגות="" נורמלית.="" בדיקת="" mann-witney="" u="" בוצעה="" עבור="" הנתונים="" המראים="" התפלגות="" לא="">

3. תוצאות

3.1. תוצאות ביוכימיות

רמות fT3, fT4 ו-TSH בסרום, רמות BUN בסרום וקריאטינין של קבוצות החולדות מוצגות באיור 1. התוצאות הצביעו על כך שרמות fT3 ו-fT4 עלו באופן משמעותי בקבוצת יתר בלוטת התריס בהשוואה לקבוצת הביקורת (שניהם p < {{5="" }}.05).="" חוץ="" מזה,="" נמצאה="" ירידה="" משמעותית="" ברמות="" tsh="" בקבוצת="" יתר="" בלוטת="" התריס="" בהשוואה="" לקבוצת="" הביקורת="" (p="">< 0.05)="" (איור="" 1a).="" רמות="" bun="" בסרום="" (איור="" 1b)="" וקריאטינין="" (איור="" 1c)="" ירדו="" באופן="" משמעותי="" בקבוצת="" יתר="" בלוטת="" התריס="" בהשוואה="" לקבוצת="" הביקורת="" (שתיהן="" p=""><>

3.2. תוצאות היסטוכימיות

שינויים היסטולוגיים שלכליותמקבוצות החולדות מוצגות באיור 2. היסטולוגיה של הכליות (הגלומרולי, הצינוריות ומבני כלי הדם) הייתה אופיינית בקבוצת הביקורת (איור 2A). למרות זאת,יתר פעילות בלוטת התריסגרם לעיבוי קרום בסיס נימי בגלומרולוס (איור 2B). עובי קרום הבסיס הגלומרולרי עלה באופן משמעותי בקבוצת יתר בלוטת התריס בהשוואה לקבוצת הביקורת (איור 3-4), (p < 0.05).="" לא="" היה="" הבדל="" ברור="" בין="" קבוצת="" הביקורת="" וההיפר-תירואיד="" במונחים="" של="" היסטולוגיה="">

איור 1. רמות triiodothyronine חופשי (fT3), תירוקסין חופשי (fT4), והורמון מגרה בלוטת התריס (TSH) של קבוצות החולדות (א). * שונה מקבוצת הביקורת (p < 0.05).="" רמות="" bun="" בסרום="" (ב)="" וקריאטינין="" (ג)="" של="" קבוצות="" החולדות.="" *בשונה="" מקבוצת="" הביקורת="" (p="">< 0.001),="" בוצעה="" בדיקת="" t-דגימות="">

איור 2. מיקרוגרפים שלכִּליָהרקמות של קבוצות בקרה (A) והיפותירואיד (B). בקבוצת הביקורת רואים היסטולוגיה אופיינית של כליות (A). בקבוצת יתר בלוטת התריס,יתר פעילות בלוטת התריסגרם להתעבות קרום בסיס נימי בגלומרולוס. נצפתה התעבות קרום בסיס נימי בגלומרולוס (חץ) (B). אין הבדלים ברורים במדולה של הכליות בשתי קבוצות החולדות. (צביעה תקופתית חומצה-שיף (PAS)). ברים הם 20 מיקרומטר ו-50 מיקרומטר.

3.3. תוצאות אימונוהיסטוכימיות

תגובות אימונוהיסטוכימיות של TRPC1, GRP78, ATF6, IRE1, PERK והביטויים שלהם נקבעים חצי כמותית על פי אחוז החיוביםכליותמקבוצות החולדות (איור 5-9). כמו כן, השונות הממוצעת שלהם מוצגת בטבלה. בהשוואה לקבוצת הביקורת TRPC1, GRP78, ATF6, IRE1 ו-PERK עלו משמעותית ביטויי החלבון בקבוצת יתר בלוטת התריס בגלומרולוס ובאבובית (איור 5-9) (p < 0,000).="" התוצאות="" הראו="" ש-trpc1="" בא="" לידי="" ביטוי="" הן="" במבנים="" גלומרולריים="" והן="" בצינוריות="" בקבוצת="" הביקורת="" (איור="" 5-1ab)="" והביטוי="" שלו="" גדל="" בקבוצת="" יתר="" בלוטת="" התריס="" (איור="" 5-2ab).="" grp78="" לא="" התבטא="" בקבוצת="" הביקורת="" (איור="" 6-1ab)="" והתגובה="" החיובית="" שלו="" נצפתה="" הן="" בצינוריות="" והן="" בגלומרולי="" בקבוצת="" יתר="" בלוטת="" התריס="" (איור="" 6-2ab);="" בעוד="" ש-atf6="" לא="" בא="" לידי="" ביטוי="" בקבוצת="" הביקורת="" (איור="" 7-1ab),="" הביטויים="" שלו="" הגיבו="" בצורה="" חיובית="" הן="" בצינוריות="" והן="" בגלומרולי="" בקבוצת="" יתר="" בלוטת="" התריס="" (איור="" 7-2ab).="" ire1="" לא="" בא="" לידי="" ביטוי="" בקבוצת="" הביקורת="" (איור="" 8-1ab),="" והתגובה="" החיובית="" שלו="" נצפתה="" הן="" בצינוריות="" והן="" בגלומרולי="" בקבוצת="" יתר="" בלוטת="" התריס="" (איור="" 8-2ab).="" בעוד="" ש-perk="" לא="" התבטא="" בקבוצת="" הביקורת="" (איור="" 9-1ab),="" הביטוי="" של="" perk="" הוגבל="" לצינוריות="" בקבוצת="" יתר="" בלוטת="" התריס="" (איור="">

איור 3. השוואה של עובי קרום הבסיס הגלומרולרי בין קבוצות בקרה וקבוצת יתר בלוטת התריס. *בשונה מקבוצת הביקורת (p < 0.05),="" בוצעה="" בדיקת="" t="" דגימות="">

איור 4. השוואה של ניקוד עובי קרום הבסיס הגלומרולרי בין קבוצות ביקורת וקבוצת יתר בלוטת התריס. *בשונה מקבוצת הביקורת (p < 0.05),="" בוצעה="" בדיקת="" mann–whitney="">

3.4. תוצאות כתם מערבי

תוצאות הכתם המערבי (איור 10) הראו עלייה מובהקת סטטיסטית בביטויי TRPC1, PERK, ATF6 ו-GRP78 בקבוצת יתר בלוטת התריס בהשוואה לקבוצת הביקורת (p < 0.05).="" העלייה="" של="" ire1="" הייתה="" מובהקת="" סטטיסטית,="" אם="" כי="" לא="" כמו="" רמות="" חלבון="" אחרות="" (p=""><>יתר פעילות בלוטת התריסגרם לעלייה בביטוי של GRP78 (פי 2.16), ATF6 (פי 2.82), PERK (פי 1.95), IRE1 (פי 1.60) ו-TRPC1 (פי 1.53) בהשוואה לקבוצת הביקורת.

4. דיון

במחקר זה, הצענו לראשונה כיצד מושפעת רקמת הכליהיתר פעילות בלוטת התריסמבחינת התפקידים של מתח ER וערוץ TRPC1 בתהליך זה. במחקר שלנו, הביטוי המוגבר של TRPC1 גרם לעלייה של ריכוז Ca2 פלוס בתא, בפרט לעיבוי קרום בסיס נימי ולהגברת ביטוי GRP78 בצינוריות, במיוחד בגלומרולי. אנו חושבים שלחץ ER משחק תפקיד פעיל בתהליך זה של נזק תאי, במיוחד באמצעות מתמר האותות ATF6 ו-PERK במסלול UPR (תגובת חלבון לא מקופלת).

כפי שניתן לראות במחקרים רבים כמו במחקר שלנו [18], ערכי fT3 ו-fT4 עולים במקרה של פעילות יתר של בלוטת התריס, בעוד שרמת ה-TSH יורדת. כל חוסר תפקוד בבלוטת התריס יכול להשפיע על הייצור של fT3 ו-fT4 אשר יכולים להיות קשורים לפתולוגיות שונות בכל הגוף [21]. הכליותממלאים תפקיד חיוני בהפרשת מוצרי פסולת ורעלים כגון אוריאה, קריאטינין וחומצת שתן. הערכת תפקוד הכליות חשובה בטיפול בחולים עם מחלת כליות או פתולוגיות המשפיעות על תפקוד הכליות. לבדיקות תפקודי כליות יש תועלת בזיהוי נוכחות של מחלת כליות, מעקב אחר תגובת הכליות לטיפול וקביעת התקדמות מחלת כליות. רמות הקריאטינין בסרום יורדות בהיפרתירואידיזם, לא רק עקב עלייה ב-GFR אלא גם עלייה בהרס השרירים. כמו כן, הירידה בריכוז BUN ביתר פעילות בלוטת התריסנחשב לנבוע מירידה בביטוי של אקוופורין 1 ו-2. לכן, רמות BUN וקריאטינין ירדו במחקרים רבים [22] כמו במחקר שלנו. בתנאים פתולוגיים, תאים עלולים לאבד פרוטאוסטזיס וכתוצאה מכך להצטברות של חלבונים לא מקופלים ולא מקופלים ב-ER, מה שגורם ללחץ UPR או ER [23].

איור 5. צביעה אימונוהיסטוכימית עבור TRPC1 בקבוצות בקרה (1A-B) והיפותירואיד (2A-B) בקבוצותכִּליָהרִקמָה. ביטוי של TRPC עלה בקבוצת יתר בלוטת התריס בהשוואה לקבוצת הביקורת (חצים). פסים הם 50 מיקרומטר. *בשונה מקבוצת הביקורת (p < 0.000),="" בוצעה="" בדיקת="" mann–whitney="">

איור 6. צביעה אימונוהיסטוכימית עבור GRP78 בקבוצות בקרה (1A-B) והיפותירואיד (2A-B) בקבוצותכִּליָהרִקמָה. ביטוי של GRP78 מוגבר בקבוצת יתר בלוטת התריס (חצים). פסים הם 50 מיקרומטר. *בשונה מקבוצת הביקורת (p < 0.000),="" בוצעה="" בדיקת="" mann–whitney="">

איור 7. צביעה אימונוהיסטוכימית עבור ATF6 בקבוצות בקרה (1A-B) והיפותירואיד (2A-B) בקבוצותכִּליָהרִקמָה. ביטוי של ATF6 מוגבר בקבוצת יתר בלוטת התריס (חצים). פסים הם 50 מיקרומטר. *בשונה מקבוצת הביקורת (p < 0.000),="" בוצעה="" בדיקת="" mann–whit="" ney="">

איור 8. צביעה אימונוהיסטוכימית עבור IRE1 בקבוצות בקרה (1A-B) והיפותירואיד (2A-B) בקבוצותכִּליָהרִקמָה. הביטוי של IRE1 מוגבר בקבוצת יתר בלוטת התריס (חצים). פסים הם 50 מיקרומטר. *בשונה מקבוצת הביקורת (p < 0.000),="" בוצעה="" בדיקת="" mann–whitney="">

איור 9. צביעה אימונוהיסטוכימית עבור PERK בקבוצות בקרה (1A-B) והיפותירואיד (2A-B) בקבוצותכִּליָהרִקמָה. ביטוי של PERK מוגבר בקבוצת יתר בלוטת התריס (חצים). פסים הם 50 מיקרומטר. *בשונה מקבוצת הביקורת (p < 0.000),="" בוצעה="" בדיקת="" mann–whitney="">

הפרעות ב-ER וב-Cytosolic Ca2 פלוס הומאוסטזיס קשורות למחלות רבות, כוללכִּליָה. הפרעה של ER Ca2 פלוס הומאוסטזיס מפעילה UPR, המונעת הצטברות נוספת של חלבונים שסונתזו לאחרונה ב-ER. לפיכך, הוא מראה מנגנון הגנה הישרדות על ידי הפחתת העומס על ER [24].

ידועים כי גורמים שונים מעוררים מתח ER וטריגרכִּליָהנֵזֶק. לחץ ER בכליה עלול לגרום להתמיינות תאי אפיתל צינורי על ידי המעבר המזנכימלי מהאפיתל, אובדן תאי אפיתל צינורי כליות על ידי אפופטוזיס, ובסופו של דבר פתולוגיה כלייתית כולל אובדן נפרון, אשר מפחית את יכולת הסינון של הכליה. במחקר של Dickhout וחב', הוצג תהליך מעבר אפיתל-מזנכימלי שנגרם על ידי ER ב-Renal cell proximal tubule HK-2 עבור מחלת כליות כרונית [25]. בנוסף למחקרים רבים [9] כפי שניתן לראות במחקר שלנו,יתר פעילות בלוטת התריסגרם להתעבות קרום בסיס נימי בגלומרולוס. הוצע כי עיבוי הקרום הבסיסי המוגבר בגלומרולי נוצר כתוצאה מתהליך המעבר האפיתל-מזנכימלי עקב הביטוי המוגבר של ממירי אותות GRP78 ו-ER-stress. החשיבות של לחץ ER הוכחה במחלה כרוניתכִּליָהמחלה במצבים פתולוגיים רבים. במודל של סוכרת הנגרמת על ידי סטרפטוזוטוצין בעכברי C57BL/6, התפתח מתח ER, ונפרופתיה חמורה שהתרחשה בחודש העשרים ושניים קשורה לוויסות של CHOP/GADD153, אחד המרכיבים של מסלול האפופטוזיס המתווך על ידי ER מתח [26] ]. בחולים עם תסמונת נפרוטית, נפרופתיה IgA, גלומרולונפריטיס ראשונית מנזגיאלית ונפרופתיה קרומית, כולל חולים בעלי תסמינים מינימליים, GRP78 ומולקולת מלווה אנדופלזמית (ER) מלווה מולקולת חמצן מווסתת חלבון 1500 (ORPhistochemical control) מוגברת בהשוואה ל-Immunochemical control (ORPhistochemical control). ביטוי CHOP/GADD153 גדל גם הוא ולוקליזציה גרעינית נצפתה באפיתל הפרוקסימלי של הצינורית של חולים נפרוטיים. בתאי כליה אנושיים שנחשפו לרמות גבוהות של אלבומין בסרום, נצפתה אינדוקציה של ER מתח והוכח כגורם לאפופטוזיס דרך מסלול CHOP/GADD153 [25]. תגובת הלחץ של ER tubulointerstitial נמצאה במחלות גלומרולריות עם אפופטוזיס של תאים צינוריים הקשורים לנפרוזה של פורומיצין אמינו נוקלאוזיד, עומס חלבון ופרוטאינוריה הקשורים לנפרופתיה סוכרתית ניסויית או אנושית [27]. לורז ואחרים. דיווח כי אקמול, משכך כאבים ונוגד חום, גורם לנזק לצינורית הכלייתית ולאפופטוזיס עקב לחץ ER [28]. אקמול גורם לתגובת סטרס ER כולל אינדוקציה של CHOP ומחשוף של קספאז-12. הצטברות מוגזמת של חלבונים מפרישים גורמת ללחץ ER, וגורמת לנזק לפודוציטים [29]. התקף המשלים גורם גם ללחץ ER ומפעיל את מסלול ה-PERK המוביל לנזק לתאי אפיתל גלומרולרי. כל הממצאים הללו מראים שלחץ ER הוא אחד הגורמים העיקריים לנזק לכליות ותגובת הלחץ ER היא מנגנון הגנה מפניכִּליָהנזק [30]. במחקר שלנו, אנו חושבים שיפרתירואידיזם המושרה על ידי תירוקסין 12 מ"ג/ליטר גורם ללחץ ER ברקמת הכליה, ולנזק הנגרם על ידייתר פעילות בלוטת התריסברקמת הכליה קשורה לוויסות של ATF6 ו-PERK במיוחד.

תעלת ה-TRP של היונקים המשובטים הראשונה, תעלת היונים TRPC1, נמצאת בתא בתוך ה-ER, קרום הפלזמה, השלפוחיות התוך-תאיות והצילירית הראשונית. זה מתבטא כמעט בכל מקום ברקמות אנושיות ומכרסמים. TRPC1 מקיים אינטראקציה עם קבוצות חלבון שונות, כולל תת-יחידות של תעלות יונים, קולטנים וחלבונים ציטוסוליים כדי לתווך את השפעתו על אות Ca2 פלוס. הוא פועל כתעלת קטיון לא סלקטיבית במסלולים השולטים בזרימת Ca2 פלוס בתגובה להפעלת קולטן פני התא. באמצעות פונקציה זו, זמינים גם שגשוג, הישרדות, התמיינות, הפרשה ונדירת תאים, כמו גם תכונות כגון קונוסים של גדילה עצבית והיתוך מיובלסט של פונקציות ספציפיות לתאים כימוטרופיים [12].

ישנם מחקרים רבים על השינוי בביטוי TRPC1 במצבים פתולוגיים רבים הגורמים ללחץ ER. Sukumaran et al. הראה שיש מתאם בין לחץ ER לבין ביטוי TRPC1 שיכול לשנות את הישרדות התאים בבלוטת הרוק. הם הביעו שביטוי TRPC1 ירד בתנאי לחץ ER וגם מוות של תאים עקב לחץ ER היה תלוי בביטוי CHOP. נצפתה מתח ER וחדירה מוגברת בתאי בלוטת הרוק של TRPC1-/- עכברי נוק-אאוט [16].

איור 10. הכִּליָהרמות ביטוי חלבון GRP78, ATF6, TRPC1, IRE1 ו-PERK וגרף של שינוי קיפול. העלייה של כל החלבונים הייתה מובהקת סטטיסטית (*p < 0.05),="" בוצעה="" בדיקת="" t="" דגימות="">

מתיכליותממודלים של חולדות סוכרתיות נבדקו, דווח כי ביטוי mRNA TRPC1 ירד [31]. בחולים עם נפרופתיה סוכרתית או חולדות סוכרתיות של צוקר בהשוואה לביקורות, ירידה בביטוי TRPC1 הצביע על כך ש-TRPC1 השפיע על התפתחות נפרופתיה סוכרתית [32]. TRPC1 ממלא תפקיד חיוני בשמירה על ER Ca2 בתוספת הומאוסטזיס, ותפקוד מופחת מוביל להפעלה ממושכת של מסלול ה-UPR ומשבש את ההפעלה של AKT, אשר לאחר מכן מוביל לניוון עצבי. ירידה בביטוי TRPC1 נצפתה במודל מחלת פרקינסון העכבר המושרה על ידי רעלנים. ביטוי מוגבר של TRPC1 מגביר את ההישרדות של נוירונים על ידי ויסות מסלול AKT/mTOR, למרות מתח ER ו-UPR שנגרמו על ידי נוירוטוקסין [33]. לי וחב'. דיווח כי ביטוי TRPC1 גדל גם בהיפרטרופיה של קרדיומיוציטים המושרה על ידי נמפטין בהתאם לזמן. כאשר הגן TRPC1 הושתק, זה הביא לעיכוב של היפרטרופיה לבבית הנגרמת על ידי nicotinamide phosphoribosyl transferase. עם זאת, על ידי ביטוי יתר של TRPC1, ניקוטינמיד פוספוריבוסילטרנספראז נחשב כמעורר היפרטרופיה של קרדיומיוציטים על ידי מסלול המושרה על ידי ER מתח. מנקודת מבט זו, השתקה של הגן TRPC1 עשויה למלא תפקיד מגן במניעת היפרטרופיה לבבית [34]. במחקר שלנו, גם מתח ER ו-TRPC1 עלו באופן משמעותי. זה מצביע על כך שהתעבות קרום בסיס נימי שנגרם כתוצאה מלחץ ER מוגבר ברקמת הכליה עקביתר פעילות בלוטת התריסנובע מביטוי מוגבר של TRPC1.

למחקר הזה יש כמה מגבלות. ייתכן שנעשה שימוש בעכברים מהונדסים גנטית במקום במודל של חולדות יתר של בלוטת התריס המושרה על ידי תירוקסין. עם שתן שנאסף באמצעות כלובים מטבוליים, חלקםכִּליָהייתכן שבדיקות התפקוד נמדדו גם בשתן. ניתן לחקור את השינוי ברמת הלחץ של ER באמצעות מעכב TRPC1.

כתוצאה מסקירת הספרות שלנו, ההשפעה של יתר פעילות בלוטת התריס על הקשר בין מתח ER ותעלת TRPC1 ברקמת הכליה הודגמה לראשונה במחקר זה. כך נקבעיתר פעילות בלוטת התריסגרם לעלייה של ביטוי TRPC1 שגורם ללחץ ER. אנו מציעים כי הפחתת ביטוי TRPC1 עשויה להיות אסטרטגיה טיפולית פוטנציאלית ל-Hyperthyroid-inducedכִּליָהואולי נזק לאיברים אחרים.

הפניות

1. Kim D, Kim W, Joo SK, Bae JM, Kim JH et al. תת-פעילות של בלוטת התריס תת-קלינית ותפקוד נמוך של בלוטת התריס קשורים לסטאטו-הפטיטיס לא-אלכוהולי ולפיברוזיס. גסטרואנטרולוגיה קלינית והפטולוגיה 2018; 16 (1): 123-131. DOI: 10.1016/j.cgh.2017.08.014

2. Bolkiny Y, Toulson E, El-Atrsh A, Akela M, Farg E. תמצית שורש Costus מקל על הפרעות ביוכימיות בדם של היפו-ו-הנגרמות בניסוייתר פעילות בלוטת התריסבעכברים. מחקר וסקירה שנתית בביולוגיה 2019; 31 (5): 1-10. DOI: 10.9734/arb/2019/v31i530063

3. Sakr S, Abdel-Ghafar FR, Abo-El-Yazid SM. סלניום משפר את רעילות הכבד הנגרמת על ידי קרבימאזול ולחץ חמצוני בחולדות לבקנים. Journal Coastal Life Medicine 2015; 3 (2): 930-936. DOI: 10.1016/j.jtemb.2010.07.002

4. Vargas F, Moreno JM, Rodríguez-Gómez I, Wangensteen R, Osuna A, et al. תפקוד כלי דם וכליות בהפרעות ניסיוניות של בלוטת התריס. כתב העת האירופי לאנדוקרינולוגיה 2006; 154 (2): 197-212. DOI: 10.1530/tee.1.02093

5. Rhee CM. האינטראקציה בין בלוטת התריס וכִּליָהמחלה: סקירה כללית של העדויות. חוות דעת נוכחית באנדוקרינולוגיה 2016; 23 (5): 407-415. DOI: 10.1097/Med.00000000000000275

6. Wijkhuisen A, Djouadi F, Vilar J, Merlet-Benichou C, Bastin J. הורמוני בלוטת התריס מווסתים את התפתחותם של אנזימים של חילוף החומרים באנרגיה באבובית מפותלת פרוקסימלית של חולדה. American Journal of Physiology-Renal Physiology 1995; 268 (4): 634-642. DOI: 10.1152/ajprenal.1995.268.4.F634

7. Baum M, Dwarakanath V, Alpern RJ, Moe OW. השפעות הורמון בלוטת התריס על קליפת המוח הכלייתית של יילודים Na plus /H plus antiporter. כליות בינלאומיות 1998; 53 (5): 1254-1258. DOI: 10.1046/j.1523-1755.1998.00879.x

8. Alcalde AI, Sarasa M, Raldúa D, Aramayona J, Morales R et al. תפקיד הורמון בלוטת התריס בוויסות הובלת פוספט בכליות בחולדות צעירות ומבוגרות. אנדוקרינולוגיה 1999; 140 (4): 1544-1551. DOI: 10.1210/endo.140.4.6658

9. Iglesias P, Bajo MA, Selgas R, Díez JJ. תפקוד לקוי של בלוטת התריס ומחלת כליות: עדכון. ביקורות בהפרעות אנדוקריניות ומטבוליות 2017; 18 (1): 131-144. DOI:

10.1007/שניה11154-016-9395-710. Selvarej S, Watt JA, Singh BB. TRPC1 מעכב ניוון תאים אפופטוטי המושרה על ידי רעלן עצבי דופמינרגי MPTP/MPP פלוס. סידן תאים 2009; 46 (3): 209-218. DOI: 10.1016/j.ceca.2009.07.008

11. Goda Y, Südhof TC. ויסות סידן של שחרור נוירוטרנסמיטר: לא אמין באופן אמין? דעה נוכחית בביולוגיה של התא 1997; 9 (4): 513-518. DOI: 10.1016/s0955-0674(97)80027-0

12. Sukumaran P, Schaar A, Sun Y, Singh BB. תפקיד פונקציונלי של ערוצי TRP באפנון מתח ER ואוטופגיה. סידן תאים 2016; 60 (2): 123-132. DOI: 10.1016/j.ceca.2016.02.012

13. Goel M, Sinkins WG, Zuo CD, Estacion M, Schilling WP. זיהוי ולוקליזציה של ערוצי TRPC בחולדהכִּליָה. American Journal of Physiology-Renal Physiology 2006; 290 (5): 1241-1252. DOI: 10.1152/ajprenal.00376.2005

14. Chubanov V, Kubanek S, Fiedler S, Mittermeier L, Gudermann T et al. תפקודי כליות של ערוצי TRP בבריאות ומחלות. בתוך: אמיר TLR (עורך). נוירוביולוגיה של ערוצי TRP. מהדורה ראשונה. בוקה רטון, פלורידה, ארה"ב: CRC Press/Taylor & Francis; 2017. עמ' 187-212.

15. Jeschke MG, Gauglitz GG, Song J, Kulp GA, Finnerty CC et al. סידן ולחץ ER מתווכים אפופטוזיס בכבד לאחר פגיעה בכוויה. כתב עת לרפואה סלולרית ומולקולרית 2009; 13 (8ב): 1857-1865. DOI: 10.1111/j.1582-4934.2009.00644.x

16. Sukumaran P, Sun Y, Zangbede FQ, Nascimento da Conceicao V, Mishra B et al. ביטוי ותפקוד TRPC1 מעכבים מתח ER ומוות תאים בתאי בלוטת הרוק. FASEB BioAdvanc es 2019; 1 (1): 40-50. DOI: 10.1096/fab.1021

17. Zhao Y, Yan Y, Zhao Z, Li S, Yin J. השינויים הדינמיים של סמני המתח האנדופלזמי GRP78 ו-CHOP בהיפוקמפוס של עכברים סוכרתיים. עלון מחקרי המוח 2015; 111: 27-35. DOI: 10.1016/j.brainresbull.2014.12.00618. Araujo A, Schenkel P, Enzveiler A, Fernandes T, Partita W et al. תפקידו של איתות חיזור בהיפרטרופיה לבבית המושרה על ידי ניסוייתר פעילות בלוטת התריס. Journal of Molecular Endocrinology 2008; 41 (6): 423-430. DOI: 10.1677/JME-08-002419. Wang Z, do Carmo JM, Aberdein N, Zhou X, Williams JM et al. אינטראקציה סינרגטית של יתר לחץ דם וסוכרת בקידום פגיעה בכליות ובתפקיד של לחץ רשתית אנדופלזמית. יתר לחץ דם 2017; 69 (5): 879-891. DOI: 10.1161/hyper tensionaha.116.08560

20. Zhang LY, Zhang YQ, Zeng YZ, Zhu JL, Chen H et al. TRPC1 מעכב את השגשוג והנדידה של סרטן שד חיובי לקולטני אסטרוגן ונותן פרוגנוזה טובה יותר על ידי עיכוב מסלול PI3K/AKT. מחקר וטיפול בסרטן השד 2020; 182 (1): 21-33. DOI: 10.1007/s10549-020-05673-8

21. Aldubayan MA. פרואנטוציאנידין של זרעי ענבים מקל על מתח חמצוני ואפופטוזיס המעורבים בכבד של עכברים יתר של בלוטת התריס. מחקר וסקירה שנתית בביולוגיה 2019: 1-11. DOI: 10.9734/arb/2019/v33i630138

22. Sonmez E, Bulur O, Ertugrul DT, Sahin K, Beyan E et al.יתר פעילות בלוטת התריסמשפיע על תפקוד הכליות. אנדוקרינית 2019; 65 (1): 144-148. DOI: 10.1007/s12020-019-01903-2

23. Yan M, Shu S, Guo C, Tang C, Dong Z. Endoplasmic reticulum stress in ischemic and nephrotoxic acuteכִּליָהפציעה. Annals of Medicine 2018; 50 (5): 381-390. DOI: 10.1080/07853890.2018.1489142

24. Bezprozvanny I, Mattson MP. טיפול שגוי בסידן עצבי ופתוגנזה של מחלת אלצהיימר. מגמות במדעי המוח 2008; 31 (9): 454-463. DOI: 10.1016/j.tins.2008.06.005

25. Dickhout JG, Carlisle RE, Austin RC. קשר הגומלין בין היפרטרופיה לבבית, אי ספיקת לב ומחלת כליות כרונית: מתח רשתית אנדופלזמית כמתווך של פתוגנזה. מחקר תפוצה 2011; 108 (5): 629-642. DOI: 10.1161/circresaha.110.226803

26. Wu J, Zhang R, Torreggiani M, Ting A, Xiong H et al. אינדוקציה של סוכרת בעכברי C57B6 מבוגרים גורמת לנפרופתיה חמורה: קשר ללחץ חמצוני, לחץ רשתית אנדופלזמית ודלקת. כתב העת האמריקאי לפתולוגיה 2010; 176 (5): 2163-2176. DOI: 10.2353/ajpath.2010.090386

27. Cybulsky AV. מתח רשת אנדופלזמי במחלת כליות פרוטאינורית.כִּליָהבינלאומי 2010; 77 (3): 187-193. DOI: 10.1038/ki.2009.389

28. Lorz C, Justo P, Sanz A, Subira D, Egido J et al. פגיעה בצינורית הכלייתית הנגרמת על ידי Paracetamolinduced: תפקיד ללחץ ER. Journal of the American Society of Nephrology 2004; 15 (2): 380-389. DOI: 10.1097/01.asn.0000111289.91206.b0

29. Inagi R, Nangaku M, Onogi H, Ueyama H, Kitao Y et al. מעורבות של מתח רשתית אנדופלזמית (ER) בפציעה של פודוציטים הנגרמת על ידי הצטברות יתר של חלבון.כִּליָהבינלאומי 2005; 68 (6): 2639-2650. DOI: 10.1111/j.1523-1755.2005.00736.x

30. Yoshida H. ER מתח ומחלות. The FEBS Journal 2007; 274 (3): 630-658. DOI: 10.1111/j.1742-4658.2007.05639.x

31. Nesin V, Tsiokas L. TRPC1. בתוך: Nilius B, Flockerzi V (עורכים). ערוצי קטיון של יונקים חולפים (TRP). מהדורה 24. ברלין, היידלברג, גרמניה: ספרינגר; 2014. עמ' 15-51.

32. He F, Peng F, Xia X, Zhao C, Luo Q et al. MiR-135a מקדם פיברוזיס כליות בנפרופתיה סוכרתית על ידי ויסות TRPC1. Diabetologia 2014; 57 (8): 1726-1736. DOI: 10.1007/s00125-014-3282-0

33. Selvaraj S, Sun Y, Watt JA, Wang S, Lei S et al. מתח ER המושרה על ידי נוירוטוקסין בנוירונים דופמינרגיים של עכבר כרוך בוויסות מטה של ​​TRPC1 ועיכוב של איתות AKT/mTOR. The Journal of Clinical Investigation 2012; 122 (4): 1354-1367. DOI: 10.1172/JCI61332

34. Li J, Wu W, Zhao M, Liu X. מעורבות TRPC1 ב-Nampt גרמה להיפרטרופיה של קרדיומיוציטים דרך הפעלת לחץ ER. ביולוגיה תאית ומולקולרית 2017; 63 (4): 33-37. DOI: 10.14715/CMB/2017.63.4.6