פגיעה בפעילות גופנית--איסכמיה כלייתית--reperfusion והאפקט המגן של הרבה ציסטאנצ'ים בשילוב עם ויטמין C בחולדות
Mar 07, 2022
פגיעה של איסכמיה-רפרפוזיה כלייתית הנגרמת על ידי פעילות גופנית והשפעת ההגנה של הרבה ציסטנצ'ס בשילוב עם ויטמין C בחולדות
למידע נוסף:ali.ma@wecistanche.com
תַקצִיר:מטרה: לחקור את ה-Herba Cistanches בשילוב עם השפעת ההגנה של ויטמין C ומנגנון התנועה של חולדות פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה בכליות. שיטות: מחלקים באופן אקראי 96 7 שבוע - חולדות Wistar זכרים מבוגרים ל-6 קבוצות: קבוצת ביקורת (קבוצה C ,12), קבוצת אימון כללי (קבוצה M,1 2), קבוצת אימון יתר (קבוצה OM,24), קבוצת אימון יתר (קבוצה COM,16), ויטמין C בתוספת קבוצת אימון יתר (קבוצה VCOM,16), ו-cistanche פלוס ויטמין C פלוס קבוצת אימון יתר (קבוצת CVCOM,1 6), קחו 56 ימים של אימון שחייה ממצה. קבוצת COM, קבוצת CVCOM עם מתן מתן מקצועי לשטיפת קיבה(ig), פעם ביום, מינון של 6．0 lg．kg-, נפח Ig 5 mL．kg-; קבוצת VCOM, קבוצת CVCOM IP קח זריקה תוך פריטונאלית, 100 מ"ג. ק"ג-, פעם ביום, נפח ההזרקה הוא 0．5 מ"ל; קבוצות אחרות הן מלוחים רגילים. זיהוי פרמטרים ביוכימיים של חנקן אוריאה בסרום וקריאטינין בסרום 24 שעות מאוחר יותר לאחר האימון האחרון. תוצאות: 1)ב-8 שבועות של אימון יתר, חולדות הביאו לתנועה של "איסכמיה-רפרפוזיה של הכליה", המבנה האולטרה-מבנה של הכליה נפגע קשות , ברור שהשינויים ההיסטופתולוגיים, תפקוד הכליות נפגע קשות.2) עלייה של קריאטינין בסרום וחנקן אוריאה בדם. קבוצת OM (P<0．01), com=""><0．o1), vcom=""><0．01), cvcom=""><0．05) higher="" than="" in="" group="" c;="" com=""><0．05), vcom=""><0．05), cvcom=""><0．01)lower than="" the="" om="" group;="" com=""><0．05), cvcom=""><0．01)lower than="" the="" vcom="" group．3)sod="" activity="" decreased．om=""><0．01), com=""><0．01), of="" vcom=""><0．01), cvcom=""><0．05)lower than="" in="" group="" c;="" m=""><0．05), com=""><0．05), vcom=""><0．05), cvcom=""><0．01)higher than="" the="" om="" group;="" com=""><0．05), cvcom=""><0．01)higher than="" the="" vcom="" group．4)the="" content="" of="" mda="" increased,="" om=""><0．01), com=""><0．01), vcom="">< 0．o1),="" cvcom=""><0．05)higher than="" in="" group="" c;="" com=""><0．05), vcom="" group=""><0．05), cvcom=""><0．01)lower than="" the="" om="" group;="" com=""><0．05), cv—="" com=""><0．01)lower than="" the="" vcom="" group．conclusion：1)overtraining="" can="" induce="" renal="" ischemia-reperfusion="" in="" rats．2)cistanche="" deserticola="" y．c．ma="" and="" vitamin="" c="" can="" enhance="" the="" activity="" of="" sod,="" scavenging="" oxygen="" free="" radicals,="" reduce="" lipid="" peroxidation,="" they="" have="" a="" protective="" effect="" on="" exercise-induced="" ischemia-reperfusion="" kidney．3)cistanche="" is="" better="" than="" vitamin="" c,="" but="" they="" worked="" even="" better="" when="" taken="">
מילות מפתח:herba Cistanches; ויטמין סי; איסכמיה-רפרפוזיה הנגרמת על ידי פעילות גופנית
עם התפתחות תיאוריית הרפואה הסינית המודרנית, תיאוריית הפרמקולוגיה המודרנית והביוטכנולוגיה המודרנית, מיושמים יותר סוכנים או נוסחאות בודדות לתרגול ספורט. הרפואה הסינית המסורתית מציגה את היתרונות הייחודיים שלה בגלל השפעתה מרובת המטרות, הרב-ערוצית, וכמעט ללא רכיבים אסורים. הוא השיג כמה הישגים בשיפור התפקוד הגופני של ספורטאים והקלה על עייפות. כאשר הגוף נמצא במצב יציב, ניתן לשמור על זרימת הדם הכלייתית קבועה יחסית באמצעות מנגנון הוויסות שלו. במהלך פעילות גופנית מאומצת, זרימת הדם הכלייתית משתנה בהשפעת גורמים עצביים והומורליים. עקב חלוקה מחדש של זרימת הדם של איברים שונים, זרימת הדם של האיברים הפעילים, בעיקר השרירים, עולה, וזרימת הדם הכלייתית יורדת בחדות, מה שברור יותר עם האינטנסיביות המתמשכת והגוברת של תהליך האימון. מצב איסכמי לא שלם זה של הכליה יוצר "איסכמיה כלייתית הנגרמת על ידי פעילות גופנית". לאחר הפסקת פעילות גופנית, אספקת הדם הכלייתית מתאוששת, ויוצרת "פרפוזיה חוזרת" לאחר איסכמיה כלייתית הנגרמת על ידי פעילות גופנית. העלייה החריגה של ייצור רדיקלים חופשיים משחקת תפקיד חשוב בתהליך של פגיעה באיסכמיה-פרפוזיה חוזרת. התוצאות מראות כי ל-Cistanche deserticola השפעות פרמקולוגיות של הגברת הפעילות של פרוקסיד דיסמוטאז והפחתת פרוקסיד ליפידים, והיא יכולה לחסל את הנזק של עודף רדיקלים חופשיים לתאי הגוף; ויטמין C, כנוגד חמצון חשוב בגוף, יכול גם לסלק ביעילות רדיקלים חופשיים. מאמר זה בוחן את ההשפעות של Cistanche deserticola בשילוב עם ויטמין C על פגיעת איסכמיה-רפרפוזיה של כליות חולדה, ודן בהשפעותיהן ובמנגנונים בפציעת איסכמיה-רפרפוזיה, כדי לספק בסיס תיאורטי ליישום הקליני שלהן.
1 חומר
1.1 בעלי חיים
100 חולדות Wistar זכרים בדרגות נקיות, בני 42 ימים, משקל ממוצע (201.8 ± 14.1) גרם, מסופק על ידי המחלקה למדעי בעלי חיים ניסויים, המחלקה לרפואה, אוניברסיטת פקין, מס' רישיון scxk2006-0008. במהלך כל הבדיקה, הטמפרטורה במעבדה נשמרת על 22 ± 2 מעלות, הלחות היחסית היא 55 אחוז ~ 75 אחוז, וזמן ההארה משתנה עם הטבע. כל חולדות הניסוי הוזנו במזון בסיסי (שסופק על ידי המחלקה למדעי בעלי חיים ניסויים, המחלקה לרפואה, אוניברסיטת פקין) ומים מזוקקים. זמן הניסוי היה 63 ימים וזמן האימון הפורמלי היה 56 ימים.
1.2 טיפול תרופתי ניסיוני
Cistanche deserticola, המיוצר במונגוליה הפנימית, נרכש מבית מרקחת Tongrentang בבייג'ינג, מס' אצווה: 120224536
הזרקת ויטמין C (מספר אצווה: 20120406), מסופק על ידי Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.
1.3 ריאגנטים
קריאטינין בסרום (SCR) נקבע בשיטת Jaffe picric acid, חנקן אוריאה בדם (BUN) בשיטת דיאצטיל MONOOXIME, ומלונדיאלדהיד (MDA) בקולורימטריה; Superoxide Dismutase (SOD) נקבע בשיטת קסנטין אוקסידאז, באמצעות הערכה שסופקה על ידי Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, ערכה מס' 2012051
1.4 מכשירים
מאזן אנליטי אלקטרוני Bs224s (Sartorius, גרמניה), מיקרוסקופ אופטי (Olympus, יפן), מנתח ביוכימי אוטומטי alcyon300 (Abbott, ארה"ב), ספקטרופוטומטר 756mc גלוי אולטרה סגול (Shanghai Precision Instrument Factory), ו-gl-20g high- מהירות הקפאת צנטריפוגה.
2 שיטות
2.1 קיבוץ בעלי חיים
לאחר 4 ימים של האכלה מותאמת, חולדות הניסוי נבדקו במשך 3 ימים עם 20 דקות של פעילות גופנית יומית, ושחיינים לא מתאימים בודדים חוסלו. שאר החולדות חולקו באופן אקראי ל-6 קבוצות: 12 בקבוצת הביקורת (קבוצה C), 12 בקבוצת האימון הכללי (קבוצה M), 24 בקבוצת אימון יתר (קבוצת OM), 16 בקבוצת ה-Cistanche deserticola פלוס אימון יתר ( קבוצת COM) ו-16 בקבוצת אימון יתר של ויטמין C פלוס (קבוצת VCOM) 16 חולדות בקבוצת Cistanche deserticola פלוס ויטמין C פלוס אימון יתר (קבוצת cv com) אומנו במשך 56 ימים. במהלך תקופת ההכשרה, קבוצת ה-com וקבוצת ה-cv com הוזרמו במכשיר מתן מקצועי פעם ביום, במינון של 6.01 גרם/ק"ג ובנפח של 5 מ"ל/ק"ג; קבוצת VCOM וקבוצת cv com הוזרקו תוך צפק במינון של 100 מ"ג/ק"ג פעם ביום, עם נפח הזרקה של 0.5 מ"ל, וכמות זהה של תמיסת מלח רגילה בקבוצות אחרות.
2.2 שיטה ניסיונית
2.2.1 ערכת הכשרה ומבחנים
קבוצה ג' הוזנה באופן שגרתי ללא כל התערבות ולא התעמלה בזמנים רגילים. קבוצה M קיבלה אימוני שחייה בעצימות בינונית ואימוני שחייה רשמיים במשך 8 שבועות. התאמן 6 ימים בשבוע, פעם ביום, שחה 20 הקפות בפעם הראשונה, ולאחר מכן הגדל בהדרגה. שחו 60 דקות בכל פעם בסוף השבוע הראשון, 90 דקות ביום בסוף השבוע השני ו-120 דקות ביום בסוף השבוע השלישי. שמרו על כמות זו של פעילות גופנית במשך 5 השבועות הבאים. מערך האימונים של קבוצות אחרות ב-3 השבועות הראשונים זהה לזה של קבוצה M, ואימונים בעצימות גבוהה יתבצעו החל מהשבוע הרביעי. חולדות אומנו עד תשישות בכל פעם. תקן התשישות היה שהחולדות לא יצאו משטח המים במשך 10 שניות לאחר השקיעה. הגדל את המשקל ב-0.5 אחוז בשלושת השבועות הראשונים, 1 אחוז בשבוע הרביעי ו-2 אחוז בשבוע החמישי. מתאמן פעם ביום. בשבוע השישי הם התאמנו פעם אחת בכל יום בבוקר ואחר הצהריים, ובשבוע השביעי-8 הם התאמנו פעם אחת בכל יום בבוקר, אחר הצהריים ולילה, כל אלו העלו את המשקל ב-5 אחוזים. עד סוף השבוע ה-8, החולדות בקבוצות C ו-M גדלו כרגיל ללא מוות מקרי. התמותה של חולדות בקבוצות אחרות הייתה גבוהה יותר עקב עלייה במשקל, אי התאוששות מעייפות ומוות בשוגג לאחר אימון. היו 14, 13, 11 ו-13 חולדות בקבוצת OM, קבוצת com, קבוצת VCOM וקבוצת CVCOM, בהתאמה. 10 חולדות בכל קבוצה נבחרו לניסוי, והאחרות לא נכללו באקראי.
2.2.2 קביעת מדד
24 שעות לאחר אימון השחייה האחרון, החולדות בכל קבוצה הורדמו בצורה מתונה עם אתר. דם נלקח מהעורק הצוואר המשותף, נוגד קרישה בתמיסת נתרן ציטראט, הונח במים של 37 מעלות למשך 30 דקות, צנטריפוגה ב-4 מעלות 3000 סל"ד למשך 10 דקות, הופרד והוכן סרום, ואוחסן במקרר בשעה מינוס 20 מעלות לעיון עתידי. הסר במהירות את שתי הכליות, הסר את הפאשיה, הכנס אותן לתמיסת מלח רגילה שמקורה מראש כדי לשטוף כתמי דם, ולבחון חזותית את הגודל, הצבע והמרקם של הכליות. הפרד את הכליה השמאלית, קח 0.5 גרם של רקמת קוטב עליון של הכליה, טוחן אותה עם 1.5 מ"ל תמיסת מלח רגילה ב-12000 סל"ד במעלה אחת כדי להפוך 10% לרקמת הכליה הומוגנית; דגימות רקמת הכליה נקבעו עם 10 אחוז פורמלדהיד, עטפו בפרפין, הפכו למקטעים בעובי 4 אום, נצבעו ב-HE, והשינויים ההיסטופתולוגיים נצפו.
3. תוצאות
3.1 שינויים פתולוגיים של פעילות גופנית, Cistanche deserticola וויטמין C על כליית חולדה
לאחר קביעת ה-SCR והלחמניה, רקמות הכליה של כל קבוצה נעשו לקטעי פרפין, נצבעו ב-HE, והשינויים ההיסטומורפולוגיים נצפו במיקרוסקופ אור. תחת מיקרוסקופ האור, מבנה רקמת הכליה של חולדות בקבוצת הביקורת הסטטית ובקבוצת האימון הכללי היה תקין, ללא גודש, ניוון ובצקת, ולא היה סוג צינורי בלומן של צינוריות הכליה. בקבוצת אימון יתר, היה גודש בגלומרולוס, בצקת, ניוון ואקוולארי והתרחבות לומן של תאי אפיתל צינוריים, ומספר קטן של תאי אפיתל ותאי פילינג בלומן. השינויים ההיסטופתולוגיים בקבוצות אחרות היו קלים יותר מאלו בקבוצת אימון יתר, עם בצקת קלה, ניוון ואקוולארי, התרחבות לומן של תאי אפיתל צינוריים, וללא סוג צינור חלבון וסוג צינור תא. לא היה הבדל מובהק בציון הפאלר של צינוריות הכליה בין קבוצת הביקורת הסטטית לקבוצת האימון הכללי (P > {{0}}.05), קבוצת הביקורת הסטטית הייתה נמוכה משמעותית מזו של קבוצות אחרות (P < 0.01),="" וקבוצת="" הטיפול="" הייתה="" נמוכה="" משמעותית="" מזו="" של="" קבוצת="" אימון="" יתר="" (p=""><>
3.2 השפעות של פעילות גופנית, Cistanche deserticola וויטמין C על BUN ו-SCR בסרום בחולדות
חנקן אוריאה בדם וקריאטינין בדם עלו באופן מובהק בכל קבוצה בהשוואה לקבוצת הביקורת, וירדו באופן מובהק בקבוצת com, קבוצת VCOM וקבוצת CVCOM בהשוואה לקבוצת OM (P < {0}}}.{{4}="" }5,="" p="">< 0.05="" ו-p="">< 0.01="" בהתאמה);="" בהשוואה="" לקבוצת="" vcom,="" קבוצת="" com="" וקבוצת="" cvcom="" ירדו="" באופן="" משמעותי="" (p=""><0.05, p=""><0.01,>
3.3 השפעות של פעילות גופנית, Cistanche deserticola וויטמין C על פעילות SOD ותכולת MDA בהומוגנית של כליות חולדות.
בהשוואה לקבוצת OM, פעילות SOD בקבוצת COM, קבוצת VCOM וקבוצת CVCOM עלתה באופן משמעותי (P < {{0}}.05,="" p="">< 0.{{9}="" }5="" ו-p="">< 0.o1,="" בהתאמה);="" בהשוואה="" לקבוצת="" vcom,="" קבוצת="" com="" וקבוצת="" cvcom="" עלו="" באופן="" משמעותי="" (p="">< o.05,="" p="">< 0}.o1,="" בהתאמה).="" תכולת="" ה-mda="" בכל="" קבוצה="" הייתה="" גבוהה="" משמעותית="" מזו="" שבקבוצת="" הביקורת="" וירדה="" משמעותית="" בקבוצת="" ה-com,="" קבוצת="" vcom="" וקבוצת="" cvcom="" בהשוואה="" לקבוצת="" om="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.05="" ו-p="">< 0.01="" בהתאמה);="" בהשוואה="" לקבוצת="" vcom,="" קבוצת="" com="" וקבוצת="" cvcom="" ירדו="" באופן="" משמעותי="" (p="">< 0.05="" ו-="" p="">< 0.o1,="">
4 דיון
פציעת איסכמיה-רפרפוזיה כלייתית (R/R) היא תהליך פתופיזיולוגי מורכב, והמנגנון הספציפי שלו לא הובהר במלואו. עם זאת, רדיקלים נטולי חמצן (OFR) ממלאים תפקיד חשוב בהתרחשות ובהתפתחות של I/R. בנסיבות רגילות, מספר קטן של רדיקלים חופשיים יכול להיווצר בגוף, אך עקב אי הפעלה של האנזים הרדיקלים החופשיים המערכת בגוף, הרדיקלים החופשיים מוסרים במהירות ללא נזק. במהלך פעילות גופנית, I/R מגביר את ייצור הרדיקלים החופשיים, מה שעלול להוביל לחמצן שומנים בממברנה, וכתוצאה מכך לשינויים של נזילות, נזילות וחדירה של הממברנה, ולאחר מכן לגרום לחוסר תפקוד של הממברנה, במיוחד להרס של הממברנה המיטוכונדריאלית. מטבוליזם ותפקוד התא, ומפריעים לתפקוד הפיזיולוגי של האיבר כולו. אנזימים נוגדי חמצון הם החומרים העיקריים בגוף לסילוק רדיקלים חופשיים ולהפחתת הנזק שלהם. סוד הוא האנזים היחיד עם רדיקל נטול חמצן כמצע בין אלפי אנזימים באורגניזמים אירוביים. זה מסיר אניון סופראוקסיד על ידי זרז אניון סופראוקסיד ליצירת מי חמצן ומגן על הגוף מפני נזק. יחד עם זאת, בטווח מסוים, SOD יגדל באופן פיצוי כאשר חילוף החומרים של רדיקלים חופשיים משופר. לכן, רמת הפעילות של SOD היא סימן לחוזק של יכולת נוגדת החמצון. MDA הוא התוצר העיקרי של חמצון שומנים תאית. התוכן של MDA במיטוכונדריה מוכר כאינדקס רגיש למדידת חילוף החומרים של רדיקלים חופשיים. קריאטינין וחנקן אוריאה הם תוצרים קטבוליים של שריר וחלבון בהתאמה. הם מודרים בעיקר מהכליה דרך מחזור הדם. ריכוזם בדם תלוי ביכולת הסינון הגלומרולרית. כאשר המהות הכלייתית נפגעת וקצב הסינון הגלומרולרי יורד לנקודה הקריטית, הריכוז שלהם יעלה משמעותית.
התוצאות הראו שאימון יתר במשך 8 שבועות הביא לשינויים משמעותיים בהיסטופתולוגיה הכלייתית. תוצאות הניסוי מראות ש-Cistanche deserticola וויטמין C יכולים לנקות ביעילות רדיקלים חופשיים, להפחית איסכמיה והיפוקסיה בכליות, לעכב חמצון שומנים ולשפר את פעילות SOD. זה יכול להפחית ביעילות פציעת איסכמיה-פרפוזיה בכליות ולמלא תפקיד מגן. המנגנונים האפשריים הם כדלקמן: 1) Cistanche deserticola יכול לשפר את פעילותם של אנזימים נוגדי חמצון ולהאיץ את סילוק הרדיקלים החופשיים. יחד עם זאת, מגוון פוליפנולים, גליקוזידים ופלבנואידים ממלאים תפקיד חיובי בניקוי רדיקלים חופשיים, הפחתת הנזק של רדיקלים חופשיים לממברנת המיטוכונדריה ולקרום הרשת הסרקופלזמית, וצמצום הנזק החמצוני לחלבוני האנזים. 2) ויטמין C הוא ויטמין נוגד חמצון חשוב. כנוגד חמצון חזק, הוא יכול ביעילות לחסל רדיקלים חופשיים של חמצן, לעכב את התחלת מפל האפופטוזיס ולהפחית את פגיעת איסכמיה-פרפוזיה חוזרת של תאים ואיברים. בנוסף, התוצאות של שלוש קבוצות טיפול מצביעות על כך ש-Cistanche deserticola עשוי להיות טוב יותר מאשר ויטמין C בטיפול בפציעה של איסכמיה בכליות הנגרמת על ידי פעילות גופנית; השילוב של השניים עשוי להועיל יותר להגנה על הכליות מפני פציעת איסכמיה-פרפוזיה חוזרת.
לסיכום, אימון שחייה בעומס כבד גרם לכליותפציעת איסכמיה-פרפוזיה חוזרתבחולדות.Cistanche deserticolaוויטמין C יש ברורהשפעות הגנה על פגיעת איסכמיה-פרפוזיה בכליות,אשר עשוי להיות על ידישיפור פעילות הסופראוקסיד דיסמוטאז,ניקוי רדיקלים חופשיים,הפחתת חמצון שומנים בדם, ושיפור תפקוד הכליות. מבחינת ההשפעה המרפאת, השילוב של השניים עדיף על השניים לבדו, ו-Cistanche deserticola עדיף על ויטמין C, אך ייתכן שזה קשור גם למינון של השניים ביישום. יש לחקור עוד את הקשר בין מינון להשפעה מרפאת.
