תגובות חיסוניות להשתלה דו-עינית רציפה של תאי אבות רשתית אלוגניים לחלל הזגוגית בעכברים

תַקצִיר:

השתלה תוך-זוויתית של תאי אבות רשתית אלוגניים (RPC) טומנת בחובה הבטחה כטיפול לניוון רשתית מסנוור. עבודה קודמת הראתה כי אבות עצביים נסבלים היטב כשתלים לאחר זריקות בודדות; עם זאת, אספקה ​​רציפה של תאים אלוגניים מעלה את הסיכון הפוטנציאלי לרגישות מארח עם דחייה חיסונית לאחר מכן של השתלים. המחקר הנוכחי נועד להעריך האם תגובה חיסונית תושרה על ידי השתלות תוך-זגוגיות חוזרות ונשנות של RPCs אלוגניים תוך שימוש במודל החיות של העכבר. הזרקנו תאי אבות רשתית עכברים (gmRPCs), שמקורם בתורמים עם רקע גנטי C57BL/6, לעכברים מקבלי BALB/c על מנת לספק נתוני בטיחות לגבי מה שניתן לצפות לאחר טיפול חוזר בחולים עם מוצר תא אנושי אלוגני. . התגובות החיסוניות ל-gmRPCs היו מתונות, והורכבו מתאי T, תאי B, נויטרופילים ותאי הורגים טבעיים, כאשר מקרופאגים שולטים בבירור. בעלי חיים שטופלו במינונים חוזרים של gmRPCs לא הראו עדות לרגישות, וגם לא היה הרס בתיווך חיסוני של השתלים. למרות היעדר טיפולים מדכאים חיסוניים, שתלי gmRPC אלוגניים שרדו לאחר מינון חוזר, ובכך סיפקו תמיכה לתצפית המוקדמת כי הזרקה חוזרת של RPCs אלוגניים לחלל הזגוגית נסבלת בחולים עם רטיניטיס פיגמנטוזה.

מערכת חיסון מגבירה צמח cistanche

לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche Enhance Immunity

【בקש עוד】 דוא"ל:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

מילות מפתח: תאי גזע; סובלנות חיסונית; פריבילגיה חיסונית; דחיית שתל; הזרקה תוך-זגוגית

1. הקדמה

רטיניטיס פיגמנטוזה (RP) מקיפה סוג של ניוון מוט-קונוס גנטי ומביאה לליקוי ראייה מתקדם ובסופו של דבר לעיוורון. ברוב המוחלט של המקרים, אין אמצעים טיפוליים מוכחים זמינים לשימור או לשיקום הראייה; עם זאת, אסטרטגיה אחת לטיפול בצורך רפואי שאינו מסופק זה היא השתלת תאי גזע. קבוצת המחקר שלנו חקרה הזרקה תוך-זגוגית של תאי אבות רשתית תרבותיים (RPC) כדרך להתערב ב-RP במטרה טיפולית לייצב את ההתקדמות או אולי להפוך את מהלך המחלה. ניתן להפיק RPGs מרשתית לא בוגרת באמצעות תרומת רקמה או, לאחרונה, משורות תאים פלוריפוטנטיות. מחקרים במודלים של בעלי חיים הראו שתאים אלו מסוגלים להציל קולטנים מהתנוונות בעקבות הזרקה לעין וגם מסוגלים להתמיין לקולטני פוט בעין המארחת. ישנן עדויות מסוימות ממחקרים בבעלי חיים לכך ש-hRPCs שהוזרקו יכולים להפוך לקולטני פוטו פונקציונליים ומשולבים ובכך עלולים לייצב את הרשתית על ידי החלפה ישירה של תאים גוססים. לפיכך, hRPCs המוזרקים עשויים לטפל ב-RP הן בצורה נוירוטרופית והן באמצעות מנגנון החלפת תאים. כך או כך, גישה מבוססת תאים זו מציעה אסטרטגיה רציונלית לטיפול בחולים הסובלים מ-RP ו, פוטנציאלית, ממחלות רשתית אחרות.

תכונה חיובית נוספת של RPCs, ואולי אבות עצביים באופן כללי, היא הסובלנות היחסית הניתנת לתאים אלה לאחר השתלה כשתלים, במיוחד כאשר הם מועברים למקום המציג פריבילגיה חיסונית כגון הרשתית [1,2]. עם זאת, סקירות אחרונות של ניסויים קליניים שנערכו בתחום הרפואה הרגנרטיבית ממשיכות לדווח על אתגרים נרחבים ומשמעותיים הקשורים לדלקת ודחייה חיסונית [3,4], כולל התערבויות המכוונות לעין כגון טיפולים גנים ברשתית [5], כמו וכן חלק מהטיפולים התאיים אך לא כולם [6]. למרות שהוא סוג תא מקומי, תא הפיגמנט האפיתל ברשתית (RPE) אינו פטור מבעיות דחייה [7-9]; לכן, דיכוי חיסוני של נמענים הוא פרקטיקה מקובלת כיום [10,11]. לעומת זאת, נראה כי RPCs אנושיים נסבלים בצורה יוצאת דופן כאלושתלים [6,12-16], אם כי זה לא מתרחב לשימוש שלהם כשתלים קסנוגרטים, שבהם נדרש דיכוי חיסוני [17]. הבסיס להישרדות מתמשכת של RPCs אלוגניים בעין עשוי להיות כרוך במספר גורמים הקשורים לתאים המשמשים ולאתר הנמען [1,8,18,19]. בעבודה קודמת באמצעות ציטומטריית זרימה, הראינו כי אבות עצבים אנושיים, הן שמקורן במוח והן מהרשתית, מבטאים אנטיגנים מסוג I, אך לא מסוג II, אנטיגנים היסטוריים (MHC) [20,21]. המנגנון הקלאסי של דחיית השתל כרוך בזיהוי לא ספציפי של מולקולות MHC זרות מסוג II על ידי לימפוציטים מארח CD4+ [20-25]. בדרך זו, היעדר מולקולות מסוג II עשוי לאפשר לתאי אבות מושתלים להתחמק מדחייה חיסונית המתווכת באמצעות מנגנון זה. עם זאת, הסטטוס "חסוני חסוי" לכאורה של hRPCs המוזרקים תוך-זגוגית אינו בהכרח מוחלט. בעוד שאבות מערכת העצבים המרכזית של עכברים (CNS) אינם מבטאים מולקולות MHC מסוג Class I או Class II בשלב הבסיס ומפגינים הרשאה חיסונית לכאורה כשתלים [1,2,20], תאים אלה יכולים לעבור דחייה חיסונית בנסיבות מסוימות. מחקרים הראו שניתן להשרות אנטיגנים של MHC באמצעות גירוי של אבות CNS עם אינטרפרון-גמא (IFN) [1,26]. אבות CNS יכולים להידחות בעקבות רגישות של מארח שהושתל בעבר. לכן, תאי אבות של מערכת העצבים המרכזית (כולל RPCs) אכן מבטאים אלואנטגנים שמתגלים על ידי מערכת החיסון המארחת. יחד, זה מרמז שהמעמד החיסוני החיסוני של תאי אבות מושתלים הוא זמני ונתון לאפנון, למשל, על ידי ציטוקינים הנמצאים במיקרו-סביבה המקומית, ואשר יכולים לעבור שינוי במהלך ניוונות כגון RP. מכל הסיבות הללו, קשה לחזות את התגובה החיסונית לזריקות RPC מרובות תוך-זגוגיות ויש לבחון אותה באופן ספציפי.

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

אם טיפול RPC יתברר כמוצלח קלינית ב-RP, יהיו תמריצים חזקים לטיפול בשתי העיניים במחלה מסנוורת דו-צדדית זו. מטעמי בטיחות לכל הפחות, טיפולים משקפיים יבוצעו בדרך כלל ברצף, עם זמן פיגור משמעותי בין שתי ההזרקות. יש לציין, מסירה רציפה זו של תאים אלוגניים עלולה לגרום לרגישות של המארח בתגובה לזריקה הראשונה, ועלולה לעורר דחייה חיסונית בתגובה לזריקה השנייה. זה עלול לגרום לאובדן השתלים בשתי העיניים. דיווחים קודמים שבדקו מינון תת-רשתי בודד עם hRPCs ב-RP [27] או ביצוע מחדש עם אבות עצביים אנושיים בבעלי חיים [28,29] שילבו דיכוי חיסוני. לכן, המחקר הבא תוכנן כחקירה תרגום של RPCs של עכברים כשתלים אלו ברצף בזן עכבר בעל יכולת חיסונית עם רקע גנטי שונה. למרות שלא כללה מוצרי RPC אנושיים, עבודה זו בוצעה כחלק ממחקרים המאפשרים IND במטרה לספק נתונים על בעלי חיים המתייחסים לבטיחות, כלומר, האם דיכוי חיסוני יהיה הכרחי עבור מטופלים המקבלים טיפולים חוזרים ונשנים של שתל RPC בניסויים הרשומים ב-FDA.

2. תוצאות

כדי לחקור את ההשלכות האימונולוגיות של הזרקת RPC דו-צדדית בעכברים אלוגניים, הוזרקו gmRPCs (רקע גנטי C57BL/6) לעין אחת של מקבלי BALB/c ומנה שנייה של RPC הוזרק לעין השנייה כעבור שבועיים. מרווח הזמן של 2-שבוע נבחר להיות מספיק כדי לאפשר לשתל הראשון לעורר תגובות חיסוניות מולדות וסתגלניות כאחד. אף אחת מחיות הניסוי לא קיבלה שום טיפול תרופתי מדכא חיסון, כך שניתן היה לצפות בתגובות החיסון הפיזיולוגיות הטבעיות.

2.1.תצפית קלינית ובדיקת עיניים לא גילו חריגות

המשקלים של חיות ניסוי נמדדו בזמן כל הזרקת gmRPC. כל חיות הניסוי הראו עלייה במשקל בין ההזרקה הראשונה והשנייה, בהתאם לבריאות הכללית. בעלי חיים שהופסקו ביום 14 וביום 28 ± 1 לאחר הזרקת gmRPC השנייה נבדקו דרך המיקרוסקופ הכירורגי. שני המקטעים הקדמיים והאחוריים של רוב העיניים שנבדקו נחשבו "בגבולות הנורמליים" (WNL). לא היו סימנים של דלקת או חריגות גלויות אחרות בקבוצות לא מטופלות, שטופלו בדמה ו-gmRPC, מה שמצביע על כך שהזרקת gmRPC תוך-זגוגית לא איפשרה תגובות דלקתיות או נזק לרקמות פיזי שניתן לזהות בשיטה זו. צבירי תאים הכוללים את השתל נראו בזגוגית גם ביום 14 וגם ביום 28 ± 1 לאחר הזרקת gmRPC השנייה (איור 1). הזרקה חוזרת של gmRPCs לא גרמה לשינויים ניכרים בגודל צבירי התאים, בהתאם להישרדות מתמשכת של תאי תורם. פתולוגיה גסה הוערכה גם בנקודת הסיום הסופית ולא נרשמו גלגלי עיניים מוגדלים (מעיד על היווצרות גידול) או חריגות אחרות.

איור 1. gmRPCs מושתלים מומחשים in vivo באמצעות צילום פונדוס דרך מיקרוסקופ כירורגי (כל=עין שמאל, מערכת הפעלה). (א, ב), חיות שטופלו בדמה (דמה/דמה, S/S); (C, D), חיות ביקורת עם עין ימין שטופלה בדמה ואחריה עין שמאל שטופלה ב-gmRPCs (דמה/תא, S/C), ובעלי חיים עם שתי העיניים שטופלו ברצף עם gmRPCs (תא/תא, C/C) נצפה והצטלם דרך המיקרוסקופ הכירורגי. הפאנל העליון (A, C, E) מציג תמונות של מערכת ההפעלה שצולמו ביום 14 לאחר ההזרקה השנייה; הלוח התחתון (B, D, F) מציג תמונות של מערכת ההפעלה שצולמו ביום 28 לאחר ההזרקה השנייה. השתלים אלו נראו כגושי תאים בצבע חיוור (חצים) הנראים בזגוגית של עיניים שמאליות שהוזרקו לתאים (S/C, C/C) בשתי נקודות הזמן (יום 14: (C, D); ויום 28: ( ה, ו)). מלבד השתלים, לא נראתה דלקת ברורה או חריגה נוספת במקטעים הקדמיים והאחוריים, כפי שנראה בצורה צירית בצורה זו.

2.2. תיוג אימונופלואורסצנטי הראה תאי חיסון בזגוגית

תיוג אימונופלורסצנטי עבור חמישה סוגי תאי חיסון עיקריים (מקרופאגים, נויטרופילים, תאי הורגים טבעיים, תאי T ותאי B) בוצע בחתכי העין וחשף חדירת תאי חיסון חיוביים לעין בעקבות הזרקת gmRPC (איור 2A-F). תא T (CD3), תא B (CD45R), נויטרופילים (Ly-6G) ותאי הורגים טבעיים (CD49b) הפגינו נוכחות מוגבלת בעיניים שהוזרקו עם gmRPCs, בעוד מקרופאגים מופעלים (Iba-1 ) היו תאי החיסון העיקריים שהגיבו להשתלות תוך-זגוגיות. רקמות דומות מבעלי חיים לא מטופלים ומטופלים בדמה לא הראו תאי חיסון בחתכים עיניים, מה שמצביע על כך שחדירת תאי החיסון שנראתה הייתה תגובה להשתלות gmRPC. בהתאם לתצפית זו, תאי החיסון אותרו באזור המקיף את השתלי gmRPC או בתוך אשכולות ה-gmRPC עצמם.

איור 2. סימון אימונו של תאי חיסון שחדרו לפי קבוצת טיפול. תמונות אימונופלואורסצנטיות של (A) קטעי בקרה (נוגדן משני בלבד), (B) אנטי-איבא-1 (סמן מקרופאג פעיל וסמן מיקרוגליה), (C) אנטי-Ly-6G (סמן נויטרופילים), (ד) אנטי-CD49b (סמן תא רוצח טבעי), (E) נוגדנים אנטי-CD3 (סמן תאי T), ו-(F) אנטי-CD45R (סמן תאי B) מוצגים באיור. האותות האדומים המוגבלים שקיימים מצביעים על סימון נוגדנים חיובי עבור סמני לויקוציטים, אותות ירוקים מציינים את שתלי gmRPC ואותות כחולים מצביעים על תיוג גרעיני DAPI. צהוב הוא חפיפה לא ספציפית של אותות, הברורה ביותר במקטעים החיצוניים של קולטן הפוטו שמפגינים אוטופלואורסצנטי. קבוצות טיפול: לא מטופלות (UT), שתי העיניים לא מטופלות; S/S, שתי העיניים מטופלות בדמה (ברצף) עם הרכב; S/C, עין ימין מוזרקת עם רכב ואחריה עין שמאל עם 50,000 gmRPCs ו; C/C, לשתי העיניים הוזרקו 50,000 gmRPCs (ברצף) לפי לוח זמנים בסעיף 4

מספרי השיא של כל תא חיסון בעין השתנו לפי סוג התא (איור 3A-E). לעומת זאת, ANOVA דו-כיווני לא גילה הבדלים בחדירת תאי מערכת החיסון בהשוואה בין בעלי חיים שקיבלו זריקות gmRPC בודדות (דמה/תאים) לאלו שקיבלו זריקות דו-צדדיות (תאים/תאים). זה היה המקרה עבור חדירת מקרופאגים (צביעה נגד Iba-1) (איור 3A), נויטרופילים (צביעה נגד Ly-6G) (איור 3B), תאי הורג טבעיים (צביעת CD49b) ( איור 3C), תאי T (צביעת CD3) (איור 3D), ותאי B (צביעה CD45R) (איור 3E).

2.3. ELISPOT לא הראה תגובות לריקול אנטיגן

ELISPOT היא דרך לבחון IFN ספציפי לאנטיגן המייצר הפעלת תאי T. טיפול בפורבול 12-myristat 13-אצטט (PMA) היה בקרה חיובית המחקה את השליח השני, DAG, כדי להפעיל את מסלול הקולטן של תאי T, ובתמורה, לגרום להפעלת תאי T. באיור 4A-D, קבוצות שטופלו ב-PMA הראו ספירת נקודות IFN גבוהה בהרבה בהשוואה לקבוצות ביקורת עם תאים מגיבים בלבד (כלומר, לימפוציטים מ-CLNs, טחולוציטים מטחול). כאשר תאי המגיבים תורבו יחד עם ספלנוציטים C57BL/6 (B6 SPL), הדגימות של היום 14 היו דומות לקבוצות התאים המגיבים בלבד, עם ספירת נקודות IFN גבוהה יותר בלבד, מה שמצביע על היעדר הפעלה של תאי T (איור 4A, ב).

איור 3. כימות של חדירת תאי חיסון בעקבות השתלת gmRPC. תאים חיסוניים שהסתננו הוצגו כאותות ניאון אדומים בתוך שדה ההדמיה לאחר הזרקת gmRPC עבור כל מצב ניסיוני, נספרו באמצעות ImageJ, ושורטטו בגרפים. נתונים מ-Iba-1 (סמן מקרופאג מופעל וסמן מיקרוגליה) (A), אנטי-Ly-6G (סמן נויטרופילים) (B), אנטי-CD49b (סמן תאי רוצח טבעי) (C), נוגדנים אנטי-CD3 (סמן תאי T) (D), ואנטי CD45R (סמן תאי B) (E) הוצגו באיור. בדיקות ANOVA דו-כיווניות שימשו לבדיקת מובהקות בין קבוצות הדמה/תא ותאים/תאים; ערכי p היו: (A) p < {{10}}.4492, (B) p < 0.9376, (C) p < 0.119{{18 }}, (D) p < 0.6411, ו- (E) p < 0.7201 (אף אחד לא היה מובהק).

בעת בדיקת תאי תורמים אלוגניים באמצעות בדיקה זו, לתאי המגיבים מהחיות שהוזרקו תוך-צפקית עם gmRPCs (קבוצת IP) לא היו תגובות זכירת אנטיגן מכיוון שהדגימות לא הראו יותר הפעלה של תאי T על ידי ספירת נקודות IFN בהשוואה לחיות הדמה שמעולם לא נחשפו ל-gmRPCs (דמה/דמה). גם החיות שהוזרקו תוך-זגוגיות עם ה-gmRPCs, לא פעם אחת (דמה/תא) או שוב ושוב (תא/תא) לא הראו תגובות לזכרון אנטיגן כלשהן. במקרה אחד, תגובות למינון חוזר של gmRPC נראו מושתקות יותר (איור 4B). יחד, תוצאות אלו הצביעו על כך ש-gmRPCs מפגינים אנטיגניות נמוכה מאוד. שימו לב ש-C57BL/6 splenocytes הותאמו לרקע הגנטי של ה-gmRPCs. באופן בלתי צפוי, תאי הממריצים האלטרנטיביים, gmRPCs, העלו את ספירת נקודות ה-IFN בכל קבוצות הניסוי בהשוואה לקבוצות הביקורת השליליות (איור 4A-D). הסבר אפשרי עשוי להיות ה-gmRPCs שגורמים לרקע גבוה בבדיקה זו. חשוב לציין, לא היה הבדל בין קבוצות הזרקת gmRPC בודדות, שטופלו בדמה, והזרקת gmRPC חוזרות ונשנות, מה ששוב הצביע על היעדר תגובות היזכרות של אנטיגן.

איור 4. כימות ELISPOT לאחר השתלת gmRPC. מבחני ELISPOT נקבעו כקבוצות הבאות: תאי בקרה, מגיבים בלבד (לימפוציטים או ספלנוציטים המכילים תאי T מבודדים מבלוטות לימפה צוואריות (CLNs) או טחולים (SPL) של חיות הניסוי; PMA, תאי מגיב שטופלו בפורבול {{1} }myristat 13-אצטט (PMA) ו-Ca ionophore; B6 SPL, תאי מגיב מעורבים עם ספלנוציטים מבודדים מחיות C57BL/6; gmRPCs, אותם תאי מגיב מעורבים עם gmRPCs. (A), תאי המגיבים היו הספלנוציטים מחיות הניסוי שהוקרבו ביום 14 לאחר הזרקת gmRPCs השנייה. (ב) תאי המגיבים היו הלימפוציטים מה-CLNs של חיות הניסוי שהוקרבו ביום 14 לאחר הזרקת gmRPCs השנייה. (ג) התאים המגיבים. היו הספלנוציטים מחיות הניסוי שהוקרבו ביום 29 לאחר הזרקת gmRPCs השנייה. (ד) התאים המגיבים היו הלימפוציטים מה-CLNs של חיות הניסוי שהוקרבו ביום 29 לאחר הזרקת gmRPCs השנייה. בדיקות ANOVA דו-כיווניות שימשו לבדיקת מובהקות (*) בין קבוצות הדמה/תא ותאים/תאים; ערכי p היו: (A) p < 0.5332, (B) p < 0.0001 (משמעותי), (C) p < 0.0207 ( משמעותי), ו-(D) p < 0.3355.

3. דיון 

היה עניין רב בטכנולוגיית תאי גזע כאמצעי לטיפול במחלות ניווניות ברשתית והקבוצה שלנו בחנה את השימוש ב-hRPCs אלוגניים ב-RP. כדי לאסוף נתונים המתייחסים להשלכות חיסוניות אפשריות כאשר יותר ממנה אחת של מוצר RPC אנושי אלוגני ניתנת באמצעות הזרקה תוך-זגוגית, ביצענו את מחקר החיות הנוכחי באמצעות gmRPCs מרקע C57BL/6 כשתלים ועכברי BALB/c כמארחים. הרקע הגנטי השונה הללו שימש למודל טיפול רציף עם hRPCs אלוגניים ולספק נתוני בטיחות ראשוניים לפני בדיקה בבני אדם.

כדי להעריך באופן מלא את התגובות, חיות המארחות לא קיבלו שום טיפול מדכא חיסון. השווינו את התגובות החיסוניות שנוצרות על ידי הזרקת gmRPC בודדת למינון דו-צדדי רציף בהתאם ללוח הזריקות המתואר. בדיקות עיניים לא גילו דלקת או הבדלים בולטים אחרים בין קבוצות החיות שקיבלו מנה אחת של gmRPCs או 2 מנות של gmRPCs, מה שמצביע על כך שמקבלים לא היו רגישים בטיפולי gmRPC הראשוניים, או שהרגישות הייתה עדינה. תוצאות סימון אימונו גילו שכל חמשת סוגי תאי החיסון שנבדקו, כלומר תאי T (CD3), תאי B (CD45R), מקרופאגים (Iba-1), נויטרופילים (Ly-6G) ותאי הורגים טבעיים ( CD49b), חדר לתוך העין וכיוון להשתלי RPC לאחר ההשתלה. עם זאת, הסתננות זו הייתה מתונה יחסית, ולמרות שסוגי תאים אחרים היו ניתנים לזיהוי, היא הורכבה בעיקר מקרופאגים חיוביים של Iba-1. מספר מוגבל מאוד של תאי T, תאי B, נויטרופילים ותאי הורגים טבעיים היו נוכחים. באופן מעניין, ההישרדות שהודגמה על ידי השתלות RPC בודדות וחוזרות הייתה שווה ערך, ללא אובדן השתלים בכל מקרה, למרות נוכחותם של מקרופאגים. בסך הכל, זה מצביע על כך שגם התגובות החיסוניות המולדות והן הסתגלותיות ל-RPC השונות גנטית היו מתונות, למרות שהדיכוי החיסוני לא הופעל. יתרה מזאת, תוצאות בדיקת ELISPOT לא הראו תגובות זכירת אנטיגן בקבוצות שטופלו ב-gmRPC, בהתאם לטענה שתאי T אינם ממלאים תפקיד חשוב בדחייה של שתלי gmRPC מעכברי C57BL/6. שוב, נצפתה חדירת מקרופאגים של שתלי gmRPC, אם כי זה לא היה קשור להרס משמעותי של השתלים מהסוג הקשור לדחייה חיסונית קלאסית [22-24].

יתרונות cistanche לגברים - מחזקים את המערכת החיסונית

יחד, תצפיות אלו חושפות מצב השונה בבירור ממנגנוני דחיית השתלות אלוגניות בתיווך תאי T ו-B המוכרים ברקמות אחרות. מספר גורמים יכולים לתרום למצב זה. מצד אחד, יש את התפיסה של העין כאתר "חסוני חסוי", למרות שהמידה של הזגוגית חולקת מאפיינים כאלה עם הקרנית והרשתית פחות נחקרת ואולי יותר שנויה במחלוקת. מצד שני, נראה שה-RPCs עצמם מפגינים אימונוגניות מופחתת כשתלים, בהשוואה לסוגי תאים שנחקרו בתדירות גבוהה יותר. כפי שהראינו בעבר, RPCs של עכברים חסרים ביטוי בסיס של אנטיגנים MHC Class I ו- Class II, אם כי אלה ניתנים להשראה באמצעות גירוי ציטוקינים. היעדר זה של ביטוי MHC עשוי לתרום להישרדותם של תאים אלה לאחר ההשתלה. עם זאת, נוכחותם של תאי חיסון בשתלים תומכת בתפיסה שסבילות השתלים בסביבה זו אינה פסיבית ונובעת מתופעה פעילה של מערכת החיסון. כאן, יש להדגיש כי אותו סוג של חדירת תאי חיסון כבר היה קיים לאחר זריקות בודדות ולא הוחמר על ידי מינון חוזר, ובכך מדגיש את מסקנתנו שחדירת תאי חיסון של השתלים, במיוחד על ידי מקרופאגים, לא הייתה תוצאה של קודם לכן. רגישות מארח. בתוך הפרמטרים של ניסוי זה, נראה כי מינון חוזר לא מפחית את הכדאיות הכוללת של השתל, דבר שעולה בקנה אחד עם האפשרות של יעילות מתמשכת בהקשרים טיפוליים. פרמטרים חלופיים, כגון מרווחי זמן שונים בין הזרקות, עשויים להגביר או להפחית את פעילות תאי החיסון במידה שתהיה רלוונטית ליישום קליני. לא ברור אם המרכיבים התאיים של הסתננות, כולל דומיננטיות של מקרופאגים, יחולו גם על בני אדם. יתר על כן, ייתכן שהישרדות של שתל אלו לא תהיה תלויה ברשתית תקינה עם מחסום בריא של דם-רשתית. מקבלי BALB/c המשמשים כאן הם לבקנים ורגישים לנזק קל [30]. יתר על כן, הישרדות מתמשכת נראתה שוב ושוב בעבודה קודמת עם מודלים שונים של ניוון רשתית (למשל, [31]).

בהשוואה להישרדות השתל, הכדאיות של תאים בתוך השתלים מציגה מצב מורכב יותר. קיים אובדן ידוע של תאי אבות של מערכת העצבים המרכזית המתרחשת במהירות לאחר ההשתלה, ככל הנראה בשל מספר גורמים שעלולים לרבות נסיגה פתאומית של גורם גדילה. לאחר שהתיישבו בתוך העין, התאים המפורקים מתלכדים לכדי אגרגטים דמויי כדור, שמרכזיהם מספקים מיקרו-סביבה לא אופטימלית לצמיחה, אולי בגלל היעדר כלי דם ואתגרים לדיפוזיה של חומרים מזינים. הטרופיזם הנראה של מקרופאגים עבור שתלי RPC יכול להיות תגובה לא ספציפית לנוכחותם של תאים לא-קיימאים אלו בחלק הפנימי של השתלים, כאשר המקרופאגים מתפקדים בתפקידם כסורקים של פסולת תאים. לחלופין, RPCs קיימא לחלוטין עשויים למשוך באופן פעיל את המקרופאגים, למשל, באמצעות ביטוי של ציטוקינים אטרקטיביים כימותרפיות, ולאחר מכן התאים המארחים יפגשו באופן משני את הפסולת מתאי תורם שאינם ברי קיימא. חשוב לציין, נראה כי למידת חדירת המקרופאגים הנראית במסגרות הספציפיות הללו אין השלכות שליליות על השתל או על הרשתית המארח, בניגוד לתגובות להשתלות תאיים באתרים מועדפים שאינם חיסוניים [4]. לבסוף, ראוי להזכיר שלתוצאות המדווחות כאן, למרות שהן מוגבלות למודל עכברי, עשויות להיות השלכות על עבודה בבני אדם. בניגוד לעכבר, אנו יודעים ש-RPC אנושיים מתורבתים כן מבטאים רמות חזקות של אנטיגנים מסוג MHC Class I בקו הבסיס; לכן, ההשוואה היא אמנם מהוססת. עם זאת, מעניין לציין שבדיקה קלינית של השתלי hRPC תת-רשתית על ידי קבוצה בסין [13], כמו גם השתלת hRPC תוך-זגוגית על ידי הקבוצה שלנו, הראתה לאחר מכן הישרדות מתמשכת של השתלים האלו בחולים שאינם מדוכאים חיסונית עם RP (JC -01, [32], נתונים שלא פורסמו). זה היה גם המקרה בעקבות הזרקה רציפה של שתי העיניים (JC-01 Extension, נתונים שלא פורסמו), בדומה לעבודה המוצגת כאן. בנוסף, הישרדות השתל נראתה במחקר המשך על JC-02 [33], שבו ניתנו מנות חוזרות עוקבות לאותה עין [34]. יחד, ממצאים אלה מצביעים על כך שדיכוי חיסוני לא תמיד נחוץ במסגרת השתלת אבות עצבית, במיוחד לעין, אם כי עדיין יש להבהיר את הגבולות של תופעה זו ומנגנוני הוויסות הבסיסיים.

4. חומרים ושיטות

4.1. תרבית תאים

gmRPCs שאופיינו בעבר [31] נבחרו כתאי תורם עבור מחקר אלוגני זה. במקור, gmRPCs בודדו מעכברי C57BL/6 מהונדסים מסוג GFP שעברו שינוי גנטי כדי לבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) משופר. הביטוי של חלבון GFP ב-gmRPCs היה מעניין בכך שהוא מאפשר הדמיה של השתלים לאחר הזרקה ללא צורך בתיוג נוסף. עבור המחקר הנוכחי, gmRPCs תופחו ב-DMEM/F12 מתקדם בתוספת N-2 (1:100, Life Technology, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב), Glutamax-1 (1:100, Life Technology , קרלסבאד, קליפורניה, ארה"ב), ו-EGF (20 ננוגרם/מ"ל, רקומביננטי, Human, Life Technologies, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב) והודגרו ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2. התאים נשמרו בהשעיה מעורבת/מושבות מחוברות רופפות בצלוחיות של תרבית רקמה לא מצופה. התאים הועברו באמצעות טריפסיניזציה עם TrypLE Select CTS (Life Technologies, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב) מדולל 1:5 ב-PBS למשך דקה אחת ונוטרל פי 10 מנפח הטריפסין שנוסף. תערובת התאים-טריפסין עברה צנטריפוגה ב-140 גרם למשך 2 דקות בטמפרטורת החדר, הסופרנטנט הוסר וכדורית התא הושעתה מחדש במדיה טרייה לפני זריעה לצלוחיות של תרבית רקמה בריכוז הרצוי. ריכוז תאים וכדאיות נקבעו באמצעות צביעה כחולה טריפן; הספירות בוצעו על ידי הרוזנת (Life Technologies, Carlsbad, CA, ארה"ב) והמוציטומטר.

עבור זריקות תוך-זגוגיות, גלולת התא הושעתה מחדש ב-50K תאים/µL ב-BSS PLUS®. ריכוז תאים וכדאיות הוערכו לפני ואחרי הזרקות. המינון שהוזרק היה 50,000 תאים לעין לכל הזרקה. המינון והרכב נבחרו על סמך המחקרים הקודמים שלנו.

4.2. חיות ניסוי

מטרת המחקר הנוכחי הייתה לחקור את התגובות החיסוניות האלוגניות הפוטנציאליות הנגרמות באמצעות הזרקה תוך-זגוגית חוזרת של RPCs אלוגניים. החיות שקיבלו היו עכברי BALB/c, אשר שונים גנטית מעכברי C57BL/6 שמהם בודדו ה-gmRPCs. השימוש של לפחות שלושה בעלי חיים לכל קבוצת ניסוי מטופלת עבור כל נקודת זמן נחשב כדרוש כדי לאפשר הערכת מובהקות סטטיסטית בין קבוצות ביחס למשתני תוצאה ואובדן פוטנציאלי של בעלי חיים במהלך תקופת הניסוי. יתר על כן, בהתחשב בגורמים הנוספים הרבים שעשויים להשפיע על תוצאת הניסוי, כגון הליך הזרקת תאים לא מוצלח או שחיקה פוטנציאלית כתוצאה מלחימה בבעלי חיים, הליכי הזרקה בוצעו על חמישה בעלי חיים בכל קבוצה כדי להבטיח עוד יותר עמידה במספרים המינימליים הנדרשים לניתוח סטטיסטי.

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

טבלה 1 מציגה את ארבע קבוצות החיות שהוכנו עבור כל אחת מארבע נקודות הזמן (4, 7, 14 ו-28 ימים) שבהן יבוצעו הערכות של היסטופתולוגיה, כולל אימונופלואורסצנטי. שתי קבוצות נוספות של בעלי חיים שהוזרקו עם 10ˆ6 gmRPCs תוך צפק הוכנו כביקורות חיוביות עבור כל אחת משתי נקודות הזמן להערכת ELISPOT (14 ו-28 ימים). טבלה 2 מסכמת את ההערכות המתוכננות לכל קבוצה.

טבלה 1. קבוצות ניסוי.

טבלה 2. נקודות זמן להערכה.

4.3. הזרקה תוך-ויטריאלית

ה-gmRPCs ניתנו באמצעות הזרקה תוך-זגוגית. לאחר ההרדמה, Mydriacyl (תמיסת עיניים של 1% Tropicamide) ופנילפרין (תמיסת עיניים 2.5%) הוחלו על שתי העיניים של החיה להזרקה. כאשר הושגה מידריאזיס נאותה, החיה רוסקה באופן ידני וראשה של החיה סובב כדי ליישר את ציר העין של העין להזרקה עם האופטיקה של המיקרוסקופ הניתוחי כדי להמחיש את המקטע האחורי של העין (כלומר, הזגוגית והרשתית). . העין הוצעה בעדינות ידנית באמצעות לחץ על העפעפיים ומחט 31G על מזרק אינסולין שימשה כדי לנקב בעדינות את הסקלרה הסמוכה ללימבוס ברביע האף התחתון. קצה מיקרו-פיפטה מזכוכית מלוטשת המכיל תאי תורם (או בקרת רכב) הועבר דרך החתך לתוך חלל הזגוגית בהדמיה ישירה. הקפידו לא לשבש את שלמות העדשה או מבני המקטע האחורי. התאים או כלי הרכב לבדם הוזרקו בנפח של 1 מיקרוליטר. לאחר מספר רגעים של הפסקה כדי לאפשר איזון של הלחץ התוך עיני, קצה הפיפטה הוסר בהדרגה מהעין, הכל בהדמיה ישירה. כל דימום תוך עיני צוין, יחד עם המיקום. לאחר ההזרקה, החיה הוכנסה לכלוב נקי מרופד ברפידה חד פעמית טריה מכוונת עם הצד הסופג כלפי מעלה/פלסטיק כלפי מטה, כדי להתאושש. ההחלמה הוקלה באמצעות כרית חימום ואומתה על ידי היכולת של בעל החיים לנוע. לאחר ההתעוררות, החיה הועברה לכלוב לאחר הניתוח עם גישה חופשית למים. בעלי חיים היו במעקב חזותי על בסיס יומי לאחר הניתוח. נצפו סימנים מזעריים או ללא סימנים הקשורים להזרקה תוך עינית.

לאחר ההליך, החיות נצפו על שפשוף העין המנותחת, פרווה מקומטת או עייפות מתמשכת, כל אלה היו עילה להמתת חסד מיידית. היו שני בעלי חיים שהופסקו כתוצאה מפצעים שנגרמו בקרבות. כל שאר החיות הופסקו בנקודות הקצה המתוכננות. המתת חסד בוצעה באמצעות שאיפת CO2.

4.4. בדיקת עיניים

A Leica Ultimate Red Reflex Surgical Microscope was used for ophthalmic examination and photography of experimental mice. Sedation was performed with a Ketamine Hydrochloride/Xylazine Hydrochloride mixture (50–100 mg/mL Ketamine, 5–10 mg/mL Xylazine) administered by intraperitoneal injection. After sedation, topical mydriatics (Tropicamide, Phenylephrine) were applied to the eye(s) to be imaged in 5 min intervals until adequate mydriasis was achieved, as determined via pupil diameter (>2.5 מ"מ) ותגובה לגירוי אור. כפיצוי על אובדן המצמוץ, תמיסת היפרומלוז (Gonak) הונחה מקומית לפי הצורך על שתי העיניים כדי למנוע התייבשות הקרנית. לצורך הליך ההדמיה, בעלי חיים מורדמים הונחו על כרית חימום והוצבו בשכיבה על החזה. בסיום ההליך, היפוך חלקי של ההרדמה הושג עם מתן Atipamezole (0.1-1 מ"ג/ק"ג) בהזרקה תוך צפקית.

4.5. היסטופתולוגיה

התגובות החיסוניות בבעלי חיים שקיבלו שני השתלים עוקבים (אחד בכל עין) הוערכו באמצעות היסטופתולוגיה של שתי העיניים ביום 4, יום 7, יום 14 ויום 28 ± 1 לאחר הזרקת העין השנייה. העכברים שטופלו על פי טבלה 1 הופסקו בהתבסס על לוח הזמנים המצוין בטבלה 2. בעלי חיים הורדמו באמצעות שאיפת פחמן דו חמצני. זלופים לבביים בוצעו בחיות הניסוי עם 2% פרפורמלדהיד (PFA) בתמיסת מלח עם פוספט (PBS). לאחר מכן, כל גלגלי העיניים נאספו והורשו להשרות ב-2% PFA/PBS למשך 48 שעות ב-4 ◦C. גלגלי העין המקובעים עובדו דרך שיפוע סוכרוז (10% סוכרוז ב-PBS למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר, 20% סוכרוז ב-PBS למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר ו-30% סוכרוז ב-PBS ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה) לפני שהוטבעו ב-PBS. מדיה ב-OCT לחיתוך בהקפאה. ניתוחים קריוסיים (10 מיקרומטר) של העיניים נצבעו בהמטוקסילין האריסון ואאוזין (H&E) כדי להמחיש את המיקרואנטומיה של הרשתית ולאתר את תאי התורם שהוזרקו.

עבור הקבוצות שטופלו ב-gmRPC, הוערכו חתכים להקפאה באמצעות אימונופלואורסצנטי עבור תאי GFP+ (תורם). זיהוי סוגי תאי החיסון הספציפיים הקיימים בעיניים בוצע באמצעות תיוג עם נוגדנים ראשוניים ספציפיים עבור הבאים: CD3 (סמן לימפוציטים T) [35], CD45R (סמן לימפוציטים B) [36], איבא-1 (סמן מקרופאג מופעל וסמן מיקרוגליה) [37], Ly-6G (סמן נויטרופילים) [38], ו-CD49b (סמן תאי רוצח טבעי) [39]. ניתוחי קריוס נשטפו ב-PBS שלוש פעמים בטמפרטורת החדר ונחסמו עם 0.03% Triton X-100 ו-10% סרום עיזים רגיל ב-PBS (NGS; Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, ארה"ב) עבור שעה אחת בטמפרטורת החדר. CD3 נגד עכבר עכברוש (דילול 1:100, BD Biosciences, סן חוזה, קליפורניה, ארה"ב), CD45R נגד עכבר חולדות (1:100, BD Biosciences, סן חוזה, קליפורניה, ארה"ב), ארנב נגד עכבר Iba{{ 26}} (דילול 1:400, Wako Chemicals, ריצ'מונד, וירג'יניה, ארה"ב), אנטי עכבר Ly-6G (דילול 1:100, BD Biosciences, סן חוזה, קליפורניה, ארה"ב), ואנטי חולדות -עכבר CD49b (דילול 1:100, BD Biosciences, סן חוזה, קליפורניה, ארה"ב) הוחלו על דגימות והודגרו למשך הלילה ב-4 מעלות. דגימות נשטפו שוב ב-PBS 3 פעמים בטמפרטורת החדר. נוגדנים משניים מצומדים אלקסה-פלואור (אלקסה-קמח עיזים נגד חולדות-568 ועזים נגד ארנבות Alexa-Flour-568, Life Technologies, קרלסבד, קליפורניה, ארה"ב) יושמו על דגימות למשך שעה בטמפרטורת החדר. כל הדגימות נשטפו ב-PBS עוד שלוש פעמים בטמפרטורת החדר. כיסויי כיסוי הותקנו באמצעות DAPI Fluoromount-G (סאות'רן ביוטק, ברמינגהאם, אל, ארה"ב), והשקופיות הושארו לייבוש לילה בטמפרטורת החדר.

4.6. מבחני ELISPOT ו-MLR

תאי זיכרון T ספציפיים ל-RPC נוטרו שבועיים ו-4 שבועות לאחר הנחת השתל הראשון באמצעות בדיקת נקודת אימונוסורבנטית מקושרת אנזים (ELISPOT). קבוצות הניסוי הוקמו כפי שמוצג בטבלאות 1 ו-2 עבור כל נקודת זמן. בדיקת ELISPOT לוכדת חלבונים מופרשים על גבי מיקרו-לוחית ספציפית מצופה נוגדנים וניתן להשתמש בה כדי לקבוע הפעלה של תאי T בזיכרון על ידי זיהוי הפרשת IFN של תאי T. הקריאה הניסיונית היא מספר כתמי ה-IFN על גבי המיקרו-לוח. מספר כתמי ה-IFN הקיימים מעיד על מספר תאי T המופעלים. התדירות של תאי T alloreactive הוערכה על ידי ביצוע תגובה של 48 שעות לויקוציטים מעורבים (MLR) על 96-צלחות Multiscreen-IP (Millipore, Burlington, MA, ארה"ב). תאי מגיבים היו לימפוציטים/ספנוציטים המכילים תאי T שטוהרו מבלוטות לימפה צוואריות (CLNs) וטחול של חיות הניסוי, ותאי ממריצים היו ה-gmRPCs שמקורם בעכברי C57BL/6. מבחני ELISPOT בוצעו על בסיס פרוטוקול סטנדרטי. 96-בכן צלחות Multiscreen-IP הורטבו מראש ב-15 µL של 35% אתנול לבאר בתנאים סטריליים. הצלחות נשטפו עם PBS סטרילי שלוש פעמים לפני ש-100 µL של נוגדן לכידת IFN (clone AN-18, eBioscience, San Diego, CA, USA) מדולל ב-PBS (2 מיקרוגרם/מ"ל) הוכנס לצלחות. הצלחות הודגרו במשך הלילה ב-4 מעלות לפני שמבחני MLR בוצעו על הצלחות. הצלחות מצופות נוגדן לכידת נשטפו שלוש פעמים עם PBS ולאחר מכן נחסמו עם RPMI1640 למשך שעתיים ב-37 מעלות צלזיוס.

כל אחת מלוחות הבדיקה כללה את הבקרות הבאות: בארות ללא תאים, בארות המכילות את התאים ללא גירוי, ובארות המכילות את התאים עם טיפולים של פורבול {{0}}myristat 13-אצטט (PMA) ו- Ca ionophore כבקרות חיוביות. טיפול ב-PMA משמש בקרה חיובית על ידי חיקוי השליח השני, DAG, כדי להפעיל את מסלול הקולטן של תאי T ובתורו לגרום להפעלת תאי T, כאשר יונופור Ca מקל על כניסת יוני סידן לתאים. הצלחות הודגרו במשך 36 שעות ב-37 מעלות צלזיוס לפני תגובת הצבע. הצלחות נשטפו עם PBS המכילים {{10}}.01% Tween 20 שש פעמים ולאחר מכן 100 µL נוגדן זיהוי (שיבוט R64A2, eBioscience, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב), בדילול ב-PBS (0.5 מיקרוגרם/מ"ל) הוחל על כל באר. הצלחות הודגרו ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים נוספות. הצלחות נשטפו שוב עם 0.01% Tween 20 ב-PBS. 100 μL של Streptavidin-AP (דילול 1:1000, Invitrogen) לבאר הוחלו והצלחות הודגרו במשך 45 דקות בטמפרטורת החדר. כל הצלחות נשטפו שוב שלוש פעמים עם 0.01% Tween 20 ב-PBS ו-PBS לבד עוד שלוש פעמים. לבסוף, 100 μL BCIP/NBT (Sigma Aldrich, מינכן, גרמניה) נוספו לכל באר לצביעה. כל הצלחות נשטפו בהרחבה במי ברז ויובשו לפני ניתוח הנתונים.

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

5. מסקנות

מחקר זה מראה כי השתלות דו-עיניות עוקבות של RPCs אלוגניות לחלל הזגוגית אינן מעוררות דחייה חיסונית קלאסית בעכבר. למרות שמוכר שלא ניתן היה לבצע מחקרים היסטולוגיים אלוגניים אלה עם מוצר קליני RPC אנושי, הנתונים נראים תואמים לתוצאות של מחקר בטיחות קליני (jCyte, JC-01E, נתונים לא פורסמו) שבו חולים עם דלקת רשתית פיגמנטוזה קיבלה זריקות דו-צדדיות שאינן בו זמנית ללא טיפולים מדכאים חיסוניים. למרות שקשה להשוות בין שני המחקרים באופן ישיר, ראוי לציין שהתוצאות הכוללות של שניהם הראו דמיון במונחים של הישרדות השתל.

הפניות

1. הורי, ג'; נג, TF; שאטוס, מ.; קלאסן, ח.; Strelein, JW; תאי אבות עצביים צעירים MJ חסרים אימונוגניות ומתנגדים להרס כשתלים. תאי גזע 2003, 21, 405–416. [CrossRef] [PubMed]

2. קלאסן, ח.; שוורץ, PH; זיאיאן, ב.; Nethercott, H.; יאנג, MJ; ברגדותיר, ר.; Tulis, GE; Warfvinge, K.; Narfstrom, K. מבשרי עצבים שבודדו ממוח החתול המתפתח מראים אינטגרציה של הרשתית לאחר השתלה לרשתית של החתול הדיסטרופי. וטרינר. אופתלמול. 2007, 10, 245–253. [CrossRef] [PubMed]

3. Salado-Manzano, C.; פרפינה, יו.; Straccia, M.; מולינה-רואיס, FJ; קוזי, ע.; רוסר, AE; Canals, JM האם התגובה האימונולוגית מהווה צוואר בקבוק לטיפול בתאים במחלות ניווניות? חֲזִית. Cell Neurosci. 2020, 14, 250. [CrossRef]

4. פטרוס-רורר, ש.; רומנו, מ.; Howlett, S.; ג'ונס, JL; לומברדי, ג.; Saeb-Parsy, K. שיקולים ואתגרים אימונולוגיים לטיפולים תאיים רגנרטיביים. Commun. ביול. 2021, 4, 798. [CrossRef]

5. בוכר, ק.; רודריגז-בוקנגרה, E.; דאולטבקוב, ד.; פישר, MD תגובות חיסוניות לטיפול גנטי ברשתית תוך שימוש בוקטורים ויראליים ללא קשורים - השלכות על הצלחת הטיפול ובטיחותם. פרוג. רשתית. Eye Res. 2021, 83, 100915. [CrossRef]

6. סינג, מ.ס.; פארק, SS; אלביני, ת"א; Canto-Soler, MV; קלאסן, ח.; מקלארן, רירי; טקאהאשי, מ.; נגאל, א.; שוורץ, ס"ד; Bharti, K. השתלת תאי גזע ברשתית: איזון בטיחות ופוטנציאל. פרוג. רשתית. Eye Res. 2020, 75, 100779. [CrossRef]

7. קמאו, ה.; מנדאי, מ.; Okamoto, S.; סקאי, נ.; סוגה, א.; סוגיטה, ש.; קריו, י. Takahashi, M. אפיון של גליונות תאי אפיתל פיגמנט פיגמנט ברשתית שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים שמקורם בבני אדם במטרה ליישום קליני. נציג תאי גזע 2014, 2, 205–218. [CrossRef]

8. סוגיטה, ש.; קמאו, ח.; איוואסאקי, י.; Okamoto, S.; השיגוצ'י, ט.; איסקי, ק.; חיישי, נ.; מנדאי, מ.; Takahashi, M. עיכוב הפעלת תאי T על ידי תאי אפיתל פיגמנט ברשתית שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים. תחקור. אופתלמול. Vis. Sci. 2015, 56, 1051–1062. [CrossRef]

9. מקגיל, טי ג'יי; סטודארד, ג'יי; רנר, LM; מסאודי, א.; בהרטי, ק.; מיטאליפוב, ש.; לאואר, א.; ווילסון, DJ; Neuringer, M. Allogeneic iPSC-Derivate RPE Cell Graft Failure בעקבות השתלה לחלל תת הרשתית בפרימטים לא אנושיים. תחקור. אופתלמול. Vis. Sci. 2018, 59, 1374–1383. [CrossRef]

10. סוגיטה, ש.; מנדאי, מ.; קמאו, ח.; Takahashi, M. היבטים אימונולוגיים של השתלת תאי RPE. פרוג. רשתית. Eye Res. 2021, 84, 100950. [CrossRef]

11. Nair, DSR; Thomas, BB אסטרטגיות טיפול מבוססות תאי גזע למחלות ניווניות של הרשתית. Curr. Res. Cell Cell Res. ת'ר. 2022, 17, 214–225. [CrossRef] [PubMed]

12. מרטינס ולסקז, לוס אנג'לס; Ballios, BG הדור הבא של תרופות מולקולריות ותאיות למחלות רשתית תורשתיות. Int. י.מול. Sci. 2021, 22, 11542. [CrossRef]

13. ליו, י.; חן, ש"י; לי,סי; Qu, LH; מנג, XH; וואנג, י.; שו, HW; ליאנג, ZQ; Yin, ZQ בטיחות לטווח ארוך של השתלת תאי אבות רשתית אנושית בחולי רטיניטיס פיגמנטוזה. Res. Cell Cell Res. ת'ר. 2017, 8, 209. [CrossRef] [PubMed]

14. וואנג, י.; טאנג, ז; Gu, P. השתלה מבוססת תא גזע/אב עבור ניוון רשתית: סקירה של ניסויים קליניים. Cell Death Dis. 2020, 11, 793. [CrossRef] [PubMed]

15. גרמנית, OL; Vallese-Maurizi, H.; סוטו, TB; רוטשטיין, נ.פ; פוליטי, LE רשתית תאי גזע, תקוות ומכשולים. World J. Stem Cells 2021, 13, 1446–1479. [CrossRef]

16. קרמלי, פ.; בהטג', ש.; באבאי-אברקי, ש.; הדדי, ח.; אטפי, א; Savoj, S.; סורושזאדה, ש; נג'פיאן, ש.; נאסר אספחני, מ.ח; Klassen, H. אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות לניוון קולטן פוטו: הדרך להשבת הראייה. J. Transl. Med. 2022, 20, 572. [CrossRef]

17. סמו, מ.; המדי, נ.; Stevanato, L.; קרטר, ד.; ברוק, ג'; יאנג, מ.; קופי, פ.; סינדן, י. פאטל, ש.; Vugler, A. יעילות ובטיחות של תאי אבות רשתית אנושיים. תרגום Vis. Sci. טכנול. 2016, 5, 6. [CrossRef]

18. מוצ'יזוקי, מ.; סוגיטה, ש.; Kamoi, K. הומאוסטזיס אימונולוגי של העין. פרוג. רשתית. Eye Res. 2013, 33, 10–27. [CrossRef]

19. יאמאסקי, ש.; סוגיטה, ש.; Horiuchi, M.; מסעודה, ט.; Fujii, S.; מקאבה, ק.; קוואסאקי, א.; חיישי, ט.; קוואהרה, א.; קישינו, א.; et al. אימונוגניות נמוכה ומאפיינים חיסוניים של רשתית ESC ו-iPSC אנושית. נציג תאי גזע 2021, 16, 851–867. [CrossRef]

20. קלאסן, ח.; שוורץ, MR; ביילי, AH; סמני משטח צעירים, MJ המתבטאים על ידי תאי אבות עצביים אנושיים ועכברים רבי-פוטנטיים כוללים טטרספאנינים ואפיטופים שאינם חלבונים. Neurosci. Lett. 2001, 312, 180–182. [CrossRef]

21. קלאסן, ח.; זיאיאן, ב.; קירוב, ב'; יאנג, MJ; שוורץ, PH בידוד של תאי אבות רשתית מרקמות אנושיות שלאחר המוות והשוואה עם אבות מוח אוטולוגיים. J. Neurosci. מילון 2004, 77, 334–343. [CrossRef]

22. Ingulli, E. מנגנון של דחייה תאית בהשתלה. רופא ילדים נפרול. 2010, 25, 61–74. [CrossRef]

23. עיסא, פ.; Schiopu, A.; Wood, KJ תפקידם של תאי T בדחיית שתל וסובלנות להשתלות. המומחה כומר קלינ. אימונול. 2010, 6, 155–169. [CrossRef] [PubMed]

24. נסר, מ.; סידל, ט.; Sarwal, M. Advances באבחון לדחיית השתלה. המומחה כומר מול. דיאגן. 2016, 16, 1121–1132. [CrossRef] [PubMed]

25. קלאסן, ח.; אימפלד, ק"ל; ריי, ג'יי; יאנג, MJ; גייג', FH; ברמן, MA התכונות האימונולוגיות של תאי אבות בהיפוקמפוס בוגרים. Vis. מילון 2003, 43, 947–956. [CrossRef] [PubMed]

26. וינגר, JG; ויסט, ב"מ; משובץ, שירותים; קלאוס, SM; Walsh, CM; חוסר התאמה של ליין, TE MHC גורם לדחיית תאי אבות עצביים בעקבות השתלת חוט שדרה במודל של דה-מיאלינציה המושרה על ידי ויראלית. תאי גזע 2012, 30, 2584–2595. [CrossRef] [PubMed]

27. ReNeuron, L. First-in-Human Phase I/IIa, Open-Label, מחקר פרוספקטיבי של הבטיחות והסבילות של תאי אבות אנושיים ברשתית (hRPC) שהושתלו תת-רשתית בחולים עם רטיניטיס פיגמנטוזה (RP). ניסוי קליני # NCT02464436. זמין באינטרנט: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02464436 (נגישה ב-27 בפברואר 2023).

28. לו, ב.; לין, י.; צאי, י.; גירמן, ש.; אדמוס, ג.; ג'ונס, חבר כנסת; שלי, ב.; Svendsen, CN; Wang, S. השתלת אב עצבי אנושי לאחר מכן לתוך הרשתית המנוונת אינה פוגעת בהישרדות השתל ראשונית או ביעילות הטיפולית. תרגום Vis. Sci. טכנול. 2015, 4, 7. [CrossRef] [PubMed]

29. ג'ונס, חבר כנסת; לו, ב.; גירמן, ש.; Wang, S. אסטרטגיות טיפוליות מבוססות תאים להחלפה ושימור במחלות ניווניות ברשתית. פרוג. רשתית. Eye Res. 2017, 58, 1–27. [CrossRef] [PubMed]

30. בל, BA; קאול, ג; Bonilha, VL; רייבורן, ME; שדרח, ק.; Hollyfield, JG עכבר ה-BALB/c: השפעת תאורת ויוואריום סטנדרטית על פתולוגיה של הרשתית במהלך ההזדקנות. Exp. Eye Res. 2015, 135, 192–205. [CrossRef]

31. קלאסן, HJ; נג, TF; קורימוטו, י.; קירוב, א.; שאטוס, מ.; קופי, פ.; אבות רשתית צעירים, MJ Multipotent מבטאים סמנים התפתחותיים, מתמיינים לנוירונים ברשתית ומשמרים התנהגות מתווכת אור. תחקור. אופתלמול. Vis. Sci. 2004, 45, 4167–4173. [CrossRef]

32. jCyte, Inc. בטיחות של הזרקה אחת, תוך-וויטריאלית, של תאי אבות רשתית אנושיים (jCell) ברטיניטיס פיגמנטוזה. ניסוי קליני # NCT02320812. זמין באינטרנט: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02320812 (נגישה ב-24 בפברואר 2023).

33. jCyte, Inc. בטיחות ויעילות של הזרקה תוך-וויטריאלית של תאי אבות רשתית אנושיים במבוגרים עם רטיניטיס פיגמנטוזה. ניסוי קליני # NCT03073733. זמין באינטרנט: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT03073733 (נגישה ב-24 בפברואר 2023).

34. jCyte, Inc. בטיחות של הזרקה חוזרת תוך-וויטריאלית של תאי אבות רשתית אנושיים (תא) בנבדקים מבוגרים עם רטיניטיס פיגמנטוזה. ניסוי קליני # NCT04604899. זמין באינטרנט: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04604899 (נגישה ב-24 בפברואר 2023).

35. Oudejans, JJ; van der Valk, P. סיווג אימונוהיסטוכימי של ניאופלזמות של תאי T ו-NK. ג'יי קלין. פאתול. 2002, 55, 892. [CrossRef] [PubMed]

36. Tostanoski, LH; Chiu, YC; גמון, JM; שמעון, ת.; Andorko, JI; Bromberg, JS; Jewell, CM תכנות מחדש של המיקרו-סביבה של בלוטות הלימפה המקומיות מקדם סובלנות שהיא מערכתית וספציפית לאנטיגנים. נציג תא 2016, 16, 2940–2952. [CrossRef] [PubMed]

37. Jurga, AM; פלצ'נה, מ.; Kuter, KZ סקירה כללית של סמנים כלליים ומפלים של פנוטיפים דיפרנציאליים של מיקרוגליה. חֲזִית. Cell Neurosci. 2020, 14, 198. [CrossRef] [PubMed]

38. לי, JC; זו, XM; יאנג, SF; ג'ין, JQ; ז'ו, ל.; לי, CJ; יאנג, ה.; Zhang, AG; Zhao, TQ; Chen, CY מלכודות נויטרופילים חוץ-תאיות משתתפות בפיתוח של פקקת הקשורה לסרטן בחולים עם סרטן קיבה. World J. Gastroenterol. 2022, 28, 3132–3149. [CrossRef]

39. Kee, BL פיתוח תאי רוצח טבעי ו-ILC1. Encycl. אימונוביול. 2016, 1, 140–148.