תאי גזע מזנכימאלי מי שפיר אנושיים מקלים על AGVHD לאחר Allo-HSCT על ידי ויסות אינטראקציות בין מיקרוביוטה של ​​המעי וחסינות המעיים

תַקצִיר

מחלת שתל מול מארח חריפה (aGVHD) לאחר השתלת תאי גזע המטופואטיים אלוגניים מהווה את אחד האתגרים המטרידים ביותר. דיסביוזיס של מיקרוביוטה במעיים יכולה להמשיך עם aGVHD ולתאי גזע מזנכימליים (MSCs) יש פוטנציאל טיפולי מבטיח עבור aGVHD. עם זאת, האם hAMSCs משפיעים על המיקרוביוטה של ​​המעי במהלך הפחתת aGVHD עדיין לא ידוע. בהתאם לכך, ביקשנו להגדיר את ההשפעות והמנגנונים הבסיסיים של MSCs (hAMSCs) הנובעים מממברנה מי שפיר של בני אדם המסדירים את מיקרוביוטת המעיים ואת חסינות המעיים ב-aGVHD. על ידי הקמת מודלים של עכברי aGVHD מואנשים וטיפול ב-hAMSCs, מצאנו ש-hAMSCs שיפרו משמעותית את תסמיני ה-aGVHD, הפכו את חוסר האיזון החיסוני של תת-קבוצות של תאי T וציטוקינים, והחזירו את מחסום המעי. יתרה מכך, הגיוון וההרכב של מיקרוביוטה במעיים השתפרו בטיפול ב-hAMSCs. ניתוח המתאם של ספירמן הראה שיש מתאם בין המיקרוביוטה של ​​המעי לבין חלבוני ה-tight junction, גם תאי חיסון וציטוקינים. המחקר שלנו הציע ש-hAMSCs מקלים על aGVHD על ידי קידום נורמליזציה של מיקרוביוטה במעיים וויסות האינטראקציות בין מיקרוביוטת המעי למחסום המעי, חסינות.

יתרונות cistanche לגברים - מחזקים את המערכת החיסונית

מילות מפתח

מחלת שתל מול מארח חריפה · תאי גזע מזנכימליים מי שפיר · מיקרוביוטה במעיים · מחסום מעיים · חסינות מעיים

מבוא

היתרון העיקרי של השתלת תאי גזע המטופואטיים אלוגניים (allo-HSCT) הוא התגובה האנטי-גידולית החזקה עקב אפקט שתל מול לוקמיה (GVL) המופעלת על ידי זיהוי של פפטידים הנובעים מהבדלים בפולימורפיזם גנומי בין המטופל לבין לוקמיה. תוֹרֵם. עם זאת, מחלת שתל-מול-מארח חריפה (aGVHD) סובבת סביב התפתחות של נזק לרקמות הנמען עקב התקפת תאי ה-T התורמים-allo-reactive ומייצגת סיבוך עיקרי מסכן חיים ב-alloHSCT [1, 2]. דווח כי ההפרעה המיקרוביאלית במעיים גורמת לתגובות דלקתיות ומתאם עם מחלות הקשורות לדלקת [3, 4]. מחקרים רבים הצביעו על כך שהפרעות במיקרוביוטה של ​​המעי הן גורם חיוני המעורר aGVHD לאחר allo-HSCT, והופכות למטרה חדשה לטיפול [5, 6]. באופן ספציפי, דיסביוזיס של מיקרוביוטה של ​​המעי ב-aGVHD מאופיינת בדרך כלל באובדן של מגוון חיידקי המעי ותוצאה של פתוגנים אופורטוניסטיים [6]. ב-GVHD של מערכת העיכול, המחסום הרירי הפגוע מתחיל הפעלה של תאים המציגים אנטיגן מארח ותאי T תורם ששיאו בהתמיינות תאי T לאורך פרדיגמות מסוג-1 וסוג-17 פתוגניים על חשבון T-רגולטורית סובלנית. דפוסי תאים [7]. בעיקר על בסיס 16S ריבוזום RNA (16S rRNA) הצביעו על כך שמינים מרובים של מיקרוביוטה במעיים נקשרו ל-GVHD, ולדוגמה, clostridia מייצרת בוטיראט קשורים לשמירה על תפקוד מחסום אפיתל והחלשה של GVHD חריף [8 ]. תאי גזע Mesenchymal (MSCs) זכו לתשומת לב רבה בעשור האחרון בשל פוטנציאל ההתחדשות העצמית וההתמיינות הרב-שושלת שלהם, כמו גם תכונות אימונומודולטוריות [9]. MSCs נחשבים לאפשר רקמות פגועות ממיקרו-סביבות דלקתיות ומתחדשות מאוזנות בנוכחות דלקת נמרצת ונעשה שימוש נרחב לטיפול בהפרעות מבוססות מערכת החיסון, שבהן היישום הקליני המוצלח ביותר מעורב בטיפול ב-GVHD [10]. תאי גזע מזנכימיים מי שפיר אנושיים (hAMSCs) הם תאי גזע סביב הלידה בעלי יכולת התמיינות דמוית תאי גזע עובריים ותכונות אימונומודולטוריות דמויות תאי גזע בוגרים. שיתוף פנוטיפים דומים ל-MSCs טיפוסיים, hAMSCs הפכו למקור מבטיח של תאי גזע בגלל הקלות, הלא פולשניות והבטיחותיות של רכישת רקמות, תפוקת תאים בשפע ומחלוקות אתיות ומוסריות נמוכות מאוד בהשוואה לתאי גזע ממקורות אחרים. ל-AMSCs אנושיים יש את היתרונות של אימונוגניות נמוכה וללא גידוליות, מה שהופך אותם למקור התא האידיאלי לטיפול בתאים [11, 12]. ניסויים במבחנה אישרו כי hAMSCs הציגו יכולת שגשוג גבוהה יותר ויכולת גדילה גבוהה יותר לטווח ארוך מאשר MSCs שמקורם במח עצם [13, 14]. מחקרים רבים הוכיחו של-hAMSCs יש פוטנציאל לשיפור מחלות דלקתיות רבות, כולל מחלות מעי דלקתיות, דלקת מפרקים ניוונית ומחלות אוטואימוניות [11]. המחקר האחרון שלנו הראה כי hAMSCs שיפרו את aGVHD על ידי ויסות האיזון של תאי T effector ותאי Treg [15]. עם זאת, ההשפעה והמנגנון של hAMSCs על ההפרעה המיקרוביאלית במעיים ב-GVHD אינם ידועים. כאן, אנו שואפים לחקור את ההשפעה הפוטנציאלית של hAMSCs על aGVHD כמו גם על המיקרו-מערכת של המעיים. זה יהיה המחקר הראשון שחשף את המיקרוביוטה של ​​המעי ואת המתאם שלה עם חסינות המעיים בעקבות טיפול HAMSCs ב-aGVHD.

חומרים ושיטות

בידוד, תרבות וזיהוי של hAMSCs

ה-hAMSCs חולצו כפי שתואר בעבר [15]. תאי מעבר שלישי (P3) נקצרו מזיהוי פנוטיפ דרך צביעה בנוגדנים נגד CD34 (581, BD Pharmingen, ארה"ב), CD45 (HI30, BD Pharmingen, ארה"ב), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen, ארה"ב , ארה"ב), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, ארה"ב), CD90 (5E10, BD Pharmingen, ארה"ב), CD73 (AD2, BD Pharmingen, ארה"ב) ו-CD105 (SN6, bioscience, ארה"ב), ולאחר מכן נותחו על ידי ציטומטר זרימה ( BD FACS Canto II). התאים נבדקו עבור התמיינות רב-שושלת שלהם באמצעות מדיום אינדוקציה ספציפי (BGscience, סין), ונצבעו ב-Oil Red-O ו- Alizarin Red עבור אדיפוגנזה והתמיינות אוסטאוגנית, בהתאמה. hAMSCs בקטעים 3 עד 6 שימשו עבור הניסויים.

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

אוסף PBMCs אנושי

דגימות פלזמה נרכשו ממתנדבים בריאים בהסכמה מדעת בכתב. תאים חד-גרעיניים של דם היקפי אנושי (PBMCs) בודדו מדם היקפי על ידי צנטריפוגה בצפיפות Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, סין), נשטף עם PBS, מושעה במאגר תמוגה דם אדום (Solarbio, סין) ב-4 מעלות למשך 15 דקות. לשטוף שוב ולאחר מכן להשעות ב-PBS להזרקת וריד הזנב לעכברי NPG.

עכברים

גיל 8-10 שבועות ועכברי NPG זכרים ונקבות של 25-30 גרם נרכשו מ-Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. וגודלו בתנאי SPF במחזור אור-חושך של 12 שעות עם טמפרטורה ולחות קבועים. כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית הדרומית (מס' L2019132) בהתאם להנחיות המועצה הלאומית לבריאות ולמחקר רפואי של סין בנושא ניסויים בבעלי חיים.

מודל וטיפול בבעלי חיים אקוטי GVHD

מודל העכבר aGVHD הוקם כפי שתואר בעבר [15]. לטיפול, 5×105 hAMSCs לכל עכבר (להלן קבוצת hAMSCs) ו-PBS (להלן קבוצת aGVHD) הוזרקו דרך וריד הזנב לכל עכבר ביום השלישי לאחר ההשתלה. בכל דגמי העכברים, עכברים נבדקו כל יומיים עבור תחלואה ושינויים במשקל. כל עכבר קיבל ניקוד עבור מאפיינים פתולוגיים הכוללים ירידה במשקל, יציבה כפופה, פרווה מקומטת, נגעים בעור, תנועתיות מופחתת ושלשולים ולאחר מכן הודרג בהתאם למערכת הניקוד הקלינית aGVHD שהותאמה לזו שתוארה במקור על ידי קוק [16]. במקרים מסוימים, עכברים בקבוצת aGVHD סבלו מ-aGVHD חמור, והעכברים בקבוצת hAMSCs ביום השלישי לאחר הטיפול הוקרבו כדי לקצור את הדם ההיקפי ואיברי המטרה כולל כבד, טחול, ריאות ומעי. הצואה של העכברים הללו נאספה לפני ההקרבה.

hAMSCs עם תווית GFP ו-In vivo Tracing

HAMSCs עם תווית GFP הוקמו וזוהו כפי שתואר קודם [15]. בקצרה, העברנו את הגן של חלבון הקרינה הירוק (GFP) לתוך hAMSCs עם lentivirus כווקטור. 5 × 105 hAMSCs המסומנים ב-GFP שהושעו ב-500 μL PBS הוזרקו לעכברי aGVHD דרך וריד הזנב. לאחר 24 שעות ו-72 שעות, העכברים הורדמו כדי לקצור את המעיים ולאחר מכן יצרו קטעים קפואים. צביעה נגדית DAPI שימשה כדי להבחין בין התאים המקבלים.

הערכה היסטופתולוגית

איברי המטרה aGVHD נאספו בזמן נתיחה ולאחר מכן עובדו לבלוקים משובצים בפרפין כדי ליצור מקטעים בעובי 5-מיקרומטר לצביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E). ציונים היסטולוגיים הוערכו על סמך הרס מבנה הרקמה וחדירת לימפוציטים [17]. עבור אימונוהיסטוכימיה, קטעים עברו דה-פראפניזציה, הוסדרו מחדש וטופלו ב-3% H2O2 במתנול למשך 20 דקות כדי לבטל פעילות פרוקסידאז אנדוגנית. לאחר מכן עברו קטעים לאחזור אנטיגן וטופלו באלבומין בסרום למשך שעה. לאחר מכן, החתכים הודגרו עם נוגדני CD45 אנטי-אנושי ארנב (EP322Y, Abcam, אנגליה) או ZO-1 נוגדנים ((EPR19945-296, Abcam, אנגליה) למשך שעה אחת ב-37 מעלות. נוגדנים זוהו עם נוגדן משני מצומד HRP (Genentech, ארה"ב) והוצגו עם DAB. האזור החיובי נותח על ידי Image J.

מערכת חיסון מגבירה צמח cistanche

רצף 16S rRNA של מיקרוביוטה צואה

DNA גנומי צואה הופק מ-0.1 גרם דגימות צואה קפואות באמצעות ערכת DNA לצואה של EZNA® (Omega BioTek, Norcross, GA, ארה"ב) בהתאם לפרוטוקול של היצרן. באמצעות DNA גנומי כתבנית, נעשה שימוש בפריימרים ספציפיים (338F: 5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3' ו-806R: 5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3') עם ברקודים ו-PremixTaq (TaKaRa, סין) האזורים ההיפר-משתנים V3-V4 של הגן rRNA החיידקי 16S. לאחר הגברה וטיהור, כל הגנום של הדגימה עבר רצף בפלטפורמת רצף תפוקה גבוהה של Illumina Hiseq או Miseq על ידי Magigene Technology Co., Ltd (Guangzhou, סין) כדי לקבל נתונים גולמיים בפורמט FASTQ. ניתוח נתוני רצף בוצע בעיקר באמצעות פלטפורמת Magichand.

ניתוח ציטומטרי זרימה

איברי המטרה aGVHD ודם היקפי של עכברים הושגו והוכנו להשעיה חד-תאית. תאים נצבעו בנוגדנים חד שבטיים נגד CD3 (UCHT1, Biolegend, ארה"ב), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, ארה"ב), CD8 (RPA-T8, Biolegend, ארה"ב), CD25 (BC96, Biolegend, ארה"ב) או התאמת איזוטיפ לשלוט על IgG (eBioscience, ארה"ב) למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר בחושך. לאחר מכן התאים עובדו עם מאגר Lysing (BD Pharm Lyse™) ב-4 מעלות בחושך למשך 15 דקות. צביעה תוך-תאית Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, ארה"ב) בוצעה על פי המלצות היצרן (Fixation/Permeabilization Solution Kit; eBioscience). לאחר מכן בוצעו ניתוח ציטומטרי זרימה פוליכרומטי על ציטומטר זרימה.

כמות ציטוקינים

רמות הציטוקינים בסרום ובעל רקמות של עכברים נקבעו באמצעות ערכת הציטוקינים Human Th1/Th2/Th17 Cytometric Bead Array (CBA) (BD Pharmingen, ארה"ב) לפי הוראות היצרן. בקצרה, 50 μL מכל אחת מדגימות העל הודגרו עם 50 μL של חרוזי לכידת הציטוקינים האנושיים Th1/Th2/Th17 מעורבים ו-50 μL של מגיב הזיהוי Th1/Th2/Th17 PE האנושי בטמפרטורת החדר בחושך, ואז הושעה. לניתוח ציטומטריית זרימה 3 שעות מאוחר יותר.

PCR כמותי בזמן אמת

RNA כולל הוצא מרקמת המעי הגס של עכבר לאחר בידוד באמצעות Trizol Reagent (TaKaRa, סין). RNA כולל שימש כתבנית לתעתוק הפוך של cDNA. -אקטין שימש כהתייחסות פנימית. ביטוי ה-mRNA נמדד באמצעות qPCR באמצעות הפריימרים הבאים: ZO-1-F, 5'-ACCACCAACCCGAGAAGAC-3', ו-ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3', ו-OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -actin-F, 5'-GGCTGTATTCCCCCTCCATCG-3', ו-actin-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. שיטת 2-ct שימשה למדידת רמות ביטוי ה-RNA.

Assay Immunosorbent Linked Anzyme (ELISA)

הרמות של D-LA ו-DAO בפלזמות נמדדו באמצעות ערכות ELISA (Jingmei, סין) לפי הוראות היצרן. בקצרה, הסופרנטנטים הפלזמה שנאספו הוכנסו לצלחות מצופות נוגדנים ספציפיים 96-בהתאמה, בהתאמה. הספיגה נרשמה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-לוחיות (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).

ניתוח סטטיסטי

הנתונים הוצגו כממוצע ± SD. בדיקת t דגימות בלתי תלויות בוצעה והוצגה באמצעות GraphPad Prism8.0. ניתוח נתונים של רצף rRNA 16S בוצעו באמצעות פלטפורמת Magichand (http://cloud.magigenecom/). ניתוח מתאם בין מיקרוביוטה של ​​המעי לחסינות נערך על ידי חבילות R (v3.6.3) כדי להציג מטריצת מתאם. ערכי P<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

תוצאות

זיהוי של hAMSCs

ה-hAMSCs הפגינו מורפולוגיה של מצולע או פיברובלסט בתרבית (איור 1A) והיו חיוביים מאוד לביטוי פני השטח של סמנים ספציפיים ל-MSC CD90, CD105 ו-CD73, אך שליליים עבור CD34, CD45, HLA-DR ו-CD11b (איור .1C). באשר להבחנה מרובה שושלת, התוצאות שלנו הראו כי hAMSCs הדגימו בידול אדיפוציטי ואוסטאובלסטי (איור 1B).

hAMSCs הקלו באופן משמעותי על תסמיני aGVHD בעכברים

הערכנו תחילה את ההשפעה הטיפולית של hAMSCs על aGVHD. בהשוואה לקבוצת aGVHD, hAMSCs שיפרו באופן משמעותי את aGVHD, כפי שמעידה על ירידה ניכרת במשקל (איור 2B) וירידה בציון הקליני של aGVHD (איור 2C). יתר על כן, לקבוצת hAMSCs היה שיעור הישרדות גבוה משמעותית בהשוואה לעכברי aGVHD (איור 2D). הניתוח ההיסטולוגי הפתולוגי הראה כי aGVHD גרם לנזק חמור לרקמות ולחדירת לויקוציטים. hAMSCs, כפי שהודגם על ידי H&E, החלישו שיבוש רקמות וחדירה של תאי T אקסוגניים באיברי מטרה aGVHD (איור 2E). באופן עקבי, התוצאות של IHC גם אישרו כי hAMSCs שיפרו ביטויים פתולוגיים חריגים (איור 2F). תוצאות אלו הצביעו על כך של-hAMSCs יש פוטנציאל לשפר תסמיני aGVHD בעכברי aGVHD.

hAMSCs השפיעו על חסינות המארח בעכברי aGVHD

כדי להבין את המנגנונים האימונומודולטורים הבסיסיים שבאמצעותם hAMSCs מפחיתים aGVHD, מדדנו את ההפעלה וההתרחבות של תאי T בדם היקפיים ובאיברי מטרה. בדיקת ציטומטריית זרימה גילתה ש-hAMSCs עיכבו בצורה יוצאת דופן את מספר תאי CD3+CD4+T ו-CD3+CD8+T בדם ובאיברי המטרה (איור 3A, ב). יתרה מכך, שיעור ה-CD4+CD25+Foxp3+Tregs בדם ובאיברי המטרה של עכברים בקבוצת hAMSCs היה גבוה משמעותית מזה שבקבוצת aGVHD (איור 3C) . לאחר מכן חקרנו את ההשפעה של hAMSCs על פרופיל הציטוקינים (איור 4). מתן hAMSCs הביא לירידה ברורה ברמות IL-17A, IFN- , TNF, IL-2 ו-IL-2 באיברי המטרה ובדם בהשוואה לאלו של קבוצת aGVHD, למעט רמת ה-TNF בטחול. בינתיים, בנוסף לרמות IL-10 בכבד, עכברים לטיפול ב-hAMSCs הציגו רמות מוגברות משמעותית של IL-10 ו-IL-4 באיברי המטרה ובדם. ביחד, hAMSCs מילאו תפקיד מגן ב-aGVHD על ידי היפוך חוסר האיזון החיסוני של תת-קבוצות של תאי T וסערת ציטוקינים.

היתרונות של cistanche tubulosa-לחזק את המערכת החיסונית

לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche Enhance Immunity

【בקש עוד】 דוא"ל:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

hAMSCs שיפר נזק מחסום מעיים בעכברי aGVHD

כדי לחקור אם hAMSCs יכולים לתקן את מחסום המעי ב-aGVHD, ראינו תחילה אם hAMSCs יכולים לנדוד למעיים. כפי שמוצג באיור 5A, hAMSCs המסומנים ב-GFP זוהו במעיים לאחר הזרקה לתוך hAMSCs ויכלו להשתלב ולהסתנן למעיים. לאחר מכן תכננו הערכה היסטופתולוגית של רקמת המעי הדק. בקבוצת aGVHD, המעי היה נשחק ונמק, שרירי המעיים הושמדו ללא ספק, הוויליות נשברו ולוקוציטים מסיביים חדרו לרירית המעי, התת-רירית ולמינה פרופריה. שרירי המעיים היו מסודרים באופן קבוע, ולא היה שבירה של וילוס מעי או ניתוק של אפיתל המעי לאחר טיפול ב-hAMSCs (איור 5B). חדירת לימפוציטים אנושית נצפתה גם על ידי אימונוהיסטוכימיה במעיים בקבוצת aGVHD, בעוד שטיפול ב-hAMSCs יכול להפחית את חדירתם (איור 5C). כדי להעריך את ההשפעה המגנה של hAMSCs על שלמות רירית המעי, ביצענו אימונוהיסטוכימיה כדי לזהות את ההשפעה על ZO-1. בקבוצת הטיפול ב-hAMSCs, רמת הביטוי של חלבון ה-tight junction ZO-1 גדלה באופן משמעותי בהשוואה לקבוצת aGVHD (איור 5D). כמו כן, בדקנו את רמות ביטוי ה-mRNA של חלבוני מעיים צמודים (TJs) ורמות פלזמה של חומצה D-לקטית (D-LA) ודיאמין אוקסידאז (DAO) כדי לקבוע את תפקוד מחסום המעי ואת חדירות המעיים. במתן תוך ורידי, hMASCs יכולים להגדיל באופן משמעותי את רמות ביטוי ה-mRNA של ZO-1 ו-Occludin, חלבוני המפתח של TJs (איור 5E, F), תוך הפחתת רמות ה-D-LA ו-DAO (איור 5G, ח). מכאן שכאשר התרחש aGVHD, מחסום המעי ניזוק עם הפחתת חלבונים בצומת הדוק של המעי והגדלת החדירות של המעי. בינתיים, hAMCSs יכולים להפוך באופן ניכר את השיבוש של מחסום המעי.

איור 1 אפיון פנוטיפי ופונקציונלי של hAMSCs. (א) צילומי מיקרו מייצגים של hAMSCs ממעבר 0 עד 3 (ללא צביעה, 100×). (ב) יכולת בידול רב שושלת של hAM SCs. בידול אדיפוגני של hAMSCs (משמאל) נצבע ב-Oil Red-O, והבחנה אוסטאובלסטית של hAMSCs (מימין) נצבעה ב-Alizarin Red (צביעה, 100×). (ג) ניתוח ציטומטרי זרימה המצביע על hAMSCs חיובי עבור CD90, CD105 ו-CD73 בעוד שלילי עבור CD34, CD45, CD11b ו-HLA-DR

איור 2 hAMSCs הקל על aGVHD בעכברי NPG. (א) דיאגרמה סכמטית הממחישה לוח זמנים לניהול של hAMSCs בדגמי עכברים aGVHD. (ב) שינויים במשקל הגוף בקבוצות שונות (n=10). (ג) ציון קליני aGVHD (מבוסס על ירידה במשקל, יציבה כפופה, פרווה מרופטת, נגעים בעור, מופחתת ניידות ושלשולים) בקבוצות שונות (n=10). (ד) הישרדות בין קבוצות שונות (n=10). (ה) תמונות מיקרוסקופיות מייצגות של צביעת H&E (400×) וציון היסטולוגיה (בהתבסס על הרס מבנה הרקמות וניפוח לימפוציטים) (n=4). (ו) תמונות מיקרוסקופיות מייצגות של אימונוהיסטוכימיה (400×) ושיעור השטח החיובי של CD45 (n=4). הערכים הוצגו כממוצע ± SD

איור 3 hAMSCs עיכבו את התרחבות תאי T של התורם תוך שיפור יצירת Tregs או התרחבות in vivo. (א) ניתוח ציטומטריית זרימה של תאי CD3+CD4+T(n=6), (ב) ניתוח ציטומטריית זרימה של CD3+CD8+ T cells(n=6), (C) ניתוח ציטומטריית זרימה של CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6). הערכים הוצגו כממוצע ± SD

איור. 4 hAMSCs הורידו את הציטוקינים הפרו-דלקתיים IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2, וציטוקינים אנטי-דלקתיים IL-10 ו-IL עם ויסות גבוה יותר -4 in vivo (n=5). הערכים הוצגו כממוצע ± SD

שינויים במיקרוביוטה במעיים לאחר טיפול ב-hAMSCs בעכברי aGVHD

רצף rRNA 16S בוצע בדנ"א של חיידקים צואתיים שבודדו מקבוצות שונות של עכברים. אינדקסי ה-diversity, כולל OUT, Chao1 ו-Shannon אינדקסים, הביאו נטיות דומות, ועכברי הטיפול ב-hAMSCs הכילו מיקרוביוטה עם גיוון גבוה יותר באופן משמעותי ביחס לזה של קבוצת aGVHD (איור 6A). ניתוח קואורדינטות ראשי (PCoA) המבוסס על מרחק Un-unifrac משוקלל, מרחק מנהטן ומרחק מטרי Bray-Curtis, הניב נקודות נתונים מפוזרות על החלקות של שתי הקבוצות, למרות שההבדל לא היה משמעותי (איור 6B). לאחר מכן, הערכנו את הנוף של מיקרוביוטת המעיים כדי לחקור עוד יותר את ההבדל הפוטנציאלי בהרכב בין שתי הקבוצות. סך של 773 OTUs חושבו, ולקבוצת hAMSCs היו OTUs גבוה יותר בהשוואה לקבוצת aGVHD (איור 6C). מבחינת הרכב החיידקים ברמת הפילום, Firmicutes ו-Bacteroidetes היו שני הפילומים השולטים ביותר (איור 6D). ארגנו גם מפת חום השוואה לניתוח של מיקרוביוטה במעיים בין שתי הקבוצות (איור 6E). הסוג של Odoribacter ו-Ruminococcus_1 הציג שפע גבוה יחסית בקבוצת hAMSCs, שהם חיידקים חשובים לשמירה על הומאוסטזיס של המעי (איור 6F, G). כדי לאשר איזה חיידק השתנה על ידי טיפול ב-hAMSCs ובתורו השפיע על התקדמות המחלה כנגד aGVHD, ביצענו השוואות מחלקות גבוהות ממדים תוך שימוש בניתוח המבחין ליניארי (LDA) של גודל אפקט (LEfSe) שזיהה הבדלים ניכרים בדומיננטיות של קהילות חיידקים בין שתי הקבוצות. כפי שמוצג (איור 6H, I), Streptococcaeae (המשפחה והסוג Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058 ו- Delftia היו סוגי החיידקים העיקריים שתורמים לדיסביוזיס של מיקרוביוטה של ​​המעי בקבוצת aGVHD. עם זאת, החיידקים המועילים Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter ו-Clostridia (המחלקה והסדר Clostridiales) הציגו העשרה יחסית בקבוצת hAMSCs, אשר עשויה להיות קשורה להקלה בתיווך hAMSCs של aGVHD. באופן קולקטיבי, המגוון וההרכב של מיקרוביוטה במעיים שופרו לאחר מתן hAMSCs ועברו במגמה כוללת שהייתה מועילה לגוף.

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

hAMSCs הסדירו את האינטראקציות בין מיקרוביוטה של ​​המעיים וחסינות המעיים

כדי להבין את הקשר הפוטנציאלי בין מיקרוביוטת המעי למחסום רירית המעי, נותחו המתאמים בין ה-TJs למיקרוביוטה של ​​המעי ברמת הסוג על ידי ניתוח המתאם של Spearman. כפי שמוצג באיור 7, היה קשר חיובי בין ZO-1 לבין חיידקים מועילים, Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 ו-Ruminiclostridium_9. השפע היחסי של החיידקים המועילים, Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1 ו-Ruminococcaceae_UCG.014 הראו מתאמים חיוביים באופן דרמטי עם Occludin. לאחר מכן ביצענו ניתוח מתאם בין מיקרוביוטה של ​​המעי לבין מחסום מערכת החיסון של המעי על ידי שיטת המתאם של ספירמן (איור 7). ראינו שהעלייה של Roseburia, Muribaculum ו-Ruminococcus _1 הייתה בקורלציה שלילית עם אחוז תאי CD3 +CD4+T. בנוסף, העלייה בחיידקים מועילים, Ruminococcus_1 ו-Ruminiclostridium _9, הייתה בקורלציה חיובית לאחוז ה-Tregs ואילו בקורלציה שלילית ל-IL-17. השפע של לקטובצילוס ו-Candidatus_ארטרומיטוס היו בקורלציה שלילית עם IFN-. היה מתאם שלילי בין השפע של Muribaculum ו-IL-2. העלייה בשפע Candidatus_Saccharimonas וירידה ב-Escherichia. שפע Shigella נמצא בקורלציה חיובית עם רמת IL-10 (איור 7). תוצאות ניתוח המתאם הצביעו על כך ש-hAMSCs שיפרו את הסביבה הדלקתית של המארח והסדירו הומאוסטזיס של המעי, אשר עשוי להיות קשור עם אפנון המיקרוביוטה של ​​המעי, וכתוצאה מכך מנעו aGVHD.

איור 5 hAMSCs שיפרו חוסר תפקוד של מחסום המעי בעכברי aGVHD. (א) hAMSCs עם תווית GFP חדרו למעיים. (ב) תמונות מיקרוסקופיות מייצגות של צביעת H&E של המעיים (400×) וציון היסטולוגיה (בהתבסס על הרס מבנה הרקמה וחדירת לימפוציטים) (n=4). (ג) תמונות מיקרוסקופיות מייצגות של אימונוהיסטוכימיה (400×) של המעיים ושיעור השטח החיובי של CD45 (n=4). (ד) תמונות מיקרוסקופיות מייצגות של אימונוהיסטוכימיה (400×) של המעיים ושיעור השטח החיובי של ZO-1 (n=4). (E) רמות ביטוי mRNA של ZO-1 ו-Occludin (n=3). (ו) רמות פלזמה של D-LA ו-DAO (n=4).הערכים הוצגו כממוצע ± SD

דִיוּן

ניתוח מיקרוביאלי מתקדם סיפק תובנות חדשות לגבי האינטראקציות המורכבות בין המארח למיקרוביוטה של ​​המעי [18]. המיקרוביוטה של ​​המעי יכולה להשתנות לאחר allo-HSCT והיא קשורה קשר הדוק ל-aGVHD, מה שמצביע על כך שמיקרוביוטה של ​​המעי עשויה להיות יעד חדש לטיפול ב-aGVHD [5]. מחקרים רבים, כולל המחקר האחרון שלנו, חקרו ואישרו את ההשפעה הטיפולית של MSCs על aGVHD [15, 19, 20]. עם זאת, ההשפעה על המיקרוביוטה של ​​המעיים בתקופה זו נותרה לא ברורה. במחקר זה, חקרנו את ההשפעה של hAMSCs על aGVHD והמנגנונים הפוטנציאליים בהם in vivo. בהתאם למחקרים קודמים [15, 21-23], התוצאות שלנו הצביעו על כך של-hAMSCs יש השפעה הגנה חיובית על aGVHD בעכברים, כפי שהוכח מתסמיני aGVHD מוחלשים והישרדות ממושכת. כמו כן, הדגמנו ש-hAMSCs הפגינו אפקט מדכא חיסון באמצעות הפחתת התרחבות תאי T תורם תוך שיפור יצירת Tregs ב-aGVHD. בינתיים, hAMSCs יכולים להחליש ציטוקינים פרו דלקתיים ולהגביר ציטוקינים אנטי דלקתיים in vivo, כדי לעכב תגובות דלקתיות. מחסום המעי, מבנה צפוף המורכב משכבה חד-שכבת של תאי אפיתל מעיים, שומר על שלמותו ומונע טרנסלוקציה של מיקרוביוטה לומינלית במצב בריא [24]. במהלך allo-HSCT, גדודים של התניה פוגעים במחסום המעי, שהוא השלב הראשוני בהתפתחות של aGVHD, מכיוון שהוא מאפשר מעבר של חיידקים על פני המחסום ומוביל לשיבוש הומאוסטזיס חיסוני של המעי [24, 25]. עדויות מצטברות מוכיחות של-MSCs יש את היכולת לתקן רקמות, אשר הוכחה לתקן את שלמות מחסום המעי בעכברי קוליטיס [26]. לחלבוני Tight junction, כולל ZO-1 ו-Occludin, יש תפקיד חיוני בתפקוד מחסום המעי והטרנסלוקציה של מיקרוביוטת המעי על מחסום המעי הפגוע מעוררת דלקת [27]. D-LA מופק מחיידקי מעיים, ו-DAO מתרכז בעיקר ברירית המעי. לפיכך, ריכוזים גבוהים של פלזמה D-LA ו-DAO עשויים לשקף חלקית שינויים בחדירות המעי ובתפקוד מחסום המעי [28]. נכון לעכשיו, מצאנו שרמות הביטוי של TJs עלו באופן דרמטי לאחר מתן hAMSCs, בעוד שרמות הפלזמה של D-LA ו-DAO ירדו באופן משמעותי, מה שמעיד על כך ש-hAMSCs יכולים לשפר את תפקוד הפרעות במחסום המעי ואת חדירות המעיים התאוששות. המעי הוא אחד האיברים המושפעים בצורה הקשה ביותר על ידי aGVHD ומחקר הדגיש כי חיידק, במיוחד המיקרוביוטה של ​​המעי ממלא תפקיד מרכזי בפתוגנזה והתפתחות של aGVHD [5, 6]. כפי שדווח במחקרים קודמים, אובדן המגוון החיידקי של חולי allo HSCT היה קשור לתמותה מוגברת מ-aGVHD [29, 30]. שליטה בצואה על ידי פתוגנים אופורטוניסטיים Enterococcus ו-Proteobacteria נקשרה גם לעלייה ב-GVHD [6, 31]. בעשורים האחרונים, תשומת לב מוגברת ניתנה למתאם בין המיקרוביוטה של ​​המעי וטיפול MSCs במחלות דלקתיות. MSCs הוכחו כמשפרים דיסביוזיס של מיקרוביוטה במעיים של דלקת מפרקים שגרונית, אלח דם ומחלות מעי דלקתיות [32-34]. כדי להמשיך ולחקור את המנגנון שבו hAMSCs משפר את aGVHD, חקרנו את ההשפעה של hAMSCs על המיקרוביוטה של ​​המעיים. במחקר הנוכחי, מתן hAMSCs הראה השפעה ניכרת על המגוון של הקהילות המיקרוביאליות בהשוואה ללא השתלה, מה שמעיד על כך שניתן לשנות את שפע המיקרוביוטה של ​​המעי לאחר טיפול ב-hAMSCs. עם זאת, לא היה הבדל מובהק במדידות ה-diversity, אולי בגלל גודל המדגם הקטן של שתי הקבוצות או מחזור הטיפול הבלתי מספק של hAMSCs. הניתוח באמצעות מפת חום השוואה ברמות הסוג הצביע על כך שמתן hAMSCs הגביר את שפע החיידקים המועילים, Odoribacter ו-Ruminococcus_1 בפלורת המעיים, שהיו יצרני חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFAs) בעלות תכונות אנטי דלקתיות [35 , 36]. כדי לזהות את החיידקים הדומיננטיים הבסיסיים המתווכים באמצעות השתלת hAMSCs, בוצע ניתוח LEfSe בין שתי הקבוצות. בהשוואה לקבוצת aGVHD, הטיפול ב-hAMSCs העלה משמעותית את השפע של כמה חיידקים מועילים הקשורים להשפעות אנטי דלקתיות, כגון Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, אשר תוארו כולם כמועילים לייצור מיקרוביוטה במעיים [מטבוליט SCFA 37–42]. לפיכך, התצפיות שלנו הצביעו על כך שאחרי מתן hAMSC, שיפור ב-microbiota dysbiosis של המעי, המתבטא במגוון משופר ובשפע היחסי המוגבר של חיידקים מועילים.

איור 6 חילופי חיידקים במעיים בעכברי aGVHD. (א) השוואה של -גיוון. (ב) השוואה של -גיוון. (ג) דיאגרמת Venn של OTUs. (ד) שפע חיידקים יחסי ברמת הפילום. (ה) מפת חום של שפע המינים ברמת הסוג. (ו) שפע יחסי של Odoribacter ברמת הסוג. (ז) שפע יחסי של רומינוקוקוס_1 ברמת הסוג. (ח) קלדוגרם מבוסס על ניתוח LEfSe. (I) ציון LDA מחושב על פי תכונות שיש בשפע באופן דיפרנציאלי בין קבוצות aGVHD ו-hAMSCs. (AI) n=3 עכברים לקבוצה. הערכים הוצגו כממוצע ± SD

aGVHD הוא תהליך דלקתי מסובך שמתחיל על ידי הרס של שלמות מחסום המעי ולאחריו טרנסלוקציה של מיקרוביוטה של ​​המעי ומרכיביה. ההכרה של דפוסים מולקולריים הקשורים לנזק ודפוסים מולקולריים הקשורים לפתוגן על ידי תאים המציגים אנטיגן משרה תגובה פרו-דלקתית כולל הפעלה של תאי T וסערת ציטוקינים כדי להחמיר את הנזק למחסום המעי ולקדם את התפתחות aGVHD [24, 43]. מצד שני, המיקרוביוטה של ​​המעי ומטבוליטים שמקורם במיקרוביוטה כמו SCFAs ממלאים תפקידים חשובים בשמירה על שלמות מחסום המעי וההומאוסטזיס של המעי, כמו גם עיצוב מערכת החיסון הרירית, ואיזון הגנת המארח עם רכיבים ומטבוליטים מיקרוביאליים [24, 44] . תקשורת בין המארח למיקרוביוטה של ​​המעי במחסום המעי מסדירה את התגובות החיסוניות הריריות והמערכתיות, ובמצבים פתולוגיים, עלולה לגרום ל-GVHD [6, 45, 46]. זה הציע כי המיקרוביוטה של ​​המעי קשורה קשר הדוק לביטוי של חלבוני צומת הדוקים [47]. המחקר הנוכחי הראה שביטוי ה-mRNA של TJs ZO-1 ו-Occludin היה מתאם שלילי לשפע היחסי של חיידקים מזיקים, בעוד שהיה לו מתאם חיובי לחיידקים מועילים, מה שמעיד על כך שהמיקרוביוטה של ​​המעי חשובה לשמירה על שלמות החיידקים. מחסום מעיים. בנוסף, המיקרוביוטה של ​​המעי חשובה מאוד בשמירה על המחסום החיסוני של המעי [47]. ראינו שחלק מהחיידקים המועילים היו בקורלציה שלילית עם אחוז תאי ה-CD3+CD4+T, אך בקורלציה חיובית עם אחוז ה-Tregs. כאן, גילינו שחיידקים מועילים, בעיקר יצרני SCFA, היו בקורלציה שלילית לציטוקינים פרו-דלקתיים, אך בקורלציה חיובית עם ציטוקינים אנטי-דלקתיים, בעוד שחיידקים מזיקים נמצאים בקורלציה הפוכה. לסיכום, ההבדל המשמעותי במיקרוביוטה של ​​המעי בין הטיפולים הצביע על תמונה מלאה של האינטראקציות בין המיקרוביוטה של ​​המעי למחסום המעי, חסינות. עדיין היו כמה מגבלות שכדאי לדון בהן בניסויים שלנו. ראשית, למרות שהמחקר שלנו חקר את ההשפעות של hAMSCs על חסינות, מחסום מעיים ומיקרוביוטה במעיים ב-aGVHD, המנגנון הבסיסי עדיין צריך להיות מאומת במחקר נוסף. שנית, דלדול מיקרוביוטה של ​​המעי והשתלת מיקרוביוטה צואה נחוצים כדי לטפל במתאמים הסיבתיים בין המיקרוביוטה של ​​המעי, מחסום המעי והחסינות. שלישית, יש צורך במחקר נוסף שחוקר את ההשפעה של hAMSCs על SCFAs שמקורם במיקרוביוטה ומטבוליטים אחרים. לסיכום, המחקר שלנו הציע ש-hAMSCs מקלים על aGVHD על ידי קידום נורמליזציה של מיקרוביוטה במעיים וויסות האינטראקציות בין המיקרוביוטה של ​​המעי למחסום המעי, חסינות. המחקר שלנו הוא הראשון להגדיר באופן שיטתי את ההשפעות והמנגנונים הבסיסיים של hAMSCs המסדירים את המיקרוביוטה של ​​המעיים ואת חסינות המעיים ב-aGVHD.

איור 7 ניתוח מתאם בין מיקרוביוטה של ​​המעי וחסינות המעיים. ניתוח המתאם של ספירמן נערך בין השפע היחסי של 15 מיקרוביוטות מעיים שונות (ברמת הסוג) לבין רמת ביטוי ה-mRNA של TJs, אחוז תאי החיסון וכן ריכוז הציטוקינים במעיים בקרב שתי הקבוצות. ערכי Spearman r נעים בין -0.5 (כחול) ל-0.5 (אדום)

הפניות

1. שמיד, סי (2021). צעד קרוב יותר ל-GVL ללא GVHD. דם, 137(19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132

2. Chang, Y., Zhao, X., & Huang, X. (2018). אסטרטגיות לשיפור ושימור השפעות אנטי-לוקמיה מבלי להחמיר מחלת שתל לעומת מארח. Frontiers in Immunology, 9, 3041. https:// doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041

3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018). עריכה מדויקת של מיקרוביוטת המעיים משפרת את הקוליטיס. טבע, 553(7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172

4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C (2018). חיידקי מעיים המקודמים באופן סלקטיבי על ידי סיבים תזונתיים מקלים על סוכרת מסוג 2. מדע (ניו יורק, ניו יורק), 359(6380), 1151–1156. https://doi.org/10.1126/science.aao5774

5. Shono, Y., & van den Brink, MRM (2018). פגיעה במיקרוביוטה במעיים בהשתלת תאי גזע המטופואטיים אלוגניים. ביקורות טבע. סרטן, 18(5), 283–295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10

6. Stafas, A., Burgos da Silva, M., & van den Brink, MRM (2017). המיקרוביוטה של ​​המעי בהשתלת תאים המטופואטיים אלוגניים ומחלת שתל מול מארח. דם, 129(8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394

7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H. ., & Chen, T. (2020). המטבוליט המיקרוביאלי במעיים trimethylamine N-oxide מחמיר GVHD על ידי גרימת קיטוב מקרופאגים M1 בעכברים. דם, 136(4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990

8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C. ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). מטבוליטים שמקורם במיקרוביום במעיים מווסתים את הנזק לתאי האפיתל של המעי ומפחיתים את מחלת השתל לעומת המארח. Nature Immunology, 17(5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400

9. דייב, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK, & Tomar, GB (2022). תאי גזע מזנכימליים חניכיים אנושיים שומרים על מאפייני הגדילה והאימונומודולטורים שלהם ללא תלות בגיל התורם. Science Advances, 8(25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504

10. Zhao, K., & Liu, Q. (2016). היישום הקליני של תאי סטרומה מזנכימליים בהשתלת תאי גזע המטופואטיים. Journal of Hematology & Oncology, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z

11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021). מאפיינים ופוטנציאל טיפולי של תאי גזע אנושיים שמקורם באמניון. International Journal of Molecular Sciences, 22(2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970

12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F., & Xia, Y. (2020). תאי גזע מזנכימיים מי שפיר אנושיים מקדמים התחדשות עצם אנדוגנית. Frontiers in Endocrinology, 11, 543623. https:// doi.org/10.3389/fendo.2020.543623

13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011). קרום מי השפיר האנושי כמקור חלופי לתאי גזע לרפואה רגנרטיבית. בידול; מחקר במגוון ביולוגי, 81(3), 162–171. https:// doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005

14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H., & Ping, B. (2016). השוואה של מאפיינים ביולוגיים ופעילות מדכאת חיסונית בין תאי גזע מזנכימיים מי שפיר אנושיים לתאי גזע מזנכימליים של מח עצם אנושי. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https://doi.org/10.7534/j.issn.1009-2137.2016.03.041

15. Gao, Y., Li, W., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Sun, H., Huang, L., He, Y. ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q., & Ping, B. (2021). תאי גזע מזנכימיים מי שפיר אנושיים מעכבים aGVHD על ידי ויסות האיזון של תאי Treg ו-T efector. Journal of Inflammation Research, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054

16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM, & Ferrara, JL (1996). מודל ניסיוני של תסמונת דלקת ריאות אידיופטית לאחר השתלת מח עצם: I. התפקידים של אנטיגנים H מינוריים ואנדוטוקסין. דם, 88(8), 3230–3239.

17. Yañez, R., Lamana, ML, García-Castro, J., Colmenero, I., Ramírez, M., & Bueren, JA (2006). לתאי גזע מזנכימליים שמקורם ברקמת שומן יש תכונות מדכאות חיסוניות in vivo הניתנות לשליטה במחלת שתל מול מארח. תאי גזע (דייטון, אוהיו), 24(11), 2582–2591.

18 Hooper, LV, Littman, DR, & Macpherson, AJ (2012). אינטראקציות בין המיקרוביוטה למערכת החיסון. מדע (ניו יורק, ניו יורק), 336(6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/ science.1223490

19. Kelly, K., & Rasko, JEJ (2021). תאי סטרומה Mesenchymal לטיפול במחלת שתל מול מארח. Frontiers in Immunology, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616

20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022) ). תאי סטרומה Mesenchymal לטיפול בשתל חריף וכרוני עמיד לסטרואידים לעומת מחלת המארח: חווית שימוש רב-מרכזית. רפואה תרגום תאי גזע, 11(4), 343–355. https://doi.org/10.1093/ stcltm/szac003

21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021). תאי גזע מזנכימליים שמקורם באמניון אנושיים מחלישים מחלת שתל מול מארח קסנוגני על ידי מניעת הפעלה ושגשוג של תאי T. Scientifc Reports, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s{10}}י

22. Yamahara, K., Harada, K., Ohshima, M., Ishikane, S., Ohnishi, S., Tsuda, H., Otani, K., Taguchi, A., Soma, T., Ogawa, H. ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K., & Ikeda, T. (2014). השוואה בין תכונות אנגיוגניות, ציטו-פרוטקטיביות ודיכוי חיסוני של תאי גזע מזנכימליים שמקורם ב-Amnion ו-chorion. PLoS One, 9(2), e88319. https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0088319

23. Yamahara, K., Hamada, A., Soma, T., Okamoto, R., Okada, M., Yoshihara, S., Yoshihara, K., Ikegame, K., Tamaki, H., Kaida, K. ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y. (2019). בטיחות ויעילות של תאי גזע מזנכימליים (AM01) שמקורם ב-Amnion בחולים עם מחלת שתל מול מארח חריפה עמידה בסטרואידים לאחר השתלת תאי גזע המטופואטיים אלוגניים: פרוטוקול מחקר עבור ניסוי יפני שלב I/II. BMJ Open, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop en-2018-026403

24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y., & Wu, D. (2021). תפקידים של המיקרוביוטה של ​​המעי ומטבוליטים מיקרוביאליים ב-GVHD חריף. Experimental Hematology & Oncology, 10(1), 49. https://doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3

25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM, & Holler, E. (2017). פתופיזיולוגיה של GvHD וסיבוכים עיקריים אחרים הקשורים ל-HSCT. Frontiers in Immunology, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079

26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020). תאי גזע מזנכימליים שמקורם בתאי גזע עובריים מקדמים את שלמות אפיתל המעי הגס והתחדשות על ידי העלאת IGF במחזור הדם -1 בעכברי קוליטיס. Theranostics, 10(26), 12204– 12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683

27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C., & Wang, L. (2022). Berberine משפר את aGVHD על ידי שיפוץ מיקרוביוטה במעיים, דיכוי איתות TLR4 ותיקון מחסום המעי הגס עבור עיכוב דלקתיות NLRP3. כתב עת לרפואה סלולרית ומולקולרית, 26(4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158

28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, ​​X., & Song, H. (2022). מיקרוביוטה של ​​המעי משתתפת בהשפעה המגנה של HO-1/BMMSCs על השתלת כבד עם השתלות כבד סטאטוטיות בחולדות. Frontiers in Microbiology, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567

29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M., & Pamer, EG (2014). ההשפעות של מגוון חיידקי מערכת המעי על תמותה בעקבות השתלת תאי גזע המטופואטיים אלוגניים. דם, 124(7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ blood-2014-02-554725

30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). בלאוטיה במעיים קשורה למוות מופחת כתוצאה ממחלת שתל לעומת מארח. ביולוגיה של השתלות דם ומח: כתב העת של האגודה האמריקאית להשתלות דם ומח, 21(8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016

31. Le Bastard, Q., Chevallier, P., & Montassier, E. (2021). מיקרוביום בטן בהשתלת תאי גזע המטופואטיים אלוגניים ושינויים ספציפיים הקשורים למחלת שתל חריפה לעומת מארח. World Journal of Gastroenterology, 27(45), 7792–7800. https://doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792

32. לי, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H. ., & Xiao, C. (2020). תאי גזע מזנכימליים טבוריים אנושיים מציגים פוטנציאל טיפולי בדלקת מפרקים שגרונית על ידי ויסות אינטראקציות בין חסינות למיקרוביוטה של ​​המעי באמצעות קולטן הפחמימנים של Aryl. Frontiers in cell and developmental biology, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131

33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H., & Sun, T. (2020). תאי גזע מזנכימליים שמקורם בשומן מחלישים פגיעות ריאות חריפות ומשפרים את המיקרוביוטה של ​​המעי בחולדות ספיגה. מחקר וטיפול בתאי גזע, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5

34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D., & Dow, S. (2018). תאי גזע Mesenchymal (MSC) המופקים מתאי גזע מושרים פלוריפוטנטיים (iPSC) המקבילים ל-MSC שמקורו בשומן בקידום ריפוי מעיים ונורמליזציה של מיקרוביום במודל של מחלות מעי דלקתיות של עכברים. רפואה תרגום של תאי גזע, 7(6), 456–467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.17-0305

35. Li, J., Zou, C., & Liu, Y. (2022). שיפור של אלרגיה למזון הנגרמת על ידי אולבומין בעכברים על ידי אספקה ​​ממוקדת בפי הטבעת ובמעי הגס של Cyanidin-3-O-Glucoside. Foods (באזל, שוויץ), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542

36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Hosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, H., Konishi, K., Miyachi, M., Kawashima, H., Mizuguchi, K. ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z., & Kunisawa, J. (2022). סיווג התרחשות של דיסליפידמיה על סמך חיידקי מעיים הקשורים לצריכת שעורה. Frontiers in Nutrition, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469

37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022). תוספת של ויטמין D3 תוך שרירי במינון גבוה משפיעה על מיקרוביוטת המעיים של חולים עם זיהום ב-clostridioides diffile. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987

38. Meyer, RK, Lane, AI, Weninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D., & Duca, FA (2022). אוליגופרוקטוז משחזר רמות חומצות שומן קצרות שרשרת לאחר הארוחה במהלך האכלה עתירת שומן. השמנת יתר (Silver Spring, Md.), 30(7), 1442–1452. https://doi.org/ 10.1002/oby.23456

39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) דפוסי גיל מתכנסים ומתפצלים של מגוון מיקרוביוטה במעיים בבני אדם ופרימטים לא אנושיים. M-Systems: e151221. https://doi.org/10.1128/msystems.01512-21

40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C., & Liu, B. (2022). שיפור של סוכרת סוג 2 על ידי קואורדינציה 6 החדשנית, 8-guanidyl luteolin quinone-chromium באמצעות מנגנונים ביוכימיים ואינטראקציה של מיקרוביוטה במעיים. כתב עת למחקר מתקדם, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003

41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 מקל על סטאטוזיס כבד כרונית הנגרמת על ידי אלכוהול ופגיעה בכבד בעכברים באמצעות שחזור פורה הומאוסטזיס של המעיים. Food Research International (Ottawa, Ont.), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259

42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH, & Quraishi, MN (2022). סקירה שיטתית של סמנים ביולוגיים חזויים של תורם ומקבל של תגובה להשתלת מיקרוביוטה צואה בחולים עם קוליטיס כיבית. EBioMedicine, 81, 104088. https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088

43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y., & Zhang, Y. (2020). תובנות חדשות על הביולוגיה הבסיסית של מחלת שתל-מול-מארח חריפה. Haematologica, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.240291 44. Kayama, H., Okumura, R., & Takeda, K. (2020). אינטראקציה בין המיקרוביוטה, האפיתליה ותאי החיסון במעי. סקירה שנתית של אימונולוגיה, 38, 23–48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104

45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti. , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020). המיקרוביוטה של ​​המעי קשורה לדינמיקה של תאי מערכת החיסון בבני אדם. טבע, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8

46. ​​Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) האינטראקציות המשולשות בין מיקרוביוטה של ​​המעי, מיקוביוטה וחסינות המארח. ביקורות קריטיות במדעי המזון והתזונה: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J., & Chen, J. (2022). תפקידו של מחסום רירית המעי במחלה אוטואימונית: יעד פוטנציאלי. Frontiers in Immunology, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713