יחסי טביעת אצבע HPLC וספקטרום-אנטי-גידול אפקט לאפליה בין Mylabris Phalerata Pallas ל- Mylabris Cichorii Linnaeus

איש קשר: emily.li@wecistanche.com

Jian-Yong Zhang, Qi-Hong Chen, Xian Pei1, Rong Yan, Can-Can Duan, Yun Liu4, Xiao-Fei Li

בית ספר 1 לרוקחות, האוניברסיטה הרפואית Zunyi, Zunyi, סין,

2 מעבדת מפתח לפרמקולוגיה בסיסית של משרד החינוך ומעבדת המחקר הבינלאומית המשותפת לאתנו-רפואה של משרד החינוך, האוניברסיטה הרפואית Zunyi, Zunyi, Guizhou, סין.

3 בית הספר למדעי הרפואה הבסיסיים, האוניברסיטה הרפואית Zunyi, Zunyi, סין, מעבדת מפתח המבוססת על 4Guizhou Provincial College למניעת גידולים וטיפול בתרופות ייחודיות, האוניברסיטה הרפואית Zunyi, Zunyi, סין.

לחץ כאן כדי לקבל מידע נוסף על Cistanche anti-tumor

עיקרי הדברים

מחקר זה מספק שיטת HPLC ישימה, אמינה ויעילה יותר להבחנה בין שני מיני Mylabris. וכן, טביעת האצבע והספקטרום של HPLC-השפעות נגד גידוליםשולבו ושלושת הסמנים הדיפרנציאליים החשובים נמצאו לסמן חדש של Mylabris.

תַקצִיר

מטרה: הערכת אפליה בין שני מיני Mylabris מבוססת על טביעת אצבע HPLC וספקטרום-אפקט אנטי גידולימערכת יחסים. שיטות: במחקר זה, שיטת כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) פשוטה ויעילה המשלבת ניתוח כיומטרי וספקטרום-אפקט אנטי גידוליהקשר פותח להבחנה בין שני מינים של Mylabris: Mylabris phalerata Pallas (MP) ו- Mylabris cichorii Linnaeus (MC). תוצאות: בניתוח טביעת האצבע, נבחרו 14 פסגות אופייניות להערכת ההבדלים בין MP ו-MC באמצעות ניתוח הדמיון וזיהוי הדפוסים באמצעות PCA ו-OPLS-DA. כרומטוגרמות HPLC של דגימות מ-10 אזורים בסין הראו הבדלים בין MP ל-MC, ונמצאו 7 סמנים כימיים אופייניים. בספקטרום-אפקט אנטי גידוליניתוח יחסים, 4 סמני פעילות מילאו תפקיד חיוני בהפחתת ה-IC50 ועשויים להיות המרכיבים האנטי-גידוליים של Mylabris על ידי ניתוח יחסי אפור וניתוח רגרסיה ליניארית רב-משתנית. הניתוח הכימוטרי בשילוב עם תוצאות יחסי ספקטרום-אפקט הצביעו על כך שפסגות 2 (ציטוזין), 4 (לא ידוע) ו-14 (לא ידוע) היו סמנים דיפרנציאליים חשובים להבחנה בין שני המינים של Mylabris.

מסקנה: השיטה ישימה, אמינה ויעילה יותר כדי להבחין בין MP ו-MC, ותציע דרך חדשה להקלת בקרת האיכות של תרופות חרקים.

מילות מפתח: HPLC, טביעת אצבע, ספקטרום-אפקט אנטי גידולי, Mylabris, אפליה

רקע כללי

Mylabris, המכונה ban mao בסין, שימש כרפואה סינית מסורתית (TCM) לטיפול בפורונקל, כיבים בעלי שורשים עמוקים, מסת בטן, והוא גורם חשובאנטי גידולסוֹכֵן. בנוסף, הוא נמצא בשימוש נרחב באירופה כרפואה עממית [1]. המרכיב הפעיל העיקרי של Mylabris הוא Cantharidin, שהוא יעילאנטי גידולמתחם [2]. מחקרים פרמקולוגיים מודרניים הוכיחו כי למילבריס יש מספר פעילויות, והוא מוערך מאוד לטיפול בגידולים בגלל הכפול שלהאנטי סרטןתכונות והיכולת להגדיל את מספר הלויקוציטים [3-4]. נכון לעכשיו, נעשה שימוש נרחב ב-Mylabris בכמה מרשמים קליניים נגד קרצינומה של TCM בסין, כגון הזרקת Aidi וקפסולת מאו Comound ban.

על פי הפרמקופיה של הרפובליקה העממית של סין (גרסת 2015), Mylabris מוגדר כגוף מיובש של Mylabris phalerata Pallas (MP) ו-Mylabris cichorii Linnaeus (MC), אשר נבדלים במאפיינים הבוטניים, בדינמיקת האוכלוסייה ובאקולוגיה שלהם. 5-6]. Mylabris היא גם תרופה רעילה מאוד. מכיוון שהתרופות הזמינות בסין הן בדרך כלל תערובת של MP ו-MC, יש צורך לזהות את ההבדלים הכימיים והפעילות בין שני המינים.

מכיוון ש-TCM's מכילים מרכיבים ידועים ולא ידועים רבים, ניתוח פרופיל כמותי של המרכיבים הכימיים שלהם מהווה אתגר משמעותי. ביצועים גבוהים של כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC) ממלאת תפקיד חשוב בבקרת האיכות (QC) של TCM בגלל מאפייני הפרופיל הכוללים שלה של רוב התרכובות במערכת מורכבת. יתר על כן, לניתוח טביעות אצבע של TCMs יש יכולת שחזור ויציבות טובה עבור אימות מינים והערכת איכות, והוא מקובל על ידי ארגון הבריאות העולמי, מינהל המזון והתרופות הממלכתי של סין (SFDA) והסוכנות האירופית להערכת תרופות (EMEA). לאחרונה פותח ניתוח כיומטרי המשלב טביעת אצבע HPLC עבור QC והבחנה בין מקורות טבעיים מורכבים שונים [7]. עם זאת, זה לא יעיל להבחין בין ההבדלים ב-TCMs מכיוון שהוא לא יכול לשקף את ההבדלים המרכיבים הפעילים, וזה חשוב יותר לשימוש קליני. עד כה, ספקטרום-אנטי גידול השפעהנעשה שימוש בגישות יחסים כדי לזהות בהצלחה את המרכיבים הביו-אקטיביים של TCMs [8]. טביעת אצבע HPLC בשילוב עם ניתוח כיומטרי ויחסי השפעת ספקטרום-אנטי-גידול יבהירו טוב יותר את ההבדל בין מספר מקורות של TCMs.

לאחרונה דווחו כמה שיטות לקביעת התוכן של קנתרידין, שניתן להשתמש בהן כדי לקבוע את האיכות של Mylabris [9]. כמה טביעות אצבע כרומטוגרפיות יושמו גם עבור QC [10-11]. רק מחקר אחד השתמש בשיטה הכוללת שחרור גרדיאנט של התרכובות המסיסות במים של Mylabris מבוססת HPLC. בינתיים, נעשה שימוש רק בעשר דגימות, וללא דגימות MC [12]. למיטב ידיעתנו, הבחנה בין MP ו-MC על בסיס הרכב כימי ופעילות לא נחקרה בעבר.

מחקר זה נועד לפתח שיטה פשוטה ויעילה להבחין בין שני מינים של Mylabris באמצעות טביעת אצבע HPLC בשילוב עם ניתוח כיומטרי וספקטרום-אנטי גידולהשפעהמערכת יחסים, שתספק בסיס ל-QC של Mylabris. ניתן ליישם שיטה זו גם לזיהוי סמן QC של TCMs אחרים.

חומרים ושיטות

בסך הכל, 20 קבוצות של Mylabris phalerata Pallas (MP) ו-Mylabris cichorii Linnaeus (MC) נאספו ממחוזות שונים של סין (טבלה 1) וזוהו על ידי הפרופסור שלנו Xiao-Fei Li. דגימות השובר הופקדו במעבדות שלנו.

הציטוזין הסטנדרטי הייחוס, אורידין, גואנוזין ואדנוזין נרכשו מ-ChengduPush Biotechnology Co., Ltd. (צ'נגדו, סין). אצטוניטריל ומתנול בדרגת HPLC נרכשו מ-Thermofisher Scientific (Fairlawn, NJ, ארה"ב). המים הטהורים של ווטסון שימשו לאורך כל המחקר. כימיקלים וממיסים אחרים היו בדרגה אנליטית והתקבלו מגיב Aladdin (שנגחאי, סין), Chengdu Kelong Reagent (צ'נגדו, סין) ומגיב כימי סינופרם (בייג'ינג, סין)

מכשיר ותנאים כרומטוגרפיים

ניתוח HPLC נערך באמצעות מערכת Agilent 1260 Infinity HPLC ב-30 מעלות על Phenomenex Synergy Polar-RP80 (4.6 מ"מ ×250 מ"מ, 5 מיקרומטר) לטביעת אצבע. להפרדה נעשה שימוש בשחרור גרדיאנט ליניארי עם eluents A (מים/חומצה קרחונית, 100:1, v/v) ו-B (מתנול). תוכנית הגרדיאנט פותחה באופן הבא: 0-1 דקות, 3.0-4.6 אחוז B; 1-9 דקות, 4.6-6.8 אחוז B; 9-25 דקות, 6.8-51.0 אחוז B; 25-30 דקות, 51.0-100 אחוזים. קצב הזרימה של השלב הנייד היה 1.0 מ"ל/דקה. הכרומטוגרמה נוטרה ב-254 ננומטר. לאחר תקופת איזון של 15 דקות, 10 μL של דגימות שימשו להזרקה.

הכנה לדוגמא

הדגימות המיובשות נמחצו לאבקה, ו-2.5 גרם מכל דגימה אבקה חולצו פעמיים עם 50 מ"ל של 75 אחוז אתנול ברפלוקס למשך 1.5 שעות בכל פעם. הדגימה שחולצה עורבבה ורוכזה בלחץ מופחת ל-20 מ"ל. לאחר מכן זרעו התערובת עם 80 מ"ל מים למשך 24 שעות מתחת ל-4 מעלות. לאחר מכן, התמצית עברה צנטריפוגה ב-3000 גרם דקות-1 למשך 10 דקות כדי להפריד את הסופרנטנט. הסופרנטנט רוכז בלחץ מופחת ל-25 מ"ל. לבסוף, הסופרנטנט סונן דרך סרט 0.22 מיקרומטר Millipore לפני ניתוח HPLC.

אימות מתודולוגיה

שיטת HPLC אומתה לדיוק, שחזור ויציבות (0 שעות, 2 שעות, 4 שעות, 8 שעות, 12 שעות, 24 שעות). האימות הוערך על סמך זמן השמירה (RT) ושטח השיא (PA). לבסוף, טביעות אצבע כימיות של 20 קבוצות של Mylabris הוקמו כדי לזהות את המאפיינים הכימיים המשולבים של תרכובות מרובות. כמה טכניקות כיומטריות הוכנסו על טביעת האצבע הכימית לצורך ניתוח.

ניתוח זיהוי דפוסים

הבדלים בין שני מינים של אזורי השיא הוערכו עבור מובהקות סטטיסטית באמצעות מבחן t של Student ללא התאמה. ערך p קטן מ-0.05 נחשב מובהק סטטיסטית. כשיטה קלאסית ללא פיקוח, ניתוח רכיבים עיקריים (PCA) מיושם באופן נרחב לניתוח נתונים סטטיסטי. במקום להשתמש במשתנים רבים, PCA לוקח מספר קטן של מחשבים אישיים מבלי לאבד מידע רב, ולאחר מכן מוצגות עלילות ניקוד להפרדה חופשית של תצפיות. במחקר זה, PCA נערך על אזורי השיא המנורמלים של כל רכיב בטביעות האצבע של HPLC באמצעות תוכנת SIMCA-P plus 14.0 (Umetrics, Umea, שוודיה) כדי למצוא את ההבחנה בין שני המינים של Mylabris.

להבחנה מועדפת יותר בין שני המינים של Mylabris, יושמה שיטה מפוקחת של אנליזה של אבחנה של ריבועים קטנים חלקיים אורתוגונליים (OPLS-DA) כדי לנתח את ההבדלים באזורי השיא המנורמלים של כל רכיב בטביעות האצבע של HPLC. ערך VIP הוא סכום משוקלל של ריבועים של משקלי OPLS, המשקפים את התרומה היחסית של כל משתנה X למודל. המשתנים עם VIP > 1, יחד עם S-plot, נחשבו כבעלי השפעה על הפרדת הדגימות בחלקות הניקוד שנוצרו מניתוח OPLS-DA. לאחר מכן, הושגו הסמנים הכימיים האופייניים לאפליה.

ניתוח יחסי השפעת ספקטרום-אנטי גידול

כדי לחקור אתאנטי גידוללהשפיע על אזור שיא עבור דגימות Mylabris המשולבות עם נתוני טביעת אצבע, ולהשוות את ההבדלים בין שני המינים, המתאם בין שיא טביעת האצבע לביןאַנְטִי-גידול סרטנינחקרו ההשפעות. שתי שיטות המשלבות ניתוח יחסי אפור וניתוח רגרסיה ליניארית רב-משתנית (MLRA) יושמו על ידי SPSS19.0 (IBM, ארה"ב) ו-GM6.0 soft (Grey Systems Theory Institution, NUAA, סין). האַנְטִי-גידול סרטניהבדיקה בוצעה על ידי השיטות שפורסמו [12], תאי קו תאי קרצינומה hepatocellular carcinoma אנושיים נשמרו במדיום RPMI1640 בתוספת של 10 אחוז סרום בקר עוברי. התאים גודלו באווירה לחה המכילה 5% CO2 ב-37 C. שיטת SRB שימשה להערכת התפשטות עבוראַנְטִי-גידול סרטניפעילויות, לאחר מכן חושב ה-IC50 של תאי HepG2, ולבסוף, נעשה שימוש ב-IC50 ובאזורי השיא המנורמלים לניתוח כיומטרי. לאחר מכן, התקבלו סמני הפעילות האופייניים של Mylabris.

תוצאות ודיון

אופטימיזציה של תנאי המיצוי

להפקה מספקת של תרכובות מומסות במים מ- Mylabris, מערכת המיצוי עברה אופטימיזציה. אולטרסאונד וריפלוקס הראו שניתן לחלץ תרכובות אלו בצורה מיטבית על ידי ריפלוקס.

אופטימיזציה של שיטת HPLC

כדי להשיג פסגות כרומטוגרפיות מקסימליות לתיאור התכונה הכוללת של העשב, נחקרו הרכב העמודה הכרומטוגרפית, השלב הנייד ואורכי גל זיהוי (200, 254, 265 ו-278 ננומטר). התוצאות הראו שעמודת Phenimenex Synergy Polar-RP80, מים (המכילים 1 אחוז חומצה קרחונית) ומתנול, ו-254 ננומטר היו התנאים הטובים ביותר לניתוח Mylabris HPLC (איור 1), המבנה של 4 חומרים סטנדרטיים מוצג באיור 2 .

אימות שיטה

במחקר זה, 14 פסגות הופרדו היטב ושימשו כ"פסגות נפוצות". הדיוק, החזרה והיציבות התבססו על זמן השמירה (RT) ושטח השיא (PA). ערכי ה-RSD של RT ו-PA עבור דיוק (n=6) לא עלו על 0.2 ו-4 אחוזים, בהתאמה; ערכי ה-RSD של RA ו-PA לחזרות (n=6) היו מתחת ל-0.2 ו-4 אחוזים, בהתאמה, וערכי ה-RSD ליציבות (0-24 h) היו פחות מ-{ {10}}.4 ו-5 אחוזים, בהתאמה, מה שהצביע על כך שהדגימות היו יציבות תוך 24 שעות. תוצאות אלו המחישו כי איכות הדגימות שנחקרו ושיטת HPLC היו יציבות ומבוקרות היטב.

הערכת דמיון בטביעת אצבע

The fingerprint similarity analysis was used to evaluate the similarity of HPLC peaks. The similarities of MP and MC were calculated by the reference HPLC fingerprint, respectively. As shown in Table 1, except for two MP samples (from Guizhou2 and Guizhou5) with lower similarities (0.880 and 0.920, respectively), other samples of MP were >0.930. The similarities of MC samples were >{{0}}.921 למעט דגימות MC (מ-Guizhou2 ו-Guizhou4), שהדמיון ביניהן היה 0.888 ו-0.887, בהתאמה. נתונים אלה הצביעו על כך שהאיכות של Mylabris בתוך מין אחד הייתה יציבה. עם זאת, קווי הדמיון של שלוש דגימות MP בלבד בהשוואה לטביעת האצבע של HPLC הייחוס היו > 0.930; והדמיון של שתי דגימות MC בלבד בהשוואה לטביעת האצבע של HPLC הייחוס היו > 0.921. תוצאות אלו הראו ששני המינים של Mylabris היו שינויים ניכרים באזורי השיא מסוימים.

אפליה של MP ו-MC על ידי ניתוח זיהוי תבניות

For global analysis of the difference, PCA was used to find the quality variation of the samples from the two species of Mylabris. Figure 3 shows that the two-dimensional PCA model was constructed by the first two PCs, which included approximately 61.8% of the original data. The score plot showed that the MP and MC samples could not be separated by PCA. To understand the differences between MP and MC, an OPLS-DA model was established. As shown in Figure 4, the Mylabris samples could be classified into two groups with R2X=0.502, R2Y=0.492, and Q2=0.0769 as compared to the PCA model. These results showed that the OPLS-DA model was more suitable than the PCA model for distinct separation of the test samples based on their different components. From the S-plot of OPLS-DA, peak markers including peaks 1, 2, 4, 7, 9, 12, and 14 between MP and MC could be found (Figure 5). Based on VIP>1, פסגות 1, 2, 4, 7, 9, 12 ו-14 עשויים להיות המשתנים המשמעותיים ביותר בהבחנה בין שני המינים (איור 6). קבוצת השיא (1, 2, 4, 7, 9, 12 ו-14) עשויה למלא תפקיד חיוני בהבחנה בין MP ו-MC כסמנים כימיים אופייניים.

קשר ספקטרום-אפקט על ידי ניתוח יחסי אפור

To further evaluate the relationship between the variations of normalized peak area and IC50, grey relational analysis (GRA) was performed. The influence rank by normalized peak area was P13>P14>P3>P2>P12>P4>P9>P1>P10>P7>P6>P8>P5> P11 as shown in Table 2. The results indicated that the top-6 peak including peaks 13, 14, 12, 2, 3, and 4 were the main influencing factors for the antitumor effect based on the standard of Relative Grey correlative degree (RGCE) >0.75.

יחסי ספקטרום-אפקט על ידי MLRA

מודל MLRA הוא שיטת המודלים הנפוצה ביותר להסקת מורכבות הקשר בין שני משתנים או יותר ותגובה שנבנתה על ידי הנוסחה הבאה

כאשר Y הוא הערך המשוער ומייצג את התגובה; Xn הוא משתנה בלתי תלוי, b{{0}} הוא החתך, ו-bn הוא מקדם הרגרסיה של Xn. במחקר זה, MLRA יושם כדי לבסס את הקשר בין טביעת האצבע ליעילות בין ערכי אזורי השיא בטביעות אצבע HPLC לבין ה-IC50 של אנטי-HepG2, ולאחר מכן למצוא את הרכיבים האנטי-גידוליים האפשריים. שילוב הנתונים נמצא על ידי מודל MLRA נפוץ, שאינו מתאים לחקור את המתאם בין Y (IC50) ו-X (PA). נעשה שימוש במודל PCA MLRA כדי לחקור את הקשר בין טביעות אצבע-אפקט, וששת המחשבים הראשונים עם שיעור תרומה של שונות מצטברת: 91.068 אחוזים נבחרו לניתוח. לבסוף, המשוואה הבאה הוקמה בהתאם לפלט ה-SPSS והמחשבים האישיים: IC50=1.115864 פלוס （ 1.87268PA1- 699.722PA2 בתוספת 25.7138PA3 - 24.1528PA4 בתוספת 7.22878PA{{ 23}}.2114PA6 פלוס 2.95283PA7- 15.5305PA8 פלוס 13.0297PA9 פלוס 22.5683PA10 - 10.3462PA11 פלוס 123.762PA12 פלוס 31.0428PA.{0} (R היה 0.682, P <>

ניתוח אינטגרלי של שני מינים של Mylabris

הניסוי הראה שניתן להשתמש בטביעת האצבע של HPLC כדי לשקף את המאפיינים הכימיים של Mylabris. אלגוריתמי הדמיון, PCA ו-OPLS-DA יושמו כדי למצוא את ההבדל בין MC ל-MP. קבוצת השיא (1, 2, 4, 7, 9, 12 ו-14) הוגדרה כסמנים כימיים אופייניים.

בנוסף, גם GRA וגם MLRA הוכיחו את עצמם כאמצעי מספק להמשך הפליה. שילוב תוצאות הניתוח של GRA ו-MLRA, פסגות 2, 4 ו-14 כסמני פעילות של Mylabris אמור להיות אחראי על האפקט האנטי-גידולי, שעשוי להיות הבסיס החומרי הפרמקודינמי של Mylabris.

הסמנים הדיפרנציאליים החשובים הוגדרו לשיא עם תכונות כימיות וסמן פעילות אופייניות. אז, בין MC ו-MP בטביעות אצבע של HPLC לאחר ניתוח יחסי ספקטרום-אפקט, הפסגות 2 (ציטוזין), 4 (לא ידוע) ו-14 (לא ידוע) היו סמנים דיפרנציאליים חשובים להבדלים בין MP ל-MC כפי שמוצג באיור 7.

סיכום

לסיכום, במחקר הנוכחי, הוצעה שיטת HPLC לטביעת אצבע כימית של MP ו-MC. על ידי שילוב של טביעת אצבע HPLC, PCA וניתוח קשרי ספקטרום-אפקט כגון GAS ו-MLRA, ניתן היה להבחין בין התכונות הכימיות והתרופתיות של שני מינים קרובים של Mylabris. זה הצביע על כך שתרכובות מהפסגות 2(ציטוזין), 4 (לא ידוע) ו-14 (לא ידוע) כסמנים דיפרנציאליים חשובים מילאו תפקידים דומיננטיים בהבחנה בין MP ל-MC. יש לזהות את המבנה של פסגות 4 ו-14 באמצעות טכנולוגיה אחרת. השיטה של ​​טביעת אצבע HPLC בשילוב עם ניתוח סטטיסטי, כיומטרי וניתוח קשרי ספקטרום-אפקט הוכחה כיעילה בגילוי רכיבי סמן או לקידום QC שלתרופות צמחיות.

הפניות

1 וואנג GS. שימושים רפואיים של Mylabris בסין העתיקה ומחקרים אחרונים. J Ethnopharmacol 1989, 26(2): 147-162.

2. Lin YS, Lia YH, Peng ZP, et al. קביעת תוכן קנתרידין והשפעתו המעכבת על תאי הפטומה HepG2 אנושיים. Biomed Res-India 2016, 27(2): 533-536.

3. Xu MZ, Lee WS, Kim MJ, et al. Acyl-CoA: פעילויות מעכבות כולסטרול acyltransferase של אמידים חומצות שומן מבודדות מ-Mylabris phalate Pallas. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14(16): 4277-4280.

4. יום RM, Harbord M, Forbes A, et al. שלפוחיות קנתרידין: טכניקה לחקירת סחר בלייקוציטים וייצור ציטוקינים באתרי דלקת בבני אדם. J Immunol Methods 2001, 257(1-2): 213-220.

5. Mo RY, Sun NX, Peng R. מחקר על מזון מועדף של Mylabris phalerata בוגר באוכלוסיות גיאוגרפיות שונות. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2014, 39(22): 4293-4296.

6. Wang XM, Cheng XS, Li XF. מאפיין ביולוגי של Meloidae והאכלה מלאכותית שלו. Guizhou Agricultural Sciences (Chin) 2007, 35(2): 140-142.

7. Yang Y, Zhang J, Jin H, et al. ניתוח כמותי בשילוב עם טכנולוגיית טביעות אצבע וניתוח כיומטרי מיושם להערכת שישה מינים של פריז פראית באמצעות UHPLC-UV-MS. J Anal Methods Chem 2016: e3182796.

8. Liu Y, Liu Z, Sun G, et al. ניטור והערכת עקביות האיכות של טבליות Compound Bismuth Aluminate על ידי שיטת טביעת אצבע יחס כימתית פשוטה בשילוב עם קביעה בו זמנית של חמש תרכובות ובקורלציה עם פעילות נוגדת חמצון. Plos One 2015; 10: e0118223.

9. מהדיניה A, Asiabi M, Jabbari A, et al. ניתוח של קנתרידין בחיפושיות שלפוחיות שווא (Coleoptera: Oedemeridae) על ידי מיקרו-מיצוי שלב מוצק בראש וספקטרומטריית גז-מסה. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2011, 879(27): 2897-2901.

10. Li XM, Xiao JS. מחקר על טביעות האצבעות GC של Mylabris phalerata. China Journal of Hospital Pharmacy (Chin) 2010; 30(2): 116-119.

11. Luo CX, Sun, GX ו-Shi XF. טביעות אצבע דיגיטליות של Mylabris מאת HPCE. בית מרקחת מרכז דרום (סנטר) 2008; 6(2): 230-235.

12. Sun GX, Luo CX, ו-Wang, Z. מחקר על טביעות האצבע הדיגיטליות HPLC של Mylabris. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis (Chin) 2008;28(7): 1031-1036.

13. Guo K, Li XF, Yan R, et al. פעילות תאי HepG 2 אנטי-אנושית של קנתרידין שמקורה במחוז Guizhou והאזורים הסובבים אותה. כתב עת לרפואה ובריאות מודרנית (סנטר) 2016; 32(5): 648-650.