דיאטה עתירת זרחן גורמת להגברת ויסות של ביטוי Bmp2 ו-Spp1 MRNA בכליית חולדה

הירושי מאצוזאקי, קיקו מורי, שינצ'י קצומטה 

כדי להבהיר את המנגנון של התפתחות נפרוקלצינוזה הנגרמת על ידי דיאטה עתירת זרחן (P), התמקדנו בחלבונים הקשורים לעצם כגון חלבון מורפוגנטי 2 ואוסטאופונטין. מחקר זה חקר את ההשפעות של דיאטה עתירת P על ביטוי ה-mRNA של Bmp2 ו-Spp1 בחולדהכִּליָה. חולדות ויסטאר חולקו לשתי קבוצות והוזנו מדיאטת ביקורת (קבוצת ביקורת) או דיאטת גבוהה P (קבוצת גבוהה-P).כִּליָהריכוזי סידן ו-P עלו משמעותית בקבוצת ה-P הגבוה בהשוואה לקבוצת הביקורת. ביטוי ה-mRNA של Bmp2 וגם של Spp1 גדל באופן משמעותי בקבוצת ה-P high בהשוואה לקבוצת הביקורת. תוצאות אלו מצביעות על כך שדיאטה עשירה ב-P גורמת להגברת ויסות של Bmp2 ו-Spp1 mRNA בכִּליָה.

מילות מפתח: דיאטה עתירת זרחן, נפרוקלצינוזיס, Bmp2, Spp1,כִּליָה, עכברוש

למידע נוסף אנא צור קשר:emily.li@wecistanche.com

cistanche לטיפול במחלת כליות

מבוא

Nephrocalcinosis היא הפרעה המאופיינת על ידי משקעי סידן (Ca) בפרנכימה הכלייתית. זרחן תזונתי (P), בפרט, הוא גורם מרכזי בהתפתחות הפרעה זו. מתן דיאטה עתירת P הוכח כגורם לעלייה בריכוז Ca ב-כִּליָהומשקעי Ca בפרנכימה הכלייתית1-6）. למרות שהשפעתה של דיאטה עתירת P על התפתחות נפרוקלצינוזיס עמדה במוקד המחקר המתמשך, מעט ידוע על המנגנון האחראי להתפתחות הפרעה זו. לפיכך, יש צורך לפתור בעיה זו בזמן.

דיווחנו כי בבדיקה היסטולוגית באמצעות מיקרוסקופיה אלקטרונית העברה, נצפו גבישים דמויי מחט בצורת מחט בצינוריות הכליה של חולדות שניזונו בתזונה עתירת P6, 7）. מיקרואנליזה בקרני רנטגן הראתה כי משקעי Ca הנגרמים על ידי דיאטה עתירת P מורכבים בעיקר מ-Ca ו-P7）. תוצאות אלו גילו כי משקעי Ca הנגרמים על ידי דיאטה עתירת P הם סוג של הידרוקסיאפטיט. בהתבסס על ממצא זה, אנו מניחים שהתפתחות נפרוקלצינוזיס נשלטת על ידי מנגנון דומה לזה של יצירת עצם. לכן, המחקר הנוכחי התמקד בחלבונים הקשורים לעצם כגון חלבון מורפוגנטי 2 (BMP2). BMP2 הוא גורם אוסטאוגני המציג פעילות הגורמת לאוסטאוגנזה8, 9）. ראוי לציין כי BMP2 זוהה כגורם המעורר חוץ רחמיעֶצֶםהיווצרות10, 11). לפיכך, שיערנו שאם ל-BMP2 יש תפקיד חשוב בהתפתחות של נפרוקלצינוזה, הביטוי של חלבון זה ב-כִּליָהיהיה מווסת על ידי דיאטה עתירת P. מטרת המחקר הנוכחי הייתה לקבוע האם דיאטה עתירת P משפיעה על ביטוי ה-mRNA של Bmp2 ב-כִּליָה.

בינתיים, המחקר הקודם שלנו דיווח שדיאטה עתירת P מעלה את ביטוי האוסטאופונטין (OPN) באבובות הכליה באמצעות ניתוח אימונוהיסטוכימי, מה שמרמז כי OPN עשוי להיות מעורב בפיתוח משקעי Ca הנגרמים על ידי דיאטה עתירת P12). לכן, חקרנו את השינויים בביטוי Spp1 mRNA ב-כִּליָהגם כן.

תוצאות המחקר הנוכחי עשויות לספק תובנות חשובות לגבי המנגנון האחראי להתפתחות נפרוקלצינוזיס הנגרמת על ידי דיאטה עתירת P.

חומרים ושיטות

בעלי חיים ודיאטות.

המחקר הנוכחי אושר על ידי ועדת השימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת טוקיו לחקלאות, וכל בעלי החיים טופלו בהתאם להנחיות האוניברסיטה לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (אישור מס' 300049).

חשוב לציין שחולדות נקבות מפתחות נפרוקלצינוזיס בקלות רבה יותר מחולדות זכרים13, 14）. בנוסף, דיווחנו שדיאטה עתירת P מגבירה את ביטוי OPN באבובות הכליות של חולדות נקבות12). המחקר הנוכחי השתמש אז בחולדות נקבות כחיות ניסוי. חולדות Wistar בנות ארבעה שבועות (קליה יפן, טוקיו, יפן) שוכנו בכלובים בודדים של רשת תיל מנירוסטה. במהלך תקופת הניסוי, כלובים אותרו בחדר עם תאורה מבוקרת תחת 12-שעות אור: מחזור כהה (אור, 0800-2000 שעות), טמפרטורה של 22 ± 1 מעלה ולחות יחסית של 60 אחוז עד 65 אחוז.

הרכב הדיאטות הניסיוניות מוצג בטבלe 1. דיאטות ניסוי הוכנו בהתייחס לדיאטת AIN{{0}}G15). הדיאטות הניסיוניות הכילו שני ריכוזי P שונים (דיאטת ביקורת, 0.3 אחוז; דיאטה עתירת P, 1.5 אחוז). ריכוז ה-P בדיאטה עתירת P נקבע ל-1.5 אחוזים מאז המחקרים הקודמים שלנו הבחינו שריכוז P בתזונה של 1.5 אחוז גורם

nephrocalcinosis חמור 6, 7, 12, 14) וביטוי OPN גבוה12). בכל דיאטות הניסוי היה אותו ריכוז של Ca (0.5 אחוז). ריכוזי P ו-Ca, כפי שנקבעו על ידי ניתוח של דיאטות הניסוי, מוצגים בטבלe 1. לפני תחילת המחקר, כל החולדות עברו התאקלמות למשך 7 ימים, ובמהלכן ניתנה להן גישה חופשית לדיאטת הביקורת ולמים שעברו עינון. לאחר תקופת ההתאקלמות, חולקו החולדות באופן אקראי לשתי קבוצות עם משקל גוף ממוצע דומה והוזנו מדיאטת הביקורת (קבוצת הביקורת) או הדיאטה הגבוהה (קבוצת ה-P) למשך 14 ימים. חולדות קיבלו גישה חופשית לדיאטות הניסוי שהוקצו ולמים דה-יונים לאורך כל תקופת הניסוי. בסוף תקופת הניסוי, חולדות הורדמו על ידי הזרקה תוך צפקית של תערובת ההרדמה (מדטומידין, מידאזולם ובוטרפנול), ודם וכִּליָהנאספו דגימות לניתוח. דגימות דם בוצעו בצנטריפוגה והסופרנטנטים שימשו כדגימות סרום. כליות הוסרו וקפסולת הכליה נזרקה. הסרום וכִּליָהדגימות אוחסנו ב-80 מעלות עד להזדקקות לניתוח. הכליה הימנית שימשה לניתוח כמותי של Bmp2 ו-Spp1 mRNA, והשמאליתכִּליָהשימש לניתוח ריכוזי Ca ו-P.

ניתוח מינרלים.

דוגמאות של דיאטות ניסוי וכליותנאפרו ב-550 מעלות למשך 48 שעות בכבשן מופל, ומינרלים הופצו ב-1 מול/ליטר HCl לצורך ניתוח. ריכוזי Ca בתזונה הניסיונית וכליותנקבעו על ידי ספקטרופוטומטריית ספיגה אטומית16）. ריכוזי P בתזונה הניסיונית וכליותנותחו בשיטת Gomori17）.

ניתוח כמותי של mRNA Bmp2 ו-Spp1.

RNA כולל בודד מהכליה ההומוגנית באמצעות ריאגנט TRIzol (Life Technologies, CA, ארה"ב) בהתאם למפרטי היצרן. הכמות והטוהר של ה-RNA הוערכו באמצעות NanoDrop 2000c (Thermo Fisher Scientific, MA, ארה"ב). cDNA סונתז באמצעות SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix עבור qRT-PCR (Life Technologies) ולאחר מכן נתון ל-RT-PCR כמותי בזמן אמת באמצעות SYBR Select Master Mix (Life Technologies). פריימרים ספציפיים18-20) שימשו לניתוח של Bmp2 (קדימה, 5'-ACCGTGCTCAGCTTCCATCAC-3'; הפוך, 5'-TTCCTGCATTTTGTTCCCGAAA-3'), Spp1 (קדימה, 5'- TGAGACTGGCAGTGGTTTGC-3'; הפוך, 5'-CCACTTTCACCGGGAGACA-3'), ו-Gapdh (קדימה, 5'-TGGGAAGCTGGTCATCAAC-3'; הפוך, 5'-GCAT-CACCCCATTTGATGTT{{26} }'). תגובת ה-PCR בזמן אמת בוצעה באמצעות StepOne Real-Time PCR System (Applied Biosystems, CA, ארה"ב), ורמות ביטוי mRNA נורמלו לרמות Gapdh mRNA. הערך של קבוצת הביקורת נחשב ל-1.00.

ניתוח סטטיסטי.

התוצאות מוצגות כאמצעי ± SEM עבור כל קבוצה של 6 חולדות. לאחר ביצוע מבחן F כדי לקבוע את ההומוגניות של השונות, נעשה שימוש במבחן t של Student כדי לקבוע הבדלים משמעותיים בין שתי הקבוצות. אם ההומוגניות של השונות לא הייתה שווה, נעשה שימוש במבחן ה-t של Welch במקום במבחן ה-t של הסטודנט. הבדלים נחשבו מובהקים ב-p ＜ 0.05

תוצאות

משקל גוף, צריכת מזון וניתוח סרום.

משקל הגוף הסופי וצריכת המזון ירדו באופן משמעותי בקבוצת ה-P הגבוה בהשוואה לקבוצת הביקורת (שולחן 2). כִּליָהמשקל וריכוזי מינרלים.כִּליָהמשקלים רטובים ויבשים עלו משמעותית בקבוצת ה-P high בהשוואה לקבוצת הביקורת (שולחן 3). כִּליָהריכוזי Ca ו-P עלו באופן משמעותי גם בקבוצת ה-P הגבוה בהשוואה לקבוצת הביקורת.

ביטוי mRNA של Bmp2 ו-Spp1 כליות.

רמות Bmp2 mRNA בקבוצת ה-P הגבוהה עלו משמעותית בהשוואה לקבוצת הביקורת (תאנה.1A). ביטוי mRNA של Spp1 גדל באופן משמעותי גם בקבוצת P high בהשוואה לקבוצת הביקורת (תאנה. 1B).

דִיוּן

אחת ההשפעות הפיזיולוגיות הידועות של דיאטה עתירת P היא התפתחות של נפרוקלצינוזיס. במחקר הנוכחי, ריכוזי Ca ו-P בכליות עלו בקבוצת ה-P הגבוה בהשוואה לקבוצת הביקורת, מה שעולה בקנה אחד עם תוצאות המחקרים הקודמים1-6）. מחקרים קודמים דיווחו שציונים היסטולוגיים של נפרוקלצינוזיס היו מתואמים באופן חיובי עם ריכוזי Ca ו-P בכליות4, 21）. לפיכך, למרות שלא בוצעה תצפית היסטולוגית של הכליה במחקר הנוכחי, ריכוזי Ca ו-P מוגברים בכליות מצביעים על כך שנפרוקלצינוזיס נגרמה על ידי דיאטה עתירת P.

מכיוון שמרבצי Ca המושרים על ידי דיאטה עתירת P נחשבים בדרך כלל לסוג של הידרוקסיאפטיט6, 7), שיערנו שהתפתחות נפרוקלצינוזה נשלטת על ידי מנגנון דומה לזה של אוסטאו ג'נסיס. לפיכך, בדקנו את ההשפעות של דיאטה עתירת P על ביטוי Bmp2 mRNA בכליה. התוצאות

הראה כי ביטוי Bmp2 mRNA כלייתי גדל בקבוצת ה-high-P וכי דיאטת high-P גורמת להוספה של ביטוי mRNA של Bmp2 בכליה. ממצא זה עשוי לעזור להסביר את המנגנון של התפתחות נפרוקלצינוזיס המושרה על ידי דיאטה עתירת P. למרות שחסרות ראיות סופיות התומכות בהשערה שלנו, אפשרות אחת היא שהביטוי של גורמי שעתוק אוסטאוגניים מוגבר באזורים מסויידים בכליה. BMP2 משרה התמיינות אוסטאובלסט ויצירת עצם על ידי ויסות גורמי שעתוק אוסטאוגניים כגון Osterix, Runx2 ו- Msx28, 9）; לפיכך, BMP2 עשוי לקדם נפרוקלצינוזיס באמצעות ויסות של גורמי שעתוק אוסטאוגניים כאלה. נכון לעכשיו, התפקיד המפורט של BMP2 בהתפתחות של נפרוקלצינוזיס נותר לא ברור. בנוסף, מכיוון שרק ביטוי ה-mRNA של Bmp2 נמדד במחקר זה, לא ידוע אם יש הבדל בביטוי החלבון BMP2. עם זאת, התוצאות שלנו מצביעות על מנגנון אפשרי שבאמצעותו שינויים בביטוי BMP2 ממלאים תפקיד חזק בפתוגנזה של נפרוקלצינוזה הנגרמת על ידי דיאטה גבוהה.

המחקר הנוכחי התמקד בביטוי mRNA Spp1 בנוסף לביטוי mRNA של Bmp2. המחקר הקודם שלנו באמצעות ניתוח אימונוהיסטוכימי הצביע על רמות גבוהות של ביטוי OPN באבוביות הכליות של חולדות שניזונו בדיאטה עתירת P12）. המחקר הנוכחי מצא שביטוי Spp1 mRNA גדל פי 10- בקירוב בקבוצת ה-P high. תוצאות המחקרים הנוכחיים והקודמים מגלות שדיאטת P גבוהה גורמת לביטוי OPN בכליה. מצד שני, חוקרים אחרים הראו כי OPN כמטריצת אבן היא גורם חשוב ביצירת אבנים בדרכי השתן22, 23）; לפיכך, הדו"ח הקודם שלנו הציע כי ל-OPN עשוי להיות תפקיד כמרכיב מטריקס ביצירת משקעי Ca הנגרמים על ידי דיאטה עתירת P12). עם זאת, Paloian et al. לאחרונה דווח כי OPN משחק תפקיד במניעת נפרוקלצינוזיס הנגרמת על ידי דיאטה גבוהה ב-OPN KO24). כלומר, נראה שהתפקיד הפיזיולוגי של OPN על נפרוקלצינוזיס הנגרמת על ידי דיאטה גבוהה P הוא דיכוי ולא קידום של הסתיידותכִּליָה. יתר על כן, דיווחים קודמים מתוארים כי רמות OPN עולות כדי לקזז הסתיידות חוץ רחמית פתולוגית נוספת בכִּליָהווסקולטורה מכיוון ש-OPN מווסת למעלה באתר של הסתיידות פתולוגית.

כפי שהוזכר לעיל, המחקר הנוכחי הציע את החשיבות של BMP2 ו-OPN בנפרוקלצינוזיס הנגרמת על ידי דיאטה גבוהה. ראוי לציין כי ההשפעות של BMP2 ו-OPN על התפתחות נפרוקלצינוזיס נחשבות מווסתות על ידי מנגנונים שונים. הבדלים מכניסטיים אלה עשויים להצביע על כך שהמנגנון הבסיסי של נפרוקלצינוזיס הוא מסובך. הנקודה הבאה שיש לקחת בחשבון היא שעיכוב גדילה עשוי להשפיע על ביטוי mRNA של Bmp2 ו-Spp1 ב-כִּליָהמכיוון שהמחקר הנוכחי ראה ירידה במשקל הגוף הסופי בקבוצת P גבוה. תצפיות במחקרים הקודמים12) והנוכחיים שלנו עשויות לעזור להסביר נקודה זו. דיווחנו בעבר על ביטוי מוגבר של חלבון OPN באבוביות הכליות של חולדות שגידולן

לא עוכב על ידי דיאטה עתירת P12）. יתרה מכך, המחקר הנוכחי הראה עיכוב גדילה בקבוצת P גבוה, אך רמות גבוהות של ביטוי Spp1 mRNA בכליה. בהתבסס על תצפיות אלה, נראה שלמחקר הנוכחי יש השפעה מועטה של ​​עיכוב גדילה של ביטוי mRNA של Bmp2 ו-Spp1. עם זאת, הפרטים של הקשר בין עיכוב גדילה וביטוי גנים Bmp2 ו-Spp1 נותרו לא ברורים. לכן יש צורך בחקירה נוספת כדי להבהיר נקודה זו.

לסיכום, כדי להבהיר את המנגנון של התפתחות נפרוקלצינוזיס הנגרמת על ידי דיאטה עתירת P, המחקר הנוכחי קבע את ההשפעות של דיאטה עתירת P על ביטוי mRNA של Bmp2 ו-Spp1 ב-כִּליָה. ריכוזי Ca ו-P בכליות עלו באופן משמעותי בקבוצת ה-P הגבוה בהשוואה לקבוצת הביקורת. יתרה מכך, ביטוי mRNA של Bmp2 ו-Spp1 גדל באופן משמעותי בקבוצת ה-P high בהשוואה לקבוצת הביקורת. תוצאות אלו מצביעות על כך שדיאטה עשירה ב-P מקדמת ויסות של ביטוי Bmp2 ו-Spp1 mRNA בכִּליָה.

הפניות

1） Hitchman AJ, יש SA, Hitchman A, Harrison JE, Tam C: הסתיידות כלייתית הנגרמת על ידי פוספט בחולדה. Can J Physiol Pharmacol 57: 92-97, 1979

2） Parker HE: קשרי גומלין של מגנזיום וזרחן ברמות זרחן בתזונה נאותות עד עודפות. Nutr Rep Int 32: 1311-1318, 1985

3） Ritskes-Hoitinga J, Lemmens AG, Danse LHJC, Beynen AC: נפרוקלצינוזה הנגרמת על ידי זרחן ותפקוד כליות בחולדות נקבות. J Nutr 119: 1423-1431, 1989

4） Cockell KA, L'Abbe MR, Belonje B: הריכוזים והיחס בין סידן וזרחן בתזונה משפיעים על התפתחות נפרוקלצינוזיס בחולדות נקבות. J Nutr 132: 252-256, 2002

5） Katsumata S, Matsuzaki H, Uehara M, Suzuki K: השפעות של תוספי סידן בתזונה על חילוף החומרים בעצמות, ריכוזי מינרלים בכליות ותפקוד כליות בחולדות שניזונו מתזונה עתירת זרחן. J Nutr Sci Vitaminol 61: 195-200, 2015

6） Matsuzaki H, Uehara M, Suzuki K, Liu QL, Sato S, Kanke Y, Goto S: דיאטה עתירת זרחן גורמת במהירות לנפרוקלצינוזה ופציעה צינורית פרוקסימלית בחולדות. J Nutr Sci Vitaminol 43: 627-641, 1997

7) Liu QL, Sato S, Kishikawa T, Matsuzaki H, Yamanaka N: יעילות הרפואה הסינית המסורתית, Wulingsan, בדיכוי התפתחות נפרוקלצינוזיס הנגרמת על ידי דיאטה עתירת זרחן בחולדות צעירות. Med Electron Microsc 34: 103-114, 2001

8） Sirard C, Kim S, Mirtsos C, Tadich P, Hoodless PA, Its A, Maxson R, Wrana JL, Mak TW: הפרעה ממוקדת בתאי עכברים חושפת דרישה משתנה ל-Smad4 בשינוי איתות הקשור לגורם גדילה. J Biol Chem 275: 2063-2070, 2000

9） Matsubara T, Kida K, Yamaguchi A, Hata K, Ichida F, Meguro H, Aburatani H, Nishimura R, Yoneda T: BMP2 מווסת את Osterix דרך Msx2 ו-Runx2 במהלך התמיינות אוסטאובלסט. J Biol Chem 283: 29119-29125, 2008

10） Urist MR: עצם: היווצרות על ידי אוטואינדוקציה. מדע 150: 893-899, 1965

11） Wozney JM, Rosen V, Celeste AJ, Mitsock LM, Whitters MJ, Kriz RW, Hewick RM, Wang EA: Regulators Novel of the formation עצם: Clones מולקולרי ופעילויות. Science 242: 1528-1534, 1988

12） Matsuzaki H, Katsumata S, Uehara M, Suzuki S, Miwa M: דיאטה עתירת זרחן גורמת לביטוי אוסטאופונטין של צינוריות הכליה בחולדות. J Clin Biochem Nutr 41: 179-183, 2007

13） Cousins ​​FB, Geary CPM: הסתיידות כלייתית הנקבעת במין בחולדות. טבע 211: 980-981, 1966

14） Matsuzaki H, Katsumata S, Masuyama R, Uehara M, Nakamura K, Suzuki K: הבדלים בין המינים בריכוזי מינרלים בכליות ובהפרשת אלבומין בשתן בחולדות שניתנו להאכלה עתירת זרחן. Biosci Biotechnol Biochem 66: 1737-1739, 2002

15） Reeves PG, Nielsen FH, Fahey GC Jr: AIN-93 דיאטות מטוהרות למכרסמים במעבדה: דו"ח סופי של ועדת הכתיבה האד-הוק של המכון האמריקאי לתזונה על ניסוח מחדש של ה-AIN-76דיאטת מכרסמים . J Nutr 123: 1939-1951, 1993

16） Gimblet EG, Marney AF, Bonsnes RW: קביעת סידן ומגנזיום בסרום, שתן, דיאטה וצואה על ידי ספקטרופוטומטריית ספיגה אטומית. Clin Chem 13: 204-214, 1967

17）Gomori G: שינוי של קביעת הזרחן הקולורימטרית לשימוש עם הקולורימטר הפוטואלקטרי. J Lab Clin Med 27: 955-960, 1942

18) Ming LG, Lv X, Ma XN, Ge BF, Zhen P, Song P, Zhou J, Ma HP, Xian CJ, Chen KM: קבוצת הפרניל תורמת לפעילויות של פיטואסטרוגן 8-פרנינרינגן בשיפור יצירת העצם ועיכוב ספיגת עצם במבחנה. Endocrinology 154: 1202-1214, 2013

19） Kreke MR, Huckle WR, Goldstein AS: זרימת נוזלים מגרה ביטוי של אוסטאופונטין וסיאלופרוטאינים של העצם על ידי תאי סטרומה של מח העצם באופן תלוי זמני. עצם 36: 1047-1055, 2005

20）Drechsler J, Grotzinger J, Hermanns HM: אפיון של קומפלקס קולטן האונקוסטטין M של חולדה הדומה לאדם אך שונה מקולטן הציטוקינים העכברי. PLoS One 7: e43155, 2012

21）Hoek AC, Lemmens AG, Mullink JWMA, Beynen AC: השפעת יחס סידן: זרחן בתזונה על הפרשת מינרלים ונפרוקלצינוזה בחולדות נקבות. J Nutr 118: 1210-1216, 1988 

22) Kohri K, Suzuki Y, Yoshida K, Yamamoto K, Amasaki N, Yamate T, Umekawa T, Iguchi M, Shinohara H, Kurita T: שיבוט מולקולרי ורצף של cDNA המקודד לחלבון אבן שתן, זהה לאוסטאופונטין. Biochem Biophys Res Commun 184: 859-864, 1992

23） Kohri K, Nomura S, Kitamura Y, Nagata T, Yoshioka K, Iguchi M, Yamate T, Umekawa T, Suzuki Y, Shinohara H, Kurita T: מבנה וביטוי של ה-mRNA המקודד לחלבון אבן השתן (Osteopontin). J Biol Chem 268: 15180-15184, 1993

24）Paloian NJ, Leaf EM, Giachelli CM: אוסטאופונטין מפגין נגד נפרוקלצינוזה הנגרמת על ידי פוספט גבוה והסתיידות כלי דם. Kidney Int 89: 1027-1036, 2016

25）Giachelli CM, Bae N, Almeida M, Denhardt DT, Alpers CE, Schwartz SM: אוסטאופונטין מוגבר במהלך היווצרות ניאוינטימה בעורקי חולדה והוא מרכיב חדשני של רובדים טרשתיים אנושיים. J Clin Invest 92: 1686-1696, 1993