ניתוח של מרכיבים כימיים במינים של Cistanche

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Yong Jiang, Peng-Fei Tu, et al

תַקצִיר

מינים מהסוג שלCistanche(Rou Cong Rong בסינית) הם עשבים טפילים רב-שנתיים ומופצים בעיקר בארצות צחיחות ובמדבריות חמים. כטוניק מעולה לטיפול במחסור בכליות, אימפוטנציה, אי פוריות נשית, מחלת לוקורריאה חולנית, מטרורגיה שופעת ועצירות סניליות,Cistancheעשבי תיבולזכה בכבוד של "ג'ינסנג של המדבר". לאחרונה, ישנה תשומת לב מדעית גוברת ל-Herba Cistanche על הפעילות הביולוגית המדהימה שלו, כולל נוגד חמצון, הגנה עצבית ואנטי אייג'ינג. המרכיבים הכימיים שלCistancheצמחיםכוללים בעיקר שמנים נדיפים ושמנים לא נדיפיםפנילתנואידגליקוזידים(PhGs), אירידואידים, ליגנאנים, אלדיטולים, אוליגוסכרידים ופוליסכרידים. מחקרים פרמקולוגיים מראים ש-PhGs הם המרכיבים הפעילים העיקריים לריפוי מחסור בכליות, נוגד חמצון והגנה עצבית; גלקטיטול ואוליגוסכרידים הם הנציגים לטיפול בעצירות סנילית, בעוד שפוליסכרידים אחראים לשיפור חסינות הגוף. במאמר זה, ההתקדמות לגבי המרכיבים הכימיים שלCistancheצמחיםוהניתוחים המקבילים שלהם נבדקים.

מילות מפתח:Cistanche Herba, Cistanches Chemical, ניתוח מרכיבים, פנילתנואידים גליקוזידים

1. הקדמה

Cistancheהופמג. Et Link, אחד מהסוגים של משפחת Orobanchaceae, עם 22 מינים בעולם, מופץ בעיקר בארצות הצחיחות ובמדבריות בחצי הכדור הצפוני, כגון שינג'יאנג, מונגוליה הפנימית, האזורים האוטונומיים של נינגשיה וגאנסו, מחוזות צ'ינגהאי של סין, כמו גם איראן, הודו, מונגוליה וכו' [1]. סביבות הגידול שלהם חמורות מאוד: אקלים צחיח קיצוני, שינויים חמורים בטמפרטורות, אור שמש אינטנסיבי, פחות מ-250 מ"מ של משקעים שנתי, וקרקעות דלות [2,3]. הCistancheהמינים שייכים לעשבים הטפילים הרב-שנתיים, הנצמדים בדרך כלל לשורשים של צמחים מקבעי חול, כגון Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliated ו-Tmarix, וכו' [3]. ישנם שישה מיני Cistanche בסין, על פי תיעוד המדד הטקסונומי של צמחים גבוהים סיניים [4]. עם זאת, מחקר נוסף אישר שרק ארבעה מינים ווריאציה אחת שלCistancheקיימים בסין, כלומרCistancheמדבריתYC Ma, C. tubulosa (Schenk) R. Wight, C. Salsa (CA Mey.) G. Beck, C. Salsa var. albiflflora PF Tu et ZC Lou and C. sinensis G. Beck [5].

רו קונג רונג (הרבהCistanche), שהוקלט לראשונה ב-Shen Nong Materia Medica הסינית, מתייחס לגבעולים העסיסיים המיובשים שלCistancheצמחים.הרבהCistancheנחשב לטוניק מעולה וזכה בכבוד של "ג'ינסנג של המדבריות". הערכים המדעיים של Herba Cistanche טמונים בטיפול במחסור בכליות, אימפוטנציה, אי פוריות נשית, לוקורריאה חולנית, עצירות סנילית ועצירות סנילית[6,7]. זו הייתה התרופה הנרשמת בתדירות הגבוהה ביותר נגד מחסור בכליות בסין עבור שושלות עוקבות. מבין מיני Cistanche, רק C. deserticola סודר מחדש בפרמקופאה הסינית (מהדורת 2000) [8], ו-C. tubulosa נוספה לפרמקופאה הסינית משנת 2005 כחלופה, בשל המרכיבים הכימיים הדומים שלה, הפעילות התרופתית והיחסית שלה. משאב אמיד בהשוואה ל-C. deserticola [9-11]. עם זאת, בשנים האחרונות, הפראי C. deserticola נמצא על סף הכחדה עקב קציר יתר, והוא נאסף כאחד מצמחי Class II הזקוקים להגנה בסין. בשל המחסור במשאבי הטבע של הפקידהרבהCistanche, מינים אחרים מהסוג הזה, כמו C. salsa ו-C. Sinensis, משמשים גם הם כתחליפים באזורים רבים [10].

מחקר מדעי עלCistancheצמחיםהחל בשנות השמונים [12], והניתוח הכימי הצביע על כך שתרכובות שונות, כולל שמנים אתריים,פנילתנואידגליקוזידים(PhGs), אירידואידים, ליגנאנים, אלדיטולים, אוליגוסכרידים ופוליסכרידים הם המרכיבים העיקריים שלCistancheצמחים[13,14]. מחקר פרמקולוגי הראה שהתמציות מCistancheלצמחים יש קשת רחבה של פעילויות, כגון ריפוי מחסור בכליות ועצירות סנילית, קידום היכולת ללמוד ושינון, טיפול במחלת אלצהיימר, שיפור חסינות, אנטי אייג'ינג ואנטי עייפות [14-21]. עם שיפור רמת החיים והגעתה של חברה מזדקנת,Cistancheצמחיםזכו ליותר תשומת לב והשתמשו בהם יותר ויותר בשל פעילותם הפרמקולוגית הייחודית.

היו מספר סקירות על חקר מרכיבים כימיים ופעילויות פרמקולוגיות שלCistancheצמחים[13–15]. המאמר הנוכחי מתמקד בניתוח הכימי של סוג זה ובהתקדמות במחקרי מרכיבים כימיים.

2. תרכובות נדיפות

שיטות המיצוי הנפוצות עבור התרכובות הנדיפות של TCMs כוללות זיקוק בקיטור ומיצוי ממס אורגני ליפופיל. באמצעות זיקוק בקיטור חולצו השמנים האתריים של C. salsa ו-C. tubulosa, ו-38 ו-21 רכיבים זוהו על ידי GC-MS, בהתאמה (טבלה 1). המרכיבים העיקריים בשמנים האתריים של C. salsa מורכבים מאלקנים, אלכוהולים, אלדהידים וכמה תרכובות הטרוציקליות, בעוד חומצה פלמיטית וחומצה לינולאית הם שני המרכיבים העיקריים של כלל השמנים של C. tubulosa [22,23]. התרכובות הנדיפות של C. deserticola הופצו על ידי אתר נפט, ו-25 מרכיבים זוהו על ידי GC–MS. שלושת המרכיבים העשירים ביותר הם מתיל 14-מתילפנטדקנואט (13.61 אחוז), אתיל פלמיטאט (12.39 אחוז) ו-2,5,6-טרימתיל-אוליתן (7.60 אחוז) [24]. דיווח נוסף על הרכיבים הנדיפים של C. deserticola הראה כי אאוגנול היה המרכיב העיקרי בעת שימוש בשיטת זיקוק-מיצוי סימולטני [25]. התוצאות האנליטיות השונות של שני מאמרים אלה [24,25] עשויות להיגרם על ידי שיטות מיצוי שונות ותנאים אנליטיים שונים של GC-MS.

מלבד אלה, מא דיווח על שיטת מיצוי נוזלי על-קריטי (SFE) כדי לחלץ את המרכיבים הלא-קוטביים מ-C. salsa. ניתוח התמצית על ידי GC–MS הראה כמה אסטרים ותרכובות מולקולריות נמוכות המכילות חמצן או חנקן קיימים, מלבד האלקנים. תוצאה זו הדגימה שניתן להפיק יותר תרכובות קוטביות על ידי SFE באמצעות הוספת מתקן קוטבי [26].

3. תרכובות לא נדיפות

התרכובות הלא נדיפות שלCistancheצמחיםכוללים בעיקר פנילאתנואידים, אירידואידים, ליגנאנים, אלדיטולים, אוליגוסכרידים ופוליסכרידים. עד כה בודדו מהם יותר מ-100 תרכובות לא נדיפותצמח Cistanche. התפלגות סוגים שונים של תרכובות בCistancheצמחיםמופיע בטבלה 2. בשנת 1995, דיווח מוריה [27,28] כי החומר הצמחי של סי.סלסה זוהה בטעות בעבר כאשר חקר את המקורות של הרבה ציסטנצ'ס משווקי הרפואה היפניים, ולכן המרכיבים הכימיים בודדו מ-C סלסה בשנות ה-80 הוקצתה מחדש ל-C. deserticola בסקירה זו.

3.1. פנילתנואידים גליקוזידים

3.1.1. מבנים כימיים של PhGs

PhGs נתפסו כמרכיבים הפעילים העיקריים שלCistancheמִין. עד כה, 34 PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)היו מבודדים מצמחי סיסטאנצ'ה, כולל 22 גליקוזידים דו-סוכרים, 10 גליקוזידים טרי-סוכרים ו-2 גליקוזידים חד-סוכרים (טבלה 3). על ידי ניתוח המבנים של PhGs בCistanche, סוכמו המאפיינים המבניים הבאים: חלק הסוכר של גליקוזידים דו-סוכרים מורכב מגלוקוז ורמנוזה, עם קישור Glc (3→1) Rha. הגלוקוז בדרך כלל מתקשר ישירות עם האגליקון, ובמיקומו של C4 או C6, היכן שבדרך כלל נמצא קומארויל או קפאואיל. כאשר ה-PhG אמור להיות גליקוזיד טריסכריד, גלוקוז נוסף או rhamnose מופיע בדרך כלל במיקום C6 של הגלוקוז הפנימי. בין אותם PhGs (pהנילאתנואידגליקוזידים)מCistancheמינים, קרנאטוסיד (34) הוא אחד יוצא דופן, שכן קיימת טבעת אתר בין המיקום של אגליקון ומיקום C-2 של הגלוקוז הפנימי במבנה שלו [34]. לאחרונה, דווח לראשונה על המבנה החד-גבישי של סלידרוזיד (15), PhG שבודד מ-C. deserticola [44].

מחקרי הפעילות הפרמקולוגית של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)הוכיחו שיש להם פונקציות שונות, כגון נוגד חמצון, הגנה עצבית, שיפור התפקוד החיסוני והמיני, הגנת הכבד, אנטי קרינה וכו' [15-17,40,48-50]. ביניהם, הגנה עצבית הופכת לנושא חם. כמה רכיבים בודדים או חלקים של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)דווח כי הם מעכבים את האפופטוזיס של תאים עצביים המושרים על ידי כימיקלים שונים [51-57], וההגנה העצבית שלהם במבחנה הוכחה גם על ידי מספר מודלים של בעלי חיים in vivo [58-64]. תוצאות אלו מצביעות על כך שדוקטורנטים(pהנילאתנואידגליקוזידים)יכול להיות מועמד אטרקטיבי לטיפול בהפרעות נוירודגנרטיביות, כגון דמנציה או מחלת פרקינסון.

3.1.2. ניתוח של PhGs

כמרכיבים הפעילים העיקריים בCistancheצמחים, PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)משמשים בדרך כלל כסמנים להערכת האיכות של תרופות גולמיות או פורמולציות התואמות שלהן.

3.1.2.1. ניתוח של PhGs על ידי כרומטוגרפיה דקה (TLC).

ג'אנג הקים לראשונה שיטת זיהוי TLC עבור אקטאוזיד (2), אכינאקוסיד (11) וציסטאנוסיד A (3) בהרבהCistanchesעל ידי סיליקה ג'ל, באמצעות אתיל אצטט-מתנול-9 אחוז חומצה אצטית (20:3:2) כממס מפתח, ותמיסת FeCl3 כריאגנטים לצביעה [65]. שיטה זו שימשה גם בפרמקופאה סינית (2000) לזיהוי אקטאוזיד (2) [8]. עם זאת, בפרמקופיה הסינית (2005), הוספח של כרומטוגרפיה שכבה דקה שונה מסיליקה ג'ל לפוליאמיד על מנת להשיג אפקט הפרדה טוב בהרבה, ונעשה שימוש במתנול-חומצה אצטית-מים (2:1:7). כממס מתפתח. שני תואר שלישי מרכזי בהרבהCistanchesניתן לזהות בו-זמנית, Echinacoside (11) ואקטאוזיד (2) [9].

3.1.2.2. ניתוח של PhGs על ידי ספקטרופוטומטריה אולטרה סגולה (UV).

כפי שהוזכר לעיל, קבוצת הסינמויל קיימת לעתים קרובות במבנים של PhGs, לפיכך, PhGs יכול להיקבע ישירות על ידי UV או על ידי השיטה הקולורימטרית לאחר תגובה עם כמה ריאגנטים צביעה [66-72]. עם זאת, כפי שאנו יודעים שהשיטה הקולורימטרית אינה גישה סבירה לקביעה מדויקת של מרכיבים כימיים ב-TCMs, בשל חוסר היציבות שלה, יכולת השחזור הירודה ושגיאת בדיקה ענקית. יתר על כן, מייגע יותר לעבד מראש את הדגימות שזוהו באמצעות UV מאשר בשיטות האחרות. לפיכך, כעת, שיטת ה-UV אינה משמשת יותר לכימות התרכובת הטהורה, אלא רק לקביעת ה-PhG הכולל מדי פעם.

3.1.2.3. ניתוח של PhGs על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC). מבין כל שיטות הניתוח, HPLC היא הנפוצה ביותר לאיכות וכמותיות של PhGs, וטבלה 4 מסכמת את השיטות שפורסמו על ניתוח PhGs על ידי HPLC בספרות, אשר יפורטו כדלקמן.

3.1.2.3.1. ניתוח של PhGs בתרופות גולמיות, דגימות ביולוגיות ומוצרים מורכבים על ידי HPLC.

בשנת 1995, שו ביצעה השוואה בין המרכיבים הכימיים של C. deserticola עם תחליף ה-C. salsa שלו. ניתוח HPLC הראה כי ההרכב הכימי של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)בין שני המינים הללו הייתה דומה, אך כמותם הייתה שונה [73]. באותה שנה ערכה מוריה השוואה בין הרכיבים הכימיים של C. deserticola (Cd), C. tubulosa (Ct) ו-C. salsa (Cs), תוך שימוש בשבעה PhG כסמנים. התוצאות הראו ש-Cistanosides A (3), C (5) וכמות עקבות של tubuloside A (17) היו קיימים ב-Cd ו-Cs, בעוד שרק tubuloside A (17) היה קיים ב-Ct, ללא cistanosides A (3) ו-C (5). כמו כן, הכמויות הכוללות של PhGs בצמחי Ct ו-Cs נמצאו יותר מזו שבצמחי Cd [28]. חשוב שמאמר זה השווה את ההבדל ביןCistancheסוג באמצעות ניתוח רב רכיבים; עם זאת, מצער כי הכמות של שבעת PhGs אלה(pהנילאתנואידגליקוזידים)בוצע רק בשיטת סטנדרט חיצונית נקודתית אחת, ללא אימות מתודולוגיה שיטתי.

טו ביצע ניתוח איכותני של שישה PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)וניתוח כמותי של שני PhGs בסוג Cistanche על ידי Rp-HPLC. התוצאות הראו כי המרכיבים הכימיים של C. deserticola, C. salsa, C. salsa var. albiflflora ו-C. tubulosa היו דומים, בעוד אלו של C. Sinensis היו שונים מהאחרים [10]. וואנג הקים שיטה לניתוח של שבעה PhGs ב-C. deserticola, C. tubulosa ו-C. salsa עם HPLC/MS/MS, והתוצאות הראו שהתפלגות המרכיבים הכימיים של שבעת ה-PhGs הפניות שונה בכל מין [ 74]. מסלולי הפרגמנטציה של הקשרים הגליקוזידיים, קשר האסטר וכמה הפסדים עצביים מעניינים של PhG נדונו במאמר זה [74] ובעוד אחד [75]. עם זאת, היתרון של טכניקת HPLC-MS לא הוכח ביסודיות בניתוחים אלה, מכיוון שרק מנגנון הפרגמנטציה של תקני PhG נחקר. אימוץ מנגנונים אלה כדי להבהיר תרכובות PhG לא ידועות כדי לתת יותר מידע כימי, ומחקר מנגנון הפיצול של תרכובות שלד אחרות הוזנח.

מלבד ניתוח איכותני, ישנם גם דוחות רבים על ניתוח כמותי שלהרבהסיסטהnches, במיוחד של שני PhGs עיקריים(pהנילאתנואידגליקוזידים), echinacoside (11) ואקטאוזיד (2). בשנת 2000, ג'אנג קבע תקן איכות עבור C. deserticola, כולל קביעת התוכן של אקטאוזיד (2) על ידי HPLC, בשילוב עם זיהוי איכותי של חמישה רכיבים על ידי TLC [65]. בשנת 2003 הוקמה שיטת Rp-HPLC לאיתור אכינאקוסיד (11) ואקטאוזיד (2) בצמחי גידול צמחים ובתי גידול שונים. המחבר השתמש בשני שלבים ניידים שונים לקביעת אכינאקוסיד (11) ואקטאוזיד (2), כלומר אצטוניטריל-מים-חומצה קרחונית (13:86:1) עבור echinacoside ומתנול-מים-חומצה קרחונית (32:67:1) עבור אקטאוזיד. התוצאה הראשונית הראתה שתכולת האכינאקוסיד והאקטאוזיד הושפעה כמובן ממארחים שונים, ותכולת שתי התרכובות הללו ב-C. tubulosa שהתארחו ב-Tamalrix L. התרבותי הייתה הגבוהה ביותר [76].

בהתחשב בכך שזה קצת מייגע לקבוע שני מרכיבים באותו מפעל באמצעות שני ממסים שונים, הוקמה שיטת Rp-HPLC פשוטה יותר לזיהוי בו זמנית של אכינאקוסיד (11) ואקטאוזיד (2) [77]. לאחר מכן, צ'ן אימץ שיטה זו כדי לקבוע את תכולת האכינאקוסיד (11) ואקטאוזיד (2) בטבע ובגידול C. tubulosa [78]. התוצאות הראו שתכולת האכינאקוסיד (11) הייתה גבוהה באופן ניכר מזו של אקטאוזיד (2) בכל הדגימות, ותכולת שני הרכיבים הפעילים הללו בטבע הייתה גבוהה מזו בתרבות [78]. ראוי להזכיר שהכנת המדגם במאמר זה אימצה את השיטה של ​​ערבוב ריבוי אצוות יחד, מה שאומר שהכותב שקל את הבדלי האיכות האישיים הברורים בהרבהCistanches.

מאז הפראCistancheמינים נמצאים על סף הכחדה, השתילה של C. deserticola ו-C. tubulosa מתבצעת בשינג'יאנג ובמונגוליה הפנימית, סין. על מנת לתת הנחיות תיאורטיות לטיפוח, נותחו דגימות מעובדות שונות. קאו קבע את התוכן של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)באביב ובסתיו עם LC-MS, על מנת להשוות דגימות C. deserticola שנאספו בעונות שונות. ארבעה PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים), כלומר echinacoside (11), acteoside (2), cistanoside A (3), ו-2 -acetylacteoside (1) נבחרו כסמנים, ותכולתם הכוללת נראתה גבוהה יותר באביב מאשר בסתיו [79] . וואנג ביצע מחקר על וריאציה של המרכיבים הכימיים בזמני גידול שונים ובחלקים שונים של ה-C. tubulosa התרבותי, תוך שימוש בטביעת האצבע ובתכולת האכינאקוסיד (11) כאינדקס. הוא מצא שההפצה הכימית של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)היה דומה בין דגימות שונות, אך הכמות של כל PhG, במיוחד של echinacoside (11), הייתה שונה משמעותית בין דגימות שונות. לאחר השוואה, הוא הגיע למסקנה שזמן הטיפוח של C. tubulosa צריך להיות מעל שלוש שנים, ויש לשלוט בקפדנות על זמן הקציר שלו לפני הפריחה. במאמר זה נמצא כי איכותם של צמחים תרבותיים אינה טובה יותר מצמחי בר, ​​ולכן המחבר הציע כי יש לקדם את טכנולוגיית הטיפוח כדי לשפר את תכולת התרכובות הפעילות [80]. יאנג חקר את הצטברות החומר היבש ואת תכולת האכינאקוסיד (11) של C. tubulosa במישור הואביי. התוצאה הראתה כי הצטברות החומר היבש של C. tubulosa הייתה בגרסה בצורת "S", ותכולת האכינאקוסיד (11) הייתה הגבוהה ביותר כאשר C. tubulosa גדל במשך 5 חודשים [81].

מלבד אלה, טביעת אצבע, טכניקה חדשה המתמקדת במאפיינים המערכתיים והמקיפים של הדגימות המנותחות שימשה גם להערכת האיכות שלCistancheצמחים. כפי שהוזכר לעיל, וואנג ניתח את המרכיבים הכימיים ואת השונות שלהם ב-C. tubulosa המתורבת באמצעות טביעת אצבע ואינדיקטורים אחרים [80]. Xie קבע טביעת אצבע כרומטוגרפית של C. deserticola על ידי HPLC (איור 1) והשתמש בה כדי להעריך את ההבדל בין האיכויות המובנות של דגימות מבתי גידול שונים. לבסוף, נמצאו הבדלים בולטים באיכות הדגימות מבתי גידול שונים [82]. אותה תופעה אף נצפתה במהלך המחקר שלנו על הערכת האיכות של C. deserticola, כך שבהמשך יש להתייחס לדאגה רצינית יותר לעקביות האיכות של מיני Cistanche.

למעט שתילה, טיפוח על ידי תאים או יבלת היא חלופה אטרקטיבית נוספת לפתור את המחסור במשאבים של הרבהCistanche. במהלך תהליך הטיפוח הוקמו שיטות אנליטיות רבות לניתוח התוצאה המעובדת ולייעל את תנאי העיבוד [83–88]. התנאים האנליטיים המתאימים סוכמו גם בטבלה 4.

באשר לניתוח של PhGs במוצרים מורכבים, ג'אנג דיווח על שיטת כימות של איזואקטאוזיד (12) בסך הכלCistancheכמוסות גליקוזידים על ידי HPLC [89]. הקמנו שיטה לניתוח של אקטאוזיד (2) בכמוסות של Shenqiyinao על ידי HPLC [90], וליי קבע קביעה של echinacoside (11) ברוח Congong על ידי HPLC [91]. נקודת המפתח של ניתוח PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)במוצרים המורכבים יש להימנע מהפרעה של רכיבים אחרים, לכן, טיפול מקדים של המדגם ואופטימיזציה של התנאים הכרומטוגרפיים הם בדרך כלל הכרחיים.

3.1.2.3.2. ניתוח מטבולי של PhGs על ידי HPLC.

בשנת 2001, ליי דיווח לראשונה על תהליך חילוף החומרים של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)במעי הגסטרו של כלבי ביגל, וארבעה מטבוליטים, echinacoside (11), acteoside (2), isoacteoside (12) ו-2 -acetylacteoside (1) בודדו מהצואה על ידי HPLC הכנה [96]. בשנת 2006, חילוף החומרים של אקטאוזיד (2) ואכינאקוסיד (11), המרכיבים הפעילים העיקריים שלהרבהCistanchesנחקרו בהתאמה, והפרמקוקינטיקה והזמינות הביולוגית שלהם בחולדות נותחו [97,98,134]. הקמנו שיטת LC-MS/MS רגישה עם מיצוי פאזה מוצק פשוטה לזיהוי של אקטאוזיד (2) בפלסמה של חולדות והומוגניות של רקמות לחקירה של זמינות ביולוגית ופיזור מוח בחולדות הנעות בחופשיות [97,134]. Jia פיתחה צימוד HPLC מהיר ופשוט עם שיטת UV כדי לקבוע את התוכן של echinacoside (11) בסרום חולדות [98]. עם זאת, הזמינות הביולוגית של אכינאקוסיד ואקטאוזיד נמצאה רק {{10}}.83 אחוז ו-0.12 אחוז, בהתאמה, דבר שהיה סותר את ההשפעות הביולוגיות המשמעותיות של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)בבעלי חיים [58–64]. בעתיד, יש לבצע מחקרים נוספים כדי להבהיר את התהליך המטבולי ומנגנון הספיגה של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים).

3.1.2.4. ניתוח של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)על ידי כרומטוגרפיה נגד זרם נגדי במהירות גבוהה (HSCCC).

HSCCC, כרומטוגרפיית מחיצות נוזל-נוזל נטולת תמיכה, מבטלת ספיחה בלתי הפיכה של דגימה על השלב הנייח ונמצאת בשימוש נרחב בהפרדה הכנה של מוצרים טבעיים. בהשוואה לכרומטוגרפיה מסורתית של עמודות מוצק-נוזל, היא מניבה התאוששות ויעילות גבוהות יותר. ליי יישם HSCCC על ההפרדה והטיהור של אקטאוזיד (2) ו-2-אצטילקטאוזיד (1) מ-C. salsa עם מערכת ממס דו-פאזית רבעונית המורכבת מאתיל אצטט-n-בוטנול-אתנול-מים ( 4:0.6:0.6:5, v/v). ניתוח HPLC של חלקי ה-CCC גילה ששני PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)היו מעל 98 אחוז טוהר [99]. מאוחר יותר, לי הקים שיטה באמצעות שתי מערכות ממסים, האחת מורכבת מאתיל אצטט-אתנול-מים (5:0.5:4.5, v/v/v), והשנייה מאתיל אצטט-n-בוטנול. –אתנול-מים ({{10}}.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v) לבידוד PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)מ-C. deserticola. חמישה דוקטורנטים(pהנילאתנואידגליקוזידים), echinacoside (11), cistanoside A (3), acteoside (2), isoacteoside (12), ו-2 -acetylacteoside (1) בודדו וטיהרו, והטהרות של התרכובות המבודדות הללו היו מעל 92.5 אחוזים. נקבע על ידי HPLC [100]. שיטות אלו סיפקו הפניות טובות לבידוד וטיהור עתידי של תקני PhGs.

3.2. בנזיל גליקוזידים

לאחרונה דיווח ליי על בידוד והבהרת המבנה של שלושה בנזיל גליקוזידים חדשים, סלסאידים A-C (35-37, איור 2) מ-C. salsa, שגם הוא היה בנזיל גליקוזידים שבודדו מ-C.Cistancheצמחיםלראשונה [47]. המאפיינים המבניים של בנזיל גליקוזידים אלה דומים לאלו של פנילתנואידים המבודדים מסוג זה, אלא שהאלכוהול הבנזילי החליף את הפנילול באגליקון.

3.3. אירידואידים

עד כה בודדו שלושה אגליקונים אירידואידים וארבעה עשר גליקוזידים אירידואידיםCistancheצמחים(38–54, טבלה 5) [102–109]. התכונות המבניות של גליקוזידים אירידואידים מCistancheצמחיםמסוכמים כדלקמן: גלוקוז מתרחש במיקום C1 של אגליקון, עם תצורה ב-H5 ו-H9; הידרוקסילציה מתרחשת לעתים קרובות בעמדות C8 ו-C10; לפעמים, התייבשות עלולה להתרחש בין ההידרוקסילים של C10 עם C1 או C3 כדי לתת חלק אפוקסי.

3.4. ליגנאנים

אגליקוני לינאן אחד וחמישה גליקוזידים של לינאן בודדו מצמחי C. deserticola ו-C. tubulosa (55-60, טבלה 6). השלדים הבסיסיים של תרכובות אלה הם טטרהידרופורן ובנזופורן ליגנאנים. המקורות של אותה C. tubulosa שממנה בודדו כמה ליגנונים הם בעיקר מפקיסטן, בעוד שמעט ליגנים בודדו מ-C. tubulosa שנאספו בסין. זה עוד הוכיח שההבדלים הכימיים קיימים בין C. tubulosa מסין ופקיסטן [27,28].

3.5. סכרידים ונגזרותיהם

3.5.1. מחקר כימי על סכרידים ונגזרותיהם

פחמימות מהוות חלק גבוה מהמסה היבשה של צמחים ממין Cistanche [110]. ביניהם, אחד החד-סוכרים, גלקטיטול דווח כמרכיב הפעיל העיקרי עם פעילות משלשלת ב-Herba Cistanches [18,19,103,104]. אמנם, הפוליסכרידים נחשבו למרכיבים הפעילים עם קידום חסינות הגוף, אנטי-אייג'ינג ואנטי-סרטן.הרבהCistanches[20,21,111–113].

בשנות ה-90, המחקרים על פוליסכרידים שלCistancheמינים התמקדו בבידוד/טיהור ובניתוח ההרכב של חד-סוכרים [110,112,114-116]. המבנים המדויקים של פוליסכרידים מCistancheהמינים לא הובהרו עד 1997. בטבלה 7, המאפיינים המבניים המובהרים של פוליסכרידים מבודדים ממינים של Cistanche פורטו. מעניין, כל אלה בודדו מ-C. deserticola, והפוליסכרידים באחריםCistancheצמחיםלא נחקרו.

מלבד אלה, בודדו כמה נגזרות אוליגוסכרידים, כגון cistanoside F, cistanoside I, cistantubuloses A1/A2 ו- cistansinensose A1/A2.הרבהCistanches(איור 3), שהם למעשה שאריות של PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים)לאחר איבוד ה-phenethylol aglycone. מכיוון שישנן תצורות הקיימות בגלוקוז בטבע, לפעמים, נגזרות אוליגוסכריד אלו קיימות גם כאנומרים, וניתן היה לצפות בתופעה זו מאותות NMR המזווגים [37,39,40,11,45].

3.5.2. ניתוח סכרידים ונגזרותיהם

על מנת להעריך את האיכות שלהרבה Cistanchesבאופן מקיף, גלקטיטול, המרכיב הפעיל העיקרי עם פעילות משלשלת ב-Herba Cistanches [18,19,97,98] נבחר לאחרונה כאינדיקטור להערכת האיכות שלהרבהCistanches, בשילוב עם PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים). על מנת להעריך באופן מקיף את האיכות של C. tubulosa מאזורים שונים, Cai פיתח שיטה לכימות של גלקטיטול יחד עם echinacoside (11) ואקטאוזיד (2) על ידי HPLC. ELSD נבחר כגלאי לגלקטיטול, בשל הספיגה הסופית החלשה שלו בספקטרום ה-UV, ועמודת ג'ל פולימר של Prevail Carbohydrate ES שימשה להפרדתו. נמדדו קבוצות של C. deserticola ו- C. tubulosa מבתי גידול שונים, ושיטת העיבוד של מנות מרתח טריות של C. tubulosa עברה גם אופטימיזציה בשיטה זו [92,93]. תוצאותיהם הראו שתכולת הגלקטיטול, האכינאקוסיד (11) והאקטאוזיד (2) במרתח ה-C. tubulosa בשיטה המתוארת הייתה גבוהה פי כמה מאלה שיובשו בחיפוי או בשיטה מסורתית [93]. בנוסף, ג'אנג הקים אי פעם שיטת זיהוי TLC של מניטול ב-C. deserticola, תוך שימוש באתיל אצטט-פירידין-מים (7:2:1) כממס מתפתח, ותמיסת KMnO4 של 1% כחומר צבע [65].

באשר לקביעת התוכן של פוליסכרידים בCistancheמינים, חומצה פנול-גופרית היא השיטה הנפוצה ביותר, ותכולת הפוליסכרידים ב-C. salsa באמצעות שיטות מיצוי שונות נקבעה להיות מ-11.61 אחוז ל-13.22 אחוז [123-125]. עם זאת, אלו הן רק כמה תוצאות אנליטיות ראשוניות בשל המגבלה של השיטה הקולורימטרית.

3.6. אלקלואידים וניתוח התואם שלהם

עד כה בודדו מהם רק שני אלקלואידיםCistancheמינים, כלומר בטאין (65) ו-N, N-דימתיל גליצין מתיל אסטר (66) (איור 3) [126]. Betaine (65) הוא אלקלואיד המופץ בדרך כלל בצמחים, ולכן ישנם דיווחים נוספים על הניתוח האיכותי והכמותי שלו. Zhang השווה את וריאציות התוכן של בטאין ב-C. deserticola לפני ואחרי עיבוד, באמצעות זיהוי TLC בשילוב עם שיטה קולורימטרית [127]. שיטת TLC זו נאספה גם בפרמקופיה סינית 2000 [8], בעוד ששיטת כימות זו באמצעות קולורימטריה אומצה מאוחר יותר על ידי אחרים כדי לייעל את טכנולוגיית המיצוי שלהרבהCistanches[128,129]. בשנת 2007, Gong דיווחה על שיטת HPLC לאיתור בטאין בצמחי Cistanche בשילוב עם גלאי ELSD, ובטאאין נמצא קיים רק ב-C. deserticola, אך לא ב-C. tubulosa. לפיכך, המחבר הציע שיש להשתמש בטאין כסמן כדי להבחין בין שני סוגי צמחי ה-Cistanche [101]. עם זאת, בהתחשב בכך שמנות הדגימה הן רק שתיים עבור כל מין, ואחד מבתי הגידול של C. tubulosa (Yunnan) אינו בטוח, המלצנו להוכיח מסקנה זו עוד יותר. בנוסף, זיהוי ה-TLC של betaine עבור Herba Cistanche הוסר מהפרמקופאה הסינית מאז 2005, בשל המאפיין הלא ספציפי שלו. לפיכך, לקחת את זה כאינדיקטור בלעדי לייעל את טכנולוגיית המיצוי של Herba Cistache לא היה סביר [129].

3.7. תרכובות אחרות

קיימות כמויות קטנות של תרכובות אחרות, כגון גליקוזידים פנוליים, מונוטרפנואידים, סטרולים או הגליקוזידים שלהם, חומצות שומן, חומצות אמינו וכמה יסודות קורט וכו' הקיימות בצמחי Cistanche [13,41,42,103,105,130-133].

4. מסקנות

בסקירה זו, המרכיבים הכימיים שלCistancheתוארו מינים ושיטות הניתוח שלהם. בין הניתוחים הקיימים, הרוב התרכז ב-PhGs(pהנילאתנואידגליקוזידים), ו-HPLC הייתה השיטה הנפוצה ביותר בשל היעילות והדיוק הגבוהים שלה. באמצעות ניתוח של עבודות המחקר הקודמות, בשילוב עם שנות המחקר שלנו על מיני Cistanche, כמה בעיות עיקריות הקיימות בניתוח שלCistancheצמחיםסוכמו כדלקמן: הראשון הוא השימוש המעורב במקור המינים: C. deserticola ו-C. tubulosa הם שני מינים רשמיים שנאספו בפרמקופיה הסינית. עם זאת, שני מיני Cistanche אחרים, C. salsa ו- C. Sinensis משמשים גם הם באזורים מסוימים עקב מחסור במשאבים. למרות שהיו מספר פרסומים המתייחסים להשוואה בין מינים שונים [6-8], הם אינם משכנעים מספיק בגלל קבוצות הדגימות והסמנים המצומצמות. לפיכך, יש צורך להקים שיטה מקיפה, כגון טכנולוגיית טביעת אצבע לניתוח השוואתי של תרופות גולמיות ממקורות שונים. השני הוא שלא הוקדשה תשומת לב רבה לחוסר העקביות של הרבה סיסטנצ'ס. מיני Cistanche הם עשבי תיבול טפילים. ישנם גורמים רבים המשפיעים על איכותם, כגון אקלים, בתי גידול, מארחים, זמן קציר, שיטת עיבוד וחלקים שונים של אותו צמח. המחקרים שלנו הראו כי האיכות של מיני Cistanche אינה יציבה, במיוחד זו של פרא C. deserticola [80,82,92]. עם זאת, בעיה זו הוזנחה בחלק מהניתוחים הקודמים, והשתמשו רק בדגימה אחת או שתיים [74,76], מה שעלול להוביל למסקנות לא מדויקות. לכן, בעתיד, יש לאסוף ולנתח הרבה יותר דגימות כדי לקבל מסקנה אובייקטיבית יותר. השלישית היא שהניתוחים הנוכחיים מתרכזים בעיקר בשני PhGs עיקריים(pהנילאתנואידגליקוזידים), echinacoside (11) ואקטאוזיד (2), אך כידוע, הפעולה הפרמקולוגית של TCM היא שיתוף פעולה של ריבוי רכיבים או סוגים שונים של מרכיבים. לפיכך, קביעה בו-זמנית של ריבוי הרכיבים הפעילים היא משמעותית יותר עבור בקרת האיכות של TCM. עם זאת, עד כה, לא היה ניתוח כמותי עבור יותר משלושה PhGs בהרבהCistanches, אפילו אין דיווח על ניתוח של בנזיל גליקוזידים, אירידואידים וליגננים. לאחר מכן, מחקר עתידי צריך לחזק את המחקר האנליטי והתרופתי שלהם. בסך הכל, המחקר הנוכחי על ניתוח מינים של Cistanche עדיין נמצא במצב נמוך יותר. Herba Cistanches הן תרופות טוניקות חשובות, אך למעשה, לא ניתן היה לשלוט ביעילות על איכותן רק על ידי שני נציגי PhG(pהנילאתנואידגליקוזידים)[9]. השילוב של קביעת ריבוי רכיבים עם טביעת אצבע נחשב לגישה רבת עוצמה לבקרת איכות של TCMs. בעתיד, יש לשפר עוד יותר את רמת המחקר של מיני Cistanche בשני השדות הללו. הקמת שיטה שיכולה בו זמנית ניתוח איכותי וכמותי של PhGs, אירידואידים ומרכיבים פעילים אחרים בהרבהCistanchesיהיה כיוון מחקר משמעותי.

Cistanchetubulosaיש השפעות רבות, לחץ כאן כדי לדעת יותר

תודות

עבודה זו נתמכה כלכלית על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' 30472070), ועל ידי תוכנית הטאלנטים של המאה החדשה, משרד החינוך של סין (מס' 985-2-102-113), והמחברים מודים גם על Xiaoming Liu, Zhihong Song, LiLei מאוניברסיטת פקין על הסיוע הטכני המומחה שלהם.

מתוך: 'ניתוח של מרכיבים כימיים בCistancheמינים' מאת Yong Jiang, Peng-Fei Tu

---Journal of Chromatography A, 1216 (2009) 1970–1979