מהם היתרונות של פוליסכריד Cistanche על תפקוד החיסון

איש קשר: emily.li@wecistanche.com

הפעילות האימונולוגית והמנגנון של Cistanche Polysaccharide

זנג קונלי, ג'נג יפאן, לו ז'יליאנג

[תַקצִיר]המטרה: ללמוד אתחֲסִיןפעילות שלCistancheפוליסכריד(CDPS) והמנגנון שלוחֲסִיןרגולציה במבחנה. שיטות: נעשה שימוש בשיטת הקולורימטרית הכחול תיאזול (MTT) כדי לראות את השפעת הוויסות של CDPS (Cistanche פוליסכריד) על IQS DEX TNF המעכב שגשוג של לימפוציטים thymic עכברים במבחנה; CDPS (Cistanche פוליסכריד) שימש לביצוע ניתוח מחזור התא ומחזור התא באמצעות ציטומטריית זרימה. קביעת Ca2 תוך תאי. תוצאות: CDPS (Cistanche פוליסכריד) בריכוז גבוה יותר יכול להתנגד להשפעה המעכבת של ISQDEX על שגשוג לימפוציטים ולהשפעה המעכבת של TNF בריכוז גבוה על שגשוג לימפוציטים, וליצור סינרגיה של השפעת קידום השגשוג של ריכוז נמוך של TN F על לימפוציטים; 100ug/ml 200 ug/ml CDPS (Cistanche פוליסכריד) יכול להגדיל משמעותית את התאים בשלב החלוקה; ריכוז גבוה יותר (100ug/ml) CDPS (Cistanche פוליסכריד) יכול לקדם באופן משמעותי את ריכוז יון Ca בתימוציטים של עכברים. מסקנה: CDPS (Cistanche פוליסכריד) יכול לקדם תאים להיכנס לשלב החלוקה, ויש להסיק שהשפעתו המעודדת על שגשוג של לימפוציטים thymic עכברים קשורה לקידום שלו לשחרור סידן בלימפוציטים thymic עכברים.

Cistanche(CistancheDeserticolaYC Ma) הוא חומר מרפא סיני נדיר ויקר במדינה שלי. הוא רשום בתור הציון העליון ב"Materia Medica של שן נונג".Cistancheבעל תפקידים של הזנת דם, הזנת הכליות וסיוע ליאנג, לחות למעיים ועיכוב ההזדקנות. מחקר פרמקולוגי מודרני מראה זאתCistancheפוליסכרידיכול לשפר את הגוףחֲסִיןפוּנקצִיָה, מקדם סינתזת DNA, מחזק את הכוח הפיזי, משפר את האינטליגנציה, ויש לו השפעות אנטי-אייג'ינג ברורות [1]. המחבר למד את הרגולציה של CDPS(Cistanche Polysaccharide), מרכיב פוליסכריד שלCistanche, על החֲסִיןפוּנקצִיָהשל לימפוציטים של עכברים.

Cistanche פוליסכרידקידוםריבוי שללימפוציטים

1 חומר ושיטות

1.1 ריאגנטים ותרופות.

RPM, I 1640 בינוני: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-גלוטמין: מפעל ריאגנטים של שנחאי דונגפנג; פניצילין וסטרפטומיצין: מפעל התרופות בצפון סין; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A Company; Phytohemagglutinin (PHA): מעבדה רפואית של שנחאי; איזופרוטרנול (ISO): מפעל התרופות שנחאי טיאנפנג; מרקפטואתנול: חברת פלוקה; סרום עגל יילוד: Sijiqing Bioengineering Company; Dexamethasone (DEX) הוצג על ידי ד"ר מא ליאנג, בית החולים המסונף הראשון של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'ג'יאנג; גורם מדכא גידולים (TNF) סופק על ידי יו יוהאן, פרופסור, המחלקה לתאים, בית הספר למדעי החיים, אוניברסיטת ג'ג'יאנג; שאר הריאגנטים הם כולם ציונים אנליטיים המיוצרים בבית.

1.2 חיות ניסוי.

עכברי ICR, זכר, בני 68 שבועות, במשקל 18-20 גרם, 22, נרכשו מ-Zhejiang Experimental Animal Center.

1.3 מיצוי של פוליסכריד Cistanche [2]:

Cistancheפוליסכרידמופק על ידי המעבדה שלנו! לאחר ריסוק הסם הגולמיCistanche, הוא טובל באתנול חם, מופק במים רותחים ומשקע באתנול. אנזים ניטרלי בשילוב עם שיטת Sewag לדה-פרוטאין, כרומטוגרפיה חילופי אניונים DEAE-Sephadex A- 50 וכרומטוגרפיה של Sephacry S-200 סינון ג'ל להשגת רכיב יחיד של CDPS (Cistanche פוליסכריד)). לשמור יבש, להשתמש ב-RPMI1640 לא שלם כדי ליצור ריכוז מסוים לפני השימוש, ולעקר על ידי סינון אולטרה

1.4 הכנת לימפוציטים מטחול ותימוס [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, התאם את ריכוז תאי הטחול ל-X 10/ml ואת ריכוז התימוציטים ל-×10 מעלות/ml

1.5 תגובת התפשטות לימפוציטים:לפי שיטת Mosmanmn [4] שיפור: 96-צלחת תרבית תאים היטב, הוסף 10/ml תרחיף תאי טחול או מים 10/ml תרחיף תימוציטים 100M1 וריכוזים שונים של תרופות 10041 בכל באר. מטפח בחממת CO2.37C למשך 72 שעות. 4 שעות לפני סיום התרבית, הוסף 8μ1 של MTT (5 מ"ג/מ"ל) לכל באר. בסוף התרבית, שאפו 150 אינץ' מהסופרנטנט מכל באר, והוסיפו 0.5N isopropanol hydrochloride 150M1. לנער בעדינות את המיקרו שייקר כדי להמיס לחלוטין את הגבישים הכחולים. למדוד את ה-OD570 בקורא המיקרו-לוחות. הגדר כל ניסוי הצבע כמו שלוש בארות משוכפלות.

1.6 קביעת ההשפעה על מחזור התא [5]:

{{0}}צלחת תרבית תאים באר, הוסף תרחיף תימוציטים של 4 10 מעלות/מ"ל 1 מ"ל לכל באר, הוסף ריאגנטים שונים ותמיסת פוליסכרידים ל-2 מ"ל ב-CO חזק, 37 אינקובטורים לאחר תרבית במשך 72 שעות, צנטריפוגה במהירות של 1500 ר/דקה למשך 15 דקות, השליכו את הסופרנטנט, הוסיפו 7 אתנול כדי לתקן את התאים המשקעים, אחסנו ב-4C לבדיקת המתנה, שטפו את התאים פעמיים עם PBS, צנטריפוגה במהירות של 1500r/min למשך 15 דקות, זרוק את סופרנטנט, ולהוסיף לאחר ש-0.5ml0.1 RNaseA עוכל ב-4C למשך 30 דקות, 50ug/ml bromoacetate נצבע למשך 30 דקות ב-4C, ועוצמת הקרינה של דגימות התא נמדדה בציטומטר הזרימה של FACScan. 10,000 נקודות בדיקת תאים נאספו עבור כל דגימה, והנתונים השתמשו בניתוח תוכנת Mul תלת אופן.

1.7 קביעת ריכוז יוני הסידן התוך תאי [6]

קח תימוציטים של עכבר באותו אופן כמו לעיל. השעינו במצע תרבית לא שלם RPMIl640 והתאם את ריכוז התא ל × 10'/ml. הוסף 1 מ"ל של תרחיף תימוציטים ו-1 מיקרומטר לכל צינור ניסוי Fluo-3AM תמיסת צביעה 5μ1, 2% F-275μ1, לאחר דגירה ב-37 למשך 30 דקות, שטפו פעמיים עם RPM1640, 1500r/ דקות, צנטריפוגה למשך 10 דקות, השליכו את הסופרנטנט והוסיפו ריכוזים שונים של פוליסכרידים ופוליסכרידים לתאים המשקעים לאחר ConA, עוצמת הקרינה נמדדה בציטומטר הזרימה של FACScan. הנתונים של 10,000 נקודות בדיקה של תאים נאספו עבור כל דגימה ונותחו על ידי תוכנת CELLQUEST. 1.8 שיטות סטטיסטיות שימשו לניתוח שונות, מחזור התא ומדידת יוני הסידן נותחו על ידי תוכנת ציטומטר הזרימה.

Cistanche Polysaccharide מ- Cistanche deserticola

2 תוצאות

2.1 Cistanche Polysaccharide במבחנה מעכב את התפשטות הלימפוציטים התימוסיים של עכברים על ידי ISO DEX TNF

אגוניסט הקולטן האדרנרגי isoproterenol (ISO) וסוג של הורמון קליפת יותרת הכליה דקסמתזון (DEX) מעכבים את התפשטות לימפוציטים CDPS (Cistanche פוליסכריד) בריכוז גבוה יותר (75 125ug/ml) יכול להתנגד להשפעה המעכבת של ISO DEX על התפשטות לימפוציטים (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche פוליסכריד) (125ug/ml) בריכוז גבוה יותר יכול להתנגד להשפעה המעכבת של TNF, ולקדם באופן סינרגטי את התפשטות לימפוציטים עם ריכוז נמוך של TNF (איור 2)

2.2 ויסות של ציסטאנצ'י פוליסכריד של מחזור לימפוציטים של התימוס

CDPS (Cistancheפוליסכריד) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml שלושה ריכוזים הופעלו על לימפוציטים thymic עכברים במשך 72 שעות, תכולת ה-DNA בתאים נמדדה על ידי FACS, ואינדקס התפשטות (PI) חושב לפי הנוסחה. התוצאות מראות שגם 100ug/ml וגם 200ug/ml יכולים להגדיל משמעותית את התאים בשלב החלוקה, ואינדקס הריבוי (68.0 אחוז, 56.6) של שניהם גבוה משמעותית מקבוצת הביקורת (44.6), ו-200ug/ml הקבוצה נמוכה במקצת מקבוצת 100ug/ml מכיוון שבריכוז של 200ug/ml, השפעתה על התפשטות התאים הפכה למגמת ירידה [7]. ערך ה-PI (47.5 אחוזים) של קבוצת ה-25 ug/ml לא היה גבוה משמעותית מזה של קבוצת הביקורת.

2.3 ההשפעה של סיסטאנצ'ה פוליסכריד על ריכוז יוני הסידן בתימוציטים של עכברים

תוצאות הניסוי מראות שריכוז גבוה יותר (100 ug/ml) של CDPS (Cistanche Polysaccharidה) יכול לקדם משמעותית את העלייה בריכוז יוני הסידן בתימוציטים של עכברים בהשוואה לקבוצת הביקורת, יש הבדל משמעותי (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 דיון

Cistanche, הידוע בכינויו"ג'ינסנג מדברי", הוא גזע בשרני יבש וקשקשי שלCistanche.Cistancheבעל תפקידים של הזנת יאנג הכליות, תמצית הזנה, דם ומעי. הוא שייך למעין ריגוש של קליפת יותרת המוח-אדרנל או בעל אפקט דמוי הורמון הדומה לקליפת יותרת הכליה. תרופה סינית בעלת ערך שיכולה לווסת אתחֲסִיןפוּנקצִיָהשל הגוף. תוצאות המחקר הקודמות שלנו מראות ש-CDPS (Cistanche פוליסכריד) במבחנה יכולים לקדם שגשוג של לימפוציטים T thymic שלא הופעלו או הופעלו על ידי ConA PHA. בשילוב עם ConA PHA, ישנם שני סוגים של ממריצים של תאי T, אנו מאמינים ש-CDPS (Cistanche פוליסכריד) הוא Badjuvant עבור תאי T, ומצאנו גם ש-CDPS (Cistanche פוליסכריד) יכול להגביר באופן משמעותי את הפרשת לימפוציטים בטחול עכברים בריכוזים גבוהים יותר [8]

כמה מחקרים מצאו ש-TNF רקומביננטי יכול לגרום לאפופטוזיס של צבירי לימפוציטים מסוג T רגילים של עכברים ואדם במבחנה, והשפעה זו עשויה להיות מעוכבת על ידי IIL-2 IL-1 IFN ו-IIL-4 עם dexamethasone (DEX) זה יכול לעכב שגשוג לימפוציטים על ידי עיכוב ביטוי והפרשת לימפוציטים של IL-2 ווויסות מטה של ​​הייצור של IL עם זיקה גבוהה-2R. ניסוי זה מצא שריכוז גבוה יותר של CDPS (Cistancheפוליסכריד) יכול לנטרל את ההשפעות של ריכוז גבוה של TN F על התפשטות לימפוציטים. עיכוב, סינרגטי עם ריכוז נמוך של TNF כדי לקדם שגשוג של לימפוציטים, ויכול להתמודד עם ההשפעה המעכבת של ISQ DEX על שגשוג לימפוציטים. ההשפעות הללו הן בדיוק דרך CDPS (Cistancheפוליסכריד) כדי לקדם את השגשוג של לימפוציטים T והם אוטוקריניים על ידי תאי T IL-2 וציטוקינים אחרים להשלמת.

בשנים האחרונות, היו מחקרים רבים על ההשפעות האימונו-פרמקולוגיות של פוליסכרידים צמחיים, אך מעט מחקרים עלחֲסִיןמנגנון ויסות של פוליסכרידים, במיוחד מסלול העברת האותות של פוליסכרידים הפועלים על לימפוציטים עם Ca2 כשליח השני. אין דיווח. ניסוי זה ערך מחקר מקדים בתחום זה. מולקולות איתות תוך תאיות כוללות cAM R Ca", IP3 DG cGMP וכו', ביניהם Ca" בעל השפעה פיזיולוגית חשובה ביותר על תאים. העלייה בריכוז Ca² התוך תאי היא תופעה חשובה בשלב המוקדם של הפעלה ושגשוג לימפוציטים. תהליך זה מתרחש בעיקר בעשרות השניות עד הדקות הראשונות כאשר תאים מופעלים על ידי ממריצים. הדרך הקלאסית להפעלת תאי T היא פוספטידילינוזיטול (PIB) לחילוף חומרים של שריר פוספטידיל. מטבוליט האלכוהול 1,4.5-inositol triphosphate (IP3) יכול לקדם את שחרור Ca" המאוחסן ברשת הפנימית על ידי קישור לקולטני הרשת הפנימיים, הגדלת רמת Ca2 תוך תאי וריכוז Ca תוך תאי. * עליות. גבוה יכול לקדם את הייצור של NF-AT (גורם נודיאי של תא T משופעל), לאחרון יש השפעה של קידום הביטוי של הגן IIL-2. תוצאות ניסויים מראות שריכוז גבוה יותר (100ug/ml ) של CDPS (Cistancheפוליסכריד) יעיל למשך 5 10 דקות לזמן יש השפעה משמעותית על הגדלת ריכוז Ca* בתימוציטים של עכברים, ויש לו השפעה סינרגטית עם ConA. לכן, אנו משערים ש-CDPS (Cistanche פוליסכריד) מקדם את שחרור הסידן בלימפוציטים תימיים של עכברים כדי להגביר את ריכוז יוני הסידן התוך תאיים. העלייה מקדמת את הביטוי של הגן IL-2 ומובילה לשגשוג של תאי T, שהוא אחד מהיסודות התיאורטיים שלCistancheשל פוליסכרידיםהשפעה רגולטורית על הגוף

Cistanche פוליסכריד

הפניות

1. IN XiuHin, SU Yuke (מצב כללי של מחקר פרמקולוגיה עלCistancheסקה 【J】. תרופות סיניות מסורתיות וצמחי מרפא ((רפואת צמחים סינית). 1993.24(10. 550-552(בסינית))

2. ZHANG Weijiee (טכנולוגיה ביוכימית של polysaccharide מורכב [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (בסינית)

3. MA Bo- (Ma Baoli). טכניקת אימונולוגיה【M1. פרס האוניברסיטה הרפואית של שנחאי (הוצאת שנגחאי רפואית), 1984 188-190. (סיני))

4. מבחן Mosmann T. Rapiloloimeric ליישום קל יותר של צמיחה והישרדות למניעת ריבוי וציטוטוקסיות [JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian וכו'), השפעת צין על התפשטות תאים מחזוריים בחֲסִיןניתוח איברים באמצעות ציטומטריית זרימה [J]. אימונולוגיה סינית (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10X5: 278-281. (בסין)

6. TAO אקסין. JIYong-yong, GAO Qi-rong ועוד (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong וכו'). ניתוח FACS של שינויים ב-C2 התוך-תאי במהלך אלאקטיבציה[J] Chinese Journal of Immunology (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (בסינית)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU suchiang; טיהור ד פוליסכריד שלCistancheDeserticolaYC Mfa והשפעותיו האימונומודולטוריות על Tellfunction[J].burnal of Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (בסינית)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH Cytotoxic Efed של TNF ולימפוטוקסין על T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.