לוקמיה גרנולוציטית ספונטנית ב-NOD/Shi-scid IL-2R null Mouse

תַקצִיר:כאן אנו מדווחים על מקרה של לוקמיה גרנולוציטית ספונטנית אצל 51-זכר בן שבוע NOD/Shi-scidIL-2ר עכבר null (NOG). העכבר הראהאנמיה מתקדמתותנועת נשימה גסה. מבחינה מקרוסקופית, הטחול היה דהוי והוגדל. מבחינה היסטולוגית, מח העצם של הסטרנוםועצם הירך הייתה מאוד תאית ומלאה כמעט אך ורק בתאים ניאופלסטים. הגרעינים של תאים ניאופלסטים היו גדולים, בצורת אליפסה עד מעט לא סדירה, ולמספר קטן של תאיםכִּליָה- או גרעינים בצורת טבעת.תאים ניאופלסטייםהסתננו באופן נרחב לאיברים, והטחול והכבד היו מעורבים באופן בולט. מבחינה אימונוהיסטוכימית, אוכלוסייה גדולה של תאים ניאופלסטים בעיסה האדומה של הטחול והסינוסואיד של הכבד הייתה חיובית עבורמיאלופרוקסידאז. בהתבסס על המאפיינים ההיסטולוגיים, מקרה זה אובחןלוקמיה גרנולוציטית. מידע חדש זה עלגידולים ספונטנייםעשוי להיות מועיל לשימוש מתאים בזן עכבר זה במחקר נוסף. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

מילות מפתח: לוקמיה גרנולוציטית, עכבר NOG, גידול ספונטני

לחץ כאן כדי לקבל תמצית CISTANCHE אורגנית טבעית עם 25% אכינאקוסיד ו-9% אקטוזיד לתפקוד הכליה

השירות התומך של Wecistanche - יצואנית ה-cistanche הגדולה בסין:

דוא"ל:wallence.suen@wecistanche.com

ווטסאפ/טלפון:+86 15292862950

קנה לפרטי מפרטים נוספים:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

לוקמיה גרנולוציטית ספונטניתמדווח רק לעתים נדירות במספר זני עכברים, אם כי חומרים כימיים וקרינה מייננת עשויים להגביר את השכיחות בחלק מזני עכברים1, 2. עכברי NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) הם חמוריםבעלי חיים עם חוסר חיסוני, ומציגים פגמים בתאי T-, B- ותאי הורגים טבעיים, ומקרופאגים ותאים דנדריטים מתפקדים בצורה לקויה על ידי נוק-אאוט של IL-2 receptor-chain (IL2R c) לתוך זן NOD-scid3. זן עכברים זה משמש לבדיקות לא-קליניות, כגון בדיקת הגידוליות, כדי להעריך את האיכות והבטיחות של מוצרים ביולוגיים לרפואה רגנרטיבית תוך שימוש בתאים/רקמות שמקורם באדם, בגלל השתלה טובה יותר באופן ניכר של תאים קסנוגניים4-6. למרות שהמצב החסר החיסוני וההשלכות שלו על שתל קסנו נלמד היטב, מידע מועט זמין על גידולים ספונטניים המתרחשים בזן עכברים זה, כגון לימפומה תימית,חלבבלוטה אדנומה/אדנוקרצינומה, קרצינומה ברונכי-אלוואולרית, rhabdomyosarcoma, ו-teratoma7. כאן אנו מדווחים על מקרה של לוקמיה גרנולוציטית בעכבר NOG זכר בן 51-שבוע.

החיה התקבלה מ-In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, יפן) בגיל 6 שבועות ונשמרה ללא טיפול. החיה אוכסנה בנפרד בכלוב פלסטיק עם מערכת כלוב מאווררת בנפרד (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., טוקיו, יפן) בתוך חדר מערכת מחסום מבוקר סביבתי, שנשמר בטמפרטורה של 22 ± 2 מעלות עם לחות של 50 ± 20% ומחזור אור/חושך 12-שע. העכבר הוזנה בדיאטה מחוטאת (CRF-1; Charles River Japan, Inc., טוקיו, יפן) עם מי ברז וליביטום. החיה טופלה על פי הפרוטוקול שאושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של CMIC Pharma Science Co., Ltd., המוסמכת על ידי AAALAC International.

עכבר זה הראה סימנים קליניים של היחלשות, כגון אנמיה, תנועת נשימה גסה והפחתה במשקל הגוף בין 49 ל-51 שבועות. בעל החיים הורדם בגיל 51 שבועות. בזמן נתיחה, הטחול היה דהוי והוגדל. לא נצפו ממצאים חריגים לא תקינים באיברים האחרים. התימוס ובלוטת הלימפה היו אטרופיים, בדומה לאלו של עכברי NOG רגילים.

כל האיברים ודגימות הרקמות נאספו באופן שגרתי, קבועות בפורמלין מבוצר נייטרלי של 10%, הוטמעו בפרפין וחתכו ב-3 מיקרומטר בערך. לצורך הבדיקה הפתולוגית שלו, החתכים נצבעו בהמטוקסילין ואאוזין (HE). קטעים של הטחול והכבד נצבעו באופן אימונוהיסטוכימי עבור נוגדן רב שבטי ארנב אנטי-אנושי מיאלופרוקסידאז (MPO) (דקו יפן, טוקיו, יפן) כסמן תאים מיאלואידים, נוגדן חד שבטי CD3 אנטי-אנושי ארנב (Nichirei Biosciences Inc., טוקיו, יפן) ) כסמן לתאי T, ונוגדן חד-שבטי של ארנב אנטי-אנושי Pax-5 (Abcam Inc., Cambridge, UK) כסמן תאי B8. קטעים הודגרו עם הנוגדנים בטמפרטורת החדר למשך שעה, וזיהוי חיסוני בוצע באמצעות Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) עם 3,3′-diaminobenzidine/H2O2 ככרומוגן. קטעים מוכתמים היו אזצבוע נגדי עם המטוקסילין.

מבחינה היסטופתולוגית, מח העצם של עצם החזה ועצם הירך היה מאוד תאי וכמעט בלעדי בתאים ניאופלסטיים (איור 1A). רקמת השומן נעקרה לחלוטין. היו מדי פעם מוקדים תאיים המורכבים מאלמנטים אריתרואידים ומגה-קריוציטים במח, שנחשבו כשרידים שלhematopoiesis רגיל. רוב התאים הניאופלאסטיים הראו מראה בלסטי, המאופיין בגרעינים גדולים, סגלגלים עד מעט לא סדיר, ועם כרומטין רשתי המכיל נוקלאולי בולט אחד או יותר. היה מספר קטן של תאים עם גרעינים בצורת כליה או טבעת וכמה תאים עם גרעינים אונות היו גם נוכחים (איור 1B). גרגירים בציטופלזמה של תאים ניאופלסטים לא היו ברורים בקטעים שנצבעו ב-HE. נמצאו דמויות מיטוטיות רבות במח, ונצפו גם גופים אפופטוטיים מדי פעם. תאים ניאופלסטיים פלשו בצורה ניכרת לפריוסטאום ולשריר השלד שמסביב. הייתה חדירת תאים ניאופלסטית נרחבת לאיברים ורקמות אחרות, והטחול והכבד היו מעורבים באופן בולט. בטחול נצפו תאים ניאופסטיים לאורך העיסה האדומה (איור 2). ניכרה חדירת קפסולה של תאים ניאופלסטים. נצפו כמה סדרות אריתרואידים ומגה-קריוציטים מתפתחים. מגהקריוציטים המכילים תא מיאלואיד אחד או כמה בציטופלזמה, מה שמצביע על אמפריפולזה, נצפו מדי פעם. בכבד חדרו תאים ניאופלסטים לקפסולת הגליסון ולסינוסואידים הכבדיים בצורה מפוזרת (איור 3). תאים ניאופלסטיים עם גרעינים בצורת כליה או טבעת היו ניכרים גם בכלי דם מסוימים. חלק מהפטוציטים באזור הפריפורטלי, עם חדירת תאים ניאופלסטית בולטת, הראו ניוון או נמק, בעוד שהמבנה התקין של האונה הכבדית נותר שלם. כמו כן נמצאה חדירת תאים ניאופלסטית באיברים אחרים, לרבות דופן המכתשית והאזור הפריווסקולרי של הריאה, בין אצטדיון בכליה, סינוסואיד בבלוטת יותרת הכליה ורירית ותת-רירית במערכת הקיבה (קיבה ומעי). מבחינה אימונוהיסטוכימית, אוכלוסייה גדולה של תאים ניאופלסטים בעיסה האדומה של הטחול (איור 4) ובסינוסואיד של הכבד הייתה חיובית ל-MPO. תאים חיוביים של CD3 ו-Pax-5 לא זוהו. התוצאות של צביעה חיסונית של CD3 ו- Pax-5 היו דומות לאלו של הטחול של עכברי NOG רגילים, שהיו היסטולוגית היפופלסטיים ולא הראו תאים חיוביים ל-CD3 או Pax-5.

מחקר אימונוהיסטוכימי גילה שמקורם של התאים הניאופלסטים משושלות התאים המיאלואידים. בחלק מהאזורים המעורבים, במיוחד הטחול והכבד, למספר קטן של תאים היו צורות כליות, טבעת או אונות המעידות על הבחנה של סדרות מיאלואידיות. ממצאים אלו מצביעים על כך שתאים ניאופלסטים נגזרים מגרנולוציטים לא בשלים. המקרה של מיאלופוזיס חמור עשוי להתבטא בנוכחות כל סוגי הסדרות המיאלואידיות המתפתחות, בניגוד לדומיננטיות של תאים לא בשלים בלוקמיה. בנוסף, אנמיה מתקדמת היא סימן קליני שכיח ללוקמיה גרנולוציטית, והעלייה בתאים אריתרואידים ומגה-קריוציטים ירודה1. האוכלוסייה המינורית של גרנולוציטים עם גרעינים אונות באזור הפגוע ללא דלקת ברורה מצביעה על הממצאים של המקרה הנוכחי שהם מיאלופוזיס ניאופלסטי ולא תגובתי.

בלוקמיה גרנולוציטית, מח העצם עשוי להיות מוחלף בתאים מיאלואידים לא בשלים ובוגרים. בדיווח קודם על זנים אחרים של עכברים, תאים ניאופלסטיים אלו הסתננו באופן מלא לכבד, לטחול, בלוטות הלימפה וכו'2, ותאים אלו בטחול ובכבד היו ממוקמים בעיקר בעיסה האדומה וסביב הקפסולה של גליסון1. לפיכך, התפלגות התאים הלויקמית במקרה הנוכחי הייתה זהה לזו שבמקרה הקודם. בהתבסס על המורפולוגיה של התאים, לוקמיה גרנולוציטית בעכברים מסווגת לשני סוגים: הסוג הצעיר, אשר דומה ללוקמיה מיאלוגנית חריפה אנושית, והסוג הבוגר ללוקמיה מיאלוגנית אנושית כרונית1. במקרה של צעירים, תאים ניאופלסטיים במח העצם, בטחול ובכבד נשלטו על ידי תאים בעלי התמיינות גרועה, בעוד שניתן לראות אלמנטים מיאלואידים המייצגים דרגות שונות של הבשלה ואחוז המיאלובלסטים היה נמוך בחלק מהמקרים הבוגרים2, 9. במקרה הנוכחי, תאים סרטניים נשלטו על ידי צורה לא בוגרת עם גרעינים גדולים, סגלגלים עד מעט לא סדיר. בנוסף, בהתחשב בממצאים הקליניים לפיהם הידרדרות בריאותית כללית, כולל אנמיה מתקדמת ותנועת נשימה גסה, התפתחה בצורה חריפה; לפיכך, מניחים שהמקרה הנוכחי הוא מסוג נוער.

איור 1. תמונות היסטולוגיות של מח העצם של עצם הירך. ת: תאים ניאופלסטיים מתרבים בצורה מפוזרת, ובכך מחליפים את מח העצם. ב: הגרעינים גדולים, בצורתם סגלגלה עד מעט לא סדירה. למספר קטן של תאים יש גרעינים בצורת כליות (ראש חץ צהוב), טבעת (ראש חץ ירוק), או אונה (ראש חץ לבן). הדמות המיטוטית מסומנת על ידי החץ הלבן. הוא מכתים. פס שחור =50 מיקרומטר (A), 10 מיקרומטר (B).

בפרסום קודם על עכברי NOG, נגעים ניאופלסטיים היו בדרך כלל לא שכיחים; עם זאת, לימפומה תימית דווחה ב-0.82% בקבוצת הגיל שנעה בין 16 ל-40 שבועות7, 10. למיטב ידיעתנו, לוקמיה גרנולוציטית ספונטנית לא דווחה בעבר בעכברי NOG. במספר זנים של עכברים, כולל B6C3F1 ו-BALB/c, לוקמיה גרנולוציטית התרחשה לעתים רחוקות2, 11, ולא דווחה במקרה של עכברים אלה בגיל 12 חודשים ומטה. המקרה הנוכחי פיתח לוקמיה גרנולוציטית בגיל 51 שבועות, שהיה גיל צעיר יחסית. מידע חדשני זה על גידולים ספונטניים עשוי להיות מועיל לשימוש המתאים של זן עכברים זה במחקר נוסף.