מיקרו-כבידה מדומה משפיעה על סמנים ביולוגיים הקשורים לחסינות בסרטן ריאות

תַקצִיר: Microgravity היא אסטרטגיה חדשה שעשויה לשמש ככלי משלים לפיתוח טיפולי סרטן עתידיים. בסרטן ריאות, השפעת מיקרו-כבידה על תהליכים תאיים ויכולת הנדידה של תאים מטופלת היטב. עם זאת, השפעתו על המנגנונים המניעים את התקדמות סרטן הריאות נותרה בחיתוליו. במחקר זה, 13 גנים מבוטאים בצורה דיפרנציאלית הוכחו כקשורים לפרוגנוזה של סרטן ריאות תחת סימולציה של מיקרו-כבידה (SMG). באמצעות ניתוח העשרה של סט גנים, גנים אלה מועשרים במסלולי חסינות הומוראלית. במקום זאת, תאי אפיתל בסיס-אלוויאולרי (A549) נחשפו ל-SMG באמצעות מערכת קלינוסטטית דו-ממדית במבחנה. בנוסף לשינוי המורפולוגי והירידה בקצב השגשוג, SMG החזיר את הפנוטיפ של המעבר האפיתל למזנכימלי (EMT) של A549, מנגנון מפתח בהתקדמות הסרטן. הדבר הוכח על ידי ביטוי מוגבר של E-cadherin באפיתל וירידה בביטוי N-cadherin mesenchymal, ומכאן שהפגין מצב פחות גרורתי. מעניין לציין, שראינו ביטוי מוגבר של FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ו-CFB ואת המתאם שלהם ל-EMT תחת SMG, מה שהופך אותם לסמנים ביולוגיים פוטנציאליים לדיכוי הגידול. יחד, ממצאים אלה חושפים הזדמנויות חדשות לבסס אסטרטגיות טיפוליות חדשות לטיפול בסרטן ריאות.

מילות מפתח: מיקרו-כבידה מדומה; EMT; סרטן ריאות; גרורות; מדכא גידולים; סמן ביולוגי

השפעות של Cistanche herb-Antitumor

1. הקדמה

החלל ידוע בכך שהוא חסר את וקטור הכבידה, המשפיע על הגוף ברמות האיברים, הרקמה והתאים. מיקרו-כבידה, מצב של חוסר משקל לכאורה, הוא גורם לחץ משמעותי בחלל הידוע כמשפיע באופן משמעותי על בריאות האדם, כגון אובדן עצם, ניוון שרירים והפרעות לב [1,2]. ההשפעה של מיקרו-כבידה על תאים סרטניים היוותה גם מוקד עניין הולך וגובר בחלל וחקר הסרטן. הוכח כי מיקרו-כבידה מדכאת את הפעילות של תאי מערכת החיסון ומשבשת מערכות רב-גומיות, מה שעלול להגביר את הסיכון לפתח סרטן [2-4]. בשל בעיות בריאות ברורות אלו, סביבת המיקרו-כבידה אפשרה לחוקרים לחקור את המנגנונים הביו-פיזיים המושפעים ממיקרו-כבידה ועזרה לגלות תרופות לטיפול בהפרעות נוירו-דגנרטיביות, אימונותרפיות וטיפולים אנטי-סרטניים טובים יותר וממוקדים יותר [4-6]. מחקרים רבים תיעדו היטב וסקרו את ההשלכה הגדולה שיש למיקרו-כבידה על התקדמות תאית, התפשטות ואפופטוזיס בשורות תאי גידול רבות, כולל סרטן ריאות [7-12]. עם זאת, מחקרים רבים אחרים המעורבים במיקרו-כבידה הוכחו כגורמים לשינויים בביטוי הגנים המעורבים בשגשוג תאי סרטן, גרורות והישרדות, ומעבירים את התאים לפנוטיפ פחות אגרסיבי [13,14]. זה עשוי לשפוך אור על הבנות חדשות של ביולוגיה ואבחון גידולים, ומכאן להדגיש את מיקרו-כבידה ככלי חדשני לגילוי מטרות חדשות בתקווה לפתח גישות מחקר חדשות ולשפר אסטרטגיות טיפוליות. סרטן הריאות, כאשר סרטן הריאות של תאים לא קטנים (NSCLC) הוא הסוג הבולט ביותר, מהווה גורם מוביל למוות, מהווה 12% מכלל סוגי הסרטן, והוא הסרטן המאובחן השכיח ביותר [15]. במחקרים העוסקים במיקרו-כבידה, שעשויים להנחות אותנו להבין טוב יותר את התהליך המסרטן, הוכח כי תאי סרטן ריאות מאבדים את הגזע שלהם לאחר חשיפה למיקרו-כבידה, ובכך משפיעים על גדילת ותפקוד תאי סרטן [11]. מחקר של Ahn et al. הראה כי חשיפת תאי סרטן ריאות (A549) למיקרו-כבידה גרמה להגירה והתפשטות מהירה. זה הוסבר על ידי הרמות המווסתות של מטריצות מטלופרוטאזות (MMP-2 ו-MMP-9) תחת מיקרו-כבידה, ובכך ממלאות תפקיד מכריע בפלישה ובנדידה של סרטן [10]. במחקר אחר, Chung et al. מצא כי מיקרו-כבידה מדומה לא השפיעה באופן מובהק על התפשטות תאי סרטן הריאה אלא הגבירה את ההגירה בהשוואה לקבוצת הביקורת תחת כוח כבידה תקין [16]. להיפך, Chang et al. הראה ירידה בנדידה בקו תאי סרטן הריאה A549 לאחר 24 שעות של חשיפה לתנאי מיקרו-כבידה [17]. למרות ההשפעות המשמעותיות של מיקרו-כבידה על התנהגות תאית, הכוללת אפופטוזיס, הגירה ופולשנות, השפעתה על סרטן הריאות טרם הובהרה במלואה. זה ידוע היטב שתאי אפיתל עוברים מספר שינויים ביוכימיים כדי לבסס פנוטיפ מזנכימלי המשפר עמידות לאפופטוזיס, פולשנות ויכולות נדידה. תהליך ביולוגי כזה ידוע כמעבר אפיתל-למזנכימלי (EMT), סימן היכר של התקדמות הסרטן [18]. הקשר של EMT להתקדמות הסרטן נדון היטב. ידוע כי גידולים מפעילים EMT על ידי הגברת פקטורי שעתוק, ביטוי חלבונים משטח התא וייצור אנזימים מפרקי ECM. ברגע ש-EMT מופעל, תאי הגידול מאבדים את הידבקותם בין התא לתא ורוכשים תכונות נודדות ופולשניות [19]. רק שני מחקרים הראו שמיקרו-כבידה מדומה גורם למעבר אפיתל-למזנכימלי חולף (EMT) בקרטינוציטים [9]. בנוסף, תופעות כאלה הודגשו בתאי MCF-7 וב-HUVEC [20]; עם זאת, אף מחקר לא התמקד בהשפעה של מיקרו-כבידה על EMT בסרטן ריאות. למרות התגליות החשובות הרבות שנעשו על יכולת המיקרו-כבידה לווסת תהליכים גידוליים וגרורות של סרטן, המנגנונים המדויקים המונעים על-ידי עיר הכבידה נותרו לא ידועים יחסית, ומכאן נותנים שאלות פתוחות לגבי השינויים האדפטיבים המתרחשים ברמה המולקולרית. במחקר זה, זיהינו חתימה של גנים הקשורים למערכת החיסון (FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ו-CST1) שהפגינו באופן משמעותי ביטוי mRNA מוגבר בתאי A549 בהשפעת מיקרו-כבידה מדומה (SMG). בנוסף, הערכנו את התרומה של SMG בהתקדמות סרטן A549 באמצעות ויסות EMT. FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ו-CST1 והמתאם שלהם לסמני מפתח EMT הציגו פנוטיפ פוטנציאלי פחות גרורתי של סרטן ריאות תחת SMG. הממצאים של מחקר זה מספקים בסיס לחקירות עתידיות הנדרשות כדי לזהות מנגנונים בסיסיים, אשר יפתחו את ההבנה שלנו ויסייעו בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות לטיפול בסרטן ריאות.

היתרונות של cistanche tubulosa-Antitumor

2. תוצאות

2.1. הגנים הנפוצים ביותר המזוהים בצורה דיפרנציאלית בתאי סרטן ריאות תחת מיקרו-כבידה מדומה (SMG) בהשוואה ל-Ground Gravity (GG)

כדי לזהות גנים המעורבים בסרטן ריאות תחת סימולציה של מיקרו-כבידה (SMG), חקרנו בתחילה גנים שמתבטאים בצורה דיפרנציאלית תחת SMG בהשוואה ל-ground gravity (GG) עבור סרטן ריאות אנושי באמצעות מסד הנתונים הזמין לציבור Gene Expression Omnibus (GEO). נבחרו שני מערכי נתונים, GSE78210 ו-GSE36931, הכוללים ביטוי גנים עבור שני קווי תאים שונים של סרטן ריאות אנושיים, A549 ו-Colo699, שטופחו בתנאי תרבית תאים דו-ממדיים ותלת-ממדיים. הבדלים בפרופילי ביטוי גנטי בין דגימות SMG ו-GG הוצגו בחלקות הר געש (איור 1). הגנים המזוהים בצורה דיפרנציאלית (DEGs; איור 2) עבור כל מערך נתונים חולקו לאלה המווסתים בסרטן ריאות (21 גנים ב-A549 ו-29 גנים ב-Colo699 של מערך הנתונים GSE78210 ו-47 גנים ב-A549 של מערך הנתונים של GSE36931) ואלו סרטן ריאות I עם ויסות מופחת (40 גנים ב-A549 ו-27 גנים Colo699 של GSE78210 מערך הנתונים ו-87 גנים ב-A549 של GSE36931 מערך הנתונים), כפי שמיוצג בטבלה 1. שלוש עשרה DEGs באו לידי ביטוי גבוה באופן משמעותי בתאי A549 של GSE7360 ו-GSE7369 SMG בהשוואה למצב GG. הגנים הנפוצים ביותר זוהו באמצעות כלי האינטרנט InteractiVienn (איור 2A). הגנים המועמדים כוללים AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ו-BPIFA1. כדי לקבוע אם ה-DEGs שזוהו מעורבים במסלולים נפוצים, הגנים המועמדים הועלו ל- Metascape (http://metascape.org; הגישה אליהם הייתה ב-11 בנובמבר 2021). מעניין שהגנים הללו מועשרים במסלולים הכוללים תגובה חיסונית הומורלית ואקסוציטוזיס מווסת (איור 2B).

איור 1. עלילת הר געש המציגה גנים מבוטאים בצורה דיפרנציאלית (DEGs) באמצעות GEO Omnibus. (א) עלילת הר געש המציגה DEGs תחת אפקטים SMG ו-GG בתאי A549 באמצעות (A) GSE78210 ו-(B) GSE36931 מערכי נתונים. (ג) עלילת הר געש המציגה DEG תחת אפקטים של SMG ו-GG בקו תאים Colo699 באמצעות מערך נתונים של GSE78210. הצבע האדום מצביע על גנים מווסתים, בעוד הצבע הכחול מצביע על גנים מווסתים.

טבלה 1. סך הגנים שמתבטאים בצורה דיפרנציאלית ב-SMG בהשוואה ל-GG בשורות תאי סרטן הריאות A549 ו-Colo699. לכל מערך נתונים היו שינויים קיפולים שהותאמו כדי לחלץ את 5% העליונים של DEGs. עבור GSE36931, שינוי קיפול (FC) הותאם כך שיכלול רק גנים עם FC גדול או שווה ל-4 או קטן מ-4 או שווה לו. עבור GSE78210, FC הותאם כך שיכלול רק גנים עם FC גדול או שווה ל-3 או קטן או שווה ל-3.

איור 2. שלוש עשרה DEGs משותפים בדרך כלל בין מערכי נתונים GSE78210 ו-GSE36931 בסרטן ריאות. (א) דיאגרמת Venn המציגה 134 מעלות ב-GSE36931 (קו תאים A549), 61 מעלות ב-GSE78210 (קו תאים A549), ו-56 מעלות ב-GSE78210 (קו תאים Colo699) בתנאי SMG בהשוואה ל-GG. מתוך סך 251 הגנים שזוהו, 13 DEG נמצאו כמשותפים בין שני מערכי הנתונים, GSE78210 ו-GSE36931, בקו התא A549. דיאגרמת Venn נוצרה באמצעות InteractiVinn.

2.2. הגנים המבוטאים בצורה דיפרנציאלית בקורלציה עם הפרוגנוזה הקלינית של חולי אדנוקרצינומה של הריאות

הגנים המבוטאים בצורה דיפרנציאלית בקורלציה עם הפרוגנוזה הקלינית של חולי אדנוקרצינומה של הריאות כדי להעריך את הערך הפרוגנוסטי הקליני של הגנים המועמדים בחולים עם אדנוקרצינומה של הריאה, פלוטר קפלן-מאייר (http://www.kmplot.com/; נגיש ב-11 בנובמבר 2{ {44}}21) שימש להשוואת ההישרדות הכוללת (OS) של חולי אדנוקרצינומה (LUAD) עם ביטוי גבוה/בינוני לעומת נמוך של גנים מועמדים (איור 3). רמות ביטוי mRNA גבוהות של NOX1 (יחס סיכון (HR), 1.45; רווח בר סמך של 95% (CI), 1.11–1.9; p=0.0058), GDA (HR) , 1.74; 95% CI, 1.33–2.26; p=3.2e-05), TCN1 (HR, 1.62; 95% CI, 1.26–2.08; p=0.00014), ו-BPIFA1 (HR, 1.44; 95% CI, 1.12-1.84; p=0.0026) נצפו כקשורים באופן מובהק לפרוגנוזה גרועה (איור 3A-D). מצד שני, רמות ביטוי mRNA גבוהות של FCGBP (HR, 0.63; 95% CI, 0.46-0.85; p=0.0026) היו קשורות לפרוגנוזה טובה יותר ולהישרדות כללית גבוהה יותר בחולי LUAD (איור 3E). לא היה מתאם מובהק בין ה-mRNA

איור 3. FCGBP, CST1, F5, CFB ו-BPIFB1 מתואמים לפרוגנוזה הקלינית של חולי אדנוקרצינומה בריאות. עקומות הישרדות קפלן-מאייר של רמות ביטוי ה-mRNA של גנים מועמדים: (A)NOX1; (ב) GDA; (ג) TCN1; (ד) PLUNC; (ה) FCGBP; (ו) AZGP1; (ז) H2Bf; (ח) B7X; (I) AGR3; (י) CEACAM6; (יא) F5; (ל) BPIFB1; ו-(M) CST1 בחולי אדנוקרצינומה בריאות. HR: יחס סיכון.

יתרונות תוספת cistanche-Antitumor

לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche

【בקש עוד】 דוא"ל:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.3. ביטוי של FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ו-CST1 ב-A549 Cells Post-Simulation Microgravity

כדי לאמת את הביטוי של הגנים המזוהים בסיליקו (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ו-BPIFA1), בוצע יישום במבחנה באמצעות qRT-PCR. באופן מעניין, באמצעות qRT-PCR, הנתונים שלנו הציגו וויסות עלייה משמעותי של ביטוי ה-mRNA של FCGBP, במיוחד ב-48 ו-72 שעות בתאי A549, לאחר SMG בהשוואה ל-GG (איור 4A). בנוסף, ביטויי ה-mRNA של CFB, F5 ו-BPIFB1 היו מווסתים באופן משמעותי ב-72 שעות לאחר ה-SMG, ובהשוואה ל-GG, בתאי A549 (איור 4B, C, E). עלייה קלה, אם כי לא משמעותית, בביטוי mRNA זוהתה עבור CTS1 בתנאי SMG בהשוואה ל-GG (איור 4D). הביטויים של AZGP1, AGR3, GDA, VTCN1, BPIFA1, NOX1, CEACAM5 ו-TCN1 לא נקבעו הן עבור SMG והן עבור GG (נתונים לא מוצגים).

איור 4. Upregulation של FCGBP, CST1, F5, CFB ו-BPIFB1 בתנאי SMG במבחנה. רמות ביטוי mRNA של (A) FCGBP, (B) CFB, (C) F5, (D) CTS1, ו-(E) BPIFB1, מכוממות על ידי qRT-PCR ומנורמלות ל-GAPDH בתאי A549 נתונים לתנאי GG ו-SMG למשך 24 , 48 ו-72 שעות. תרשימי עמודות מציגים את התוצאות של 3 ניסויים עצמאיים (n=3). * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, ו-**** p < 0.0001.

בסך הכל, נתונים אלה מרמזים שה-FCGBP, F5, CFB ו-BPIFB1 המבוטאים בצורה דיפרנציאלית בסרטן ריאות עשויים למלא תפקיד חשוב בהתקדמות סרטן הריאה.

2.4. מיקרו-כבידה מדומה מפחיתה את כדאיות התא והופכת את המעבר האפיתל-למזנכימלי בקו תאי סרטן הריאות A549

כדי לחקור האם SMG משפיע על פוטנציאל ההתפשטות של תאי A549, בוצע בדיקת כדאיות תאים באמצעות בדיקת אי הכללה של טריפן כחול. הנתונים שלנו חשפו ש-SMG גרמה משמעותית לירידה תלוית זמן בהתפשטות התאים (איור 5B). הירידה בשגשוג התאים הייתה משמעותית בעיקר לאחר 48 ו-72 שעות לאחר ה-SMG בהשוואה ל-GG, שהציגה עלייה בשגשוג התאים של תאי A549. במקביל, זוהה שינוי במורפולוגיה התאית בתאי A549 תחת SMG. כדי להעריך את השינויים הללו, תאים הוסרו ממצב SMG, זרעו על גבי לוחות 24-באר, ונצפו במיקרוסקופ אור לאחר שעה אחת של יישום SMG. באופן מעניין, תאים שנחשפו ל-SMG חשפו מורפולוגיה גרגירית ומגוששת לאחר-SMG. (איור 5א).

איור 5. מיקרו-כבידה מדומה מפחיתה את כדאיות התא ומעוררת שינויים מורפולוגיים בתאי A549 באופן תלוי זמן. (א) צילומי מיקרוסקופ מייצגים של תאי A549 ההורים (GG) ותאי A549 שהועברו ל-SMG במשך 24, 48 ו-72 שעות לפני זריעתם חזרה למשך שעה אחת תחת GG. התמונות צולמו בהגדלה של 10X. (ב) כדאיות התא של תאי A549 הוערכה באמצעות בדיקת אי הכללת צבע טריפן כחול. כדאיות התא הממוצעת של 3 ניסויים עצמאיים מוצגת כשליטה באחוזים. **** p < 0.0001. איור 5. מיקרו-כבידה מדומה מפחיתה את כדאיות התא ומעוררת שינויים מורפולוגיים בתאי A549 באופן תלוי זמן. (א) צילומי מיקרוסקופ מייצגים של תאי A549 ההורים (GG) ותאי A549 שהועברו ל-SMG במשך 24, 48 ו-72 שעות לפני זריעתם חזרה למשך שעה אחת תחת GG. התמונות צולמו בהגדלה של פי 10. (ב) כדאיות התא של תאי A549 הוערכה באמצעות בדיקת אי הכללת צבע טריפן כחול. כדאיות התא הממוצעת של 3 ניסויים עצמאיים מוצגת כשליטה באחוזים. ****p < 0.0001.

עשב סיני cistanche plant-Antitumor

כדי להבין את הנתונים שהתקבלו על ירידה בשגשוג הסלולרי ב-A549, הערכנו את התרומה של SMG למנגנון המעבר בין אפיתל למזנכימלי (EMT). EMT הוא סימן היכר ומנגנון חשוב המניע את התקדמות הסרטן וגרורות, ובכך משפר את תנועתיות התא ותכונותיו הפולשניות [19]. סמני EMT עיקריים (E-cadherin, N-cadherin, ZO-1 וחלזון) ורמות ביטוי ה-MMP-2 ו-MMP-9 mRNA של metalloproteinases נמדדו באמצעות qRT-PCR ב-A549, תחת גם GG וגם SMG (איור 6). עם יישום SMG, נצפתה עלייה משמעותית בביטוי E-cadherin mRNA, במקביל לירידה משמעותית בביטוי N-cadherin mRNA, ב-48 ו-72 שעות לאחר ה-SMG (איור 6A, B). עלייה לא מובהקת ב-ZO-1 ו-MMP-9 וירידה בגורם שעתוק שבלול זוהו ב-SMG (איור 6C–E). MMP-2 ירד באופן משמעותי ב-A549 ב-48 שעות לאחר ה-SMG (איור 6F), מה שמצביע על צורה פחות פולשנית. ביחד, נתונים אלה תומכים בפנוטיפ מזנכימלי-אפיתל (MET) המושרה על ידי SMG ב-A549.

איור 6

2.5. נתיב מעבר אפיתל למזנכימלי מתאם עם הביטוי של FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ו-CST1

כדי לקבל תובנה מכניסטית נוספת לגבי התפקיד הפוטנציאלי של הגנים המזוהים ב-A549 והמתאם האפשרי שלהם ל-EMT בתנאי SMG, בוצע ניתוח אינטראקציה בין גנים באמצעות GeneMANIA כנגד סמני גן EMT. איור 7 מציג את אינטראקציות הגנים המתוכננות בין הגנים E-cadherin (CDH1), N-cadherin (CDH2), TJP1, CTNNB1, SNAI1 (Snail), ZO-1 ו-catenin, בהתאמה. הודות לתפקידיהם המשמעותיים בפלישה ובנדידה של סרטן, המטאלפרוטאנאזות MMP-2 ו-MMP-9 נכללו גם הם בניתוח. הצמתים מזהים דפוסי ביטוי משותף בין הגנים בעלי עוצמות שונות בהתבסס על עובי הצומת. הגנים המועמדים מראים מידה של ביטוי משותף ביניהם; BPIFB1 בא לידי ביטוי יחד עם CFB ו-CST1; FCGBP בא לידי ביטוי יחד עם F5, CST1 ו-CFB; CST1 בא לידי ביטוי משותף עם CFB, ו-F5 בא לידי ביטוי עם CFB, CST1 ו-BPIFB1. צומת ביטוי משותף זוהו גם בין גנים EMT לבין הגנים המועמדים; CDH1 בא לידי ביטוי יחד עם FCGBP ו-F5; CDH2 בא לידי ביטוי יחד עם F5, CST1, BPIFB1 ו-FCGBP; CTNNB1 בא לידי ביטוי עם CST1 ו-FCGBP; SNAI1 בא לידי ביטוי יחד עם CST1, F5 ו-BPIFB1; TPJ1 בא לידי ביטוי יחד עם CST1, FCGBP ו-F5; CTNNB1 בא לידי ביטוי עם CST1 ו-FCGBP; MMP2 בא לידי ביטוי יחד עם BPIFB1 ו-CST1; ו-MMP9 בא לידי ביטוי יחד עם F5, CST1, FCGBP ו-CFB. ממצאים אלו מצביעים על מתאם משמעותי בין הגנים החדשים שזוהו וסמני EMT בתנאי SMG, אולי קשור למסלולי EMT.

איור 7. FCGBP, CST1, F5, CFB ו-BPIFB1 מתואמים עם מסלול ה-EMT. רשת אינטראקציה בין גנים לגנים של גנים מועמדים נבחרים; FCGBP, CST1, F5, CFB ו-BPIFB1 עם גנים EMT; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1 ו-SNAI1, כמו גם גנים הקשורים להגירת תאים MMP2 ו-MMP9 שנוצרו על ידי GeneMANIA (http://genemania.org/; ניגש ב-11 בנובמבר 2021) כדי לזהות אינטראקציות בין הגנים המועמדים עם EMT וסמני נדידת תאים. הצבעים השונים של קצה הרשת מציינים את שיטות הביואינפורמטיקה המיושמות: חיזוי אתר (כתום), אינטראקציות פיזיות (אדום), ביטוי משותף (סגול), תחומי חלבון משותפים (חום), מסלול (תכלת), לוקליזציה משותפת (כהה). כחול), ואינטראקציות גנטיות (ירוק)

3. דיון

תה Cistanche

דיון סרטן הריאות, אחת המחלות המשמעותיות והמאיימות בעולם, זוכה לאחרונה לתשומת לב רבה ב"מחקר החלל". עם זאת, למרות ההתקדמות בתחום זה, התקדמות סרטן הריאות ותגובתו לטיפול נותרים שנויים במחלוקת עקב היעדר אסטרטגיות הערכה מוחלטות המסייעות במניעה או טיפול בסרטן [21]. למיטב ידיעתנו, זהו הדו"ח הראשון לזהות קבוצה של גנים כחתימה להתקדמות סרטן הריאות בסביבה מכנית הנגרמת על ידי מיקרו-כבידה מדומה (SMG). אנו מדגישים את הביטוי המוגבר של גנים הקשורים לתגובה חיסונית FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ו-CFB, ואת המתאם שלהם למעבר אפיתל-למזנכימלי (EMT) תחת SMG, מה שהופך אותם לסמנים ביולוגיים פוטנציאליים של התקדמות סרטן הריאה. כאן, אנו גם מדגישים את ההשפעה של SMG המושרה על ויסות EMT, סימן היכר של התקדמות הסרטן [18,22], בתמיכה בפנוטיפ מזנכימלי לאפיתל (MET). בסך הכל, מחקר זה מציע את הבסיס לקשר של הגנים המזוהים עם EMT; עם זאת, נדרשות חקירות נוספות כדי לפענח את המנגנונים המדויקים המסייעים בפיתוח טיפול ממוקד חדש בסרטן ריאות. במחקר זה, הצגנו שלושה עשר גנים (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ו-BPIFA1) המתבטאים באופן מובהק בסרטן ריאות תחת מיקרו-כבידה מדומה (SMG) כמו בהשוואה לכוח המשיכה הקרקעי בסיליקו. הנתונים שלנו הראו כי גנים אלה המובעים באופן דיפרנציאלי מועשרים במסלולים הקשורים בעיקר לחסינות הומורלית ואקסוציטוזיס מווסת. עניין במקביל לממצאים שלנו, אם כי תפקידו העיקרי של FCGBP עדיין לא ברור [23]. ייתכן שהדבר נובע בחלקו מהתפקידים הסותרים שהוא מפגין בגידולים שונים [25]. לדוגמה, הוכח ש-FCGBP קשור באופן מובהק לפרוגנוזה כללית טובה יותר ולהישרדות ספציפית למחלה בחולי סרטן ראש וצוואר, סרטן המעי הגס ואוסטאוסרקומה [25-27], בעוד שבסרטן השחלות והערמונית, הביטוי הגבוה של FCGBP היה קשור להישרדות כללית ירודה יותר [28]. יש לציין, תפקידו של FCGBP יוחס למנגנוני הגנה חיסוניים, תגובות אנטי דלקתיות, כמו גם הגנה על תאים [29,30], ומכאן שהופך אותו לסמן פרוגנוסטי חיוני [31]. באמצעות יישומים במבחנה, הערכנו את הביטוי של הגנים שזוהו בסרטן ריאות ובתנאי SMG באמצעות קלינוסטט דו-ממדי. קיים מבחר רחב של סוגי קלינוסטטים ופלטפורמות מיקרו-כבידה אחרות שפותחו. אלה כוללים מערכות 1/2/3 D clinostat, מכונות מיקום אקראיות המצוידות בבקבוקונים (בעיקר עבור תאי סרטן בלוטת התריס), וכלי דופן מסתובבים שפותחו על ידי NASA. כל אחד מהם נועד לשרת מטרה מחקרית מסוימת, כאשר חלקם מתוכננים לטפח תאים דביקים או מתלים, ואחרים משמשים למדידה מקוונת של תגובות קינטיות. יש לציין, ה-clinostat היא אחת הפלטפורמות הפשוטות והניתנות להתאמה המשמשות יישומים ניסיוניים שונים. באופן עקרוני, הקלינוסטט הדו-ממדי מאופיין בציר סיבוב המסתובב ברציפות במהירות קבועה מותאמת ובכיוון הניצב לכיוון וקטור הכבידה של כדור הארץ, ומכאן שיוצר כוחות צנטריפוגליים המחקים מיקרו-כבידה אמיתית [14,32,33 ]. מעניין שמבין שלושה עשר הגנים, ביטויי FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ו-CFB עלו באופן משמעותי בתגובה ל-SMG 2D המושרה על ידי קלינוסטט בתאי A549. הביטויים של FCGBP ו-BPIFB היו המושפעים ביותר, והראו עלייה משמעותית בכל נקודות הזמן המוערכות: 24, 48 ו-72 שעות לאחר SMG. בדומה ל-FCGBP, ידוע כי BPIFB1 תורם לתגובות חסינות מולדות [34]. קפל ה-BPI המכיל חלבון ממשפחת B חבר 1 (BPIFB1), המיוצר בעיקר על ידי אפיתליה של דרכי הנשימה, הוכח כהשתתף במנגנוני הגנה מארח, יחד עם השפעות חיידקיות ואנטי דלקתיות [35]. במחלות בדרכי הנשימה, הוכח כי BPIFB1 מפגין השפעות אנטי-גידוליות ואנטי-גרורות; עם זאת, המנגנונים המדויקים נותרו לא ברורים, מה שמצדיק חקירה נוספת [34,36]. מחקר אחד של Wei et al. מצא ש-BPIFB1 מעכב הגירה ופלישה של קרצינומה של האף-לוע [37]. בהתחשב בכך, נמצא שמוטציות המתרחשות ב-BPIFB1 מקדמות את הסיכון לסרטן ריאות, והורדת הוויסות שלו מובילה לפרוגנוזה גרועה בחולי סרטן ריאות [38,39]. בנוסף לתפקיד של FCGBP ו-BPIFB, הוכח כי גורם המשלים B (CFB) ומדכא הגידול הכימרי 1 (CST1) ממלאים תפקידי הגנה בסרטן. לדוגמה, דווח כי ביטוי גבוה של CFB היה קשור לעלייה בהישרדות הכללית של החולה וללא מחלה בחולי סרטן ריאות [40]. יתר על כן, מערכת המשלים משמשת כקו ההגנה הראשון מפני פתוגנים, המשמשת כמרכיב עיקרי של מערכת החיסון המולדת והנרכשת כאחד [41]. באשר ל-CST1, מחקרים שונים הדגישו את תכונותיו המעניינות, כמו יכולתו לדכא את צמיחת תאים, לגרום לאפופטוזיס, ועמידותו בפני ביטול על ידי צורות אונקוגניות של p53, מה שהופך אותו למטרה טיפולית אטרקטיבית אך אלטרנטיבית של p{ {74}}גידולים אנושיים עמידים [42]. בנוסף לביטוי המוגבר של FCGBP, BPIFB1, F5, CFB ו-CST1, הנתונים שלנו הציגו בצורה מעניינת שני פנוטיפים הקשורים לתא של תאי A549 תחת SMG - שינוי מורפולוגי לאגרגטים ותאים בצורת גוש וירידה משמעותית בהתפשטות שיעור לאחר SMG. זה במקביל לכמה מחקרים אחרים, שבהם תאים שנחשפו ל-SMG הציגו גושים קטנים או צבירי תאים רב-שכבתיים [43,44]. הבדלים מורפולוגיים אלה משתקפים בשינויים התפקודיים הדרמטיים הנלווים בתהליכים התאיים, שחלק מהם הוא EMT. EMT הוא סימן היכר של התהליך הגרורתי, הקשור לבריחה של המעקב החיסוני והפלישה לכלי הדם, ומכאן מאפשר לתאים להתפשט לאיברים משניים [19,22]. באופן עקרוני, תאי אפיתל ממאירים עוברים מנגנון EMT בשלבים הראשוניים של התפתחות הגידול, כאשר תאים אלה נוטים לבטא תכונות מזנכימליות, ומפגינים תנועתיות מוגברת המאפשרת את בריחתם מהגומחה הראשונית, בעוד שהתאים הגרורתיים שנוצרו בצד המשני מציגים מאפיינים פחות מובחנים בהשוואה לגידולים הראשוניים המקבילים להם. כאן, תהליך MET (מזנכימלי לאפיתל) הוא חלק מהתקדמות כזו של היווצרות גידול גרורתי. עם זאת, זה לא מזניח את ההשתתפות של EMTs בשלבים שונים של התקדמות הסרטן מכיוון שתאי סרטן באתרים משניים ימשיכו לגדול ולהתרבות או יעברו תרדמה [45,46]. תיאום גנים מרובה כזה והופעה של סמני נדידה ספציפיים המווסתים את ההתקדמות הגרורתית של תאים סרטניים עשויים לגרום לתוצאות שונות בחשיפה ל-SMG [47]. לדוגמה, בתנאי מיקרו-כבידה, תאי סרטן שד שונים הציגו מורפולוגיות שונות, הידבקות תאים ותכונות נדידה בחשיפה למיקרו-כבידה [5]. יש לציין, המאפיין העיקרי של EMT הוא אובדן מולקולת ההדבקה של התא, E-cadherin, ובכך משפיע על השקט של שלמות התאים. מצד שני, העלייה של קדרין עצבי, N-cadherin, מובילה לשינויים בהדבקה בתאים. זה מושרה בעיקר על ידי גורם גדילה מתמר (TGF-), המפעיל גורמי שעתוק המבוטאים פליאוטרופיים, כגון חלבוני Snail, Twist ו-Zeb ומסלולי איתות אחרים המיושמים במסלולים גרורתיים [18,48,49]. כאן, אנו מדווחים על השיפור של סמן האפיתל E-cadherin (CDH1) ועל ויסות מטה של ​​רמות ה-N-cadherin (CDH2) mesenchymal mRNA, סמני מפתח של EMT [49]. זה מרמז שבשילוב עם הנתונים שלנו על שיעור ההתרבות המופחת של A549, התאים מציגים מצב פחות גרורתי. מעניין לציין שהביטוי המשתנה של סמני EMT מפתח לווה גם בוויסות מטה משמעותי של המטריצה ​​מטלופרוטאינאז MMP-2, שהוא מרכיב עיקרי של קרום הבסיס, המפריד בדרך כלל את שכבת האפיתל מהמזנכיה שמסביב, ובכך מוביל ל אובדן קרום הבסיס [50]. זאת במקביל למחקר של Chang וחב', שבו הם דיווחו על ממצאיהם של הפחתת הפוטנציאל הגרורתי של תאי אדנוקרצינומה בריאותית באמצעות שינוי בביטוי MMP2 [17]. באופן כללי, התפקיד של MMP היה מעורב היטב בהתקדמות גידולים ממאירים, כולל גרורות, כאשר ביטוי מופחת של MMP (MMP-2 ו-MMP-9) ופעילות אנזימטית הם מאפיין של פנוטיפ פחות גרורתי [ 50–52]. עם התפקיד המשמעותי של EMT בגרורות, הנתונים שלנו מדגישים מתאם משמעותי של FCGBP, BPIFB, F5, CST1 ו-CFB עם סמני גנים EMT כמו גם גנים הקשורים להגירת תאים MMP2 ו-MMP9. מעניין, Xiong et al. הראו ש-FCGBP הוא הרגולטור העיקרי של EMT בכיס המרה [53]. זה מסמל שהגנים שזוהו עשויים לשמש כסמנים ביולוגיים פוטנציאליים למחקרים עתידיים שיכולים לחזות ולהבין עוד יותר את התקדמות סרטן הריאות. ביחד, הממצאים שלנו מסווגים את הגנים שזוהו כמווסתים מרכזיים של EMT, ומקדמים שיפור פוטנציאלי של פנוטיפ פחות גרורתי באמצעות מעבר מזנכימלי לאפיתל (MET) של תאי סרטן ריאות.

4. חומרים ושיטות

4.1. מערכי נתונים לזיהוי גנים נפוצים (DEG) בשורות תאי סרטן ריאות שנחשפו למיקרו-כבידה מדומה

מערכי נתונים רלוונטיים ממסד הנתונים הזמין לציבור של Gene Expression Omnibus (GEO) חולצו לניתוח ראשוני. מסד נתונים זה משמש כניתוח גנומי פונקציונלי זמין לציבור של נתוני ביטוי גנים ומיקרו-מערכי תפוקה גבוהה. מערכי הנתונים שנבחרו עמדו בקריטריונים הבאים: מערכי נתונים המשתמשים בקווי תאי סרטן ריאות אנושיים בלבד, מחקרים הכוללים תנאי בקרה תואמים ב-ground gravity (GG), מערכי נתונים עם סיווג מוגדר של שורות תאי סרטן ריאות ומערכי נתונים עם ביטוי גנים של תאי סרטן ריאות אנושיים באמצעות microarray. שני מערכי נתונים מתאימים לקריטריון זה, GSE78210 ו-GSE36931. בסך הכל, 25 דגימות נכללו במחקרים, ו-14 דגימות קו תאי סרטן ריאות במיקרו-כבידה מדומה (SMG) הושוו עם 11 בדיקות GG, כפי שמוצג בטבלה 2 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov /geo/; ניגש ב-11 בנובמבר 2021).

טבלה 2. פרטים של מערכי נתונים שהופקו מ- Gene Expression Omnibus (GEO) המשמשים לזיהוי ראשוני של DEG בין תאי סרטן ריאות מדומה (SMG) ו-Ground Gravity (GG).

4.2. ניתוח העשרה של ערכת גנים של GEO2R ליצירת DEG בכל נתונים

GEO2R (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r; ניגש ב-11 בנובמבר 2021), כלי מקוון אינטראקטיבי המשמש להשוואת סדרות GEO, שימש בכל מערך נתונים לקיבוץ ולזהות גנים מווסתים ומורדים במצבי SMG בהשוואה למצבי GG. הגנים עם ערכי p הנמוכים מ-0.05 ושינוי פי שניים יותר מ-2 נבחרו כגנים בעלי ביטוי דיפרנציאלי DEG בתנאי SMG. כתוצאה מכך, ה-DEGs של כל מערך נתונים הצטלבו זה בזה, וגנים נפוצים זוהו

4.3. כימות של מעורבות קליניקופתולוגית של הגנים המזוהים

לאחר מכן, הגנים שהתקבלו ברשימה הקצרה אושרו באמצעות Kaplan-Meier Plotter (http://www.kmplot.com/; גישה אליו ב-11 בנובמבר 2021), מסד נתונים ציבורי מקוון שמעריך את ההשפעה של גנים נבחרים על התוצאות הקליניות של המטופל. ההישרדות הכללית (OS) הוגדרה כמשך הזמן מרגע האבחנה (בחודשים) ועד למוות. נתוני ביטוי הגנים ומידע ההישרדות נגזרים מה-Gene Expression Omnibus (GEO), אטלס הגנום הסרטני (TCGA) ומאטלס התופעה של הגנום האירופי (EGA). החולים סווגו לשתי קבוצות: (1) ביטוי גבוה (עם ערכי TPM מעל הרבעון העליון) ו-(2) ביטוי נמוך/בינוני (עם ערכי TPM מתחת לרבעון העליון). חלקות קפלן-מאייר שימשו להשוואת מערכת ההפעלה של חולי אדנוקרצינומה (LUAD) עם ביטוי גבוה/בינוני לעומת נמוך של גנים מועמדים.

4.4. אשכול אונטולוגיה מועשר עבור הגנים המזוהים

כדי לחקור אם הגנים שזוהו חולקים מסלולים משותפים, בוצע ניתוח העשרה של מסלולי Gene Ontology (GO) עבור הגנים שזוהו באמצעות כלי האינטרנט Metascape (https://metascape.org/; נגיש ב-11 בנובמבר 2021) לביאור רשימת גנים מקיף ומשאב ניתוח לצד GEO2R

4.5. קו תאים ותרבות תאים

שורת התאים האפיתל הבסיסי האפיתל הבסיסי של אדנוקרצינומה אנושית (A549), בשימוש נרחב כמודל לאדנוקרצינומה ריאות, גודלה במדיום Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI)-1640 בתוספת של 10% סרום בקר עוברי (FBS; Sigma, St. Louis, MO, ארה"ב) ו-100 יחידות/מ"ל של פניצילין/סטרפטומיצין (P/S; Sigma, St. Louis, MO, ארה"ב). שורת התאים תורבתה באינקובטור 37 ◦C לחות באווירה של 5% CO2. כאשר התאים הגיעו למפגש, הם נקצרו באמצעות 0.5% טריפסין, עברו צנטריפוגה ב-100× גרם למשך 5 דקות, והשתמשו בהם בעת הצורך.

4.6. מיקרו כבידה

תאי סרטן ריאות (A549) תורבו במערכת קלינוסטטית דו-ממדית המחקה את סביבת הכבידה הקרובה לאפס (מיקרו-כבידה). Rotary Culture Max (RCMW™; Synthecon® Inc—יוסטון, טקסס, ארה"ב) הוא ביו-ריאקטור המצויד בכלי תרבית תאים המשלב ליבת זלוף מיקרו-נקבובית ומערכת חמצון מובנית, המספקת חומרי הזנה וגזים חיצוניים של המדיה, מכאן שמבטיחים חילופי גזים נאותים וסביבת תרבית תאים עם גזירה נמוכה. החדר היה ארוז במדיית התרבות המכילה את התאים. תא זה הסתובב אופקית סביב ציר אחד בניצב לכוח הכבידה במהירות של 10 סל"ד. הקלינוסטט הדו-ממדי הוצב בתוך החממה המולחת 37 ◦C באווירה של 5% CO2. תאי A549 נקצרו לאחר סימולציה של מיקרו-כבידה (SMG) ב-24, 48 ו-72 שעות. כדי ליצור סביבת סרטן ריאות דומה, תאי A549 תורבו בצלחות תרבית ב-GG, במצב לא מסובב או סטטי, ונשמרו בקרבת המכשיר בתוך החממה המולחנת (37 ◦C). תאים אלו מכונים קבוצת הביקורת והם נקצרו גם ב-24, 48 ו-72 שעות.

4.7. בדיקת כדאיות תאים

עבור תנאי ה-GG, תאי A549 נזרעו ב24-צלחות של תרבית תאים בבאר בצפיפות של 3.0 × 104 תאים לכל 500 µL. תאים נקצרו על ידי טריפסיניזציה ב-24, 48 ו-72 שעות לאחר הזריעה, ולאחר מכן עברו צנטריפוגה ב-200× גרם למשך 5 דקות. כדורי תאים שהושגו הוקמו מחדש במדיה תרבית. עבור תנאי SMG, תאי A549 נזרעו במערכת הסיבובית 2D clinostat בצפיפות של 6.0 × 104 תאים לכל 1 מ"ל. תאים נקצרו ב-24, 48 ו-72 שעות לאחר חשיפת SMG, ולאחר מכן עברו צנטריפוגה ב-200×g למשך 5 דקות. כדורי תאים שהושגו הוקמו מחדש במדיה תרבית. בוצע בדיקת אי הכללת צבע טריפן כחול (Sigma, ארה"ב). ספירת התאים נקבעה באמצעות מונה התאים האוטומטי CellDrop™.

4.8. תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת (qRT-PCR)

רמות ביטוי גנים (רמות mRNA) של הגנים שזוהו בסיליקו (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP ו-BPIFA1) יחד עם סמני גנים EMT (טבלה 3) נקבעו גם בתאי A549 על ידי qRT-PCR. בקצרה, מיצוי של RNA כולל מתאי בוצע באמצעות RNEasy Mini Kit (QIAGEN, Hilden, גרמניה) ב-24, 48 ו-72 שעות ב-GG ולאחר חשיפה ל-SMG על ידי ביצוע פרוטוקולי היצרן. מיקרוגרם אחד של RNA כולל הועתק לאחור ל-DNA משלים חד-גדילי (cDNA) בנפח תגובה של 20 מיקרוגל באמצעות ערכת סינתזה cDNA iScript™ (Thermo, Waltham, MA, ארה"ב). qRT-PCR בוצע באמצעות PowerUp™ Sybr™ Green master mix (Thermo, ארה"ב) במכונת Quant Studio 5 pcr (Thermo, ארה"ב). שלבי הגברה של PCR היו כדלקמן: שלב דנטורציה ראשוני ב-95 ◦C למשך 3 דקות, טמפרטורת חישול של גן המטרה למשך 30 שניות, ולאחר מכן 72 ◦C למשך 30 שניות. ערך מחזור סף הקרינה התקבל עבור כל גן. ∆∆שיטת Cq שימשה כדי לחשב את השינוי הקפל היחסי בביטוי הגנים לאחר נורמליזציה לגן משק הבית, Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH).

טבלה 3. רשימה של פריימרים אנושיים. NOX1, NADPH Oxidase 1; GDA, Guanine Deaminase; TCN1, Transcobalamin 1; FCGBP, Fc Gamma Binding Protein; BPIFA1, BPI Fold המכיל Family A Member 1; AZGP1, Alpha-2-Glycoprotein 1; CFB, גורם משלים B; VTCN1, V-Set Domain המכיל מעכב הפעלת תאי T 1; AGR3, שיפוע קדמי 3; CTS1, מדכא גידול כימרי 1; F5, גורם קרישה V; CEACAM6, מולקולת הדבקה לתא CEA 6; BPIFB1, BPI Fold המכיל משפחה B חבר 1; ZO-1, Zonula occludens חלבון 1; MMP-9, Matrix metalloproteinase 9; MMP-2, Matrix metalloproteinase 2; ו-GAPDH, Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase

4.9. ניתוח אינטראקציה בין גנים לגנים

נתונים מ-in vitro qRT-PCR יושמו בניתוח אינטראקציה בין גנים לגנים באמצעות כלי האינטרנט של סיליקו GeneMANIA (http://genemania.org/; הגישה אליו ב-11 בנובמבר 2021), אלגוריתם רשת לחיזוי תפקודי גנים באמצעות קבוצה גדולה של נתוני שיוך פונקציונליים. זה נערך כדי להעריך עוד יותר אינטראקציות בין/בין הגנים המועמדים שנבחרו; FCGBP, CST1, F5, CFB ו-BPIFB1 עם גנים EMT; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1 ו-SNAI1, כמו גם גנים הקשורים להגירת תאים, MMP2 ו-MMP9.

4.10. ניתוח סטטיסטי

תוכנת GraphPad Prism שימשה לביצוע ניתוח סטטיסטי. התוצאות מבוטאות כנתונים בודדים או כממוצע ± סטיית תקן (SD). מבחן t של התלמיד שימש להשוואה בין קבוצות שונות. הבדלים בין הקבוצות הוערכו על ידי ANOVA של שונות חד כיוונית (ANOVA). ערכי p נקבעו וערכים של p < 0.05, p < 0.01, p < 0.001 (*, ** ו-***, בהתאמה) היו נחשב כמשמעותי. כל הניסויים בוצעו בשלושה עותקים (n=3).

הפניות

1. לבן, RJ; Averner, MJN בני אדם בחלל. טבע 2001, 409, 1115–6828. [CrossRef]

2. ברדבורי, פ.; וו, ה.; Choi, JU; רואן, AE; ג'אנג, ה.; פול, ק.; לאקו, ג'; צ'ו, ג'יי דוגמנות ההשפעה של מיקרו-כבידה ברמה התאית: השלכות על מחלות אנושיות. חֲזִית. Cell Dev. ביול. 2020, 8, 96. [CrossRef] [PubMed]

3. יואן, מ.; ליו, ה.; ג'ואו, ש.; ג'ואו, X.; Huang, Y.-E.; הו, פ.; Jiang, W. ניתוח אינטגרטיבי של מודול רגולטורי מגלה קשרים של מיקרו-כבידה עם חוסר תפקוד של מערכות מרובות גוף וגידולים. Int. י.מול. Sci. 2020, 21, 7585. [CrossRef] [PubMed]

4. Crucian, BE; צ'וקר, א.; סימפסון, RJ; מהטה, ש; מרשל, ג'; סמית', SM; Zwart, SR; הייר, מ.; פונומארב, ש.; ויטמייר, א.; et al. חוסר ויסות של מערכת החיסון במהלך טיסה לחלל: אמצעי נגד פוטנציאליים למשימות חקר חלל עמוק. חֲזִית. אימונול. 2018, 9, 1437. [CrossRef] [PubMed]

5. נאסף, מ"ז; מלניק, ד.; קופ, ש; סחנה, ג'; אינפנגר, מ.; לוצנברג, ר.; רליה, ב.; ווהלנד, מ.; גרים, ד.; Krüger, M. תאי סרטן השד במיקרו-כבידה: היבטים חדשים לחקר הסרטן. Int. י.מול. Sci. 2020, 21, 7345. [CrossRef]

6. Takamatsu, Y.; קויקה, ו.; Takenouchi, T.; סוגמה, ש.; ווי, ג'; וראגאי, מ.; סקיאמה, ק.; Hashimoto, M. הגנה מפני מחלות ניווניות בכדור הארץ ובחלל. NPJ Microgravity 2016, 2, 16013. [CrossRef]

7. נאסף, מ"ז; קופ, ש; ווהלנד, מ.; מלניק, ד.; סחנה, ג'; קרוגר, מ.; Corydon, TJ; אולטמן, ה.; שמיץ, ב.; Schütte, A. מיקרו-כבידה אמיתית משפיעה על שלד הציטו והידבקויות מוקדיות בתאי סרטן שד אנושיים. Int. י.מול. Sci. 2019, 20, 3156. [CrossRef]

8. דיץ, ג; אינפנגר, מ.; רומסווינקל, א.; סטרובה, פ.; קראוס, א. אינדוקציה של אפופטוזיס ושינוי של היצמדות תאים בתאי סרטן ריאות אנושיים תחת מיקרו-כבידה מדומה. Int. י.מול. Sci. 2019, 20, 3601. [CrossRef]

9. ריצ'י, ג'; קוצ'ינה, א.; פרואיטי, ש.; דיניקולה, ש.; פרנטי, פ.; Cammarota, M.; פיליפיני, א.; ביזארי, מ.; Catizone, A. Microgravity משרה EMT חולף בקרטינוציטים אנושיים על ידי ויסות מטה מוקדם של E-cadherin ועיצוב מחדש של הדבקה בתאים. J. Appl. Sci. 2020, 11, 110. [CrossRef]

10. אהן, CB; לי, ג'-ה; האן, DG; קאנג, ח.-ו.; לי, ש.-ה.; לי, ג'יי-אי; בן, ח; Lee, JW מדומה מיקרו-כבידה עם סביבה צפה מעודדת הגירה של סרטן ריאות של תאים לא קטנים. Sci. נציג 2019, 9, 14553. [CrossRef] [PubMed]

11. Pisanu, ME; נוטו, א.; דה ויטיס, סי; מסילו, MG; Coluccia, P.; פרואיטי, ש.; Giovagnoli, MR; ריצ'י, א.; Giarnieri, E.; Cucina, A. תאי גזע של סרטן ריאות מאבדים את מצב ברירת המחדל שלהם לאחר חשיפה למיקרו-כבידה. BioMed Res. Int. 2014, 2014, 470253. [CrossRef] [PubMed]

12. אינפנגר, מ.; Kossmehl, P.; שכיבאי, מ.; באואר, ג'; קוסמהל-זורן, ש.; קוגולי, א.; קורצ'יו, פ.; Oksche, A.; ווהלנד, מ.; קרויץ, RJC; et al. חוסר משקל מדומה משנה את שלד הציטוס ואת חלבוני המטריצה ​​החוץ-תאית בתאי קרצינומה של בלוטת התריס הפפילרית. Cell Tissue Res. 2006, 324, 267–277. [CrossRef] [PubMed]

13. חן, ג'; מיקרו-כבידה, L. תאי גידול במיקרו-כבידה. בחלל: מסע כיצד בני אדם מסתגלים וחיים במיקרו-כבידה; IntechOpen: לונדון, בריטניה, 2018; כרך 139, עמ' 259–268.

14. גרים, ד.; שולץ, ה.; קרוגר, מ.; Cortés-Sánchez, JL; עגלי, מ.; קראוס, א.; סחנה, ג'; Corydon, TJ; המרסבך, ר.; Wise, PM המאבק בסרטן על ידי מיקרו-כבידה: הכדור הרב-תאי כמודל גרורות. Int. י.מול. Sci. 2022, 23, 3073. [CrossRef]

15. שבאת, מ.ב; Cote, ML התקדמות סרטן וסדרי עדיפויות: סרטן ריאות. סרטן אפידמיול. ביומרק. הקודם 2019, 28, 1563–1579. [CrossRef] [PubMed]

16. Chung, JH; אהן, CB; בן, ח; יי, ע.; בן, ה.ס; קים, ח.-ש.; Lee, SH סימולציה של השפעות מיקרו-כבידה על שגשוג והגירה של תאי סרטן ריאות תאים לא קטנים. Aerosp. Med. זִמזוּם. לְבַצֵעַ. 2017, 88, 82–89. [CrossRef]

17. צ'אנג, ד'; שו, ה.; גואו, י.; ג'יאנג, X.; ליו, י.; לי, ק.; פאן, ג; יואן, מ.; וואנג, ג'; לי, ט.; et al. מיקרו-כבידה מדומה משנה את הפוטנציאל הגרורתי של שורת תאי אדנוקרצינומה בריאותית אנושית. Vitr. תָא. Dev. ביול. אנים. 2013, 49, 170–177. [CrossRef]

18. חנן, ד.; וינברג, ר' סימני ההיכר של הסרטן: הדור הבא. תא 2011, 144, 646–674. [CrossRef]

19. ריבטי, ד.; תמא, ר; Annese, T. מעבר אפיתל-מזנכימלי בסרטן: סקירה היסטורית. תרגום אונקול. 2020, 13, 100773. [CrossRef]

20. שי, ש; לי, ש; Cao, Q.; דיאו, י.; ג'אנג, י.; יו, ל.; Wei, L. EMT גורמי שעתוק מעורבים בהיצמדות התא המשתנה תחת אפקט מדומה של מיקרו-כבידה או עומס יתר על ידי ויסות של E-cadherin. Int. י.מול. Sci. 2020, 21, 1349. [CrossRef]

21. טופאל, יו.; Zamur, C. Microgravity, תאי גזע וסרטן: תקווה חדשה לטיפול בסרטן. Stam Cells Int. 2021, 2021, 5566872. [CrossRef]

22. Ksiazkiewicz, M.; מרקייביץ', א. Zaczek, AJ מעבר אפיתל-מזנכימלי: סימן היכר ביצירת גרורות המקשר בין תאי גידול במחזור ותאי גזע סרטניים. פתוביולוגיה 2012, 79, 195–208. [CrossRef] [PubMed]

23. יאן, ט.; טיאן, ד.; חן, ג'; טאן, י.; צ'נג, י.; אתה, ל.; דנג, ג.; ליו, ב.; יואן, פ.; Zhang, S. FCGBP הוא סמן ביולוגי פרוגנוסטי וקשור לחדירה חיסונית בגליומה. חֲזִית. אונקול. 2021, 11, 769033. [CrossRef] [PubMed]