חשיבות של מגבלות תוכן שונות עבור רכיבי סמן של Cistanche Deserticola ו- C. tubulofloris בפרמקופואיה סינית על בסיס רכיבים דיפרנציאליים ⅱ

תַקצִיר

מַטָרָה:כדי ללמוד את המרכיבים ההפרש ולהשוות בין תוכנם בין Cistanche Tubulosa ל- C. deserticola ולנתח את המשמעות של מגבלות תוכן שונות עבור רכיבי סמן בין שני הצמחים בפרמקופואיה הסינית (מהדורת 2020). שיטות: רכיבי ההפרש זוהו על ידי ספקטרומטריה של כרומטוגרפיה נוזלית בשילוב ניתוח סטטיסטי רב -משתני, ותוכן הרכיבים ההפרש נקבע על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים. תוצאות: התרכובות הדיפרנציאליות היו Cistanoside A, Isoacteoside, Echinacoside ו- Acteoside. Echinacoside היה בעל התוכן הגבוה ביותר בשני הצמחים, ואחריו אקטוזיד. תוכן Echinacoside, Acteoside ו- Isoacteoside ב- C. tubulosa היה גבוה יותר מזה שב- C. deserticola (p<0.01), and no cistanoside A was detected in C. tubulosa. Conclusion: There are differences in the chemical composition between C. deserticola and C. tubulosa. Cistanoside A can be taken as a maker component in C. deserticola. Echinacoside and acteoside are the common components in both plants, and they are specified in the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition) as the marker components in both plants. The different content limits for the two components between C. deserticola and C. tubulosa reflect the objectivity in the standard.

מילות מפתח: Cistanche Deserticola;Cistanche Tubulosa; Cistanoside א; איזואקואוזיד;Echinacoside; Acteoside

 

 

 

 

Cistanche Deserticolaהוא הגבעול הבשרני המיובש עם עלים קשוחים של Cistanche Deserticola yc ma או cistanche tubulosa (Schenk) Wight, צמח ממשפחת Orobanchaceae [1]. זהו מזון טוניק ורפאני, המכונה "ג'ינסנג המדבר". הוא מופץ בעיקר במונגוליה הפנימית, נינגקסיה, גאנסו, שינג'יאנג ואזורים אחרים [2]. Cistanche Deserticola הוא חם באופיו, מתוק ומלוח בטעם, ונכנס לכליה ומרידיאנים המעי הגס. יש לו את ההשפעות של הזנת הכבד והכליות, להועיל למהות ודם, והרטיבות של המעיים ומקלים על תנועות המעי. ניתן להשתמש בו לטיפול במחסור בכליות, אימפוטנציה ואי פוריות, כאביות המותניים והברכיים, חולשת הגידים והעצמות, ועצירות הנגרמת על ידי מעיים יבשים [1]. מחקרים מודרניים מראים כי הגבעולים הבשרניים עם עלי קנה מידה של Cistanche Deserticola מכילים בעיקר מגוון של רכיבים כימיים כמו גליקוזידים פנילנואידים, טרפנים אתר אירידואידים והגליקוזידים שלהם, הליגנינים והסוכרים שלהם [3]. ביניהם, גליקוזידים פנילנואידים הם החומרים הפעילים החשובים ביותר, שיש להם השפעות פרמקולוגיות כמו אנטי-אייג'ינג [4], נוגד חמצון, אנטי-עייפות ומשלשל [5].
ישנם כ -20 מינים של Cistante בעולם, וישנם 5 מינים בארצי: Cistanche Deserticola, Cistanche Tubulosa, C. Salsa (Caly.) G.Beck, C. Sinensis G. Beck ו- C. Salsa var. Albiflora pf tu et zclou. מהדורת 2020 של פרמקופואיה של הרפובליקה העממית של סין (להלן "הפרמקופואיה הסינית") קובעת כי שני המינים הראשונים הם המין המקורי של Cistanche Deserticola [6].

Cistanche Deserticola

לפני המהדורה של 2005 של הפרמקופואיה הסינית, המוצא היחידים של Cistanche Deserticola היה Cistanche Deserticola. בשל הביקוש הגבוה בשווקים המקומיים והבינלאומיים ומחסור במשאבים, Cistanche Tubulosa התווסף כמוצא החוקי. עם זאת, מחירי שני המקורות של Cistanche Deserticola בשוק שונים מאוד, כאשר מחירו של Cistanche Tubulosa הוא רק 1/4 עד 1/6 מזה של Cistanthe Deserticola [7]. ההבדלים בהרכב ובהשפעות הפרמקולוגיות של שני מקורות אלה שווים מחקר וניצול מעמיק לטווח הארוך. מבחינת ההבדלים בסוגי המרכיבים, Huang Xiongmei et al. [8] מצא כי Cistancheside A היה המרכיב המבדיל העיקרי דרך מחקר הספקטרום האופייני לשני המקורות. מבחינת ההבדל בתוכן הרכיבים, Gao Yan et al. [9] מצא כי יחסי התוכן של Echinacoside ל- Grablascoside, and verbascoside ל- iSovalascoside ב Cistanche Deserticola ו- Cistanthe Tubulosa היו שונים למדי באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית גבוהה במיוחד; Zhu Nawiang et al. [10] מצא באמצעות ניתוח טביעות אצבע כי תוכן הגליקוזידים הפנילטנואידים ב Cistanche Deserticola היה נמוך משמעותית מזה שבציסטאנציה טובולוזה, ותוכן הגליקוזידים הפנילטנואידים ב- Cistanche Tubulosa היה גבוה משמעותית מזה של גליקוזידים אירידואידים.
קבוצת המחקר שלנו השתמשה בספקטרומטריה של כרומטוגרפיה נוזלית-מסה בשילוב עם ניתוח סטטיסטי רב-משתני כדי להשוות בין ההבדלים בסוגי המרכיבים הכימיים בין Cistanche Desercola ו- Cistanche Tubulosa, לזהות סמנים דיפרנציאליים ולקבוע את תכולתן, כדי לספק התייחסות למקורה של Cistanche Daseycola and as Prant. בנוסף, על ידי השוואה בין ההבדלים בתוכן של רכיבי מדד הפרמקופואיה (Echinacoside ו- Grobalascoside) של שתי הסיסטנצ'ים המקוריים, ההכרח להציב את הגבולות המשולבים של שני המרכיבים של Cistanches ו- Cistanches Tubulosa בהתאמה הוסבר.

 

1 חומרים

1.1 מכשירים

Ultimate 3 000 ביצועים אולטרה-גבוהים שלב נוזלי שלב-אלקטרוסטוסטטי שדה טנדם יון מלכודת ברזולוציה גבוהה ספקטרומטר (UPLC-LTQ ORBITRAP XL, Thermo Fisher Scientific, ארה"ב); 2695 כרומטוגרף נוזלי בעל ביצועים גבוהים, 2489 גלאי אולטרה סגול (ווטרס, ארה"ב); BT125D 1/100,000 איזון אלקטרוני (מערכות מכשירים Sartorius, גרמניה); Kq -500 de cnc מנקה אולטראסוני (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); PL2002 איזון אלקטרוני [Mettler-Toledo Instrument (Shanghai) Co., Ltd.].

 

Cistanche Tubulosa

1.2 תרופות לבדיקה

חומרי ההתייחסות echinacoside, cistancheside A, verbascoside ו- isoverbosaside (טוהר יותר מ- 98%, מספרי אצווה PS000867, PS010950, PS000683 ו- PS001059, בהתאמה) נרכשו מ- Chengdu Pusi Biotechnology Co., Ltd.; מתנול בדרגת ספקטרומטריה המונית (פישר); חומצה פורמית של ספקטרומטריה המונית (טוהר: 99%, סיגמא אלדריך); מים היו מים מזוקקים של ווטסון.

 

1.3 דוגמאות

10 קבוצות של פרוסות דסריקולה של Cistanche ו -10 קבוצות של פרוסות טובולוסה של Cistanche זוהו על ידי פרופסור לי שיאנגרי מאוניברסיטת בייג'ינג לרפואה סינית כגבעולים הבשרניים המיובשים עם עלי גודל של Cistanche Deserticola ycma ו- Cistanche Tubulosa (Schenk), With, Flancacea Ameancea. מידע מפורט מוצג בטבלה 1.

 

2 שיטות

2.1 מחקר על המרכיבים השונים של Cistanche Deserticola ממוצא שונה

2.1.1 הכנת תמיסת הבדיקה

קח בערך 0. 2 גרם אבקת דגימה יבשה (עוברת דרך מסננת מספר 4), שוקלים במדויק ומניחים בבקבוק נפח חום של 50 מ"ל, הוסיפו 25 מ"ל של 50% מתנול, שוקלים את המסה, קר קרה למשך 30 דקות, טפלו באופן אולטרה -סונטי במשך 40 דקות (כוח 250 וו, תדר 35 ק"ש), ובאופן משקל של 50%, טייסקים, עם 50%, בהירידה של 50%. סינון להשגה.

 

2.1.2 תנאים כרומטוגרפיים

ווטרס זיכיון uplctm beh c18 עמוד כרומטוגרפי (1 0 0 מ"מ × 2.1 מ"מ, 1.7 מיקרומטר), טמפרטורת העמודים של 35 מעלות, טמפרטורת תא דגימה של 1 {{29}, תואר זריקה לדוגמה של 3 מיקרומטר, 1 פתרון (ב) כשלב נייד (0 דקות, 10%A; 0 ~ 4 דקות, 10%~ 26%A; 4 ~ 18 דקות, 26%~ 40%A; 18 ~ 24 דקות, 40%~ 100%A; 24 ~ 28 דקות, 100%A), אורך גל של 330 ננומטר, קצב זרימה של 0.3 מ"ל · דקות –1.

 

2.1.3 תנאי ספקטרומטריה המונית

נעשה שימוש במקור יון אלקטרו -ריסוס (ESI), סריקת מצב יונים שלילית, טמפרטורת הנימים הייתה 350 מעלות, קצב זרימת נפח הגז היה 30 ARB, קצב זרימת נפח הגז העזר היה 10 ARB, מתח הריסוס היה 3 קילוואט, מתח נימה היה –35 V, טווח הסריקה היה m/Z100 ~ 1000, ומערכת רכישת נתונים הייתה xcalibur 2.1.

Cistanche Tubulosa

2.1.4 ניתוח רכיבים עיקרי (PCA)

לאחר קבלת המטריצה ​​הדו-ממדית של זוגות נתוני זמן שמירת המונים המדויקים, לוח המכשירים יציג את כל מידע הזמן המדויק של שמירה מדויקת, ושיטת ה- PCA של מודול הסטטיסטיקה המורחבת תשמש לניתוח.

 

2.1.5 אורתוגונלי חלקית פחות ריבועים ניתוח-אפליה (OPLS-DA)

על ידי ביצוע ניתוח נתונים דו ממדי עם OPLS-DA, התקבלו מספר גדול של ספקטרום אורתוגונלי, שיכול להראות בבירור את ההבדלים בין שתי קבוצות הדגימות. במתכונת S-Plot, זוגות זמן שמירה על המונים בשני הקצוות של העקומה בצורת S מייצגים את היונים המאפיינים האמינים ביותר מכל קבוצת מדגם.

 

2.2 קביעת רכיבי דיפרנציאל

 

2.2.1 הכנת פתרון התייחסות מעורבת

 

קח כמויות מתאימות של Echinacoside, cistancheside A, verbascoside ו- iSoverascoside לתוך בקבוק 1 0 ml חום, מתמוסס ומדלל לסימן עם 5 0. 0.384 ו- 0.312 מ"ג · מ"ל - 1, בהתאמה.

 

2.2.2 הכנת תמיסת הבדיקה

 

השיטה זהה ל- 2.1.1.

 

2.2.3 תנאים כרומטוגרפיים

נעשה שימוש בעמודה של Egilent Eclipse XDB-C18 (25 0 מ"מ × 4.6 מ"מ, 5 מיקרומטר), עם מתנול (א) -0. 1% פתרון מימי חומצה פורמית (B) כשלב הנייד, וסידרון elution ({1 {0}}}}}}}, 15%, 15%, 15%, 15%, 15%, 15%, 15%, 15%, 15%, 15%, 15%, 15%, 15, 15, 15, 15, 15, 15, 15, 15, 15, 15, 15, 15 (15 15%~ 21%A; 15 ~ 20 דקות, 21%~ 25%a;

 

2.2.4 חקירה מתודולוגית

2.2.4.1 חקירת יחסים לינאריים

בדיוק פיפטה {{0}}. 1, 0. 5, 1. 0, 2. 0, ו -5.0 מ"ל של פיתרון ההתייחסות המעורב ל -10 מ"ל נפח, הוסיפו 50% מתנול לדילול לריכוזים של סדרה של סדרה. הזרקו את הדגימה לקביעה, השתמשו באזור השיא הכרומטוגרפי כ- ORDINATION (y) והריכוז כאבסיסה (X), ציירו עלילת פיזור וביצעו ניתוח רגרסיה כדי להשיג את משוואות הרגרסיה הליניארית של חומרי התייחסות שונים.

 

2.2.4.2 ניסוי מדויק

קח את פיתרון ההתייחסות המעורב של Echinacoside, Cistancheside A, verbascoside ו- iSoverbaccoside, הזריק אותו 6 פעמים ברציפות, רשום את שטח השיא של Echinacoside, Cistancheside A, verbascoside ו- iSoverbaccoside, וחשב את ערך ה- RSD של כל רכיב בהתאמה.

 

2.2.4.3 ניסוי יציבות

קח את אותו פתרון בדיקה של Cistanche Deserticola (מספר אצווה: 16 0 901), הזריק אותו ל- 0, 2, 4, 8, 12, 24 שעות, קבע את התוכן של Echinacoside, cistancheside A, verbascoside ו- isoverbaccoside בתמיסת הבדיקה, וחושב את ערך ה- RSD של כל רכיב.

 

2.2.4.4 ניסוי חוזרות

קח את אותה מדגם (מספר אצווה: 160901) אבקה, הכן 6 פתרונות בדיקה בהתאם לשיטה מתחת ל -2.1.1, הזרקו ומדדים, חישבו את תוכן האכינאקוזיד, Cistancheside A, verbascoside ו- iSoverbascoside בכל פתרון בדיקה, וחשבו את ערך ה- RSD של כל רכיב.

 

2.2.4.5 ניסוי התאוששות מדגם

שוקל במדויק 6 דגימות של Cistanche Deserticola (מספר אצווה: 160901) עם תוכן ידוע, הוסיפו פתרון התייחסות שווה ערך לתוכן הידוע של Echinacoside, Cistancheside A, verbascoside ו- iSoverbascoside, הכינו פתרונות מבחן בהתאם לשיטה מתחת ל -2.1.1, הזרקו ומדוד, ומחשבים את התאוששות המדגם הממוצע.