השפעות מניעה של פנילטנול גליקוזידים מ- Cistanche Tubulosa

איש קשר: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 דוא"ל:audrey.hu@wecistanche.com

Shu-Ping You, et al

תַקצִיר

רקע כללי:Cistanchetubulosaהיא רפואת צמחים סינית מסורתית שנמצאת בשימוש נרחב לוויסות חסינות.Phenylethanoildגליקוזידים(CPhGs) ממפעל זה הם החומרים היעילים בעיקר. מטרת מחקר זה הייתה להעריך את ההשפעות המניעתיות והטיפוליות של CPhGs על פיברוזיס כבד הנגרמת על ידי BSA בחולדות ומנגנונים מולקולריים קשורים המערבים תאי סטלט כבד. Biejiarangan (BJRG), רפואת צמחי מרפא סינית מסורתית נוספת, שימשה כביקורת חיובית.

שיטות:בניסויים in vivo, 75 חולדות SD חולקו באופן אקראי ל-6 קבוצות: רגילות (מטופלות במים מזוקקים), מודל (מטופלת ב-BSA), תרופה חיובית (מטופלת ב-BSA בתוספת BJRG 600 מ"ג/ק"ג/יום), ומטופלת ב-BSA בתוספת CPhGs (125, 250 ו-500 מ"ג/ק"ג/יום). מדדי הכבד והטחול, רמות הסרום של אספרטאט אמינוטרנספראז (AST),אלנין אמינוטרנספראז (ALT), חומצה הקסדצנונית (HA), למינין (LN), פרוקולגן מסוג III (PCIII), קולגן IV (IV-C), הידרוקסיפרולין (Hyp) ), וגורם גדילה טרנספורמטיבי 1 (TGF- 1) נמדדו בכבדי חולדה. ציונים היסטופתולוגיים לפיברוזיס בכבד הוערכו עבור כל קבוצה באמצעות צביעה של H&E ו-Trichrome של Masson. הביטוי של TGF- 1, קולגן I (Col-I) וקולגן III (Col-III) נקבעו על ידי שיטת צביעה אימונוהיסטוכימית. השפעות אלו הוערכו עוד יותר במבחנה על ידי קביעת רמות הביטוי של NF-κB p65 ו- Col-I על ידי ניתוחי PCR כמותיים בזמן אמת. ביטוי החלבון Col-I נבדק גם הוא על ידי Western blotting.

תוצאות: כל קבוצות המינון (125, 250 ו-500 מ"ג/ק"ג/יום) של CPhGs הפחיתו משמעותית את אינדקס הכבד והטחול, הורידו ALT, AST, HA, LN , רמות PCIII, IV-C בסרום, תוכן TGF- 1 (P < 0.01,="" p="">< 0.01,="" ו-p="">< 0.01),="" והיפ="" תוֹכֶן.="" cphgs="" גם="" הקלו="" בצורה="" ניכרת="" את="" הנפיחות="" של="" תאי="" הכבד="" ומנעו="" ביעילות="" נמק="" הפטוציטים="" וחדירת="" תאי="" דלקת.="" תוצאות="" אימונוהיסטוכימיות="" הראו="" ש-cphgs="" הפחיתו="" באופן="" משמעותי="" את="" הביטוי="" של="" tgf-="" 1="" (p=""><0.01, p=""><0.01 ו-p=""><0.01), col-i="" ו-col-iii.="" ההשפעות="" החוץ="" גופיות="" של="" cphgs="" (100,="" 75,="" 50="" ו-25="" ug/ml)="" על="" hsc-t6="" הראו="" ש-cphgs="" הפחיתו="" משמעותית="" את="" ביטוי="" ה-mrna="" של="" nf-κb="" p65="" ו-col-i,="" ו-cphgs="" גם="" הורידו="" את="" ביטוי="" החלבון="">

מסקנות:ל-CPhGs יש אפקט אנטי פיברוזיס משמעותי בכבד, והם עשויים לשמש כחומרי הגנה על הכבד לטיפול בפיברוזיס בכבד.

מילות מפתח:פיברוזיס בכבד,Cistanche tubulosa,Phenylethanoildגליקוזיד,Chemokine BSA, מניעה וטיפול

PhenylethanoildגליקוזידבCistanchetubulosa

רקע כללי

פיברוזיס בכבד היא תגובה לריפוי פצעים לפגיעה חמורה בכבד המתרחשת בפתוגנזה של כרוניצפטיטיס הנגרמת על ידי גורמים שונים. גורמים אלו הם זיהום ויראלי, שימוש לרעה באלכוהול, כולסטזיס ומחלות מטבוליות ואוטואימוניות [1-3]. הצטברות מתקדמת של מטריקס חוץ-תאי (ECM) וירידה בעיצוב מחדש משבשים את הארכיטקטורה התקינה של הכבד, וכתוצאה מכך לפיברוזיס בכבד [4]. פיברוזיס בכבד היא קריטית במחלת כבד כרונית ולעתים קרובות מתפתחת לשחמת וקרצינוגנזה בלתי הפיכה. כיום, אין שיטות או תרופות יעילות לטיפול בפיברוזיס בכבד. לכן, דחוף למצוא תרופה נגד פיברוזיס בכבד שתחליש את התקדמות הפגיעה בכבד לפיברוזיס וסרטן.

CistanchetubulosaW (ממשפחת Orobanchaceae) הוא צמח טפילי הגדל באופן נרחב באזור הדרומי של שינג'יאנג בסין [5]. אנשים בדרך כלל משתמשים בו כדי להמריץ את הכליות, להזין את הדם, להרפות את המעיים ולדחות את ההזדקנות. זה רשום באופן רשמי בפרמקופאה הסינית [6].Cistanchetubulosaמכיל מגוון רכיבים פעילים. אלו כולליםPhenylethanoildגליקוזידים(CPhGs), אירידואידים ופוליסכרידים. כאחד ממרכיבים פעילים רבים בCistanchetubulosa, CPhGshave הפגין השפעות משכנעות של נוגדי חמצון, אנטי עייפות, הגנה עצבית ואנטי דלקתית הן במחקרים in vivo והן במחקרים במבחנה [7]. בשנים האחרונות דווח כי ל-CPhGs יש השפעות הגנה על הכבד. מנגנונים פוטנציאליים העומדים בבסיס ההשפעות הללו הם ניקוי רדיקלים חופשיים, הגנה על ממברנות הכבד, ויסות חיסוני, עיכוב של אפופטוזיס, עיכוב הביטוי של HBsAg ו-HBeAg, ועיכוב שכפול DNA של HBV ואחרים [8-11]. עם זאת, מעט מחקרים בספרות עוסקים בהשפעת הפיברוזיס האנטי-כבדית של GPhCs. לכן, מחקר זה נועד לחקור את השפעת הפיברוזיס האנטי-כבדית של GPhCs על ידי שימוש במודל של אלבומין בקר (BSA) המושרה בכבדי פיברוזיס בחולדות. מנגנונים מולקולריים קשורים נחקרו בתאי HSC-T6.

שיטות

כימיקלים וריאגנטים

ערכת Hydroxyproline (הידרוליזה אלקלית) (חלקה: 20140616) נרכשה מהמכון הביו-הנדסי של Nanjing Jiancheng (סין). ערכות TGF- 1 של עכברוש סנדוויץ'ELISA (חלקה: 238240615) נרכשו מ-Lianke Biotech Co., Ltd. (סין). נוגדן ארנב אנטי-קולגןI (חלקה: 140619), נוגדן אנטי-קולגן III של ארנב (חלקה: 980788 W), ונוגדן ארנב אנטי-TGF- 1 (חלקה: 140619) סופקו על ידי Beijing BiosynthesisBiotechnology Co., LTD ( חרסינה). מצורף עם סרום כבשים רגילות (נוזל עבודה) (חלקה: WP141214), PV-6000(חלקה: WK141225), וערכת DAB (חלקה: K136621D) נרכשו מ-Zhongshan Golden Bridge BiotechCo., Ltd. (סין). זיהוי נוגדנים ראשוניים בוצע באמצעות 2. תמיסת נוגדנים (Alk-Phos.Conjugated, Anti-rabbit) ו-2. תמיסת נוגדנים (Alk-Phos. Conjugated, Anti-mouse) (חלקה: 272387) שנרכשה מחברת Invitrogen (ארה"ב) .

אלבומין בסרום בקר (BSA) (חלקה: SLBG8239V) נרכש מסיגמא (ארה"ב). לפני השימוש, BSA הוכן ב-18 גרם/ליטר בתמיסת מלח רגילה, החיידקים הוסרו על ידי סינון, ו-BSA מאוחסן ב-4 מעלות. התוסף הלא שלם של פרוינד המכיל 1 גרם של שומנים משיער כבשים (חלקה: AF0220LA14, Shanghai yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (סין,) היה מעורבב עם 2 גרם פרפין נוזלי (לוט: 20130815, Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., בע"מ (סין,), מעוקרת בחיטוי קיטור, ומאוחסנת ב-4 מעלות. התרופה החיובית BJRG הושגה כטבליות Biejiarangan מ-Inner Mongolia Furui Medical Science Co., Ltd.(סין). מלאי התרופות BJRG הוכן על ידי המסת טבליות BJRG ב-BJRG מים מזוקקים בריכוז של 600 מ"ג/ק"ג.

Phenylethanoild גליקוזידבCistancheיש השפעות מניעה

חומרים צמחיים

Cistanche tubulosa(משפחת Orobanchaceae) נרכשה מאזור Minfeng של שינג'יאנג שבסין. החומר אושר על ידי החוקר ג'ון ז'או, מעבדת מפתח לרפואה אויגורית, המכון למטריה מדיקה של שינג'יאנג. דגימות שובר הופקדו במכון Materia Medica של Xinjiang.

הכנת CPhGs

קני שורש מיובשים ופרוסים שלCistanchetubulosa(6.0 ק"ג) חולצו ברציפות תחת ריפלוקס שלוש פעמים עם 70 אחוז אתנול, והממס הוסר כדי להניב תמצית אתנול. תמציות אתנול טוהרו באמצעות שרף AB-8 כדי להשיג אתפנילתנואידגליקוזידים(CPhGs). פתרונות מלאי של CPhGs ששימשו לקבוצות מינון שונות במחקרים על בעלי חיים (500 מ"ג/ק"ג, 250 מ"ג/ק"ג ו-125 מ"ג/ק"ג, בהתאמה) הומסו ב-0.5 אחוז (5 גרם/ליטר) קרבוקסימטיל תאית ( מלח נתרן).

כימות של CPhGs

התוכן של שני רכיבים (echinacoside andacteoside) ב-CPhGs נקבע על ידי HPLC תוך שימוש בשיטה שדווחה בעבר (Zhang et al. 2004)[12]. HPLC בוצע באמצעות Shimadzu LC-10AHPLC המצויד בגלאי UV. עמודת HPLC הייתה עמודת Phenomenex Gemini ODS (250 × 4.6 מ"מ, 5 מיקרומטר). הפאזה הניידת האיזוקרטית כללה מתנול-אצטוניטריל-1 אחוז חומצה אצטית (15:10:75, v/v/v). הפליטה הייתה למשך 40 דקות וקצב הזרימה נשמר על 0.6 מ"ל לדקה. טמפרטורת העמודה נשמרה קבועה ב-30 מעלות. זיהוי UV היה ב-334 ננומטר.

בעלי חיים וקו תאים HSC-T6

[דרגה SPF] זכר בוגר בריא זכר Sprague-Dawley (SD) חולדות (180-220 גרם) נרכשו ממרכז החיות של Xinjiang MedicalUniversity, מס' רישיון: SCXK (חדש) 2011-0004. חולדות קיבלו מזון ספציפי ללא פתוגן (SPF). כל ההליכים הקשורים לניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה לבעלי חיים של בית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית של שינג'יאנג. חולדות אוחסנו בכלובים בתנאי סביבה מבוקרים (25 מעלות ומחזור אור/חושך של 12 שעות) והייתה לה גישה חופשית לאוכל סטנדרטי של גלולות חולדות ומי ברז. חולדות עברו התאקלמות לפני הטיפול.

קו תאי כבד של עכברוש מונצח, HSC-T6, הושג מ- Wuhan Procell Gene BiotechnologyCo., LTD. (ווהאן, סין). תאי HSC-T6 הותרבות ב-Dulbecco's Modified Eagle's Medium (גבוהה גלוקוז) (DMEM, בייג'ינג, סין) בתוספת של 10 אחוז סרום עוברי (Gibco, דרום אמריקה), 100 IU/ml פניצילין ו-100 ug/ml סטרפטומיצין (בייג'ינג, סין ) באינקובטור לחות ב-37 מעלות עם 5 אחוז CO2.

פגיעת כבד הנגרמת על רקע BSA וטיפולים

שבעים וחמש חולדות SD חולקו באופן אקראי לשש קבוצות: רגילה (מטופלת במים מזוקקים), מודל (מטופלת ב-BSA), תרופה חיובית (מטופלת ב-BSA בתוספת BJRG 600 מ"ג/ק"ג/יום) , וקבוצות שטופלו ב-BSA בתוספת CPhG (125, 250, 500 מ"ג/ק"ג/יום). בקבוצות שטופלו ב-BSA פלוס CPhGs (125, 250, 500 מ"ג/ק"ג/יום) היו 13 חולדות בכל קבוצה, ובקבוצה השנייה היו 12 חולדות בכל קבוצה. המודל של פגיעה בכבד המושרה על ידי BSA מחולק לרגישות ראשונית ואחריה התקף אימונולוגי) [13]. פרט לקבוצה הרגילה, לקבוצות האחרות ניתנו זריקות תת עוריות מרובות עם 0.5 מ"ל (9 מ"ג/מ"ל) אדג'ובנט לא שלם של BSAFreund ביום 1, יום 15, יום 22, יום 29 ויום 36 עבור רגישות ראשונית. שבעה ימים לאחר ההזרקה החמישית, דם הושג דרך מקלעת הווריד הרטנית ונבדק לנוגדני אלבומין בסרום. נוגדן BSA בסרום חולדות זוהה בשיטת דיפוזיה כפולה של אגר. הזרקת ההתקפה בוצעה על ידי מתן 0.4 מ"ל של BSA ב-Normalaline הייתה דרך הווריד הזנב בחולדות חיוביות לנוגדנים BSA פעמיים בשבוע במשך עשר פעמים. הריכוזים וזמני ההזרקות היו 5.00, 5.50, 6.00, 6.50,7.00, 7.50, 8.50, 9.00, 9.50 ו-10.00 גרם/ליטר ביום 46 , יום 50, יום 53, יום 57, יום 60, יום 64, יום 67, יום 71, יום 74 ויום 78, בהתאמה. בקבוצה הרגילה, נעשה שימוש בתמיסת מלח רגילה לזריקות אימונולוגיות ראשוניות (רגישות) ומשניות (התקפה) במקום BSA, ומצבים אחרים היו זהים לאלו בקבוצת המודל.

לקבוצה הרגילה ניתנו דרך הפה מים מזוקקים במינון של 10 מ"ל/ק"ג ליום. לקבוצת המודל ניתנה דרך הפה 10 מ"ל/ק"ג/יום תמיסה של 0.5 אחוז CMC-Na. לקבוצת התרופות החיובית ניתנה דרך הפה 600 מ"ג/ק"ג/יום BJRG. הקבוצות שטופלו ב-BSA בתוספת CPhGs (125,250 ו-500 מ"ג/ק"ג/יום) קיבלו דרך הפה 125, 250 ו-500 מ"ג/ק"ג/יום CPhGs, בהתאמה. חולדות במינון יומי נמשכו במשך שבועיים לאחר ההזרקה האחרונה.

לאחר תקופת הניסוי, החולדות צמו במשך 12 שעות לפני 10 אחוז כלור הידרט ולאחר מכן הוטמנו מיד. דגימות סרום נאספו מכל עכבר בשימוש מיידי. כבדים נקצרו לשתי מטרות: (1) שימור בחנקן נוזלי עבור Hyp kits (2) קיבוע ב-10 אחוז פורמלדהיד לבדיקות היסטולוגיות ואימונוהיסטוכימיות. משך כל מחקרי החיות היה 93 ימים.

Phenylethanoild גליקוזידבCistancheיש השפעות מניעה

מדדי כבד וטחול

הכבד והטחול נותחו על ידי laparotomy ונשטפו במלוחים נורמליים של 4 מעלות. לאחר ספיגת עודפי מים עם נייר סינון, הכבד והטחול נשקלו כדי לחשב את המדדים המתאימים: משקל איבר יחסי=מסת איבר (g)/מסת גוף בודדת (g) × 100 אחוז [14].

ניתוח סמנים של פיברוזיס בכבד

ההשפעה המגנה של CPhGs נגד פגיעה בכבד הנגרמת על ידי BSA הוערכה על ידי מדידת ALT ו-AST (Mind ray automatic biochemical analyzer, A086A0182). התפתחות פיברוזיס בכבד והשפעות הטיפול נקבעו על ידי בדיקת HA, LN, PC III ו- IV-C (Cemiluminescence Analyser, TaiGeKeXin, MP2808).

תוכן היפי וניתוח TGF- 1

רמת ה-Hyp ברקמת הכבד נקבעה בשיטה ספקטרופוטומטרית לפי הוראות הערכה. רמת ה-Hyp באה לידי ביטוי כהיפ (ug)/חלבון (מ"ג). היפ (ug/mg)=(מודד OD - OD ריק)/(תקן OD ריק OD)×5 (ug/ml) × 10/משקל רטוב של רקמה (ml/mg). הריכוז הכבדי של TGF- 1 זוהה באמצעות ערכות ELISA לפי הוראות היצרן. ההשפעה המעכבת של CPhGs על פיברוזיס אוששה על ידי רמות הביטוי של TGF- 1.

בדיקה היסטופתולוגית

רקמת הכבד באותו חלק של האונה השמאלית נכרתה וקבועה בתמיסת פורמלדהיד של 10 אחוז. רקמות נצבעו בצביעה קונבנציונלית H&E ו-Masson'strichrome כדי לצפות בשינויים היסטופתולוגיים במיקרוסקופ אור. ביטוי של קולגן מסוג I, קולגן מסוג III ו-TGF- 1 ברקמות הכבד נותח על ידי צביעה אימונוהיסטוכימית [15].

אימונוהיסטוכימיה חצי-כמותית בוצעה על פי שיטות מדווחות [16, 17]. הסיווגים הבאים שימשו עבור תאים חיוביים של TGF- 1: "-" אינו מציין כמעט שום ביטוי, 20=l; " פלוס " מציין תאים חיוביים שנאספו בנפרד באזור הנגע, 21=2; " פלוס פלוס " מציין תאים חיוביים בקבוצות קטנות שנאספו סביב אזור הנגע, 22=4; " פלוס פלוס פלוס " מציין תאים חיוביים מפוזרים המבוטאים כ-23=8. התוצאות מייצגות אינטגרציה היררכית. הדרגה וההיקף הכרומוגני מסוג קולגן מסוג I וקולגן מסוג III הומרו ל-CRI לצורך ניתוח סטטיסטי (דרגה כרומוגנית × טווח כרומוגני). התואר הכרומוגני מתחלק ל"פלוס" חלש, בינוני "פלוס פלוס", וחזק "פלוס פלוס פלוס". הטווח הכרומוגני מחולק ל" פלוס ", הטווח הכרומוגני שלו < תצוגה="" 1/4;="" "="" פלוס="" פלוס="" ",="" טווח="" הראייה="" הכרומוגני="" שלו/4-2/4;="" "="" פלוס="" פלוס="" פלוס="" ",="" טווח="" הראייה="" הכרומוגני="" שלו="" 2/4-3/4;="" "="" פלוס="" פלוס="" פלוס="" פלוס="" ",="" הטווח="" הכרומוגני="" שלו=""> 3/4. ניקוד עיוורון בוצע על ידי שני אנשים כאשר "פלוס" הוא 1; " פלוס פלוס " הוא 2, " פלוס פלוס פלוס " הוא 3, ו- " פלוס פלוס פלוס פלוס " הוא 4. שלושה שדות תצפית של מיקרוסקופ (הגדלה × 200) נבחרו אקראית עבור כל קטע, כאשר הרמה הממוצעת של הדגימות משמשת כ- רמה חצי כמותית.

ניסויים בתאים

תאי HSC-T6 צופו בצלחת 96-באר. בתחילה, התאים תורבו עם DMEM המכיל 10 אחוז FBS למשך 48 שעות. לאחר מכן הוחלף המדיום ב-DMEM ללא FBS כדי להרעיב את התאים למשך 12 שעות. לאחר מכן התאים תורבו עם DMEM שהכיל 5.0 ng/mLTGF - 1 (ללא FBS) למשך 24 שעות. לבסוף, ריכוזים שונים של CPhGs (100 ug/ml, 50ug/ml, ו-25ug/ml), acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml, and 1.5 ug/ml), andechinacoside (500ug/ml, 250ug/ml, ו-125 ug/ml) בוצעו בצלחת בבארות מרובעת והודגרו במשך 48 שעות.

ניתוח PCR בזמן אמת

רמת ביטוי ה-mRNA של NF-κB, p65 וקולגןI נקבעה על ידי PCR בזמן אמת. כדי לקבוע ביטויי RNA בתאי HSC-T6, התאים (4 × 105 תאים) נזרעו בצלחות שש בארות עם 3 מ"ל DMEM עם 10 אחוז FBS והודגרו למשך הלילה ב-37 מעלות ו-5 אחוז CO2, לאחר מכן אמצעי תרבית תאים שונו DMEM ללא טוסרום. לאחר מכן, CPhGs (100 ug/ml, 50 ug/ml, ו-25 ug/ml), acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml, and 1.5 ug/ml), and echinacoside (500 ug/ml, 250 ug/ml) לבארות נוספו לבארות. לאחר 48 שעות של דגירה עם CPhGs או קומפוזיציות מונומריות, ה-RNA הכולל חולץ באמצעות ריאגנט TRIzol (Invitrogen, ארה"ב) ועורב במרץ עם כלורופורם במשך 15 שניות. לאחר ישיבה בטמפרטורת החדר למשך 3 דקות, בוצע צנטריפוגה של הליזאט ב-12,000 × g למשך 15 דקות ב-4 מעלות. RNA בשלב מימי הוזרע עם איזופרופנול, והפאזה המימית העליונה הועברה לצינורית מיקרוצנטריפוגה חדשה. RNA הושק על ידי הוספת 0.75 אחוז אתנול, ולאחר מכן הצינור המיקרוצנטריפוגה עבר צנטריפוגה ב-12,000 × g ב-4 מעלות למשך לא יותר מ-5 דקות. הסופרנטנט הוסר וה-RNA יובש בטמפרטורת החדר למשך 5-10 דקות. קבוצות ספציפיות של פריימרים (סאנגון, שנגחאי, סין) ששימשו להגברה של אקטין עכברוש [GenBank: NM_031144.3], קולגן I [GenBank: NM_ 053304.1], ו-NF- גנים κB p65[GenBank: NM_199267.2] תוכננו באמצעות Batch Primer 3. הפריימרים קדימה (FW) והיפוך (RV) היו כדלקמן: קולגן I (FW: GGA GAGAGC ATG ACC GAT GG, RV: GGG ACT TCT TGAGGT TGC CA), NF-κB p65 (FW: CAT ACG CTG ACCCTA GCC TG, RV: TTT CTT CAA TCC GGT GGCGA), -אקטין (FW: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GATG, RV: AGA GGC ATA CAG GGA CAA CAC A). התוצאות נורמלו ל-mRNA של ה-housekeepinggene -actin כבקרה פנימית ומוצגות כרמות mRNA יחסיות

התגובות בוצעו עם 8 μL IQ SYBR GreenSupermix, 1 μL 10 pM פריימר, 8.5 μL מים מזוקקים ו-2.5 μL cDNA. כל תגובת שרשרת פולימראז בוצעה בתנאים הבאים: 95 מעלות למשך 3 דקות, לאחר מכן 40 מחזורים של 10 שניות ב-95 מעלות, 30 שניות ב-55 מעלות, ו-10 שניות ב-55 מעלות - 95 מעלות להארכה, ולאחר מכן מדידת פלואורסצנציה בודדת. התוצאות הסופיות תוארו עם הערכים היחסיים (2-ΔΔCt). חישוב וניתוח בוצעו על ידי מערכת iQ5 לזיהוי PCR בזמן אמת.

ניתוח כתם מערבי

רמות ביטוי החלבון של קולגן I (Abcam, Cambridge, UK, Art No: ab34710) נקבעו על ידי Westernblotting [עם -actin (Lot: 60008-1-lg; Proteintech,China) כבקרת משק בית. תמציות של תאים שלמים הוכנו באמצעות חיץ של Radioimmunoprecipitation Assay (RIPA) (Thermo Scientific, ארה"ב) עם 1 אחוז קוקטייל מעכבי Haltprotease (Thermo Scientific, ארה"ב) וקוקטיילים מעכבי Halt פוספטאז 1 אחוז (Thermo Scientific, ארה"ב). ריכוז החלבון נמדד וכומת בשיטת ברדפורד [18]. חלבון (10-50 ug) הופרד על ג'ל SDS-PAGE של 10 אחוז והועבר לממברנות PVDF (Millipore, ארה"ב). הממברנות נחסמו למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר עם 5 אחוז BSA, והנוגדנים העיקריים (Anti-Colla gen I נוגדן, דילול 1:200 או mAb של עכבר של -אקטין, דילול 1:5000) הודגרו ב-4 מעלות למשך הלילה. ה-Alk-Phos המקביל. נוגדנים משניים מצומדים הודגרו בטמפרטורת החדר. לבסוף, הממברנות נשטפו שלוש פעמים עם 1 × Tris-HClsaline עם 0.1 אחוז Tween 20, והאותות נסרקו והוצגו על ידי GEL DOC XR Imaging System (Bio-Rad). ניתוח דנסימטרי בוצע על החלבונים המעניינים ומנורמל לאקטין על ידי תוכנת GEL DOCImage Studio (Bio-Rad). -אקטין שימש כבקרה פנימית.

ניתוח סטטיסטי

מבחן הנורמליות של Shapiro-Wilk ומבחן הומוגניות שונות של Levene יושמו כדי לאמת תקינות והומוגניות של שונות. ניתוח השונות (ANOVA) ואחריו מבחן הפוסט-הוק של Tukey שימש לזיהוי הבדלים סטטיסטיים לא-הומוגניים, בחלוקה נורמלית. המבחן הלא-פרמטרי של Kruskal-Wallis שימש לניתוח נתונים שאינם מבוזרים נורמליים או הומוגניים. התוצאות הובעו כממוצע ± SD. המובהקות נקבעה ל-P < 0.05.="" כל="" הנתונים="" נותחו="" על="" ידי="" תוכנת="" spss="" 16.0="" (האוניברסיטה="" הרפואית="" של="">

תוצאות

קביעה כמותית של CPhGsCPhGs בCistanchetubulosaמכיל שנייםPhenylethanoildגליקוזידים, echinacoside ו-acteoside, והתוכן שלהם ב-CPhGs נקבעו על ידי ניתוח HPLC (איור 1) להיות 42.71 ± 0.42 אחוזים ו-14.27 ± 0.18 אחוזים, בהתאמה.

מדדי כבד וטחול

כפי שהוצגה טבלה 1, מדדי הכבד והטחול של קבוצת המודלים עלו באופן משמעותי [P < 0.01,p="">< 0.05].="" מדדי="" הכבד="" והטחול="" של="" התרופות="" החיוביות="" bjrg="" ו-cphgs="" בקבוצות="" מינון="" שונות="" הופחתו="" באופן="" משמעותי="" בהשוואה="" לקבוצת="" המודל="" [pliver="0.004," pliver="0.003," pliver="0.004," pliver="0.005;" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024,PSpleen=0.070," בהתאמה].="" מדדי="" הכבד="" והטחול="" היו="" נמוכים="" מאלו="" של="" קבוצת="">

השפעות של CPhGs על פעילויות ALT, AST וסמני פיברוזיס בכבד

במחקר הנוכחי, רמות הסרום של האנזימים הכבדיים AST ו-ALAT עלו באופן משמעותי בקבוצת המודל, מה שמשקף נזק כבד תאי בחולדות פיברוזיס בכבד המושרה על ידי BSA. עם זאת, הניסויים הראו שטיפול ב-BJRG (600 mg/kg) ו-CPhGs (125, 250 ו-500 mg/kg) הפחית באופן משמעותי AST[PAST < 0.001,="" past="">< 0.001,="" past="">< 0.001,="" past="">< 0.001,="" בהתאמה]="" ו-alt="" [palt="0.117," palt="0.139," palt="0.189" ,="" palt="0.255," בהתאמה]="" רמות="" בפיברוזיסרטים="" בכבד.="" (שולחן="">

הרמות של HA, LN, PC ו-IV-C בחולדות מודל עלו באופן מובהק [PHA < 0.001,="" pln="">< 0.{{39}="" }01,="" ppciii="0.002," piv-c="">< 0.001,="" בהתאמה].="" בהשוואה="" לקבוצת="" המודל,="" הרמות="" של="" ha="" [pha="0.009," pha="0.007,PHA=0.009," pha="0.023," בהתאמה],="" ln="" [pln="0.011," pln="0.004," p="" ln="0.026," p="" ln="0.069," בהתאמה],="" pc="" iii[p="" pciii="" {{26="" }}.006,="" p="" pciii="0.067," p="" pciii="0.136," p="" pciii="0.296," בהתאמה],="" ו-iv-c="" [p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c="">< 0.001,="" בהתאמה]="" בחולדות="" ירדו="" באופן="" ניכר="" על="" ידי="" bjrg="" (600="" מ"ג/ק"ג)="" ו-cphgs="" בקבוצות="" מינון="" שונות="" (125,="" 250="" ו-500="" מ"ג/ק"ג)="" )="" (שולחן="">

תוכן היפי ו-TGF- 1

תכולת קולגן זוהתה גם על ידי מדידת Hyplevels ברקמת הכבד. כפי שמוצג בטבלה 4, רמת ה-Hyp הממוצעת בקבוצת המודל הייתה גבוהה משמעותית מהקבוצה הרגילה, אך היא ירדה באופן ניכר בקבוצת BJRG ובקבוצות המינון השונות של CPhGs.

ריכוז הכבד של TGF{{0}} של קבוצת המודלים בחולדות גדל באופן משמעותי [P < 0.001].="" בהשוואה="" לקבוצת="" המודלים,="" רמות="" tgf-="" 1="" של="" התרופה="" החיובית="" וקבוצות="" המינון="" השונות="" של="" cphgs="" ירדו="" באופן="" ניכר="" [p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0.001,p="" tgf{{10="" }}="">< 0.001,="" ptgf-="" 1="">< 0.001,="" בהתאמה].="" התוצאות="" מסוכמות="" בטבלה="">

בדיקה היסטופתולוגית

תצפיות של קטעי רקמת כבד תקינים שנצבעו ב-H&E וב-Trichrome של Masson מציגים כבדי כבד וסינוסואידים כבדיים ברורים. מבנה רקמת הכבד בחולדות המודל היה מופרע, ורקמת הכבד והסינוסואידים הכבדים הוחלפו בכמות גדולה של רקמת חיבור. עם זאת, ציטוארכיטקטורה נורמלית יותר ופחות רקמות חיבור זוהו בקבוצת הטיפול מאשר אלו בקבוצת המודל.

צביעת H&E

בקבוצה הרגילה, נצפתה שלמות מבנית של אונות הכבד ללא אזורי שער חריגים וסינוסים בכבד. מיתרי הכבד היו מסודרים בצורה מסודרת, כאשר הליבה עגולה וברורה. הגרעינים ממוקמים במרכז התא, עם ציטופלזמה בשפע. רק באזור השער יש כמות קטנה של רקמה סיבית (איור 2א).

בקבוצת המודלים, המבנה הלובולרי נפגע קשות. תאי כבד הראו ניוון מימי קל, בעיקר ניוון בלון ו/או ניוון שומני. כמו כן נצפתה היווצרות של חדירת תאים דלקתיים, היפרפלזיה נרחבת של רקמות סיבית, היווצרות מספר גדול של המחיצה הסיבית, אונות מפוצלות והתפשטות משמעותית של תאי כבד. פיברוזיס בכבד (איור 2ב).

בהשוואה לקבוצת המודל, חלה הפחתה של חדירת תאי דלקת ב-CPhGs השונים. כמו כן נצפו פחות נמק וניוון שומני של תאי כבד וכן הקלה על פיברוזיס. CPhG הקלה משמעותית את הפתולוגיה של פיברוזיס כבד המושרה על ידי BSA בחולדות, הקלה על נפיחות תאי כבד ומנעה למעשה נמק הפטוציטים וחדירת תאי דלקת, דבר המצביע על כך ש-CPhG משפיע על השפעת הגנה על כבד הנגרמת על ידי BSA. (איור 2ג-ו).

מכתים טריכרום של מאסון

בקבוצה הרגילה, רקמת הכבד הייתה תקינה. אזור השער הכבדי הראה מספר קטן של סיבי כחול-קולגן, ורקמת הכבד הייתה בנויה בצורה רגילה (איור 3א). בהשוואה לרקמת הכבד של הקבוצה הרגילה, רקמה סיבית התרבה ​​על ידי העלון המרכזי והתרחבה לתוך פרנכימה הכבד. סיבי קולגן התרחבו וקשרו ועטפו את כל האונה והקיפו את הווריד המרכזי. השפעות אלו, יחד עם פיברוזיס הפטוציטים, נזק מבני לובולרי, פיברוזיס פריפורטלי ויצירת פסאודולבולולים (איור 3b) סיפקו הוכחות לכך שהמודל הוקם.

בהשוואה לקבוצת המודל, סיבי הקולגן בקבוצת הביקורת החיובית של תרופות הורחבו מעט כלפי חוץ מאזור הפורטל ההיקפי (איור 3c). בהשוואה לקבוצת המודל, סיבי הקולגן בקבוצות המינון השונות של CPhGs הופחתו באופן משמעותי, שגשוג סיבים נבלם, והתפשטות רקמה סיבית בתוך הפרנכימה של הכבד הופחתה משמעותית. תוצאות אלו הצביעו על כך ש-CPhGs הגנו על חולטים מפני פיברוזיס כבד המושרה על ידי BSA (איור 3d-f).

צביעה אימונוהיסטוכימית

חשוב לציין, הביטוי של קולגן מסוג I וקולגן מסוג III ממלאים תפקידים חיוניים בפיתוח פיברוזיס בכבד, ויצירתם והשקעתם ברקמת הכבד יכולים לשמש כגורם חשוב ליעילות הפיברוזיס האנטי-כבדית. התוצאות מסוכמות בטבלה 5.

קולגן סוג I

הקבוצה הנורמלית ביטאה קולגן מסוג I בעיקר כלי דם ואזור הפורטל. קבוצת המודלים ביטאה מאוד קולגן סוג I פיברוזיס כלי דם באזורי השער. בחלל של Disse, צביעת קולגן מסוג I נצפתה כפס או כהפצה חלקית. פיברוספטה עטופה בקולגן ליצירת פסאודובולולה. בניסויים אלו, נוצרו פחות מחיצות סיביות עבור BJRJ (600 מ"ג/ק"ג) וקבוצות מינון שונה של CPhGs (125, 250 ו-500 מ"ג/ק"ג) [PCol I= 0.002, PCol I {{6 }}.001, PCol I=0.023, ו-PCol I=0.044, בהתאמה]. התוצאות הכמותיות למחצה גילו שהביטוי של סוג הקולגן I שלהם היה נמוך משמעותית בהשוואה לקבוצת המודל (איור 4).

קולגן סוג III

קולגן מסוג III התבטא בצורה חלשה בקבוצה הרגילה, ואזורים היקפיים המקיפים את הפורטל והורידי הכבד הראו כמות קטנה של צהוב עדין במקום סיבים רציפים (איור 5a). בקבוצת המודלים, סיבי הקולגן הציגו מיתרים רחבים ועבים, המעידים על הבעה חזקה, הממוקמים בעיקר באזורי השער והרקמות הסיבית (איור 5b).

סיבי קולגן של BJRJ (600 מ"ג/ק"ג) וקבוצות מינון שונות של CPhGs (125, 250 ו-500 מ"ג/ק"ג) היו חוטיים והופצו סביב אזורי הווריד המרכזי והפורטל. בהשוואה לקבוצת המודלים, סיבי הקולגן הופחתו באופן משמעותי, הצביעה הייתה חיוורת ודקה, וצביעה אימונוהיסטוכימית הייתה חיובית חלשה (איור 5c-f). תוצאות חצי כמותיות אלו מראות שהתאים המבוטאים באופן חיובי בקבוצות המינון החיוביות והשונות [PCol III=0.015, PCol III=0.001, PColIII=0.010 ו-PCol III=0.037, בהתאמה] היו שונים מאלה שבקבוצת המודלים.

TGF- 1

היה מעט ביטוי של TGIF- 1 בתאי כבד רגילים של חולדה. הביטוי הוגבל למספר קטן של תאים ביניים (איור 6א). בקבוצת המודלים, ביטוי ה-TGF- 1 היה תפוצה נרחבת באזור הפורטל, חללים סיביים, תאי כבד, תאי דלקת, דופן הסינוסואידלית והציטופלזמה. אזור שער מסוים הראה ביטוי חיובי מאוד עם צביעה חום-צהוב (איור 6b)

הייתה כמות קטנה של ביטוי באזור השער ובמחיצות הסיבים של BJRJ (600 מ"ג/ק"ג) וקבוצות מינון שונות של CPhGs (125, 250 ו-500 מ"ג/ק"ג). מידת הצביעה החיובית בקבוצות אלו הופחתה באופן משמעותי בהשוואה לזו של קבוצת המודלים. צביעה בתאי הביניים במחיצות הסיבים ובציטופלזמה של תאים דלקתיים ירדה (איור 6c-f). תוצאות כמותיות למחצה גילו כי BJRJ וקבוצות מינון שונות של CPhGs [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 < 0.001,="" p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0." 004,="" בהתאמה]="" היו="" משמעותיים="" בהשוואה="" לקבוצת="">

כפי שהוזכר קודם לכן במאמר, TGF- 1 הוא ציטוקין חשוב בפתופיזיולוגיה של פיברוזיס בכבד, הממריץ את הייצור של מטריצה ​​חוץ-תאית [19]. הראינו שרמת ה-TGF- 1 עלתה בקבוצת המודלים באופן שעולה בקנה אחד עם חומרת הפיברוזיס בכבד. רמות הביטוי של TGF- 1 בכבד היו עקביות עם רמות serumTGF- 1. זה מצביע על כך ש-CPhGs יכולים להפחית באופן משמעותי פיברוזיס בכבד עקב ביטוי TGF- 1 על ידי השתתפות בסינתזה ופירוק של ECM.

הביטוי של קולגן מסוג I, קולגן מסוג III ו-TGF- 1 יכול לזהות את התהליך הפתולוגי של פיברוזיס בכבד. רמות הביטוי שלהם בקבוצות הטיפול ירדו באופן משמעותי והמחישו ש-CPhGs יכולים לשפר את פעילות הקולגנאז, לשמור על שיווי המשקל הדינמי של סינתזה ופירוק של ECM בכבד, ובכך לעכב ולמנוע את היווצרות פיברוזיס בכבד.

NF-κB p65 וביטוי קולגן I לאחר התערבות תרופות בתאי HSC-T6

על מנת לאפיין אותות של פיברוזיס בכבד, נקבעו שני גנים רגולטוריים מרכזיים בכבד באמצעות בדיקת RT-PCR. הנתונים הראו כי לתאי tHSC-T6 מקבוצת הביקורת היו רמות נמוכות יותר של NF κB ו-mRNA מסוג קולגן I. לעומת זאת, TGF- 1 גרמה לתאי HSC-T6 להגביר בצורה ניכרת את NF-κB (P < 0.01)="" ו-col-i="" (p=""><0.01) mrna,="" עם="" רמות="" גבוהות="" מ-="" אלה="" בקבוצת="" הביקורת.="" בנוכחות="" ריכוזים="" שונים="" של="" cphgs,="" התוצאות="" של="" nf-κb="" p65="" [p="" nf-κb="0.001" עבור="" 100="" ug/ml,="" p="" nf-kb="0.002" עבור="" 75="" ug/ml="" ,="" p="" nf-κb="0.007" עבור="" 50="" ug/ml,="" ו-p="" nf-κb="0.012" עבור="" 25="" ug/ml,="" בהתאמה]="" ו-col-i="" [p="" col-i="" {{32="" }}.006,="" p="" col-i="0.009," p="" col-i="0.014," p="" col-i="0.019," בהתאמה]="" הראו="" ביטויים="" מופחתים="" של="" ה-mrna="" הללו="" (="" איור="">

ניתוח כתם מערבי של רמת קולגן I לאחר התערבות תרופות בתאי HSC-T6

איור 8 מציג את רמות הביטוי של חלבון קולגן I בתאי HSC-T6 של קבוצות הניסוי השונות. רמת הביטוי של חלבון קולגן I ירדה משמעותית בקבוצות המינון השונות של CPhGs (100 ug/ml, 75 ug/ml, 50 ug/ml, ו-25 ug/ml) בהשוואה לקבוצת TGF- 1.

דִיוּן

CPhGs הוא פנילתנואיד גליקוזיד מבודד ומטוהר מקנה השורש של Cistanche, המשמש כרפואת צמחים סינית מסורתית. בשנים האחרונות, CPhGshad הוכח כבעל יכולת חזקה למנוע פציעות כבד [20]. לכן, מטרתנו הייתה לחקור האם ל-CPhGs יש השפעות מעכבות על פיברוזיס הפטיטיס על ידי פיברוזיס כבד המושרה על ידי BSA בחולדות. BJRG משמש בדרך כלל כתרופה טיפולית לפיברוזיס בכבד בסין. הוא עשוי מקונכיות צב. ל- Radix PaeoniaRubra, Cordyceps Sinensis, Radix isatidis וכו' יש השפעות של מילוי צ'י ודם, הקלה על עייפות, ריכוך צמתים. בנוסף, מחקרים קודמים מראים שיש לו תפקיד ברור של חסימת פיברוזיס מוקדמת בכבד, עיכוב שגשוג של תאים אוגרי שומן והפחתת סינתזת קולגן [21]. לכן, נעשה שימוש ב-BJRG כתרופה חיובית במחקר זה.

השינויים הפתולוגיים של פיברוזיס בכבד בחולדות שנגרמו על ידי זריקות BSA דומים לאלה בשחמת הפורטל האנושי [22]. CPhGs הקלו באופן תלוי מינון את מידת הפיברוזיס בכבד ועיכבו את הפיכת HSC לתאים דמויי מיופיברובלסט, הפחיתו את הרמות המוגברות של ALT, AST, HA, LN, CIV, TGF- 1, ואינדקס הכבד, ודיכאו באופן ניכר את הביטוי של קולגן. I, קולגן III ו-TGF- 1 ברקמת הכבד.

השלבים של פיברוזיס בכבד נמצאים בקורלציה עם רמות תזרום של HA, LN ו-IV-C, אשר כסמנים עשויים למלא תפקיד בזיהוי מידת הפיברוזיס בכבד [23]. דווח כי HA הוא המשאב העיקרי של המטריצה ​​החוץ-תאית. IV-C כמרכיב המהותי של קרום הבסיס יסונתז בשפע ויושקע בכבדות בשלבים המוקדמים יותר של שחמת הכבד. רמות הסרום של LN ו-IV-C הן המדדים של קצב התחלופה של קרום הבסיס ומראות את מידת הפיברוזיס באזור הפורטל ובנימים הסינוסואידים [24]. PC III הוא סמן באבחון של פיברוזיס בכבד ושחמת שחמת מוקדם, אך הרגישות והספציפיות שלו אינן גבוהות, ואין הבדל משמעותי בין השלבים השונים של אופיברוזיס בהתייחסויות רבות [24, 25]. מחקר זה השיג תוצאה דומה.

בנוסף, תצפיות החתך המוכתם בטריכרום של H&E ו-Masson מציגות רקמות כבד תקינות עם אונות כבד וסינוסואידים כבדיים ברורים. מבנה רקמת הכבד בקבוצת המודל היה מופרע, ורקמת הכבד והסינוסואיד הכבדי הוחלפו בכמות גדולה של רקמת חיבור. עם זאת, נצפה שיפור משמעותי בקבוצות הטיפול בהשוואה לקבוצת המודל.

חשוב לציין, ביטוי קולגן מסוג I וקולגן מסוג III ממלאים תפקידים חיוניים בהתפתחות פיברוזיס בכבד, שחסימתו יכולה למנוע ולטפל בפיברוזיס בכבד. לכן, היווצרות וההשקעה ברקמת הכבד של קולגן מסוג I וקולגן מסוג III יכולים לשמש כגורם חשוב ליעילות פיברוזיס אנטי-כבדית. TGF- 1 הוא גם ציטוקין פרופיברוגני חשוב בפגיעה בכבד והוא פעיל ביולוגית עם פעולות פרמקולוגיות מרובות[26]. נדרש איזון בין הפעולות הללו כדי לשמור על הומאוסטזיס של רקמות. הביטוי החריג של TGF 1 מעורב בפתוגנזה של מחלות כבד [27, 28]. ידוע ש-TGF- 1 הוא ציטוקין מכריע המעורב בשלבים המוקדמים של פיברוזיס בכבד. סטרס חמצוני גורם ל-TGF- 1, וכתוצאה מכך האחרון ממריץ ייצור ותצהיר ECM [29]. לכן, אחת האסטרטגיות היעילות לייצור תרופה נגד פיברוזיס בכבד היא זיהוי חומרים אנטי-TGF- 1. ניתוח אימונוהיסטוכימי הראה שהביטויים של קולגן מסוג I, קולגן מסוג III ו-TGF- 1 יכולים לזהות את התהליך הפתולוגי של פיברוזיס בכבד. הביטויים של קולגן מסוג I, קולגן מסוג III ו-TGF- 1 בקבוצות הטיפול יורדים, שהיו נמוכים משמעותית בקבוצת הטיפול במינון גבוה של CPhGs בפרט, והציעו כי CPhGs הוא קולגן יעיל מסוג I, קולגן מסוג III , ומעכבי TGF- 1. ככל הנראה, CPhGscan משפר את פעילות הקולגנאז, שומר על שיווי המשקל הדינמי של סינתזה ופירוק ECM, ובכך מעכב ומונע את היווצרות פיברוזיס בכבד.

CPhGs לא רק יכולים לשפר את hepaticfibrosis הנגרמת על ידי BSA בחולדות, אלא גם עשויים להיות קשורים לעיכוב ההפעלה של HSC in vitro. הפעלת HSC נחשבת לייצג את השלב המכריע של פיברוגנזה. במחקר זה, התוצאות המחישו כי מתן CPhGs מ-25 עד 100 ug/ml הפחית בצורה יוצאת דופן את הירידה ב-NF-kB p65, ביטוי קולגן I mRNA וביטוי חלבון קולגן I ב-HSC.

NF-κB ממלא תפקיד חשוב בוויסות התגובה החיסונית לזיהום או לגירויים [30]. הצטברות NF-KB בתאי כבד יכולה לגרום לגיוס של ציטוקינים/מתווכים דלקתיים, ובכך לגרום להתפתחות פיברוזיס [31, 32]. יתרה מכך, קולגן הוא גם אינדקס רגיש המשקף את רמת הפיברוזיס ומהווה כ-50 אחוז מסך החלבון בכבד הסיבי [33]. כתוצאה מכך, הנחנו שהמנגנון המולקולרי נגד פיברוזיס בכבד קשור לאי-אקטיבציה בתיווך CPhGs של ביטוי NF-κB, שבו התועלת תורמת לתפקידים סינרגטיים של הפחתה של רעילות חיסונית ולחץ דלקתי במחלת הכבד הנגועה ב-BSA, ובכך מתקן עוד יותר את חילוף החומרים של הכבד.

מסקנות

לסיכום, המחקרים שלנו מצביעים על כך ש-CPhGs מחליש באופן משמעותי את מידת הפיברוזיס בכבד המושרה על ידי BSA בחולדות. המנגנון שלו עשוי לפחות חלקית לנבוע מההשפעה המעכבת של CPhGs על הרכב ECM וגירוי הפירוק של ECM, ו/או על ידי עיכוב ישיר של הסינתזה של קולגן מסוג I, קולגן מסוג III וביטוי של TGF{{0 }}. לכן, ציפינו שניתן להשתמש ב-CPhGs במוצרי בריאות או בתרופות קליניות למניעת פיברוזיס בכבד האנושי. נדרשים מחקרים עתידיים כדי לבסס את היעילות של CPhGs כתרופה חזקה נגד כבד פיברוזיס.

קיצורי מילים

CPhGs: גליקוזידים אנול מ-cistanche;

BSA: אלבומין בסרום בקר;

HSC-T6: תאי stellate Hepatic;

היפ: הידרוקסיפרולין;

BJRG: טבליות CompoundBiejiarangan;

TGF- 1: שינוי גורם צמיחה 1;

ALT: Alanineaminotransferase;

AST: Aspartate aminotransferase;

HA: חומצה היאלורונית;

ל"נ: למינין; PC III: פרוקולגן מסוג III;

IV-C: קולגן מסוג IV;

NF-κB: Nuclearfactor kappa-light-chain-enhancer של תאי B משופעלים;

RT-PCR: תגובת שרשרת Reversetranscriptase-polymerase;

SDS-PAGE: אלקטרופורזה של ג'ל Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide.

אינטרסים מתחרים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים

תרומות מחברים

TL, JZ, SPY, LM, MT ו-SLZ הגו ותכננו את הניסויים. SPY, TL ו-JZ ניתחו את הנתונים. SPY ו-JZ כתבו את כתב היד. TL,LM ו-JZ סקרו את כתב היד. כל המחברים קראו ואישרו את כתב היד הסופי.

הכרה

מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81260624). המחברים רוצים להביע את תודתם הכנה לפרופסור טאו ליו על ההצעות שלו לשיפורים לכתיבת מאמר זה.

פרטי מחבר

1המחלקה לטוקסיקולוגיה, בית הספר לבריאות הציבור, האוניברסיטה הרפואית של שינג'יאנג, מס' 393 Xinyi Road, Urumqi 830011האזור האוטונומי של Xinjiang Uyghur, סין. 2Key Laboratory for Medicine Uighur, Institute of MateriaMedica of Xinjiang, Urumqi 830004, China. 3 לא. 140 Xinhua South Road, District Tianshan, Urumqi 830000Xinjiang Uyghur Region Autonomous Region, China.

לחץ כאן כדי לבדוקCistanchetubulosaמוצרים

הפניות
1. כהן-נפטלי מ, פרידמן SL. מצב נוכחי של טיפולים אנטי-פיברוטיים חדשים בחולים עם מחלת כבד כרונית. תר עו"ד גסטרואנטרול. 2011;4(6):391–417.
2. Puche JE, Saiman Y, Friedman SL. תאי כבד ופיברוזיס בכבד. Compr Physiol. 2013;3(4):1473–92.
3. Hernandez-Gea V, Friedman SL. פתוגנזה של פיברוזיס בכבד. עננו ר' פאתול. 2011;6:425–56.
4. Sohrabpour AA, Mohamadnejad M, Malekzadeh R. מאמר סקירה: הפיכות של שחמת. Aliment Pharmacol Ther. 2012;36(9):824–32.
5. Raven PH, Zhang LB, Ventenat O. האקדמיה הסינית למדעים. מהדורה 23. סין: ועדת העורכים של Flora of China; 2013. עמ'. 1–16.
6. ועדת הפרמקופיה הסינית של המשרד הסניטרי של הרפובליקה העממית של סין. פרמקופאה סינית, חלק 1. China: Chemical Industry Publishing House; 2010. עמ'. 126.
7. Yan GH, Tian JH, Long BW, Li N. התקדמות המחקר שלפנילתנואידגליקוזידיםמCistanchetubulosa. סנטרל סאות' פארם. 2012;10:692–5.
8. Li J, Huang D, He L. השפעת Rou Cong Rong (Herba Cistanches Deserticolae) על רעילות רבייה בעכברים המושרה על ידי גליקוזיד של Leigongteng (Radix et Rhizoma Tripterygii). J Tradit Chin Med. 2014;34(3):324–32.
9. Xing Y, Liao J, Tang Y, Zhang P, Tan C, Ni H, et al. ACE, ומעכבי צבירה של טסיות מבית Tamarix hohenackeri Bunge (צמח מארח שלהרבהCistanches) גדל בשינג'יאנג. Pharmacogn Mag. 2014;10(38):111–7.
10. Jia Y, Guan Q, Jiang Y, Salh B, Guo Y, Tu P, et al. שיפור של קוליטיס הנגרמת על ידי דקסטרן סולפט בעכברים על ידי תמצית מועשרת באכינאקוסיד שלCistanchetubulosa. Phytother Res. 2014;28(1):110–9.
11. Wong HS, Ko KM. Herba Cistanches מגרה מחזור חיזור גלוטתיון תאי על ידי מיני חמצן תגובתיים הנוצרים מנשימה מיטוכונדריאלית בקרדיומיוציטים H9c2. פארם ביול. 2013;51(1):64–73.
12. Zhang SJ, Liu L, Yu JY. ARP: שיטת RP-HPLC לקביעה בו-זמנית של אכינאקוסיד ואקטאוזיד ב-Herbie Cistanches. Chin Pharm J 2004; 39(10): 740-741.
13. Zhu QG, Fang BW, Zhu QN, Wu HS, Fu QL. מחקר של מודל החיסון של פיברוזיס בכבד המושרה על ידי אלבומין בסרום בקר. צ'ין ג'יי פאתול. 1993;22:121–2.
14. Qin DM, Wen ZP, Nie YR, Yao GM. השפעת תמציות Cichorium glandulosum על פיברוזיס כבד המושרה על ידי CCl4-. איראן הסהר האדום Med J. 2013;15, e10908.
15. Niu HM, Zeng DQ, Long CL, Peng YH, Wang YH, Luo JF, et al. Clerodane diterpenoids ו-prenylated flavonoids מ-Dodonaea viscosa. J Asian Nat Prod Res. 2010;12(1):7–14.
16. Li WW, Song XW, Wang HW, Shen BS, Wang QC. מתאם של NF-κB ושלב פתולוגי של פיברוזיס בכבד בחולים עם הפטיטיס כרונית B. Chin J Immunol. 2013;29(3):251–4.
17. Zhang GL, Shi XF, Ran CQ, Xu M, Zhu ZJ. השפעות של סך הספונינים של Panax notoginseng נגד פיברוזיס בכבד בחולדות. Acta Academiae Medicinae Militaris שלישוני. 2007;29:2212–4.
18. Rossi O, Maggiore L, Necci F, Koberling O, MacLennan CA, et al. השוואה של מבחנים קולורימטריים עם ניתוח כמותי של חומצות אמינו לכימות חלבון של מודולים כלליים לאנטיגנים של ממברנה (GMMA). מול ביוטכנול. 2015;57(1):84–93.
19. Dang SS, Li YP. התקדמות בהבנת התפקיד של גורם גדילה משתנה- 1 בפתוגנזה של פיברוזיס בכבד. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi. 2010;18:1631–6.
20. Zhao J, Liu T, Ma L, Yan M, Zhao Y, Gu Z, et al. אפקט מגן של אקטאוזיד על פגיעה אימונולוגית בכבד הנגרמת על ידי Bacillus Calmette-Guerin בתוספת ליפופוליסכריד. פלנטה מד. 2009;75(14):1463–9.
21. Yang FR, Fang BW, Lou JS. השפעות של כדורי Fufang Biejia Ruangan על פיברוזיס בכבד in vivo ו-in vitro. World J Gastroenterol. 2013;19(32):5326–33.

22. Liu P, Fang BW, Liu C. תפקיד הפיכת גורם הגדילה 1 והקולטן שלו בפיברוגנזה של כבד המושרה על ידי אימונולוגי בחולדות והשפעה של פוליסכריד קורדיספס עליהן. Chin J Hepatol. 1998;6:232–3.

23. Xu GG, Luo CY, Wu SM, Wang CL. הקשר בין הבמה של הכבדפיברוזיס ורמות הביוכימיה בסרום. HBPD INT. 2002;1:246–8.אתה וחב'. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences (2015) 23:52 עמוד 12 מתוך 13

24. Liu J, Wang JY, Lu Y. סמני פיברוזיס בסרום באבחון פיברוזיס בכבד. סַנְטֵרJ מתמחה מד. 2006;145:475–7.

25. Li CZ, Wan MB, Zeng MD, Mao YM, Fan ZP, Cao AP, et al. מחקר ראשוני של שילוב של פרמטרים לא פולשניים באבחון של פיברוזיס בכבד. Chin J Hepatol. 2001;9:261–3.

26. חן י"ל, לי זי"י. הקשר בין TGF- 1, PDGF-BB, CTGF והפטיטיס B כרונית עם פיברוזיס. Chin J Diffic Compl Cas. 2010;9:19–20.

27. Sferra R, Vetuschi A, Catitti V, Ammanniti S, Pompili S, Melideo D, et al. תמציות Boswellia serrata ו- Salvia miltiorrhiza מפחיתות פיברוזיס כבד המושרה על ידי DMN בעכברים על ידי הורדת ויסות TGF-beta1. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2012;16(11):1484–98.
28. Liu L, Li XM, Chen L, Feng Q, Xu LL, Hu YY, et al. ההשפעה של Gypenosides על מסלול TGF- 1/Smad בפיברוזיס בכבד המושרה על ידי פחמן טטרכלוריד בחולדות. מתמחה J Integr Med. 2013;1:1–6.
29. Zhang BJ, Xu D, Guo Y, Ping J, Chen LB, Wang H. הגנה על ידי מנגנון נוגד חמצון של ברברין מפני פיברוזיס בכבד של חולדה הנגרמת על ידי גורמים כבדים מרובים. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2008;35(3):303–9.
30. Tornatore L, Thotakura AK, Bennett J, Moretti M, Franzoso G. מסלול איתות של גורם גרעיני kappa B: שילוב מטבוליזם עם דלקת. טרנדים Cell Biol. 2012;22(11):557–66.
31. Luedde T, Schwabe RF. NF-κB בפציעה המקשרת בכבד, פיברוזיס וקרצינומה כבדית. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2011;8(2):108–18.
32. Petrasek J, Csak T, Szabo G. קולטנים דמויי אגרה במחלת כבד. עו"ד Clin Chem. 2013;59:155–201.
33. Wang Y, Cheng M, Zhang B, Nie F, Jiang H. תוספת תזונתית של מיץ אוכמניות משפרת את הביטוי הכבד של מטאלותיון ומחליש פיברוזיס בכבד בחולדות. PLoS ONE. 2013;8, e58659.