לפוליסכרידים של Cistanche Deserticola יש השפעה נוירו-פרוטקטיבית

למידע נוסף:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu, et al

תַקצִיר:

שבץ איסכמיה היא מחלה עם תחלואה ותמותה גבוהים.Cistancheמדבריתפוליסכרידים(CDP) בעל מגוון רחב של השפעות מועילות, כולל הגנת הכבד והומאוסטזיס חיסוני. עד כמה שידוע לנו, ההשפעה המגנה של CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)על נוירונים שנפגעו ממחסור/חזרה של חמצן-גלוקוז (OGD/RP) לא נחקרו. במחקר זה, OGD/RP פצע מודל תא PC12. בקצרה, CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)({{0}}.05, 0.5 ו-5 ug/ml) ניתנו לפני זרבובית חוזרת. ההשפעה המגנה של CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)לאחר מכן הוערך על בסיס כדאיות התא, דליפת לקטט דהידרוגנאז (LDH), [Ca2 פלוס ] I, פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלי (MMP) ואפופטוזיס של התא, מצב האנדרדוקס לאחר הפרפוזיה מחדש הוערך על ידי בדיקת מיני חמצן תגובתיים (ROS), קטלאז ( CAT), גלוטתיון פרוקסידאז (GSH-Px) ויכולת נוגדת חמצון כוללת. בהתבסס על העובדה שחלבון DJ הקשור למחלת פרקינסון-1 משתתף בנוגדי חמצון אנדוגניים ומבצענוירו-פרוטקטיביהשפעות לאחר ischemiastroke, חקרנו את האינטראקציה בין CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)ותקליטן{{0}}. ביטוי DJ-1 זוהה באמצעות ניתוח ELISA ו-Western blot, והטרנסלוקציה של DJ-1 הוערכה באמצעות אימונופלואורסצנטי. התוצאות הראו ש-CDP (0.05, 0.5 ו-5 ug/ml) החליש את מוות תאי PC12, שימר את ה-MMP ואת הומאוסטזיס סידן; מעכב מתח חמצוני, וירידה באפופטוזיס של התא. יתרה מכך, CDP (5 ug/ml) עורר באופן ניכר הפרשה וביטוי של DJ{10}. בסך הכל, התוצאות העלו כי CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)מפעיל אנוירו-פרוטקטיביהשפעה נגד פציעה הנגרמת על ידי OGD/RP על ידי עיכוב מתח חמצוני וויסות מסלול ה-DJ-1

מילות מפתח:Cistanche deserticola, פוליסכרידים, Neuroprotective, חסך/חזרה של חמצן גלוקוז, מתח חמצוניDJ-1

לחץ למוצרי Cistanche UK

1. הקדמה

שבץ איסכמי הוא הגורם השני לתמותה והגורם העיקרי לנכות ארוכת טווח בעולם [1]. מוות כתוצאה משבץ מוחי צפוי לעלות ל-7.8 מיליון בשנת 2030 [2]. בסין, 58 עד 142 לכל 100,000 אנשים מתים משבץ בכל שנה. לפיכך, יש לפתח אסטרטגיות יעילות הפוכה לפציעת איסכמיה-פרפוזיה. עדויות נרחבות תומכות שלחץ חמצוני הוא גורם מרכזי המקדם את ההתפתחות וההתקדמות של אוטם מוחי במהלך רפרפוזיה [3,4]. לכן, לגלות יעילנוירו-פרוטקטיביסוכנים המסוגלים להפחית ROS ולדכא מתח חמצוני משכו עניין רב במחקר. proteinDJ-1 הקשור למחלת פרקינסון מתווך הגנה עצבית על ידי גירוי ביטוי גנים אנטי-אפופטוטי ונוגדי חמצון [4,5]. DJ-1 יכול להיות מועבר למיטוכונדריה על ידי עקה חמצונית וגירוי מיטוגני וניתן להפריש אותו למטריצה ​​החוץ-תאית בתנאים פתולוגיים, כגון סרטן שד, מלנומה ופציעת OGD/RP [6]. יתר על כן, DJ-1 שימושי במיקוד טיפולי לניוון עצבי איסכמי בשל תפקידו הקריטי בנוגדי חמצון [4,7]. בעשר השנים האחרונות, מספר קבוצות אישרו ש-DJ-1 כןנוירו-פרוטקטיביהשפעות על מודלים של איסכמיה מוחית in vivofocal ודגמי OGD/RP in vitro [6-9]. בינתיים, תרופות מסוימות, כולל ציקלוספורין A ונתרן פניל-בוטיראט, מבטלות מוות של תאי עצב באמצעות DJ-1 upregulation inischeמיה שבץ [9,10 ].

Cistancheמדברית, הצמח המיובש האינטגרלי שלCistancheמדבריתYCMa ו-Cistanche tubulosa Wight, מיוצר בעיקר באזורים המדבריים של צפון וצפון מערב סין [11]. C. deserticola הוא אכיל וזוכה לכבוד 'ג'ינסנג של המדבריות'. במרשם דיקור, דלקת משמשת כטיפול במחלת כליות כרונית, אימפוטנציה מינית, אי פוריות נשית, מחלת לוקורריאה, מטרורגיה ועצירות סניליות [12].C. polysaccharides deserticola, מרכיב פעיל עיקרי שבודד מCistanche מדברית. CDP, מווסת את התפקוד החיסוני ואיזון השומנים ומספקים הגנה מפני הזדקנות, חמצון ונזק לכבד. יתר על כן, CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)מונע פגיעה באיסכמיה-פרפוזיה בלב ובכבד [13,14]. מחקרים אחרונים דיווחו כי CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)אינם רעילים[12,15,16], ופיטוכימיקלים אחרים המופקים מ-C. Deserticola, כולל אכינאקוסיד, איזואקטאוזיד, אקטאוזיד וסלידרוסיד, מציגיםנוירו-פרוטקטיביהשפעות [11,12]. עם זאת, השימוש הפוטנציאלי ב-CDP לשיפור נזקי שבץ איסכמי לא דווח עד כה.

במחקר הנוכחי, אנו משערים כי CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)מעכב סטרס חמצוני להגנה עצבית. השפעות ההגנה הפוטנציאליות של CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)נזקי שבץ אינסכמיה נבדקו על ידי שימוש בתאי PC12 שנפצעו ב- OGD/RP. לאחר מכן נחקרו האינטראקציות הבסיסיות הקשורות ל-DJ-1.

2. שיטות

2.1. תרבית תאים ומודל OGD/RP

תאי PC12 תורבו במדיום RPMI 1640 המכיל 10 אחוז FBS ב-37 מעלות בחממה נורמוקסית המכילה 5 אחוז CO2. המדיום הוחלף כל 48 שעות. הוכן מודל OGD/RP. תאי PC12 נשטפו ונחשפו לתמיסת המלח המאוזנת של ארל. לאחר מכן, התאים הועברו לתא אנאירובי המכיל 5 אחוזים CO2 ו-95 אחוזים N2 ב-37 מעלות למשך 4 שעות ולאחר מכן הורשו לעבור חמצן מחדש. במהלך שלב זה, אותו נפח של מצע תרבות נוסף לתאים. לאחר החמצן מחדש, התאים הונחו על חממה נורמוקסית למשך 24 שעות.

2.2. מתן תרופות

CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)נרכש מחברת Yuanye Biological Technology Co., שנגחאי, סין (C23J7Y18405, > 98 אחוז טוהר). Nimodipine, תרופה מונעת קו ראשון לשבץ איסכמיה, שימשה כתרכובת ביקורת חיובית [17-19]. הזרקת נימודיפין הייתה מחברת באייר. התאים חולקו באופן אקראי לשש קבוצות, דהיינו, הביקורת, המחלה (OGD/RP), נימו (5 ug/ml), CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)(0.05 ug/ml), CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)(0.5 ug/ml) ו-CDP (5 ug/ml). נימודיפין ו-CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)נוספו לפני הפרפוזיה מחדש. קבוצת הביקורת תורבה במדיום רגיל והודגרה במצב נורמוקסי.

2.3. כדאיות תאים: מבחני MTT ו-NRU

תאי PC12 (6 × 103 לבאר) נזרעו בצלחת תרבית של 96-באר. התאים טופלו בהתאם לדרישה של כל קבוצה. MTT (Solarbio, סין) נוספה לתאים בריכוז של 5 מ"ג/מ"ל והודגרה במשך 4 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות. Formazan הוא תוצר ההפחתה של succinate dehydrogenase בתאים חיים [20]. DMSO הוסף לפירוק פורמזן כחול שנוצר. ספיגה באורך גל של 490 ננומטר זוהתה עם Microplate Reader (Thermo, ארה"ב) לאחר שהתאים נוערו במשך 10 דקות ב-25 מעלות. תוצאות הכדאיות של התא באו לידי ביטוי כאחוז מקבוצת הביקורת [21].

מבחן ספיגה אדום ניטרלי (NRU) בוצע על פי פרוטוקול שפורסם בעבר [22]. כאשר הסתיימו תקופות רפרפוזיה, אדום ניטרלי (Solarbio, סין) נוסף לתאים בריכוז של 50 ug/ml. התערובת הודגרה למשך 3 שעות. לאחר מכן, התאים נשטפו במהירות עם תמיסה המכילה 0.5 אחוז פורמלדהיד ו-1 אחוז סידן כלורי. התאים נוספו לאחר מכן לתערובת המכילה 1 אחוז חומצה אתית ו-50 אחוז מים-הידרו-אתנול. צלחות נקראו בספיגה של 540 ננומטר לאחר שיעור התאים במשך 20 דקות ב-37 מעלות. התוצאות של כדאיות התא באו לידי ביטוי כאחוז מקבוצת הביקורת.

פוליסכרידים של Cistanche deserticolaשיהיה לךהשפעה נוירו-פרוטקטיבית

2.4. הערכת ציטוטוקסיות

LDH הוא אנזים ציטופלזמי המזרז את החמצון של לקטאט טופירובט. LDH משתחרר במהירות לנוזל החוץ תאי כאשר קרום התא ניזוק. לכן, זיהוי LDH מבוצע בדרך כלל לצורך הערכת ציטוטוקסיות. [23]. ההליך הניסיוני עקב אחר הוראות ערכה מסחריות שסופקו על ידי ערכת בדיקת LDH (Jiancheng, סין). הספיגה של כל דגימה זוהתה ב-440 ננומטר עם קורא microplate. אחוז מוות תאי חושב על ידי שימוש בנוסחה הבאה: כדאיות (אחוז)=(OD Treatment - ODTreatment blank)/(OD Max LDH activity - OD Max LDH activity blank) × 100%.

2.5. זיהוי של Ca2 תוך תאי פלוס ריכוז

הריכוז התוך תאי של Ca2 פלוס נמדד עם Fluo-3/AM [15]. תאי PC12 נשטפו עם PBS שלוש פעמים ולאחר מכן הודגרו עם 2 מיקרומטר פלואו -3/AM (Beyotime, סין) למשך 30 דקות ב-37 מעלות בחושך. התאים נשטפו לאחר מכן עם PBS שלוש פעמים לטיהור צבע חוץ תאי. עוצמת הקרינה של Fluo-3/AM נקבעה במיקרוסקופ קונפוקאלי סריקת לייזר (Olympus, יפן). חבילת התוכנה Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ו-ImageJ שימשו לחישוב ערכי בקנה מידה אפור

2.6. מדידת MMP

JC-1 (5,5',6,6'-Tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethyl-imidacarbocyanine; Beyotime, סין) הוא בדיקה נוחה הרגישה למתח המשמשת בדרך כלל לצביעה תאים והערכת MMP [24]. תאי PC12 נשטפו פעמיים עם PBS קר ולאחר מכן הודגרו בתערובת המכילה 50 אחוז בינוני ו-50 אחוז נוזל עבודה למשך 15 דקות ב-37 מעלות בחושך. לאחר מכן, התערובת נזרקה והוחלפה במדיום טרי. תמונות פלואורסצנטי אדום וירוק נלכדו באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית של לייזר. היחס היחסי של אותות הקרינה האדומים והירוקים שימש למדידת MMP [25]. חבילת תוכנהOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer ו-ImageJ שימשו לחישוב ערכים בקנה מידה אפור.

2.7. מבחן זיהוי אפופטוזיס, Hoechest33342 וניתוח ציטומטריית זרימה

Hoechst33342, צבע קושר DNA, שימש לבדיקת אפופטוזיס בתאים [26]. לאחר פרפוזיה חוזרת, תאי PC12 נשטפו עם PBS שלוש פעמים והודגרו עם Hoechst33342 (Beyotime, סין) בריכוז של 5 ug/ml למשך 15 דקות ב-37 מעלות בחושך. לאחר מכן, התאים נצפו תחת מיקרוסקופ קונפוקאלי סריקת לייזר. תאים תיאפופטוטיים הפגינו פלואורסצנטי כחול אינטנסיבי ועיבוי גרעין. עבור כל ניסוי צביעה, שלושה שדות אקראיים נלכדו וכומתו. Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ו-ImageJ שימשו לחישוב ערכי סולם אפור. אחוזי התאים האפופטוטיים חושבו באמצעות הנוסחה הבאה: כמות אפופטוטית/כמות כוללת × 100 אחוז [27].

2.8. מדידה של יצירת ROS

הבדיקה הפלורסנטית 2',7'- dichlorofluorescein-diacetate (DCFH-DA; Jiancheng, סין) יכולה לחדור לממברנות התא וניתן לעבור הידרוליזה ל-DCFH לא פלואורסצנטי. DCFH מחומצן על ידי ROS תוך תאי ל-DCF פלואורסצנטי [29]. לאחר פרפוזיה חוזרת, התאים נשטפו פעמיים עם PBS ולאחר מכן הודגרו עם DCFH-DA בריכוז סופי של 10 מיקרומטר למשך 45 דקות ב-37 מעלות בחושך. הקרינה נצפתה על ידי ספקטרופוטומטר פלואורסצנטי עם אורך גל עירור של 485 ננומטר ואורך גל פליטה של ​​535 ננומטר.

פוליסכרידים של Cistanche deserticolaשיהיה לךהשפעה נוירו-פרוטקטיבית

2.9. קביעת מדדי מתח חמצוני: CAT, GSH-Px ו-T-AOClevels

התאים גורדו והושעו מחדש ב-PBS. תוספי התאים שהתקבלו עברו צלילים 45 פעמים על קרח ועברו צנטריפוגה במהירות של 1000 r/min למשך 10 דקות ב-4 מעלות. הסופרנטנטים נשמרו והשתמשו לזיהוי [24]. תכולת החלבון הכוללת של סופרנטנט התא נמדדה עם ערכת מגיב לבדיקת חלבון BCA (KeyGEN, סין). הפעילויות של רמות CAT, GSH-Px ו-T-AOC נמדדו בהתאם להוראות היצרן (Jiancheng, סין). הספיגה של כל דגימה זוהתה עם קורא מיקרופלטות.

2.10. מדידת ריכוז DJ חוץ תאי-1

תאי PC12 (6 × 103 לבאר) נזרעו ב96-צלחות תרבית באר. לאחר פרפוזיה מחודשת, הסופרנטנט של התא נאסף ונותח על ידי ערכת DJ-1/PARK-7 ELISA (Raybio, ארה"ב ) לפי הוראת היצרן [9]. הספיגה של כל דגימה זוהתה באמצעות Microplate Reader באורך גל כפול של 450 ננומטר או 540 ננומטר.

2.11. ניתוח כתם מערבי

חלבונים סלולריים חולצו עם חיץ תמוגה קר כקרח לפי הוראות היצרנים (KeyGEN, סין). ריכוז החלבון נקבע עם ערכת מגיב לבדיקת חלבון BCA. כמויות שוות של lysates חלבון (20 ug) מכל קבוצה נפתרו באלקטרופורזה של 12% נתרן דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד ג'ל ולאחר מכן הועברו לממברנת ניטרוצלולוזה. הממברנה הודגרה עם PBS המכיל 5 אחוז חלב רזה למשך שעתיים בטמפרטורת החדר ולאחר מכן נבדקה עם נוגדנים נגד PARK7/DJ-1 (ab76008, Abcam; דילול 1:1000) למשך הלילה ב-4 מעלות. לאחר מכן, הממברנה נשטפה שלוש פעמים עם PBST והודגרה עם נוגדן משני עז נגד ארנב IgG (SA00001-2, Proteintech Group; דילול 1:5000) בטמפרטורת החדר למשך 2 שעות. נוגדן נוגדן - -Tubulin (10759-1-AP, Proteintech Group; דילול 1:1000) נחשב לבקרה. להקות חלבון הוצגו על ידי ריאגנטים מוגברת של כימילומינסנציה (ECL). צפיפות הפס נמדדה עם תוכנת QuantityOne Analysis v.4.6.9.

2.12. ניתוח אימונוציטוכימיה

תאי PC12 נקבעו ב-4 אחוז פרפורמלדהיד למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר לאחר הטיפול מחדש [9]. לאחר הסרת עודף פרפורמלדהיד, התאים הודגרו ב-PBS המכיל 0.3% Triton X-100 למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, התאים נשטפו עם PBS שלוש פעמים לפני שהם הודגרו בסרום עיזים תקין של 5 אחוזים למשך שעה. לאחר מכן התאים הודגרו עם שרשרת אנטי-ATP סינתאז מונוקלונלית של עכבר ארנב (MABS1304, EMD Millipore, דילול 1:200) לצביעה של מיטוכונדריה ולאחר מכן הודגרו עם נוגדן אנטי-PARK7/DJ-1 (דילול 1: 100) לחיטוט של DJ חלבון-1. התאים נשטפו והודגרו עם IgG-Alexa 488 של עיזים (ירוק; A11034, Invitrogen; דילול 1:1000) ו-IgG-Alexa של עיזים נגד עכברים (אדום; A11032; Invitrogen; דילול 1:19000) עבור 1:1000 דקה לבסוף, התאים נשטפו שלוש פעמים עם PBS והותקנו על שקופיות זכוכית עם מדיום הרכבה המכיל DAPI. תמונות אימונופלורסנט הוצגו באמצעות מיקרוסקופ קונפוקאלי סריקת לייזר.

פוליסכרידים של Cistanche deserticolaשיהיה לךהשפעה נוירו-פרוטקטיבית

2.13. נתונים/ניתוח סטטיסטי

כל הערכים הוצגו כממוצע ± SD. המובהקות נקבעה על ידי ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA), ולאחר מכן מבחן רב-השוואה של דנט. p < .05="" נחשב="" כמובהקות="" סטטיסטית.="" נתוני="" ניסויים="" נותחו="" באמצעות="" תוכנה="" סטטיסטית="" spss="">

3. תוצאות

3.1. CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)מעכב נזק לתאים המושרה על ידי OGD/RP

תאי PC12 שנחשפו ל- OGD/RP הראו ירידה משמעותית במספר. צורת התא שונתה וקרום התא נשבר. במבחן MTT, חיוניות התא ב-CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצות ({{0}}.05, 0.5 ו-5 ug/ml) היו 58.91 אחוז ± 5.40 אחוז, 61.13 אחוז ± 3.81 אחוז ו-68.57 אחוז ± 3.24 אחוזים בהתאמה, p < .05="" (איור="" 1a)="" ,="" וכי="" עם="" רכב="" היו="" 51.68="" אחוז="" ±="" 3.89="" אחוז="" .="" ערכים="" אלה="" הצביעו="" על="" כך="">(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)הגן על התאים מפני פציעת OGD/RP והפחתת מוות תאי. יתר על כן, כדאיות התאים בקבוצת Nimo הייתה 77.02 אחוז ± 5.22 אחוז, שזה כמעט שווה לזו ב-5 ug/ml CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצה מטופלת.

ב-NRU assay, חיוניות התא ב-CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצות ({{0}}.05, 0.5 ו-5 ug/ml) היו 52.03 אחוז ± 4.72 אחוז, 58.49 אחוז ± 2.50 אחוז ו-69.17 אחוז ± 3.91 אחוז, בהתאמה, (איור 1B) וזה עם רכב היו 47.14 אחוז ± 2.88 אחוזים. הערכים הצביעו על השפעת ההגנה התלויה בריכוז של CDP.

בניגוד לרכב (44.73 אחוז ± 3.30 אחוז), שחרור LDH הופחת משמעותית ב-CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצות. ב-CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצות ({{0}}.05, 0.5 ו-5 ug/ml), שיעורי דליפת LDH היו 32.41 אחוז ± 3.70 אחוז, 27.13 ± 2.79 אחוז ו-23.13 אחוז ± 4.59 אחוז בהתאמה, p < .01="" (איור="" .1c).="" יתרה="" מכך,="" שיעורי="" דליפת="" ldh="" בקבוצת="" nimo="" היו="" 21.99="" אחוז="" ±="" 4.02="" אחוז,="" שהיה="" שווה="" כמעט="" לזה="" בקבוצה="" שטופלה="" ב-5="" ug/ml="">

3.2. CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)עלייה מוחלשת הנגרמת על ידי OGD/RP של [Ca2 פלוס ]i

רמות Ca2 פלוס התוך תאי בתאי PC12 עלו ל-4146.60 ± 195.97 לאחר פציעת OGD/RP בניגוד לקבוצת הביקורת (373.62 ± 75.69). ה-CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצות ({{0}}.05, 0.5 ו-5ug/ml) יכולות להפחית את רמת Ca2 פלוס התוך-תאי ל-2921.25 ± 222.19, 2015.85 ± 230.53 ו-1768.43 ± 426.12 בהתאמה (A ו-CFig. ). יתרה מכך, רמת Ca2 plus בקבוצה שטופלה ב-5 ug/ml CDP ירדה לרמה דומה לזו בקבוצת Nimo (1591.19 ± 213.21).

3.3. CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)פיזור מוחלש של MMP המושרה על ידי OGD/RP

בהשוואה לקבוצת הביקורת (1.67 ± 0.89), קבוצת הרכב (0.48 ± 0.10) הפגינה יותר קרינת FL ירוקה מאשר FL אדום הקרינה (איור 2B ו-D). היחסים בין קרינת FL אדומה וירוקה ירדו ל-1.11 ± 0.26 ו-1.18 ± 0.16 ב-0.5 ו-5 ug/ml CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצות מטופלות בהתאמה, p < .01.="" הקרינה="" fl="" ירוקה="" ירדה="" באופן="">

3.4. CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)מנע אפופטוזיס תאים המושרה על ידי OGD/RP

תאים המציגים כרומטינים מעובים או גרעינים מפוצלים צוינו כתאים אפופטוטיים [30]. תוצאות בדיקת Hoechst33342 חשפו הופעת גרעינים מעובה לאחר OGD/RP (איור 3A ו-C). עוצמת קרינה גבוהה FL נצפתה בגרעינים בקבוצת הרכב. עוצמת הקרינה FL של הגרעינים נחלשה ב-5 ug/ml CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצה מטופלת. ניתחנו שיעור אפופטוטי בתאי PC12 על ידי ציטומטריה עמיתים באמצעות צביעה כפולה FITC-Annexin V/PI (איור 3B ו-D). לקבוצת הביקורת היה שיעור אפופטוטי תאי של 4.16 אחוז ± 0.24 אחוז, בעוד שבקבוצת הרכב היה 22.98 אחוז ± 0.66 אחוז. בקבוצה שטופלה ב-5 ug/ml CDP, שיעור האפופטוזיס של התא היה 7.86 אחוז ± 1.16 אחוז.

3.5. CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)הצטברות ROS תוך תאית מוחלשת של OGD/RP ומצב חיזור נשמר

ההשפעות של CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)על עקה חמצונית הוכחו על בסיס יצירת ROS, GSH-Px, פעילויות CAT ורמות T-AOC. רמות ה-ROS בתאי PC12 שנפגעו ב- OGD/RP עלו והפכו גבוהות משמעותית מזו בקבוצת הביקורת (p < .01).="" בינתיים,="" רמות="" ה-ros="">(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצות ({{0}}.05, 0.5 ו-5 ug/ml) ירדו באופן תלוי מינון (p < .01;="" איור="" 4a).="" יתרה="" מכך,="" cdp="" גם="" העלה="" משמעותית="" את="" רמות="" ה-t-aoc="" (p="">< .05;="" איור="" 4b),="" cat="" (p="">< .05;="" איור="" 4c)="" ו-="" gsh-px="" (p="">< .05;="" איור="" 4d)="" בהשוואה="" לרכב="" קְבוּצָה.="" הפעילות="" של="" נוגדי="" חמצון="" אנדוגניים="">(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)קבוצות גדלו.

3.6. CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)עורר את הפרשת DJ-1 ושיפר את הביטוי של DJ-1

שינויים בריכוז DJ-1 בסופרנטנט התא זוהו וחשפו את הקשר האפשרי בין DJ-1 ל-CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים). שחרור DJ-1 נצפה מתאי PC12 שנפגעו ב- OGD/RP (איור 5). ל-DJ-1 הוסדרה מוגברת משמעותית ב-CDP של 5 ug/ml(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)בקבוצה שטופלה (38.66 ± 8.44 pg/ml) והפכה לעלייה משמעותית מזו בקבוצת הרכב (18.33 ± 3.80 pg/ml, p < .01) ובקבוצת הביקורת (9.67 ± 3.96 pg/ml, p < .01) .

כדי לחקור את ההשפעות של CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)על הביטוי התוך תאי של DJ-1, מדדנו את רמות החלבון DJ-1 על ידי Western blotting. רמות ביטוי החלבון DJ-1 עלו באופן משמעותי 24 שעות לאחר הפרפוזיה מחדש. לעומת זאת, 5 ug/ml CDP לאחר הטיפול הגביר באופן משמעותי את ביטוי היתר של DJ-1 בהשוואה לקבוצת הרכב (p <.01, איור="">

3.7. CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)טרנסלוקציה משופרת של DJ-1 למיטוכונדריה

תאי PC12 נצבעו בנוגדנים אנטי-PARK7/DJ-1 ואנטי-ATP synthase-שרשרת (איורים 7 ו-8). האנטי-ATP synthase - שרשרת נוגדנים מקשרים עם מיטוכונדריה קומפלקס I, והאנטיגן המקשר היו מקומיים בממברנה הפנימית של המיטוכונדריה. התוצאות גילו ש-DJ-1 עבר לממברנה הפנימית של המיטוכונדריה בעקבות עלבון OGD/RP (איור 8). בינתיים, תוצאות הצביעה הכפולה של DJ-1 והמיטוכונדריה חשפו שה-CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)הקלה על טרנסלוקציה של מיטוכונדריה של DJ- 1 ולוקליזציה משותפת (איור 8). תוצאות אלו הצביעו על אינטראקציה ישירה בין DJ-1 ונוירו-פרוטקטיביהשפעה של CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)(איור 9).

4. דיון

במחקר זה, דיווחנו ממקור ראשון כי CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)מפחית ביעילות את הנזק לתאי PC12 המושרה על ידי OGD/RP באמצעות וויסות העל של חלבון DJ-1. CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)שיפור יכולת התאים, הפחתת הנזק לממברנת התא, שמירה על Ca2 תוך תאי פלוס הומאוסטזיס, מנע אובדן MMP, הפחתת אפופטוזיס של התא, דיכוי עקה חמצונית, קידם ביטוי של DJ-1 והגברת טרנסלוקציה של DJ-1 למיטוכונדריה. DJ-1 היה מעורב לאחרונה ברגולציה שלנוירו-פרוטקטיביהשפעה ושלמות המיטוכונדריה. תוצאות אלו סיפקו הוכחות משכנעות לכךנוירו-פרוטקטיביהשפעות של CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)נגד איסכמיה. יתר על כן, האינטראקציה בין CDP ל-DJ-1 מנגנת אנוירו-פרוטקטיביתפקיד בנזק לתאי PC12 המושרה על ידי OGD/RP. התוצאות שלעיל עשויות לפתח את ההבנה שלנו לגבי ההשפעה המיטיבה של CDP ועשויות לספק מידע שימושי לטיפול בשבץ מוחי בעתיד.

שבץ איסכמיה יוחס לסדרה מורכבת של מנגנונים ביוכימיים ומולקולריים, כולל אקזיטוטוקסיות, עומס יתר של סידן ולחץ חמצוני [31]. OGD/RP נמצא בשימוש נרחב כמודל במבחנה של איסכמיה-פרפוזיה חוזרת ומשמש לחקירה של שינויים נוירולוגיים וביוכימיים. קו התאים PC12 רגיש לפציעת OGD/RP [2]. הוא מציג מספר תכונות ומאפיינים של נוירונים סימפטיים [32] ובכך נעשה שימוש נרחב בשורות תאים נוירונים למחקר הקשור למנגנונים של נזק נוירולוגי עקב שבץ [33,34]. מחקרים רבים הצביעו על כך שלחץ חמצוני ממלא תפקיד חיוני באירוע מוחי ובפגיעה באיסכמיה במוח [35-37]. DJ חלבון הקשור למחלת פרקינסון -1 יכול לעכב ניוון עצבי איסכמי וחוסר תפקוד התנהגותי על ידי הפחתת פגיעה נוירונית בתיווך ROS [7]. לכן, השתמשנו במודל תא PC12 של OGD/RP-פציעה כדי לחקור אתנוירו-פרוטקטיביהשפעה של CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים).

מידת הפגיעה בתאי PC12 המושרה על ידי OGD/RP הוערכה על ידי מבחני שחרור MTT, NRU ו-LDH. ניהול CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)({{0}}.05, 0.5 ו-5 ug/ml) שיפרו את הישרדות התאים והפחיתו את שחרור LDH. ההשפעות המועילות של טיפול CDP כללו גם ירידה בעומס יתר של סידן תוך תאי ושימור של MMP. חריגות של Ca2 בתוספת ריכוז תוך תאי, במיוחד עומס יתר של סידן מיטוכונדריאלי, נקשרו לאפופטוזיס עצבי ומוות הנגרם כתוצאה משבץ איסכמיה [38]. MMP יכול לשקף את היעילות של שרשרת הובלת האלקטרונים וצוין כאינדקס הפרעות פתולוגי של מערכת זו [39]. שתי העליות של Ca2 בתוספת ריכוז תוך תאי ואובדן MMP עלולים להוביל לחוסר יציבות של מבנה הנוירון ובסופו של דבר לגרום לנזק לתאים או למוות של תאים [21,40]. במחקר זה, התוצאות הוכיחו ש-CDP עיכב באופן משמעותי את ה-Ca2 התוך תאי בתוספת עומס יתר והגדיל את רמות ה-MMP בתאי PC12 שנפגעו עם OGD/RP. אפופטוזיס ממלא תפקיד חיוני בפתופיזיולוגיה המורכבת של פגיעה באיסכמיה מוחית-רפרפוזיה. נתונים הולכים וגדלים העלו כי אפופטוזיס היה מעורב בתפקוד לקוי של המיטוכונדריה; פיזור MMP הוא אירוע מוקדם שגורם לאפופטוזיס בתאים [8,39]. אפופטוזיס הוא תהליך של מוות תאים מתוכנת תלוי באנרגיה כדי להיפטר מתאים מיותרים. נוירונים רבים בשבץ איסכמי יעברו אפופטוזיס [41]. במחקר זה, ביצענו צביעת Hoechst33342 ו-Annexin V-FITC/PI כדי לבחון את ההשפעה של CDP על אפופטוזיס [23,28]. התוצאות הראו ש-CDP שומר על שלמות הגרעין ומפחית את קצב האפופטוזיס של התא. כל התוצאות הללו הצביעו על כך שהפעילות האנטי-אפופטוטית של CDP תרמה להשפעה המיטיבה בפגיעה עצבית בתאי PC12.

תאים שעוברים נזק לאיסכמיה שנגרם על ידי הצטברות יתר של ROS, שעלול להוביל להתחמצנות שומנים, נזק לממברנת התא, עומס יתר של סידן וחוסר תפקוד מיטוכונדריאלי, שבסופו של דבר מביא לאפופטוזיס תאים ומוות [42]. צריכת נוגדי חמצון אנדוגניים, כגון SOD, CAT ו-GSH-Px, הצביעה אף היא על ההתרחשות איור 9. מנגנונים אפשריים להשפעות ההגנה של CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)נגד נזק לתאי PC12 המושרה על ידי OGD/RP. טיפול ב-CDP מדכא עקה חמצונית, מייצב את ריכוז Ca2 פלוס ו-MMP, משפר את הביטוי והלוקליזציה של DJ-1 במיטוכונדריה. Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678של עקה חמצונית במהלך איסכמיה-פרפוזיה חוזרת. במחקר זה, קבוצת OGD/RP הראתה עלייה משמעותית ב-ROS וירידה ב-CAT, GSH-Px ו-T-AOC בהשוואה לקבוצה שטופלה ב-5 ug/ml CDP. עם זאת, ראינו ירידה משמעותית בשיעורי יצירת ROS וצריכה של נוגדי חמצון אנדוגניים (CAT, GSH-Px ו-T-AOC) בקבוצות ה-CDP. ההשפעות המועילות בקבוצת 5 ug/ml CDP היו קרובות לאלו שבקבוצת Nimo. התוצאות הצביעו על כך ש-CDP מעכב את יצירת ROS ומשקם את ההגנה האנזימטית של נוגדי חמצון.

DJ-1 הוא תגובת חיזור מפתחנוירו-פרוטקטיביחלבון מעורב בוויסות של עקה חמצונית בשבץ. ההשפעות המועילות של ביטוי יתר של DJ-1 כוללות הישרדות תאים כתוצאה מאיסכמיה-פרפוזיה חוזרת ושימור של תפקוד המיטוכונדריה והמורפולוגיה, כגון זרזת פתיחת נקבוביות חדירות המיטוכונדריה [39,43]. מחקרים קודמים הצביעו על כך שהאפקט המגן של DJ-1 בתאים שנחשפו ל- OGD/RP קשור לתכונות נוגדות החמצון שלו ולטרנסלוקציה של המיטוכונדריה [43-45]. DJ-1 מבצע הגנה עצבית אנדוגנית יעילה בהפחתת פגמים במיטוכונדריה באמצעות טרנסלוקציה [46]. מספר מחקרים הצביעו על כך שלטרנסלוקציה של DJ-1 עשויה להיות השפעה על תנועת המיטוכונדריה, לשפר את האינטראקציה בין תאים לתאים ולקדם תהליכי הישרדות תאים אחרים.

DJ-1 משפיע על מספר תהליכים, כגון נדידת תאים והידבקות, כימוטקסיס, שגשוג ואפופטוזיס, הן במודלים חוץ גופיים והן במודל in vivo [6,9,47,48]. באמצעות מודל השבץ של תאי PC12 פצועים OGD/RP, חקרנו קשר פוטנציאלי בין CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)ותקליטן-1. ביטוי יתר של DJ- 1 זוהה על ידי ELISA ו-Western blotting. יחד עם פונקציה זו, ממצא מרכזי בניסויים הראה שביטוי היתר המשמעותי של DJ-1 התרחש כאשר CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)(5 ug/ml) ניתנה לפני ריפרפוזיה. זה הציע אפשרותנוירו-פרוטקטיביהשפעה על מערכת היחסים של CDP ו-DJ-1. יתרה מכך, ראינו ש-DJ-1 הממוקם במיטוכונדריה בתנאים של OGD/RP וביטוי שופע של DJ-1 הפחית את הרגישות התאית ל-ROS ועכב מתח חמצוני [45]. התוצאות רומזות ש-CDP מווסת ומשפר את DJ-1, שפועל כקשר מולקולרי בין תפקוד לקוי של המיטוכונדריה ולחץ חמצוני ומספק התקדמות של מוות תאי משני הטמון בשבץ [5,47,49-51]. במקביל לייצוב של DJ-1 במיטוכונדריה, CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)הטיפול הגביר את הישרדות התא, ייצב את Ca2 פלוס הומאוסטזיס, השפר את פיזור ה-MMP ומונע אפופטוזיס הקשור למיטוכונדריה [43]. בסך הכל, התוצאות שלנו הצביעו על כך ש-CDP מפעיל רומןנוירו-פרוטקטיבימנגנון בטיפול בשבץ איסכמי.

5. מסקנה

התוצאות שלנו הצביעו על כך ש-CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)מגן על תאי PC12 מפני פגיעה הנגרמת על ידי OGD/RP באמצעות ההשפעות נוגדות החמצון שלו, המיוחסות חלקית למסלול המתווך של DJ-1. השפעות אלו כוללות ירידה בשיעור הנזק לממברנת התא, שימור של הומאוסטזיס [Ca2 plus ] I, שיפור בפיזור MMP, עיכוב של אפופטוזיס של התא, הנחתה של ROS תוך תאי ומודולציה של רמות DJ-1. התוצאות גם הצביעו על כך שהאינטראקציות בין CDP ו-DJ-1 מעצימות את ההגנה העצבית ושומרות על שלמות המיטוכונדריה. לכן, נוירונים פגיעים יכולים להיות מוגנים על ידי CDP(Cistancheמדבריתפוליסכרידים)באמצעות שיפור של ביטוי DJ-1 במהלך שבץ איסכמיה.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק 81360649), תוכנית המפתח הלאומית למדע וטכנולוגיה (מענק 2015BAK45B01), ותוכנית התמיכה למדע וטכנולוגיה של האזור האוטונומי Ningxia Hui (מענק 2016BZ07).

פוליסכרידים של Cistanche deserticolaשיהיה לך השפעה נוירו-פרוטקטיבית

הפניות

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans מגן על נוירונים בקליפת המוח מפני רעילות הנגרמת על ידי היפוקסיה על ידי הורדת הוויסות HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: תוכנית תגובה מהירה לשבץ מוחי בסין, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] ראש הממשלה ג'ורג', GK Steinberg, תרפיה חדשה של שבץ מוחי: פתופיזיולוגיה של שבץ מוחי והשפעתה על טיפולים קליניים, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, NADPH oxidase-related pathophysiology במודלים ניסיוניים של שבץ, Int. י.מול. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, The oxidation states of DJ{{ 1}} להכתיב את גורל התא בתגובה ללחץ חמצוני המופעל על ידי 4-hpr: אוטופגיה או אפופטוזיס? שלט חיזור נוגד חמצון. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 משפר מוות של תאים איסכמיים במבחנה, אולי דרך המסלול המיטוכונדריאלי, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira, et al., DJ{{ 1}} מגן מפני ניוון עצבי הנגרם על ידי איסכמיה מוחית מוקדית וריפרפוזיה בחולדות, J. Cereb. זרימת דם. נפגש. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, תאים עצביים ראשוניים של חולדה חסרי חמצן מפגינים טרנסלוקציה של DJ-1 למיטוכונדריה בריאה: יעד טיפולי חזק לשבץ, CNS Neurosci. ת'ר. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Cyclosporine A טיפול מבטל מוות תאי עצבי המושרה על ידי איסכמיה על ידי שימור שלמות המיטוכונדריה באמצעות וויסות העל של ה-DJ-1 החלבון הקשור למחלת פרקינסון, CNS Neurosci. ת'ר. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu, et al., Pretreatment with sodium Phenylbutyrate Alleviates cerebral ischemia/ פציעת רפרפוזיה על ידי העלאת ויסות DJ-1 חלבון, Front. נוירול. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. סקירת נוירו-פרמקולוגיה, פרונט. פרמקול. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): אחת המתנות הפרמצבטיות הטובות ביותר של הרפואה הסינית המסורתית, פרונט. פרמקול. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Effects and mechanisms of Chinese Herbal Medicine in ameliorating myocardial ischemia-reperfusion injury, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches מגרה מחזור חיזור גלוטתיון תאי על ידי מיני חמצן תגובתיים הנוצרים מנשימה מיטוכונדריה בקרדיומיוציטים H9c2, פארם. ביול. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "ג'ינסנג במדבר": סקירה, Am. ג'יי צ'ין. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistancheמדבריתמרתח מקל על רעילות האשכים המושרה על ידי הידרוקסיאוריאה בעכברים זכרים, האסייתי J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of theנוירו-פרוטקטיביהשפעת נימודיפין על תאי Neuro2a באמצעות מודל לחץ דמוי ניתוח, Int. י.מול. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,מגן עצביהשפעת נוסקפין על פגיעה בחמצן-גלוקוז מוחי, Pharmacol. רפ' 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A מגן מפני פגיעה איסכמית בתרבית ראשונית של נוירונים קליפת המוח של חולדה לאחר מניעת חמצן-גלוקוז לאחר מכן. על ידי reperfusion, J. Neurosci. מילון 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Trans-cinnamaldehyde הגנה על תאי PC12 מפני מניעת חמצן וגלוקוז /reperfusion (OGD/R) פציעה הנגרמת באמצעות אנטי-אפופטוזיס ולחץ אנטי-אוקסידטיבי, Mol. Cell Biochem. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Protective effects of aloin on oxygen and פגיעה הנגרמת כתוצאה ממניעת גלוקוז בתאי PC12, Brain Res. שׁוֹר. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol מגן על תאי PC12 איסכמיים על ידי עיכוב גורמי התעתוק הקשורים להיפוקסיה והגברת רמות אנזימי ההגנה נוגדי החמצון, ACS Chem. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B מגן על תאי PC12 מפני מוות עצבי כתוצאה מחוסר חמצן-גלוקוז על ידי שמירה על הומאוסטזיס מיטוכונדריאלי באמצעות אינדוקציה של תלוי יוביקוויטין פירוק חלבון p53, אירו. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu, et al., Protective effffects of aloperine on neonatal rat primary נוירונים בהיפוקמפוס מתורבתים שנפגעו מחוסר חמצן-גלוקוז ורפרפוזיה, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib מגן על נוירונים קליפת המוח של עכברים מפני נוירוטוקסיות הנגרמת על ידי OGD/R על ידי וויסות עלייה של Bcl-2, Neurochem. מילון 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 מייצב את ביטוי HER2 ושומר על אוכלוסיית תאי הגזע הסרטניים בתאי סרטן השחלות, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Protects RGC-5 cell from H(2)O( 2) עלבונות סטרס חמצוני המושרה על ידי הפעלת PI3K/Akt/eNOS Signaling pathway, Int. י.מול. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, תמציות Dichloromethane של פרופוליס מגינות על התא מפני עקה חמצונית הנגרמת על ידי מניעת חמצן-גלוקוז Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679דרך הפחתת אפופטוזיס, Food Nutr. מילון 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,מגן עצביהשפעת נוירוסרפין באסטרוציטים של חולדה מטופלים בחמצן-גלוקוז במבחנה, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, יוני ליתיום מחלישים אפופטוזיס הנגרמת בסרום בתאי PC12 באמצעות ויסות של איתות Akt/FoxO1 מסלולים, פסיכופרמקולוגיה (ברל) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., תקציר מנהלי מחלות לב ושבץ סטטיסטיקות 2016 עדכון. דו"ח מאגודת הלב האמריקאית, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Regulation of the muscarinic linking ligand sites by nerve growth factor in PC12 phaeochromocytoma cells, Nature 297 (1982) 152-154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanolone attenuates high-glucose-induced apoptosis ומונע כאבים נוירופתיים סוכרתיים ניסיוניים: מחקרים במבחנה ו-in vivo, J. Steroid Biochem. מול. ביול. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol מגן על תאי PC12 מפני אפופטוזיס המושרה על ידי OGD/R באמצעות מסלול האיתות המתווך במיטוכונדריה, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oxidases as מקור ללחץ חמצוני ולמטרה מולקולרית באיסכמיה/פרפוזיה חוזרת. פציעה, J. Mol. Med. (ברל) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, השפעות הגנה על איברים של תמצית יין אדום, רזברטרול, בפגיעות חוזרות בתיווך מתח חמצוני, Oxid. Med. תא לונגב. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Distinct mPTP activation in ischemia-reperfusion: תרומות של Ca2 plus plus , ROS, pH, ופוליפוספט אנאורגני, Cardiovasc. מילון 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, מינון נמוך של אתנול מגן מפני מניעת חמצן-גלוקוז/ פגיעה עצבית הנגרמת על ידי חמצן מחדש על ידי הפעלת מוליכות גדולה , Ca2 plus plus -activated K plus plus Channels In Vitro, Neurosci. שׁוֹר. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, השפעת עיכוב ביקוע מיטוכונדריאלי על מטבוליזם אנרגיה בנוירונים בהיפוקמפוס של חולדה במהלך פציעת איסכמיה/פרפוזיה חוזרת, Neurol. מילון (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun, et al., Protective effffects of Lycium barbarum polysaccharide על נוירונים בהיפוקמפוס בתרבית ראשונית של חולדה יילודים שנפגעו מחוסר חמצן-גלוקוז ורפרפוזיה, J. Mol. היסטול. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptotic mechanisms after cerebral ischemia, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin מגן על אסטרוציטים מפני היפוקסיה במבחנה, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, סידן/קלמודולין חלבון קינאז מווסת את PINK1/Parkin ואת DJ{{3} } מסלולים של מיטופאגיה במהלך אלח דם, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 הוא מתווך חשוב של תגובות סלולריות הנגרמות על ידי היפוקסיה, Proc. נאטל. אקד. Sci. ארה"ב 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Calcium/Calmodulin-dependent protein kinase regulates the PINK1/ מסלולי פרקין ו-DJ-1 של מיטופאגיה במהלך אלח דם, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrosylation מ-DJ-1 ל-PTEN מחליש מוות של תאי עצב במודלים של מחלת פרקינסון, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 מגן מפני מוות תאי בעקבות פגיעה חריפה באיסכמיה-רפרפוזיה לבבית, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} הוא סמן ביולוגי אמין לאבחון סרטן רירית הרחם בסיכון גבוה, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan, et al., DJ-1 מגן על הניגרוסטריאטל ציר מהנוירוטוקסין MPTP על ידי אפנון של מסלול AKT, Proc. נאטל. אקד. Sci. ארה"ב 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, DJ חלבון מחלת פרקינסון-1 הואנוירו-פרוטקטיביעקב לוקליזציה מיטוכונדריאלית המונעת על ידי ציסטאין-סולפינית, Proc. נאטל. אקד. Sci. ארה"ב 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, עיכוב המושרה על ידי היפרגליקמיה של DJ-1 ביטוי פגע ביעילות של הגנת לב איסכמית לאחר התניה בחולדות, Oxid. Med. תא לונגב. (2013) (2013) 564902.