משמעות ניבוי של ביטוי חלבון 8 הקשור למיאלואיד בכליות בחולים עם השמנת יתר או מחלות כליה הקשורות לסוכרת מסוג 2

איש קשר: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 דוא"ל:audrey.hu@wecistanche.com

טאקאשיג'ה קוואברה¹, קיושי מורי1,^2*, Masato Kasahara^1,3, הידקי יוקוי¹, Hirotaka Imamaki¹,אקירה אישי¹, קניצ'י קוגה¹, אקירה סוגווארה⁴, שינג'י יאסונו³, קנג'י אואשימה³, טאקאשי מוריקווה⁵,יושיו קונישי⁵, מאסאהיטו אימנישי⁵, אקירה נישיאמה⁶, Kazuwa Nakao^1,2, מאסאשי מוקויאמה¹

¹המחלקה לרפואה ומדע קליני, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת קיוטו, קיוטו, יפן,

²מרכז חדשנות רפואית, בית הספר לרפואה בוגר אוניברסיטת קיוטו, קיוטו, יפן,

³המחלקה למחקר EBM, המכון לקידום מדע קליני ותרגומי, בית החולים האוניברסיטאי של קיוטו, קיוטו, יפן,

⁴המחלקה לנפרולוגיה, בית החולים הצלב האדום אוסקה, אוסקה, יפן,

חטיבה 5 לנפרולוגיה ויתר לחץ דם, בית החולים הכללי של העיר אוסקה, אוסקה, יפן,

6 המחלקה לפרמקולוגיה, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת קגאווה, קגאווה, יפן

תַקצִיר

רקע ומטרה: דיווחנו שקולטן דמוי אגרה 4 (TLR4) ואחד מהליגנדים האנדוגניים שלו, חלבון 8 הקשור למיאלואיד (MRP8 או S100A8), ממלאים תפקיד חשוב בהתקדמות של נפרופתיה סוכרתית בעכברים. מטרת מחקר זה הייתה להעריך את המשמעות שלכִּליָהביטוי MRP8 בחולים עםהַשׁמָנָה- או הקשור לסוכרת מסוג 2מחלות כליות. שיטות: בנבדקים עם סוכרת, השמנת יתר או בקרה, רמות ביטוי MRP8 mRNA וחלבון בדגימות ביופסיה של הכליה נקבעו על ידי RT-PCR בזמן אמת ואימונוהיסטוכימיה (n=28 ו-65, בהתאמה), והקשר שלהם עם קו הבסיס נותחו פרמטרים פרוגנוסטיים. ההשפעות של MRP8 על ביטויי גנים פרו-דלקתיים נבדקו באמצעות מקרופאגים. תוצאות:כִּליָהרמות ביטוי הגנים והחלבון של MRP8 עלו בקבוצות שמנות או סוכרתיות בהשוואה לקבוצת הביקורת. בין כל הנבדקים, לפי ניתוח רגרסיה ליניארית חד-משתנית, ספירת תאים חיובית של MRP8-גלומרולרית ואזור חיובי MRP8-טובולי-אינטרסטיציאלי בקו הבסיס היו שניהם, בהתאמה, בקורלציה לא רק עם גורמי סיכון ידועים שונים לנפרופתיה סוכרתית (כגון כמו לחץ דם סיסטולי, פרוטאינוריה וקריאטינין בסרום) אך גם עם מידת הגלומרולוסקלרוזיס ופיברוזיס טובולו-אינטרסטיציאלי. גורמים בלתי תלויים המנבאים את רמות החלבון בשתן שנה לאחר מכן נבדקו על ידי ניתוח רב משתני, והם כללו ספירת תאים גלומרולרית MRP8-חיובית (b=0.59, P,0.001), פרוטאינוריה (b=0.37, P=0.002) ולחץ דם סיסטולי (b=0.21, P=0.04) בקו הבסיס, לאחר התאמה לסיכון ידוע גורמים. ביטוי חלבון MRP8 נצפה במקרופאגים חיוביים ל-CD68- ובצינוריות אטרופית. במקרופאגים של עכברים מתורבתים, ביטויי ציטוקינים פרו-דלקתיים הנגרמות על ידי חלבון MRP8 הפעילו גם אינדוקציה אוטומטית של MRP8 באופן תלוי TLR4-.

מסקנות: נראה כי ביטוי גלומרולרי MRP8 קשור להתקדמות של פרוטאינוריה בחולים שמנים או סוכרתיים מסוג 2, אולי על ידי גרימת שינויים דלקתיים במקרופאגים באמצעות איתות TLR4.

השפעות של cistanche: טיפול במחלות כליות

מבוא

דלקת כרונית משחקת תפקיד חשוב בפתוגנזה של סוכרת אוהַשׁמָנָהוהסיבוכים הקרדיווסקולריים שלו [1]. מעורבותם של קולטני חיסון מולדים והליגנדים האנדוגניים בתהליך של דלקת כרונית הייתה מעורבת. חלבון 8 הקשור למיאלואיד (MRP8, הידוע גם בשם S100A8 או קלגרנולין A) זוהה במקור כחלבון ציטופלזמי קושר סידן בנויטרופילים ובמונוציטים [2] וזכה להכרה נרחבת כליגנד אנדוגני חזק לקולטן דמוי אגרה 4 (TLR4). ) במחלות שונות כולל הלם ספטי, הפרעות כלי דם ואוטואימוניות [3,4,5]. לאחרונה הצענו כי איתות MRP8/TLR4 ממלא תפקיד חשוב בהתקדמות הנגרמת על ידי היפרליפידמיה של נפרופתיה סוכרתית [6]. מקרופאגים גלומרולריים ותאי צינור איסוף הם המקורות העיקריים של MRP8 במודלים של עכברים של נפרופתיה סוכרתית [6] ופיברוזיס כליות [7], בהתאמה. רמות הפלזמה של MRP8, היוצרות בדרך כלל קומפלקס הטרודימרי עם שותף מקשר MRP14 בזרם הדם, גדלות בנבדקים שמנים [8,9]. עם זאת, לא היו דיווחים שחקרו את הביטוי הכלייתי של MRP8 בחולים עם השמנת יתר אוסוּג2 סוכרתוהקשר שלו עם פרוגנוזה כלייתית.

מטרת מחקר זה הייתה לקבוע את רמות ביטוי ה-mRNA והחלבון של MRP8 ב-כִּליָהשל חולים יפנים עם נפרופתיה סוכרתית (DN),הַשׁמָנָהגלומרולופתיה קשורה (ORG), תסמונת נפרוטית מינימלית (MCNS) או אי-נורמליות גלומרולרית מינורית (MGA), אשר אובחנו כולם על ידי ביופסיה כלייתית, וכדי להעריך אם ביטוי MRP8 הכלייתי יכול לחזות תוצאות כליות.

Cistanche יכול לשפר את תפקוד הכליות

חומרים ושיטות

אמירה אתית

המחקר האנושי נערך על פי העקרונות המובעים בהצהרת הלסינקי ואושר על ידי הוועדות האתיות לחקר האדם של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת קיוטו ובית החולים הכללי של העיר אוסקה, בהתאמה. כל המשתתפים נתנו הסכמה מדעת בכתב. פרוטוקול המחקר בבעלי חיים אושר על ידי ועדת המחקר לבעלי חיים של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת קיוטו (מספר היתר: Med Kyo 13318). כל הניתוחים בבעלי חיים בוצעו בהרדמת נתרן פנטוברביטל, וכל המאמצים נעשו כדי למזער את הסבל.

מקצועות לימוד

חולים חלבוניים עםהַשׁמָנָהאו סוכרת מסוג 2 שעברו ביופסיה כלייתית נרשמו למחקר זה. חולים עם מחלות זיהומיות, סרטן, מחלת כבד או מחלת קולגן לא נכללו. פרוטאינוריה הוגדרה כחלבון בשתן גדול מ-0.5 גרם/גרם קריאטינין או אלבומין בשתן גדול מ-300 מ"ג/גרם קריאטינין לפחות בשתי מדידות רצופות.הַשׁמָנָההוגדר כאינדקס מסת גוף (BMI) גדול מ-25.0 (ק"ג/מ"ר²). סוכרת מסוג 2 אובחנה בהתאם לקריטריונים של ארגון הבריאות העולמי. מדידות ביוכימיות בכניסה לביופסיה כליה שימשו כמאפיינים בסיסיים לניתוח חתך. קצב סינון גלומרולרי משוער (eGFR) חושב באמצעות משוואת חיזוי פשוטה שהוצעה על ידי האגודה היפנית לנפרולוגיה: eGFR (ml/min/1.73 m)²)=1946 [גיל (שנים)]20.287 6 [קריאטינין בסרום (מ"ג perdl)]21.094 60.739 (עבור נשים), שהוא שינוי מקומי מאומת של MDRD [ 10]. ריכוזי הקראטינין בסרום נמדדו בשיטה אנזימטית.

עבור אימונוהיסטוכימיה, נותחו 65 חולים יפנים שעברו ביופסיה כלייתית במחלקה לרפואה ומדע קליני, בית החולים האוניברסיטאי בקיוטו בין השנים 2000 ל-2011. אבחנות שהוכחו ביופסיה של כל החולים במהלך תקופה זו מופיעות בטבלה S1 בקובץ S1. הנבדקים שנבדקו בעבודה זו כללו DN (n=19), ORG (n=10) ונבדקים שאינם שמנים, ללא סוכרת, אשר אובחנו כ-MGA(n=19) או MCNS (n=17). חלק מהמקרים בקטגוריות אלה לא נכללו מכיוון ששאריות הדגימות הזמינות הכילו פחות מ-10 גלומרולי. ההגדרה של DN כללה (1) משך יותר מ-5 שנים לאחר הופעת הסוכרת, (2) קיום של מיקרו-או מאקרו-אלבומינוריה, (3) שינויים היסטופתולוגיים תואמים ל-DN כגון עיבוי קרום הבסיס הגלומרולרי, התרחבות מסנגיאלית, נודולרית. טרשת (גבשושיות Kimmelstiel-Wilson) ו/או היאלינוזה עורקית, ו- (4) הרחקה של סיבות אחרות להפרעות כליות [11]. ORG הוגדר מורפולוגית כגלומרולוסקלרוזיס סגמנטלית מוקדית ו/או גלומרולומגליה בנבדקים עם שניהםהַשׁמָנָהופרוטאינוריה, שהגדרותיה תוארו לעיל [12,13].

עבור ניתוח ביטוי mRNA, לא נכללו דגימות באיכות נמוכה, שבהן רמות 18S ריבוזומי RNA (rRNA) היו נמוכות מגבול הרגישות לזיהוי על ידי RT-PCR בזמן אמת. הנבדקים שנרשמו כללו 22 חולי סוכרת מסוג 2 שעברו ביופסיה כלייתית בבית החולים הכללי של אוסקה סיטי בין השנים 2000-2010, ו-6 נבדקים ללא סוכרת, אשר עברו ביופסיה מוכחת של MGA.

טבלאות 1 ו-2 מסכמות את המאפיינים הקליניים הבסיסיים של החולים שנבדקו על ידי ניתוח אימונוהיסטוכימי או ביטוי גנים, בהתאמה. עבור מיקרוסקופ אור, דגימות הרקמה עובדו על פי נהלים סטנדרטיים. קטעים נצבעו בהמטוקסילין-אאוזין, חומצה מחזורית-שיף, כסף מתנמין חומצה מחזורית או טריכרום מאסון (איור S1). היחסים בין מספר הגלומרולי עם טרשת גלובלית בין הגלומרולי הכוללת והאזורים היחסיים של פיברוזיס tubulointerstitial הוערכו באופן עצמאי על ידי שני פתולוגים שלא מודעים לאבחנה ולנתונים קליניים.

השפעות של cistanche: טיפול במחלות כליות

הגדרה של תוצאות כליות

שני האינדיקטורים הפרוגנוסטיים הבאים נבדקו על ידי ניתוחי רגרסיה ליניארית ורגרסיה לוגיסטית, בהתאמה: (1) מידת הפרוטאוריה שנמדדה שנה אחת לאחר ביופסיה, ו-(2) אירוע כלייתי המוגדר כעלייה השנתית בקריאטינין בסרום ב-.50 אחוז. מקו הבסיס או התחלת דיאליזה כרונית.

אימונוהיסטוכימיה

אימונוהיסטוכימיה של MRP8 ו-CD68 בוצעה באמצעותכִּליָהקטעים (עובי 4 מ"מ) קבועים ב-4 אחוז פרפורמלדהיד מאוחסן. לאחר שליפת אנטיגן על ידי חיץ ציטראט, קטעי כליה הודגרו עם 10 אחוז סרום עיזים, ואחריו עכבר אנטי-אנושי MRP8 (1:100; BMA biomedicals, Augst, שוויץ)[14] או נוגדנים נגד CD68 עכברים (1:50) ; DAKO, Ely, בריטניה), בהתאמה. נוגדנים ראשוניים הוצגו עם נוגדן משני מצומד חזרת פרוקסידאז ו-3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride (Dako USA, Carpinteria, CA). גרעינים נצבעו נגדי בהמטוקסילין. תאים חיוביים ל-MRP8-נספרו ביותר מ-10 גלומרולים, ואזור חיובי ל-MRP8- ב-tubulointerstitium נמדד כמותית כדי לקבל ממוצע עבור כל נבדק באמצעות תוכנת MetaMorph 7.5 (Molecular Devices, Downingtown, PA, ארה"ב ). שילוב של תאים חיוביים של CD68- ו-MRP8- הוערך עם קטעים סדרתיים. לא היה אות MRP8 או CD68 בבקרות שליליות שנצבעו ללא נוגדן ראשון (איור S2). על ידי דגירה מוקדמת של נוגדן אנטי-MRP8 עם עודף של 20 מולאריים של חלבון אנושי רקומביננטי MRP8 (Life Technologies, Carlsbad, CA, ארה"ב) ב-4uC למשך הלילה, הצביעה הופחתה במידה ניכרת, אם לא לחלוטין, ותומכת עוד יותר בספציפיות של הנוגדן (איור S3) .

Cistanche לטיפול בכליות

הערכת ביטוי mRNA

קָפוּאכִּליָהחלקים הופרדו לרקמות גלומרולי ו-nonglomerulus על ידי מיקרו-נתיחה של לכידת לייזר (LM200; אולימפוס, טוקיו, יפן) כפי שתואר קודם [15]. סך ה-RNA הופק עם ערכת RNeasy mini (Qiagen, טוקיו, יפן). רמות הביטוי של mRNA נקבעו על ידי TaqMan בזמן אמת PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, ארה"ב) [16,17]. רמות הביטוי של כל הגנים נורמלו על ידי רמות 18S rRNA (בקרה פנימית). ראה טבלה S2 בקובץ S1 עבור רצפי פריימר ובדיקה. אוקריוטי 18S rRNA זוהה עם ריאגנטים טרום-פיתוח TaqMan Assay (Applied Biosystems).

טבלה 1. מאפיינים קליניים בסיסיים של חולים בביופסיה כלייתית אשר נותחו עבור ביטוי חלבון MRP8 על ידי אימונוהיסטוכימיה.

MGA: אי תקינות גלומרולרית מינורית, MCNS: תסמונת נפרוטית בשינוי מינימלי, ORG:הַשׁמָנָהגלומרולופתיה קשורה, DN: נפרופתיה סוכרתית, BMI: אינדקס מסת הגוף, BUN: חנקן אוריאה בדם, CRP: חלבון C-reactive. נתונים הם אמצעים 6 SD. *ההבדלים הכוללים בין קבוצות MGA, MCNS, ORG ו-DN הושוו על ידי ANOVA.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t001

טיפול MRP8 במקרופאגים

מקרופאגים שמקורם במח עצם נוצרו מעכברי נוקאאוט מסוג פרא או TLR4 (KO) [18] על רקע גנטי C57BL/6J (Oriental BioService, קיוטו, יפן) כפי שתואר קודם [6]. בקצרה, בעקבות תמוגה של תאי דם אדומים, תאי מח עצם הושעו מחדש במדיום המכיל 20 אחוז סרום עגל עוברי ו-50 ננוגרם/מ"ל רקומביננטי של גורם מגרה של מושבה מקרופאגים אנושיים (Peprotech, Rocky Hill, NJ, ארה"ב), ותופחו ב- 37uC באווירה של 5 אחוז CO2. ביום 7, מקרופאגים הודגרו עם MRP8 של עכבר רקומביננטי (אבנובה, טייפה, טייוואן) או כלי רכב למשך 4 שעות. Polymyxin B (25 מ"ג/מ"ל, NacalaiTesque, קיוטו, יפן) נוספה לכל באר כדי למזער את זיהום האנדוטוקסין כמתואר קודם [3,19]. Noendotoxin זוהה בכל ריכוז של MRP8 שנבדק לאחר הדגירה עם 25 מ"ג/מ"ל של polymyxin B על ידי ToxinSensorChromogenic LAL Endotoxin Assay Kit (GenScript, Piscataway, NJ, ארה"ב). RNA הכולל מתאי חולץ עם RNeasy MiniKit, ורמות ביטוי mRNA של אינטרלוקין-1 בטא (IL-1b), גורם נמק גידול אלפא (TNFa) ו-MRP8 נקבעו על ידי TaqMan בזמן אמת RT-PCR. רמות הביטוי של כל הגנים נורמלו על ידי רמות GAPDH של מכרסמים (בקרה פנימית, ריאגנטים מפותחים מראש של TaqMan Assay). רצפי פריימר ו-Probe עבור PCR בזמן אמת מופיעים בטבלה S2 בקובץ S1.

ניתוח סטטיסטי

הנתונים מבוטאים כאמצעי 6 SD, או ממוצע רווח סמך של 695 אחוז (CI) כאשר מתאים. לצורך ההשוואה בין ארבע קבוצות, נעשה שימוש ב-ANOVA חד-כיווני או דו-כיווני עם ניתוח פוסט-הוק של Bonferroni, ומשתנים קטגוריים הושוו באמצעות מבחן x2. מבחן ה-t הבלתי מזווג של התלמיד יושם להשוואה בין שתי קבוצות לפי הצורך. מקדמי המתאם של Spearman נאמדו כדי לקבוע קשרים בין שני משתנים. כדי לבחון את ההשפעות של משתנים בסיסיים הקובעים את מידת הביטוי של MRP8 גלומרולרי או tubulointerstitial או רמות חלבון בשתן שנה לאחר הביופסיה, בוצעו ניתוחי רגרסיה ליניארית חד משתנים ורב משתנים. ניתוח רגרסיה לוגיסטית שימש לניתוח משתנים מסבירים המנבאים את התרחשותם של אירועים כלייתיים. כל הנתונים נותחו באמצעות תוכנת StatView 5.0 (SAS InstituteInc., Cary, NC, ארה"ב). ערכי P,0.05 נחשבו מובהקים סטטיסטית.

השפעות של cistanche: טיפול במחלות כליות

תוצאות

השווינו רמות ביטוי חלבון MRP8 ב-כִּליָהבקרב קבוצות DN, ORG, וקבוצות לא-שמנת יתר, ללא סוכרת (MGA ו-CNS). ניתוח אימונוהיסטוכימי גילה שגם ספירת תאים חיובית של MRP 8-גלומרולרית (איור 1A) וגם אזור חיובי MRP8- של tubulointerstitial (איור 1B) ב-DN היו גדולים משמעותית מאלו בקבוצות אחרות כולל MGA, MCNS, ו-ORG (P<0.01). org="" subjects="" also="" showed="" a="" tendency="" of="" elevated="" mrp8expression="" compared="" to="" mga="" and="" mcns="" (fig.="" 1a,="" 1b).="" furthermore,="" glomerular="" mrp8="" mrna="" expression="" levels="" in="" dn="" subjects="" were="" significantly="" higher="" compared="" to="" non-dm="" control="" subjects="" (p,0.01,="" fig.="" 1c).="" in="" non-glomerulus="" tissues,="" mrp8mrna="" expression="" levels="" were="" much="" lower="" than="" those="" in="" glomeruli,="" both="" in="" non-dm="" and="" dm="" groups.="" abundant="" mrp8="" protein="" expression="" in="" the="" tubulointerstitium="" of="" dn="" cases="" was="" not="" clearly="" reflected="" into="" increased="" mrna="" expression,="" which="" may="" be="" partly="" caused="" by="" deposition="" of="" blood-derived="" proteins="" in="" the="" tubulointerstitium="" as="" discussed="" in="" the="" next="" section.="" as="" shown="" in="" representative="" photos="" (fig.="" 1d–g,="" see="" fig.="" s4="" in="" detail),="" renal="" biopsy="" samples="" from="" mga="" and="" mcns="" subjects="" showed="" few="" mrp8-positive="" cells="" in="" glomeruli="" (fig.="" 1d,="" 1e="" and="" fig.="" s4).="" in="" org="" subjects,="" somemrp8-positive="" cells="" appeared="" in="" glomeruli="" and="" tubulointerstitium(fig.="" 1f="" and="" fig.="" s4).="" in="" dn="" subjects,="" a="" marked="" increase="" of="" mrp8-expressing="" cells="" in="" glomeruli="" and="" significant="" expansion="" of="" mrp8-positive="" areas="" in="" the="" tubulointerstitium="" were="" observed="" in="" a="" focal="" manner="" (fig.="" 1g="" and="" fig.="" s4).="" of="" note,="" mrp8-positive="" cells="" were="" absent="" in="" nodular="" sclerosing="" lesions="" of="" diabetic="" glomeruli="" (fig.="" s4:dn="" case="" 2,="" 3)="" as="" described="" previously="" for="" sclerotic="" lesions="" in="" anca-associated="" glomerulonephritis="" [20].="" paired="" immunohistochemistry="" for="" cd68="" and="" mrp8="" in="" serial="" sections="" suggested="" thatmrp8="" signals="" were,="" at="" least="" in="" part,="" observed="" in="" macrophages="" expressing="" cd68="" (fig.="" 2),="" as="" we="" reported="" in="" a="" mouse="" model="" of="" diabetic="" nephropathy="" [6].="" besides,="" focally="" injured="" atrophic="" tubular="" epithelial="" cells="" also="" strongly="" expressed="" mrp8,="" which="" were="" surrounded="" by="" mrp8(+)-,="" cd68(+)-positive="" macrophages="" (fig.="" 2,="" fig="" s4:="" dn="" case="" 3-5).="" in="" the="" cases="" with="" nephrotic="" range="" proteinuria,="" mrp8="" staining="" was="" also="" observed="" along="" brush="" borders="" of="" proximal="" tubules="" both="" in="" mcns="" and="" dn="" cases="" (fig.="" s4).="" since="" the="" sample="" number="" of="" mrna="" expression="" was="" too="" small="" for="" multivariate="" analysis,="" the="" following="" analyses="" were="" performed="" using="" data="" from="" patients="" studied="" by="">

טבלה 2. מאפיינים קליניים בסיסיים של חולים בביופסיה כלייתית אשר נותחו עבור ביטוי MRP8 mRNA על ידי RT-PCR בזמן אמת.

האסוציאציות ביןכִּליָהאותות MRP8 ופרמטרים קליניים בסיסיים בזמן הביופסיה הכלייתית נותחו בחתך רוחב (טבלה 3). על ידי ניתוח חד-משתני, ביטוי חלבון MRP8 גלומרולרי ו/או tubulointerstitial נמצא בקורלציה מובהקת לגיל, ללחץ דם סיסטולי ודיאסטולי, חלבון בשתן, רמות סרום של קריאטינין, BUN ו-HDL כולסטרול, eGFR, והיקף גלומרולוסקלרוזיס ופיברוזיס טובולו-בין-מערכתי. פרמטרים אלו נבדקו עוד על ידי ניתוח רב משתני לאחר אי הכללה של לחץ דם דיאסטולי, eGFR ו-BUN בגלל קולינאריות. אחוז הפיברוזיס tubulointerstitial היה בקורלציה עצמאית עם אותות glomerularMRP8 (b=0.62, מותאם P=0.02) ואותות tubulointerstitialMRP8 (b=0.85, מותאם P ,0.001), בהתאמה. בנוסף, אותות MRP8 tubulointerstitial היו גם בקורלציה עצמאית עם פרוטאינוריה בסיסית (b=0.20, מותאם P=0.01). ניתוחי עלילה מפוזרים בין אותות MRP8 בגלומרולי או tubulointerstitium ופרמטרים קליניים הצביעו על כך שלקבוצת MCNS דפוס הפצה מובהק מקבוצות אחרות, במיוחד לגבי רמות חלבון בשתן ורמות כולסטרול LDL בסרום (איור S5A–D, S6A–D). אי הכללה של קבוצת MCNS שיפרה את המתאם בין אותות MRP8 ורמות חלבון בשתן או רמות LDL-כולסטרול בסרום (איור S5E-F, S6E-F). לפיכך, ביצענו תת-אנליזה שלא כללה חולי MCNS ומצאנו שחלבון השתן היה גורם בלתי תלוי בקורלציה לאותות glomerularMRP8 על ידי ניתוח רב-משתני (טבלה 4; b=0.36, מותאם P=0.03 ).

לאחר מכן, ביצענו ניתוחי רגרסיה ליניארית או רגרסיה לוגיסטית כדי לזהות גורמים מסבירים המנבאים תוצאות כליות שהיו היקף הפרוטאין שנה לאחר מכן ואירוע כלייתי בתוך שנה. מאחר שהיה קשר טוב בין אותות MRP8 גלומרולרי ו-tubulointerstitial (איור S7; R=0.67,P,0.001), פרמטרים אלה נרשמו לחלופין בניתוחים נוספים . הערכנו את הקשר בין פרמטרים בסיסיים לחלבון בשתן שנה אחת לאחר ביופסיה כלייתית על ידי ניתוח רגרסיה מרובה. כפי שמוצג בטבלה 5, אות MRP8 גלומרולרי (b=0.59, מותאם P,0.001) היה גורם מנבא למידת הפרוטאוריה שנה לאחר מכן, כמו גם לחץ הדם הסיסטולי הבסיסי (b {{13} היו. פרמטרים אלו היו בלתי תלויים בגורמי סיכון ידועים אחרים של נפרופתיה סוכרתית, כולל הפרעה בתפקוד הכלייתי (קריאטינין בסרום) והיקף הטרשת העולמית ופיברוזיס tubulointerstitial [11,21-24]. מצד שני, אות MRP8 tubulointerstitial (b=0.34, P=0.09 מותאם) לא היה גורם מנבא בלתי תלוי לרמות חלבון בשתן שנה לאחר מכן. אירועים כלייתיים התרחשו ב-7 חולים (6 ב-DN ו-1 במקרים של ORG) בתוך שנה לאחר ביופסיית כליות. לפי ניתוח חד-משתני, לא רק מידת הגלומרולוסקלרוזיס ופיברוזיס tubulointerstitial, ואותות MRP8 glomerular ו- tubulointerstitial, אלא גם לחץ דם, הפרעה בתפקוד הכלייתי ורמות חלבון בשתן בקו הבסיס היו גורמים מנבאים משמעותיים להתרחשות של אירועים כלייתיים. עם זאת, על ידי ניתוח רב-משתני, המשתנים המשתנים שלהם בוטלו זה בזה (טבלה S3 בקובץ S1), ככל הנראה בשל מתאמים גבוהים בין פרמטרים אלה.

לבסוף, בחנו את העוצמה של MRP8 כליגנד אנדוגני עבור TLR4 באמצעות מקרופאגים מתורבתים. במקרופאגים שמקורם במח עצם מעכברים מסוג פרא, חלבון MRP8 גרם לוויסות עלייה של גנים מעוררי דלקת של ציטוקינים כמו IL-1b וTNFa וגם עורר אינדוקציה אוטומטית של MRP8, באופן תלוי מינון בין 1{{ 15}}–1000 ננוגרם/מ"ל. השפעות אלו של MRP8 דוכאו בערך בשני שליש במקרופאגים שהתקבלו מעכברי TLR4 KO (P,0.01) (איור 3).

איור 1. ניתוחים אימונוהיסטוכימיים ו-mRNA עבור MRP8 בכִּליָהדגימות ביופסיה. כימות של MRP{{0}}ספירת תאים חיובית של גלומרולרי (A) ו-MRP של tubulointerstitial8-אזור חיובי (B). ביטוי mRNA של MRP8 בשברים גלומרולריים ולא גלומרוריים (C). סורגים פתוחים: בקרות ללא השמנת יתר, ללא סוכרת שהם MGA או MCNS, סורגים סגורים: ORG או DN (A–C). תמונות מייצגות של קבוצות MGA, MCNS, ORG ו-DN (D-G). MGA: אי תקינות גלומרולרית מינורית, MCNS: תסמונת נפרוטית מינימלית, ORG: גלומרולופתיה הקשורה להשמנה, DN: נפרופתיה סוכרתית. *P,0.01.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g001

דִיוּן

המחקר הנוכחי הוכיח ש-MRP8 מתבטא בשפע ב-glomeruli וב-tubulointerstitium של חולים עם DNas בהשוואה ל-ORG ולשליטה ללא השמנת יתר ללא סוכרת (MGAו-MCNS). יתר על כן, בנבדקי ORG, רמות הביטוי MRP8 נטו להיות גבוהות יותר מנבדקי MGA או MCNS. בחקירת חתך בסיסית, הכוללת את כל הנבדקים, על ידי ניתוח רגרסיה ליניארית חד-משתנית, ספירת תאים גלומרולרית8-חיובית ואזור MRP8-חיובי של tubulointerstitial היו שניהם, בהתאמה, בקורלציה לא רק עם גורמי סיכון ידועים שונים עבור נפרופתיה סוכרתית (כגון לחץ דם סיסטולי, פרוטאינוריה וקריאטינין בסרום) אך גם עם היקף גלומרולוסקלרוזיס ופיברוזיס טובולו-אינטרסטיציאלי. לפי ניתוח רב-משתני, אזור MRP8-חיובי של tubulointerstitial נמצא בקורלציה מובהקת עם פרוטאינוריה ופיברוזיס tubulointerstitial. ספירת תאים חיובית של MRP8-גלומרולרית הייתה בקורלציה מובהקת עם פיברוזיס tubulointerstitial בניתוח הראשוני, ועם פרוטאינוריה בתת-אנליזה ללא קבוצת MCNS. אימונוהיסטוכימיה הצביעה על כך ש-MRP8 בא לידי ביטוי, לפחות חלקית, על ידי מקרופאגים המבטאים CD68( פלוס ) וצינוריות אטרופית. ממצאים אלו מעלים את האפשרות שכִּליָהאותות MRP8 ב- glomeruli או tubulointerstitium עשויים לשמש כסמנים חדשים של נפרופתיה סוכרתית.

איור 2. לוקליזציה של ביטוי חלבון CD68 ו-MRP8 בחתכים סדרתיים של מקרי נפרופתיה סוכרתית. ביטוי של ביטוי CD68(A,B) ו-MRP8 (C,D) בדגימות כליות זוגיות (A ו-C, orB ו-D). החצים מציינים מיקום של CD68 ו-MRP8 signals.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g002

במחקר הפרוגנוסטי, ניתוח רב-משתני גילה שרמות חלבון בשתן בשנה לאחר ביופסיה כלייתית היו קשורות באופן עצמאי לספירת תאים גלומרולרית MRP 8-חיובית, חלבון בשתן ולחץ דם סיסטולי בקו הבסיס. יש לציין, ביטוי MRP8 גלומרולרי הראה את המתאם החזק ביותר עם חלבון שתן שנה לאחר מכן (b= 0.87), אפילו חזק יותר מחלבון שתן בסיס (b=0.78), על ידי ניתוח חד-משתני. חלקית זה נובע מכך שהביטוי הגלומרולרי של MRP8 אינו מוגבר במידה רבה בצורות 'שפירות' של פרוטאינוריה, כמו אלו שנצפו בחולי MCNS, שרמות הפרוטאוריה שלהם גבוהות ביותר באבחון באמצעות ביופסיה כלייתית, אך בדרך כלל נפתרות תוך שנה לאחר התחלת טיפול מדכא חיסון. ממצאים אלו מצביעים על כך שביטוי גלומרולרי של MRP8 עשוי להיות בעל אופי ניבוי ייחודי כסמן מחלה, שאינו ניתן להחלפה על ידי פרוטאינוריה בסיסית או ניתוח פתולוגי שגרתי הערכת גלומרולוסקלרוזיס ופיברוזיס tubulointerstitial. יתרה מכך, אנו משערים שביטוי MRP8 גלומרולרי אינו סמן פשוט או צופה מהצד אלא שחקן פעיל בפציעה גלומרולרית כפי שנדון להלן.

מקדם הקביעה (R2) שחושב עם פרמטרים מסבירים שנכללו בניתוח רגרסיה מרובה היה 0.52* ו-0.74#, בהתאמה. y, שנים; לחץ דם, לחץ דם; gCr, g קריאטינין; T-chol, כולסטרול כולל; HDL-Chol, HDL כולסטרול; LDL-chol, LDL כולסטרול; GS, גלומרולוסקלרוזיס; TI, tubulointerstitial.doi:10.1371/journal.pone.0088942.t003

טבלה 4. תת-אנליזה של הקשר בין פרמטרים קליניים בסיסיים לאותות MRP8, לאחר אי הכללה של קבוצת MCNS.

טבלה 5. ניתוח רגרסיה מרובה לזיהוי גורמים המנבאים רמות חלבון בשתן שנה לאחר ביופסיית כליות

איור 3. השפעות של MRP8 על מקרופאגים שמקורם במח עצם. מקרופאגים שמקורם במח עצם (BMDM) עוררו עם MRP8 של עכבר רקומביננטי למשך 4 שעות. פסי שגיאה מציינים 95 אחוז CI וניתוחים סטטיסטיים בוצעו עם ערכים שעברו טרנספורמציה ביומן. ANOVA דו-כיווני חשף השפעות משמעותיות של גנוטיפים, ריכוזי MRP8 והאינטראקציות שלהם לביטוי של כל 3 הגנים (P,0.001 לכל ההשוואות). n=4. WT, פראי; KO, נוקאאוט; IL-1b, interleukin 1 beta; TNFa, tumor necrosis factor-alpha. *P,0.01 בין ריכוזים שונים, #P,0.01 בקרב genotypes.doi:10.1371/journal.pone.0088942.g003

בניסיון נוסף של מחקר אורך, ניתוח רגרסיה לוגיסטית לא הצליח לגלות מנבאים בלתי תלויים להתרחשות של אירוע כליות בתוך שנה. אנו משערים שהסיבה לכך היא חלקית כי ביטוי MRP8 tubulointerstitial ופיברוזיס tubulointerstitial היו שני מנבאים חזקים לאירוע כליות באנליזה חד משתנית, אך המשמעות שלהם בוטלה זו על ידי ניתוח רב משתנים. שני הפרמטרים הללו הראו מתאם חזק (R=0.68, P,0.001) (איור S8), מה שמרמז ששני הפרמטרים הללו עשויים להיות שווים לחיזוי אירועים כלייתיים. ואכן, ביטוי MRP8 אינטרסטיציאלי הראה דפוס דומה למדי לפיברוזיס אינטרסטיציאלי שהוערך על ידי צביעת טריכרום מאסון. כמות MRP8 הביניים תלויה במידה רבה באותות החיוביים בצינוריות אטרופית ולא באלו שבמקרופאגים, שתכונתם שונה מזו של MRP8 גלומרולרית בהתפלגות נקודתית. יתר על כן, גודל מדגם קטן, תקופת תצפית קצרה ומעט נבדקים שפיתחו אירועים כלייתיים עשויים היו להפחית את כוח הזיהוי. מכיוון שביטוי MRP8 בתאי אפיתל צינורי ממלא תפקיד סיבתי בהתקדמות של דלקת tubulointerstitial במודל עכבר של פיברוזיס כליות [7], יהיה צורך בניתוח נוסף כדי להבהיר את תפקידו של tubulointerstitial MRP8 ב-DN.

בהתאם למחקר הקודם שלנו [6], MRP8 mRNA היה מווסת בעיקר בחלק הגלומרולרי של נבדקי DN אנושיים בהשוואה לנבדקי ביקורת עם MGA. מצד שני, ביטוי חלבון MRP8 נצפה לא רק ב- glomerulus אלא גם ב- tubulointerstitium. בהקשר זה, יש לציין כי היו שני דפוסים ברורים של צביעת MRP8 ב-tubulointerstitium של DN. אחד מהם היה צביעה אינטנסיבית ומוקדית בצינוריות אטרופית חמורה. השני היה צביעה קלה שהופצה לאורך גבול המברשת של צינוריות פרוקסימליות, שנמצאה גם ב-ORG וב-MCNS. האותות האחרונים מייצגים ככל הנראה חלבון MRP8 שמקורו בדם ונספג מחדש על ידי צינוריות פרוקסימליות, אשר לא אמורות להיות מלווה בביטוי מוגבר של MRP8 mRNA. בנוגע לחלבונים שאינם MRP8, אנו ואחרים דיווחנו לאחרונה על תופעות דומות של זיהוי חלבון אימונריאקטיבי בצינוריות הפרוקסימליות הנגרמות על ידי ספיגה חוזרת אך לא על ידי סינתזה כלייתית [25,26]. מצד שני, מאחר שמעט מכתים MRP8 נותרו בבדיקת ספיגת נוגדנים, במיוחד בנגעים אקסודטיביים גלומרולריים ובנגעים פיברוטיים עם צלקות חמורות סביב צינוריות אטרופית, לא ניתן לשלול לחלוטין את נוכחותם של אותות לא ספציפיים (איור S3).

אותות גלומרולרי MRP8 הראו בעיקר דפוסי פיסוק בנבדקי DN (איור 1, איור S4). מכיוון ששני CD68 ו-MRP8 זוהו על ידי נוגדנים חד שבטיים של עכברים, הלוקליזציה של מולקולות אלו הוערכה על ידי חתכים סדרתיים, ולא על ידי צביעה חיסונית כפולה. דפוסי צביעה של MRP8 היו תואמים לאלה בהפרעות כליות דלקתיות אחרות כולל IgAnephritis [27], גלומרולונפריטיס ממברנופרוליפרטיבי [14], וגלומרולונפריטיס הקשורה ל-ANCA [20], שבהן הוצעו מקרופאגים כמקור עיקרי ל-MRP8, כפי שדיווחנו ב- דגם מכרסם [6]. בנוסף, נויטרופילים יכולים להיחשב כמקור נוסף ל-MRP8 המשפיע על סיבוכים של כלי הדם [28]. נכון לעכשיו, אנו חוקרים את המנגנון המולקולרי מדוע MRP8 מווסת בעיקר בתאי שושלת מיאלואיד החודרים לגלומרולי. מחקר במבחנה גילה ש-MRP8 גרם לביטוי ציטוקינים דלקתי וגם העצים את הביטוי של MRP8 עצמו במקרופאגים באופן תלוי TLR. בנוסף, תאים חיוביים ל-MRP8- נעדרו בנגעים טרשתיים נודולריים, מה שמצביע על כך ש-MRP8 של גלומרולרי עשוי לשקף נזק גלומרולרי מתמשך [20]. חשוב לציין, מחקר אנושי בקנה מידה גדול דיווח כי ביטוי הגנים MRP8 בתאים חד-גרעיניים בדם של חולי סוכרת מסוג 1 מוגבר באופן משמעותי בנבדקים עם סיבוכים סוכרתיים כולל נפרופתיה [29].

מאחר שעיכוב של מערכת הרנין-אנגיוטנסין (RAS) הוא גורם קובע חשוב לתוצאות הכליות, בדקנו את ההשפעות של חסימת RAS עלכִּליָהביטוי MRP8. לא מצאנו הבדל משמעותי בביטוי mRNA של MRP8 בכליות בין חולי DN שטופלו עם או בלי חסימת RAS (איור S9), כנראה בגלל שמקרים שטופלו בחסימת RAS נטו ליתר לחץ דם חמורים ולפרוטאינוריה מאשר במקרים ללא חסימת RAS

בבני אדם ועכברים שמנים, עלייה במתחם MRP8/14 בפלזמה עשויה לשקף מידה שלהַשׁמָנָהומקורם באדיפוציטים וכן מלוקוציטים [8,9]. במקרים של ORG שלנו היה צביעה קלה של MRP8 בצינוריות הפרוקסימליות, מה שמצביע על עלייה ברמות הפלזמה של MRP8. לעומת זאת, לא היה מתאם משמעותי בין ביטוי MRP8 tubulointerstitial לבין מדד מסת הגוף (איור S6G). לכן, ביטוי MRP8 מקומי ב-כִּליָהעשוי לשמש טוב יותר כסמן לפגיעה כלייתית ולא עבורהַשׁמָנָה[8,9].

Cistanche לשיפור תפקוד לקוי של הכליות

למחקר שלנו יש מספר מגבלות. מספר המדגם של כל קבוצה שנחקרה היה קטן. נבדקים לא זהים נרשמו ל-mRNA ולניתוחים אימונוהיסטוכימיים. מכיוון שניתחנו רק מטופלים שעברו ביופסיה כלייתית, ייתכן שהרכב המטופלים שנחקרו כאן לא ישקף את אלו בחולי סוכרת מסוג 2 או בכלל כרוניים.כִּליָהנושאי מחלות. למרות שהגיל לא נשמר כגורם עצמאי הקשור לאותות MRP8 בנתונים שלנו (טבלה 3), ידוע שהזדקנות קשורה לדלקת כרונית [30]. אי אפשר להזניח לחלוטין את השפעות הגיל. למרות שרוב האותות של MRP8 אבדו בבדיקת ספיגת הנוגדנים, נותרו כמה אותות חיוביים, שעלולים להיגרם על ידי קישור לא ספציפי של הנוגדן הראשון. כפי שנדון לעיל, חקירה של ביטוי MRP8 בכליות על ידי ביופסיה כלייתית עוזרת לנו להבין את הפתופיזיולוגיה והפרוגנוזה של מחלות כליה כרוניות, במיוחד הקשורותהַשׁמָנָהוסוכרת, אך יש לו חיסרון לשימוש שגרתי וחוזר במרפאות חוץ

לסיכום, המחקר הנוכחי מציע שהביטוי של MRP8 ב-כִּליָהמשקף את המצב הפתולוגי הנוכחי וגם מנבא תוצאות כליות בחולים עםהַשׁמָנָהאוֹסכרת סוג 2. מחקרים נוספים העוסקים במחקר של רמות MRP8 בשתן בקרב חולים שמנים או סוכרתיים בקנה מידה גדול עשויים להיות מוצדקים

מידע תומך

איור S1 תמונות מייצגות המציגות קטעי ביופסיה כלייתית של חולה DN מוכתם ב-(A) חומצה מחזורית שיף, (B) מתנמין-כסף חומצה תקופתית או (C)Masson trichrome. היחס בין מספר הגלומרולי עם טרשת עולמית (חצים) בין מספר הגלומרולי הכולל והשטח היחסי של פיברוזיס tubulointerstitial היה 33 אחוזים ו-65 אחוזים, בהתאמה, בחולה זה. (רִיב)

איור S2 אימונוהיסטוכימיה עבור חלבונים MRP8 ו-CD68 בחולי DN. התמונות בעמודה הימנית מציגות ניסויי בקרה שליליים ללא נוגדן ראשון. (TIF)

איור S3 בדיקת ספיגת נוגדנים לצביעת MRP8.PBS: תמיסת מלח מפוצלת פוספט, rhMRP8: אנושי רקומביננטיMRP8.(TIF)

איור S4 תמונות מייצגות של ביטוי MRP8 בקבוצות MGA, MCNS, ORG ו-DN.(TIF)

איור S5 מתאם בין ספירת תאים חיובית של MRP8-גלומרולרית ופרמטרים קליניים. נעשה שימוש בערכים שעברו טרנספורמציה ביומן של אותות MRP8. המתאמים נותחו באמצעות כל 4 הקבוצות (A-D, G) או 3 קבוצות למעט קבוצת MCNS (E, F). מעגלים פתוחים: חריגה גלומרולרית מינורית (MGA), מעגלים סגורים: תסמונת נפרוטית מינימלית (MCNS), משולשים פתוחים:הַשׁמָנָהגלומרולופתיה קשורה (ORG), משולשים סגורים: נפרופתיה סוכרתית (DN).(TIF)

איור S6 מתאם בין אזור חיובי של MRP8- של tubulointerstitial לבין פרמטרים קליניים. נעשה שימוש בערכים שעברו טרנספורמציה ביומן של אותות MRP8. מתאמים אלו נותחו באמצעות כל 4 הקבוצות (A–D, G) או 3 קבוצות למעט קבוצת MCNS (E, F).(TIF)

איור S7 מתאם בין ביטוי MRP8 גלומרולרי ו-tubulointerstitial. נעשה שימוש בערכים שעברו טרנספורמציה ביומן של אותות MRP8.(TIF)

איור S8 מתאם בין אזור חיובי של MRP8- tubulointerstitial ופיברוזיס tubulointerstitial. נעשה שימוש בערכים שעברו טרנספורמציה ביומן של אותות MRP8.(TIF)

איור S9 ביטוי mRNA כלייתי של MRP8 בחולי DN עם ​​או בלי חסימת רנין-אנגיוטנסין.NS: לא משמעותי. n=15 (כן), 6 (לא). מבין 22 מקרי DN, מידע על תרופות לא היה זמין בחולה אחד.(TIF)

קובץ S1 טבלאות תומכות.

טבלה S1, אבחנות פתולוגיות של כל המקרים שעברו ביופסיה כלייתית במחלקה לרפואה ומדע קליני, בית החולים האוניברסיטאי של קיוטו בין השנים 2000 ו-2011. טבלה S2, רצפי פריימר ובדיקה עבור TaqMan בזמן אמת RT-PCR. טבלה S3, ניתוח רגרסיה לוגיסטית להתרחשות של אירוע כליות בתוך שנה. (DOC)תודות אנו מודים בתודה ל-S. Tanaka על ייעוץ סטטיסטי, Y. Ogawa, N.Igarashi, ו-C. Kimura על הסיוע הטכני, ו-A. Yamamoto ו-SOgino על סיוע המזכירות. תרומות מחבר הגה ועיצב את הניסויים: TK KM MK HY MI AN KNMM. ביצעו את הניסויים: TK HI AI KK TM YK MI AN. ניתח את הנתונים: ת"ק ק"מ מ"ק הי"ש ס"י קו ק"ן מ"מ. תרמו ריאגנטים/חומרים/כלי ניתוח: TK KM. כתב את המאמר: TK KMMM.

השפעות של cistanche: טיפול במחלות כליות

הפניות

1. Donath MY, Shoelson SE (2011) סוכרת סוג 2 כמחלה דלקתית. Nat Rev Immunol 11: 98-107.

2. Odink K, Cerletti N, Bruggen J, Clerc RG, Tarcsay L, et al. (1987) חלבונים קושרי שני סידן במקרופאגים חודרים של דלקת מפרקים שגרונית. טבע 330: 80-82.

3. Vogl T, Tenbrock K, Ludwig S, Leukert N, Ehrhardt C, et al. (2007) Mrp8 ו-Mrp14 הם מפעילים אנדוגניים של קולטן דמוי Toll 4, המעודדים הלם קטלני המושרה על ידי אנדוטוקסין. Nat Med 13: 1042–1049.

4. Croce K, Gao H, Wang Y, Mooroka T, Sakuma M, et al. (2009) חלבון הקשור למיאלואיד-8/14 הוא קריטי לתגובה הביולוגית לפגיעה בכלי הדם. Circulation 120: 427–436.

5. Loser K, Vogl T, Voskort M, Lueken A, Kupas V, et al. (2010) הליגנדים Mrp8 ו-Mrp14 לקולטן דמויי Toll הם חיוניים בפיתוח של תאי CD8 פלוס T אוטו-ריאקטיביים. נת מד 16: 713–717.

6. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, et al. (2012) החמרה של נפרופתיה סוכרתית על ידי היפרליפידמיה מתווכת על ידי קולטן דמוי אגרה 4 בעכברים. Diabetologia 55: 2256–2266.

7. Fujiu K, Manabe I, Nagai R (2011) תאי אפיתל צינור איסוף כליות מווסתים דלקת בנזק tubulointerstitial בעכברים. J Clin Invest 121: 3425–3441.

8. Sekimoto R, Kishida K, Nakatsuji H, Nakagawa T, Funahashi T, et al. (2012) רמות גבוהות במחזור הדם של קומפלקס S100A8/A9 (calprotectin) בזכר יפני עם שומן בטני וביטוי לא מווסת של S100A8 ו-S100A9 ברקמות שומן של עכברים שמנים. Biochem Biophys Res Commun 419: 782–789.

9. Mortensen OH, Nielsen AR, Erikstrup C, Plomgaard P, Fischer CP, et al. (2009) קלפרוטקטין - סמן חדש שלהַשׁמָנָה. PLoS One 4: e7419.

10. Matsuo S, Imai E, Horio M, Yasuda Y, Tomita K, et al. (2009) משוואות מתוקנות עבור GFR משוער מקריאטינין בסרום ביפן. אני ג'ייכִּליָהDis53: 982–992.

11. Gross JL, de Azevedo MJ, Silveiro SP, Canani LH, Caramori ML, et al. (2005) נפרופתיה סוכרתית: אבחון, מניעה וטיפול. Diabetes Care 28:164–176.

12. Kambham N, Markowitz GS, Valeri AM, Lin J, D'Agati VD (2001)הַשׁמָנָהגלומרולופתיה קשורה: מגיפה מתהווה.כִּליָהInt 59: 1498–1509.

13. Praga M, Morales E (2006)הַשׁמָנָה, פרוטאינוריה והתקדמות של אי ספיקת כליות. Curr Opin Nephrol Hypertens 15: 481–486.

14. Kawasaki Y, Hosoya M, Takahashi A, Isome M, Tanji M, et al. (2005) ביטויי חלבון 8 הקשורים למיאלואיד על מקרופאגים הם סמן פרוגנוסטי שימושי לתפקוד לקוי של הכליות בילדים עם MPGN מסוג 1. Am JכִּליָהDis 45: 510–518.

15. Nishiyama A, Konishi Y, Ohashi N, Morikawa T, Urushihara M, et al. (2011) אנגיוטנסינוגן בשתן משקף את הפעילות של מערכת רנין-אנגיוטנסין תוך-כלית בחולים עם נפרופתיה IgA. Nephrol Dial Transplant 26: 170–177.

16. Ogawa Y, Mukoyama M, Yokoi H, Kasahara M, Mori K, et al. (2012) קולטן פפטיד נטרי-אורטי guanylyl cyclase-A מגן על פודוציטים מפני פגיעה גלומרולרית הנגרמת על ידי אלדוסטרון. J Am Soc Nephrol 23: 1198–1209.

17. Yokoi H, Mukoyama M, Mori K, Kasahara M, Suganami T, et al. (2008) ביטוי יתר של גורם גדילה של רקמת חיבור בפודוציטים מחמיר נפרופתיה סוכרתית בעכברים.כִּליָהInt 73: 446–455.

18. Hoshino K, Takeuchi O, Kawai T, Sanjo H, Ogawa T, et al. (1999) חוד החנית: עכברים חסרי קולטן 4 (TLR4) חסרי תגובה לליפופוליסכריד: עדות ל-TLR4 כמוצר הגן Lps. J Immunol162: 3749–3752.

19. Suganami T, Tanimoto-Koyama K, Nishida J, Itoh M, Yuan X, et al. (2007) תפקידו של מסלול הקולטן דמוי Toll 4/NF-kappaB בשינויים דלקתיים הנגרמות על ידי חומצות שומן רוויות באינטראקציה בין אדיפוציטים ומקרופאגים. Arterioscler Thromb Vasc Biol 27: 84–91.

20. Pepper RJ, Hamour S, Chavele KM, Todd SK, Rasmussen N, et al. (2013) ביטוי של לויקוציטים וסרום S100A8/S100A9 משקף פעילות מחלה בכלי דם הקשורים ל-ANCA וגלומרולונפריטיס.כִּליָהInt 83: 1150–1158.

21. Ravid M, Brosh D, Ravid-Safran D, Levy Z, Rachmani R (1998) גורמי הסיכון העיקריים לנפרופתיה בסוכרת מסוג 2 הם רמות כולסטרול בפלזמה, לחץ דם ממוצע והיפרגליקמיה. Arch Intern Med 158: 998–1004.

22. Adler AI, Stratton IM, Neil HA, Yudkin JS, Matthews DR, et al. (2000) קשר של לחץ דם סיסטולי עם סיבוכים מקרווסקולריים ומיקרווסקולריים של סוכרת מסוג 2 (UKPDS 36): מחקר תצפית פרוספקטיבי.BMJ 321: 412-419.

23. Ruggenenti P, Remuzzi G (1998) Nephropathy of type-2 diabetes mellitus. J Assoc Nephrol 9: 2157–2169.

24. Taft JL, Nolan CJ, Yeung SP, Hewitson TD, Martin FI (1994) קורלציות קליניות והיסטולוגיות של ירידה בתפקוד הכליות בחולי סוכרת עם פרוטאינוריה. סוכרת 43: 1046–1051.

25. Matsusaka T, Niimura F, Shimizu A, Pastan I, Saito A, et al. (2012) Liverangiotensinogen הוא המקור העיקרי של אנגיוטנסין II בכליות. J Am Soc Nephrol23: 1181–1189.

26. Kuwabara T, Mori K, Mukoyama M, Kasahara M, Yokoi H, et al. (2009) רמות ליפוקלין הקשורות ל-Nitropphil ג'לטינאז בשתן משקפות נזק לגלומרולי, לצינוריות הפרוקסימליות ולנפרון דיסטלי.כִּליָהInt 75: 285–294.

27. Kawasaki Y, Suyama K, Go H, Imamura T, Ushijima Y, et al. (2009) הצטברות של מקרופאגים המבטאים חלבון 8 הקשור למיאלואיד הקשור להתקדמות של שינויים טרשתיים בילדים עם נפרופתיה IgA. Tohoku J Exp Med 218: 49-55.

28. Nagareddy PR, Murphy AJ, Stirzaker RA, Hu Y, Yu S, et al. (2013) היפרגליקמיה מקדמת מיאלופוזיס ופוגעת בפתרון של טרשת עורקים. Cell Metab 17: 695–708.

29. Jin Y, Sharma A, Carey C, Hopkins D, Wang X, et al. (2013) הביטוי של גנים דלקתיים מווסתים בדם היקפי של חולים עם סוכרת מסוג 1. טיפול בסוכרת.

30. Longo VD, Finch CE (2003) רפואה אבולוציונית: ממערכות מודל ננסיות לבני מאה בריאים? מדע 299: 1342–1346.

ציטוט: Kuwabara T, Mori K, Kasahara M, Yokoi H, Imamaki H, et al. (2014) חשיבות ניבוי שלכִּליָהביטוי חלבון 8 הקשור למיאלואיד בחולים עםהַשׁמָנָה- או מחלות כליה הקשורות לסוכרת מסוג 2. PLoS ONE 9(2): e88942. doi:10.1371/journal.pone.0088942

עורך: Utpal Sen, University of Louisville, ארצות הברית

התקבל ב-11 בספטמבר 2013; התקבל 14 בינואר 2014; פורסם ב-18 בפברואר 2014

זכויות יוצרים: 2014 Kuwabara et al. זהו מאמר בגישה פתוחה המופץ תחת התנאים של רישיון הייחוס של Creative Commons, המאפשר שימוש, הפצה ושכפול ללא הגבלה בכל מדיום, בתנאי שהכותב והמקור המקוריים זוכים לזיכוי.

מימון: עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי מענק סיוע לחקר נפרופתיה סוכרתית ונפרוסתקלרוזיס ממשרד הבריאות, העבודה והרווחה של יפן (ל-KM), מענקי מחקר ממשרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע היפני , וטכנולוגיה (ל-TK, KM ו-MM), מקרן יפן לאנזימולוגיה יישומית (ל-TK) ומקרן מחקר העישון (ל-MM). למממנים לא היה תפקיד בתכנון המחקר, איסוף נתונים וניתוח, החלטה לפרסם או הכנת כתב היד.

תחומי עניין מתחרים: המחברים הצהירו שאין אינטרסים מתחרים.

* דואר אלקטרוני: keyem@kuhp.kyoto-u.ac.jp