חלק 3: Echinacoside מבודד מ- Cistanche Tubulosa ממריץ באופן משוער הפרשת הורמון גדילה באמצעות הפעלה של קולטן הגרלין

Echinacoside מבודד מ- Cistanche tubulosa ממריץ באופן משוער הפרשת הורמוני גדילה באמצעות הפעלה של קולטן הגרלין

Chieh-Ju Wu 1, Mei-Yin Chien 2, Nan-Hei Lin 1, Yi-Chiao Lin 1, Wen-Ying Chen 3, Chao-Hsiang Chen 2,4,* וג'ייסון TC Tzen 1,*

1 מכון בוגר לביוטכנולוגיה, אוניברסיטת צ'ונג-הסינג הלאומית, טאיצ'ונג 402, טייוואן; baby159357520@gmail.com (C.-JW); CMNHEI@mohw.gov.tw (N.-HL); s9755702@gmail.com (Y.-CL)

2 Ko Da Pharmaceutical Co. Ltd., Taoyuan 324, טייוואן; rd1@koda.com.tw

3 המחלקה לרפואה וטרינרית, אוניברסיטת צ'ונג-הסינג הלאומית, טאיצ'ונג 402, טייוואן; wychen@dragon.nchu.edu.tw

4 בוגר המכון לפרמקוגנוסיה, האוניברסיטה הרפואית של טייפה, טייפה 110, טייוואן

* התכתבות: gm@koda.com.tw (C.-HC); TCTZEN@dragon.nchu.edu.tw (JTCT); טל': פלוס 886-4-22840328 (שלוחה 776) (JTCT); פקס: פלוס 886-4-22853527 (JTCT)

עורך אקדמי: Pinarosa Avato

התקבל: 22 בינואר 2019; התקבל: 14 בפברואר 2019; פורסם: 17 בפברואר 2019

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

תַקצִיר:Cistancheמינים, הג'ינסנג של המדבר, תועדו כבעלי פעילויות ביולוגיות רבות בפרמקופיה סינית מסורתית ושימש כתרופה אנטי-אייג'ינג. שלושה גליקוזידים פנילתנואידים-echinacoside, Tubuloside A, ו-acteoside - התגלו בתמצית המים שלCistanche tubulosa(שנק) ר' וייט והמרכיב העיקרי,echinacoside, טוהר עוד יותר.אכינאקוסיידבריכוז גבוה מ-10_6 M הציג פעילות משמעותית לגירוי הפרשת הורמון גדילה של תאי יותרת המוח של חולדה. בדומה להורמון משחרר הורמון גדילה -6, אנלוגי סינטטי של גרלין, הגירוי של הפרשת הורמון הגדילה על ידי אכינאקוסיד עוכב על ידי [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-חומר P , אגוניסט הפוך של קולטן גרלין. מודלים מולקולריים הראו שכל שלושת הגליקוזידים של פנילאתנואידים קיימו אינטראקציה נאותה עם כיס הקישור של הקולטן לגרלין, ואכינאקוסיד הציג אינטראקציה מעט טובה יותר עם הקולטן מאשר tubuloside A ו-acteoside. התוצאות מצביעות על כך ש-phenylethanoid glycosides, במיוחד echinacoside, הם מרכיבים פעילים האחראים לכאורה להשפעות האנטי-אייג'ינג של C. tubulosa ועשויים להיחשב כמתפתחים כאנלוגים לא-פפטידיל של גרלין.

מילות מפתח: cistanchetubulosa;echinacoside; גרלין; הפרשת הורמון גדילה;פנילתנואידגליקוזידים

echinacosideבcistancheבעל השפעות רבות

בבקשה, לחץ כאן לחלק 2

4. חומרים ושיטות

4.1. כימיקלים וחומרים צמחיים

Cistanchedeserticola YC Ma הושג משוק מקומי ואומת על ידי ד"ר נאן-היי לין.Cistanchetubulosa (Schenk) R. Wight נרכשה מ-Sinopharm Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd., (Hangzhou, סין). אצטוניטריל, חומצה פורמית ומתנול בדרגת HPLC נרכשו מ-ECHO Chemical Co., Ltd, (Miaoli, טייוואן). המדיום (DMEM) של Dulbecco של Dulbecco, סרום עוברי עובר דיאליזה (DFBS) ו-Trypsin-EDTA נקנו מ-Invitrogen (Carlsbad, CA, ארה"ב). DNase נקנתי מ-Worthington Biochemical (לייקווד, ניו ג'רזי, ארה"ב). הורמון משחרר הורמוני גדילה-6 (GHRP-6) התקבל מ-Gen Way Biotech, Inc. (סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב). קולגנאז מסוג I ו-[D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-חומר P נקנו מ-Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, ארה"ב). ערכת הורמון הגדילה ELISA של חולדות נרכשה מחברת Sunred Biological Technology Corporation (שנחאי, סין).

4.2. ניתוחי HPLC/UV ו-LC_MSn של מיצוי המים של Cistanche spp.

גבעול מיובש (25 גרם) שלCistanchedeserticola YC מא אוCistanchetubulosa (Schenk) R חולצה שלוש פעמים עם 500 מ"ל מים מזוקקים למשך 60 דקות ב-50 מעלות באמבט מים. התמיסה סוננה דרך מסנן סורי בגודל 13 מ"מ עם מסנן ממברנה של 0.45 אום PP (Pall Corporation, Glen Cove, NY, ארה"ב), ונתונה לניתוחים הבאים. נותחו המרכיבים הכימיים בתמציות

באמצעות עמודת Syncronis C18 (קוטר פנימי של 4.6 × 250 מ"מ, 5 אום, Thermo Scientific, Waltham, MA, ארה"ב) במערכת HPLC בשילוב עם גלאי מערך פוטודיודות דגם 600E (Waters Corporation,

מילפורד, MA, ארה"ב). הפאזה הניידת כללה (A) מים המכילים {{0}}.1 אחוז חומצה פורמית ו-(B) אצטוניטריל. שיפוע הפליטה היה כדלקמן: 0–60 דקות, שיפוע ליניארי מ-14 אחוז B; 0–3 דקות, 14 אחוז עד 17 אחוז B; 3–4 דקות, 17 אחוז B; 4-15 דקות, 17 אחוז עד 20 אחוז B; 15–20 דקות, 20 אחוז B; 20–50 דקות, 20 אחוז עד 14 אחוז B; 50–60

דקה, 14 אחוז B. אורך הגל לזיהוי הספיגה האולטרה סגול (UV) נקבע על 330 ננומטר. ספקטרומטר מסה טנדם מלכודת ליניארית (LTQ) (Thermo Electron, סן חוזה, קליפורניה, ארה"ב) מצויד בממשק יינון אלקטרוספריי (ESI) חובר למערכת Surveyor LC (Thermo Electron)

עם לולאת דגימה של 5 ul. שיפוע הפליטה היה כדלקמן: 0–90 דקות, שיפוע ליניארי מ-14 אחוז B; 0–24 דקות, 14 אחוז עד 17 אחוז B; 24–25 דקות, 17 אחוז B; 25–36 דקות, 17 אחוז עד 20 אחוז B; 36–37 דקות, 20 אחוז ב'; 37-80 דקות,

20% to 14% B; 80–90 min, 14% B. The heated capillary temperature was set at 300℃ with a spray voltage of 4.5 kV. Negative ESI mode was firstly scanned ranging from m/z 400–1000. Data-dependent MSN was obtained using the high purity helium (>99.99 אחוזים) כגז ההתנגשות.

4.3. בידוד של Echinacoside

תמצית המים מהגבעול המיובש (25 גרם) של C. tubulosa רוכזה בלחץ מופחת לקבלת סירופ חום עמוק. המיצוי הגולמי הושעה במים מזוקקים והוליופיליזציה על ידי מייבש הקפאה. האבקה של 100 מ"ג נמסה במים מזוקקים של 5 מ"ל ונתונה לטיהור באמצעות עמודת Sephadex LH-20 (100 מ"ל; GE Healthcare Bio-Sciences AB, שוודיה) שנפלטה עם תמיסת מתנול מימית של 10 אחוז ונוטרה על ידי HPLC . השברים המכילים echinacoside זוהו על ידי קריאת הספיגה ב-245 ננומטר ונקטפו באמצעות דגימה אוטומטית.

4.4. חיות

הניסויים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת צ'ונג_הסינג הלאומית עם מספר האישור של IACUC 106-079. חולדות זכר Sprague_Dawley במשקל 250_300 גרם נרכשו מ-BioLASCO, Taiwan Co., Ltd. (טייפיי, טייוואן). שני בעלי חיים לכל כלוב נשמרו בסביבה מבוקרת של 23 o2, 60 או 10 אחוזי לחות ומחזור אור/חושך של 12 שעות. החולדות הוזנו עם דיאטת צ'או סטנדרטית (סופקו קלוריות

ב-28.7 אחוז חלבון, 13.4 אחוז שומן ו-57.9 אחוז פחמימות, 5001 Rodent LabDiet, St. Louis, MO, ארה"ב) ומים מזוקקים באופן חופשי.

4.5. תרבות תאי יותרת המוח העיקרית

תאי יותרת המוח בודדו על פי שיטת פיזור אנזימטי שונה שפותחה על ידי Yamazaki וחב'. [29]. בקצרה, חולדות Sprague Dawley זכרים הורדמו עם Zoletil 50 (40 מ"ג/ק"ג, IP; Virbac Laboratories, Carros, צרפת), ובלוטות יותרת המוח הקדמיות הוסרו ופוזרו להתרבות תאי יותרת המוח בתרחיף, כפי שתואר קודם [30].

4.6. בדיקת הפרשת הורמון גדילה

תאי יותרת המוח הקדמיים הראשיים של 4 × 104 תאים/באר תורבו ב-37 מעלות מתחת ל-5% CO2 במשך יומיים לפני בדיקת הפרשת הורמון הגדילה לפי הפרוטוקול שתואר קודם [30].

לאחר הסרת מצע התרבות, התאים הורעבו במדיום של Dulbecco's Modified Eagle (DMEM) ללא סרום למשך 90 דקות כדי לייצב את הפרשת ההורמון הבסיסי. מדיום הרעב הוחלף ב-DMEM טרי המכיל echinacoside (מ-10_8 עד 10_5 M) או GHRP-6 (אגוניסט של קולטן גרלין אנושי, GHSR, 10_7 M) כביקורת חיובית, והתאים הודגרו במשך 15 ו-30 דקות ב-37 מעלות מתחת ל-5% CO2. לזיהוי אפקט אנטגוניסט, התאים הודגרו עם GHSR

אגוניסט הפוך, [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-חומר P (0.5 uM), ולאחר מכן טופל ב-DMEM המכיל echinacoside (10_5 M) או GHRP-6 (10_7 M) למשך 30 דקות. המדיום נאסף עבור

קביעת הפרשת הורמון הגדילה על ידי ערכת הורמון גדילה ELISA של חולדה (Shanghai Sunred Biological Technology Corporation).

4.7. ניתוח סטטיסטי

הנתונים הוצגו כערכים ממוצעים של SD. ההבדלים נותחו על ידי T-Test. חישובים סטטיסטיים בוצעו על ידי GraphPad Prism 6 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, ארה"ב). רמה של p < 0.05="" נחשבה="" למובהקת="">

4.8. מידול הומולוגיה ועגינה

מודלים הומולוגיים ועגינה לקולטן גרלין אנושי, קולטן הפרשת הורמון גדילה (GHSR, מספר גישה AAI13548), הוקמה על ידי ביצוע הבנייה הקודמת שלנו [21,24]. בקצרה, מבנים גבישיים של קולטנים אדרנרגיים 1 ו-2 (PDB 2YCY ו-3PDS) עם ליגנדים קשורים, ציאנופינדולול ו-FAUC50 שימשו כתבניות לבניית מבנה GHSR [31,32]. מבנה ה-GHSR עם האנרגיה הכוללת הנמוכה ביותר של PDF נבחר לעגינה נוספת עם GHRP-6, echinacoside, tubuloside A ו-acteoside. כל תהליכי הדוגמנות בוצעו באמצעות פלטפורמת Discovery Studio 2.1 (http://accelrys.com/).

המבנה התלת-ממדי של GHRP-6 הורד ממסד הנתונים של המתחם של Pub-Chem באתר NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). המבנים התלת-ממדיים של echinacoside, tubuloside A ו-acteoside נבנו באמצעות תוכנית Chem3D (http://www.cambridgesoft.com/). אתר הקישור לליגנד של GHSR הוגדר כחלל הכדורי עם רדיוס של 14 Å ממרכז כיס הקישור בהדמיית העגינה. עגינה של GHRP-6, echinacoside, tubuloside A או acteoside לאתר הקישור של GHSR בוצעה בסיליקו על ידי שימוש במודול LibDock בחבילת Discover Studio 2.1 וממוזער עוד יותר על ידי אלגוריתם מזער חכם עם שדה כוח CHARMm ב- חבילת Discover Studio 2.1 [33]. כדי להשוות את זיקות הקישור היחסיות של echinacoside, tubuloside A ו-acteoside ב-GHSR, אזור המרכז הפעיל שנבנה עם GHRP-6 ב-GHSR שימש לעגינה, ואנרגיית הקישור חושבה על ידי GEMDOCK (המכון לביואינפורמטיקה). , אוניברסיטת צ'יאו טונג הלאומית, טייוואן).

תרומות מחבר: ניסויים בבעלי חיים, C.-JW, Y.-CL, ו-W.-YC; זיהוי וטיהור: MY.C., N.-HL ו-C.-HC; מודלים מולקולריים: C.-JW, Y.-CL ו-JTCT; עיצוב וכתיבה של פרויקט: C.-HC ו-JTCT

מימון: העבודה נתמכה בחלקה על ידי מענק לג'ייסון TC Tzen מאוניברסיטת צ'ונג-הסינג הלאומית (NCHU-102D604).

תודות: המחברים מודים לטיאן-שון וונג על שיתוף הניסיון המקצועי שלו בשימוש במינים של Cistanche.

ניגודי אינטרסים: כל המחברים אינם מצהירים על ניגודי עניינים.

הפניות

1. וואנג, ט.; ג'אנג, X.; Xie, W. Cistanche deserticola YC Ma, "ג'ינסנג במדבר": סקירה. אמ. ג'יי צ'ין. Med. 2012,40, 1123–1141. [CrossRef] [PubMed]

2. וואנג, ט.; חן, ג; יאנג, מ.; דנג, ב.; קירבי, MG; Zhang, X. Cistanche tubulosa תמצית אתנול מתווך רמות הורמון המין של חולדה על ידי אינדוקציה של אנזימים סטרואידוגניים אשכים. פארם. ביול. 2016, 54, 481–487. [CrossRef] [PubMed]

3. Lin, WY; צ'ון, י.; ג'ק, סי; קאו, ST; Tsai, FJ; Liu, HP מסלולים מולקולריים הקשורים לקידום אריכות ימים ושיפור קוגניטיבי של Cistanche tubulosa ב-Drosophila. Phytomedicine 2017, 26, 37–44. [CrossRef]

4. וו, CR; לין, HC; Su, MH היפוך על ידי תמציות מימיות של Cistanche tubulosa מחסרים התנהגותיים במודל חולדות דמוי מחלת אלצהיימר: רלוונטיות לתצהיר עמילואיד ותפקוד נוירוטרנסמיטר מרכזי. BMC Complement. אלטרנט. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef]

5. שואן, GD; Liu, CQ מחקר על ההשפעה של phenylethanoid glycosides (PEG) של Cistanche deserticola על אנטי אייג'ינג בעכברים מבוגרים המושרה על ידי D-galactose. Zhong Yao Cai 2008, 31, 1385–1388. [PubMed]

6. Jiang, Y.; טו, PF ניתוח של מרכיבים כימיים במינים של Cistanche. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979. [CrossRef] [PubMed]

7. גאו, ג.; וואנג, סי; Wu, G. Cistanche סך הגליקוזידים על ההשפעה של חולדות דמנציה כלי דם למידה וזיכרון ומחקר המנגנון. סַנְטֵר. עֵשֶׂב. Med. 2005, 36, 1852–1855.

8. לי, פ.; יאנג, י.; ז'ו, פ.; חן, ו.; Qi, D.; שי, X.; ג'אנג, סי; יאנג, ז.; Li, P. Echinacoside מקדם התחדשות עצם על ידי הגדלת יחס OPG/RANKL בתאי MC3T3-E1. Fitoterapia 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef]

9. שימודה, ח.; טנאקה, ג'; טקהארה, י.; Takemoto, K.; שאן, SJ; Su, MH ההשפעות ההיפוכולסטרוליות של תמצית Cistanche tubulosa, תרופה סינית מסורתית, בעכברים. אמ. ג'יי צ'ין. Med. 2009, 37, 1125–1138. [CrossRef]

10. טאנג, פ.; האו, י.; ג'אנג, X.; Qin, J. השפעת echinacoside על פיברוזיס בכליות על ידי עיכוב של מסלול איתות TGF- 1/Smads במודל עכברי DB/DB של נפרופתיה סוכרתית. Drug Des. Devel. ת'ר. 2017, 11,2813–2826. [CrossRef]

11. שיונג, WT; גו, ל.; וואנג, סי; שמש, HX; Liu, X. השפעות אנטי-היפרגליקמיות והיפוליפידמיות של Cistanche tubulosa בעכברי DB/DB סוכרתיים מסוג 2. J. Etnopharmacol. 2013, 150, 935–945. [CrossRef] [PubMed]

12. באו, XX; מא, חח; דינג, ח; לי, WW; Zhu, M. אופטימיזציה ראשונית של נוסחת צמחי מרפא סינית המבוססת על ההשפעות הנוירו-פרוקטטיביות במודל חולדה של מחלת פרקינסון הנגרמת על ידי רוטנון. J. Integr. Med. 2018, 16, 290–296. [CrossRef] [PubMed]

13. קוג'ימה, מ.; הוסודה, ח; תאריך, י.; Nakazato, M.; Matsuo, H.; Kanagawa, K. Ghrelin הוא פפטיד אצילי המשחרר הורמון גדילה מהקיבה. טבע 1999, 402, 656–660. [CrossRef] [PubMed]

14. זיגמן, JM; ג'ונס, JE; לי, CE; Saper, CB; Elmquist, JK ביטוי של mRNA קולטן גרלין במוח של חולדה ועכבר. J. Comp. נוירול. 2006, 494, 528–548. [CrossRef] [PubMed]

15. קסטנדה, TR; טונג, ג'; דאתא, ר; קולר, מ.; Tschop, MH Ghrelin בוויסות משקל הגוף ומטבוליזם. חֲזִית. נוירואנדוקרינול. 2010, 31, 44–60. [CrossRef] [PubMed]

16. רודמן, ד.; פלר, א.ג; Nagraj, HS; גרמנים, ג"א; Lalitha, PY; גולדברג, א.פ; שלנקר, ר"ע; כהן, ל.; רודמן, IW; Mattson, DE השפעות הורמון הגדילה האנושי בגברים מעל גיל 60. N. Engl. J. Med. 1990, 323, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

17. ליו, ה.; Bravata, DM; אולקין, I.; נייאק, ש.; רוברטס, ב.; Garber, AM; הופמן, AR סקירה שיטתית: הבטיחות והיעילות של הורמון גדילה בקשישים בריאים. אן. מתמחה. Med. 2007, 146, 104–115. [CrossRef] [PubMed]

18. ג'ורדנו, ר.; Bonelli, L.; Marinazzo, E.; Ghigo, E.; Arviat, E. טיפול בהורמון גדילה בהזדקנות האדם: יתרונות וסיכונים. הורמונים 2008, 7, 133-139. [CrossRef] [PubMed]

19. Sattler, FR הורמון גדילה אצל הזכר המזדקן. השיטות הטובות ביותר. מילון קלינ. אנדוקרינול. 2013, 27, 541–555. [CrossRef]

20. לו, י"ה; חן, י"ג; Chang, CI; לין, YW; Chen, CY; לי, MR; לי, VS; Tzen, JTC Teaghrelins, טטראגליקוזידים ייחודיים של פלבנואידים אצילים בתה אולונג של צ'ין-שין, הם אגוניסטים פומיים משוערים של קולטן גרלין.

J. Agric. Food Chem. 2014, 62, 5085–5091. [CrossRef]

21. הסיה, סק; ראה, י"ה; וו, CC; צ'ונג, TY; Tzen, JTC זיהוי של תוצרי ביניים ביו-סינתטיים של teaghrelins ותרכובות דמויות teaghrelin בתה אולונג, והעגינה המולקולרית שלהם לקולטן הגרלין.

J. Food Drug Anal. 2015, 23, 660–670. [CrossRef]

22. הסיה, סק; צ'ונג, TY; לי, YC; ראה, י"ה; לין, NH; Kuo, PC; Chen, WY; Tzen, JTC Ginkgoghrelins, גליקוזידים ייחודיים של פלבנואידים אצילים ב-Folium Ginkgo, מעוררים הפרשת הורמון גדילה באמצעות הפעלה של הקולטן לגרלין. J. Etnopharmacol. 2016, 193, 237–247. [CrossRef]

23. האן, ל.; Mavis, BY; ליו, E.; ג'אנג, י.; לי, ו.; שיר, X.; פו, פ.; Gao, X. אפיון מבני וזיהוי של גליקוזידים פנילתנואידים מ-Cistanches deserticola YC Ma על ידי UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS. Phytochem. אנאלי. 2012, 23, 668–676. [CrossRef]

24. לו, ד.; ג'אנג, ג'; יאנג, ז.; ליו, ה.; לי, ש; וו, ב.; Ma, Z. ניתוח כמותי של Cistanches Herba באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים בשילוב עם זיהוי מערך דיודות וספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוהה בשילוב שיטות כיומטריות. J. Sep. Sci. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef]

25. ירח, מ.; קים, HG; הוואנג, ל.; Seo, JH; קים, ש.; Hwang, S.; קים, ש.; לי, ד.; צ'ונג, ה.; אה, MS; et al. ההשפעה הנוירו-מגן של גרלין ב1-מתיל-4-פניל-1, 2, 3, מודל עכבר 6-טטרה-הידרופירידין של מחלת פרקינסון על ידי חסימת הפעלה של מיקרוגליה. נוירוטוקס. מילון 2009, 15, 332–347. [CrossRef]

26. Lupien, SJ; איזבל, OM; הופבך, א.; טו, מ"ט; באס, ג.; ווקר, ד.; פרוסנר, י. Mcewen, BS מעבר למושג הלחץ: עומס אלוסטטי-פרספקטיבה ביולוגית וקוגניטיבית התפתחותית. בפסיכופתולוגיה התפתחותית: כרך שני: מדעי המוח ההתפתחותי; John Wiley & Sons, Inc.: ניו יורק, ניו יורק, ארה"ב, 2015; עמ' 578–628.

27. ריזו, מ.; ריזבי, א.א.; סודר, ע.; סוסקיץ', ש.; אובראדוביץ', מ'; מונטלטו, ג'; Boutjdir, M.; מיכאילדיס, DP; Isenovic, ER סקירה של ההשפעות הקרדיווסקולריות והאנטי-אתרוגניות של גרלין. Curr. פארם. דס. 2013, 19, 4953–4963. [CrossRef]

28. הולסט, ב.; לאנג, מ.; ברנדט, ע.; באך, א.; הווארד, א.; פרימרר, TM; בק-סיקינגר, א.; שוורץ, TW אגוניסטים הפוכים לקולטן גרלין: זיהוי ליבת פפטיד פעילה ואפיטופופי האינטראקציה שלה על הקולטן. מול. פרמקול. 2006, 70, 936–946. [CrossRef]

29. ימאזאקי, מ.; נקאמורה, ק.; קוביאשי, ח.; מצוברה, מ.; חיישי, י. קנאגאווה, ק.; Sakai, T. השפעת ויסות של גרלין על הפרשת הורמון גדילה מתאי יותרת המוח הקדמיים של חולדה מבולבלת. J. Neuroendocrinol. 2002, 14, 156–162. [CrossRef]

30. הלו, י"ה; חן, י"ג; צ'ונג, TY; לין, NH; Chen, WY; Chen, CY; לי, MR; צ'ו, CC; Tzen, JTC Emoghrelin, נגזרת אמודין ייחודית בהשואו, מעוררת הפרשת הורמון גדילה באמצעות הפעלה של הקולטן לגרלין. J. Etnopharmacol. 2015, 159, 1–8. [CrossRef]

31. מוחמציאנוב, ר.; Warne, T.; אדוארדס, PC; Serrano-Vega, MJ; לסלי, א.ג.; טייט, CG; Schertler, GF שתי קונפורמציות ברורות של סליל 6 שנצפו במבנים הקשורים באנטגוניסט של קולטן בטא1-אדרנרגי. פרוק. נאטל. אקד. Sci. ארה"ב 2011, 108, 8228–8232. [CrossRef]

32. רוזנבאום, ד"מ; ג'אנג, סי; Lyons, JA; הול, ר.; Aragao, D.; ארלו, ד"ה; Rasmussen, SG; Choi, HJ; Devree, BT; Sunahara, RK; et al. מבנה ותפקוד של קומפלקס אדגוניסט-ביתא(2) בלתי הפיך. טבע 2011, 469, 236–240. [CrossRef]

33. ברוקס, BR; Bruccoleri, RE; אולפסון, BD; מדינות, DJ; Swaminathan, S.; Karplus, M. CHARMM - תוכנית לחישובי אנרגיה מקרומולקולרית, מזעור ודינמיקה. J. Comput. Chem. 1983, 4, 187–217. [CrossRef]