חלק 2|גליקוגן סינתאז קינאז 3b היפראקטיביות בתאים מגולפים בשתן מנבאת התקדמות של מחלת כליות סוכרתית
Mar 05, 2022
לחץ כאן לחלק 1
למידע נוסף אנא צור קשר:emily.li@wecistanche.com
דִיוּן
בארצות הברית ובמדינות מערביות אחרות, DKD נותרה האטיולוגיה המובילה של פרוגרסיבימחלת כליות כרוניתומטילה נטל כבד על האוצר ומערכות הבריאות ללא טיפול סופי עדיין זמין.5 כבר זמן רב הוכר שלא כל החולים עם סוכרת ימשיכו לפתח DN.5 בהתאם לקבוצה שנחקרה, הוערך כי DN פוגע ב-30% עד 50% מחולי הסוכרת. האמצעים שננקטו על ידי הפרקטיקה הקלינית הנוכחית כדי לזהות חולי סוכרת בסיכון לפתח DKD מוגבלים במידה רבה לבדיקות עיניים לאיתור רטינופתיה ובדיקת שתן לאלבומינוריה.5 עם זאת, עדויות אפידמיולוגיות מתכנסות מצביעות על כך שמיקרו-וסקולופתיה חוץ-כליתית או אלבומינוריה אינה תואמת באופן משמעותי את ההתקדמות של DKD.12,13,26,27 ככזה, קיים צורך דחוף לפתח סמן ביולוגי חדש לריבוד מדויק של חולי סוכרת בסיכון ל-DN. המחקר הנוכחי, בפעם הראשונה, מדווח ש-GSK3b מתבטא יתר על המידה והיפראקטיבית בפרנכימהכִּליָהתאים ב-DN ניסיוני וגם קליני, הקשורים להתקדמות מחלת כליות. יתר על כן, היפראקטיביות GSK3b בתאים מגולפים בשתן עשויה לחזות את התקדמות ה-DN.
Cistanche tubulosa מונע מחלת כליות, לחץ כאן כדי לקבל את הדגימה
![Deterioration of human diabetic nephropathy (DN) is associated with glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) overexpression and hyperactivity in renal glomeruli and tubules. (a) Representative microscopic images of periodic acid–Schiff staining or peroxidase immunohistochemistry staining for GSK3b or the activated form of GSK3b (phosphorylated GSK3b at Y216 [p-GSK3b]) in normal control kidney specimens and in kidney biopsy tissues from diabetic patients, stratified according to histological classes of DN. Specific staining in glomerular podocytes and mesangial cells is indicated by black arrows and black arrowheads, respectively; specific staining in renal tubules is indicated by white arrowheads. Bar ¼ 50 mm. (b) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for GSK3b and integrated pixel density is presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes. n ¼ 6–10. (c) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for p-GSK3b and integrated pixel density presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes.](/Content/uploads/2021842169/202112101057096935b7a7e83b420997b0a2b2ccb12176.png "Deterioration of human diabetic nephropathy (DN) is associated with glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) overexpression and hyperactivity in renal glomeruli and tubules. (a) Representative microscopic images of periodic acid–Schiff staining or peroxidase immunohistochemistry staining for GSK3b or the activated form of GSK3b (phosphorylated GSK3b at Y216 [p-GSK3b]) in normal control kidney specimens and in kidney biopsy tissues from diabetic patients, stratified according to histological classes of DN. Specific staining in glomerular podocytes and mesangial cells is indicated by black arrows and black arrowheads, respectively; specific staining in renal tubules is indicated by white arrowheads. Bar ¼ 50 mm. (b) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for GSK3b and integrated pixel density is presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes. n ¼ 6–10. (c) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for p-GSK3b and integrated pixel density presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes.")
![Deterioration of human diabetic nephropathy (DN) is associated with glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) overexpression and hyperactivity in renal glomeruli and tubules. (a) Representative microscopic images of periodic acid–Schiff staining or peroxidase immunohistochemistry staining for GSK3b or the activated form of GSK3b (phosphorylated GSK3b at Y216 [p-GSK3b]) in normal control kidney specimens and in kidney biopsy tissues from diabetic patients, stratified according to histological classes of DN. Specific staining in glomerular podocytes and mesangial cells is indicated by black arrows and black arrowheads, respectively; specific staining in renal tubules is indicated by white arrowheads. Bar ¼ 50 mm. (b) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for GSK3b and integrated pixel density is presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes. n ¼ 6–10. (c) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for p-GSK3b and integrated pixel density presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes.](/Content/uploads/2021842169/2021121010573409d6aadc2e1d4dc78124d55406c4e0d6.png "Deterioration of human diabetic nephropathy (DN) is associated with glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) overexpression and hyperactivity in renal glomeruli and tubules. (a) Representative microscopic images of periodic acid–Schiff staining or peroxidase immunohistochemistry staining for GSK3b or the activated form of GSK3b (phosphorylated GSK3b at Y216 [p-GSK3b]) in normal control kidney specimens and in kidney biopsy tissues from diabetic patients, stratified according to histological classes of DN. Specific staining in glomerular podocytes and mesangial cells is indicated by black arrows and black arrowheads, respectively; specific staining in renal tubules is indicated by white arrowheads. Bar ¼ 50 mm. (b) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for GSK3b and integrated pixel density is presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes. n ¼ 6–10. (c) Computerized morphometric analysis was performed on kidney sections stained for p-GSK3b and integrated pixel density presented. *P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes; &P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class IV; $P < 0.05 versus glomerular staining in other DN classes except class III; #P < 0.05 versus tubulointerstitial staining in other DN classes.")
GSK3b, קינאז סרין/תרעונין-חלבון שמור מאוד, רגיש לחיזוק, מעורב מרכזי באיתות אינסולין כמו גם במספר מסלולי אותות תאיים אחרים שהם חיוניים לתהליכים פתופיזיולוגיים הקשוריםכִּליָהפציעה, תיקון והתחדשות. ברקמות הרגישות לאינסולין, כגון הכבד ושריר השלד, GSK3b פעיל בתנאים בסיסיים ומדכא את פעילות הגליקוגן סינתאז.19,28 אינסולין משבית במהירות את GSK3b באמצעות זרחון מעכב בסרין 9, וכתוצאה מכך לביו-סינתזה של גליקוגן. מספר גדל והולך של עדויות מצביע על כך שחוסר ויסות GSK3b קשור לסוכרת מסוג 2.19,29-31 אכן, ישנם נתונים המצביעים על ביטוי יתר של GSK3b והיפראקטיביות בשרירים של חולי סוכרת31-33 וברקמות שומן של עכברים סוכרתיים שמנים.34 יתרה מכך. , ביטוי יתר טרנסגני של GSK3b בשרירי השלד של עכברים גורם לפגיעה בסבילות לגלוקוז, עמידות לאינסולין והיפר-אינסולינמיה.29,35 לעומת זאת, עכברים חסרי GSK3b בשרירי השלד הראו סבילות משופרת לגלוקוז.36 באופן עקבי, GSK3 מסוגלים לעכב ליתיום, כגון מעכבי ליתיום. מחקה את פעולת האינסולין בקווי תאים ורקמות.37 יתרה מכך, בעכברים סוכרתיים שמנים, מעכבי GSK3 שיפרו את הרגישות לאינסולין ואת הומאוסטזיס הגלוקוז.38כִּליָהבאופן מסורתי לא נחשב כאיבר מטרה לפעולת אינסולין. עם זאת, ראיות משכנעות לאחרונה הצביעו על כך שהאינסולין מסמן אותותכִּליָהתאים, במיוחד בפודוציטים, ממלאים תפקיד מפתח בשמירה על גלומרולרי וכִּליָההומאוסטזיס.39–41 איתות לאינסולין פגום בפודוציטים, בגלל מחסור או עמידות לאינסולין, הוא ככל הנראה יוזם מרכזי לרבים מהנגעים הפתולוגיים שנצפו ב-DN. יתרה מזאת, מחקרים קליניים הראו שתנגודת לאינסולין נמצאת בקורלציה עם הופעתה וחומרתה של אלבומינוריה אפילו בחולים נורמוטנסיביים שאינם סובלים מסוכרת, מה שמצביע על כך שתנגודת לאינסולין כשלעצמה עלולה לגרום לאלבומינוריה. נוק-אאוט מותנה של הקולטן לאינסולין בפודוציטים גלומרולריים, פיתח אלבומינוריה ונגעים גלומרולריים המשחזרים את DN, למרות היעדר היפרגליקמיה או סוכרת.41 לעומת זאת, בחיות סוכרתיות, גורמים רגישים לאינסולין מסוגלים להאט את התקדמות ה-DN ללא תלות בשליטה גליקמית.43 ממצאים אלו מצביעים על כך שאיתות אינסולין מווסת את תפקוד הפודוציטים ללא תלות ברמות הגלוקוז בדם. עם זאת, כמתמר המפתח של מסלול איתות האינסולין, תפקידו של GSK3b בפתוגנזה והתקדמות של DN לא נחקר במידה רבה.
בתוך הכִּליָה, GSK3b מתבטא בעיקר בפודוציטים, ובמידה פחותה, בתאי mesangial ו- endothelial in glomerulus20,21 ומתבטא באופן נרחב על ידי תאי צינורית כליה. ישנם נתונים מקבוצות שלנו ושל קבוצות אחרות המצביעים על כך ש-GSK3b מתווך פגיעה אוטונומית של פודוציטים על ידי שילוב מסלולי איתות טופתיים מרובים של פודוצי. גלומרולופתיות שונות שאינן סוכרתיות.21 יתר על כן, בפרוגרסיביכְּרוֹנִיכִּליָהמַחֲלָה, GSK3b נמצא כמאפנן של פגיעה צינורית וכלייתית אינטרסטיציאלית. עם זאת, האם וכיצד GSK3b מעורב ב-DN היה לא ברור ושנוי במחלוקת עז, למרות שהמחקר הנוכחי הראה שהפעלת GSK3b משופרת ב-כִּליָהובתאי פילינג בשתן עשויים להיות קשורים להתפתחות או התקדמות של DKD. לדוגמה, בחולדות עם סוכרת הנגרמת על ידי סטרפטוזוטוצין, Lin et al.46 מצאו שעיכוב של GSK3b על ידי מעכב תחרותי אדנוזין טריפוספט (20 Z,30 E)-6- Bromo in indirubin-30 -oxime ( BIO) מוחלשת פרוטאינוריה ושיפור בנגעים גלומרולריים של DN בהיעדר תיקון של היפרגליקמיה, מה שמצביע על כך ש-GSK3b ממלא תפקיד מזיק ב-DN. כמו כן, בחולדות עם סוכרת הנגרמת על ידי סטרפטוזוטוצין, Paeng et al.22 מצאו ממצאים דומים באמצעות BIO והגיעו למסקנה שפעילות מוגברת של GSK3b בתוך פודוציטים במצבי סוכרת קשורה לאפופטוזיס פודוקציטים ואובדן ב-DN. זה תואם מחקר נוסף במבחנה, שבו נמצא ש-GSK3b מתווך דה-דיפרנציאציה ופציעה של פודוציטים לאחר חשיפה למדיום גבוה של גלוקוז.47 להיפך, Mariappan וחב'48 טענו כי ההפעלה של GSK3b במקום זאת משפרת את מחלת הסוכרת.כִּליָהפציעה. במחקר שלהם, עכברים סוכרתיים הנגרמת על ידי סטרפטוזוטוצין טופלו ב-sodium nitroprusside, תורם תחמוצת חנקן המסוגל להפעיל את GSK3b. הם מצאו שאלבומינוריה, היפרטרופיה של הכליות והצטברות מטריצה חוץ-תאית בגלומרולי חולפו כולם בהיעדר שיפור ביתר לחץ דם או היפרגליקמיה. עם זאת, ממצאים אלו סותרים בצורה חדה את הנתונים של עכברי נוק-אין ממוקדי גנים עם GSK3 פעיל באופן מכונן שפיתחו אלבומינוריה ספונטנית ופגיעת פודוציטים.49 כדי ליישב את הממצאים הסותרים, יש לנקוט זהירות ולפרש את הנתונים שנוצרו באמצעות מעכבים או מפעילים כימיים. של GSK3b. למרות ש-BIO אושר שוב ושוב כמעכב מולקולה קטנה סלקטיבית ביותר של GSK3b, נתרן ניטרופרוסיד אינו מפעיל ספציפי של GSK3b, אך ידוע כבעל השפעה המודינמית חזקה,50 אשר עשוי לבלבל את פעולתו להפחתת האלבומינוריה ולהגנה מחדש עכברים סוכרתיים. ביחד, למרות כמה נתונים סותרים, עדויות רווחות נוטות לתמוך בכך שסביר להניח ש-GSK3b קשורכִּליָהפציעהופרוטאינוריה ב-DN. יש להזכיר כמה מגבלות של המחקר הנוכחי. ראשית, הנתונים הפרה-קליניים היו מוגבלים רק לדגמי DB/DB של עכברים. כדי לקבוע את יכולת ההכללה של התפקיד של GSK3b בפגיעה בכליות סוכרתית, יש צורך לאמת את הממצאים במודלים אחרים של DN, כולל דגמי DN מסוג 1. שנית, התצפיות הקליניות כאן נגזרו מקבוצות רטרוספקטיביות של חולי סוכרת עם גודל מדגם מוגבל וזמן מעקב קצר יחסית. אמנם, נדרשים מחקרים בקנה מידה גדול, פרוספקטיבי, רנדומלי, רב-מרכזי כדי לאמת את התצפיות שלנו ולאשר את הכוח של GSK3b בתאים מגולפים בשתן בניבוי התוצאה של DKD.
![Receiver operating characteristic curve analysis of the power of baseline urinary albumin excretion (UAE) or relative glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) activity (phosphorylated glycogen synthase kinase 3b at Y216 [p-GSK3b]/GSK3b) in urinary exfoliated cells for predicting the progression of renal impairment in diabetic patients.](/Content/uploads/2021842169/20211210111332cbda6209b31c4cb483b3aea3a6fafbed.png "Receiver operating characteristic curve analysis of the power of baseline urinary albumin excretion (UAE) or relative glycogen synthase kinase 3b (GSK3b) activity (phosphorylated glycogen synthase kinase 3b at Y216 [p-GSK3b]/GSK3b) in urinary exfoliated cells for predicting the progression of renal impairment in diabetic patients.")
GSK3b, קינאז סרין/תרעונין-חלבון שמור מאוד, רגיש לחיזוק, מעורב מרכזי באיתות אינסולין כמו גם במספר מסלולי אותות תאיים אחרים שהם חיוניים לתהליכים פתופיזיולוגיים הקשוריםכִּליָהפציעה, תיקון והתחדשות. ברקמות הרגישות לאינסולין, כגון הכבד ושריר השלד, GSK3b פעיל בתנאים בסיסיים ומדכא את פעילות הגליקוגן סינתאז.19,28 אינסולין משבית במהירות את GSK3b באמצעות זרחון מעכב בסרין 9, וכתוצאה מכך לביו-סינתזה של גליקוגן. מספר גדל והולך של עדויות מצביע על כך שחוסר ויסות GSK3b קשור לסוכרת מסוג 2.19,29-31 אכן, ישנם נתונים המצביעים על ביטוי יתר של GSK3b והיפראקטיביות בשרירים של חולי סוכרת31-33 וברקמות שומן של עכברים סוכרתיים שמנים.34 יתרה מכך. , ביטוי יתר טרנסגני של GSK3b בשרירי השלד של עכברים גורם לפגיעה בסבילות לגלוקוז, עמידות לאינסולין והיפר-אינסולינמיה.29,35 לעומת זאת, עכברים חסרי GSK3b בשרירי השלד הראו סבילות משופרת לגלוקוז.36 באופן עקבי, GSK3 מסוגלים לעכב ליתיום, כגון מעכבי ליתיום. לחקות אינסולין
פעולה בקווי תאים ורקמות.37 יתרה מכך, בעכברים סוכרתיים שמנים, מעכבי GSK3 שיפרו את הרגישות לאינסולין ואת הומאוסטזיס לגלוקוז.38 הכליה לא נחשבה באופן מסורתי כאיבר מטרה לפעולת אינסולין. עם זאת, ראיות משכנעות לאחרונה העלו כי איתות אינסולין בתאי כליה, במיוחד בפודוציטים, ממלא תפקיד מפתח בשמירה על הומאוסטזיס גלומרולרי וכליות.39–41 איתות אינסולין פגום בפודוציטים, בגלל מחסור או עמידות לאינסולין, הוא כנראה יוזם מרכזי. עבור רבים מהנגעים הפתולוגיים שנצפו ב-DN. יתרה מזאת, מחקרים קליניים הראו שתנגודת לאינסולין נמצאת בקורלציה עם הופעתה וחומרתה של אלבומינוריה אפילו בחולים נורמוטנסיביים שאינם סובלים מסוכרת, מה שמצביע על כך שתנגודת לאינסולין כשלעצמה עלולה לגרום לאלבומינוריה. נוק-אאוט מותנה של הקולטן לאינסולין בפודוציטים גלומרולריים, פיתח אלבומינוריה ונגעים גלומרולריים המשחזרים את DN, למרות היעדר היפרגליקמיה או סוכרת.41 לעומת זאת, בחיות סוכרתיות, גורמים רגישים לאינסולין מסוגלים להאט את התקדמות ה-DN ללא תלות בשליטה גליקמית.43 ממצאים אלו מצביעים על כך שאיתות אינסולין מווסת את תפקוד הפודוציטים ללא תלות ברמות הגלוקוז בדם. עם זאת, כמתמר המפתח של מסלול איתות האינסולין, תפקידו של GSK3b בפתוגנזה והתקדמות של DN לא נחקר במידה רבה.
בכליה, GSK3b מתבטא בעיקר בפודוציטים, ובמידה פחותה, בתאי mesangial ו- endothelial in glomerulus20,21 ומתבטא באופן נרחב על ידי תאי צינורי כליה. ישנם נתונים מקבוצות שלנו ושל קבוצות אחרות המצביעים על כך ש-GSK3b מתווך פגיעה אוטונומית של פודוציטים על ידי שילוב של מספר מסלולי איתות פתיים של פודוציטים. גלומרולופתיות שונות שאינן סוכרתיות.21 יתר על כן, במחלות כרוניות מתקדמתכִּליָהמַחֲלָה, GSK3b נמצא כמאפנן של פגיעה צינורית וכלייתית אינטרסטיציאלית. עם זאת, האם וכיצד GSK3b מעורב ב-DN לא היה ברור ושנוי במחלוקת עז, למרות שהמחקר הנוכחי הראה שהפעלה משופרת של GSK3b בכליות ובתאים מגולפים בשתן עשויה להיות קשורה להתפתחות או התקדמות של DKD. לדוגמה, בחולדות עם סוכרת הנגרמת על ידי סטרפטוזוטוצין, Lin et al.46 מצאו שעיכוב של GSK3b על ידי מעכב תחרותי אדנוזין טריפוספט (20 Z,30 E)-6- Bromo in indirubin-30 -oxime ( BIO) מוחלשת פרוטאינוריה ושיפור הנגעים הגלומרולריים של DN בהיעדר תיקון של היפרגליקמיה, מה שמצביע על כך ש-GSK3b ממלא תפקיד מזיק ב-DN. כמו כן, בחולדות עם סוכרת הנגרמת על ידי סטרפטוזוטוצין, Paeng et al.22 מצאו ממצאים דומים באמצעות BIO והגיעו למסקנה שפעילות מוגברת של GSK3b בתוך פודוציטים במצבי סוכרת קשורה לאפופטוזיס פודוקציטים ואובדן ב-DN. זה תואם מחקר נוסף במבחנה, שבו נמצא ש-GSK3b מתווך דה-דיפרנציאציה ופציעה של פודוציטים לאחר חשיפה למדיום גבוה של גלוקוז.47 להיפך, Mariappan וחב'48 טענו כי ההפעלה של GSK3b במקום זאת משפרת את מחלת הסוכרת.כִּליָהפציעה. במחקר שלהם, עכברים סוכרתיים הנגרמת על ידי סטרפטוזוטוצין טופלו ב-sodium nitroprusside, תורם תחמוצת חנקן המסוגל להפעיל את GSK3b. הם מצאו שאלבומינוריה, היפרטרופיה של הכליות והצטברות מטריצה חוץ-תאית בגלומרולי חולפו כולם בהיעדר שיפור ביתר לחץ דם או היפרגליקמיה. עם זאת, ממצאים אלו סותרים בצורה חדה את הנתונים של עכברי נוק-אין ממוקדי גנים עם GSK3 פעיל באופן מכונן שפיתחו אלבומינוריה ספונטנית ופגיעת פודוציטים.49 כדי ליישב את הממצאים הסותרים, יש לנקוט זהירות ולפרש את הנתונים שנוצרו באמצעות מעכבים או מפעילים כימיים. של GSK3b. למרות ש-BIO אושר שוב ושוב כמעכב מולקולה קטנה סלקטיבית ביותר של GSK3b, נתרן ניטרופרוסיד אינו מפעיל ספציפי של GSK3b, אך ידוע כבעל השפעה המודינמית חזקה,50 אשר עשוי לבלבל את פעולתו להפחתת האלבומינוריה ולהגנה מחדש עכברים סוכרתיים. ביחד, למרות כמה נתונים סותרים, עדויות רווחות נוטות לתמוך בכך שסביר להניח ש-GSK3b קשורכִּליָהפציעהופרוטאינוריה ב-DN. כמה מגבלות של
צריך להזכיר את המחקר הנוכחי. ראשית, הנתונים הפרה-קליניים היו מוגבלים רק למודלים עכבריים dB/dB. כדי לקבוע את יכולת ההכללה של התפקיד של GSK3b בפגיעה בכליות סוכרתית, יש צורך לאמת את הממצאים במודלים אחרים של DN, כולל דגמי DN מסוג 1. שנית, התצפיות הקליניות כאן נגזרו מקבוצות רטרוספקטיביות של חולי סוכרת עם גודל מדגם מוגבל וזמן מעקב קצר יחסית. אמנם, נדרשים מחקרים בקנה מידה גדול, פרוספקטיבי, רנדומלי, רב-מרכזי כדי לאמת את התצפיות שלנו ולאשר את הכוח של GSK3b בתאים מגולפים בשתן בניבוי התוצאה של DKD.
לסיכום, המחקרים שלנו הוכיחו כי הביטוי והפעילות הכלייתית של GSK3b מוגברים ב-DN ניסיוני וקליני. פעילות GSK3b בתאי פילינג בשתן עשויה לשמש כסמן ביולוגי חדש לניבוי התקדמות DN. הנתונים שלנו עשויים לסלול את הדרך לבדיקה רחבת היקף ומעמיקה של הערך ש-GSK3b בתאים מגולפים בשתן עשוי לשמש כסמן ביולוגי פרוגנוסטי של DN.
שיטות
מחקרים בבעלי חיים
מחקרים בבעלי חיים אושרו על ידי המוסד לטיפול בבעלי חיים והוועדה, והם תואמים את תקנות משרד החקלאות האמריקאי ואת המדריך של המכון הלאומי לבריאות לטיפול בבני אדם ושימוש בחיות מעבדה. עכברי DB/DB זכרים וחברי המלטה בשליטה ב-db/m בני 6 שבועות נרכשו ממרכז המחקר לבעלי חיים של אוניברסיטת נאנג'ינג (Nanjing, סין) ושוכנו במתקן החיות המרכזי של אוניברסיטת Zhengzhou. כל העכברים הוזנו באופן חופשי, ו-8 עד 10 עכברים נהרגו בגילאים המצוינים. דגימות שתן ודם נדגמו בנקודות הזמן המצוינות. לאחר ההרג, נקצרו כליות לבדיקה נוספת. רמות אלבומין בשתן נמדדו באמצעות ערכת בדיקת כימות של חומרי ספיגה חימוניים (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX). רמות קריאטינין בשתן נקבעו באמצעות ערכת בדיקת קריאטינין (BioAssay Systems, Hayward, CA).
תרבית תאים
פודוציטים עכברים שהונצחו באופן מותנה בין מעברים 21 ו-25 תורבו במדיום Roswell Park Memorial Institute 1640 בתוספת של 10 אחוז נסיוב בקר עוברי בתנאים מתירים כמתואר קודם.22 תת-תרבויות של הפודוציטים היו נתונים לתנאים לא מתירים כדי לגרום להבדלה במשך 14 ימים. לאחר מכן נחשף לסביבה/מדיום תרבות נורמלי שהכיל 5 מ"מ גלוקוז, סביבה סוכרתית המורכבת מגלוקוז (25 מ"ל) וגורם גדילה מתמיר b1 (2 ננוגרם/מ"ל), או מדיום בקרת אוסמולאליות גבוהה המכיל 20 מ"מ מניטול עבור 48 שעה (ות. תאי אפיתל צינוריים פרוקסימליים של עכברים ותאי עכבר גלומרולריים נשמרו ב-Dulbecco's Modified Eagle's medium/F12 בתוספת של 5% סרום בקר עוברי. תאים צופו ב-w70 אחוז התכנסות במדיום המכיל 5 אחוזים סרום בקר עוברי למשך 24 שעות ולאחר מכן עברו הרעבה בסרום למשך 24 שעות נוספות ולאחר מכן חשיפה לסביבה/מדיום תרבות נורמלי שהכיל 5 מ"מ גלוקוז, סביבה סוכרתית המורכבת מרמה גבוהה של סוכרת. גלוקוז (25 מ"מ) וגורם גדילה מתמיר b1 (2 ננוגרם/מ"ל), או מדיום בקרת אוסמולאליות גבוה המכיל 5 מ"מ גלוקוז ו-20 מ"מ מניטול למשך 48 שעות. כדאיות התא הוערכה על ידי אי הכללת טריפן כחול. בנקודות הזמן המצוינות, תאים תוקנו או נאספו תאי תאים לחקירה נוספת.
טרנספקציה חולפת של וקטורים
הווקטורים המקודדים לוקטור ריק או להמגלוטינין (HA) – המוטנט פעיל באופן קונסטיטטיבי (S9A) (S9A-GSK3b-HA/pcDNA3) של GSK3b סופקו על ידי ד"ר גייל VW Johnson (Birmingham, AL) והועברו לפודוציטים מתורבתים, תאים mesangial, ותאי אפיתל צינורי באמצעות Lipofectamine 2000 (Life Technologies, Carlsbad, CA) כפי שתואר קודם לכן.44 יעילות טרנספקציה אומתה על ידי צביעה אימונופלואורסצנטית או אימונובלוטינג עבור HA לאחר 12 שעות. לאחר מכן נאספו תאים והוכנו לניתוח כתם Western או מבחני אחרים.
RNAi
מאגר של 3 עכברים ספציפיים ל-GSK3b דופלקסים של RNA קטנים ומפריעים-50-CUUGUCCUGUAGAACUUUCtt-30, 50-AUGAUCCAUUUCCAAUCACTt-30 ו-50-AUACCGCAGUCGGACUAUGtt-30 — תוכננו וסונתזו בהתאם לרצף הקידוד המלא של הגן GSK3b העכברי (הצטרפות ל-GenBank no.BC060743.1). בנוסף, רצף RNA קטן ומפריע (50-GCGAGUAGCGCUAGGAAGUTt-30) ללא דמיון ברצף לרצף גנים ידוע כלשהו מעכברים, חולדות או בני אדם שימש כבקרת RNAi. היעילות של השתקת גנים בתיווך lipofectamine (Invitrogen, Carlsbad, CA) הוערכה על ידי ניתוח אימונובלוט עבור GSK3b. דיכוי משביע רצון של ביטוי חלבון GSK3b נצפה בפודוציטים מתורבתים, תאים מנזגיאליים ותאי אפיתל צינורי 24 שעות לאחר RNAi. לאחר מכן התאים הועברו לסביבה רגילה/מדיום תרבותי, סביבה סוכרתית או מדיום בקרת אוסמולאליות גבוהה למשך 48 שעות כפי שצוין לעיל לפני עיבוד התאים לבדיקות נוספות.
מחקרים קליניים
החלק הקליני של מחקר זה תאם את ההנחיות האתיות של הצהרת הלסינקי משנת 1975 ואושר על ידי מועצת הביקורת המוסדית של בית החולים המסונף הראשון של אוניברסיטת Zhengzhou. משתתפי מחקר אנושיים לא גויסו במיוחד למחקר זה. כל הנתונים הקליניים נאספו על ידי סקירת טבלאות רטרוספקטיבית ועל ידי בדיקה של קטעי רקמה שנשמרו בארכיון או דגימות שתן. דגימות מוגזמות או מושלכות של ביופסיה של כליה, כמו גם דגימות שתן מפוצלות, נאספו באופן שגרתי במכון לנפרולוגיה של בית החולים הראשון של אוניברסיטת ג'נגג'ואו. רקמות ביופסיית כליות מגוונות בארכיון לא מזוהות עם פורמלין מקובע-פרפין ממטופלים בשלבים שונים של DN נבחרו באקראי לבדיקה. דגימות כליה נוספות ללא נגעים היסטומורפולוגיים נרכשו מכליות שהושלכו להשתלה בגלל חריגות בכלי הדם או מרקמות ביופסיה טרום השרשה ושימשו כבקרות רגילות. עבור מחקר העוקבה הרטרוספקטיבי, בסך הכל 127 חולים עם סוכרת מסוג 2, אשר היו במעקב מאז 2010 עם דגימות של שתן מפוצל, נבדקו בדיעבד להכללה במחקר זה. המטופלים שנחקרו היו בגילאים בין 29 ל-80 שנים ואובחנו עם סוכרת מסוג 2 על פי הקריטריונים של האגודה האמריקאית לסוכרת. קריטריוני ההדרה כללו אובדן מעקב, מידע לא מספק,כִּליָהתִפקוּד לָקוּי, or overt proteinuria at baseline, or other superimposed kidney diseases such as acute kidney injury or glomerulopathies. Finally, 60 patients have enrolled in this study for further assessment. All patients had been followed up for >5 שנים. במהלך המעקב השגרתי תועדו נתונים דמוגרפיים, כמו גם פרמטרים קליניים, לרבות מין, גיל, מחלות נלוות, תרופות, משך סוכרת, לחץ דם, רמה גליקמית, רמת קריאטינין בסרום, נתוני ניתוח שתן, UAE ו-eGFR. התוצאה הקלינית לאחר מעקב של 5 שנים הייתה נוכחות או היעדר התקדמות של ליקוי כליות, שהוגדרה כירידה של 25% ב-eGFR או התקדמות של אלבומינוריה, כפי שמצוין על ידי הסלמה של חומרת האלבומינוריה לאורך שלבים קליניים שונים של DN, כלומר נומואלבומינוריה, מיקרואלבומינוריה, מאקרואלבומינוריה או פרוטאינוריה גלויה. כל החולים סיפקו הסכמה מדעת בכתב.
הערכת מורפולוגיה של הכליות וניתוח אימונוהיסטוכימיה
בלוקים של רקמת כליה של עכבר עם פורמלין משובצים בפרפין נחתכו לקטעים של 3- מ"מ. עבור היסטולוגיה כללית, קטעים עובדו לצביעה מחזורית חומצה-שיף. צביעה אימונוהיסטוכימית עבור GSK3b ו-p-GSK3b בוצעה באמצעות ערכת VECTASTAIN ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA) כפי שתואר קודם לכן.20 כביקורת שלילית, הנוגדן הראשוני הוחלף בסרום לא אימוני מאותו מין; לא התרחשה הכתמה. המאפיינים המורפולוגיים של כל המקטעים הוערכו על ידי צופה בודד באופן עיוור בסיוע פתולוג כליות.
צביעה אימונופלואורסצנטית
תאים מתורבתים או קטעי קריוסטט קפואים נקבעו ונצבעו בנוגדנים ראשוניים ולאחר מכן מריחת הנוגדנים המשניים המצומדים של Alexa Fluor (Invitrogen). כביקורת שלילית, נוגדנים ראשוניים הוחלפו ב-IgG פרה-אימונית מאותו מין; לא התרחשה הכתמה. לבסוף, קטעים נצבעו נגדי ב-40,6-diamidino-2-פנילינדול או יודיד פרופידיום והותקנו במדיום הרכבה VECTASHIELD (מעבדות וקטור). עבור מיקרוסקופ פלואורסצנטי FL, כל הקטעים נותחו בו זמנית כדי לא לכלול חפצים עקב דעיכה משתנה של הפלואורוכרום. החתכים נבדקו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי של Olympus FL מצויד במצלמה דיגיטלית Spot II (אולימפוס, טוקיו, יפן). עבור צביעה בצבע כפול, תמונות נרכשו ברצף כדי למנוע הפרעות צבע. תוכנת ImageJ (המכונים הלאומיים לבריאות, Bethesda, MD) שימשה עבור עיבוד שלאחר התמונות, למשל, קנה מידה, מיזוג וניתוח קולקאליזציה.
מורפומטריה ממוחשבת
תמונות של צביעת אימונוהיסטוכימיה נלכדו ועברו דיגיטציה באמצעות מערכת ניתוח תמונה ממוחשבת המורכבת ממצלמה דיגיטלית של התקן מצמד מטען ברזולוציה גבוהה המחוברת למיקרוסקופ (Olympus BX41, Olympus) ולמחשב. התמונות הוצגו ברזולוציית פיקסל של 1024,768 פיקסלים (רזולוציה מרחבית, 0.24 מ"מ/פיקסל). עבור תמונות של צביעת אימונוהיסטוכימיה של רקמות כליה אנושיות, תוכנת ImageJ שימשה לפילוח תמונה, הקמת סף ומדידות עוצמת האות. תיקונים ידניים בוצעו לפי הצורך. בסך הכל, 10 glomeruli או 10 שדות tubulointerstitial אקראיים נדגמו לניתוח מורפומטרי, והנתונים הסופיים הובאו כערך של צפיפות הפיקסלים המשולבת ביחס לקבוצת הביקורת.
ניתוח אימונובלוט מערבי
תאים מתורבתים עברו lysed;כִּליָהרקמותאו גלומרולי כליות מבודדים הומוגגו במאגר מבחן רדיואימוניות בתוספת מעכבי פרוטאז, ודגימות עובדו לניתוח אימונובלוט. לצורך ניתוח אימונובלוט של המספר המצומצם של תאים מפולפים בשתן, הפרוטוקול של הכתם המערבי שונה כפי שתואר קודם על ידי שימוש בג'לים NuPAGE Bis-Tris בעלי הביצועים הגבוהים (Invitrogen) וממברנות העברה באיכות גבוהה.25 אימונובלוטינג מעודן יכול לזהות חלבונים בעלי ביטוי מתון בפחות מ-1000 תאים. הנוגדנים נגד GSK3b, פיברונקטין, קולגן IV, אקטין וגליצראלדהיד-3-פוספט דהידרוגנאז (GAPDH) נרכשו מ-Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA); אלה נגד synaptopodin נרכשו מ-PROGEN Biotechnik GmbH (Heidelberg, גרמניה); ואלה נגד ZO-1 ו-p-GSK3b נרכשו מ- Cell Signaling Technology (Danvers, MA).
ניתוח סטטיסטי
All in vitro studies were repeated 3 to 6 times. For immunoblot analysis, bands were scanned and the integrated pixel density was determined using a densitometer and the ImageJ analysis program, version 1.48 (National Institutes of Health). Data were expressed as mean -SD or median (interquartile range). All included patients had baseline data. Patients with missing data or lost to follow-up were excluded from this study. Continuous variables were analyzed as appropriate by using the t-test, Mann-Whitney U test, or 1-way analysis of variance (ANOVA) followed by the Student-NewmanKeuls test if there were 3 comparisons or by the Scheffé test if there were >3 השוואות. נתונים קטגוריים הושוו בין קבוצות באמצעות מבחן הצ'י ריבוע. ניתוח רגרסיה ליניארי יושם כדי לבחון קשרים אפשריים בין 2 פרמטרים. ניתוחי רגרסיה פרופורציונליים של סיכונים חד משתנים Cox בוצעו כדי להעריך את הקשר בין המשתנים הרלוונטיים והסיכון להתקדמות של ליקוי כליות, ולאחר מכן ניתוח רב-משתני ביחס למבלבלים פוטנציאליים. בוצע ניתוח עקומת ROC ונמדדו האזורים מתחת לעיקומות ROC כדי לנתח את הכוח של משתנים מסוימים בניבוי התקדמות הפרעות הכלייתית בחולי סוכרת. משתנים לא מבוזרים נורמליים, כגון איחוד האמירויות הערביות, הומרו על ידי לוגריתם כדי להשיג נורמליות עבור ניתוחי רגרסיה של פרופורציית Cox ניתוחי עקומת ROC. כל הניתוחים הסטטיסטיים בוצעו באמצעות PSS גרסה 22 (IBM Corporation, Armonk, NY). ערכי P<0.05 in2-tailed="" tests="" were="" considered="" statistically="" significant="" in="" all="">
חשיפה
כל המחברים הצהירו שאין להם אינטרסים מתחרים.
תודות
חלק ממחקר זה הוצג כמצגת בעל פה ב- KidneyWeek 2016: American Society of Nephrology Annual Meeting, 15-20 בנובמבר 2016, שיקגו, IL. RG נתמכה בחלקה על ידי הקרן לבריאות. XL נתמכה על ידי מלגת מחקר כדי לקבל הכשרה חוץ-מוסרית. ZL נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין במענקים U1604284, 81770672 ו-81873612. למממנים לא היה תפקיד בתכנון וביצוע המחקר, האיסוף והפרשנות של הנתונים, או הכנה ואישור של כתב היד.
תרומות מחבר
RG הגה את הרעיונות הרעיוניים. XL, ZL ו-RG תרמו לתכנון המחקר. XL, PW, BC, YG, AYG ו-BF ביצעו את הניסויים בתרבית תאים. XL ו-ZL ביצעו את הניסויים בבעלי חיים ואספו את הנתונים מחולי סוכרת. XL, LJW, DKM, LDD, ZL, ותרם לדיון ולפרשנות של התוצאות. לקח את ההובלה בכתיבת כתב היד. XL, BC ו-BF תרמו לעריכת כתבי יד. כל המחברים הסכימו שכל הרעיון והבעלות על יצירה זו שייכים ל-RG. כל המחברים אישרו את כתב היד הסופי.
חומר משלים
שיטות משלימות.
טבלה S1. מאפיינים של נבדקי ביקורת וחולים עם נפרופתיה סוכרתית, מרובדים לפי מחלקות היסטולוגיות של נפרופתיה סוכרתית. טבלה S2. נתונים דמוגרפיים, קליניים ומעבדתיים בסיסיים של העוקבה הרטרוספקטיבית של חולי סוכרת בשלב מוקדם ללא סימנים של DKD. טבלה S3. נתונים דמוגרפיים, קליניים ומעבדתיים של חולי סוכרת מסוג 2 בשלב מוקדם, מרובדים בהתאם לתוצאות הכליות שלהם לאחר 5 שנות מעקב. איור S1. הפעילות הכלייתית המוגברת של GSK3b מנבאת את ההתפתחות והחומרה שלסוכרתיכִּליָהמַחֲלָהבעכברי db/db. עכברי db/db ו-db/m זכרים היו במעקב בין גיל 4 ל-13 שבועות. (א) נדגמו דם מעכברים שאינם בצום בגיל 4 ו-7 שבועות, ורמות הגלוקוז בפלזמה נבדקו. *P < 0.001="" לעומת="" עכברים="" db/m="" בגיל="" 7="" שבועות.="" n="" ¼="" 15-18.="" (ב)="" שתן="" נקודתי="" נדגם="" בגיל="" 4,="" 7,="" 10="" ו-13="" שבועות="" ונתון="" לבדיקת="" אלבומין="" בשתן="" וקריאטינין="" בשתן="" לקביעת="" יחסי="" אלבומין-קריאטינין="" בשתן="" (uacrs).="" *p=""><0.001 לעומת="" עכברים="" db/m="" בגיל="" 10="" שבועות="" (n="" ¼="" 15-18);="" #p="">< 0.001="" לעומת="" עכברים="" db/m="" בגיל="" 13="" שבועות.="" n="" ¼="" 15-18.="" (ג)="" כל="" העכברים="" קיבלו="" ביופסיה="" כלייתית="" פתוחה="" בגיל="" 7="" שבועות="" ודגימות="" ביופסיה="" עובדו="" לניתוח="" אימונובלוט="" עבור="" p-gsk3b,="" gsk3b="" ו-gapdh.="" (ד)="" אימונובלוטים="" עברו="" ניתוח="" דנסימטרי.="" השפע="" היחסי="" של="" gsk3b="" ו-p-gsk3b="" נקבע="" כיחסים="" דנסימטריים="" של="" מולקולה/gapdh="" בהתאמה="" בהתאם="" לשינויים="" בקפלים="" בהשוואה="" לעכברי="" db/m="" בקרה.="" הפעילות="" היחסית="" של="" gsk3b="" חושבה="" כיחסים="" של="" p="" gsk3b="" ל-gsk3b="" כקפלים="" של="" עכברי="" ביקורת="" db/m.="" (ה)="" ניתוח="" רגרסיה="" ליניארי="" הדגים="" מתאם="" חיובי="" מובהק="" סטטיסטית="" בין="" פעילות="" כלייתית="" gsk3b="" בגיל="" 7="" שבועות="" בעכברי="" db/db="" לבין="" התפתחות="" וחומרת="" אלבומינוריה,="" סימן="" היכר="">סוכרתיכִּליָהמַחֲלָהבגיל 13 שבועות. R ¼ 0.699; P ¼ 0.0{{20}}1. (ו) ניתוח עקומת אופייני להפעלת המקלט הוכיח שפעילות כלייתית GSK3b בשלבים מוקדמים של סוכרת (גיל 7 שבועות) מספקת דיוק ועוצמה מצוינים בניבוי התפתחות אלבומינוריה ו-DKD בגיל 13 שבועות בעכברי db/db. איור S2. עמידות לאינסולין וגלוקוז סביבתי גבוה מפעילים באופן סינרגטי את GSK3b בתאי כליה. (א) פודוציטים של עכברים מתורבתים, (B) תאים גלומרולריים בשתן (MMCs) ו-(C) תאי אפיתל צינורי כליות (TECs) הועברו טרנספקטים באוליגונוקלאוטידים siRNA מקושקשים (siCon) או siRNA אוליגונוקלאוטידים (siIRb) ספציפיים לאיזו-b. הקולטן לאינסולין (IRB) למודל של מצב העמידות לאינסולין במבחנה. לאחר מכן התאים נחשפו במשך 48 שעות לסביבה הרגילה המכילה גלוקוז (NG) או לסביבה הסוכרתית המכילה גלוקוז גבוהה (HG). ליזטים של תאים נאספו ועברו ניתוח אימונובלוט עבור IRB, p-GSK3b, GSK3b ו-GAPDH ואחריו ניתוח דנסימטרי של הכתם. *P <0.01 לעומת="" ביטוי="" irb="" בתאים="" שטופלו="" ב-sicon="" שנחשפו="" לאותו="" סביבה="" (n="" ¼="" 3),="" #p="">< 0.05="" לעומת="" אותו="" ביטוי="" חלבון="" בקבוצת="" siirb="" þ="" ng="" או="" sicon="" þ="" hg="" (n="" ¼="" 3),="" &p="">< 0.05="" לעומת="" אותו="" ביטוי="" חלבון="" בקבוצת="" þ="" hg="" או="" siirb="" þ="" ng="" השנייה="" (n="" ¼="" 3).="" איור="" s3.="" רמות="" ביטוי="" של="" gsk3b="" mrna="" בדגימות="" כליות="" אנושיות="" שנרכשו="" מתורמי="" חיים="" בריאים="" וחולים="" עם="" נפרופתיה="" סוכרתית.="" הנתונים="" נגזרו="" מ-www.nephroseq.org="" על="" בסיס="" מערך="" הנתונים="" ju="" ckd="" glom51="" והובאו="" כעוצמה="" חציונית="" במרכז="" log2.="" איור="" s4.="" פעילות="" מוגברת="" של="" gsk3b="" בתאי="" פילינג="" בשתן="" שנאספו="" מחולי="" סוכרת="" בשלב="" מוקדם="" מנבאת="" התפתחות="" של="" מחלת="" כליות="" סוכרתית.="" (א,="" ב)="" זיהוי="" של="" gsk3b="" ו-gsk3b="" מופעל="" בתאים="" מגולפים="" בשתן="" שנאספו="" מחולי="" סוכרת="" בשלב="" מוקדם="" (pts)="" ובקרות="" בריאות="" (ctrls).="" תאים="" מגולפים="" בשתן="" נאספו="" והוסרו.="" ליזטים="" של="" תאים="" עובדו="" לניתוח="" אימונובלוט="" עבור="" gsk3b,="" p-gsk3b="" ו-gapdh.="" (ג)="" אימונובלוטים="" עברו="" ניתוח="" דנסימטרי.="" השפע="" היחסי="" של="" gsk3b="" ו-p-gsk3b="" נקבע="" כיחסים="" דנסימטריים="" של="" מולקולה/gapdh="" בהתאמה="" בהתאם="" לשינויים="" בקפלים="" בהשוואה="" לבקרות="" (ctrls).="" הפעילות="" היחסית="" של="" gsk3b="" חושבה="" כיחסים="" של="" p-gsk3b="" ל-gsk3b="" כקפלים="" של="" בקרה="" רגילה="" (ctrls).="" (ד)="" ניתוח="" עקומת="" אופייני="" להפעלת="" המקלט="" הוכיח="" שפעילות="" gsk3b="" היחסית="" (יחס="" p-gsk3b/gsk3b)="" בתאים="" מגולפים="" בשתן="" שנאספו="" מחולי="" סוכרת="" בשלב="" מוקדם="" מספקת="" דיוק="" מצוין="" בניבוי="" התפתחות="">מחלת כליות סוכרתיתבעוד 5 שנים, כאשר השטח מתחת לעקומה (AUC) הוא 0.886.
הפניות
1. Umanath K, Lewis JB. עדכון על נפרופתיה סוכרתית: תכנית הליבה 2018. Am J Kidney Dis. 2018;71:884–895.
2. Gregg EW, Li Y, Wang J, et al. שינויים בסיבוכים הקשורים לסוכרת בארצות הברית, 1990-2010. N Engl J Med. 2014;370:1514–1523.
3. Haller H, Ito S, Izzo JL Jr, et al. אולמסארטן לעיכוב או מניעה של מיקרואלבומינוריה בסוכרת מסוג 2. N Engl J Med. 2011;364:907–917.
4. Schena FP, Gesualdo L. מנגנונים פתוגנטיים של נפרופתיה סוכרתית. J Am Soc Nephrol. 2005;16(ספק 1):S30–S33.
5. Ritz E, Zeng XX, Rychlik I. ביטוי קליני והיסטוריה טבעית של נפרופתיה סוכרתית. תרומה נפרול. 2011;170:19–27.
6. Holman RR, Paul SK, Bethel MA, et al. 10-מעקב שנה אחר בקרת גלוקוז אינטנסיבית בסוכרת מסוג 2. N Engl J Med. 2008;359:1577–1589.
7. פרקינס BA, Ficociello LH, Ostrander BE, et al. מיקרואלבומינוריה והסיכון לירידה בתפקוד כליות פרוגרסיבי מוקדם בסוכרת מסוג 1. J Am Soc Nephrol. 2007;18:1353–1361.
8. Koye DN, Magliano DJ, Reid CM, et al. סיכון להתקדמות של CKD נורמואלבומינורי למחלת כליות סופנית באנשים עם סוכרת: מחקר CRIC (Cronic Renal Insufficiency Cohort). Am J Kidney Dis. 2018;72:653–661.
9. Caramori ML, Fioretto P, Mauer M. הצורך במנבאים מוקדמים של סיכון לנפרופתיה סוכרתית: האם קצב הפרשת אלבומין מספיק? סוכרת. 2000;49:1399–1408.
10. Caramori ML, Fioretto P, Mauer M. שיעור סינון גלומרולרי נמוך בחולי סוכרת נורמואלבומינורי מסוג 1: אינדיקטור לנגעים גלומרולריים מתקדמים יותר. סוכרת. 2003;52:1036–1040.
11. קרולבסקי א.ס. ירידה מתקדמת בכליות: הפרדיגמה החדשה של נפרופתיה סוכרתית בסוכרת מסוג 1. טיפול בסוכרת. 2015;38:954–962.
12. Robles NR, Villa J, Gallego RH. נפרופתיה סוכרתית לא חלבונית. J Clin Med. 2015;4:1761–1773.
13. Adler AI, Stevens RJ, Manley SE, et al. התפתחות והתקדמות של נפרופתיה בסוכרת מסוג 2: מחקר סוכרת פרוספקטיבי בבריטניה (UKPDS 64). כליות אינט. 2003;63:225–232.
14. Gluhovschi C, Gluhovschi G, Petrica L, et al. סמנים ביולוגיים בשתן בהערכת נפרופתיה סוכרתית מוקדמת. J Diabetes Res. 2016;2016: 4626125.
15. Doi T, Moriya T, Fujita Y, et al. IgG4 ו-Smad1 בשתן הם סמנים ביולוגיים ספציפיים לשינויים מבניים ותפקודיים של הכליה בשלבים המוקדמים של נפרופתיה סוכרתית. סוכרת. 2018;67:986–993.
16. De S, Kuwahara S, Hosojima M, et al. הפרשת מגלין בשתן בתיווך אקוציטוזיס באורך מלא קשורה לפתוגנזה של נפרופתיה סוכרתית. סוכרת. 2017;66:1391–1404.
17. Xu W, Ge Y, Liu Z, et al. גליקוגן סינתאז קינאז 3b מכתיב את תנועתיות הפודוציטים ותחלופה של הידבקות מוקדית על ידי אפנון פעילות הפקסילין: השלכות על ההשפעה המגנה של ליתיום במינון נמוך בפודוציטופתיה. אם ג'יי פאתול. 2014;184:2742–2756.
18. Ali A, Hoefiich KP, Woodgett JR. גליקוגן סינתאז קינאז-3: תכונות, פונקציות וויסות. Chem Rev. 2001;101:2527–2540.
19. Beurel E, Grieco SF, Jope RS. גליקוגן סינתאז קינאז-3 (GSK3): ויסות, פעולות ומחלות. Pharmacol Ther. 2015;148:114–131.
20. Li C, Ge Y, Dworkin L, et al. האיזופורם b של GSK3 מתווך פגיעה אוטונומית של פודוציטים בגלומרולופתיה פרוטאינורית. ג'יי פאתול. 2016;239:23.
