3.4 מיפוי של מטבוליטים דיפרנציאליים הקשורים ל-phenylethanoid glycosides (PhGs) מסלול ביוסינתזה

בעבר, שילבנו ניתוח טרנסקריפטומי ומטבולומי כדי לחקור את המסלולים הביוסינתטיים של PhGs בגבעולים הבשרניים של C. deserticola.16 כדי לגלות את המנגנון המולקולרי המוביל להבדל בחילוף החומרים בין התפרחת לגזע העסיסי, שחזרנו את המסלול הביוסינתטי של PhGs. (איור 4). הוא הכיל בעיקר ארבעה מסלולי KEGG: "ביוסינתזה של פניל ​​פרופנואיד (Ko00940)", "ביוסינתזה של פנילאלנין, טירוזין וטריפטופן (Ko00400)", "מטבוליזם של טירוזין (Ko00350)" ו"מטבוליזם של פנילאלנין (Ko00360)". התוצאות באיור 4 הראו שהתכולה היחסית של תרכובות במסלול הביוסינתזה של PhGs השתנתה עם הרקמות (תפרחות וגבעולים עסיסיים) וסוגים אקולוגיים (אדמה מלוחה-אלקלית, שטח עשב ואדמה חולית) של C. deserticola. באקו-טיפוס האקו-טיפ, התכולה היחסית של טירוזין וחומצה קינמית הייתה מווסתת בגבעולים עסיסיים. הן באדמות מלוחות-אלקליות והן באקו-טיפוס של עשב, התכולה היחסית של חומצת קפאית הייתה מווסתת בתפרחת. ניתוח מטבולום זיהה שלושה גליקוזידים של פנילאתנואידים (PhGs), כלומר isoacteoside, acteoside ו-2′-acetylacteoside, והתכולה היחסית שלהם הייתה הגבוהה ביותר בקבוצת A2.

על פי מחקרים רלוונטיים, סיסטאנצ'ה הוא עשב נפוץ המכונה "עשב הנס שמאריך חיים". המרכיב העיקרי שלו הוא cistanoside, בעל השפעות שונות כמו נוגד חמצון, אנטי דלקתי וקידום תפקוד חיסוני. המנגנון בין cistanche והלבנת העור טמון בהשפעה נוגדת החמצון של cistanche glycosides. המלנין בעור האדם מיוצר על ידי חמצון של טירוזין המזרז על ידי טירוזינאז, ותגובת החמצון דורשת השתתפות של חמצן, ולכן הרדיקלים החופשיים בחמצן בגוף הופכים לגורם חשוב המשפיע על ייצור המלנין. Cistanche מכיל ציסטאנוסיד, שהוא נוגד חמצון ויכול להפחית את יצירת הרדיקלים החופשיים בגוף, ובכך לעכב את ייצור המלנין.

לחץ על תוסף Cistanche Tubulosa להלבנה

【למידע נוסף: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

בנוסף, ל-cistanche יש גם תפקיד של קידום ייצור קולגן, מה שיכול להגביר את הגמישות והברק של העור ולסייע בשיקום תאי עור פגומים. Cistanche Phenylethanol Glycosides הם בעלי השפעה מווסתת משמעותית על פעילות טירוזינאז, וההשפעה על טירוזינאז הוכחה כעיכוב תחרותי והפיך, מה שיכול לספק בסיס מדעי לפיתוח וניצול מרכיבי ההלבנה ב- Cistanche. לכן, ל-cistanche יש תפקיד מפתח בהלבנת העור. זה יכול לעכב את ייצור המלנין כדי להפחית שינוי צבע וקהות; ולקדם את ייצור הקולגן כדי לשפר את גמישות העור וזוהר. בשל ההכרה הרווחת בהשפעות אלו של סיסטאנצ'ה, מוצרי הלבנת עור רבים החלו להחדיר מרכיבים צמחיים כגון סיסטאנצ'ה כדי לענות על דרישת הצרכנים, ובכך להגדיל את הערך המסחרי של סיסטאנצ'ה במוצרי הלבנת עור. לסיכום, תפקידו של cistanche בהלבנת העור הוא מכריע. השפעתו נוגדת החמצון והאפקט מייצר הקולגן יכולים להפחית את שינוי הצבע והקהות, לשפר את גמישות העור והברק, וכך להשיג אפקט הלבנה. כמו כן, היישום הרחב של Cistanche במוצרי הלבנת עור מוכיח שאי אפשר לזלזל בתפקידו בערך המסחרי.

3.5 ניתוח עגינה מולקולרית של הרכיבים הפעילים העיקריים של C. deserticola

45 יעדי המחלה הקשורים שנאספו היו עוגנו מולקולרית עם 127 תרכובות של C. deserticola. בהתבסס על תוצאות השוואת ספרות ועגינה מולקולרית, 15 סימנים ו-88 תרכובות נבדקו לבסוף (טבלאות S2 ו-S3). טבלה S2 הראתה מידע על מטרות, מחלות וגנים חזויים. כדי להבין יותר את הקשר המקיף בין התרכובות שנבחרו, גנים חזויים נבחרים ומחלות, בוצע ניתוח רשת מקיף באמצעות Cytoscape גרסה 3.7.0 (איור 5a). נוצרה רשת סבוכה בין התרכובות הנבחרות והמטרות הפוטנציאליות שלהן לגבי אוסטאופורוזיס, מחלות כלי דם, טרשת עורקים, פגיעה בשריר הלב, מחלת אלצהיימר, פרקינסון, טכיקרדיה חדרית וסרטן פי הטבעת. מידת הרשת על האינטראקציה בין תרכובת-מטרה תוארה בטבלה S2, שהצביעה על כך שלגנים החזויים CTSK ו-FDPS הקשורים לאוסטאופורוזיס, ולגן המטרה ACE לגבי מחלות כלי דם יש ערך גבוה יותר, מה שמצביע על כך שיותר תרכובות ב-C דסרטיקולה יכולה לפעול על גן המטרות הללו.

האינטראקציה בין 12 הגנים נותחה והוצגה באמצעות מסדי נתונים של STRING. רשת אינטראקציית חלבון-חלבון (PPI) (איור 5b) נבנתה תחת "ביטחון בינוני (0.4 כברירת מחדל)". באמצעות מסד הנתונים של DAVID, 14 מסלולי KEGG של 12 הגנים החזויים הוצגו באיור 5c. מסלולי ה-KEGG המועשרים על ידי גנים אלה כוללים בעיקר סינפסה סרוטונרגית, הפטיטיס B, פרוטאוגליקנים בסרטן וקרצינוגנזה ויראלית. רשימת 12 הגנים החזויים שנבדקו הועלתה למסד הנתונים של DAVID לצורך ניתוח העשרה של GO (איור 5ד). המטרות היו מעורבות בתהליכים ביולוגיים רבים (BP) כולל "הפעלת טסיות דם", "ויסות חיובי של תהליך אפופטוטי נוירונים", ו"התפתחות ההיפוקמפוס". "ציטוסול", "נוקלאופלזמה" ו"מיטוכונדריון" דירגו הגבוהים ביותר בקטגוריית הרכיבים התאיים (CC). במקביל "פעילות קינאז", "פעילות חלבון קינאז" ו"פעילות חלבון סרין/תרונין קינאז" היו התפקוד המולקולרי העיקרי (MF) המעורב.

טבלה S3 מציגה את תוצאות העגינה המולקולרית של הרכיבים היעילים של גבעולים עסיסיים של C. deserticola ומטרות מחלה. כפי שמוצג באיור 4, 2'-acetylacteoside, acteoside ו-isoacteoside ב-PhGs של C. deserticola מגיבים ללחץ מלח אלקלי. איור 6a ו-S4a הדגימו תצוגה מפורטת של העגינה המולקולרית של שלושת התרכובות הללו עם מטרות בעלות ניקוד גבוה. ל-2′-Acetylacteoside הייתה עגינה מצוינת עם מטרות הקשורות לטרשת עורקים (3TL5) ולמחלות כלי דם (4BZR). ל-Isoacteoside היה ציון גבוה עגינה עם מטרות הקשורות לאוסטאופורוזיס (4X6H) ומחלות כלי דם (4BZR). ל-Acteoside הייתה עגינה טובה יותר עם מטרות הקשורות למחלות כלי דם (4BZR) וטכיקרדיה חדרית (4GQS). איור 6b ו-S4b הראו תוצאות עגינה מולקולריות בין ארבעה פלבנואידים שזוהו רק בתפרחת לבין יעדי הדלקת שנבחרו. טבלה S4 ציינה כי ל-chrysoeriol ול-cynaroside היו ציונים גבוהים יותר עם 2 מטרות.

4. דיון

המחקר שלנו מצביע על התפרחת של C. deserticola לא רק מכילה את החומר הפעיל העיקרי PhGs אלא גם מכילה מספר רב של פלבנואידים. בפרט, התכולה היחסית של פלבנואידים גבוהה משמעותית מהגבעולים העסיסיים. הפלבנואידים, בשל תכונותיהם נוגדות החמצון, האנטי-סרטניות, התכונות האנטי-דלקתיות והאנטי-מוטגניות שלהם, ויכולתם לווסת את תפקודם של אנזימי תאים מרכזיים, נחשבים כיום למרכיבים חיוניים במזונות בריאות, תרופות, תרופות וקוסמטיקה שונים. .32 פלבונולים הם מחלקה של פלבנואידים עם שלד 3-הידרוקסי פלבנואיד (שם IUPAC: 3-hydroxy-2-phenylchromium-4-one). הגיוון שלהם נובע מהמיקומים השונים של קבוצת הפנול-OH.33 הטאוטומריזם של פלבנולים גורם לקרינה כפולה (עקב העברת פרוטונים תוך-מולקולרית במצב מעורער או ESIPT), שיכולה לקדם הגנת UV בצמחים.34 לכן, אנו ממליצים לעשות שימוש חוזר בצמחים. תפרחות של C. deserticola עשירות בפלבנואידים במקום לזרוק אותם.

באופן מעניין, מצאנו שרוב המטבוליטים הדיפרנציאליים הקשורים ללחץ מלוח-אלקלי בשלושת הסוגים האקולוגיים של C. deserticola היו גם פלבנואידים. המחקר הקודם שלנו16 מצא שהתכולה היחסית של פנילאתנואידים גליקוזידים (PhGs) בגבעולים העסיסיים של C. deserticola (אדמה מלוחה-אלקלית) גבוהה יותר משני הסוגים האקולוגיים האחרים. מליחות עלולה לגרום למגוון השפעות שליליות בצמחים, ואחת ההשלכות הבלתי נמנעות שלה היא ייצור מוגזם של מיני חמצן תגובתיים (ROS). פיני וחב'. האמינו כי פלבנואידים הם חלק חשוב ממערכת הניקוי המשנית של ROS.35 Xu-mei Jia et al. השערה כי איתות סוכרוז מווסת את הומאוסטזיס ROS על ידי גרימת מסלול ביוסינתזה של פנילפרופן וסינתזה של פלבנואידים.36 Wang et al. מאמינים שבגלל שפלבונואידים יכולים להסיר חומרים מזיקים לתגובת לחץ (כולל רדיקלים חופשיים, מולקולות חמצן בודדות ופרוקסידים), הם יכולים לשפר את הסבילות של צמחים ללחצים אביוטיים וביוטיים.37 Zhang et al. השתמש בניתוח תעתיק כדי לחשוף את התגובה המולקולרית של עלי Cynanchum auriculatum ללחץ מלח. הם גילו שהמסלול הביוסינתטי של פלבנואידים ופניל-פרופנואידים הופעל. במסלול זה, חומצה טרנס-קינמית 4-מונואוקסיגנאז (C4H) ואיזומרים של כלקון קשורים ישירות לסינתזה של פלבנואידים, שבה רמות הביטוי שלהם כולם היו מווסתות למעלה. תוצאות אלו הצביעו על כך שסונתזו יותר פלבנואידים, מה שעשוי לתרום לקיבולת נוגדת החמצון הכוללת בתגובה ללחץ המים המלוחים של C. auriculatum. באופן דומה, Walia et al. דיווחו שמספר רב של גנים במסלול הביוסינתזה של הפלבנואידים הווסרו מעלה תחת לחץ מלחים, שמילא תפקיד מגן חשוב בהתנגדות ללחץ מלחים.38 לסיכום, אנו מאמינים שלחץ מלוח אלקלי מקדם הצטברות של פלבנואידים בשני הסוקולנטים. גבעולים ותפרחות של C. deserticola. אנו רואים בחום באדמה מלוחה את סוג הקרקע הטוב ביותר לגידול C. deserticola.

מצד אחד, השגנו את הפלבנואידים הייחודיים בתפרחת על ידי ניתוח תוצאות המטבולום. בהתחשב בתפקידם של פלבנואידים באנטי דלקתיות, ביצענו ניתוח עגינה מולקולרי של חמש התרכובות הללו עם מטרות הקשורות לדלקת, כדי להנחות את הפיתוח של משאבי תפרחת לא רפואיים. מצד שני, ביצענו עגינה מולקולרית של הרכיבים הפעילים של הגבעולים העסיסיים של C. deserticola כדי לפצות על הפער בהקשר זה. הוא סיפק כמה כיוונים למנגנון הטיפולי של החומרים הפעילים של C. deserticola לטיפול במחלות הזדקנות. ג'אנג ואחרים. מצא שלתמצית C. deserticola יש פעילות פוטנציאלית נגד אוסטאופורוזיס, והשפעה זו מעורבת לפחות בחלקה ב-RANKL/RANK/TRAF6 בתיווך NF-KB ו-PI3K/AKT העברת אותות ובוויסות רמות c-Fos ו-NFAT2.39 נתונים שפורסמו הוכיחו שמספר תרכובות מבודדות של C. deserticola, כולל echinacoside, acteoside, ו-cistanoside A, דווחו גם כמעבדות פעילות אנטי-אוסטיאופורוזיס. 40-42 תרכובות הקשורות למטרות הקשורות לטרשת עורקים כוללות 2'-אצטילאקטאוזיד, אקטאוזיד, echinacoside, daucosterol, isoacteoside, cistanoside A, arena inside, cistanosinenside A וכו'. למרות שדרוש אימות ביולוגי נוסף כדי לאמת עוד יותר את התוצאות הנוכחיות, עבודה זו עשויה לספק הזדמנויות טיפול חדשות למחלות הזדקנות כגון אוסטאופורוזיס, טרשת עורקים וכו'. עשוי לפתוח דרכים חדשות לגילוי שילובי תרופות מהמוצרים הטבעיים של C. deserticola.

לסיכום, מחקר זה הוא הראשון שחשף את מאפייני השונות המטבוליים בין התפרחות והגבעולים העסיסיים של שלושת האקוטיפוסים של C. deserticola. יתרה מכך, עגינה מולקולרית יושמה כדי לסנן את המטרות והתרכובות הטיפוליות הפוטנציאליות של C. deserticola. התקבלו המסקנות הבאות: (1) מספר המטבוליטים בתפרחת שופע יותר מזה של הגבעולים הבשרניים, ורוב המטבוליטים המתגלים רק בתפרחת הם פלבנואידים, היכולים לשמש כחומר לפיתוח של משאבים רפואיים חדשים. (2) Isorhamnetin O-hexoside ו-rosinidin O-hexoside יכולים לשמש כסמנים כימיים כדי להבחין בין גבעולים ותפרחות עסיסיים בשלושת האקוטיפים. (3) לחץ מלוח-אלקלי מוביל להצטברות גדולה של פלבנואידים ב-C. deserticola. אנו מציעים שאדמה מלוחה-אלקלית היא בחירה טובה לטיפוח C. deserticola. (4) למרכיבים הפעילים של C. deserticola יש השפעות טיפוליות פוטנציאליות טובות על מחלות הזדקנות כגון אוסטאופורוזיס ומחלות כלי דם וטרשת עורקים. בינתיים, לפלבונואידים הייחודיים בתפרחת של C. deserticola ציוני עגינה גבוהים עם המטרות האנטי דלקתיות, מה שנותן כיוון חדש לפיתוח וניצול התפרחת. מחקר זה הניח בסיס תיאורטי לגידול מלאכותי ופיתוח משאבים יעיל של C. deserticola. המחקר שלנו מספק שיטות חדשות והדרכה תיאורטית לפיתוח וניצול משאבים חדשים של צמחי מרפא וגילוי מנגנונים טיפוליים פוטנציאליים של מוצרים טבעיים.

מימון

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81473315 ו-U1812403-1), התוכנית הלאומית לחקירות משאבים בסיסיים במדע וטכנולוגיה של סין (2018FY100701), קרן המחקר הפתוחה של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית. מעבדה למחקר שיטתי של משאבי רפואה סינית ייחודיים בדרום מערב סין (003109034001) ובקרן הטבע המדעית של בייג'ינג (7202135), אשר זוכים להכרת תודה.

תרומות מחבר

כל המחברים תרמו לתיקון כתב היד, וקראו ואישרו את הגרסה שהוגשה. XS, LF-H ו-YZ תרמו תפיסה ועיצוב של המחקר; XS, PJ ו-BA אספו את הדגימות; XS ו-YZ ארגנו את בסיס הנתונים; XS ביצע את הניתוח הסטטיסטי; XS ו-LF-H כתבו את הטיוטה הראשונה של כתב היד; LF-H, YZ, JP ו-AB כתבו קטעים מכתב היד.

ניגוד עניינים

המחברים אינם מצהירים על ניגוד עניינים.

תודות

אנו מביעים את תודתנו הגדולה ל-Xiang Zhang מהמכון לפיתוח צמחי מרפא, האקדמיה הסינית למדעי הרפואה, Peking Union Medical College, על ההנחיות לעגינה מולקולרית.

הפניות

1 T. Wang, X. Zhang ו-W. Xie, Am. ג'יי צ'ין. מד., 2012, 40, 1123–1141.

2 Y. Jiang ו-PF Tu, J. Chromatogr. א, 2009, 1216, 1970–1979.

3 L. Gu, W.-T. Xiong, C. Wang, H.-X. שמש, ג.-פ. Li and X. Liu, Asian J. Androl., 2013, 15, 838.

4 NA Stefanova, AZ Fursova, KN Sarsenbaev ו-NG Kolosova, J. Ethnopharmacol., 2011, 138, 624–632.

5 C. Gu, X. Yang ו-L. Huang, Front. Pharmacol., 2016, 7, 289.

6 S. Zheng, X. Jiang, L. Wu, Z. Wang and L. Huang, PLoS One, 2014, 9, e98061.

7 XJ Qin, W. Ni, CX Chen ו-HY Liu, Nat. לְדַרבֵּן. Bioprospect., 2018, 8, 265–278.

8 F. Yang, Y. Qi, W. Liu, J. Li, D. Wang, L. Fang and Y. Zhang, Molecules, 2019, 24(19), 3448.

9 HL Qiao, PF Lu, R. Xu, J. Chen, X. Wang, WS Ma ו-TN Liu, Zhongyaocai, 2012, 35, 573–577.

10 X. Peng, Y. Luo, J. Wang, T. Ji, L. Yuan and G. Kai, Food Res. Int., 2020, 138, 109799.

11 E. Gemperline, C. Keller and L. Li, Anal. Chem., 2016, 88, 3422–3434.

12 B. Worley and R. Powers, Curr. Metabolomics, 2013, 1, 92-107.

13 S. Wei, X. Yang, G. Huo, G. Ge, H. Liu, L. Luo, J. Hu, D. Huang and P. Long, Int. י.מול. Sci., 2020, 21, 1481.

14 J. Xu, J. Yan, W. Li, Q. Wang, C. Wang, J. Guo, D. Geng, Q. Guan ו-F. Ma, Int. י.מול. Sci., 2020, 21, 4797.

15 W. Xin, L. Zhang, W. Zhang, J. Gao, J. Yi, X. Zhen, M. Du, Y. Zhao and L. Chen, Int. י.מול. Sci., 2019, 20, 5893.

16 X. Sun, L. Li, J. Pei, C. Liu ו-L.-F. Huang, Plant Mol. ביול., 2020, 102, 253–269.

17 W. Liu, Q. Song, Y. Cao, N. Xie, Z. Li, Y. Jiang, J. Zheng, P. Tu, Y. Song and J. Li, J. Pharm. ביומד. אנאליז, 2019, 162, 16–27.

18 P. Zou, Y. Song, W. Lei, J. Li, P. Tu and Y. Jiang, Acta Pharm. חטא. ב, 2017, 7, 647–656.

19 S. Li ו-B. Zhang, Chin. ג'יי נאט. מד., 2013, 11, 110–120.

20 X. Zhang, D. Wang, X. Ren, AG Atanasov, R. Zeng and L. Huang, Curr. חלבון Pept. Sci., 2019, 20, 964–975.

21 W. Wu, Z. Zhang, F. Li, Y. Deng, M. Lei, H. Long, J. Hou and W. Wu, Int. י.מול. Sci., 2020, 21, 1766.

22 J. Liu, J. Zhu, J. Xue, Z. Qin, F. Shen, J. Liu, X. Chen, X. Li, Z. Wu, W. Xiao, C. Zheng and Y. Wang, Sci . Rep., 2017, 7, 16364.

23 YQ Li, Y. Chen, JY Fang, SQ Jiang, P. Li ו-F. Li, J. Ethnopharmacol., 2020, 254, 112764.

24 L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li ו-X. Liu, Asian J. Androl., 2013, 15, 838–840.

25 Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao and CM Tzeng, Front. Pharmacol., 2016, 7, 41.

26 T. Wang, X. Zhang ו-W. Xie, Am. ג'יי צ'ין. מד., 2012, 40, 1123–1141.

27 J. Stamos, MX Sliwkowski and C. Eigenbrot, J. Biol. Chem., 2002, 277, 46265–46272.

28 PA Harris, M. Cheung, RN Hunter, 3rd, ML Brown, JM Veal, RT Nolte, L. Wang, W. Liu, RM Crosby, JH Johnson, AH Epperly, R. Kumar, DK Luttrell and JA Stafford, J. מד. Chem., 2005, 48, 1610–1619.

29 J. Cheung, MJ Rudolph, F. Burshteyn, MS Cassidy, EN Gary, J. Love, MC Franklin and JJ Height, J. Med. Chem., 2012, 55, 10282–10286.

30 M. Koˇz´ıˇsek, M. Lepˇs´ık, K. Grantz ˇSaˇskov´a, J. Brynda, J. Konvalinka and P. Rez´aˇcov´a, FEBS J., 2014, 281, 1834–1847.

31 D. Szklarczyk, AL Gable, D. Lyon, A. Junge, S. Wyder, J. Huerta-Cepas, M. Simonovic, NT Doncheva, JH Morris, P. Bork, LJ Jensen and CV Mering, Nucleic Acids Res. , 2019, 47, D607–D613.

32 A. Panche, A. Diwan and S. Chandra, J. Nutr. Sci., 2016, 5, e47. 33 JB Harborne ו-CA Williams, The flavonoids, Springer, 1975, עמ' 376–441.

34 GJ Smith ו-KR Markham, J. Photochem. Photobiol., A, 1998, 118, 99–105.

35 A. Fini, C. Brunetti, M. Di Ferdinando, F. Ferrini and M. Tattini, Plant Signaling Behav., 2011, 6, 709–711.

36 XM Jia, YF Zhu, Y. Hu, R. Zhang, L. Cheng, ZL Zhu, T. Zhao, X. Zhang ו-YX Wang, Hortic. Res., 2019, 6, 91.

37 F. Wang, W. Kong, G. Wong, L. Fu, R. Peng, Z. Li ו-Q. Yao, Mol. ג'נט. Genomics, 2016, 291, 1545–1559.

38 H. Walia, C. Wilson, P. Condamine, X. Liu, AM Ismail, L. Zeng, SI Wanamaker, J. Mandal, J. Xu, X. Cui and TJ Close, Plant Physiol., 2005, 139, 822–835.

39 B. Zhang, L.-L. יאנג, S.-Q. דינג, J.-J. ליו, י.-ה. דונג, י.-ת. לי, נ. לי, X.-J. Zhao, C.-L. הו וי.ג'יאנג, פרונט. Pharmacol., 2019, 10, 1412.

40 F. Li, X. Yang, Y. Yang, C. Guo, C. Zhang, Z. Yang and P. Li, Phytomedicine, 2013, 20, 549–557.

41 ש.-י. לי, ק.-ס. Lee, SH Yi, S.-H. קוק ו-J.-C. Lee, PLoS One, 2013, 8, e80873.

42 X. Xu, Z. Zhang, W. Wang, H. Yao and X. Ma, Molecules, 2017, 22, 197.

【למידע נוסף: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】