מחקר התערבות של פנילאתיל אלכוהול גליקוזידים ב-Cistanche על תסמונת פרימנופאוזה מודל בעלי חיים Ⅱ

ניסוי 1 הכנת Cistanche phenylethanoid glycoside 1 מקור לחומרים רפואיים

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, מספר אצווה: 20130501.

2 ריאגנטים

95% אתנול (דרגה רפואית); AB-8 שרף ספיחה מאקרו-פורוסית, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, מספר אצווה: 20130618.

חומר ייחוס Echinacoside, מסופק על ידי מכון סין לבקרת מוצרים פרמצבטיים וביולוגיים, מספר אצווה: 111670-200503.3

כמה זמן לוקח ל-CISTANCHE לעבוד?

שיטת הכנה

ההתייחסות בוצעה לשיטת הספרות [19] ונעשתה בהדרכתו של פרופסור פנג סוקסיאנג מהמחלקה לניתוח תרופות של מכללת הנאן לרפואה סינית מסורתית.טוחן סיסטאנצ'הלאבקה גסה, הוסיפו פי 10 מהכמות של 70% אתנול לריפלוקס, וחלצו פעמיים, 1.5 שעות בכל פעם, חברו את שתי תמציות האלכוהול, התרכזו בלחץ מופחת עד שאין ריח אלכוהול, ומפזרים עם מים מזוקקים (הריכוז הוא 0.5 גרם חומר תרופתי/מ"ל) כתמיסת הדגימה. עוברים דרך שרף AB-8 (תרופה בעמודה: שרף הוא 1:10), טען את הדגימה בזרימה, ונותן לה לעמוד במשך 5 שעות עד שהיא נספג במלואה. ראשית, יש לשטוף עם פי 10 מנפח העמוד של מים מזוקקים, להשליך את המים, ולאחר מכן להשתמש פי 10 מנפח העמודה. השתמש ב-10% אתנול כדי להסיר זיהומים, ולבסוף לחפוף עם פי 7 מנפח העמודה של 60% אתנול. אוספים את האלואייט ומאדים לייבוש לקבלת אבקה. 4 בחירת אורך גל מדידה

יש למדוד במדויק {{0}}.5 מ"ל מתמיסת הייחוס, להוסיף 1 מ"ל של תמיסת נתרן ניטריט 5%, לנער היטב ולהניח לעמוד למשך 6 דקות; הוסף 1 מ"ל של תמיסת חנקתי אלומיניום 10%, נער היטב והניח לעמוד במשך 6 דקות; הוסף תמיסת נתרן הידרוקסיד של 10% 10 מ"ל, דלל ל-25 מ"ל במים, נער היטב, והניח לעמוד למשך 18 דקות כדי לשמש כתמיסת הייחוס. 0.5 מ"ל שלCistanche פנילטנול גליקוזידהתמיסה הוכנה באותו אופן כמו תמיסת הבדיקה. השתמש בדגימה המקבילה מבלי להוסיף חומר ייחוס ובדוק את התמיסה כריקה, והכן את התמיסה הריקה באותו אופן. בספקטרופוטומטר UV, בצע סריקה באורך גל מלא של שלושת הפתרונות שלמעלה בטווח אורך הגל של 200-800nm. גם לחומר הייחוס וגם לתמיסת הבדיקה יש שיאי ספיגה מקסימליים ב-507 ננומטר, ולכן 507 ננומטר נקבע כאורך גל הספיגה.

לאחר התפתחות צבע של דגימת Cistanche phenylethanol glycoside + התפתחות צבע של חומר התייחסות למנדרינה Echinacea (השוואה על גבי), ראה איור 1.

איור 1 לאחר התפתחות צבע של Cistanche phenylethanoid glycoside + לאחר התפתחות צבע של חומר ייחוס מנדרינה אכינצאה איור 5 שיטת זיהוי תוכן

יש למדוד במדויק 1 מ"ל מהתמיסה לבדיקה, להוסיף 1 מ"ל של תמיסת נתרן ניטריט 5%, לנער היטב ולהניח לעמוד למשך 6 דקות; הוסף 1 מ"ל של תמיסת חנקתי אלומיניום 10%, נער היטב והניח לעמוד למשך 6 דקות; הוסף 10% נתרן הידרוקסיד התמיסה היא 10 מ"ל, יש לדלל ל-25 מ"ל במים, לנער היטב ולהניח לעמוד למשך 18 דקות. השתמשו בדגימה המקבילה מבלי להוסיף תמיסת דגימה כחסר, והכינו תמיסת ריקה באותו אופן. נמדד באמצעות ספקטרופוטומטר UV ב-507nm. 6 סקירה מתודולוגית

6.1 הכנת תמיסת ייחוס ותמיסת דגימה

הכנת תמיסת הייחוס: שקלו במדויק 3.06 מ"ג מתקן ההתייחסות echinacoside שיובש למשקל קבוע, הניחו אותו בבקבוק נפח של 25 מ"ל, הוסיפו תמיסה של 70% להמסה ודילול עד לסימון, לנער היטב, ולהניח בצד. הריכוז הסטנדרטי הוא 0.1224 מ"ג/מ"ל.

הכנת תמיסה לדוגמא: משקל 5 מ"ג במדויקCistanche phenylethanoid גליקוזיד לחלץלתוך בקבוק נפח של 10 מ"ל, ממיסים אותו עם 70% אתנול ומדלל לנפח.

6.2 הכנת עקומה סטנדרטית

צייר במדויק {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0 , 6.0 מ"ל תמיסת ייחוס, מפתחים צבע ומדללים לנפח לפי השיטה ב-4.2 ומודדים את ערך הספיגה ב-507 ננומטר. שימוש בריכוז לעומת ספיגה כדי ליצור עקומת רגרסיה, משוואת הרגרסיה היא: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994), והטווח הליניארי הוא 4.{{ 23}}.4 אג'/מ"ל.

6.3 בדיקת דיוק

קח את תמיסה המדגם ומדוד אותה שש פעמים במקביל לפי הפריט "שיטת קביעת תוכן". חשב את סטיית התקן היחסית של הספיגה. הספיגות הן {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0.297 בהתאמה. הספיגה הממוצעת=0.298, RSD=0.330% (n =6).

6.4 מבחן יציבות

קח כמות מתאימה של תמיסה לדוגמה, ובהתאם לפריט "שיטת קביעת תוכן", מדוד את ערכי הספיגה ב-{{0}}, 15, 30, 50 , ו-60 דקות לאחר שהפתרון נצבע לחלוטין, וחשב את סטיית התקן היחסית. הספיגות הן 0.304, 0.303, 0.300 ו-0.296 בהתאמה. , 0.295, 0.295, ספיגה ממוצעת=0.299, RSD=1.362% (n=5).

6.5 מבחן החזרה

קחו דגימה, הכינו 6 תמיסות לדוגמא לפי הפריט "הכנת תמיסה לדוגמא" ומדדו את ערך הספיגה לפי הפריט "שיטת קביעת תוכן" וחשבו את התוכן. התכולה היא 65.2%, 65.6%, 66.7%, 67.2% ו-66.5% בהתאמה. , 65.8%, תוכן ממוצע 66.2%, RSD=1.142% (n=6).

6.6 מבחן התאוששות לדוגמה

צייר במדויק 0.5 מ"ל מהתמיסה לדוגמא עם תוכן ידוע, בסך הכל 9 חלקים, והוסף 200, 250 ו-300 ul מהתמיסה הסטנדרטית בהתאמה. מדוד וחשב את שיעור ההתאוששות ואת סטיית התקן היחסית של Cistanche phenylethanol glycoside. שיעורי ההחלמה הם 101.45% ו-99.26% בהתאמה. , 98.94%, 101.83%, 99.05%, 99.47%, 98.72%, 99.17%, 100.64%, שיעור ההחלמה הממוצע הוא 99.84%, RSD=1.164% (n=9).

7 קביעת תוכן לדוגמה

טבלה 1 תוצאות קביעת תכולת הגליקוזידים של פנילתנואידים ב- Cistanche