אימייל:joanna.jia@wecistanche.com

פעילויות נוגדות דיכאון ושיפור קוגניטיבי של הצמח הסיני המסורתי Cistanche

Dongfang Wang,1 Haizhen Wang,2 ו-Li Gu2

1State Key Laboratory of Biocontrol, המכון לבעלי חיים כלכליים ימיים ומעבדת מפתח במחוז גואנגדונג לבעלי חיים כלכליים ימיים, בית הספר למדעי החיים, אוניברסיטת Sun Yat-sen, גואנגג'ואו 510275, סין

2מרכז המחקר להנדסת מזון ובריאות של משרד החינוך הממלכתי, אוניברסיטת Sun Yat-sen, גואנגג'ואו 510275, סין

יש להפנות התכתבות ל-Li Gu; התקבל ב-20 בפברואר 2017; מתוקן 11 במאי 2017; התקבל ב-28 במאי 2017; פורסם ב-28 ביוני 2017 עורך אקדמי: Ki-Wan Oh זכויות יוצרים © 2017 Dongfang Wang et al. זהו מאמר בגישה פתוחה המופץ תחת רישיון הייחוס של Creative Commons, המאפשר שימוש, הפצה ושכפול ללא הגבלה בכל מדיום, בתנאי שהיצירה המקורית מצוטטת כהלכה. יותר מעשרה אחוזים מהאנשים סובלים לפחות מאפיזודה אחת של דיכאון והפרעות נפשיות נלוות במהלך החיים, ודיכאון והפרעות נפשיות נלוות הן אחת מבעיות בריאות הציבור הגדולות בעולם. תיאוריית ריבוי מערכות גורסת כי חוסר ויסות של המערכות המרובות עומד בבסיס הפתוגנזה של דיכאון והפרעות נפשיות נלוות, ויש צורך דחוף בטיפולים חדשים המבוססים על תיאוריית חוסר הוויסות המרובות במערכת. במחקר זה, ההשפעה נוגדת הדיכאון של מרתח מצמחי מרפאCistancheמדבריתYCMa ו-Cistanchetubulosaנבדק. עֵשֶׂבCistancheמרתח הפחית את תקופת חוסר התנועה באופן משמעותי במבחן ההשעיה של זנב העכבר. עכברים שטופלו במרתח עשבים הראו יכולת משופרת של למידה מרחבית וזיכרון במבחן מבוך המים של מוריס. מרתח עשבים שטופלו בקבוצות הציגו פעילות מונואמין אוקסידאז (MAO) ממוזערת; ריכוז הדופמין (DA) במוח היה מווסת, מה שמצביע על עשבCistancheמרתח שיפר את התרגשות העצבים; ריכוז הסרום של קורטיקוסטרון (CORT) הוורד ויסות, מה שמראה כי עכברים נהנו מרמת מתח מופחתת. מכאן, היעילות והמנגנון נוגד הדיכאון של המסורתיסִינִיתעֵשֶׂבCistancheנחקרו במחקר זה. עֵשֶׂבCistancheהראו פוטנציאל לפיתוח כטיפול משלים ואלטרנטיבי בדיכאון.

מניעת מחלת אלצהיימר עם cistanche

1. הקדמה

דיכאון והפרעות מצב רוח נלוות, עם הערכה של 12-17 אחוזים מהאוכלוסייה שחווים לפחות אפיזודה אחת במהלך החיים, הם בין הגורמים המובילים למוגבלות נפשית ונחשבים לאחת מבעיות בריאות הציבור הגדולות בעולם.[1].רלוונטי במיוחד, חלק ניכר מהחולים בדיכאון סובלים מאובדן זיכרון, בעיות ריכוז, ירידה באנרגיה או עייפות, אובדן עניין או הנאה בתחביבים ופעילויות, קשיי שינה, יקיצה מוקדמת בבוקר או שינה יתר. למרות שהמצעים העצביים לאנורמליות בדיכאון ותסמונות נלוות אינם ברורים, מקובל בדרך כלל כי הפגיעה בנוירופלסטיות ובחוסן התאי מולידה את הפתופיזיולוגיה של דיכאון וטיפול מוצלח עשוי להיות תלוי בהתערבות של רמת הנוירוטרנסמיטר.[2]. הגישה לטיפול תרופתי בדיכאון מבוססת בעצם על מערכת המונואמין הקלאסית

השערה, הטוענת שחוסר ויסות של מונואמינים במיוחד סרוטונין (5-HT) ונוראפינפרין (NE) תורם לפתוגנזה של דיכאון, והתערבות של מערכת הנוירוטרנסמיטר עם אגוניסטים של דופמין ומאפננים דופמין-נורדנרגיים תקל על הסימפטומים של דיכאון מג'ורי. הפרעה [3]. אף על פי שנרשם באופן נרחב, היעילות המרפאת של התרופה נוגדת הדיכאון מוטלת בספק ולא ניתן להתעלם מתופעת הלוואי מכיוון שחלק ניכר מהחולים אינם מגיבים למניפולציה של מערכת המונואמין [4]. לאחרונה, תיאוריות חדשות של פתוגנזה של דיכאון מצביעות על כך שמערכות מרובות, כולל מסלולים דלקתיים, מסלול הלחץ החמצוני, ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אדרנל (HPA), המערכת המטבולית והביו-אנרגטית, מסלולים נוירוטרופיים, מערכת הגלוטמט, מערכת האופיואידים, ו המערכת הכולינרגית, קשורות קשר הדוק להתרחשות הדיכאון [3]. עדויות מראות שהתערבות מרובת מטרות יצרה יעילות טובה יותר מאשר התערבות מטרה אחת בודדת [5]. דרושים בדחיפות טיפולים חדשים המבוססים על תיאוריית חוסר הוויסות המרובה של המערכת.

לפי הדיווחים, מוצרי צמחים צרכו יותר ממחצית מאוכלוסיית ארה"ב[6];העניין והדרישות למוצרי צמחי מרפא או צמחי מרפא כדרך משלימה לטיפול בדיכאון גוברים בכל העולם. נמצא שצמחים רפואיים מרובים מדגימים את ההשפעה המיטיבה של הקלה בדיכאון. צמחי מרפא שדווחו כבעלי השפעה של דיכוי דיכאון ושיפור התפקוד הקוגניטיבי כוללים אשחר ים [7], גינקו בילובה[8], פייפר ניגרום[9], Hypericum perforatum [10], Griffonia simplicifolia[11]. מתן שילוב של חומצה פרולית ופיפרין הראה אפקט דמוי נוגד דיכאון סינרגטי בעכברים על ידי מניפולציה של המערכת המונואמינרגית[7]. אלביפלורין אופיינה בזיקה סלקטיבית גבוהה לקולטנים ולטרנספורטרים של הנוירוטרנסמיטר והעלאת ריכוזים חוץ-תאיים משמעותית של 5-HT ו-NE בהיפותלמוס של חולדות הנעות בחופשיות[12]. עשב רפואי Melissa officinalis L. הקל על ההתנהגות הדיכאונית של עכברים על ידי הפעלת השפעה על רמת הנוירוטרנסמיטר הסרוטונרגי[13].צמחי מרפא או מרתחים אלו, שפותחו כתרופות אלטרנטיביות לדיכאון, מסייעים בהקלה על תסמיני הדיכאון ומספקים מקור חדש לפיתוח תרופות נוגדות דיכאון. עֵשֶׂבCistancheמינים, המופצים בארצות צחיחות ומדבריות בצפון סין, הם צמחי מרפא של רפואה סינית מסורתית ונמצאים בשימוש נרחב לטיפול במחלות שונות במשך יותר מ-1,{1}} שנים בסין. היעילות המרובה של עשבCistancheטווח מרתח בין האפרודיזיאק [14], מקדם חיסון[15], נוגד חמצון [16], ומגן על הכבד [17] נכסים. מרתחות של C. deserticola מעוררות את האנזימים הסטרואידוגניים האשכים [18], מעודדות תגובת זיקפה של הפין ומקצרות את תקופת החביון של תגובה זיקפה בחולדות מסורסים [19]. עֵשֶׂבCistancheדווח כי הוא מעכב את הפעילות של נוירונים דופמינרגיים על ידי ויסות הגנים האפופטוזיס המעכבים וגורמים נוירוטרופיים [20]. ג.tubulosaמרתחים שינו את התפקוד הקוגניטיבי שנגרם על ידי A� 1-42 באמצעות חסימת שקיעת עמילואיד והחיו את התפקוד הנוירוני הכולינרגי וההיפוקמפוס הדופמינרגי [21]. התכונה הנוירו-פרוקטיבית של צמחים Cistanche מרמזת על הפוטנציאל הטיפולי במחלות הקשורות לקוגניטיביות. דיכאון הוא מצב מעורב שכיח של תגובות רגשיות עם שכחה וירידה קוגניטיבית בתור התסמינים השכיחים [22]. צמחי מרפא שימש בדרך כלל כתרופה סינית מסורתית לטיפול בשכחה; יתרה מכך, דוח שנערך לאחרונה מראה שמתן מוקדם למבוגרים של קמח תירס בתוספת C.tubulosaמועיל לקידום אריכות ימים ושיפור למידה וזיכרון הקשורים לריח במודל תסיסנית ללא חוליות [23]. עובדות אלו מצביעות על התכונה המשתפרת הקוגניטיבית של עשבCistanche; כאן במחקר זה, לראשונה, אפיינו את התכונה נוגדת הדיכאון ואת הקשר שלו לפעילויות שיפור קוגניטיבי במודל היונקים על ידי ויסות מערכת המונואמין וציר HPA. הארת התכונה נוגדת הדיכאון והמנגנון המקדים של צמח המרפאCistancheיכול להרחיב את ספקטרום היישום של עשב Cistanche, שניתן לפתח כתרופה חלופית לדיכאון.

2. חומרים ושיטות

1.1. הכנת חומר צמחי ומרתח. C. deserticola YCMa הושג מהאזור האוטונומי ניי מונגולי, סין; ג.tubulosaהושג מהאזור האוטונומי שינג'יאנג אויגור, סין. לפני המרתח, צמח העשב (C. deserticola YCMa או C. tubulosa) נבדק לאיתור תכולת האכינאקוסיד והוורבסקוסיד באמצעות HPLC (כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים) (Milford, MA, Waters, ארה"ב), והמוצר המתאים (לפי ל- Pharmacopoeia of the People's Republic of China) שימש לניסויים בבעלי חיים. המרתח נרכש על בסיס שיטת אידוי מים שפותחה על ידי מרכז המחקר להנדסת מזון ובריאות של משרד החינוך הממלכתי, אוניברסיטת סאן יאט-סן. Cistanche deserticola מיובש של 125 גרם נופץ ומסננת על ידי 120-מסך רשת ואז האבקה הומסה ב-3 ליטר מים טהורים במיוחד, מחוממים

ב-100∘C למשך 2 שעות, לאחר מכן מקורר לטמפרטורת החדר, ומסננת; הסופרנטנט ממוחזר. לאחר מכן הומס המשקע במים טהורים של 2 ליטר ולאחר מכן חומם למשך 1.5 שעות וקירר כפי שהוזכר לעיל כדי למחזר את הסופרנטנט; המשקעים שימשו אז למיחזור הסופרנטנט. התוכן של כל הסופרנטנט הועשר על ידי מאיידים ואקום סיבוביים ב-60∘C; לבסוף, ריכוז התרופה הגולמית נקבע ל-0.5 גרם/מ"ל והמוצר אוחסן ב-20∘C.

1.2. Assay Echinacoside and Verbascoside על ידי ניתוח HPLC. HPLC (כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים) שימשה למדידת המבחן האיכותי והכמותי של echinacoside ו-verbascoside; verbascoside (טוהר > 93 אחוז) ואכינאקוסיד (טוהר > 93 אחוז) נרכשו מהמכונים הלאומיים לבקרת מזון ותרופות (בייג'ינג, סין) ושימשו כבקרה סטנדרטית.

1.3. הטיפול בבעלי חיים והתנהלות ניסויית. הנבדקים היו עכברי קונמינג זכרים מסוג SPF (ללא פתוגן ספציפי) במשקל 21-25 גרם, שסופקו על ידי המרכז הרפואי לבעלי חיים ניסויים במחוז גואנגדונג. החיות שוכנו בכלובי פלסטיק (עשרה לכלוב); תנאי הסביבה נקבעו כך: לחות 40-70 אחוזים, טמפרטורת החדר 21 ± 1∘C, ותקופה של 12 שעות: 12 שעות אור-חושך. כל הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה לבעלי חיים של אוניברסיטת Sun Yat-sen.

1.4. מבחן מתליית זנב. בדיקת מתלי הזנב נעשתה על פי הפרוטוקול שתואר על ידי Cryan et al. [24] בשינויים צנועים. בקצרה, ביום 21, העכברים הושעו על הזנב באמצעות גרדום מתכתי קשור בצנתר ניילון, כשהראש בגובה 50 מ"מ מהרצפה. העכברים נתלו על הקרס על סרטי הדבקה במרחק של 10-20 מ"מ מקצה זנבו ובודדו אקוסטית וויזואלית על ידי לוחות קלאפ. תנועות הגוף של העכבר תועדו והתעלמו מתנועות הנשימה. לפני יום הניסוי, העכברים הושעו למשך 8 דקות להסתגלות.

1.5. מבחן מבוך המים של מוריס. בדיקת מבוך המים נעשתה על פי התיאור של Vorhees et al. [25–27] באמצעות המכשיר שפותח על ידי האקדמיה הסינית למדעי הרפואה. בריכה עגולה (קוטר 150 ס"מ) מלאה במים (26

± 1∘C; גובה השפה (מרחק משטח המים לשפת הקיר): 10 ס"מ)

טבלה 1: התוכן של echinacoside ו-verbascoside באבקה ובמרתח של C. deserticola YCMa ו-C.tubulosa.

היה בשימוש, במת חילוץ מעגלית (קוטר: 11 ס"מ; מרחק

דגימות

אחוז ECH VerBS אחוז בין נקודת מרכז הפלטפורמה לקיר הבריכה: 27 ס"מ) היה שקוע 1-1.5 ס"מ מתחת לפני המים, ואזור הבדיקה מואר בתאורה עקיפה (50 ± 10 לוקס) כדי למנוע השתקפויות. נעשה שימוש בארבעה מיקומי התחלה, N, S, E ו-W. עבור מבחן הלמידה המרחבית, בעלי חיים אומנו מדי יום בימים 9-11 על מיקום ההתחלה הקבוע. תקופת חביון הבריחה נמדדת כדי להציג את הזיכרון המרחבי ויכולת הלמידה של העכברים. אם העכברים לא יכלו למצוא או לטפס על הרציף, העכברים יובלו לפלטפורמה ויישארו במשך 10 שניות. לאחר מנוחה של 60 שניות, יתחיל האימון הבא. נתונים שהתקבלו ממבחן הלמידה המרחבית האחרון שימשו כערך בסיס עבור דפוס. בימים 23-28, בוצעו בדיקת ניווט במקום ובדיקה מרחבית. בדיקת הניווט במקום נמשכה 6 ימים ונעשתה בשעה 13:00, בעלי חיים הוכנסו למים כשראשם פונה לקיר הבריכה עם כיוון השעון, ותועדה תקופת החביון (תוך 2 דקות). לאחר ביצוע בדיקת הניווט במקום, הפלטפורמה הוסרה. העכברים הוכנסו למים כשראשם פונה אל דופן הבריכה במיקום אקראי, ותועדו שביל התנועה והתדירות שעכברים שחו על פני המקום בו הייתה הפלטפורמה תוך 2 דקות. שביל התנועה תועד על ידי מקליט אוטונומי רב תכליתי של תנועת עכברים (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, סין).

echinacoside in cistanche

1.6. איתור פעילות MAO. פעילות ה-MAO נמדדה באמצעות ערכת זיהוי MAO (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, סין), והאיתור נעשה על פי פרוטוקול היצרן. הומוגנט מרקמת המוח התקבל; 500 �l עורבבו עם 300 �l של סוכן 1 ו- 300 �l של סוכן 2, הודגרו במשך 3 שעות ב-37 ∘C, ולאחר מכן הוסיפו ברציפות עם 300 �l של סוכן 3, 3 מ"ל של סוכן 4, ומערבבים עבור 2 דקות. תערובת התגובה עברה צנטריפוגה ב-3,{16}} סל"ד למשך 10 דקות, והצפיפות האופטית של הסופרנטנט נקבעה על ידי ספקטרופוטומטר אולטרה סגול וספקטרום גלוי (Lambda 25, PerkinElmer, ארה"ב) באמצעות אור עירור של 242 ננומטר.

1.7. Assay Immunosorbent מקושר אנזים של נוירוטרנסמיטורים ו-ACTH ו-CORT. ערכת זיהוי של אנזים מקושר אימונוסורבנט (ELISA) עבור דופמין (DA), נוראדרנלין (NE) ו-5-hydroxytryptamine (5-HT) נקנתה מ-BLUE GENE, שנגחאי. ערכות זיהוי ELISA נקנו מ-Qiyun Biotech, גואנגג'ואו.

ההליכים הם כדלקמן: הניסוי נערך בטמפרטורת החדר. מצפים את בארות של צלחת מיקרוטיטר PVC עם נוגדן לכידה בריכוז של 1-10 �g/mL במאגר קרבונט/ביקרבונט (pH 9.6). אטום את הצלחת ודגירה למשך הלילה ב-4∘C; לשטוף את הצלחת עם PBS/tween 3 פעמים, ואתרי הקישור הלא ספציפיים נחסמים על ידי Block Solution; לאחר מכן שטפו את הצלחת עם PBS/tween 3 פעמים. תקנים ודגימות מדוללים בתמיסת חסימה ו-100 �l מתווספים לבאר הצלחת, והצלחת נאטמת ומודגרת ב-37∘C למשך שעה. הוסף 100 �l נוגדן זיהוי מדולל ודגור את הצלחת בשעה

C. אבקת deserticola 1.27 ± 0.009 0.52 ± 0.003

C. tubulosaאבקה 19.81 ± 0.66 2.45 ± 0.12

C. deserticola מרתח {{0}}.90 ± 0.001 0.20 ± 0.001 C.tubulosaמרתח 5.90 ± 0.12 0.54 ± 0.05 Echinacoside, ECH; phenylethanoid גליקוזידים, PeGs; verbascoside, VerBS.

37∘C למשך שעה אחת; שטפו את הצלחת עם PBS/Tween 3 פעמים. הוסף 50 �l תמיסה לפיתוח צבע והרחיק את הצלחת מהאור ודגרו אותה בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות; מאגר עצירה של 50 �l מתווסף כדי לעצור את התגובה. מדוד את הצפיפות האופטית (OD) עבור כל באר עם קורא microplate מוגדר ל-405 ננומטר תוך 30 דקות.

1.8. ניתוח סטטיסטי. כל הנתונים יוצגו כממוצע ± SEM (שגיאה סטנדרטית של הממוצע), ההבדל המשמעותי נותח על ידי t-test או ANOVA חד כיווני ואחריו בדיקות הטווח המרובות של דאנקן באמצעות SPSS 16.0, והבדלים בין קבוצות עם � < 0.05="" נחשבו="" מובהקות="">

2. תוצאות

2.1. קביעת התוכן של מרכיבים ביו-אקטיביים עיקריים ב-C. deserticola YCMa ו-C.tubulosaדגימות. הגליקוזידים הפנילאתנואידים כגון אכינאקוסיד וורבסקוסיד נחשבים בדרך כלל כמרכיבים הביו-אקטיביים העיקריים; מכאן התוכן של echinacoside ו-verbascoside גם ב-C. deserticola YCMa וגם ב-C.tubulosaדגימות נקבעו על ידי HPLC. כרומטוגרמות HPLC הוצגו באיור1, והתוצאות מראות שהתכולה הכוללת של phenylethanoid glycosides מ-C. deserticola YCMa הייתה כפולה מזו של C. tubulosa. משקלי Echinacoside ו-verbascoside, בהתאמה, מהווים 1.27 ± 0.009 אחוז ו-{{10}}.52 ± 0.003 אחוז מהאבקה שהוכנה מ C. deserticola YCMa ו-19.81 ± 0.66 אחוז ו-2.45 ± 0.12 אחוז מהאבקה שהוכנה מ-C.tubulosa. משקלי Echinacoside ו-verbascoside, בהתאמה, הם {{0}}.90 ± 0.{{10}}01 אחוז ו 0.20 ± 0.001 אחוז ממרתח C. deserticola YCMa ו-5.90 ± 0.12 אחוז ו-0.54 ± 0.05 אחוז אבקה שהוכנה מ-C.tubulosa(שולחן1).

2.2. מרתח של C. deserticola YCMa ו- C. tubulosa הקל על רמת הלחץ והדיכאון. מבחן השעיית זנב (TST) היא שיטה מהירה וקלאסית להערכת ההשפעה האנטי-דיכאונית של תרופות בעכברים [24]; במחקר זה, הסטטוס הבלתי תנועתי, שנגרם כתוצאה מהלחץ קצר הטווח והבלתי נמנע של השעיית הזנב, שימש כתכונה לשקף את רמת הדיכאון של עכברים. בדקנו האם מרתח של C. deserticola YCMa ו-C.tubulosaיכול להפוך את חוסר התנועה ולקדם התרחשות של התנהגות הקשורה לבריחה. בהשוואה לקבוצות ביקורת, תקופת חוסר התנועה של קבוצת הלחץ עלתה ב-27.4 אחוזים; לעומת הלחץ

איור 1: הפרופיל הכרומטוגרפי של HPLC של גליקוזידים פנילתנואידים מאבקת C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa. פסגות 1 ו-2 מייצגות echinacoside ו-verbascoside, בהתאמה.

איור 2: השפעת מרתחות C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa על תקופת חוסר התנועה של עכברים תלויי זנב תוך 5 דקות. לאחר ההסתגלות, קבוצות הניסוי ניתנו עם מרתח Cistanche עשבי תיבול על ידי זנות במשך 21 ימים ולאחר מכן הושעו על ידי הזנב והתנועה נוטרה ב-5 דקות לאחר ההשעיה; כל קבוצה הייתה מורכבת מ-10 עכברים. L, M ו-H, בהתאמה, מייצגים נמוך, בינוני וגבוה; CD ו-CT, בהתאמה, מייצגים

מרתח C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa. כל הנתונים הוצגו כממוצע ± SEM; פ< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

קבוצות,

קבוצות, הקבוצות שטופלו בריכוז בינוני וגבוה של מרתח עשבי תיבול C. deserticola YCMa הראו ירידה מובהקת סטטיסטית של תקופת חוסר התנועה כל אחת ב-44.1 אחוזים ו-56.1 אחוזים; הקבוצות שטופלו בריכוז בינוני וגבוה של

מרתח עשבי תיבול C. tubulosa הראה ירידה מובהקת סטטיסטית של תקופת חוסר התנועה של כל אחד ב-41.9 אחוזים ו-47.7 אחוזים (איור2). תוצאות אלו מצביעות על כך שמרתח של C. deserticola YCMa ו-C.tubulosaיכול להפחית את רמת הלחץ והדיכאון של עכברים, ומרתח C. deserticola YCMa הפגין יעילות מעט גבוהה יותר מ-C.tubulosaמִרתָח.

1.1. מרתח של C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa שיפרה את הלמידה והזיכרון המרחביים של עכברים. אנשים (הן מתבגרים והן מבוגרים) הסובלים מדיכאון נוטים

לסבול מלקות למידה [28]; מרתח של C. deserticola YCMa ו-C.tubulosaהוכח כמקל על רמת הלחץ והדיכאון; לאחר מכן בחרנו להעריך האם מרתח של C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa יכול להשפיע על הלמידה והזיכרון המרחביים באמצעות מודל מבוך המים של מוריס, אשר מיושם באופן נרחב בהערכת הלמידה המרחבית ותפקוד הזיכרון של אזור מוח קשור.[29]. שבילי התנועה מסווגים לארבעה במהלך חביון החיפוש; מסלול קו ישר הראה שהעכברים זיהו את מיקומו של פלטפורמת החילוץ, מסלול נטייה הראה שהעכברים הראו כיוון נכון, והמסלול העצבני הראה שהעכברים היו בתקופת האימון המוקדמת או סבלו מדמנציה, בניסיון איתור מקום יעד על סמך אינסטינקט; מסלול החיפוש האקראי הראה שלעכברים הייתה יכולת מיקום נמוכה וחיפשו את מקום היעד ללא מטרה. הנתונים נרכשו על פי הקריטריונים.

ההשפעה של מרתחות C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa על יכולת למידה וזיכרון במרחב של עכברים לחוצים איפוק מוצגת באיור3. לאחר בדיקת השעיית הזנב, עכברים הראו תקופת חביון ממושכת משמעותית. בהשוואה לקבוצות הסטרס, העכברים שטופלו במינון בינוני גבוה של C. deserticola YCMa ומרתח של C. tubulosa במינון נמוך, הראו תקופת חביון מקוצרת; התדירות שבה שחו עכברים את הפלטפורמה הנסתרת הווסטה באופן משמעותי בקבוצות שטופלו במרתח C. deserticola YCMa במינון בינוני גבוה. תוצאות אלו מצביעות על כך שהעכברים הלחוצים נהנו ממתן מרתח Cistanche צמחים והראו שיפור בלמידה ובזיכרון המרחביים.

1.2. מרתח של C. deserticola YCMa ו-C.tubulosaהוריד את פעילות המונואמין אוקסידאז. MAO מזרז את הפירוק החמצוני של אמינים כגון טירמין, קטכולמין ו-5-הידרוקסיטריפטמין (5-HT) במוח וברקמות היקפיות; עיכוב פעילות MAO מביא ליעילות נוגדת דיכאון [30]. ביקשנו להסביר את ההשפעה נוגדת הדיכאון על ידי C. deserticola YCMa ו-C.tubulosa; לאחר מכן נקבעה פעילות MAO במוח. לאחר מבחן מתלי הזנב, פעילות ה-MAO הווסרה באופן משמעותי; פעילות MAO בקבוצות שטופלו בהשעיית זנב ולאחר מכן במינון בינוני וגבוה

איור 3: ההשפעה של C. deserticola YCMa ו-C.tubulosaמרתחים על יכולת למידה וזיכרון במרחב של עכברים הלחוצים. לאחר ההסתגלות, לקבוצות הניסוי ניתנו מרתח Cistanche עשבי תיבול באמצעות מתן מתן למשך 21 ימים ולאחר מכן נבדקו עם

מבוך מים של ר' מוריס לקביעת למידה מרחבית וזיכרון. L, M ו-H, בהתאמה, מייצגים נמוך, בינוני וגבוה; CD ו-CT, בהתאמה, מייצגים את C. deserticola YCMa ו-C.tubulosaמִרתָח. "#" ו-"∗" כל אחד מייצגים את P< 0.05="" and="" p="" <="">

איור 4: השפעת מרתחות C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa על פעילות מונואמין אוקסידאז במוח (MAO) של עכברים לחוצים בהשעיית זנב. לאחר ההסתגלות, לקבוצות הניסוי ניתנו מרתח ציסטאנצ'י עשבים על ידי מתן מתן למשך 21 ימים ולאחר מכן הושעו על ידי הזנב למשך 5 דקות, כל קבוצה הורכבה מ-10 עכברים, והעכברים הוקרבו כדי לקצור את רקמות המוח ומשמש למדידת פעילות MAO. L, M ו-H, בהתאמה, מייצגים נמוך, בינוני וגבוה; CD ו-CT, בהתאמה, מייצגים C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa מרתח. P= 10; כל הנתונים יוצגו כממוצע ± SEM; P <0.05 נחשב="" כשונה="" באופן="" מובהק="" וסומן="">

מרתח מ-C. deserticola YCMa הראה ירידה משמעותית בכ-13.9 אחוזים של ~12.3 אחוזים; פעילות ה-MAO בקבוצות שטופלו בהשעיית זנב ולאחר מכן במרתח במינון גבוה מ-C. tubulosa הראתה ירידה משמעותית בכ-13.2 אחוזים (איור4).הנתונים הראו כי מרתח הן מ-C. deserticola YCMa והן מ-C. tubulosa עשויה לעכב את פעילות ה-MAO ועשויה לתרום לתרופה נוגדת הדיכאון

ההשפעה והמרתח של C. deserticola YCMa הראו יעילות חזקה יותר מזו של C. tubulosa.

1.1. מתן המרתח של C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa הביא להגברת הוויסות של ריכוז הדופמין המרכזי ולהורדת הוויסות של ריכוז קורטיקוסטרון בסרום. רמת DA ו-NE ב-

איור 5: השפעת מרתחות C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa על רמות נוירוטרנסמיטר במוח של עכברים לחוצים בהשעיית זנב. לאחר ההסתגלות, קבוצות הניסוי ניתנו עם מרתח Cistanche עשבים על ידי מתן זנות למשך 21 ימים ולאחר מכן הושעו על ידי הזנב למשך 5 דקות, כל קבוצה הורכבה מ-10 עכברים, והעכברים הוקרבו לקציר רקמות המוח ושימשו לנוירוטרנסמיטר במוח מדידת רמה. L, M ו-H, בהתאמה, מייצגים נמוך, בינוני וגבוה; CD ו-CT, בהתאמה, מייצגים C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa מרתח. P= 10; כל הנתונים יוצגו כממוצע ± SEM; פ< 0.05="" was="" considered="" as="" significantly="" different="" and="" was="" marked="" as="">

מֶרכָּזִי

מערכת העצבים המרכזית נמדדה כדי לקבוע את התרגשות העצבים. לאחר 4 שבועות של בדיקת מתליית זנב, בהשוואה לקבוצות הלחץ, רמת ה-DA של קבוצות שטופלו במינון מתון של C. deserticola YCMa עלתה באופן משמעותי כל אחת ב-43.5 אחוזים; גם רמת ה-DA של קבוצות שטופלו במינון מתון של C. tubulosa הווסרה משמעותית (איור5(a)). רמת ה-NE הייתה מווסתת קלה בקבוצות שטופלו במרתח של שני הצמחים בהשוואה לקבוצות הלחץ, ולא נמצא הבדל סטטיסטי (איור5(b)).תוצאות אלו עשויות להסביר את המנגנון המולקולרי של ההשפעה האנטי-דיכאונית של צמח הצמח Cistanche.

הורמון אדרנוקורטיקוטרופי (ACTH), הורמון פוליפפטיד המיוצר ומופרש על ידי בלוטת יותרת המוח הקדמית, ממריץ את הפרשת הגלוקוקורטיקוסטרואידים על ידי פעולה על קליפת יותרת הכליה, zona fasciculata [31]; קורטיקוסטרון, הורמון סטרואידי המיוצר על ידי קליפת האדרנל, מעורב בוויסות התהליכים הפיזיולוגיים כגון הגברת אנרגיה, תגובה חסינות ותגובות לחץ [32], אז בחרנו לחקור את ההשפעה של מרתח עשבים על ציר HPA. וריכוז ACTH וקורטיקוסטרון בסרום נמדד. לאחר 4 שבועות של בדיקת מתליית זנב, ריכוז ה-ACTH והקורטיקוסטרון של קבוצת הלחץ הוסרו באופן משמעותי (איור6).לא נצפו שינויים משמעותיים בקבוצות הטיפול במרתח עשבי תיבול בהשוואה לקבוצת הלחץ (איור6(a)).בהשוואה לקבוצת הסטרס, ריכוז הקורטיקוסטרון בסרום של קבוצות שטופלו במינון בינוני וגבוה של מרתח C. deserticola YCMa הוורד משמעותית; ריכוז הקורטיקוסטרון של קבוצות שטופלו במינון גבוה של C. tubulosa היה מופחת אך לא להבדלים סטטיסטיים משמעותיים

(דמות5(b)).הנתונים הראו כי מרתח משניהם

C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa יכולים להפחית את ריכוז הקורטיקוסטרון בסרום ועשויים להיות מעורבים בוויסות ציר HPA, ומרתח של C. deserticola YCMa הראה יעילות חזקה יותר מזו של C. tubulosa.

1. דיון

במחקר זה, הוגדרו הפעילויות נוגדות הדיכאון ושיפור הזיכרון והלמידה של צמחי מרפא Cistanche, אשר עשויים לשפוך אור חדש על תפקוד הצמח Cistanche ולתת רמזים להרחבת טווח היישום הטיפולי. מחקרים קודמים מראים שצמחי המרפא Cistanche הוא תרופה סינית רב-תכליתית עם פעילויות ביולוגיות של אנטי-אייג'ינג, נוגד חמצון, אסטרוגני, אנטי-אוסטיאופורוטי, אפרודיזיאק ואנטי-דלקתי.33]. Herb Cistanche הוכר כטיפול למחסור בכליות, אי פוריות ועצירות כרונית (Pharmacopeia Committee of China, 2010). מרתח עשב ציסטאנצ'י מורכב משמנים נדיפים, גליקוזידים פנילתנואידים לא נדיפים (PeGs), אירידואידים, ליגנים, אלדיטולים, אוליגוסכרידים ופוליסכרידים. Echinacoside ו-verbascoside נתפסים בדרך כלל כמרכיבים הביו-אקטיביים העיקריים [34]. ישנם ארבעה מיני Cistanche עיקריים כולל C. deserticola YCMa, C. tubulosa, Cistanche Sinensis G. Beck ו- Cistanche salsa var. albiflorashi et al. [35]; בחרנו ב-C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa כמודל שלנו לקביעת תכולת ה-PeGs, ול-C. deserticola YCMa היה תכולה גבוהה יותר של PeGs (איור1), מה שעשוי להסביר את היעילות הגבוהה יותר של C. deserticola YCMa. התוצאות מצביעות על כך שתכולת המרכיבים הביו-אקטיביים העיקריים קובעת את יעילותו של צמח הצמח Cistanche.

איור 6: השפעת מרתחות C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa על ריכוזי הורמונים בסרום בעכברים תלויים במתח. לאחר ההסתגלות, קבוצות הניסוי ניתנו עם מרתח Cistanche עשבים על ידי מתן נתון למשך 21 ימים ולאחר מכן הושעו על ידי הזנב למשך 5 דקות, כל קבוצה הייתה מורכבת מ-10 עכברים, והדם נאסף והשתמשו בו לקביעה של הורמון אדרנו-קורטיקוטרופי בסרום (ACTH) ורמת קורטיקוסטרון (CORT). L, M ו-H, בהתאמה, מייצגים נמוך, בינוני וגבוה; CD ו-CT, בהתאמה, מייצגים C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa מרתח. P=10; כל הנתונים יוצגו כממוצע ± SEM; P < 0.05="" נחשבו="" כשונים="" באופן="" מובהק="" וסומנו="">

מחקרים קודמים מצביעים על כך שמוצרי Cistanche צמחים מועילים לטיפול בהפרעות נוירודגנרטיביות על ידי הגברת גורם הגדילה העצבי (NGF) בהיפוקמפוס של עכברים [36,37], אך לא דווח על מחקר על פעילויות נוגדות דיכאון ולמידה קוגניטיביות של צמחי מרפא Cistanche במודלים של יונקים. במחקר זה, מרתח ציסטאנצ'י עשבים הוכח כיעיל להקלה על רמת הלחץ ולהגביר באופן משמעותי את התנהגות ההישרדות במבחן מתליית הזנב (איור2) ולשפר את יכולת הלמידה והזיכרון המרחבית במודל מבוך המים (איור3). לין וחב'. הוכיח כי עשב Cistanche שיפר את הזיכרון הקשור לריח במודל זבוב הפירות [23]; מיקדנו את המחקר שלנו בהשפעה נוגדת הדיכאון ואימצנו מודל חיה אחר; התוצאה הוכיחה שהצמח Cistanche שיפר סוג שונה של תפקוד קוגניטיבי, כלומר, יכולת הלמידה המרחבית בעכברים. על פי תיאוריית המונואמין, חווית הלחץ והדיכאון קשורים קשר הדוק לרמת המוח של נוירוטרנסמיטורים מונואמין, כגון DA, NE, 5-HT ואפינפרין [38]. ומצאנו שמרתח הצמחים Cistanche יכול לערער את פעילות MAO (איור4) ולהגדיל את ריכוז ה-DA המרכזי (איור5(א)). באופן מפתיע, ריכוז ה-5--HT המרכזי הווסטה על ידי טיפול במרתח Cistanche של צמחי מרפא (נתונים לא מוצגים), מכיוון שמחקרים קודמים הראו שהפחתת הפעילות המרכזית של 5-HT קשורה לדיכאון [39]. חוסר ויסות של ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אדרנל קשור לעיתים קרובות לדיכאון [40], התערבות עם מערכת קולטני הגלוקוקורטיקואידים (GR) הצליחה להפוך את הפנוטיפ המדכא בעכברים.[41], וגילינו שצמחי המרפא Cistanche הקל באופן משמעותי על הסרום

ריכוז של CORT (איור6(b)).מודולציה של מערכת המונואמין וציר HPA תורמת שניהם להשפעה נוגדת הדיכאון של צמחי המרפא Cistanche. האכינאקוסיד יכול לחצות את מחסום הדם-מוח בחופשיות ולפעול על מערכת העצבים המרכזית [42], מה שעשוי להסביר מדוע למרתח ציסטאנצ'י צמחים יש פונקציה נוגדת דיכאון. לראשונה, אפיינו את התכונה נוגדת הדיכאון והקשר שלו לפעילויות שיפור קוגניטיבי במודל העכבר, ונחקר המנגנון המקדים. ובכל זאת, מנגנון התכונה נוגדת הדיכאון של Cistanche לא הובהר ברמה המולקולרית, ויש צורך במחקר נוסף כדי להבהיר את המנגנון האנטי-דיכאוני המקיף של עשב Cistanche.

בהתחשב בכך שמרתח Cistanche עשבים הוא תערובת של תרכובות, עשויות להיות דרכים מרובות של מרתח Cistanche עשבים להפעיל את האפקט נוגד הדיכאון ולהגביר את יכולת הלמידה. מתח חמצוני משפיע על תפקודים תאיים רבים של נוירונים וייצור יתר של מיני חמצן תגובתיים (ROS) גורם לנזק לתאים, לאפופטוזיס ולמוות [43]. Echinacoside המופק מגבעולי C. Salsa מציג אפקט נוירו-פרוקטי על ידי הפחתת הייצור של ROS ואפופטוזיס בתיווך מיטוכונדריה [44]; אקטאוזיד, תרכובת נוגדת חמצון חזקה במיוחד, עשויה להיות אחראית חלקית להשפעה העצבית[45]. מלבד השיטה המסורתית של מרתח, היישום של שיטות פרמצבטיות מודרניות כמו כמוסות גליקוזיד בשחרור מבוקר עשוי להגביר את השפעת מרתח עשבים, מכיוון שהמרכיבים הביו-אקטיביים יכולים להתעכל ולהתפרק על ידי מערכת העיכול [37].

מחקרים קודמים מצביעים על כך שמוצרי Cistanche צמחים מועילים לטיפול בהפרעות נוירודגנרטיביות על ידי הגברת גורם הגדילה העצבי (NGF) בהיפוקמפוס של עכברים [36,37], אך לא דווח על מחקר על פעילויות נוגדות דיכאון ולמידה קוגניטיביות של צמחי מרפא Cistanche במודלים של יונקים. במחקר זה, הוכח כי מרתח Cistanche עשב יעיל להקלה על רמת הלחץ ולהגביר באופן משמעותי את התנהגות ההישרדות במבחן מתליית הזנב (איור2) ולשפר את יכולת הלמידה והזיכרון המרחבית במודל מבוך המים (איור3). לין וחב'. הוכיח כי עשב Cistanche שיפר את הזיכרון הקשור לריח במודל זבוב הפירות [23]; מיקדנו את המחקר שלנו בהשפעה נוגדת הדיכאון ואימצנו מודל חיה אחר; התוצאה הוכיחה שהצמח Cistanche שיפר סוג שונה של תפקוד קוגניטיבי, כלומר, יכולת הלמידה המרחבית בעכברים. על פי תיאוריית המונואמין, חווית הלחץ והדיכאון קשורים קשר הדוק לרמת המוח של נוירוטרנסמיטורים מונואמין, כגון DA, NE, 5-HT ואפינפרין [38]. ומצאנו שמרתח הצמחים Cistanche יכול לערער את פעילות MAO (איור4) ולהגדיל את ריכוז ה-DA המרכזי (איור5(א)). באופן מפתיע, ריכוז ה-5--HT המרכזי הווסטה על ידי טיפול במרתח Cistanche של צמחי מרפא (נתונים לא מוצגים), מכיוון שמחקרים קודמים הראו שהפחתת הפעילות המרכזית של 5-HT קשורה לדיכאון [39]. חוסר ויסות של ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אדרנל קשור לעתים קרובות לדיכאון [40], התערבות עם מערכת קולטני הגלוקוקורטיקואידים (GR) הצליחה להפוך את הפנוטיפ המדכא בעכברים.[41], וגילינו שצמחי המרפא Cistanche הקל באופן משמעותי על הסרום

ריכוז של CORT (איור6(b)).מודולציה של מערכת המונואמין וציר HPA תורמת שניהם להשפעה נוגדת הדיכאון של צמחי המרפא Cistanche. האכינאקוסיד יכול לחצות את מחסום הדם-מוח בחופשיות ולפעול על מערכת העצבים המרכזית [42], מה שעשוי להסביר מדוע למרתח ציסטאנצ'י צמחים יש פונקציה נוגדת דיכאון. בפעם הראשונה, אפיינו את התכונה נוגדת הדיכאון ואת הקשר שלו לפעילויות שיפור קוגניטיבי במודל העכבר, והמנגנון המקדים נחקר. ובכל זאת, מנגנון התכונה נוגדת הדיכאון של Cistanche לא הובהר ברמה המולקולרית, ויש צורך במחקר נוסף כדי להבהיר את המנגנון האנטי-דיכאוני המקיף של עשב Cistanche.

בהתחשב בכך שמרתח Cistanche עשבים הוא תערובת של תרכובות, עשויות להיות דרכים מרובות של מרתח Cistanche עשבים להפעיל את האפקט נוגד הדיכאון ולהגביר את יכולת הלמידה. מתח חמצוני משפיע על תפקודים תאיים רבים של נוירונים וייצור יתר של מיני חמצן תגובתיים (ROS) גורם לנזק לתאים, לאפופטוזיס ולמוות [43]. Echinacoside המופק מגבעולי C. Salsa מציג אפקט נוירו-פרוקטי על ידי הפחתת הייצור של ROS ואפופטוזיס בתיווך מיטוכונדריה [44]; אצטוניד, תרכובת נוגדת חמצון חזקה במיוחד, עשויה להיות אחראית חלקית להשפעה העצבית[45]. מלבד השיטה המסורתית של מרתח, היישום של שיטות פרמצבטיות מודרניות כמו כמוסות גליקוזיד בשחרור מבוקר עשוי להגביר את השפעת מרתח עשבים, מכיוון שהמרכיבים הביו-אקטיביים יכולים להתעכל ולהתפרק על ידי מערכת העיכול [37].

1. מסקנות

במחקר זה, מצאנו כי מרתחים של C. deserticola

YCMa ו-C. tubulosa הפגינו השפעה נוגדת דיכאון ושיפרו את יכולת הלמידה והזיכרון המרחבית במודל העכבר, ולמרתחים של C. deserticola YCMa ו-C. tubulosa הייתה השפעה משמעותית על ציר HPA;

C. deserticola YCMa הראה תפקוד תרופתי חזק יותר. C. deserticola ו-C. tubulosa עשויים להכיל את הפוטנציאל להתפתח כתרופות אלטרנטיביות לטיפול בדיכאון.

גילוי נאות

הדעות המובעות כאן הן של המחברים ואינן משקפות בהכרח את הדעות של כל אחת מהסוכנויות הללו.

ניגוד עניינים

המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד עניינים.

תודות

פרויקט זה נתמך על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע (81503333) והתמיכה במדע וטכנולוגיה על ידי פרויקט באזור האוטונומי שינג'יאנג אויגור (סין) (200840102-15).

הפניות

[1] RC Kessler, KA McGonagle, S. Zhao, et al., "שכיחות חיים ו12-חודשים של הפרעות פסיכיאטריות DSM-III-R בארצות הברית: תוצאות מהסקר הלאומי הנלווה למחלות," Archives of פסיכיאטריה כללית, כרך א. 51, לא. 1, עמ' 8–19, 1994.

[2] HK Manji, GJ Moore, G. Rajkowska, ו-G. Chen, "נוירופלסטיות וגמישות תאית בהפרעות מצב רוח," מולקולרית פסיכיאטריה, כרך. 5, לא. 6, עמ' 578–593, 2000.

[3] JD Rosenblat, RS McIntyre, GS Alves, KN ​​Fountoulakis, ו-AF Carvalho, "מעבר למונואמינים-מטרות חדשות לדיכאון עמיד לטיפול: סקירה מקיפה," Current Neuropharmacology, vol. 13, לא. 5, עמ' 636–655, 2015.

[4] K. Wilson ו-P. Mottram, "השוואה של תופעות לוואי של מעכבי ספיגה חוזרת של סרוטונין סלקטיביים ונוגדי דיכאון טריציקליים בחולים דיכאוניים מבוגרים: מטה-אנליזה," International Journal of Geriatric Psychiatry, vol. 19, לא. 8, עמ' 754–762, 2004.

[5] S. Vezmar, B. Miljkovic´, K. Vucˇic´evic´ et al., "Pharmakokinetics and effective of fluvoxamine and amitriptyline in depression," Journal of Pharmacological Sciences, vol. 110, לא. 1, עמ' 98–104, 2009.

[6] CH Halsted, "תוספי תזונה ומזונות פונקציונליים: שני צדדים של מטבע?" American Journal of Clinical Nutrition, vol. 77, עמ' 1001S–1007S, 2003.

[7] י.-ס. טיאן, סי-סי. Liu, H. Xiang וחב', "חקירה על ההשפעה נוגדת הדיכאון של שמן זרעי אשחר הים באמצעות גישת המטבולומיקה מבוססת GC-MS בשילוב עם ניתוח רב משתנים," Food and Function, vol. 6, לא. 11, עמ' 3585–3592, 2015.

[8] י' הו, מ"א אבוקטווה, ד'-ל. Lei, K. Manaye, I. Khan, and

Y. Luo, "פלבנולים טבעיים נוגדי דיכאון מווסתים BDNF ו

בטא-עמילואיד בנוירונים ובהיפוקמפוס של עכברי TgAD כפול", Neuropharmacology, כרך 58, מס' 6, עמ' 911–920, 2010.

[9] J. Wattanathorn, P. Chonpathompikunlert, S. Muchimapura,

A. Priprem, ו-O. Tankamnerdthai, "Piperine, המזון הפונקציונלי הפוטנציאלי להפרעות מצב רוח והפרעות קוגניטיביות," Food and Chemical Toxicology, vol. 46, לא. 9, עמ' 3106–3110, 2008.

[10] M. Shirai, Y. Kawai, R. Yamanishi, and J. Terao, "גישה למזונות פונקציונליים חדשים לבקרת מתח 5. פרופילי פעילות נוגדי חמצון של צמחי מרפא נוגדי דיכאון ומרכיביהם הפעילים," Journal of Medical Investigation, vol. 52, עמ' 249–251, 2005.

[11] PS Kumar, T. Praveen, NP Jain, ו-B. Jitendra, "סקירה על Griffonia simplicifollia - נוגד דיכאון צמחי אידיאלי", International Journal of Pharmacy & Life Sciences, 2010.

[12] ז.-ל. Jin, N. Gao, W. Xu וחב', "פרופילי קישור ופעילות של רצפטורים וטרנספורטרים של אלביפלורין המופק מ- Radix Paeonia Alba," דוחות מדעיים, כרך. 6, מזהה מאמר 33793, 2016.

[13] ש.-ח. לין, מ.-ל. צ'ו, W.-C. Chen וחב', "עשב מרפא, Melissa officinalis L. משפר התנהגות דמוית דיכאון של חולדות במבחן השחייה הכפויה באמצעות ויסות הנוירוטרנסמיטר הסרוטונרגי," Journal of Ethnopharmacology, vol. 175, מאמר מס'. 9741, עמ' 266–272, 2015.

[14] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. שאן, ומ.-ה. סו, "ההשפעות ההיפוכולסטרולימיות של תמצית Cistanche tubulosa, תרופה סינית מסורתית, בעכברים," American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, לא. 6, עמ' 1125-1138, 2009.

[15] LI Xia, MA Yong-Qing, YX Song, JF Shui ו-LI Xiu-Wei, "השפעת מווסת גידול צמחים שונים על יחס ההישרדות של שתיל האמונדנדרון haloxyfop והיחס הטפילי של cistanche deserticola," Journal of Chinese חומרים רפואיים, כרך. 32, עמ' 1651–1654, 2009.

[16] Q. Xiong, S. Kadota, T. Tani, and T. Namba, "השפעות נוגדות חמצון של phenylethanoids from Cistanche deserticola," Biological and Pharmaceutical Bulletin, vol. 19, לא. 12, עמ' 1580–1585, 1996.

[17] Y. Wu, L. Li, T. Wen, ו-Y.-Q. לי, "השפעות הגנה של echinacoside על רעילות כבד הנגרמת על ידי פחמן טטרכלוריד בחולדות," Toxicology, vol. 232, מס'. 1-2, עמ' 50–56, 2007.

[18] T. Wang, C. Chen, M. Yang, B. Deng, GM Kirby, and X. Zhang, "Cistanche tubulosa תמצית אתנול מתווך רמות הורמוני מין של חולדה על ידי אינדוקציה של אנזימים סטרואידוגניים אשכים," Pharmaceutical Biology, vol. 54, לא. 3, עמ' 481–487, 2016.

[19] L. Gu, WT Xiong, YL Zhuang, JS Zhang, ו-X. Liu, "השפעות של תמצית Cistanche deserticola על תגובת זיקפה של הפין בחולדות מסורסים", Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 29, לא. 2, עמ' 557–562, 2016.

[20] SG Lin, SF Ye, JM Huang, וחב', "כיצד תרופות סיניות המחזקות את הכליה מעכבות אפופטוזיס של נוירון דופמינרגי?" מחקר התחדשות עצבית, כרך. 8, לא. 30, עמ' 2820–2826, 2013.

[21] סי'-ר. וו, ה.-סי. לין, ומ.-ה. סו, "היפוך על ידי תמציות מימיות של Cistanche tubulosa מחסרים התנהגותיים במודל חולדות דמוי מחלת אלצהיימר: רלוונטיות לתצהיר עמילואיד ותפקוד נוירוטרנסמיטר מרכזי," BMC Complementary and Alternative Medicine, vol. 14, עמ' 1-11, 2014.

[22] DR Lara, LW Bisol ו-LR Munari, "השפעות נוגדות דיכאון, מייצבות מצב רוח ופרוקוגניטיביות של קטמין תת-לשוני במינון נמוך מאוד בדיכאון חד-קוטבי ודו-קוטבי עקשן," International Journal of Neuropsychopharmacology, vol. 16, לא. 9, עמ' 2111–2117, 2013.

[23] W. Lin, C. Yao, J. Cheng, S. Kao, F. Tsai, and H. Liu, "מסלולים מולקולריים הקשורים לקידום אריכות ימים ושיפור קוגניטיבי של Cistanche tubulosa ב-Drosophila,"

Phytomedicine, vol. 26, עמ' 37–44, 2017.

[24] JF Cryan, C. Mombereau, ו-A. Vassout, "מבחן השעיית הזנב כמודל להערכת פעילות נוגדת דיכאון: סקירה של מחקרים תרופתיים וגנטיים בעכברים," Neuroscience and Biobehavioral Reviews, vol. 29, לא. 4-5, עמ' 571–625, 2005.

[25] CV Vorhees ו-MT Williams, "מבוך המים של מוריס: נהלים להערכת צורות למידה וזיכרון מרחביות וקשורות", Nature Protocols, vol. 1, לא. 2, עמ' 848–858, 2006.

[26] ר' מוריס, "פיתוחים של הליך מבוך מים לחקר למידה מרחבית בחולדה," Journal of Neuroscience Methods, vol. 11, לא. 1, עמ' 47–60, 1984.

[27] א' וולף, ב' באואר, א"ל אבנר, ט' אשכנזי-פרולינגר וא.

MS Hartz, "סוללת בדיקה התנהגותית מקיפה להערכת למידה וזיכרון בעכברים 129S6/Tg2576," PLoS ONE, כרך. 11, לא. 1, מזהה מאמר e0147733, 2016.

[28] BP Rourke, GC Young, ו-AA Leenaars, "לקות למידה בילדות המעמידה את הסובלים לדיכאון של מתבגרים ומבוגרים ולסיכון התאבדות." Journal of Learning Disabilities, vol. 22, לא. 3, עמ' 169–175, 1989.

[29] R. D'Hooge ו-PP De Deyn, "יישומים של מבוך המים של מוריס בחקר הלמידה והזיכרון," Brain Research Reviews, vol. 36, לא. 1, עמ' 60–90, 2001.

[30] JC Shih, K. Chen, ו-MJ Ridd, "מונואמין אוקסידאז: מגנים להתנהגות," Annual Review of Neuroscience, vol. 22, עמ' 197–217, 1999.

[31] SR Bornstein, WC Engeland, M. Ehrhart-Bornstein, and JP Herman, "Dissociation of ACTH and glucocorticoids," Trends in Endocrinology and Metabolism, vol. 19, לא. 5, עמ' 175–180, 2008.

[32] S. Whirledge ו-JA Cidlowski, "Glucocorticoids, stress, and fertility," Minerva Endocrinologica, vol. 35, לא. 2, עמ' 109–125, 2010.

[33] L. Wang, H. Ding, H. Yu וחב', "Cistanches Herba: Chemical Constituents and Pharmacological Effects," Chinese Herbal Medicines, vol. 7, לא. 2, עמ' 135–142, 2015.

[34] ז' לי, ה' לין, ל' גו, ג' גאו, וס'-מ. צנג, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): אחת המתנות הפרמצבטיות הטובות ביותר של הרפואה הסינית המסורתית," Frontiers in Pharmacology, vol. 7, סעיף 41, 2016.

[35] HM Shi, J. Wang, MY Wang, PF Tu, ו-XB Li, "זיהוי של מיני Cistanche על ידי טביעות אצבעות חוזרות ברצף כימי ובין-פשוט", ביולוגי ותרופות עלון, כרך. 32, לא. 1, עמ' 142–146, 2009.

[36] JG Choi, M. Moon, HU Jeong, MC Kim, SY Kim, and

MS Oh, "Cistanches Herba משפר את הלמידה והזיכרון על ידי גרימת גורם גדילה עצבי," Behavioral Brain Research, vol. 216, מס'. 2, עמ' 652–658, 2011.

[37] Q. Guo, Y. Zhou, C.-J. Wang et al., "מחקר פתוח, לא מבוקר פלצבו על כמוסות cistanche tubulosa glycoside (Memoregain®) לטיפול במחלת אלצהיימר בינונית," American Journal of Alzheimer's Disease and Other Dementias, vol. 28, לא. 4, עמ' 363–370, 2013.

[38] M. Popoli, M. Gennarelli, and G. Racagni, "מודולציה של פלסטיות סינפטית על ידי סטרס ותרופות נוגדות דיכאון," הפרעות דו קוטביות, כרך. 4, לא. 3, עמ' 166–182, 2002.

[39] AJ Cleare, A. McGregor, and V. O'Keane, "ראיות נוירואנדוקריניות לקשר בין תת פעילות בלוטת התריס, הפחתת פעילות HT מרכזית ודיכאון," Clinical Endocrinology, vol. 43, לא. 6, עמ' 713–719, 1995.

[40] NL Lopez-Duran, M. Kovacs, ו-CJ George, "חוסר ויסות של ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אדרנל בילדים ובני נוער מדוכאים: מטה-אנליזה," Psychoneuroendocrinology, vol. 34, לא. 9, עמ' 1272–1283, 2009.

[41] N. Barden, "השלכה של ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-אדרנל בפיזיופתולוגיה של דיכאון," Journal of Psychiatry and Neuroscience, vol. 29, לא. 3, עמ' 185–193, 2004.

[42] M. Zhu, C. Lu ו-W. Li, "חשיפה חולפת לאכינאקוסיד מספיקה כדי להפעיל איתות Trk ולהגן על תאים עצביים מפני רוטנון," Journal of Neurochemistry, vol. 124, לא. 4, עמ' 571–580, 2013.

[43] ת.-ח. לו, סי-סי. סו, פ.-סי. Tang וחב', "חומצה כלורואצטית מעוררת אפופטוזיס בתאי עצב באמצעות מסלול איתות אנדופלזמי של רשתות רשתיות המושרות על ידי חמצן תגובתי," Chemico-Biological Interactions, vol. 225, עמ' 1–12, 2015.

[44] י.-ה. וואנג, ז'-ה. שואן, ס. טיאן ו-G.-H. Du, "Echinacoside מגן מפני 6-תפקוד מיטוכונדריאלי המושרה על ידי הידרוקסי-דופמין ותגובות דלקתיות בתאי PC12 באמצעות הפחתת ייצור ROS," Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, vol. 2015, מזהה מאמר 189239, 9 עמודים, 2015.

[45] WF Chiou, LC Lin, ו-CF Chen, "Acteoside מגן על תאי האנדותל מפני מתח חמצוני הנגרם על ידי רדיקלים חופשיים," Journal of Pharmacy and Pharmacology, vol. 56, לא. 6, עמ' 743–748, 2004.