המודיאליזה מעלה מתח חמצוני באמצעות רדיקלים ממוקדי פחמן למרות שיפור התאימות הביולוגית

הפעלת לויקוציטים וכתוצאה מכךמתח חמצוניהמושרה על ידיחומרים לא תואמים ביובְּמַהֲלָךהשפעת המודיאליזההפרוגנוזה של החולים. למרות התקדמות מרובות בתחוםדיאליזרי המודיאליזה, הפרוגנוזה של המודיאליזהחולים עם סיבוכים הקשורים לעומקמתח חמצוני, כמוסוכרת המלליטוס נשאר עני. לפיכך, הערכנו מחדש את ההשפעות שלהמודיאליזהעל מיני חמצן תגובתיים מרובים באמצעות שיטות מבוססות תהודה ספין אלקטרונים לשיפור נוסף שלתאימות ביולוגיתבהמודיאליזה. רשמנו 31 מטופלים במצב יציב שעברו המודיאליזה באמצעות דיאליזרי פוליסולפון בשטף גבוה. ההשפעות של המודיאליזה על מיני חמצן תגובתיים הוערכו בשתי שיטות: MULTiS, אשר מעריכה פעילויות ניקוי בסרום כנגד מיני חמצן ריאקטיביים הידרופיליים מרובים, ו-i-STrap, אשר מזהה רדיקלים ליפופיליים במרכזי פחמן. בדומה למחקרים קודמים, מצאנו שפעילות ניקוי רדיקלי הידרוקסיל בסרום השתפרה משמעותית לאחר המודיאליזה. בניגוד למחקרים קודמים, גילינו שפעילות הניקוי נגד רדיקלי אלקוקסיל הופחתה משמעותית לאחר מכןהמודיאליזה. יתרה מכך, מטופלים עם סוכרת הראו ירידה בפעילות הסרה בסרום כנגד רדיקלים אלקיל פרוקסיל ועלייה ברדיקלים ליפופיליים במרכז הפחמן לאחר המודיאליזה. תוצאות אלו מצביעות על כך שלמרות שיפורים נרחבים בממברנות הדיאליזר, הצורות שלמיני חמצן תגובתייםשניתן לבטל במהלך דיאליזה מוגבלים, ומיני חמצן תגובתיים מרובים נשארים ברמות מוגברות במהלך המודיאליזה.

מילות מפתח:המודיאליזה, תאימות ביולוגית, תהודה ספין אלקטרונים רדיקלי אלקיל פרוקסיל, MULTiS, i-STrap

לחץ כאן כדי לקבל תמצית CISTANCHE אורגנית טבעית עם 25% אכינאקוסיד ו-9% אקטוזיד לתפקוד הכליה

השירות התומך של Wecistanche - יצואנית ה-cistanche הגדולה בסין:

דוא"ל:wallence.suen@wecistanche.com

ווטסאפ/טלפון:+86 15292862950

קנה לפרטי מפרטים נוספים:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

מחלת כליות כרונית(CKD) ידוע כמזוהה עםלחץ חמצוני גבוה. (-4)הצטברות של רעלן אורמיs עם תכונות פרו-אוקסידטיביות המובילות למיקרו דלקתשנגרם על ידי העלייה של ציטוקינים פרו דלקתייםsהוא המאפיין המרכזי שלפתופיזיולוגיה של CKD. (s-, המודיאליזה (HD), טיפול חלופי כליות הנערך באופן נרחב, פועל כחרב פיפיות להפחתת מתח חמצוני בחולים עם CKD. הפעלת לויקוציטים פולימורפו-גרעיניים, עקב מגע עם הממברנה או משטחים מלאכותיים אחרים במעגלי HD , הוא הגורם העיקרי ללחץ חמצוני המושרה על ידי HD.s-) לעומת זאת, הסרת רעלנים אורמיים פרו-אוקסידטיביים, במיוחד תרכובות הידרופיליות בעלות משקל מולקולרי נמוך כגון תרכובות טרימתילאמין-נוקסידאור גואנידינו, עשויה לשפר את האופי נוגד החמצון של HD, מוביל לשיפור ארוך טווח של שיעור ההישרדות ואיכות החיים בחולים עם CKD. (2,13) ​​בנוסף, תיקון החמצת מוביל להפעלה מחדש של אנזימים נוגדי חמצון והפחתת עומס נפח המוביל למניעת קרדיו. סיבוכים של כלי הדם הם מנגנונים נוגדי חמצון. (4 לפיכך. הכרחי לחומרי HD כדי למזער את הפעלת לויקוציטים ולמקסם השפעות נוגדות חמצון. כדי להתגבר על בעיה זו פותחו חומר HD נוגד חמצון ותואם ביולוגי, המודגם על ידי הדיאליזר המצופה ויטמין E. (si7) עם זאת, למרות ההתקדמות הרבות בדיאליזר HD, הפרוגנוזה של חולי HD נותרה בלתי משביעת רצון, במיוחד אלה עם סוכרת (DM), מחלה המקדמת מצב חמצוני מאוד. (8) חששות אלה נובעים חלקית מהפרטים של מגוון רחב ומורכב in vivoתגובות הקשורות ללחץ חמצונילא נותחו מספיק. לפיכך, מחקר זה נועד להבהיר את ההשפעה של HD על דינמיקת מיני חמצן תגובתיים (ROS), כאירועים במעלה הזרם של תגובות עקה חמצונית, בהתבסס על התפיסה שכל אתר יעד של תגובות חמצון ונוגדי חמצון בגוף צריך להיות מתואר ביוכימי בזמן ובמרחב ספציפיים. הסבר אחד לכך הוא אחוסר ניתוח מפורטשל הצד במעלה הזרם של תגובות הקשורות ללחץ חמצוני המעוררות תגובות תאיות אלו. הזיהוי של ROS הפועלים כממריצים של תגובות עקה חמצונית או אינטראקציות בין ROS ליצירת ממריצים חמצוניים הוא קשה בגלל קצבי התגובה הגבוהים ושרשרות התגובה המורכבות. מכיוון ש-ROS אינם אחידים ול-ROS בודדים יש מאפיינים ספציפיים במהלך תגובות in vivo, נדרש ניתוח של מספר ROS. (9-2n לפיכך, כדי לשפר את התאימות הביולוגית המבוססת על שימוש בחומרים נוגדי חמצון ותואמים ביולוגיים, יש להבין את השינויים בדינמיקה של ROS הנגרמים על ידי HD.

כדי לחקור את הדינמיקה של ROS במהלך HD, השתמשנו בשתי שיטות שפותחו לאחרונה המבוססות על תהודה ספין אלקטרונים (ESR). מבחן ריבוי הרדיקלים החופשיים ההידרופיליים (MULTIS) ומבחן זיהוי הרדיקלים הליפופיליים בדם מלא (i-STrap) למרות שהמחקר על פעילות סילוק ROS על ידי ESR אינו נרחב, הוא נותר השיטה היחידה הזמינה לזיהוי סוג ובחינת הדינמיקה של ROS. השיטה משלבת מערכת זרימה מסוג כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים עם מערכת ESR ומשתמשת ב-5-(2,2-dimethyl-1.3-propoxycyclophosphoryl)-5- מתיל-1-pyrrolineNoxide(CYPMPO) כמלכודת הספין. MULTIS מספקת רגישות ויציבות גבוהות יותר למדידת ניקוי ROS בהשוואה למבחני ESR קונבנציונליים.22-24) אחד השותפים שלנו דיווח בעבר על פעילויות ניקוי ROS שנמדדו ב-MULTIS בחולים עם CKD בשלב 5. עם זאת, הם לא העריכו את ההשפעה של HD.e2) בנוסף, שיטת i-STrap היא שיטה מבוססת ESR המזהה ROS בדם מלא באמצעות 2-diphenylphosphinoyl-2-methyl-3,{ {20}}dihydro-2H-pyrrole N-oxideDPhPMPO) כמלכודת הספין שלו ומודד ESR לאחר מיצוי אורגני, ובכך משקף ROS.2s ליפופיל.26 במחקר זה, מצאנו שהרמות של מספר ROS היו מוגברת ולא בוטלה על ידי HD, מה שמעיד על כך שתגובות שרשרת רדיקליות עדיין אינן מבוקרות כראוי בעקבות HD. זה עשוי להשפיע עלפרוגנוזה של חולים עם CKD.

חומרים ושיטות

נושאים והסכמה מדעת. כל ההליכים שנערכו בנושאים אנושיים בוצעו לאחר קבלת הסכמה אישית בכתב. הפרוטוקול בשימוש אושר על ידי ועדת אוניברסיטת צוקובה לטכנולוגיה (הרשאה מס' 201809). זהו מחקר תצפיתי; לכן, בוצעו התערבויות בחולים. בסך הכל נכללו במחקר 31 חולי HD יציבים. השגנו ורשמנו מידע קליני ודמוגרפי עבור כל מטופל. כל המטופלים טופלו בדיאליזרי ממברנות פוליסולפון בעלי שטף גבוה (Toray Medical Co., Ltd., Tokyo, יפן) עם שטחי פני ממברנה שונים, המותאמים למבנה הגוף של כל אדם. החולים חולקו לשתי קבוצות בהתאם לגורם למחלת הכליות הסופית שלהם: הקבוצה הלא-סוכרתית (ללא DM, n=17) וקבוצת הסוכרת, n=14).

אוסף דוגמאות. דגימות דם התקבלו בתחילת וסיומו של טיפול הדיאליזה מהדגימה הממוקמת בצד העורקי של מעגל ה-HD. עבור מדידות MULTIS, הסרה הופרדו ואוחסנו במקפיא בדרגה {{0}} (עד ביצוע המדידה, עבור מדידות i-STrap. דגימות דם מלא נאספו בצינורות מצופות הפרין שהותרו לעמוד שעה אחת לפני המדידות. מדידות של פעילות ריבוי רדיקלים חופשיים בנסיוב. פעילויות ניקוי ROS הידרופיליות נמדדו בשיטת MULTIS תוך שימוש בפרוטוקולים שתוארו קודם לכן עם שינויים מינוריים.2227) פעילויות ניקוי נגד חמישה ROS, כלומר רדיקלי הידרוקסיל(OH) נמדדו , סופראוקסיד(0,"), רדיקל אלקוקסיל (RO"), רדיקל פרוקסיל אלקיל (ROO"), וחמצן יחיד ('0,),. ספקטרומטר ESR בפס X( נעשה שימוש ב-RR-Xl ESR: Radical Research Inc., טוקיו, יפן) המשתמשת באפנון שדה של 100 kHz ותוכנת תפעול WN-RAD (Radical Research Inc.). OH, O, RO', ו-ROO' ו-4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine (TEMP)עבור 'O. הגדרות הספקטרומטר האופייניות היו כדלקמן: רוחב אפנון שדה.0.1 mT; כוח מיקרוגל, 10 mW; רוחב וקצב סריקת השדה+7.5 mT/2 דקות; וקבוע זמן, 0.1 שניות. כל ROS נוצר באמצעות תאורה באתרית עם אור UV/נראה ממאיר RUVF-203SR UV illuminator, Radical Research Inc.) המצויד במנורת קשת כספית/קסנון בלחץ בינוני 200W ו מנחה אור קוורץ, מחובר לחלל התהודה. מקורות האור, זמני ההארה, המבשרים וחומרי ה-photosensitizer המשמשים לייצור ROS מסוכמים בטבלה 1. פעילויות ניקוי ה-ROS חושבו לפי שיטה שתוארה קודם לכן22) והומרו ליחידה המקבילה לסורקים טהורים ידועים: גלוטתיון (GSH) עבור OH ו-'O, superoxide dismutase (SOD)for O, 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (Trolox)for RO', וכן חומצה ליפואית עבור ROO'MULTIS מדידות עבור כל ROS בוצעו בשלושה עותקים.

מדידה של ליפופיל

פעילות ניקוי Ros בדם מלא באמצעות i-Strap. פעילות ROsscavenging ליפופילית נמדדה באמצעות מדידת i-STrap ESR ki(Dojin-Glocal/Dojindo, Kumamoto, Japan) בהתבסס על פרוטוקול היצרן ודוח קודם.2 שיטה זו מבוססת על התגובה התחרותית בין נוגדי חמצון בדם מלא ו-DPhPMPO עם ה-tert-butyl hydroperoxide (BuOOHradical. דגימות דם מלאות הודגרו עם DPhPMPO(1{{10}} mM) ו-test-BuOOH (10 mM) למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר הדגירה, הספין אדדוקטים בשלב האורגני חולצו באמצעות תמיסות כלורופורם ומתנול; מדידות ESR נערכו באמצעות דגימות אורגניות אלו. תנאי המדידה היו זהים לאלו של MULTISmeasurement, למעט רוחב וקצב סריקת השדה, שנקבעו ב-+5 .0 mT/2 דקות, לא היו נוגדי חמצון ספציפיים למדידת i-STrap; לפיכך, פעילות ההשקה הובעת כערך 10/-1, כאשר "0" מציין את עוצמת האות ללא דגימה ו-"' מציין את האות עוצמה עם דגימה.(28) ריאגנטים. CYPMPO התקבל מ-RR INC.(יפן); ריבופלבין, 2,2'-אזוביס (2-amidinopropane) דיהידרוכלוריד (AAPH), text-BuOOH, דימתיל sulfoxide (DMSO), וורד בנגל נרכשו מסיגמא-אלדריץ' יפן (טוקיו, יפן) ו-TEMP נרכשה מהתעשייה הכימית של טוקיו (טוקיו, יפן). מי חמצן ומאגרים התקבלו מ-WakoChemical Co.(אוסקה, יפן). ניתוח סטטיסטי". ניתוח סטטיסטי בוצע באמצעות Prism 6 עבור תוכנת מחשב Mac OS X (GraphPad SoftwareInc., La Jolla, CA). הנתונים נבדקו באמצעות הסטודנט של הסטודנט מבחן t מצמד. הנתונים הובאו כערכים ממוצעים עם רווח בר סמך של 95% (95% CI.