פרמטרי מיצוי ושיטות ייבוש של Cistanche Deserticola

Cistanche הוא Cistanche deserticola YC Ma orCistanche tubulosa (Schenk) Wightגזע בשרני יבש עם עלים קשקשים של צמח OrobanchiaceaeCistanche deserticola YC Ma[1]. החומר הפעיל העיקרי של Cistanche deserticola הוא פנילטנול גליקוזידים [2-4]. מחקרים פרמקולוגיים הראו שיש לו את הפונקציות שלאפרודיזיאק, שיפור חסינות, ושיפור הזיכרון[4-9].

בשנים האחרונות, נעשה שימוש נרחב במתודולוגיית משטח התגובה במיצוי הרפואה הסינית המסורתית [{{0}}]. לשיטת משטח התגובה יש את היתרונות המובנים של דיוק זיהוי גבוה, פחות מספר ניסויים נדרש, חיזוי מדויק של מודלים של פונקציות ויכולת לשקף את הקשר בין גורמים וערכים חזויים [15-17]. לכן, ניסוי זה משתמש בציון המקיף של התוכן של חמשת הגליקוזידים של פנילתנול כערך התגובה, ומשתמש בתוכנת Design-Expert 8.0.6.1 כדי לתכנן את הניסוי, לייעל את תהליך המיצוי של Cistanche deserticola, ולספק מידע לזיהוי ו הקמת תקני איכות שלCistanche deserticola.

נכון לעכשיו, המדדרכיבים echinaceaside ו-verbascosideהם נושאי מחקר חמים בטכנולוגיית החילוץ והעיבוד שלCistanche deserticola. מהדורת 2015 של הפרמקופאה הסינית קובעת ששיטת העיבוד של Cistanche deserticola היא "להסיר זיהומים, לשטוף, להרטיב, לחתוך לפרוסות עבות ולייבש". [1] אין תקנות ברורות לשיטת הייבוש. לכן, בניסוי זה נעשה שימוש בשמונה שיטות ייבוש שונות, כולל ייבוש בשמש, ייבוש בצל, ייבוש בתנור (40, 60, 80, 100, 120 מעלות) וייבוש בהקפאה, כדי לעבד את Cistanche deserticola [18], אשר סיפקו בסיס תיאורטי עבור תהליך ייבוש של Cistanche deserticola.

על הדרכה.

תמצית CISTANCHE עם 30% ECHINCAOSIDE

1 חומרים וכלים

Fresh Cistanche deserticola נקצר באוקטובר 2018. מקום המוצא הוא Mitan Township, Minqin County, Baiyin, Provincie Gansu. פרופסור חבר גואו יהונג מהאוניברסיטה החקלאית גאנסו זיהה אותו כ-Cistanche deserticola YC Ma, גבעול בשרני עם עלי אבנית. חומרי התייחסות echinaceaside (מספר אצווה 82854-37-3, שבר מסה גדול מ-98%), cistancheaside A (מספר אצווה 93236-42-1, חלק מסה גדול מ-95%), verbascoside (מספר אצווה { {5}}, שבר מסה גדול או שווה ל-98%), איזומורבאזין (מספר אצווה 61303-13-7, שבר מסה גדול או שווה ל-98%), 2'-אצטיל verbascoside (מספר אצווה 94492-24-7 , חלק מסה גדול או שווה ל-95%) נרכשו מ-Chengdu Pu. Feide Biotechnology Co., Ltd.; חומצה פורמית ומתנול הם בדרגת כרומטוגרפיה, חברת Merck מגרמניה; מים הם מים מטוהרים, וריאגנטים אחרים הם בדרגה אנליטית.

Waters Acquity כרומטוגרף נוזלי, גלאי מחשב כף יד, תחנת עבודה לכרומטוגרפיה של Empower ומערכת ניהול ממס רבעוני; KQ-100מנקה קולי E, Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.

חֶברָה; מאזן אנליטי AL104, Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.; מייבש הקפאה LyoQuest-85, Telstar, ספרד.

2 שיטות ותוצאות

2.1 הכנת פתרון התייחסות

שקלו בדיוק את הכמויות המתאימות שלechinaceaside, cistancheoside A, verbascoside, isorbascoside, ו-2'-acetyl verbascoside תקני התייחסות, והוסיפו 70% מתנול כדי להפוך את ריכוזי המסה 1.04, 0.61, 0.63, 0.39 ו-0.48 מ"ג/מ"ל של תמיסת ייחוס מעורבת.

2.2 תנאים כרומטוגרפיים של Cistanche deserticola

Waters Symmetry C18 (250 מ"מ×4.6 מ"מ, 5 מיקרומטר); טמפרטורת העמודה 30 מעלות, זרימת נפח 1.0 מ"ל/דקה; הפאזה הניידת היא מתנול-0.1% תמיסה מימית של חומצה פורמית, שיפוע אלוציה: 0~12 דקות, 29%~34% מתנול; 12-40 דקות, 34%-40% מתנול; 30-35 דקות, 40%-35% מתנול; 35-40 דקות, 30% מתנול;

1-echinacoside 2-cistanche A 3-verbascoside 4-isoacteoside 5-2′-acetylacteoside

איור 1 HPLC של התייחסות מעורבת (A) ודגימת C. deserticola (B)

2.3 הכנת תמיסת בדיקה

שקלו במדויק 1 גרם אבקת Cistanche deserticola מיובשת לתוך בקבוק ארלנמייר (הועבר דרך מסננת רשת 65-), הוסיפו 50 מ"ל של 50% מתנול, שקלו את המסה, קולי ב-40 קילו-הרץ ב-150 ואט, קררו לטמפרטורת החדר. , ולהרכיב את המסה כדי לקבל אותה.

2.4 חקירת קשר ליניארי

קח את {{0}}.1, {{20}}.5, 1, 2, 4 ו-8 מ"ל מתמיסת הייחוס המעורבת לעיל לתוך 10 מ"ל בקבוק נפח, והוסיפו 70% מתנול לסימון. צייר במדויק 10 μL ומדוד לפי התנאים הכרומטוגרפיים של "2.2". ריכוז המסה הוא האבססיס (X) ושטח השיא הוא הסמטה (Y). בצע רגרסיה ליניארית ומשוואות הרגרסיה הן: Echinacea Y=128 049 X -830 189, r=0.999 5, טווח ליניארי 10.4~832.0 ug/mL; Cistancheside AY=87 980 -447 963, r＝0.999 8, טווח ליניארי 6.3-504.0 ug/mL; Isomurabasin Y＝92 831 גליקוזיד Y=79 207 X-304 428, r=0.999 4, טווח ליניארי 4.8~384.0 ug/mL.

2.5 סקירה מתודולוגית

2.5.1 בדיקה מדויקת

קח 20 μL מתמיסת הייחוס המעורבת בפריט "2.1" והזריק 6 פעמים ברציפות כדי למדוד את אזורי השיא של echinaceaside, cistancheaside A, verbascoside, isorebascoside ו-2'-acetylverbascoside. RSDs הם 0.23% בהתאמה. , {{10}}.71%, 0.59%, 0.41%, 0.29%, מה שמציין שלמכשיר יש דיוק טוב.

2.5.2 מבחן החזרה

קחו 6 מנות מאותה דגימת Cistanche deserticola, הכינו את תמיסת הבדיקה לפי פריט "2.3", הזריקו את הדגימה בתנאים הכרומטוגרפיים של פריט "2.2", ומדדו את שטח השיא. תוצאות חלקי המסה הממוצעים של echinaceaside, cistancheoside A, verbascoside, isorebascoside ו-2'-acetyl verbascoside היו 1.83%, 0.21%, 2.34%, 0.13% ו-{{15 }}.68% בהתאמה, וה-RSDs היו 1.32 בהתאמה. %, 0.83%, 1.24%, 2.19%,

0.78%, מציין שלשיטה יש יכולת חזרה טובה.

2.5.3 מבחן יציבות

קבע את היציבות של אותה תמיסת בדיקה (הוכנה לפי "2.3") ב-0, 2, 4, 8, 12, 24 ו-48 שעות כדי להשיג echinaceaside, cistancheoside A, verbascoside ו- isolebascoside. , אזור שיא 2'-acetyl verbascoside, RSD היו 0.58%, 0.21%, 1.58%, 1.46%, 2.19% בהתאמה, מה שמצביע על כך שתמיסת הבדיקה הייתה יציבה תוך 48 שעות.

2.5.4 מבחן התאוששות לדוגמה

קח 1 גרם של 6 דגימות Cistanche deserticola עם תוכן ידוע, והוסף במדויק כמות מסוימת של תמיסת ייחוס מעורבת (Echinaceaside 1.06 mg/mL, Cistancheoside A 0.86 mg /מ"ל, Verbascoside 2.17 מ"ג/מ"ל, Isolebascoside 0.79 מ"ג/מ"ל, 2'-אצטיל verbascoside 0.91 מ"ג/מ"ל), הוסף 70% מתנול כדי להספיק ל-50 מ"ל, ו להזריק דגימות בהתאם לתנאים הכרומטוגרפיים של "2.2". ממוצע ההתאוששות שנמדד הוא 101.52%, 99.21% ו-102.62% בהתאמה. , 98.62%, 97.36%, RSD הם 1.64%, 1.95%, 0.87%, 1.59%, 1.13% בהתאמה, ושיעור התאוששות המדגם טוב.

Cistanche הוא עשב טוניק ידוע שיכול להזין ולהגן על הכליות. בתורת הרפואה הסינית המסורתית, Cistanche הוא הצמח הטוב ביותר לכליות.Cistanche עשיר באכינאקוסיד, אקטאוזיד ופלבנואידים. מרכיבים יעילים אלה ב-Cistanche יכולים להפחית אפופטוזיס של תאי כליה ולהגביר את התפשטות תאי הכליה. לכן, Cistanche הוא תוסף כליות טבעי.