קביעת תמצית אכינאקוסיד במים של Cistanche Herba על ידי HPLC

תַקצִיר:

מטרה הוקמה שיטת HPLC עבורקביעת אכינאקוסידב-תמצית מים של Cistancheהרבה.

שיטות Echinacoside נקבע על ידי HPLC. ההפרדה בוצעה על עמודת Inertsil ODS-SP C18 עם פאזה ניידת המורכבת מאצטוניטריל(A) ו-0.4% תמיסת חומצה זרחתית(B), על ידי דליית שיפוע. אורך גל הזיהוי נקבע ל-333 ננומטר, וטמפרטורת העמודה הייתה 30 מעלות. קצב הזרימה היה 1.0 mL·min-1 ונפח ההזרקה היה 10 μL. תוצאות הקשר הליניארי של echinacoside בטווח הריכוז של 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 היה טוב(r=0.999 8). השחזורים היו 94.59%-105.31% (RSD= 2.93%,n=9). התוכן של echinacoside בתמציות מים של Cistanche herba היה 15.527,7.347,12.267 mg·g-1. מסקנה שיטת ה-HPLC המבוססת עם יכולת חזרה טובה היא מדויקת, פשוטה וישימה. הוא מתאים לקביעת אכינאקוסיד בתמצית המים של Cistanche herba.

מילות מפתח:HPLC;תמצית מים של Cistanche herba; echinacoside; קביעת תוכן

Cistanche deserticola היא רפואה סינית מסורתית טוניקית הנפוצה בשימוש קליני וידועה בשם "ג'ינסנג מדברי" [1]. ה-Cistanche deserticola שנרשם במהדורת 2015 של הפרמקופאה הסינית הוא הגבעול הבשרני המיובש עם עלים קשקשים של Cistanche deserticola YC Ma או Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. הוא חם, מתוק ומלוח, וחוזר למרידיאנים של הכליות והמעי הגס. יש לו השפעות של הזנת יאנג הכליות, מילוי תמצית ודם, והענקת לחות למעיים ולחומרים משלשלים [2]. "ה-Materia Medica של שן נונג", אומר שהיא יכולה "לחזק את האמצע, להזין את חמשת האיברים הפנימיים, לחזק את היין ולהזין את המהות". Cistanche deserticola מכיל בעיקר גליקוזידים פנילתנואידים, אירידואידים והגליקוזידים שלהם, ליגננים והגליקוזידים שלהם, פוליסכרידים, תרכובות אסטר ואלקלואידים [3]. פנילטנול גליקוזידים הם המרכיבים הפעילים העיקריים של Cistanche deserticola. ביניהם, echinacoside ו-verbascoside רשומים ב- Cistanche deserticola בפרמקופיה הסינית.

רכיבים אינדיקטיביים לזיהוי וקביעת תוכן. מחקרים פרמקולוגיים [4] מראים כי ל- Cistanche deserticola השפעות תרופתיות שונות כמו משלשל, הגנה על הכבד, אנטי אוסטאופורוזיס, נוגד חמצון, אנטי אייג'ינג ואנטי עייפות. תמצית מימית Cistanche deserticola יכולה לקדם את הביטוי של גן חלבון 2 מורפוגנטי בעצם באוסטאובלסטים של חולדה, פוספטאז חומצה עמיד לטרטרטים, אוסטאוקלצין בסרום של עכברים שעברו שחלות, וגנים Smad1, mad5, גורם גדילה מתמר, וכו' במח העצם. , יש השפעות אנטי אוסטיאופורוזיס [5-6].

אכינצאה יכולה לקדם שגשוג של אוסטאובלסטים ולקדם את ההתמיינות של תאי גזע מזנכימליים של מח עצם התרבותיים במבחנה לאוסטאובלסטים [7-9]. בשנים האחרונות היו דיווחים מחקריים רבים על קביעת התוכן של echinacoside ו-verbascoside בתמצית אתנול Cistanche deserticola ותכשיריו התרכובים [10-12], אך ישנם דיווחים מעטים על קביעת התוכן של רכיבי אינדקס ב- Cistanche deserticola תמצית מימית. במחקר זה, נעשה שימוש בכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) כדי לקבוע את התוכן של echinaceaside בתמצית המימית של Cistanche deserticola.

1 חומר

1.1 מכשירים

LC-20AT כרומטוגרפיית נוזלים בעלת ביצועים גבוהים, SPD-20גלאי, SIL-20דגימה אוטומטית, CTO-10תנור עמודות ASvp, תחנת עבודה לכרומטוגרפיה נוזלית LC, Shimadzu Corporation of יַפָּן; מאזן אנליטי אלקטרוני MES125P-OCE-DU, חברת Sartorius, גרמניה; SHZ-D (Ⅲ) משאבת ואקום רב-תכליתית במחזור מים, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; מערכת מחזור קירור מאייד סיבובי RC2B SO25, מאייד סיבובי RV 10 D S96, חברת IKA, גרמניה; DK-S26

אמבט מים חשמלי בטמפרטורה קבועה, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; מכונת מים אולטרה-טהורים מסדרת UPR, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 חומרים וריאגנטים רפואיים

חומר רפואי Cistanche deserticola נרכש מ- Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., מספר אצווה: 1801001, 1806001, 181001. Tu Xingming, הרוקח הסיני המסורתי הראשי בבית החולים השלישי המסונף של אוניברסיטת גואנגג'ואו זיהה את זה. כמו הגבעול הבשרני המיובש עם עלים קשקשים של Cistanche deserticola YCMa. הדגימה מאוחסנת בחדר בדיקות התרופות של בית החולים השלישי של אוניברסיטת גואנגג'ואו לרפואה סינית; Echinacea Glycoside חומר ייחוס, תכולה 89.7%, מכון סין לבקרת מזון ותרופות, מספר אצווה: 111670-

201706; אצטוניטריל טהור מבחינה כרומטוגרפית (Merck, גרמניה); מתנול וחומצה זרחתית טהורים מבחינה אנליטית (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); מים הם מים טהורים במיוחד.

2 שיטות ותוצאות

2.1 הכנת תמצית מים של Cistanche deserticola

קח את האבקה הגסה של חומר תרופתי Cistanche deserticola, הוסף פי 10 מכמות המים המזוקקים, חום וריפלוקס למיצוי פעמיים, שעה כל פעם, מסנן, מאחד את התסנין ורכז את התסנן עם מאייד סיבובי לתכולת תרופה גולמית של 0.100 גרם·מL-1, ואחסנו אותה ב-4 מעלות לשימוש מאוחר יותר.

2.2 תנאים כרומטוגרפיים והתאמת המערכת

עמודה כרומטוגרפית: עמודה Inertsil ODS SP C18 (150 מ"מ × 4.6 מ"מ, 5 מיקרומטר); פאזה ניידת: אצטוניטריל (A)-0.4% תמיסה של חומצה זרחתית (B), פליטת שיפוע: 0 ~ 5 דקות, 17%

א; 5 ~ 25 דקות, 20% A; 25 ~ 30 דקות, 17% A; אורך גל זיהוי: 333 ננומטר; טמפרטורת עמודה: 30 מעלות; קצב זרימה: 1.0 מ"ל·דקה-1;

נפח הזרקה: 10 μL. בתנאים כרומטוגרפיים אלו, ההפרדה בין פסגות אכינאקוסיד לרכיבים סמוכים היא גדולה מ-1.5, ומספר הלוחות התיאורטיים המבוססים על שיא האכינאקוסיד צריך להיות לא פחות מ-4,000. הכרומטוגרמה מוצגת באיור 1.

2.3 הכנת תמיסה

2.3.1 תמיסת חומר ייחוס שקלו כמות מתאימה של חומר ייחוס אכינאקוסיד, שקלו אותו במדויק, הנח אותו בבקבוק נפח של 10 מ"ל, הוסיפו מתנול כדי להמיס אותו, והכינו תמיסת חומר ייחוס המכילה 898.794 אג' של אכינאציד למ"ל, 4 מעלות. שמור לשימוש מאוחר יותר.

2.3.2 פתרון בדיקה

יש למדוד במדויק 2.0 מ"ל של תמצית מימית Cistanche deserticola, לאדות לייבוש באמבט מים, להוסיף מתנול להמסה, לדלל לנפח בבקבוק נפח של 10 מ"ל, לנער היטב ולסנן עם להשיג קרום מיקרו-נקבי בגודל 0.22 מיקרון.

2.4 חקירת קשר ליניארי

מדוד במדויק את {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 מ"ל מתמיסת הייחוס לפי סעיף 2.3.1, הנח אותה בבקבוק נפח של 5 מ"ל, הוסף מתנול כדי להספיק לנפח, ונער היטב לקבלת ריכוז גרדיאנט של 44.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 תמיסת ייחוס ug·mL-1, מסוננת דרך ממברנה מיקרו-נקבית בגודל 0.22 מיקרומטר. מדוד לפי התנאים הכרומטוגרפיים תחת 2.2, ורשום את שטח השיא. בצע רגרסיה ליניארית עם ריכוז המסה של חומר הייחוס כאבססיס (X, ug·mL-1) ושטח השיא כאורדינאטה (Y), ומתקבלת משוואת הרגרסיה: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. התוצאות מראות כי לאכינצאה יש קשר ליניארי טוב בטווח הריכוז של 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 בדיקת דיוק

קח 539.276 4 ug ·mL- 1 תמיסת ייחוס, הזריק ומדוד 6 פעמים ברציפות בהתאם לתנאים הכרומטוגרפיים לפי 2.2, ורשום את שטח השיא. התוצאות הראו שה-RSD של אזור שיא האכינאקוסיד היה 1.81%, מה שמצביע על דיוק מכשיר טוב.

2.6 מבחן יציבות

יש למדוד במדויק 2.0 מ"ל תמצית מימית Cistanche deserticola, לאדות לייבוש באמבט מים, להוסיף מתנול להמסה, לדלל לבקבוק נפח של 10 מ"ל, לנער היטב, לסנן בעזרת {{ 7}}.22 מיקרומטר קרום מיקרו-נקבי, עקוב אחר התנאים הכרומטוגרפיים לפי פריט 2.2, והצב ב-0 ו-2 בהתאמה. , מדידת הזרקה 4, 8, 12, 24 שעות, רשום את אזור השיא. התוצאות הראו שה-RSD של אזור שיא האכינאקוסיד היה 1.16%, מה שמצביע על כך שלתמיסת הבדיקה הייתה יציבות טובה תוך 24 שעות.

2.7 מבחן החזרה

יש למדוד במדויק 2.0 מ"ל תמצית מי Cistanche deserticola ולהכין 6 תמיסות בדיקה במקביל לפי השיטה בסעיף 2.3.2. הזרקו דגימות למדידה בהתאם לתנאים הכרומטוגרפיים ב-2.2 ורשמו את שטח השיא. התוצאות הראו כי RSD שלechinacosideריכוז המסה היה 1.28%, מה שמעיד על חזרה טובה של השיטה.

2.8 מבחן התאוששות לדוגמה

מדוד במדויק 9 מנות של 1.0 מ"ל של תמצית מי Cistanche deserticola, הוסף 0.8, 1.0 ו-1.2 מ"ל של תמיסת ייחוס (1.552 מ"ג·מ"ל{{11 }}) בהתאמה, לאדות לייבוש באמבט מים, להוסיף מתנול להמסה ולהתאים לבקבוק נפח של 10 מ"ל; לנער היטב ולסנן דרך קרום מיקרו-נקבי בגודל 0.22 מיקרומטר להכנת פתרונות בדיקה בריכוז גבוה, בינוני ונמוך. הכינו 3 עותקים מכל ריכוז במקביל. למדוד לפי התנאים הכרומטוגרפיים בסעיף 2.2. רשום את שטח השיא וחשב את התאוששות המדגם. קֶצֶב. התוצאות מוצגות בטבלה 1.

2.9 קביעת תוכן המדגם

יש למדוד במדויק 3 מנות של 2.0 מ"ל תמצית מימית Cistanche deserticola, לאדות לייבוש באמבט מים, להוסיף מתנול להמסה, לדלל לבקבוק נפח של 10 מ"ל, לנער היטב, לסנן עם קרום מיקרו-נקבי בגודל 0.22 מיקרומטר, ולמדוד לפי התנאים הכרומטוגרפיים ב-2.2. רשום את שטח השיא וחשב את תכולת ה- Echinaceaside. התוצאות מוצגות בטבלה 2.

טבלה 1 תוצאות של בדיקות התאוששות של echinacoside

טבלה 2 תוצאות קביעת התוכן של אכינאקוסיד בתמצית מים של Cistanche herba