ניסוי 4 השפעת Cistanche Deserticola Phenylethanol Glycoside על תסמונת פרימנופאוזה של עכבר דיכאון מודל חומרים ושיטות 1 חומרים ניסויים

1.1 חיות ניסוי

עכברים בדרגת SPF, גזע קונמינג, נקבה, 18~22 גרם, מסופק על ידי Shandong Lukang Pharmaceutical Co., Ltd., מספר תעודת אצווה זה של עכברים: 0016003; מספר תעודת מעבדה SYXK (Yu) 2010-001. 1.2 תרופות ניסיוניות

Cistanche פנילטנול גליקוזידהוכן לפי שיטת ניסוי 1, והתכולה הגיעה ל-66.47%. קפסולת Gengnian'an, מרכיבים: Rehmannia glutinosa, Rehmannia glutinosa, Alisma, Ophiopogon japonicus, Scrophulariaceae, קליפת אדמונית, Poria cocos, אם הפנינה, curculigo, Schisandra chinensis, מגנטיט, Polygonum multiflorum multiflorum, polygonum multiflorum multiflorum, polygonum multiflorum. . פונקציות ואינדיקציות:להזין את היין ולהכניע את היאנג, להקל על הצרותולהרגיע את הנפש. משמש לגלי חום והזעה בגיל המעבר, סחרחורת, טינטון, עצבנות ונדודי שינה. מפרטים: 0.3 גרם לקפסולה. שימוש ומינון: אוראלי, 3 כמוסות בכל פעם, 3 פעמים ביום. יצרן: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. מספר אצווה ייצור: 121104. מספר אישור: National Drug Approval No. Z14021848.

כמה זמן לוקח ל-CISTANCHE לעבוד?

איזופלבונים סויה וויטמין E רכות, רשימת מרכיבים: אבקת איזופלבונים סויה, ויטמין E, שמן חמניות, ג'לטין, גליצרין, מים, טרטרזין, טיטניום דו חמצני. מרכיבים ותכולה איקוניים: כל 100 גרם מכיל 55.2 מ"ג של איזופלבונים סויה (מחושבים כגניסטאין) ו-608.5 מ"ג של ויטמין E. פונקציות בריאותיות: הגברת צפיפות העצם. הוראות ומינון: קח כמוסה אחת 2 פעמים ביום עם מים חמים. מפרט: 500mg×100 כמוסות. יצרן: Weihai Ziguang Biotechnology Development Co., Ltd. מספר אצווה ייצור: 13070302. מספר אישור: Guoshijianzi G20080032. 1.3 ריאגנטים ניסיוניים

נתרן קרבוקסימיל תאית, Tianjin Hengxing Chemical Reagent Manufacturing Co., Ltd., מספר אצווה: 20120418; פניצילין נתרן להזרקה, North China Pharmaceutical Co., Ltd., מפרט: 4 מיליון יחידות, מספר אצווה ייצור: c1206807; תמיסת פורמלדהיד (כיתה אנליטית), Yantai City Shuangshuang Chemical Co., Ltd., מספר אצווה ייצור: 20130902; הזרקת 0.9% נתרן כלורי, Chenxin Pharmaceutical Co., Ltd.; מפרט: 250 מ"ל, מספר אצווה ייצור: 1301265303;

כלורלי הידרט, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, מספר אצווה 20120827; ערכת זיהוי עכבר E2 ELISA, חברת מו"פ, מספר אצווה: 20140101A; ערכת זיהוי עכבר T ELISA, חברת מו"פ, מספר אצווה: 20140101A; ערכת זיהוי עכבר LH ELISA, חברת מו"פ, מספר אצווה: 20140101A; ערכת זיהוי עכבר FSH ELISA, חברת מו"פ, מספר אצווה: 20140101A;

ערכת זיהוי Mouse DA ELISA, חברת מו"פ, מספר אצווה: 20140101A; עכבר 5-ערכת זיהוי HT ELISA, חברת מו"פ, מספר אצווה: 20140101A. 1.4 מכשירים ניסויים

משקל אלקטרוני, Shanghai Minqiao Medical Instrument Co., Ltd., דגם: JY601; מאזן אנליטי אלקטרוני, חברת Ohaus (Shanghai), דגם: AR1140/C; צנטריפוגה שולחנית במהירות גבוהה, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, דגם: TGL-168 ; אמבט מים תרמוסטטי חשמלי, Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd., דגם: HWS12; בודק פעילות אוטונומית של עכבר, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., דגם: ZZ-6; מד הימנעות כהה מעכבר, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., דגם: BA-200; בודק מתלי זנב, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., דגם: TS-200; צנטריפוגה מקורר במהירות גבוהה, Zhongjia Branch of HKUST Innovation Co., Ltd., דגם: KDC-160HR; מכשיר פיפטציה מתכוונן, Shanghai Leibo Analytical Instrument Co., Ltd.;

קורא Microplate, חברת BIO-RAD האמריקאית, דגם: 680;

מיקרוסקופ חשמלי, חברת OLYMPUS יפן, דגם: BX61.

2 שיטות ניסוי

2.1 דוגמנות ומתן תרופות

נבחרו 90 נקבות קונמינג נקבות עם משקל גוף של 23-25g, ו-10 נבחרו באקראי כקבוצה הריקה ועברו ניתוח מדומה, ושאר העכברים שימשו ליצירת מודלים של גיל המעבר. לאחר השקילה, העכברים הורדמו על ידי הזרקה תוך-צפקית של 10% הידרט כלורלי (0.03 מ"ל/10 גרם) ומצב הבטן נקבע. לאחר מכן, השיער נחתך מהחלק האחורי של העכבר מתחת לצלע האחרונה, בהצטלבות של קו אמצע הציר וכ-1 ס"מ מהחלק החיצוני של עמוד השדרה, ולאחר מכן חתך לאחר חיטוי. רוחב העור והגב הוא בערך 0.5-1ס"מ. בשדה החתך ניתן לראות מסת שומן לבנה חלבית מבריקה, והשחלה מוטבעת בה. השתמשו בפינצטה קטנה כדי לאחוז בעדינות את מסת השומן ולשלוף אותה מהחתך, להפריד את מסת השומן, ותראו קבוצה של שחלות דקות, לא סדירות, צהובות-אדומות. בעת החיתוך יש לקשור תחילה את החצוצרות (כולל שומן) מתחת לשחלות עם חוטים דקים, ולאחר מכן להסיר את השחלות. לאחר הניתוח מחזירים את קרני הרחם אל חלל הבטן, תופרים את השרירים והעור ומוציאים את שתי השחלות באותו אופן. לאחר הניתוח, החיות גודלו בקפידה ופנצילין 200,000 u/kg (0.1 מ"ל כל אחד) הוזרק לשריר כדי למנוע זיהום במשך 3 ימים רצופים, פעם ביום. 5 ימים לאחר הניתוח, בוצעה בדיקת מריחת נרתיק לכל עכבר בזה אחר זה, פעם ביום במשך 5 ימים רצופים כדי לקבוע האם השחלות הוסרו לחלוטין. העכברים שהראו תגובת אסטרואי במריחה הושלכו, ו-60 עכברים שסורסו לחלוטין חולקו באופן אקראי ושווה ל-6 קבוצות למטרות ניסוי, כלומר קבוצת מודל, קבוצת מגניאן, קבוצת איזופלבונים סויה, גדולה, בינונית ובמינון נמוך Cistanche קבוצת גליקוזידים פנילתנול. בעלי חיים בכל קבוצה קיבלו תרופות מתאימות ביום העשירי לאחר הניתוח. לאחר 6 ימים של מתן, עכברים בקבוצה הריקה גידלו ב-5 לכל כלוב, עם מזון ומים רגילים, ללא כל גירוי. 6 קבוצות המודל גודלו כולן בעכבר אחד לכל כלוב, וקיבלו גירויים שונים באופן אקראי מדי יום. שבעה גורמי סטרס יושמו באופן אקראי תוך 18 ימים: זבל לח (1 גרם מלטה/1 מ"ל מים); שחייה במי קרח (4 מעלות, 5 דקות); מתח חום (45 מעלות, 5 דקות); תאורת לילה (24 שעות); הידוק זנב (דקה אחת); מניעת מים (24 ​​שעות); צום (24 ​​שעות). גירוי ניתן באופן אקראי בכל יום, וכל גירוי לא יכול היה להופיע ברציפות במשך 18 ימים.

שיטת הכנה: 0.5% CMC שיטת הכנה: שקלו 4 גרם נתרן קרבוקסימטיל תאית וערבבו אותם עם מים מזוקקים לקבלת 800 מ"ל.

המינונים של מינונים גדולים, בינוניים וקטנים של Cistanche phenylethanol glycoside group היו 200mg/kg, 10{{20}}mg/kg ו 50mg/kg בהתאמה (נפח מתן 0.1ml/10g). שיטת הכנה: שוקלים 2000 מ"ג, 1000 מ"ג ו-500 מ"ג של Cistanche phenylethanoid glycoside בהתאמה, ממיסים אותם עם כמות קטנה של 0.5% CMC, ואז מתקנים את הנפח ל-100 מ"ל, מערבבים היטב, וזהו. קפסולות Gengniangan (675 מ"ג/ק"ג, מעורבבות עם מים מזוקקים ל-67.5 מ"ג/מ"ל, 0.1 מ"ל/10 גרם, שווה ערך לפי 15 מהמינון הקליני); שיטת הכנה: קח 9 כמוסות Gengniangan, השתמש תחילה בכמות קטנה של 0.5% CMC Dissolve, לאחר מכן התאם את הנפח ל-40 מ"ל, וערבב היטב כדי לקבל את המינון של תרחיף כמוסות Gengnianan (675 מ"ג/ק"ג). קפסולה רכה של איזופלבון ויטמין E של פולי סויה (250 מ"ג/ק"ג, השתמש במים מזוקקים להכנת 25 מ"ג/מ"ל, 0.1 מ"ל/10 גרם, שווה ערך לפי 15 מהמינון הקליני); שיטת הכנה: קח 2 קפסולה רכה ויטמין E מסוג איזופלבון סויה, השתמש בה תחילה ממיס כמות קטנה של 0.5% CMC, ולאחר מכן כוונן את הנפח ל-40 מ"ל, וערבב היטב לקבלת מינון תרחיף קפסולה רכה ויטמין E סויה איזופלבון (250 מ"ג/ק"ג). ). שיטת אחסון: לקרר, לשמור על חום במהלך השימוש.

שיטת מתן: לבעלי חיים בכל קבוצה ניתנו תרופות מתאימות ביום העשירי לאחר הניתוח. לקבוצת Gengnian'an ניתנה דרך הפה תרחיף כמוסה Gengnian'an 675 מ"ג·ק"ג-1, לקבוצת איזופלבון סויה ניתנה דרך הפה 250 מ"ג·ק"ג-1 סויה איזופלבון ויטמין E תרחיף כמוסה רכה, וגדול, בינוני ומנות קטנות של Cistancheפנילתנול. קבוצת הגליקוזידים ניתנה דרך הפה במינונים גדולים, בינוניים וקטנים של Cistanche phenylethanol glycoside 200mg·kg-1, 10mg·kg-1, 50mg·kg{{ 5}}, 0.1 מ"ל/10 גרם בהתאמה. הקבוצה הריקה וקבוצת המודל טופלו באותו נפח של תמיסת CMC של 0.5% פעם ביום במשך 30 ימים רצופים.

2.2 פריטי תצפית ושיטות זיהוי

שחייה מאולצת: ביום הראשון לאחר סיום גירוי הלחץ הכרוני, זמן חוסר התנועה של עכברים בכל קבוצה בתוך 6 דקות נמדד למשך 2-6 דקות. (הכנס את העכברים בכל קבוצה לתוך כוס של 2000 מ"ל. טמפרטורת המים היא 25 מעלות. בנוסף לתנועה המינימלית הדרושה כדי לשמור על ציפה, איברי החיות מפסיקים לנוע ונרשמות כלא תנועה. רשום את זמן חוסר התנועה הכולל מ-2 עד 6 דקות תוך 6 דקות ) מבחן פעילות מרצון: ביום השני לאחר סיום גירוי הלחץ הכרוני, נמדד מספר הפעילויות הספונטניות של עכברים בכל קבוצה תוך 5 דקות.

שיטת הימנעות מחושך: ביום ה-3 לאחר סיום גירוי הלחץ הכרוני, הכניסו את זנב העכבר לקופסת המדידה הפונה לפתח הקטן לחדר החושך, וערכו אימון. לאחר 24 שעות, מדדו מחדש את זמן האחזור של העכבר הנכנס לחדר החושך בפעם הראשונה ואת הזמן שלוקח להיכנס לחדר החושך תוך 5 דקות. מספר מכות חשמל.

בדיקת מתליית זנב: ביום החמישי לאחר סיום גירוי הלחץ הכרוני, זמן חוסר התנועה של עכברים בכל קבוצה בתוך 6 דקות נמדד למשך 2-6 דקות.

שעתיים לאחר המנה האחרונה (12 שעות ללא מזון או מים), העכברים נשקלו, גלגלי העיניים הוסרו, דם נאסף, הסרום הופרד ותכולת E2, T, LH ו-FSH בסרום. נמדד; העכברים נהרגו לאחר מכן על ידי נקע של חוליות הצוואר, והעכברים נותחו. , הסר את התימוס, הטחול ורקמת הרחם, שקל את משקלם הרטוב וחשב את אינדקס האיברים (איבר אינדקס איברים=משקל איברים רטוב מ"ג/משקל עכבר g), לאחר מכן הסר את המוח, חתוך חצי, והכן את המוח הומוגגת רקמות. ניסוי חיסוני אנזים שימש כדי לקבוע את התוכן של נוירוטרנסמיטורים מונואמינים 5-HT ו-DA בהומוגנית רקמת המוח. רקמות התימוס, הטחול, הרחם והמוח נקבעו בתמיסת פורמלדהיד 10%, הוטמעו בפרפין, נחתכו ונצבעו ב-HE. השינויים המורפולוגיים של כל קבוצה נצפו תחת מיקרוסקופ אור. 2.3 שיטת קביעת ערכה

השג דגימות בסרום: השתמש במבחנות ללא פירוגנים ואנדוטוקסינים. הימנע מכל גירוי תאים במהלך הניתוח. לאחר איסוף הדם, צנטריפוגה אותו ב-3000 סל"ד למשך 10 דקות כדי להפריד במהירות ובזהירות בין הסרום לתאי הדם האדומים. השג דגימות הומוגניות של רקמות: הוסף כמות מתאימה של תמיסת מלח פיזיולוגית לרקמה ומרסק אותה. צנטריפוגה ב-3000 סל"ד למשך 10 דקות ולקחת את הסופרנטנט.

שיטת הקביעה של ערכת העכבר (עכבר) אסטרדיול (E2) ELISA זהה לניסוי 2. הריכוזים של מוצרים סטנדרטיים (S0-55) הם: 0, 4, 8, 16, 32 , ו-64 pmol/L.

שיטת הקביעה של ערכת טסטוסטרון עכבר (T) ELISA זהה לזו של אסטרדיול (E2). הריכוזים של מוצרים סטנדרטיים (S0-55) הם: 0, 50, 100, 200, 400, 800pg/mL.

שיטת הקביעה של ערכת ELISA של הורמון מגרה זקיק עכבר (FSH) זהה לזו של אסטרדיול (E2). הריכוזים של מוצרים סטנדרטיים (S0-55) הם: 0, 5, 10, 20, 40 ו-8{{30} }mIU/mL. שיטת הקביעה של ערכת העכבר (עכבר) הורמון luteinizing (LH) ELISA זהה לזו של אסטרדיול (E2). הריכוזים של התקן (S0-55) הם: 0, 0.5, 1, 2, 4 ו-8mIU/mL. שיטת הקביעה של ערכת ELISA של 5-הידרוקסיטריפטמין (5-HT) של עכבר זהה לזו של אסטרדיול (E2). הריכוזים של מוצרים סטנדרטיים (S0-55) הם: 0, 15, 30, 60, 120, 240ng/ml. שיטת הקביעה של ערכת הזיהוי של עכבר (עכבר) דופמין (DA) ELISA זהה לזו של אסטרדיול (E2). הריכוזים של מוצרים סטנדרטיים (S0-55) הם: 0, 7.5, 15, 30, 60 ו-120pg/ml.

ניתן לראות מטבלה 21 ואיור 25 שבהשוואה לקבוצה הריקה, זמן חוסר התנועה של העכברים בקבוצת המודלים גדל באופן משמעותי בניסויי השחייה המאולצים והשעיית זנב (P<0.01), indicating that perimenopausal model mice with depression Increased levels of despair about adverse circumstances. Compared with the model group, the forced swimming immobility time and tail suspension immobility time of mice in each drug group were significantly reduced (P<0.01).

2 השפעות על פעילויות אוטונומיות בעכברי מודל דיכאון בגיל המעבר

התוצאות של בדיקת הפעילות האוטונומית של עכברים בכל קבוצת ניסוי מוצגות בטבלה 22 ובאיור 26.

ניתן לראות מטבלה 23 ואיורים 27 ו-28 שבהשוואה לקבוצה הריקה, תקופת החביון של העכברים בקבוצת המודל פחתה באופן משמעותי ומספר המכות החשמליות גדל באופן משמעותי (P<0.01), reflecting the decline in memory of the perimenopausal depression model mice. . Compared with the model group, the number of electric shocks received by mice in each administration group was significantly reduced (P<0.01), and the latency of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Mengnianan group, and soybean isoflavones group was significantly reduced (P<0.01). extension (P<0.01). The latent period of mice in the medium and small doses of Cistanche phenylethanoid glycoside group was significantly prolonged (P<0.05).

4 השפעות על אינדקס איברים בעכברי דיכאון בגיל המעבר

ניתן לראות מטבלה 24 ואיור 29 שבהשוואה לקבוצה הריקה, מדד התימוס, מדד הטחול ואינדקס הרחם של קבוצת המודל הופחת משמעותית (P<0.01), indicating that the perimenopausal depression mouse model had thymus, spleen, and uterus index. Shrinkage of the organization. Compared with the model group, the thymus index, spleen index, and uterine index of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Gengnianan group, and soybean isoflavone group could be significantly increased (P<0.01). The medium-dose Cistanche פנילטנול גליקוזידקבוצה ניתן להגדיל משמעותית את מדד התימוס ואינדקס הרחם של עכברים (P<0.01), and the spleen index can be significantly increased (P<0.05).