השפעות של פוליגונה-פוליסכרוז על פרופטוזיס בחולדות נפרופתיה סוכרתיות

מילות מפתח:נפרופתיה סוכרתית;פוליגונה-פוליסכרוז; פרופטוזיס; טרנספרין; FTH1; GPX4

 

נפרופתיה סוכרתית(DN) הוא סיבוך מיקרו-וסקולרי רציני שלסוכרת[1] DN הוא רציניסיבוך מיקרו-וסקולרי של סוכרתmellitus [1], בדרך כלל מופיעה כמיקרואלבומינוריה בשלבים המוקדמים, ואחריה התפתחות מתקדמת של השלב המוקדם מופיע בדרך כלל עם מיקרואלבומינוריה, ואחריה התפתחות מתקדמת של פרוטאינוריה מסיבית, ירידה מתקדמת בקצב הסינון הגלומרולרי ועלייה מתקדמת בקריאטינין בדם [2] ]. עלייה מתקדמת בקריאטינין[2]. אם המחלה אינה מטופלת, עלולה להוביל למחלה כרונית. אם לא מטופל, זה יכול להוביל לנזק כרוני פרוגרסיבי לכליות ובסופו של דבר למחלה סופנית. אם לא מטופל, זה יכול להוביל לפגיעה כלייתית פרוגרסיבית כרונית ובסופו של דבר אי ספיקת כליות סופנית[3]. מוות ברזל מוות ברזל הוא הצטברות תלויה בברזל של חומצת שומן בלתי רוויה מוות ברזל הוא הצטברות תלויה בברזל של חמצון פוספוליפידים של חומצות שומן בלתי רווי המוביל למוות תאי, המתבטא בעיקר על ידי הביטוי העיקרי של מוות ברזל הוא הצטברות של תלוי ברזל. פרוקסיד ליפידים תוך תאיים[4] . [4] . מחקרים נמצא כי פגיעה בתאי אפיתל צינורי כלייתי קשורה קשר הדוק למוות ברזל[5]. וואנג וחב'.

Wang et al[6] מצאו כי ביטוי גלוטתיון פרוקסידאז 4 (GPX4) בביטוי אינטרסטיציאלי צינורי כלייתי (GPX4) קשור קשר הדוק לחומרת ולהתקדמות של מחלת DN. GPX4, כיעד חשוב להפעלת תוכנית מוות ברזל, הוא חיישן של מתח חמצוני ואיתות מוות תאי, וביטוי מופחת של GPX4 מוביל לעלייה משמעותית בירידה בביטוי GPX4 חי, וכתוצאה מכך לעלייה משמעותית בחמצן חי בגוף[ 7] . . לכן, עיכוב מוות תאי אפיתל צינורי כליה באמצעות ויסות מוות ברזל. לכן, עיכוב מוות תאי אפיתל צינורי כליה באמצעות ויסות מוות ברזל כדי להקל על פגיעה כלייתית DN עשויה להיות אסטרטגיה יעילה לטיפול ב-DN. לכן, עיכוב של צינורית כליה מוות של תאי אפיתל באמצעות ויסות מוות ברזל עשוי להיות אסטרטגיה יעילה לטיפול ב-DN.
הפוליסכרידשֶׁלג פלבוסהוא התרופתי השופע והחשוב ביותר זהו אחד המרכיבים הפרמקולוגיים השופעים והחשובים ביותר של C. flavus. המחקר הניסיוני מצא כי יש לו תפקיד חשוב בשיפור התפקוד הכלייתי של DN והקלה על התגובה הדלקתית. Li et al[8] . Li et al[9] . מצאו כי Li et al[9] מצאו שההתערבות של C. flavus polysaccharide שיפרה משמעותית הפרעות מטבוליזם של גלוקוליפידים וסבילות לאינסולין בעכברים סוכרתיים. לי וחב'. מחקר אחר מצא שהסבילות לגלוקוז, 24 שעות לגלוקוז ולאינסולין של עכברים עם נפרופתיה סוכרתית השתפרו משמעותית לאחר התערבות של פוליסכריד מיצוי צהוב. מחקר אחר מצא שרמת הגלוקוז בדם, מיקרואלבומין בשתן 24-h, ​​קריאטינין בדם (SCr) וחנקן אוריאה בדם (BUN) בעכברים מסוג נפרופתיה סוכרתית השתפרו באופן משמעותי לאחר התערבות פוליסכריד Fructus flavus. ורמות חנקן אוריאה בדם (BUN) הופחתו משמעותית במודל של נפרופתיה סוכרתית[10]. הטיפול ב-DN עם ​​פוליסכריד מ-Flos Chrysanthemi עם זאת, המנגנון הספציפי של פעולתו אינו ברור. לכן, הווה במחקר זה, דיאטה עתירת שומן בשילוב עם הזרקת סטרפטוזוטוצין (STZ) שימשה לביסוס מודל חולדות DN.
לכן, במחקר זה, הקמנו מודל של חולדות DN על ידי דיאטה עתירת שומן בשילוב עם הזרקת סטרפטוזוטוצין (STZ), וצפינו בהשפעה של פוליסכריד C. flavus על מוות ברזל בחולדות. לכן, המחקר הנוכחי נערך כדי לבחון את ההשפעה של C. flavus polysaccharide על מוות ברזל בחולדות שניזונו מתזונה עתירת שומן בשילוב עם הזרקת סטרפטוזוטוצין (STZ), ולהבהיר את מנגנון הפעולה של C. flavus polysaccharide על DN.

חומרים ושיטות
1.1 בעלי חיים
חמישים חולדות SD זכרים בריאים עם מסת גוף של (200±20) גרם שוכנו במכון לרדיולוגיה, האקדמיה הסינית למדעי הרפואה, בייג'ינג, סין, במחזור של 12-שעות אור-חושך בטמפרטורה של (25±2) מעלות ולחות יחסית של (50±15) אחוז, והוזנה באופן חופשי. דיאטה עשירה בסוכר ושומן (10 אחוז שומן חזיר, 20 אחוז סוכרוז, 2.5 אחוז כולסטרול, 67.5 אחוז מזון קונבנציונלי), (4.8 אחוז שומן, 20 אחוז חלבון ו-59.4 אחוז סוכר כולל), Beijing Huafukang Biotechnology Co. ניסוי זה אושר על ידי בית החולים Cangzhou לרפואה אינטגרטיבית (CZX2022-KY-023).

1.2 תרופה והכנה
פוליסכרידשֶׁלפלוס אסטרגלוס(טוהר 70 אחוז, מספר אצווה S27804), Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. Ltd הוכנה עם מי מלח בריכוז של 200, 800 מ"ג/מ"ל, בהתאמה. תמיסה של 800 מ"ג/מ"ל. טבליות Irbesartan (חלקה 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. הוכנו בתמיסת מלח ב-30 מ"ג/מ"ל. פִּתָרוֹן.

 

1.3 ריאגנטים ומכשירים עיקריים
חלבון שתן (מספר אצווה C035-2-1), SCr (מספר אצווה C011-2-1), BUN (מספר אצווה C013-2-1) BUN (מספר אצווה C013-2-1), מלונדאלדהיד ( MDA, מספר אצווה C003-1- 2), גלוטתיון (GSH, מגרש C006-2-1), תכולת יוני ברזל כוללת (מספר אצווה A039-2-1), מכון המחקר להנדסה ביולוגית של נאנג'ינג ג'יאנצ'נג. , נאנג'ינג, סין; טרנספרין (מספר אצווה ab278498), פריטין טרנספרין (חלקה ab278498), שרשרת כבדה של פריטין (FTH1, חלקה ab75973), GPX4 (חלקה ab252833) ו-פריטין (חלקה ab252833). ab252833), -אקטין (מגרש ab179467), אבקם, בריטניה. סמן אנזים רב תכליתי iMark680, Bio-Rad, ארה"ב. צנטריפוגה Fresco17, Thermo, ארה"ב; צנטריפוגה קפואה 5810, אפנדורף, גרמניה; ABI Prism® 7500 כימות הקרינה Applied Biosystems, ארה"ב; DYCZ-24מכל אלקטרופורזה אנכית של DN, בייג'ינג ליויי מכשירים במפעל, בייג'ינג, סין; SH-523 chemiluminescence imaging Ltd, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 דוגמנות, קיבוץ ומתן תרופות
לאחר שבוע של האכלה מסתגלת, 10 חולדות נבחרו באופן אקראי כנורמלי. 40 החולדות הנותרות הופנו לשיטת הספרות [11] כדי לבסס את מודל החולדות DN. החולדות הוזנו בתזונה עתירת סוכר ושומן במשך 7 שבועות, ולאחר מכן צמו במשך 12 שעות ללא מים. החולדות הוזנו בתזונה עתירת סוכר ושומן במשך 7 שבועות, ולאחר מכן צמו עם מזון ומים במשך 12 שעות. STZ הוזרק תוך צפק ב-30 מ"ג/ק"ג. לאחר 72 שעות, דם נאסף מוריד הזנב כדי לזהות גלוקוז אקראי בדם, וגלוקוז בדם של מעל או שווה ל-16.7 mmol/L נחשב כמודל מוצלח של סוכרת. החולדות הוזנו בתזונה עתירת סוכר ושומן במשך שבוע אחד, ו24-שעות נאסף שתן מהכלוב המטבולי.

 

 

1.5.5 בדיקת Western blot
לאסוף רקמות כליות, להוסיף 150 μL של חיץ תמוגה RIPA, homogenize סופרנטנט החלבון נשמר לאחר צנטריפוגה. ריכוז החלבון הכולל נקבע באמצעות ערכת בדיקת החלבון BCA. ריכוז החלבון הכולל נקבע באמצעות ערכת בדיקת חלבון BCA, וריכוז החלבון הומוגג. כמויות שוות של חלבון 20 ug, 8 אחוז -12 אחוז SDS-PAGE שימש להפרדת חלבון, והחלבון הועבר הממברנות נסגרו עם 5 אחוז אבקת חלב רזה בטמפרטורת החדר למשך 2 שעות. נוספו נוגדן ראשי נגד חולדות טרנספרין (1:2 000), FTH1 (1:3 000) ו-GPX4 (1:3 000). 3,000), GPX4 (1:3,000), -אקטין (מדולל 1:5,000), והודגר לילה ב-4 מעלות. דגירה לילה ב-4 מעלות. הממברנה נשטפה, נוגדן משני (1:9 000) נוסף והודגרה למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. הממברנות נשטפו עם TBST, שפותחו על ידי ECL chemiluminescence וזוהו באמצעות
תוכנת Image J שימשה לניתוח ערכי גווני האפור של הרצועות.

 

1.6 שיטות סטטיסטיות
SPSS Statistics25.0 תוכנה סטטיסטית שימשה לניתוח. ניסוי התוצאות הובאו כ-xˉ±s, וכל הנתונים נבדקו לתקינות ולצ'י ריבוע. כל הנתונים נבדקו לתקינות ולצ'י ריבוע, ונעשה שימוש במבחני t אם הם היו מרוצים, ובמבחנים לא פרמטריים אם הם לא היו מרוצים. פ<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 תוצאות
2.1 השפעות של פלבופירידיום פוליסכריד על מסת הגוף וגלוקוז בדם בצום של חולדות מודל בהשוואה לקבוצה הרגילה, מסת הגוף של חולדות בקבוצת המודל ירדה באופן משמעותי (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). ראה טבלה 2.

2.2 השפעות של פלבופירידיום פוליסכריד על מדדי תפקודי כליות של חולדות מודל
בהשוואה לקבוצה הרגילה, רמת ה-SCr, BUN ותכולת החלבון בשתן במשך 24 שעות של חולדות בקבוצת המודל היו גבוהים משמעותית (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 השפעות של פוליסכריד תמצית צהובה על המורפולוגיה ההיסטופתולוגית של הכליה של חולדות מודל
המבנה הגלומרולוס והצינורי של חולדות בקבוצה רגילה לא הראו כל חריגות, והממברנה התילקואידית והסטרומה התילקואידית לא התרבו, ולא הייתה חדירת תאים דלקתיים וכו'; המודל בחולדות המודל, נצפתה ניוון צינורית מוקדית וניוון, וקרום הבסיס הגלומרולרי היה קל. החולדות בקבוצת המודל הראו ניוון ואטרופיה צינורית מוקדית, קרום בסיס גלומרולרי מעובה מעט, היפרפלזיה thylakoid, וניוון שומני של גלומרולי צינורות. החולדות בכל קבוצת מתן תרופה הראו נגעים מופחתים, והשיפור היה ברור יותר בקבוצת התרופות החיוביות ובמינון הגבוה של פלבופירידיום פוליסכריד. השיפור היה ברור יותר בקבוצת התרופות החיוביות ובמינון הגבוה של פלבופירידיום פוליסכריד. ראה איור 1.