Echinacoside מפעיל פעילות אנטי-גידולית בסרטן הכבד

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Wen Li*, Jing Zhou, Yajie Zhang, Jing Zhang, Xue Li, Qiao Yan, Jiabing Han, ו-Fangdi Hu*

תַקצִיר

רקע כללי:Echinacoside (ECH) הוא החומר הפעיל העיקרי של Cistanches Herba, אשר ידוע כבעל השפעות טיפוליות על גידולים גרורתיים. עם זאת, ההשפעות של ECH על סרטן הכבד עדיין לא ברורות. מחקר זה נועד לחקור את ההשפעות של ECH על התוקפנות של תאי סרטן הכבד.

שיטות:שני סוגים של תאי סרטן הכבד Huh7 ו- HepG2 טופלו במינונים שונים של ECH בזמנים ובשיפועים שונים. מבחני MTT ויצירת מושבות שימשו כדי לקבוע את ההשפעות של ECH על הכדאיות של תאי Huh7 ו- HepG2. מבחני Transwell ו-flow cytometry שימשו כדי לזהות את ההשפעות של טיפול ECH על הפלישה, ההגירה, האפופטוזיס ומחזור התא של תאי Huh7 ו-HepG2. נעשה שימוש בניתוח Western blot כדי לזהות את ההשפעות של ECH על רמות הביטוי של TGF- 1, smad3, smad7, חלבונים הקשורים לאפופטוזיס (Caspase-3, Caspase-8) וציטו C בתאי סרטן הכבד. הקשר בין miR-503-3p ו-TGF- 1 זוהה באמצעות ניתוח ביואינפורמטיקה ובדיקת Luciferase reporter.

תוצאות:התוצאות הראו ש-ECH עיכב את השגשוג, הפלישה והנדידה של תאי Huh7 ו-HepG2 באופן תלוי מינון וזמן. יתרה מכך, מצאנו ש-ECH גרם לאפופטוזיס של תאי Huh7 ו-HepG2 על ידי חסימת תאים בשלב S. יתר על כן, הביטוי של miR-503-3p נמצא מופחת ברקמות הגידול בכבד, אך טיפול ב-ECH הגביר את הביטוי של miR-503-3p בתאי Huh7 ו-HepG2. בנוסף, מצאנו ש-TGF- 1 זוהה כיעד פוטנציאלי של miR-503-3p. ECH קידם את ההפעלה של מסלול האיתות TGF- 1/Smad והעלה את רמות הביטוי של Bax/Bcl-2. יתר על כן, ECH יכול לעורר את שחרור המיטוכונדריאלי Cyto C, ולגרום לדרגת התגובה Caspases.

מסקנות:מחקר זה מדגים ש-ECH מפעיל פעילות אנטי-גידולית באמצעות ציר miR-503-3p/TGF- 1/Smad בסרטן הכבד, ומספק סוכן אנטי-גידול בטוח ויעיל לסרטן הכבד.

מילות מפתח: Echinacoside, סרטן כבד, אפופטוזיס, MiR-503-3p, TGF- 1/smad

Cistanche הוא חומר אנטי גידולי בטוח ויעיל לסרטן הכבד.

מבוא

סרטן הכבד הוא אחד הגידולים הממאירים השכיחים ביותר עם שיעור שכיחות גבוה, ושכיחות סרטן הכבד גדלה במהירות [1]. כריתת כבד היא הדרך הטובה ביותר לטיפול בסרטן הכבד עבור חולים בשלביו המוקדמים [2]. עם זאת, לרוב החולים יש הישנות וגרורות לאחר הניתוח. שיעור ההישרדות של 5-שנה הוא רק כ-3-5 אחוזים [2]. לכן, יש צורך בדחיפות בגישות טיפוליות וסוכנים חדשניים.

בשנים האחרונות, פיתוח תרופות לסרטן ומחקר על פיטוכימיקלים החלו לשים לב לאתנו-פרמקולוגיה [3, 4]. מספר רב של מחקרים קליניים וניסיוניים הראו שמונומרים של תרופות יכולים לעכב שגשוג, גרורות של תאי קרצינומה הפטוצלולריים, לגרום לאפופטוזיס והתמיינות של תאים סרטניים [5]. Cistanches Herba הוא צמח השייך למשפחת הצמחים, שהיא רפואה מסורתית בסין ומכונה "ג'ינסנג מדברי" [6]. Cistanches Herba עשיר בסוגי רכיבים כימיים, וחוקרים מבית ומחוץ בודדים ממנו יותר ממאה תרכובות, ביניהן פנילטנול גליקוזידים, ליגנאנים, טרפנים ציקלואליפטים, סוכרים, חומצות אמינו ועוד [7]. Echinacoside (ECH) הוא המרכיב העיקרי של Cistanches Herba והוא גם נחשב בדרך כלל למרכיב הפעיל העיקרי שלו [6]. בשנים האחרונות, מחקרים הראו כי ECH עשוי להיות אפשרות טיפול חדשה לגידולים אגרסיביים או גרורתיים נרחבים [8]. מחקרים מצאו כי ECH יכול לעכב סרטן הלבלב, לוקמיה, סרטן קיבה, סרטן רירית הרחם וגידולים רבים אחרים [9]. עם זאת, אין דיווח על ההשפעה של ECH על התקדמות סרטן הכבד.

MiRNAs ממלאים תפקידים מרכזיים ברגולציה שלאחר התעתוק של ביטוי גנים (10). מחקרים נרחבים הראו ש-miRNAs קשורים קשר הדוק לסרטן הכבד [11] ולטרשת נפוצה. MiR-503-3p הוא מירנה שהתגלה לאחרונה המעורב בהתרבות, הגירה ופלישה של תאי גידול [12]. עם זאת, תפקידו בסרטן הכבד אינו ברור. נכון לעכשיו, המחקר של גני מטרה של מירנה במורד הזרם נמצא בשלב בוגר יחסית, אך לוקוסים רבים של גני מטרה נותרו בלתי נתגלו. מסלול העברת אותות של Te TGF- 1/Smad3 חשוב במיוחד להיווצרות גידולים והתפתחות [13]. נמצא שמסלול TGF- 1/Smad3 הופעל במודל ההפטומה, מה שמרמז על כך שמסלול TGF- 1/Smad3 שיחק תפקיד משמעותי בהתפתחות סרטן הכבד [14]. הביטוי הגבוה של מסלול TGF- 1/Smad3 נחשב לאחת הסיבות העיקריות להופעת סרטן הכבד [15]. על מנת להמשיך ולחקור את המנגנון הבסיסי שתווך את ההשפעות של ECH על סרטן הכבד, נחקר מסלול ה-miRNA/TGF- 1/Smad3.

במחקר זה, הערכנו את ההשפעות של ECH על התקדמות תאי סרטן הכבד ומצאנו ש-ECH הפעיל פעילות אנטי-גידולית דרך ציר miR-503-3p/TGF- 1/Smad בסרטן הכבד, ומספק חומר אנטי-גידול בטוח ויעיל לסרטן הכבד.

cistanche tcmהוא אנטי סרטן.

שיטות וחומרים

חומרים

Echinacoside (ECH) (purity>98 אחוז, מונוהידראט) התקבל מ-Hetian Dichen sashing Pharmaceutical Development Co., Ltd (שינג'יאנג, סין). הנוסחה המבנית הוצגה באיור 1.

תרבית וטרנספקציה

קווי תאי סרטן כבד אנושיים Huh7 ו- HepG2 נרכשו מ- FENGHUISHENGWU (Hunan, סין). תאים תורבו במדיום DMEM בתוספת של 10 אחוז סרום בקר עוברי (FBS, Gibco, ארה"ב) ב-37 מעלות בחממת תאים של 5 אחוז CO2. MiR-503-3p mimic ו-miR-NC הושגו מ-Shanghai Gene Pharmaceutical Co., Ltd. (Shanghai, סין). כל הטרנספקציות בוצעו באמצעות ריאגנט Lipofectamine 2000 (Invitrogen) בהתאם להוראות היצרן. לאחר 24-48 שעות נוספות נאספו התאים שהועברו ועובדו למחקרים נוספים.

בדיקת כתב לוציפראז

סך RNAs הופקו מתאי, ו-TGF- הוגבר באמצעות הפריימרים WT ו-MUT. קטע של TGF- 1 הוכנס לווקטור pGL3-Bashc luciferase reporter בשם TGF- -WT-Luc. אזור הקישור של 1 ו-miR-503-3p עבר מוטציה ליצירת פלסמיד מוטנטי המוגדר כ-TGF- 1-Mut-Luc. TGF 1-WT-Luc ו-TGF- 1-Mut-Luc הועברו יחד לתאים עם miR-503-3p mimic ו-pRLTK. תאים נאספו 6 שעות לאחר ההעברה. ערכת Dual-Luciferase Reporter Assay (Promega, מדיסון, WI, ארה"ב) שימשה לקביעת פעילות הלוציפראז.

בדיקת צמיחת תאים

תאי Huh7 ו-HepG2 (2×105) הונחו בצלחות 96-באר. לאחר מכן טופלו תאים ב-ECH במשך 24, 36 ו-48 שעות. לאחר מכן, נוספה 10 מ"ל תמיסת MTT לכל באר והתאים הודגרו במשך 4 שעות. לאחר מכן, נוספו 150 μL של DMSO לבארות. והספיגה ב-570 ננומטר נמדדה על ידי קורא ELISA (Aoweiya, בייג'ינג, סין).

היווצרות מושבה

השעיה חד-תאית הוכנה מהתאים שעברו טרנספקציה ותורגלה באינקובטור למשך 7 ימים. לאחר השלכת המדיום, התאים נצבעו בכתם של רייט למשך 5 דקות ולאחר מכן נצבעו בתמיסת צבע Giemsa ובתמיסת Bufer phosphomolybdate Sorensen (1:9) למשך 10 דקות. לאחר הכביסה, מושבות נספרו תחת מיקרוסקופ.

בדיקת Transwell

מבחני הגירה ופלישה בוצעו בחדרי Transwell (Costar, Badhoevedorp, טה הולנד) מצופים עם או בלי Maribel (BD Biosciences) על פני השטח העליון של הממברנה {{0}}μm (גודל נקבוביות). לצורך בדיקת הגירה, תאי Huh7 ו-HepG2 שעברו נגיעה הושעו מחדש ב-200 μL של מדיום DMEM נטול סרום ונזרעו בחדרים העליונים. עבור בדיקת הפלישה, Matrigel (30 ug/well) היה מצופה מראש על הממברנות של החדרים העליונים ושלבים אחרים היו זהים למבחן הנדידה. לאחר דגירה של 24 שעות, תאים שנדדו או פלשו דרך הממברנה אל המשטח התחתון נקבעו באתנול והוצבעו בסגול קריסטל של 0.2 אחוז. לבסוף, תאים נצפו ונספרו בחמישה שדות אקראיים באמצעות מיקרוסקופ.

ניתוח מחזור התא

תאי Huh7 ו-HepG2 נזרעו ב6-צלחות באר בצפיפות של 1×105 תאים/מ"ל. תאים נאספו לאחר שטופלו ב-ECH במשך 0, 24, 48 שעות. לאחר מכן נוספו לתאי Tese 1 מ"ל של קרח מקורר מראש ב-75 אחוז אתנול, קבוע ב-20 מעלות למשך שעתיים. לאחר מכן, נוספו תאים עם תמיסת צביעת PI והודגרו בחושך למשך 15 דקות. מחזור התא נותח לאחר מכן על ידי ציטומטריית זרימה.

ניתוח תאים אפופטוטי

תאים צופו לתוך 6-צלחות באר בצפיפות של 5×105 תאים/באר. לאחר האיסוף, התאים טופחו בצנטריות ונוספו 195 μL של תמיסת מחייב Annexin V-FITC כדי להשהות מחדש את התאים. לאחר מכן, נוספו 5 μL Annexin V-FITC ו-10 μL תמיסת צביעה של propidium iodide. תאים הודגרו בחושך ולאחר מכן הוכנסו לאמבט קרח.

Cistanche מגן על הכבד.

PCR שעתוק הפוך כמותי (qRT-PCR)

סך RNAs חולצו על ידי ריאגנט TRIzol (Haigene, Haerbin, סין). מערכת PCR בזמן אמת Te viiA™ 7 שימשה עבור qRT-PCR. RNA הועתק לאחור לתוך cDNA באמצעות BeyoRT™ First Strand cDNA Synthesis Kit (Beyotime Institute of Biotechnology). U6 שימש כביקורת אנדוגנית [16]. רצפי הפריימר היו כדלקמן:

miR-503-3p: forward: 5′-CTGATGGTTAAGAGAATGT-3′,

miR-503-3p: reverse: 5′-GTCCTTGGACATCCGGGCCG-3′,

U6: קדימה: 5′-GACAGATTCGGTCTGTGGCAC-3′,

U6: הפוך: 5′-GATTACCCGTCGGCCATCGATC-3′.

ניתוח כתם מערבי

התאים שעברו טרנספקציה נאספו וחולצו סך כל החלבונים. ריכוזי החלבון נקבעו באמצעות ערכת BCA Protein Assay Kit. דגימות חלבון הופרדו על ידי 10 אחוז SDS-PAGE והועברו על גבי קרום פוליווינילידן פלואוריד. לאחר מכן הודגרה הממברנה עם אנטי-TGF- 1 (1:1000, Shifeng, שנגחאי, סין), SMAD3 (1:1000, Shifeng, שנחאי, סין), SMAD 7 (1:1000, Shifeng, שנחאי, סין), Bcl-2 (1:1000, Shifeng, שנחאי, סין), Bax (1:1000, Shifeng, שנגחאי, סין), Cyto C (1:1000, Shifeng, שנחאי, סין), caspase{ {19}} (1:1000, Shifeng, שנגחאי, סין), קספאז-8 (1:1000, Shifeng, שנחאי, סין) ונוגדנים אנטי- -אקטין (1:1000, Shifeng, שנחאי , סין) בן לילה. 10 הממברנה הודגרה עם הנוגדן המשני נגד ארנב (1:1000, Shifeng, שנחאי, סין) [17].

שיטות סטטיסטיות

הנתונים הוצגו כסטיית התקן הממוצעת (SD). כל הניתוחים הסטטיסטיים בוצעו עם תוכנת SPSS 13.0. מבחן t של התלמיד שימש להשוואות. p-value < 0.05="" נחשב="">

תוצאות

השפעת ECH על פעילות ותאי סרטן כבד אנושיים והתפשטות

כדי לחקור את ההשפעה של ECH על תפקוד תאי סרטן הכבד האנושי, בוצע בדיקת MTT והתוצאות הראו שכדאיות התא של HepG2 (איור 2a) ו-Huh7 (איור 2b) ירדה בהדרגה עם העלאת המינון והזמן של טיפול ב-ECH בהשוואה לקבוצת הביקורת (p < 0.01).="" לאחר="" חשיפה="" של="" 48="" שעות="" של="" ech,="" כדאיות="" התא="" הייתה="" הנמוכה="" ביותר,="" ולכן="" חשיפה="" של="" 48="" שעות="" של="" ech="" נבחרה="" לניסוי="" נוסף.="" תוצאות="" מבחני="" היווצרות="" מושבות="" הראו="" שמספר="" המושבות="" של="" תאי="" hepg2="" (איור="" 2c)="" ו-huh7="" (איור="" 2d)="" ירד="" בהדרגה="" על="" ידי="" טיפול="" ב-ech="" באופן="" תלוי="" מינון="" בהשוואה="" לקבוצת="" הביקורת="" (p="">< 0="" .01,="" p="">< 0.001).="" תוצאות="" אלו="" מצביעות="" על="" כך="" ש-ech="" ממלא="" תפקיד="" חשוב="" בפעילות="" תאי="" hcc="">

השפעות של ECH על הגירה ופלישה של תאי סרטן כבד אנושיים

כדי להמשיך ולחקור את ההשפעה של ECH על תפקוד תאי סרטן הכבד האנושי, זוהו נדידת תאים ופלישה. כפי שמוצג באיור 3a, b, בהשוואה לקבוצה ללא טיפול ב-ECH, ההגירה והפלישה של תאי Huh7 ו-HepG2 הופחתו באופן משמעותי לאחר טיפול ב-ECH באופן תלוי מינון (p<0.01,><0.001), suggesting="" that="" ech="" inhibited="" the="" migration="" and="" invasion="" of="" huh7="" and="" hepg2="">

ECH מווסת את הפצת תאי סרטן הכבד האנושי ואת האפופטוזיס

על מנת לחקור את ההשפעה של ECH על אפופטוזיס של תאי סרטן הכבד, בוצעה ציטומטריית זרימה. כפי שמוצג באיור 4a, בהשוואה לקבוצת הביקורת, אחוז תאי Huh7 ו-HepG2 בשלב G0/G1 הופחת משמעותית לאחר טיפול ב-ECH באופן תלוי מינון (p<0.01), and="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" the="" s="" phase="" was="" gradually="" increased="" after="" ech="" treatment="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01), but="" there="" was="" no="" change="" of="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" g2/m="" phase="" after="" ech="" treatment="" (p="">0.05), המציין ש-ECH גרם לעצירת שלב S של תאי Huh7 ו-HepG2. בנוסף, עם הגדלת המינון של ECH, שיעור האפופטוזיס של תאי Huh7 ו- HepG2 עלה בהדרגה בהשוואה לקבוצת הביקורת (איור 4b, p.<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" induced="" the="" apoptosis="" of="" huh7="" and="" hepg2="">

ההשפעות של ECH על מסלול TGF-1/Smad

זה ידוע שמסלול איתות TGF- 1/Smad מעורב היטב באפופטוזיס של תאים. על מנת לחקור את המנגנון של אפופטוזיס המושרה על ידי ECH בתאי HepG2. זוהה הביטוי של מסלול האיתות TGF- 1/Smad. בהשוואה לקבוצת הביקורת, מצאנו שטיפול ב-ECH הפחית באופן משמעותי את רמות הביטוי של TGF- 1 ו-Smad3 הן ברמות mRNA (איור 5a) והן ברמות החלבון (איור 5b), והסדיר באופן משמעותי את הביטוי של Smad7 באופן תלוי מינון הן ברמות mRNA והן ברמות החלבון (עמ'<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" inhibited="" the="" activation="" of="" the="" tgf-β1/smad="" signaling="">

TGF‑1 היה יעד ישיר של miR‑503‑3p

בנוסף, כלי החיזוי המקוון Starbase v2. הראה ש-TGF- 1 היה יעד פוטנציאלי של miR-503-3p (איור 6א). תוצאות בדיקת הגנים של Luciferase Reporter הראו שפעילות הלוציפראז של תאי HepG2 ותאי Huh7 שהועברו יחד עם miR-503-3p mimic ו-TGF- 1-WT הופחתה באופן משמעותי, אך לא התאים שהועברו יחד עם miR{ {10}}p mimic ו-TGF- 1-MUT (איור 6b, p<0.01). similarly,="" the="" luciferase="" activity="" of="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-="" mut="" was="" signifcantly="" increased,="" but="" not="" the="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-wt="" (fig.="" 6c,=""><0.01). furthermore,="" the="" expression="" levels="" of="" tgf-β1="" were="" signifcantly="" reduced="" in="" the="" mir-503-3p="" mimic="" group="" compared="" with="" that="" in="" the="" nc="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.01), but="" signifcantly="" increased="" in="" the="" mir-503-3p="" inhibitor="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.05). these="" results="" suggested="" that="" tgf-β1="" was="" a="" direct="" target="" of="" mir-503-3p.="" to="" further="" investigate="" whether="" mir-503-3p="" mediated="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="" cancer,="" the="" expression="" of="" mir-503-3p="" was="" detected="" in="" liver="" cancer="" tissues="" and="" it="" showed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" were="" decreased="" in="" liver="" cancer="" tissues="" compared="" with="" that="" in="" normal="" liver="" tissues="" (fig.="" 6f,=""><0.01). moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" mir503-3p="" were="" further="" decreased="" in="" metastasis="" liver="" cancer="" tissues="" than="" that="" in="" nonmetastatic="" liver="" cancer="" tissues="" (fig.="" 6g,=""><0.01). the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" were="" gradually="" increased="" after="" ech="" exposure="" (fig.="" 6e,=""><0.05,><0.01). taken="" together,="" these="" results="" suggest="" that="" mir-503-3p/tgf-β1="" may="" mediate="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="">

השפעת ECH על פעילויות ציטוכרום C ו-caspases

כפי שמוצג באיור 7a, בהשוואה לקבוצת הביקורת, מצאנו שטיפול ב-ECH גרם לירידה משמעותית ברמות הביטוי של Bcl-2 באופן תלוי מינון (p<0.01,><0.001), while="" the="" expression="" levels="" of="" bax="" were="" signifcantly="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01,><0.001). it="" was="" demonstrated="" that="" bcl-2="" and="" bax="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells.="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" cyto="" c,="" caspase-8,="" and="" caspase-3="" were="" signifcantly="" increased="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" (fig.="" 7b,=""><0.01,><0.001), indicating="" that="" the="" release="" of="" cyto="" c="" and="" the="" activation="" of="" caspase-8="" and="" caspase-3="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="">

דִיוּן

כריתה כירורגית היא שיטת הטיפול העיקרית בחולים עם סרטן הכבד, ושיעור ההישנות והגרורות לאחר כריתת הכבד גבוה [18, 19]. במחקר זה, מצאנו כי ל-ECH יש השפעה מעכבת מסוימת על גידולי כבד, והוא מספק סוכן אנטי-גידול בטוח ויעיל לסרטן הכבד. פרקטיקה קלינית הוכיחה שרפואה סינית מסורתית יכולה להקל ביעילות על התסמינים הקליניים של חולי סרטן כבד [20]. עבור ECH, מחקרים הראו של-ECH יש השפעות נוגדות חמצון, נוגדות דיכאון, אנטי דלקתיות, אנטי-ויראליות, אנטי-גידוליות ואנטי-בקטריאליות [21, 22]. בסרטן המעי הגס, ECH יכול לגרום לאפופטוזיס של תאי גידול על ידי ויסות מעלה של קספאז-3 ולחתוך אנזימי תיקון DNA כדי לגרום לחמצון DNA [23]. במחקר זה, מצאנו לראשונה ש-ECH מפעיל פעילות אנטי-גידולית דרך ציר miR 503-3p/TGF- 1/Smad בסרטן הכבד.

ניתן לחלק את השלב הבין-תאי של מחזור התא של תאים אוקריוטיים ל-G1, S ו-G2. נקודות הוויסות של מחזור התא בתקופות שונות מווסתות על ידי גורמים רגולטוריים שונים [24]. מחקר זה מצא שאחוז תאי Huh7 ו-HepG2 בשלבי G0/G1 ו-G2/M הופחת, ואחוז התאים בשלב ה-S גדל לאחר ECH, מה שמצביע על כך ש-ECH גרם לעצירת שלב S. של תאי Huh7 ו- HepG2. חוסר איזון של אפופטוזיס הוא אחד המנגנונים העיקריים של גידולים אנושיים. דווח כי תרופות כימותרפיות נגד גידולים גורמות בדרך כלל לאפופטוזיס של תאים סרטניים ומפקחות על התקדמות הסרטן. במחקר שלנו, מצאנו גם ש-ECH יכול לגרום לאפופטוזיס של תאי סרטן בכבד באופן תלוי מינון, מה שמצביע על כך שהשראת אפופטוזיס של תאי סרטן עשויה להיות אחד המנגנונים הבסיסיים של ECH בסרטן הכבד.

MiRNAs ממלאים תפקידי מפתח בוויסות של שגשוג תאי HCC, מחזור, אפופטוזיס, הגירה באמצעות אינטראקציות עם מסלולי איתות ומולקולות שונות [25, 26]. לדוגמה, נמצא כי miR-26a מתבטא מאוד בתאי כבד נורמליים, אך הוא מווסת משמעותית בתאי סרטן הכבד ומעכב שגשוג [27]. ביטוי יתר של miR-503-3p גורם לאפופטוזיס של תאי סרטן ריאות ומעכב פלישת תאים ונדידה [28]. בנוסף, מספר רב של מחקרים הראו כי מסלול האיתות TGF- 1/Smad ממלא תפקיד מרכזי בהתפתחות סרטן הכבד [7]. יתרה מכך, כאשר סרטן הכבד ממשיך להתקדם, הביטוי של TGF- 1 עולה בהדרגה [29]. במחקר זה, מצאנו ש-ECH הסדיר את ה-TGF- 1 ו-Smad3 כלפי מטה, והסדיר את Smad7, מה שמוכיח ש-ECH מעכב את ההפעלה של מסלול האיתות TGF- 1/Smad. במחקר זה, מצאנו כי הביטוי של miR-503-3p נמצא מופחת ברקמות הגידול בכבד, אך טיפול ב-ECH הגביר את הביטוי של miR-503-3p בתאי Huh7 ו-HepG2. בנוסף, מצאנו ש-TGF- 1 זוהה כיעד פוטנציאלי של miR-503-3p. ECH קידם את ההפעלה של מסלול האיתות TGF- 1/Smad והעלה את רמות הביטוי של Bax/Bcl-2. תוצאות אלו מצביעות על כך שמסלול איתות miR-503-3p/TGF- 1/Smad עשוי לתווך את ההשפעות של ECH על סרטן הכבד. ידוע שהיחס המוגבר של Bax/Bcl-2 עלול לגרום לשחרור ציטו C במיטוכונדריה לתוך הציטופלזמה. Cyto C מקיים אינטראקציה עם Caspase-8 ויוצר גוף אפופטוטי שמגייס ומפעיל את Caspase-3, שגורם למפל Caspases ומקדם מוות של תאים [30]. במחקר זה, מצאנו ש-ECH הפחית את הביטוי של Bcl-2 והגדיל את הביטוי של Bax, Cyto C, caspase-8 ו-caspase-3. תוצאות אלו מצביעות על כך ש-ECH יכול לתקן פגיעה במיטוכונדריה במידה מסוימת.

מסקנה במחקר זה, מצאנו שטיפול ב-ECH מעכב את ההתפשטות, הפלישה והנדידה, וגרם לאפופטוזיס של תאי סרטן הכבד. המנגנון הבסיסי של טיפול ECH בתאי סרטן הכבד נמצא קשור למסלול האיתות miR-503-3p/TGF- 1/Smad. מחקר זה יספק בסיס ניסיוני מסוים למחקר של ECH על אנטי גידולים. ראוי לציין כי המחקר הנוכחי מוגבל על ידי היעדר ניסויים בבעלי חיים. לכן, המחקר העתידי שלנו יבצע ניסויים בבעלי חיים כדי לאשר עוד יותר את הממצאים שלנו.

הטבות cistanche במדברלהגן על הכבד.

למידע נוסף, אנא לחץ כאן.