Lipidomics דיפרנציאלי של תאי HK-2 ואקסוזומים תחת גירוי גלוקוז גבוה

תַקצִיר

מטבוליזם לא תקין של שומנים תאי חשוב מאוד בהתרחשות והתקדמות של מחלת כליות סוכרתית (DKD). עם זאת, הרכב השומנים והביטוי הדיפרנציאלי על ידי גירוי גלוקוז גבוה של תאי צינורי הכליה והאקסוזומים שלהם, שהם חלק חיוני בהתפתחות DKD, אינם ידועים במידה רבה. במחקר זה, בהתבסס על ניתוח שומנים ממוקד על ידי סימון איזוטופים וספקטרומטריית מסה טנדם, כמתו סך של 421 ו-218 מיני שומנים בתאי HK-2 ואקסוזומים, בהתאמה. חשוב מכך, התוצאות הראו ש-GM3 d18:1/22:0, GM3 d18:1/16:0, GM3 d18:0/16:0, GM3 d18:1/22:1 עלו באופן משמעותי, בעוד LPE18:1, LPE, CL66:4 (16:1), BMP36:3, CL70:7 (16:1), CL74:8 (16) :1) ירדו באופן משמעותי בתאי HK{{4{{90}}}} בגירוי גבוה של גלוקוז. כמו כן, PG36:1, FFA22:5, PC38:3, SM d18:1/16:1, CE-16:1, CE-18:3, CE-20:5, ו-CE-22:6 עלו באופן משמעותי, בעוד ש-GM3 d18:1/24:1, GM3 ירדו באופן משמעותי באקסוזומים שהופרשו על ידי תאי HK-2 בעלי גירוי גבוה בגלוקוז. יתר על כן, TAG, PC ו-CL ירדו באופן משמעותי באקסוזומים בהשוואה לתאי HK-2, ו-LPA18:2, LPI22:5, PG32:2, FFA16:1, GM3 d18:1/18:1 , GM3 d18:1/20:1, GM3 d18:0/20:0, PC40:6p, TAG52:1(18:1), TAG52:0(18:0), CE{101 }}:5, CE-20:4, CE-22:6 נמצאו רק באקסוזומים. בנוסף, הביטוי של PI4P בתאי HK-2 ירד במצב של גלוקוז גבוה. נתונים אלה עשויים להיות שימושיים כדי לספק יעדים חדשים לחקר המנגנונים של DKD.

מילות מפתח

ליפידום ממוקד; צינורות כליות; אקסוזומים; מחלת כליות סוכרתית.

לחץ כאן כדי לקנות תוסף Cistanche להגנה על הכליה

מבוא

הפרעות מטבוליות של שומנים משתתפות בהתרחשות ובהתפתחות של מחלת כליות סוכרתית (DKD) [1, 2]. שינויים בהרכב השומנים הסלולרי בכליה במצב גלוקוז גבוה יכולים לגרום לעלייה בייצור חמצן פעיל, תפקוד לקוי של המיטוכונדריה, ואף לגרום לאפופטוזיס [3, 4, 5, 6]. למרות שחוקרים רבים הכירו בתפקיד החשוב של צינוריות הכליה בהתפתחות והתקדמות של DKD, מחקרים מעטים התייחסו לביטוי כולל של שומנים באבובות הכליה או בשינויים בגירוי גלוקוז גבוה [7, 8]. לכן, ישנה חשיבות רבה לקבל מידע מקיף על שומנים באבובות הכליה, ובכך להבהיר עוד יותר את תפקידם של שומנים בפתוגנזה של DKD.

במהלך השנים האחרונות, תפקידם של האקסוזומים בפיתוח DKD משך תשומת לב גוברת. לאקסוזומים שיכולים לשתף פעולה עם מסלול האוטופגיה-ליזוזום כדי להקל על מתח תוך תאי יש תפקיד חשוב בשמירה על הומאוסטזיס תאי [9, 10]. בינתיים, הם פועלים כנשאים להעברת חומרים ותקשורת מידע בין תאים [11]. מחקרים אחרונים גילו כי לשיח ההצלבה בין תאי הצינור וסוגי תאי כליה אחרים בנפרון עשוי להיות תפקיד חשוב בהתקדמות המחלה [12, 13]. למרות שהרכב השומנים של אקסוזומים יכול להשפיע על תכונותיהם, הוא נחקר במידה פחותה בהשוואה לתשומת הלב של חלבון ו-RNA [14]. מכיוון שאקסוזומים המופרשים על ידי תאים שונים משתנים בסוגי שומנים, תכולה ותפקודים, הבהרת הרכב השומנים והביטוי הדיפרנציאלי של האקסוזומים המופרשים על ידי צינוריות הכליה במצב גלוקוז גבוה יספקו בסיס תיאורטי להבהרת מנגנון התקשורת האקסוזומלית לגבי צינוריות הכליה. .

כאן, הצגנו ניתוח ליפידומי דיפרנציאלי של צינוריות הכליה והאקסוזומים שלהן תחת גירוי גלוקוז גבוה וזיהינו מיני שומנים בעלי ביטוי דיפרנציאלי של קרדיוליפין (CL), monosialodihexosyl ganglioside (GM3) וכולסטרול אסטר (CE). כמו כן, בהתחלה חקרנו את תפקידם של פוספואינוזיטידים (PIPs) בייצור אקסוזומלי וצפינו בספיגת אקסוזומים צינוריים על ידי תאים מנזגיים גלומרולריים (GMCs).

תוסף Cistanche

שיטות

1. תרבית תאים

קו תאי האפיתל הצינורי הפרוקסימלי של הכליה האנושית HK-2 נרכש ממרכז משאבי התא של Shanghai Institute for Biological Sciences. תאי ה-HK-2 תורבו ב-Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F-12) של גלוקוז רגיל שנוספה בתוספת של 10% סרום בקר עוברי (FBS; FSP500, ExCell). גלוקוז תקין DMEM/F-12 היה תערובת 1:1 של DMEM (11966025, Gibco) ו-Ham's F-12 (11765054, Gibco) שהכילה 5.56 mmol/L גלוקוז. התאים נשמרו ב-37 מעלות בחממה של 5 אחוז CO2. לאחר שהושגה 80 אחוז מפגש, התאים נקצרו באמצעות הליך עיכול טריפסין הסטנדרטי והועבר ביחס פיצול של 1:2. תאי המעבר תורבו עם FBS מדולדל מהאקסוזום (CMS101.03, Cellmax) ב-5.5 mmol·L-1 גלוקוז כקבוצת הביקורת הריקה (NG) ו-30 mmol·L-1 גלוקוז כגלוקוז גבוה קבוצה (HG) למשך 48 שעות.

2. בידוד אקסוזומים

נעשה שימוש באולטרה-צנטריפוגה דיפרנציאלית כדי לחלץ אקסוזומים מהסופרנטנטים של תרבות התאים HK{{0}}. בקצרה, סופרנטנטים של תרבות תאי HK-2 נאספו ועברו צנטריפוגה ברצף ב-2000×g, 4 מעלות למשך 10 דקות, ולאחר מכן ב-10,000×g, 4 מעלות למשך 30 דקות כדי להסיר תאים, פסולת תאים ושלפוחיות גדולות. חלקי הסופרנטנט סוננו באמצעות מסננים בגודל 0.22-מיקרומטר. לאחר מכן הועברו דגימות מסוננות לאולטרה-צנטריפוגה ב-110,000×g למשך 75 דקות, פעמיים ב-4 מעלות כדי לגלול את האקסוזומים. האקסוזומים שהתקבלו הושעו מחדש בכמות קטנה של תמיסת חיץ פוספט (PBS) ואוחסנו ב--80 מעלות.

3. ניתוח מעקב ננו-חלקיקים (NTA)

אקסוזומים הופשרו באמבט מים של 25 מעלות והונחו על קרח, ולאחר מכן הם דוללו ישירות עם 1×PBS לזיהוי עם חישת דופק מתכווננת (TRPS). ניתוחים של התפלגות גודל וריכוז אקסוזומים בוצעו באמצעות qNano Gold עם Izon Control Suite 3.3.2 מבית Izon Science.

4. קביעת חלבון ו-Western blotting

משוער. 100 ul תמיסת פיצוח מעורבבת מראש (תמיסת פיצוח RIPA ו-1 אחוז מעכב PMSF) נוספה לדגימות התא והאקסוזום בנפרד. לאחר פיצוח במשך 30 דקות, הם עברו צנטריפוגה ב-12,000×g, 4 מעלות למשך 20 דקות. הסופרנטנט נלקח, וריכוזי החלבון נקבעו באמצעות ערכת בדיקת חלבון ביצינצ'ונינית (BCA; Beyotime) לפי הוראות היצרן. אלבומין בסרום בקר שימש כחלבון הסטנדרטי.

דגימות חלבון חולקו על ידי אלקטרופורזה של ג'ל מסוג סודיום-דודציל-סולפט פולי-אקרילאמיד (SDS-PAGE). לאחר ההעברה על גבי ממברנת PVDF (Millipore), הם הודגרו עם נוגדנים ראשוניים שונים, אנטי-CD63 (EXOAB-CD63A-1, SBI; 1:1000), אנטי-ALIX (YT6283, Immunoway; 1:1000 ), אנטי-Calnexin (YT0613, Immunoway; 1:1000), אנטי-P62 (P0067, Sigma; 1:1000), ואנטי-LC3 (L7543, Sigma; 1:1000), ואחריהם נגד עזים נגד ארנבת או עכברים נוגדנים משניים של Ig (180202-001, SBI; 1:5000). רצועות ספציפיות זוהו באמצעות מצע chemiluminescent משופר (ECL; Beyotime). -אקטין (BM0627, Boster) שימש כבקרה פנימית. עוצמת הלהקה היחסית נמדדה באמצעות תוכנת ImageJ.

5. מיקרוסקופ אלקטרונים העברה (TEM)

דגימת 5 ul הושלכה לרשת הנחושת והודגרה בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות. טיפה של 2 אחוז אורניום פרוקסיד אצטט נוספה לרשת הנחושת והודגרה בטמפרטורת החדר למשך דקה אחת. לאחר מכן הוא יובש במשך כ-20 דקות בטמפרטורת החדר ונצפה תחת מיקרוסקופ אלקטרונים עם העברה ננו (Tecnai G2 Spirit BioTwin, FEI).

תמצית Cistanche

6. ליפידום ממוקד

שומנים הופקו באמצעות גרסה שונה של שיטת Bligh and Dyer [15]. כל הניתוחים הליפידומיים בוצעו ב-Exion Ultra-performance נוזל כרומטוגרפיה (UPLC) בשילוב עם מערכת SCIEX QTRAP 6500 PLUS. ניתוחי UPLC-MS/MS נערכו במצב יינון אלקטרוספריי (ESI), עם התנאים הבאים: גז וילון=20, מתח ריסוס יונים=5,500 V , טמפרטורה=400 מעלות , גז מקור יונים 1=35 וגז מקור יונים 2=35. שומנים קוטביים הופרדו באמצעות עמודת Phenomenex Luna 3 מיקרומטר של סיליקה (קוטר פנימי 150 × 2.0 מ"מ) עם שני שלבים ניידים: שלב A נייד (כלורופורם: מתנול: אמוניום הידרוקסיד, 89.5: 10: 0.5) ושלב B נייד (כלורופורם: מתנול: אמוניום הידרוקסיד: מים, 55: 39: 0.5: 5.5). הפרדת שיפוע בוצעה באופן הבא: השיפוע נשמר עם 95 אחוז A למשך 5 דקות ולאחר מכן הצטמצם לינארי ל-60 אחוזים תוך 7 דקות והוחזק למשך 4 דקות, ולאחר מכן הוא ירד ל-30 אחוז ולאחר מכן הוחזק למשך 15 דקות. לבסוף, השיפוע המקורי הוחל ונשמר במשך 5 דקות. ניטור מסה ספקטרומטרי רב-תגובה (MRM) הוקם עבור זיהוי שומנים שונים וניתוח כמותי [16, 17]. מינים בודדים של שומנים קוטביים כומתו על ידי התייחסות לסטנדרטים פנימיים עם קוצים מאותה מחלקת שומנים, כולל PE-d31(16:0/18:1), DMPE; PG-d31(16:0/18:1), DMPG; PI-d31(16:0/18:1), di-C8- PI; PS-d31(16:0/18:1), DMPS; PA-d31(16:{{1{{1{{110}}8}}4}}/18:1), PA(17:0/17:0); BMP-(14:0/14:0); LPE-17:1; LPI-17:1; LPS-17:1; LPA-17:0; GM3 d18:1/18:0-d3; ד31-16:0, ד8-20:4; PC-d31(16:0/18:1), DMPC; SM d18:1/ d31-16:0, SM d18:1/12:0; LPC-17:0; Cer d18:1-d7/15:0; Sph-d18:1/17:0; CL 22:1(3)-14:1.

שומני גליצרול, כולל דיאצילגליצרולים (DAGs) וטריאצילגליצרולים (TAGs), כומתו באמצעות גרסה שונה של HPLC/MS/MS הפוכה. הפרדת שומנים ניטרליים הושגה בעמודה Phenomenex Kinetex-C18 2.6 מיקרומטר (מזהה 4.6x100 מ"מ) באמצעות פאזה ניידת המכילה כלורופורם: מתנול: {{19} }.1 M אמוניום אצטט (100:100:4), בקצב זרימה של 160 µl/דקה. ד5-TAG (16:0)3; ד5-TAG (14:0)3; d5-TAG (18:0)3 שימשו ל-TAG ספייק. ד5-DAG (1,3-17:0); d5-DAG (1,3-18:1) שימשו להגברת DAG בודדים על בסיס טכנולוגיית Neutral Miss MS/MS.

כולסטרולים חופשיים, סטרולים והאסטרים שלהם נותחו על ידי HPLC-MS/MS, שבוצעו במצב יינון כימי בלחץ אטמוספרי (APCI), עם Cholesteryl-2,2,3,4,4,6-d6 אוקטדקונאט; כולסטרול-26,26,26,27,27,27-d6 כסטנדרטים פנימיים.

כלורופורם: מתנול: (1:1), חומצה הידרוכלורית 2.4M ו-0.25M EDTA נוספו לדגימה, ולאחר מכן טחינה בטמפרטורות נמוכות. הדגימה עברה צנטריפוגה לאחר דגירה של 3 שעות ב-4 מעלות, ולאחר מכן חולצה השלב האורגני התחתון. כלורופורם הוסף לחילוץ השני, ולאחר מכן שטיפת הפאזה האורגנית באמצעות חומצה הידרוכלורית 1N: מתנול (1:1). השלב האורגני יובש ברכז סיבובי ואקום. כפי שדווח בעבר, 40 אחוז מתילאמין: מים: n-בוטנול: מתנול (36:8:9:47) שימשו לדיאצילציה ונותחו באמצעות כרומטוגרפיית יונים Thermo ICS-5000. PI4P, PI3P, PI4P, PI(3, 4)P2, PI(3, 5)P2, PI(4, 5)P2 ו-PI(3, 4,5) P3 שימשו לבניית עקומת כיול חיצונית לכמותית אָנָלִיזָה. הניתוח נתמך על ידי Lipidall Technologies Company Limited.

7. מיקרוסקופ פלואורסצנטי

כדי לדמיין את הספיגה של אקסוזומים לתוך GMCs (Sicencell), כמות שווה של אקסוזומים המופרשים על ידי תאי HK-2 עם או בלי גירוי גלוקוז גבוה סומנו שניהם עם PKH67 (mini67, Sigma) בהתאם להוראות היצרן. אקסוזומים שסומנו תורגלו עם GMCs במשך 24 שעות. GMCs confluent נשטפו שלוש פעמים עם PBS, ולאחר מכן התאים נקבעו עם 4 אחוז פרפורמלדהיד ונשמרו מאור למשך 30 דקות. תאים נשטפו שלוש פעמים עם PBS והוצבעו ב-DAPI (28718903, Solarbio) למשך 4-6 דקות. לאחר כביסה שלוש פעמים, צולמו GMCs confluent באמצעות מיקרוסקופ קונפוקאלי Nikon C2.

8. ניתוח סטטיסטי

GraphPad 7.0 הוחל לניתוח סטטיסטי ומיפוי. הנתונים מבוטאים כממוצע ± SEM. מבחן t של התלמיד שימש להשוואה בין שתי הקבוצות. ערך P < 0.05 נחשב כמובהקות סטטיסטית.

קפסולות Cistanche

דִיוּן

המחקר שלנו מספק את מיני השומנים המבוטאים בצורה דיפרנציאלית של תאי HK{{0}} ואקסוזומים תחת גירוי גלוקוז גבוה, שלא דווחו קודם לכן. מעניין לציין כי מינים של GM3, כגון GM3 d18:1/22:0, GM3 d18:1/16:0, GM3 d18:0/16:0 , GM3 d18:1/22:1 עלו באופן משמעותי בתאי HK-2 בעלי גירוי גבוה של גלוקוז, ו-GM3 d18:1/24:1, GM3 ירדו באופן משמעותי באקסוזומים שלהם. בנוסף, GM3 d18:1 /18:1, GM3 d18:1/20:1, ו-GM3 d18:0/20:0 נמצאו רק באקסוסומים. GM3 הוא הגנגליוזיד המופץ ביותר בגוף, המורכב מגלוקוז, גלקטוז וחומצה סיאלית המאופיינת בקבוצות סיאליות הקשורות למבנה השלד הסרמיד [18]. הוא מעורב בוויסות של מגוון תפקודי תאים, כולל המרת אותות, התפשטות, התמיינות ואפופטוזיס. על פי מחקרים אחרונים, ריכוז הסרום של GM3 גבוה יותר בחולים עם סוכרת מסוג 2, היפרליפידמיה וחולים שמנים, בעוד ש-GM3 יכול לקדם את הסרת קולטני אינסולין ולהפחית את איתות האינסולין [19]. התוצאות שלנו הצביעו על רמות גבוהות של כל מיני GM3 המבוטאים דיפרנציאליים בתאי HK-2 תחת גירוי גלוקוז גבוה, במיוחד העלייה של GM3 עם שרשרת רוחבית (22:0) שהייתה הברורה ביותר. ג'אנג ואחרים. [20] צפה גם בביטוי מוגבר של GM3 d18:1/22:0 בקליפת הכליה של עכברים עם נפרופתיה סוכרתית, דבר שהיה עקבי עם התוצאות שלנו. המחקר על חולדות סוכרת מסוג 2 הנגרמות על ידי סטרפטוזוטוצין שנערך על ידי Anela et al. [21] נמצא GM3 ללא שינוי בגלומרולי אך הגביר באופן משמעותי את ביטוי GM3 באבובות הכליה, מה שעולה בקנה אחד עם הממצא שלנו לגבי שינויים ב-GM3 באבובות הכליות. קוואק ואח'. [22] נמצאה ירידה ב-GM3 בתכולת הגלומרול של חולדות סוכרתיות הנגרמות על ידי סטרפטוזוטוצין, ואחריה אובדן מחסום סינון סלקטיבי בגלומרולי. חשוב לציין שתפקידו של GM3 בגלומרולי ובאבוביות הכליה עשוי להשתנות. GM3 הוא גם חלק חשוב מרפסדת השומנים [23]. שינויים ברמות ביטוי GM3 ברפסודות שומנים משנים את הפעילויות של Na plus -glucose cotransporter type 2 (SGLT2) ושל Na plus /K plus /Cl- cotransporter כליות, ששניהם תלויי רפסודת שומנים [24]. כמה חוקרים שיערו שריכוז גבוה יותר של GM3 מגביר את פעילות ה-SGLT2 ו-Na plus /K plus /Cl- cotransporter, מה שמוביל לספיגה חוזרת צינורית מוגברת ולחץ הידרוסטטי עורקי efferent ולאחר מכן גורם לפציעה של תאי צינורי כליה על ידי פגיעה באיזון הצינורית. קומארי וחב'. [25] מצא ש-GM3 באקסוזומים בשתן של חולים הראה הבדל משמעותי בין DKD לסוכרת. יחד, התפקיד של הביטוי המוגבר של GM3 תחת גלוקוז גבוה באבובות הכליה צריך להיות מטופל במחקר עתידי.

חשוב לציין, התוצאות שלנו הראו גם שמינים מסוימים של CL, כולל CL66:4(16:1), CL70:7(16:1) ו-CL74:8(16:1) ירדו באופן משמעותי ב-HK עם גירוי גבוה של גלוקוז{ {13}} תאים. בהשוואה לתאי HK-2, CL ירד משמעותית באקסוזומים. CL ממוקם כמעט כולו בממברנה הפנימית של המיטוכונדריה ומהווה חלק חשוב בשמירה על המבנה המיטוכונדריאלי. יש לו תפקיד חשוב בהולכת אלקטרונים, ייצור אדנוזין טריפוספט, חילוף חומרים אנרגטי ואפופטוזיס [26, 27]. בסוכרת, שינויים מורפולוגיים של המיטוכונדריה וחוסר תפקוד מלווים לעתים קרובות בשינוי CL פתולוגי [28,29]. תאי האפיתל הצינורי הכלייתי הפרוקסימלי דורשים מספיק ATP כדי לשמור על ההובלה הפעילה והספיגה מחדש של חומרים שונים. כתאים צורכים אנרגיה גבוהה, תאי אפיתל צינורי כליה פרוקסימליים עשירים במיטוכונדריה [30]. פיצול מיטוכונדריאלי נצפה בתאי אפיתל צינוריים פרוקסימליים בסוכרת מוקדמת. ג'אנג ואחרים. [31] מצא ש-CL חיוני לשמירה על תפקוד מיטוכונדריאלי צינורי בעכברים עם סוכרת מסוג 1. התוצאות שלנו עשויות לספק בסיס תיאורטי חדש לחקר מנגנון הפגיעה במיטוכונדריה של DKD.

לאקסוזומים יש תפקיד חשוב בשמירה על הומאוסטזיס תאי על ידי שיתוף פעולה עם מסלול האוטופגיה-ליזוזום. מחקרים קודמים מצאו ששינויים ברמות ביטוי PIPs יכולים להשפיע הן על הפרשת אקסוזום והן על אוטופגיה תאית על ידי ויסות הטרנספורמציה של MVBs [32, 33, 34]. נינה וחב'. [35] מצא שבתאי PC-3, עיכוב של PIKfyve, שהסובסטרט הוא PI3P, הגביר את הפרשת האקסוזומים ועורר אוטופגיה הפרשה, ובכך הראה שמסלולים אלו היו קשורים קשר הדוק על ידי PIPs. בהתבסס על האמור לעיל, צפינו בשינויים ב-PIPs, ייצור אקסוזומלי ואוטופגיה בתאי HK-2 בעלי גירוי גבוה של גלוקוז. התוצאות שלנו הראו שגלוקוז גבוה עורר הן את הפרשת האקסוזומים והן את ההפעלה של אוטופגיה בתאי HK-2, בעוד שנמצאה ירידה משמעותית בביטוי PI4P. מחקרים נוספים נחוצים כדי לחקור את מנגנון הוויסות האקסוזום-אוטופגיה של PIPs המעורבים בגירוי גלוקוז גבוה.

בתור השליח, לאקסוזומים יש תפקיד חשוב באיתות תוך תאי ושינויים תפקודיים בהתפתחות DKD [36, 37, 38]. סימנו אקסוזומים ששוחררו בתאים HK-2 בצורה פלואורסצנטית והדגמנו את הספיגה הפרקרינית שלהם על ידי GMCs. בהשוואה לתאי האם שלהם, לאקסוזומים יש הרכב מיוחד, מה שגורם להם להיות יציבים ופונקציונליים יותר בשל הכולסטרול העשיר, ספינגוליפידים, פוספוליפידים רוויים ותחומים שומניים [39]. גם שינויים קטנים בהרכב השומנים יכולים להשפיע על תכונות הממברנה, ובכך להשפיע רבות על תפקודו. במחקר הנוכחי, מצאנו ש-TAG, PC ו-CL ירדו באופן משמעותי באקסוזומים בהשוואה לתאי אם HK-2, בעוד ש-13 מינים של שומנים כולל LPA18:2, LPI22:5, PG32:2, FFA16: 1, GM3 d18:1/18:1, GM3 d18:1/20:1, GM3 d18:{{30}}/20:0, PC40: 6p, TAG52:1(18:1), TAG52:0(18:0), CE-20:5, CE-20:4, CE-22:6 זוהו רק ב אקסוזומים. העבודה המוצגת כאן מספקת בסיס לניתוח נוסף של התפקידים הפראקריניים של אקסוזומים המשתחררים על ידי תאים צינוריים.

אבקת Cistanche

מסקנות

לסיכום, המחקר שלנו הוכיח את החשיבות של ניתוח ליפידומי באספקת יעדים חדשים לחקור את הפתוגנזה של DKD. מחקרים נוספים על תפקוד השומנים המבוטאים דיפרנציאליים כמו גם מחקרי שומנים מקיפים על תאים אחרים בנפרון והאקסוזומים שלהם עשויים לספק פרספקטיבה חדשה שתבהיר עוד יותר את המנגנון של DKD.

הפניות

1. Stephanie Eid, Kelli M. Sas, Steven F. Abcouwer, Eva L. Feldman, Thomas W. Gardner, Subramaniam Pennathur. et al. תובנות חדשות על המנגנונים של סיבוכי סוכרת: תפקידם של שומנים ומטבוליזם של שומנים. סוכרת. 2019; 62(9): 1539-49.

2. קריסטיאן סטדלר, אירה ג'יי גולדברג, קטלין סוסטק. ההבנה המתפתחת של תרומת חילוף החומרים של שומנים למחלת כליות סוכרתית. Curr Diab Rep. 2015; 15(7): 40.

3. מיכל הרמן-אדלשטיין, פנינה שרצר, אנה טובר, משה לוי, עוזי גפטר. שינוי בחילוף החומרים של שומנים בכליות והצטברות שומנים בכליות בנפרופתיה סוכרתית אנושית. J Lipid Res. 2014; 55(3): 561-72.

4. G Michelle Ducasa, Alla Mitrofanova, Alessia Fornoni. דיבור צולב בין שומנים ומיטוכונדריה במחלת כליות סוכרתית. Curr Diabetes Rep. 2019; 19:144.

5. קרי ג'יי גרוב, פול א. ווזיאן, ג'פרי מ. ספראגינס, סואן וואנג, פאיסיט פאוקסאקון, ריימונד סי האריס. et al. נפרופתיה סוכרתית גורמת לשינויים בפרופילי השומנים הגלומרולריים והצינוריים. J Lipid Res. 2014; 55(7): 1375-85.

6. Kelli M. Sas, Jiahe Lin, Thekkelnaycke M. Rajendiran, Tanu Soni, Viji Nair, Lucy M. Hinder. et al. אינטראקציות משותפות ונבדלות של שומנים-שומנים בפלזמה וברקמות מושפעות במודל עכבר סוכרתי. J Lipid Res. 2018; 59(2): 173-83.

7. יוסף החמישי בונבנטרה. האם נוכל לכוון לנזק צינורי כדי למנוע ירידה בתפקוד הכליות בסוכרת? סמינ נפרול. 2012; 32(5): 452-62.

8. Bi-Cheng Liu, Tao-Tao Tang, Lin-Li Lv, Hui-Yao Lan. פגיעה באבובית הכלייתית: כוח מניע לעבר מחלת כליות כרונית. כליות בינלאומי. 2018; 93(3): 568-79.

9. נינה פטרסן הסוויק, אלישיה יורנטה. ידע עדכני על ביוגנזה ושחרור אקסוזום. Cell Mol Life Sci. 2018; 75(2): 193-208.

10. ליילה סלימי, עלי אכברי, נסרולה ג'בארי, בהנם מוג'רד, עלי והבי, סלאוומיר שפרט. et al. סינרגיות באקסוזומים ובמסלולי אוטופגיה להומאוסטזיס תאי וגרורות של תאי גידול. Cell Biosci. 2020; 10: 64.

11. Suresh Mathivanan, Hong Ji, Richard J. Simpson. אקסוזומים: אברונים חוץ-תאיים חשובים בתקשורת בין-תאית. J Proteomics. 2010; 73(10): 1907-20.

12. מאיה קוסנוביץ', אלישיה יורנטה, סופיה גלמוצ'ליה, חוסה מ' ואלדיבילסו, מיליקה בוז'יץ'. שלפוחיות חוץ-תאיות ופיברוזיס כליות: אודיסיאה לקראת גישה טיפולית חדשה. Int J Mol Sci. 2021; 22(8): 3887.

13. Lin-Li Lv, Ye Feng, Min Wu, Bin Wang, Zuo-Lin Li, Xin Zhong. et al. מירנה אקזומלית-19b-3p של תאי אפיתל צינוריים מעודדת הפעלת מקרופאגים M1 בפגיעה בכליות. מוות תאים שונה. 2020; 27(1): 210-26.

14. Raghu Kalluri, Valerie S. LeBleu. הביולוגיה, התפקוד והיישומים הביו-רפואיים של אקסוזומים. מַדָע. 2020; 367(6478): eaau6977.

15. Jieli Lu, Sin Man Lam, Qin Wan, Lixin Shi, Yanan Huo, Lulu Chen. et al. ליפידום ממוקד בכיסוי גבוה חושפת מנבאים חדשים של שומנים בדם וחוסר ויסות של מסלולי השומנים לפני הופעת סוכרת מסוג 2 במבוגרים סינים עם נורמוגליקמיה. טיפול בסוכרת. 2019; 42(11): 2117-26.

16. Sin Man Lam, Raoxu Wang, Huan Miao, Bowen Li, Guanghou Shui. שיטה משולבת לחקירה ישירה של הומאוסטזיס ספינגוליפיד ברקמות הלב והמוח של עכברים דרך התפתחות לאחר לידה ועד להזדקנות הרבייה. Anal Chim Acta. 2018; 1037: 152-58.

17. Sin Man Lam, Zehua Wang, Jie Li, Xun Huang, Guanghou Shui. ריבוד של חומצות שומן רב בלתי רוויות בפוספוליפידים קרומיים של זחל Caenorhabditis elegans dauer מחליש את הביוסינתזה של האיקוסנואידים להישרדות ממושכת. חיזור ביול. 2017; 12: 967-77.

18. מסאקו נישיקאווה, מאקוטו קוראנו, טאקהירו ניטה, הירוטקה קאנו, ג'ין-איצ'י אינוקוצ'י, יוטאקה יאטומי. רמות GM3(d18:1-16:0) ו-GM3(d18:1-24:1) בסרום עשויות להיות קשורות ללימפומה: מחקר חקרני עם מחלות המטולוגיות. Sci Rep. 2019; 9: 6308.

19. טאקאשיג'ה סאטו, יוטאקה ניהאי, מסאקאזו נאגאפוקו, סיייצ'י טאגאמי, רינה צ'ין, מיצונובו קוואמורה. et al. רמות מחזוריות של גנגליוסיד GM3 בתסמונת מטבולית: מחקר פיילוט. Obes Res Clin Practice. 2008; 2(4): 231-38.

20. Biyu Hou, Ping He, Peng Ma, Xinyu Yang, Chunyang Xu, Sin Man Lam. et al. פרופיל ליפידום מקיף של הכליה בשלב מוקדם של נפרופתיה סוכרתית. אנדוקרינול פרונט (לוזן). 2020; 11: 359.

21. אנלה נובאק, ניקולינה רז'יץ' מוז'יניץ', ודרנה צ'יקש צ'וליץ', יושקו בוז'יץ', טינה טיצ'ינוביץ' קוריר, לילה פרהטוביץ'. et al. התפלגות כלייתית של ganglioside GM3 במודלים של חולדות של סוכרת מסוג 1 ו-2. J Physiol Biochem. 2013; 69: 727-35.

22. Dong Hoon Kwak, Young Il Rho, Oh Deog Kwon, Seon Ho Ahan, Ju Hung Song, Young Kug Choo. et al. ירידה ב-Ganglioside GM3 בגלומרולי סוכרתיים הנגרמת על ידי סטרפטוזוטוצין של חולדות. Life Sci. 2003; 72(17): 1997-2006.

23. יונג צ'ן, ג'י צ'ין, ג'נג ו.צ'ן. NSOM עם פלואורסצנטי טופוגרפי מדגים ישירות את קוטביות שיא העמק של רפסודות GM1/GM3 בתנודות קרום התא. J Lipid Res. 2008; 49(10): 2268-75.

24. Pia Welker, Alexandra Böhlick, Kerim Mutig, Michele Salanova, Thomas Kahl, Hartmut Schlüter. et al. כליות Na plus -K plus -Cl- -פעילות קוטרנספורטר וסחר בהשראת וזופרסין תלויים בשומנים. Am J Physiol Renal Physiol. 2008; 295(3): F789-F802.

25. Sangeeta Kumari, Ajeet Singh. lipidomic exosomal של השתן מגלה סמנים לנפרופתיה סוכרתית. מטבולומיקה נוכחית. 2018; 6: 131-39.

26. אלכסנדר V. פאנוב, סרגיי I. Dikalov. קרדיוליפין, לכל רדיקלי הידרוקסיל, וחמצן שומנים בתפקוד לקוי של המיטוכונדריה והזדקנות. Oxid Med Cell Longev. 2020; 2020: 1323028.

27. Giuseppe Paradies, Valeria Paradies, Francesca M. Ruggiero, Giuseppe Petrosillo. תפקידו של קרדיוליפין בתפקוד המיטוכונדריאלי ובדינמיקה בבריאות ובמחלות: היבטים מולקולריים ותרופתיים. תאים. 2019; 8(7): 728.

28. Edgard M Mejia, Hieu Nguyen, Grant M Hatch. ביוסינתזה של קרדיוליפין יונקים. Chem Phys Lipids. 2014; 179: 11-6.

29. G. Michelle Ducasa, Alla Mitrofanova, Shamroop K. Mallela, Xiaochen Liu, Judith Molina, Alexis Sloan. et al. מחסור בקלטת A1 קושרת ATP גורם להפרעה בתפקוד המיטוכונדריאלי המונע על ידי קרדיוליפין בפודוציטים. J Clin Invest. 2019; 129(8): 3387–400.

30. אלחנדרה גיירמינה מירנדה-דיאז, ארנסטו גרמן קרדונה-מוניוז, פרמין פול פאצ'קו-מואיז. תפקיד הקרדיוליפין והנזק המיטוכונדריאלי בהשתלת כליה. Oxid Med Cell Longev. 2019; 2019: 3836186.

31. Guanshi Zhang, Jialing Zhang, Rachel J. DeHoog, Subramaniam Pennathur, Christopher R. Anderton, Manjeri A. Venkatachalam. et al. DESI-MSI ו- METASPACE מצביעים על הפרעות שומנים ורכיבי קרום מיטוכונדריאלי השתנו באבוביות הפרוקסימליות של הכליה הסוכרתית. מטבולומי. 2020; 16(1): 11.

32. יוהאן-אוון דה קריין, דימיטרי ל. ברטאצי, סברין בר, סילבי פריאנט. Phosphoinositides הם שחקנים מרכזיים בסחר בממברנות ובמסלולי איתות של שומנים. Int J Mol Sci. 2017; 18(3): 634.

33. קיי או. שינק, קיה-ווי טאן, האראלד סטנמרק. פוספוינוזיטידים בשליטה על דינמיקת הממברנה. Annu Rev Cell Dev Biol. 2016; 32: 143-71.

34. טור סקוטלנד, נינה פ' הסוויק, קירסטן סנדוויג, אלישיה יורנטה. הרכב שומנים אקזומלי ותפקידם של שומני אתר ופוספואינוזיטידים בביולוגיה של אקזוזו. J Lipid Res. 2019; 60(1): 9-18.

35. Nina Pettersen Hessvik, Anders Øverbye, Andreas Brech, Maria Lyngaas Torgersen, Ida Seim Jakobsen, Kirsten Sandvig. et al. עיכוב PIKfyve מגביר את שחרור האקסוזום ומעורר אוטופגיה מפרישה. Cell Mol Life Sci. 2016; 73: 4717-37.

36. מרגריטה AC פומאטו, קיארה גאי, בנדטה בוסולאטי, ג'ובאני קאמי. שלפוחיות חוץ-תאיות בפתופיזיולוגיה של הכליות. פרונט מול ביוסקי. 2017; 4:37.

37. Xiaoming Wu, Yanbin Gao, Liping Xu, Wanyu Dang, Huimin Yan, Dawei Zou. et al. אקסוזומים מתאי אנדותל גלומרולריים שטופלו בגלוקוז גבוה מעוררים את המעבר האפיתל-מזנכימלי ותפקוד לקוי של פודוציטים. Sci Rep. 2017; 7: 9371.

38. Xiao-ming Wu, Yan-bin Gao, Fang-qiang Cui, Na Zhang. אקסוזומים מתאי אנדותל גלומרולרי שטופלו בגלוקוז גבוה מפעילים תאים מנזגיים כדי לקדם פיברוזיס כלייתי. ביול פתוח. 2016; 5(4): 484-91.

39. טור סקוטלנד, קירסטן סנדוויג, אלישיה יורנטה. ליפידים באקסוזומים: ידע נוכחי והדרך קדימה. Prog Lipid Res. 2017; 66: 30-41.

Weidong Wang, Tingting Li, Zhijie Li, Hongmiao Wang, Xiaodan Liu

המחלקה לנפרולוגיה, בית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית בסין, 155 North Nanjing Street, Shenyang, Liaoning, PR China, 110001