ilבחר
הבית / יֶדַע / תוכן

יֶדַע

השוואה בין חסינות CMV הומורלית ותאית בחולים הממתינים להשתלת כליה

Nov 08, 2023

תַקצִיר:מחלת כליות כרונית עשויה לשנות את חסינות תאי T אנטי-ויראליים. במחקר הנוכחי, הערכנו ב-63 מטופלים לפני השתלת כליה כיצד חיסוניות הומורלית ותאית נגד ציטומגלווירוס (CMV) נמצאה בקורלציה באמצעות אינטרפרון (IFN) - ELISpot (T-Track® CMV, Mikrogen, Neuried, גרמניה). הקבוצה כללה 24 חולים עם שלילי ו-39 עם CMV IgG חיובי. בעוד שאף אחד מהמטופלים עם CMV IgG שלילי לא הראה תגובות ניתנות לזיהוי ל-T-Track® CMV, ל-26 מתוך 39 חולים עם CMV IgG חיובי היו תגובות חיוביות ל-ELISpot. התגובה החציונית ל-CMV pp65 בקבוצה הסרונגטיבית של CMV הייתה {{10}} יחידות יוצרות נקודה (SFU) לכל 200,000 PBMC (טווח 0-1) ו בקבוצה הסרו-חיובית 43 SFU (טווח 0-750). לפיכך, 13 מתוך 39 חולים עם סרוסטטוס CMV חיובי (33%) היו בעלי חסינות בלתי ניתנת לזיהוי של תאי T ועשויים להיות בסיכון מוגבר להפעלה מחדש של CMV. תגובות CMV pp65-הספציפיות ל-ELISpot היו גבוהות פי 29.3- בחולים סרו-חיוביים עם לעומת ללא דיאליזה ופי 5.6-גבוהה יותר בחולים עם טיפול מדכא חיסוני לעומת ללא טיפול חיסוני, אך חולים עם דיאליזה וטיפול מדכא חיסון הראו, כצפוי, תגובות נמוכות יותר לפיטו-המגלוטינין, הביקורת החיובית. ממצא זה עשוי להיגרם על ידי (תת-קלינית) CMV-DNAemia ו"בוסטר" של תאי T ספציפיים ל-CMV.

מילות מפתח: ציטומגלווירוס אנושי; ELISpot; אינטרפרון-; דיאליזה; טיפול מדכא חיסון

Cistanche deserticola—improve immunity -

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

1. הקדמה

אצל מושתלי כליה, זיהום בנגיפים של הרפס, במיוחד עם ציטומגלווירוס (CMV), יכול להוביל למחלות קשות כגון דלקת ריאות אינטרסטיציאלית, הפטיטיס, קוליטיס ודלקת המוח [1], והוא יכול לעורר דחיית שתל אלון [2]. לעומת זאת, אצל אנשים בעלי יכולת חיסונית, מהלך הזיהום הוא בדרך כלל אסימפטומטי או קל, עם תסמינים דומים לזה של מונונוקלאוזיס [3]. לפיכך, חיוני להעריך את הסיכון לזיהום/הפעלה מחדש של CMV בצורה מדויקת ככל האפשר בחולים מושתלים או בחולים הממתינים להשתלה. מלבד קביעת חסינות הומורלית נגד CMV, כלומר אימונוגלובולין (Ig) G או M, התגובה החיסונית התאית נגד CMV מוערכת יותר ויותר בשיטות חוץ גופיות, כגון ציטומטריית זרימה או ELISpot [4]. ידוע כי חסינות הומורלית מופחתת בחולי דיאליזה ו/או תחת דיכוי חיסוני. לדוגמה, בדיקות חוזרות הראו ב-18 מתוך 168 חולים שעברו המודיאליזה עם סרו-חיוביות של CMV (11%) שינוי זמני לשליליות [5]. יתר על כן, חסינות לתאי T ספציפיים ל-CMV זוהתה בחולים מושתלי כליה ללא נוגדני CMV IgG [6]. סקירה של Sester et al. [7] הדגיש את התפקיד החשוב של חסינות תאי T ספציפיים ל-CMV אצל מושתלי איברים מוצקים. עם זאת, זה גם מבוסס היטב שתפקוד כליות לקוי משנה את תפקוד תאי T, מה שמוביל לירידה בתגובות אנטי-מיקרוביאליות [8]. לפיכך, למרות זיהום CMV קודם, נוגדנים ספציפיים או תאי T עשויים לרדת מתחת לגבול מסוים ולהיות בלתי ניתנים לזיהוי (זמנית). מבחן ELISpot הרגיש ביותר יכול לזהות הפרשת ציטוקינים ברמת תא בודד [9], ואפשר למדוד חסינות אנטי-ויראלית אצל מושתלים [10]. הכימות של חסינות ה-CMV הסלולרית עשוי לעזור לרבד את הסיכון לזיהום או הפעלה מחדש של CMV ובכך להנחות טיפול אנטי-ויראלי מונע ומניעתי לאחר ההשתלה [11-24]. חסינות ספציפית נגד CMV עשויה להיות חשובה לא רק אצל מושתלים אלא גם בחולים הממתינים להשתלת כליה. ברשימת ההמתנה מבוצעת ריבוד סיכון של המטופלים - בהתחשב גם בחיוביות/שליליות של CMV. תפקוד כליות לקוי עשוי להשפיע על תפקוד מערכת החיסון התאית, ויש מעט נתונים על המתאם בין חסינות הומורלית ותאית בקבוצה זו [25]. במחקר הנוכחי, התייחסנו לשאלה כיצד חיסינות CMV הומורלית ותאית נמצאה בקורלציה ב-63 חולים הממתינים להשתלת כליה. יתרה מזאת, ניתחנו אם משתנים כלשהם כגון CMV IgG, CMV IgM, גיל, מין, גורם לאי ספיקת כליות, דיאליזה, השתלת כליה קודמת או טיפול מדכא חיסון השפיעו על תגובות ELISpot הספציפיות ל-CMV.

Cistanche deserticola—improve immunity

cistanche tubulosa- לשפר את המערכת החיסונית

2. חומרים ושיטות

2.1. חולים

ממרץ עד יוני 2021 כללנו ברציפות 63 חולים הממתינים להשתלת כליה (טבלה 1). לא היו קריטריונים להרחקה. הקבוצה הכילה 38 זכרים ו-25 נקבות; הגיל החציוני היה 54 שנים (טווח 19-78). 19 חולים קיבלו דיאליזה פריטונאלית ו-31 המודיאליזה. 12 חולים טופלו בתרופות מדכאות חיסון. המחקר אושר על ידי ועדת האתיקה המקומית של בית החולים האוניברסיטאי באסן, גרמניה (21-9883-BO), וכל המתנדבים סיפקו הסכמה מדעת להשתתף במחקר. המחקר בוצע בהתאם לסטנדרטים האתיים שצוינו בהצהרת הלסינקי משנת 1964 ותיקוניה המאוחרים או סטנדרטים אתיים דומים.

טבלה 1. מאפיינים של 63 חולים הממתינים להשתלת כליה

Table 1. Characteristics of 63 patients awaiting kidney transplantation


2.2. בדיקת ELISpot

דם היקפי נאסף בצינורות הפרין של 9 מ"ל, וה-PBMC בודד והותאם ל-2 מיליון PBMC למיליליטר. בסך הכל, 200,000 PBMC נוספו לכל באר של 8-רצועות ELISpot וגוירו במשך 19 שעות ב-37 ◦C בכפולות עם שני חלבוני T-activated® CMV, אנטיגן מוקדם מיידי{{ 8}} (IE-1) ופוספופרוטאין 65 (pp65), לפי הוראות היצרן (T-Track® CMV, Mikrogen GmbH, Neuried, גרמניה; לשעבר Lophius Biosciences GmbH, Regensburg, גרמניה) [10,26 ]. במקביל, תורבו בקרות שליליות (תאים עם מדיום בלבד) וביקורות חיוביות (מעוררות עם המיטוגן phytohemagglutinin, PHA). הכתמים שנוצרו, שכל אחד מהם מייצג תא משחרר אינטרפרון (IFN) בודד, נכמת באמצעות קורא צלחות ELISpot (AID Fluorospot, Autoimmun Diagnostika GmbH, שטרסברג, גרמניה). התוצאות נוצרו על פי אלגוריתם שסיפק היצרן. באמצעות האלגוריתם שסופק, הממוצע האריתמטי של 2-מספרי כתמים משוכפלים שעברו טרנספורמציה בשורש ריבוע מחושב ומרובע [26]. בקרות שליליות הופחתו מערכים ספציפיים ל-CMV, וכתוצאה מכך יחידות יוצרות נקודה (SFU). SFU גדול מ-10 או שווה ל-10 הוגדר כחיובי.

2.3. CMV סרוסטטוס 

CMV IgG was determined using the Anti-CMV-IgG® (DiaSorin, Saluggia, Italy) assay on the LIASON XL platform, following the manufacturer's instructions. In addition, an Anti-CMV IgM® (DiaSorin) was used to detect CMV primary infection. Using this platform, CMV IgG < 12 IU/mL is considered negative, from 12 to 14 IU/mL borderline, and >14 IU/mL חיובי.

Desert ginseng—Improve immunity (15)

מערכת חיסון מגבירה צמח cistanche

2.4. ניתוח סטטיסטי

ניתוח סטטיסטי בוצע עם תוכנת GraphPad Prism 8.0.1 (סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב) ותוכנת IBM SPSS Statistics 23 (ניו יורק, ניו יורק, ארה"ב). לצורך ניתוח משתנים מספריים, יישם מתאם ספירמן. כדי להעריך את ההשפעה של משתנים קטגוריים, השתמשנו במבחן המדויק של פישר, מבחן מאן-וויטני, או מבחן קרוסקאל-וואליס לפי הצורך. בנוסף, ביצענו ניתוח רב-משתני באמצעות רגרסיה לוגיסטית רב-נומית. כאן כללנו את הגיל כרציף ו-CMV IgG ודיאליזה וטיפול מדכא חיסון כמשתנים דיכוטומיים, כלומר כן או לא. ערכי p דו-צדדיים < 0.05 נחשבו מובהקים.

3. תוצאות

העוקבה הכוללת של 63 חולים עם מחלת כליות כרונית כללה 24 חולים עם שלילי ו-39 עם CMV IgG חיובי. אף אחד מהחולים עם CMV IgG שלילי לא הראה תגובות IFN- לזיהוי ל-CMV IE-1 ELISpot (איור 1A) או ל-CMV pp65 ELISpot (איור 1B). התגובה החציונית לחלבון CMV IE-1 הייתה 0 SFU לכל 200,000 PBMC (טווח 0–{{16 }}) ולחלבון CMV pp65 {{20}} SFU (טווח 0-1), בהתאמה (איור 1A, B, טבלה 2). בחולים עם CMV IgG חיובי, התגובות התאיות היו גבוהות יותר באופן מובהק (p < 0.0001). התגובה החציונית ל-CMV IE-1 הייתה 2 SFU (טווח 0-555), ול-CMV pp65, היא הייתה 43 SFU (טווח 0-750). הבדיקה המדויקת של פישר הראתה שתגובות ELISpot ל-CMV IE-1 ול-pp65 היו בקורלציה מובהקת (p <0.05) עם תגובות CMV IgG (איור 1C).

Figure 1. Distribution of CMV-specific ELISpot responses in 63 patients awaiting kidney transplantation. The cohort comprised 24 with negative (green circles) and 39 with positive CMV IgG (blue circles). Panel (A) shows ELISpot responses upon stimulation with CMV immediate early antigen 1 (IE-1) and panel (B) upon stimulation with CMV phosphoprotein 65 (pp65). Horizontal lines indicate median values. The dotted line represents the cutoff for positive responses (10 spot-forming units, SFU). Cellular in vitro responses in patients without and with CMV IgG were compared by the Mann–Whitney test. Panel (C) summarizes the correlation between humoral (IgG) and cellular (ELISpot) CMV-specific responses (Fisher's exact test). Figure 1. Distribution of CMV-specific ELISpot responses in 63 patients awaiting kidney transplantation. The cohort comprised 24 with negative (green circles) and 39 with positive CMV IgG (blue circles). Panel (A) shows ELISpot responses upon stimulation with CMV immediate early antigen 1 (IE-1) and panel (B) upon stimulation with CMV phosphoprotein 65 (pp65). Horizontal lines indicate median values. The dotted line represents the cutoff for positive responses (10 spot-forming units, SFU). Cellular in vitro responses in patients without and with CMV IgG were compared by the Mann–Whitney test. Panel (C) summarizes the correlation between humoral (IgG) and cellular (ELISpot) CMV-specific responses (Fisher's exact test).


איור 1. התפלגות תגובות ELISpot ספציפיות ל-CMV ב-63 חולים הממתינים להשתלת כליה. הקבוצה כללה 24 עם שלילי (עיגולים ירוקים) ו-39 עם CMV IgG חיובי (עיגולים כחולים). לוח (A) מציג תגובות ELISpot עם גירוי עם CMV אנטיגן מוקדם מיידי 1 (IE-1) ולוח (B) עם גירוי עם CMV phosphoprotein 65 (pp65). קווים אופקיים מציינים ערכי חציון. הקו המקווקו מייצג את הסף לתגובות חיוביות (10 יחידות יוצרות נקודה, SFU). תגובות סלולריות במבחנה בחולים ללא ועם CMV IgG הושוו על ידי בדיקת Mann-Witney. לוח (C) מסכם את המתאם בין תגובות הומורליות (IgG) ותגובות סלולריות (ELISpot) ספציפיות ל-CMV (הבדיקה המדויקת של פישר). איור 1. התפלגות תגובות ELISpot ספציפיות ל-CMV ב-63 חולים הממתינים להשתלת כליה. הקבוצה כללה 24 עם שלילי (עיגולים ירוקים) ו-39 עם CMV IgG חיובי (עיגולים כחולים). לוח (A) מציג תגובות ELISpot עם גירוי עם CMV אנטיגן מוקדם מיידי 1 (IE-1) ולוח (B) עם גירוי עם CMV phosphoprotein 65 (pp65). קווים אופקיים מציינים ערכי חציון. הקו המקווקו מייצג את הסף לתגובות חיוביות (10 יחידות יוצרות נקודה, SFU). תגובות סלולריות במבחנה בחולים ללא ועם CMV IgG הושוו על ידי בדיקת Mann-Witney. לוח (C) מסכם את המתאם בין תגובות הומורליות (IgG) ותגובות סלולריות (ELISpot) ספציפיות ל-CMV (הבדיקה המדויקת של פישר).

טבלה 2. משתנים שותפים פוטנציאליים של תגובות ELISpot ספציפיות ל-CMV בכל החולים הממתינים להשתלת כליה (n=63).

Table 2. Potential covariates of CMV-specific ELISpot responses in all patients awaiting kidney transplantation (n = 63).

יתרה מכך, ניתוח מתאם ספירמן של תגובות כלפי שני חלבוני ה-CMV IE-1 ו-pp65 בחולים סרו-חיוביים של CMV הראה, כצפוי, מתאם חיובי (r=0.41, p=0.009 ) (איור 2). 13 מתוך 39 חולים עם CMV IgG חיובי (33%) הראו תגובות ELISpot שליליות לשני האנטיגנים של CMV. 18 חולים הגיבו רק ל-CMV pp65 אך לא ל-IE-1 ושמונה הגיבו לשני האנטיגנים.


Figure 2. Spearman correlation analysis of T cell immunity toward CMV IE-1 and pp65 in CMV IgG positive patients awaiting kidney transplantation (n = 39). The dotted lines represent the cutoff for positive responses (10 spot-forming units, SFU) for each of the CMV antigens. Quadrant statistics are shown in the upper left panel and results of the Spearman correlation analysis are in the lower left panel.


איור 2. ניתוח מתאם ספירמן של חסינות תאי T כלפי CMV IE-1 ו-pp65 בחולים חיוביים ל-CMV IgG הממתינים להשתלת כליה (n=39). הקווים המקווקוים מייצגים את נקודת החיתוך לתגובות חיוביות (10 יחידות יוצרות נקודה, SFU) עבור כל אחד מאנטיגנים של CMV. נתונים סטטיסטיים ברביע מוצגים בחלונית השמאלית העליונה והתוצאות של ניתוח המתאם של Spearman נמצאות בחלונית השמאלית התחתונה.

יחד, רק ל-67% מהחולים עם סרוסטטוס CMV חיובי היו בעלי חסינות ניתנת לזיהוי של תאי T, כלומר, רק ל-26 מתוך 39 חולים עם CMV IgG חיובי היו גם תגובות חיוביות ל-T-Track® CMV. לכל החולים הללו הייתה תגובה חיובית ל-CMV pp65 ולשמונה הייתה תגובה חיובית ל-IE-1 ו-pp65. הניתוח החד-משתני של משתנים פוטנציאליים ב-63 חולים הממתינים להשתלת כליה הצביע על כך שלאף אחד מהם לא הייתה השפעה משמעותית על תגובות ELISpot הספציפיות ל-CMV, למעט CMV IgG. ניתוח המתאם של Spearman לא הראה מתאם עם הגיל (IE-1: r {{10}}.02, p=0.9; pp65: r {{15 }}.16, עמ'=0.2). בנוסף, חילקנו את העוקבה לפרטים צעירים ומבוגרים יותר, מחולקים לפי הגיל החציוני (54 שנים), והשוו את שניהם לפי מבחן מאן-וויטני (איור 3א). למרות שתגובות תאי T ספציפיות ל-CMV נטו להיות גבוהות יותר בחולים מבוגרים, ההבדל נעלם ממשמעות סטטיסטית (IE-1: p=0.15; pp65: p=0.30). בחולים צעירים לעומת מבוגרים יותר, ראינו תגובות חציוניות של 0 לעומת 0 SFU כלפי IE-1 ו-1 לעומת 3 SFU לכיוון pp65. הערכים הממוצעים המתאימים היו 1.9 לעומת 35.9 ו-55.9 לעומת 105.4 SFU. בדיקת Mann-Witney לא הראתה גם השפעה משמעותית של CMV IgM, מין, ונוכחות או היעדר דיאליזה, השתלת כליה קודמת או טיפול מדכא חיסון (טבלה 2). לבסוף, מבחן Kruskal-Walis הצביע על כך שלגורם לאי ספיקת כליות או למספר ההשתלות הקודמות אין השפעה משמעותית.

Figure 3. Distribution of CMV-specific ELISpot responses in 63 patients awaiting kidney transplantation, divided either by age (A), presence or absence of dialysis (B), immunosuppression (C) or peritoneal dialysis vs. hemodialysis (D). Horizontal lines indicate median values. The dotted line represents the cutoff for positive responses (10 spot forming units, SFU). Cellular in vitro responses toward CMV immediate early antigen 1 (IE-1), CMV phosphoprotein 65 (pp65) and the positive control phytohemagglutinin (PHA) were compared by Mann–Whitney test. PD, peritoneal dialysis; HD, hemodialysis.

איור 3. התפלגות תגובות ELISpot הספציפיות ל-CMV ב-63 חולים הממתינים להשתלת כליה, מחולקים לפי גיל (A), נוכחות או היעדר דיאליזה (B), דיכוי חיסוני (C) או דיאליזה פריטונאלית לעומת המודיאליזה (D). קווים אופקיים מציינים ערכי חציון. הקו המקווקו מייצג את הסף לתגובות חיוביות (10 יחידות יוצרות נקודה, SFU). תגובות חוץ גופיות ל-CMV מיידי מוקדם אנטיגן 1 (IE-1), CMV phosphoprotein 65 (pp65) והביקורת החיובית phytohemagglutinin (PHA) הושוו על ידי מבחן Mann-Whitney. PD, דיאליזה פריטונאלית; HD, המודיאליזה.


Figure 3. Cont.

איור 3. המשך.

ההשפעה של דיאליזה וטיפול מדכא חיסון על תגובות ספציפיות ל-CMV-pp65 חמקה ממשמעות סטטיסטית (p=0.1 ו-p=0.2, בהתאמה) (איור 3B,C). בעוד שתגובות ספציפיות ל-CMV-pp65 בחולים עם דיאליזה ודיכוי חיסוני היו גבוהות יותר, ראינו את ההיפך עבור הבקרה החיובית עם PHA. הבדל זה עבור בקרת PHA היה משמעותי בחולים עם דיכוי חיסוני לעומת ללא דיכוי חיסוני (p=0.01). יתר על כן, התגובות החציוניות ל-CMV pp65 נטו להיות נמוכות יותר ב-19 חולים עם דיאליזה פריטונאלית מאשר ב-31 חולי המודיאליזה (3 לעומת 17 SFU, איור 3D). נתונים מפורטים על 12 החולים שקיבלו טיפול מדכא חיסוני מוצגים בטבלה 3. שני חולים שקיבלו דלדול תאי T עם גלובולין אנטי-תימוציטים לפני יותר מחמש שנים, שניהם הראו תגובות ניתנות לזיהוי של תאי T ל-CMV pp65. יתרה מכך, תגובות ספציפיות ל-CMV pp65-נצפו בכל החולים עם השתלת כבד קודמת (n=2) ועם 2-3 השתלות כליה קודמות (n=3).

טבלה 3. מאפיינים של שנים עשר חולים הממתינים להשתלת כליה שקיבלו טיפול מדכא חיסון

Table 3. Characteristics of twelve patients awaiting kidney transplantation who received immunosuppressive therapy

ביצענו גם אנליזה רב-משתנית, שכללה CMV IgG, גיל, דיאליזה וטיפול מדכא חיסון. מצאנו תוצאות משמעותיות עבור המשתנים הבאים: IE{{0}} ELISpot: CMV IgG (p=0.01); pp65 ELISpot: CMV IgG (p < 0.0001), גיל (p < 0.0001) וטיפול מדכא חיסון (p=0.048). כשלב הבא, ניתחנו בנפרד את תת-הקבוצה של 39 חולים עם CMV IgG חיובי (טבלה 4). בדומה לקבוצה הכוללת, תגובות ELISpot הספציפיות ל-CMV היו חזקות יותר בחולים עם דיאליזה ועם טיפול מדכא חיסון (איור 4). SFU הספציפי ל-CMV pp65 היו גבוהים פי 29.3- בחולים עם לעומת ללא דיאליזה (חציון של 44 לעומת 1.5) ופי 5.6- גבוה יותר בחולים עם טיפול מדכא חיסוני לעומת ללא טיפול חיסוני (חציון של 157 לעומת 28), בהתאמה. עם זאת, גם ממצא זה לא היה משמעותי. שוב, בקרות PHA הראו את ההיפך מתרבויות מגרות CMV pp65, תגובה מופחתת בחולים עם דיאליזה או דיכוי חיסוני.


Figure 4. Distribution of CMV-specific ELISpot responses in 39 CMV IgG positive patients awaiting kidney transplantation, divided either by presence or absence of dialysis (A) or immunosuppression (B). Horizontal lines indicate median values. The dotted line represents the cutoff for positive responses (10 spot forming units, SFU). Cellular in vitro responses toward CMV immediate early antigen 1 (IE-1), CMV phosphoprotein 65 (pp65) and the positive control phytohemagglutinin (PHA) were compared by Mann–Whitney test.

איור 4. התפלגות תגובות ELISpot הספציפיות ל-CMV ב-39 חולים חיוביים ל-CMV IgG הממתינים להשתלת כליה, מחולקים לפי נוכחות או היעדר דיאליזה (A) או דיכוי חיסוני (B). קווים אופקיים מציינים ערכי חציון. הקו המקווקו מייצג את הסף לתגובות חיוביות (10 יחידות יוצרות נקודה, SFU). תגובות חוץ גופיות ל-CMV מיידי מוקדם אנטיגן 1 (IE-1), CMV phosphoprotein 65 (pp65) והביקורת החיובית phytohemagglutinin (PHA) הושוו על ידי מבחן Mann-Whitney.

טבלה 4. משתנים שותפים פוטנציאליים של תגובות ELISpot ספציפיות ל-CMV בחולים חיוביים ל-CMV IgG הממתינים להשתלת כליה (n=39).

Table 4. Potential covariates of CMV-specific ELISpot responses in CMV IgG positive patients awaiting kidney transplantation (n = 39).


4. דיון

במחקר זה, בדקנו 63 חולים עם מחלת כליות כרונית עבור המתאם שלהם בין חסינות הומורלית ותאית ל-CMV. ראינו שניתן לחלק את קבוצת החולים עם CMV IgG seropositivity לשליש ללא חסינות תאית ניתנת לזיהוי ושני שליש עם חסינות תאית. תגובות סלולריות לחלבוני CMV pp65 היו נפוצות במידה ניכרת מאשר תגובות ל-CMV IE-1, אשר ניתן היה לזהות ב-26 ושמונה מתוך 39 חולים סרו-חיוביים של CMV IgG, בהתאמה. בחולים עם סרו-חיוביות של CMV IgG אך עם תגובות תאי T בלתי ניתנות לזיהוי, טיפול מונע אנטי-ויראלי לאחר השתלת כליה עשוי להיות אופציה טיפולית מתאימה. כדי להעריך טוב יותר את עוצמת התגובות של ELISpot בקבוצה הנוכחית, השווינו אותה עם התוצאות של מושתלי כליה וכבד מהמרכז שלנו, שהנתונים שלהם פורסמו חלקית [10,26]. שני המחקרים הקודמים כללו מושתלים בסיכון בינוני (תורם (D)-/מקבל (R)+, D+/R+) ומושתלים בסיכון גבוה (D+/R-). חוזק התגובות של ELISpot כלפי T-Track® CMV במושתלי כליה ובכבד היה דומה לנתונים הנוכחיים. אצל מושתלי כליה, זוהו תגובות ספציפיות ל-CMV IE-1 חציוניות של 1.5 SFU לכל 200,000 לימפוציטים ותגובות ספציפיות ל-CMV pp65 של 40.5 SFU לכל 200,000 לימפוציטים (n { {27}}) [10]. אצל מושתלי כבד, מצאנו תגובות ספציפיות ל-CMV IE-1 חציוניות של 4 SFU לכל 200,000 לימפוציטים ותגובות ספציפיות ל-CMV pp65 חציוניות של 41 SFU לכל 200,000 לימפוציטים (n { {37}}) [26]. כאשר מנרמלים את הנתונים הנוכחיים שלנו על PBMC ללימפוציטים ומחילים מקדם המרה של 1.29 כפי שחושב מנתונים גולמיים של המחקר המאוחר יותר של Gliga et al. [26], התגובות עדיין היו ברמה דומה (נתונים מומרים של המחקר הנוכחי: CMV IE-1 ו-pp65: 3 ו-55 SFU לכל 200,000 לימפוציטים, בהתאמה). בהשוואה למחקר קודם על חולי המודיאליזה [25], שיעור התגובות החיוביות ל-ELISpot בחולים סרו-חיוביים של CMV היה נמוך יותר במחקר הנוכחי. המחקר של Banas et al. תוצאות חיוביות של T-Track® CMV נצפו ב-90% (60/67) מחולי ההמודיאליזה CMV-seropositive. יתרה מכך, הם זיהו תאים תגובתיים של IE-1- בדגימות דם של חולים עם סרולוגיה שלילית של CMV. מחקר קודם זה צפה בתגובות ספציפיות ל-CMV IE-1 של 9.7 SFU לכל 200,000 לימפוציטים ותגובות ספציפיות ל-CMV pp65 של 165 SFU לכל 200,000 לימפוציטים, בהתאמה. ייתכן שהבדלים תלויי מעבדה, למשל, ב-ELISA המשמש לקטגוריות חולים או בהגדרת הכתמים, עשויים להיות סיבה לתוצאות השונות. המחקר הקודם השתמש בקורא ELISpot אחר משלנו, אשר ידוע כבעל השפעה רבה על מספרי הספוט.

Desert ginseng—Improve immunity (21)

יתרונות cistanche לגברים מחזקים את המערכת החיסונית

לחץ כאן לצפייה במוצרי Cistanche Enhance Immunity

【בקש עוד】 דוא"ל:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

יתר על כן, במחקר רב מרכזי על 96 מושתלי כליה בסיכון בינוני (D-/R+, D+/R+) שנבדקו גם על ידי T-Track® CMV [11], תגובות ELISpot הספציפיות ל-CMV היו גבוהות יותר. במחקר של Banas וחב', חציון תגובות ספציפיות ל-CMV IE-1 של 9-25 SFU לכל 200,000 לימפוציטים ותגובות ספציפיות ל-CMV pp65 חציוניות של 114-206 לכל 200,{{17} } לימפוציטים זוהו, בהתאם לנקודת הזמן. לפיכך, מספרי ספוט שנמדדו על ידי הקבוצה של Banas et al. נראה שהם בדרך כלל גבוהים יותר, בין אם בחולי המודיאליזה או במושתלי כליה. הבדל זה מבהיר שערכי חיתוך חייבים תמיד להיות מאומתים על ידי המעבדה המתאימה. יש להניח שהגדרנו רק את החולים עם תגובות חזקות של תאי T כחיוביות, שסביר יותר שהם מוגנים מפני הפעלה מחדש של CMV. בנוסף, ניתוח משתני משנה הראה ש-CMV IgG נמצא בקורלציה מובהקת עם תגובות ELISpot הספציפיות ל-CMV. יתר על כן, דיאליזה וטיפול מדכא חיסון עשויים להשפיע על חסינות ספציפית ל-CMV התאית. למטופלים בעלי סרו-חיובי CMV שקיבלו דיאליזה או טיפול מדכא חיסוני היו תגובות גבוהות פי 29.3- או פי 5.6- כלפי CMV pp65 מאשר לאלו ללא דיאליזה (כלומר, חולים ברשימת ההמתנה לפני השתלת כליה חיה) או ללא טיפול מדכא חיסון. לעומת זאת, תגובות PHA פחתו בחולים עם דיאליזה או דיכוי חיסוני. ממצא זה על חסינות CMV הוא בלתי צפוי ממבט ראשון שכן גם דיאליזה וגם דיכוי חיסוני אמורים להוביל לפגיעה בתפקוד תאי T. עם זאת, דיכוי חיסוני נמצא, כצפוי, לאחר גירוי עם המיטוגן PHA. נתונים אלה עולים בקנה אחד עם מחקר קודם של הקבוצה שלנו, שהראה שלמטופלים עם מיאלומה נפוצה היו תגובות לקויות של תאי T למגוון רחב של מיטוגנים ומזכירים אנטיגנים אך לא ל-CMV [27]. בפירוט, תגובות של תאי T כלפי ארבעת המיטוגנים PHA, concanavalin A, pokeweed mitogen ואנטי-CD3 ושבעת האנטיגנים מזכירים טוברקולין, טטנוס טוקסואיד, קנדידה אלביקנס, וירוס הרפס סימפלקס סוג 1, וירוס אבעבועות רוח ונגיף שפעת A ו-B היו נמוכים משמעותית בחולים עם מיאלומה נפוצה (n=169) מאשר בבקרות בריאות תואמות (n=100). עם זאת, התגובות של תאי T ל-CMV לא היו שונות באופן משמעותי, ואחוז התגובות החיוביות הספציפיות ל-CMV בחולים היה גבוה משמעותית מאשר בביקורת.

Desert ginseng—Improve immunity (9)

יתרונות cistanche לגברים מחזקים את המערכת החיסונית

ביחד, הנתונים הנוכחיים מצביעים על כך שחסינות תאית ספציפית ל-CMV עשויה להישמר או להגביר למרות דיכוי כללי של חסינות תאי T (תגובת PHA). יתרה מזאת, המחקר שלנו בקבוצה מדוכאת חיסונית אחרת (חולים עם מיאלומה נפוצה) [27] מצביע על כך שדיכוי חיסוני אינו משפיע על כל התגובות החיסוניות האנטי-מיקרוביאליות באופן שווה. מחקרים קודמים מצביעים על כך שהגיל משפיע באופן משמעותי על התגובה החיסונית של אדם ל-CMV [26,28,29]. המחקר הנוכחי יכול לאשר את הממצאים הללו בעת ביצוע ניתוח רב-משתני. בנוסף לגיל, דיאליזה (במיוחד המודיאליזה) השפיעה על חסינות CMV התאית. מחקר קודם הראה שהמודיאליזה מובילה לדלקת בולטת יותר בהשוואה לדיאליזה פריטונאלית, שעלולה לגרום להזדקנות מוקדמת של מערכת החיסון [30]. יתרה מכך, זיהום CMV ממלא תפקיד מרכזי בהזדקנות אימונולוגית של חולים עם מחלת כליות סופנית [31]. לסיכום, בחולים עם מחלת כליות כרונית עם CMV-seropositive, ELISpot ספציפי ל-CMV pp65 עשוי לקבוע את הרגישות להפעלה מחדש של CMV. בשליש מהחולים הללו, יש להניח סיכון מוגבר עקב היעדר תגובות ספציפיות של תאי T. מספרי כתמים ספציפיים ל-CMV עלו בחולים שקיבלו דיאליזה וטיפול מדכא חיסון, אשר עשוי להיות מתאם עם (תת-קלינית) CMV-DNAemia ו"בוסטר" של תאי T ספציפיים ל-CMV. עם זאת, יש לאשש השערה זו במחקרים גדולים יותר ועצמאיים.

הפניות

1. Azevedo, LS; פיירוטי, LC; עבדאלה, ע.; קוסטה, SF; סטרבלי, TM; Campos, SV; ראמוס, JF; לטיף, AZ; ליטבינוב, נ.; מאלוף, ניו זילנד; et al. זיהום Cytomegalovirus אצל מושתלים. מרפאות 2015, 70, 515–523. [CrossRef]

2. מרטין-גנדול, סי; מולר, ניו ג'רזי; פסקואל, מ.; Manuel, O. השפעת הזיהום על תפקוד כרוני של שתל שתל ועל הישרדות אלולוג לאחר השתלת איברים מוצקים. אמ. J. השתלה. 2015, 15, 3024–3040. [CrossRef]

3. מרסלין, JR; קורה, ע.; Razonable, RR Cytomegalovirus זיהום אצל מושתלי כבד: עדכונים על ניהול קליני. World J. Gastroenterol. 2014, 20, 10658–10667. [CrossRef] [PubMed]

4. גודאר, ב.; גזאן, א.; גיי, א.; בפטיסט, מ.; וינסנט, ב.; פגז-פיורנט, ב.; סטרומפף, ל. פרידמן, WH; גלוץ, ד.; Tartour, E. אופטימיזציה של בדיקת elispot לאיתור לימפוציטים מסוג CD8+ T ספציפיים לציטומגלווירוס. זִמזוּם. אימונול. 2004, 65, 1307–1318. [CrossRef] 5. Korcakova, L. Cytomegalovirus antibodies: סקירת תוצאות של בדיקות חוזרות ב-208 חולים שעברו המודיאליזה. הֶבֶל. לק. 1995, 41, 454–457.

6. Litjens, NHR; הואנג, ל.; Dedeoglu, B.; Meijers, RWJ; Kwekkeboom, J.; Betjes, MGH Protective Cytomegalovirus (CMV) - חסינות ספציפית של תאי T שכיחה בחולי השתלות כליה ללא נוגדנים אנטי-CMV בסרום. חֲזִית. אימונול. 2017, 8, 1137. [CrossRef]

7. ססטר, מ.; Leboeuf, C.; שמידט, ט.; Hirsch, HH "ABC" של חסינות תאי T ספציפית לווירוס בהשתלת איברים מוצקים. אמ. J. השתלה. 2016, 16, 1697–1706. [CrossRef]

8. לינדמן, מ.; ויצקה, או.; Lütkes, P.; פידלר, מ.; קרויצפלדר, ע.; פיליפ, ט.; רוגנדורף, מ.; בדיקת Grosse-Wilde, H. ELISpot ככלי רגיש לזיהוי חסינות תאית בעקבות חיסון נגד שפעת אצל מושתלי כליה. קלינ. אימונול. 2006, 120, 342–348. [CrossRef]

9. צ'רקינסקי, סי; אנדרסון, ג'; Ekre, HP; נילסון, לוס אנג'לס; Klareskog, L.; Ouchterlony, O. בדיקת ELISPOT הפוכה לניתוח משובטים של ייצור ציטוקינים. I. ספירת תאים מפרישי גמא-אינטרפרון. J. Immunol. שיטות 1988, 110, 29–36. [CrossRef]

10. גליגה, ש.; קורת', ג'; קראבצ'יק, א.; ווילד, ב.; הורן, הרשות הפלסטינית; ויצקה, או.; לינדמן, מ.; מבחני CMV של Fiedler, M. T-Track-CMV ו-QuantiFERON לניבוי הגנה מפני הפעלה מחדש של CMV אצל מושתלי כליה. ג'יי קלין. וירול. 2018, 105, 91–96. [CrossRef]

11. בנאס, ב.; שטובל, ד.; רנדרס, ל.; צ'יטקה, ד'; בנאס, MC; ווקרל, ט.; קוך, מ.; ויצקה, או.; מוהלפלד, א.; זומרר, סי; et al. אימות קליני של מבחן נקודתי חיסוני מקושר אנזים חדש המבוסס על בדיקת אבחון חוץ גופית לניטור חסינות מתווכת תאים ספציפיים לציטומגלווירוס אצל מושתלי כליה: מחקר רב-מרכזי, אורכי, פרוספקטיבי, תצפיתי. Transpl. Int. 2018, 31, 436–450. [CrossRef]

12. ווקר, ש.; פאזו, סי; קרואו, ת.; הולדסוורת, ר.; קיילי, פ.; וייל, מ.; בל, ש; גיילברייט, א.; מקניל, ק.; ג'ונס, ש.; et al. ניטור Ex vivo של תגובות CD8+ ספציפיות לציטומגלווירוס אנושי של תאי T באמצעות QuantiFERON-CMV. Transpl. לְהַדבִּיק. Dis. 2007, 9, 165–170. [CrossRef]

13. רואן, י.; גואו, ו.; ליאנג, ס.; שו, ז; Niu, T. ביצועים אבחונים של ניטור חיסוני של ציטומגלווירוס (CMV) עם בדיקת ELISPOT ו-QuantiFERON-CMV בהשתלת כליה: מאמר תואם PRISMA. רפואה 2019, 98, e15228. [CrossRef] [PubMed]

14. ססטר, יו.; גרטנר, BC; וילקנס, ה.; שוואאב, ב.; ווסנר, ר.; קינדרמן, I.; Girndt, M.; מאיירהנס, א.; מולר-לנצש, נ.; Schafers, HJ; et al. הבדלים ברמות תאי T ספציפיות ל-CMV וברגישות ארוכת טווח לזיהום ב-CMV לאחר השתלת כליה, לב וריאה. אמ. J. השתלה. 2005, 5, 1483–1489. [CrossRef] [PubMed]

15. חנוזס, ד.; קטן, א; לווה, ר.; Ball, S. Assessment of the T-SPOT.CMV assay release interferon-gamma in מושתלי כליה: מחקר עוקבה מרכזי יחיד. PLoS ONE 2018, 13, e0193968. [CrossRef] [PubMed]

16. ברבאס, ש.; שפינדלר, ט.; קינר, ר.; טונר, סי; לוגנר, ט.; בצילה, י. בנדפלדט, ח.; רסקל, א.; אסבך, ב.; וגנר, ר.; et al. בדיקת IFN-gamma ELISpot אופטימלית לניטור רגיש וסטנדרטי של תאי אפקטור תגובתיים לחלבון CMV של חסינות מתווכת תאים. BMC Immunol. 2017, 18, 14. [CrossRef] [PubMed]

17. שין, ח; לי, HJ; צ'אנג, CL; קים, EJ; לים, ש; לי, SJ; Ryu, JH; יאנג, ק.; צ'וי, ב"ה; לי, TB; et al. חסינות לתאי T ספציפיים ל-CMV מנבאת וירמיה מוקדמת לאחר השתלת כבד. Transpl. אימונול. 2018, 51, 62–65. [CrossRef]

18. רוג'רס, ר.; סהרה, ק.; צ'נדורקר, א'; וייס, ZF; ויירה, ק.; קו, ש.; Farmakiotis, D. ניסיון קליני בניסוי חדשני המודד חסינות של תאי T4+ ו-CD8+ ספציפיים לציטומגלווירוס (CMV) על ידי ציטומטריית זרימה וצביעת ציטוקינים תוך-תאיים כדי לחזות אירועי CMV משמעותיים מבחינה קלינית. BMC Infect. Dis. 2020, 20, 58.

19. תומפסון, ג'; בואן, פ.; Baumwol, J.; צ'אקרה, א.; MacQuillan, G.; Swaminathan, S.; לבנדר, מ.; פלקסמן, ג'; ג'יימס, I.; John, M. ניתוח של בדיקת QuantiFERON-CMV, CMV viremia וטיפול אנטי-ויראלי בעקבות השתלת איברים מוצקים במערב אוסטרליה. פתולוגיה 2018, 50, 554–561. [CrossRef]

20. קומאר, ד.; מיאן, מ.; זינגר, ל. Humar, A. מחקר התערבותי המשתמש בחסינות מתווכת תאים להתאמה אישית של טיפול בזיהום ציטומגלווירוס לאחר השתלה. אמ. J. השתלה. 2017, 17, 2468–2473. [CrossRef]

21. מנואל, או.; חוסיין, ש.; קומאר, ד.; זייאס, ג; מהורטר, ש.; לוי, אני; קלפו, י. ליסבוא, ל.; אלי, ל.; קאול, ד"ר; et al. הערכה של חסינות מתווכת תאים ספציפית לציטומגלווירוס לחיזוי מחלת ציטומגלווירוס אצל מושתלי איברים מוצקים בסיכון גבוה: מחקר עוקבה רב-מרכזי. קלינ. לְהַדבִּיק. Dis. 2013, 56, 817–824. [CrossRef] [PubMed]

22. קומאר, ד.; צ'ין-הונג, פ.; קיילר, ל.; וויצ'ובסקי, ד.; Limaye, AP; אוסמה גאבר, א.; בול, ש.; מהטה, AK; קופר, מ.; בלנשרד, ט.; et al. מחקר תצפיתי רב-מרכזי פרוספקטיבי של חסינות מתווכת תאים כמנבא לזיהום ציטומגלווירוס אצל מושתלי כליה. אמ. J. השתלה. 2019, 19, 2505–2516. [CrossRef]

23. Lisboa, LF; קומאר, ד.; וילסון, LE; Humar, A. תועלת קלינית של חסינות בתיווך תאי ציטומגלווירוס אצל מושתלים עם וירמיה של ציטומגלווירוס. השתלה 2012, 93, 195–200. [CrossRef]

24. Chiereghin, A.; פוטנה, ל.; בורחז', ל.; ג'יברטוני, ד'; סקווארזוני, ד.; Turello, G.; פטריסלי, ע.; Piccirilli, G.; גבריאלי, ל. גריגיוני, פ.; et al. ניטור של חסינות מתווכת תאים ספציפית של ציטומגלווירוס (CMV) אצל מושתלי לב: שימוש קליני של מבחן QuantiFERON-CMV לניהול זיהום ב-CMV לאחר ההשתלה. ג'יי קלין. מיקרוביול. 2018, 56, ה01040-17. [CrossRef]

25. בנאס, ב.; שטובל, ד.; רנדרס, ל.; ווקרל, ט.; קוך, מ.; ויצקה, או.; מוהלפלד, א.; זומרר, סי; הביכט, א.; הוגו, סי; et al. אימות קליני של T-Track (R) Cmv כדי להעריך את הפונקציונליות של חסינות מתווכת תאים ספציפיים Cmv אצל מושתלי כליה. לְהַשְׁתִיל. Int. 2016, 29, 20.

26. גליגה, ש.; פידלר, מ.; דורנידן, ט.; אחטרפלד, א. פול, א.; הורן, הרשות הפלסטינית; הרצר, ק.; Lindemann, M. השוואת שלוש מבחני תאים לניבוי מהלך זיהום ב-CMV אצל מקבלי השתלות כבד. Vaccines 2021, 9, 88. [CrossRef]

27. לינדמן, מ.; שואט, פ.; מוריץ, ט.; אוטינגר, HD; אופלקה, ב.; סיבר, ש.; Nowrousian, MR; Grosse-Wilde, H. תפקוד חיסוני חוץ-גופני של תאים בחולי מיאלומה נפוצה לאחר כימותרפיה במינון גבוה והשתלת תאי גזע היקפיים אוטולוגיים. לוקמיה 2005, 19, 490-492. [CrossRef] [PubMed]

28. יאן, ז; Maecker, HT; ברודין, פ.; Nygaard, UC; Lyu, SC; דייויס, מ"מ; Nadeau, KC; Andorf, S. Aging ו-CMV סתירה קשורה לגיוון חיסוני מוגבר בין תאומים מונוזיגוטים. חיסון. מזדקנות 2021, 18, 5. [CrossRef]

29. ז'ילינסקי, מ.; טרסביץ, א.; ז'ילינסקה, ח.; ינקובסקה, מ.; מושקובסקה, ג.; דבסקה-סליזין, א. רוטקובסקי, ב.; Trzonkowski, P. CD28 חיובי, לימפוציטים T ציטוטוקסיים ספציפיים לציטומגלווירוס כסמן ביולוגי חדש הקשור לווירמיה של ציטומגלווירוס ב-allorecipients. ג'יי קלין. וירול. 2016, 83, 17–25. [CrossRef]

30. Ducloux, D.; Legendre, M.; במוליד, י. רביבו, JM; סאס, פ.; Courivaud, C.; Crepin, T. פנוטיפ חיסוני הקשור ל-ESRD תלוי בשיטת הדיאליזה ובמצב הברזל: השלכות קליניות. חיסון. הזדקנות 2018, 15, 16. [CrossRef] 31. Betjes, MG; הויזמן, מ.; ויימאר, ו.; Litjens, NH הרחבה של תאי CD4+CD28- ציטוליטיים במחלת כליות סופנית. כליות אינט. 2008,74, 760–767. [CrossRef] [PubMed]

אולי גם תרצה