תמצית Codonopsis Pilosula מגינה על מלנוציטים מפני H2O2-לחץ חמצוני המושר על ידי הפעלת אוטופגיה

אנא צור קשרoscar.xiao@wecistanche.comלמידע נוסף

תַקצִיר:לאחרונה, כאשר זוהה תפקיד האנטי-אייג'ינג של המלנין בעור ועיכוב ייצור המלנין, מושך תשומת לב פיתוח חומרים המסוגלים לשמור על הומאוסטזיס של העור. במחקר זה, חקרנו עוד יותר את ההשפעה האנטי-מלנוגנית של תמצית Codonopsis pilosula (CPE) ותחת לחץ חמצוני, את ההשפעה הציטו-פרוטקטיבית במלנוציטים של Melan-a שנחשפו ל-H2O2. ראשית, טיפול ב-CPE הפחית באופן משמעותי את ייצור המלנין על ידי עיכוב חלבונים הקשורים למלנוגנזה, כולל גורם שעתוק הקשור למיקרופתלמיה (MITF), טירוזינאז וחלבון הקשור לטירוסינאז 2 (TRP 2), כתוצאה מהזרחון של MAPK/JNK במלאן. -תאים. לאחר מכן, כדי לחקור את ההשפעות המגנות של ה-CPE על פגיעה בעור הנגרמת על ידי מתח חמצוני והמנגנון המולקולרי שלו, קבענו את ההשפעה של CPE לאחר גרימת מתח חמצוני על ידי חשיפת מלנוציטים ל-H2O2. תאים מוגנים על ידי CPE מפני H2O2-גרמו ציטוטוקסיות על ידי הפחתת הביטוי של הגן המקודד לחלבון הפרו-אפופטוטי Bax, בעוד שהוא גרם לגנים המקודדים למשפחת הלימפומה של תאי B (Bcl2) ו-MITF, שהוא מווסת שעתוק. שמעודד התמיינות מלנוציטים. יתרה מכך, התוצאות שלנו מראות ש-CPE שיפר את הייצור של חלבונים הקשורים לאוטופגיה כגון Beclin-1 ושרשרת קלה 3 (LC3)Ⅱ; זה התהפך באופן מהותי על ידי טיפול מקדים של 3-מתיל אדנין (MA, מעכב אוטופגיה). ביחד, הממצאים שלנו מראים שטיפול ב-CPE מציג לא רק אפקט אנטי-מלנוגני במלנוציטים נורמליים, אלא גם אפקט ציטו-פרוטקטיבי במלנוציטים הנתונים ללחץ חמצוני על ידי גרימת אוטופגיה וביטוי MITF.גודל הפין cistanche,לכן, אנו מאמינים ש-CPE הוא מועמד חזק לתחזוקת תאים במלנוציטים.

מילות מפתח:Codonopsis pilosula; תאי מלאן-a; מלנוגנזה; אוטופגיה; מתח חמצוני

אנא לחץ כאן כדי לדעת יותר

1. הקדמה

העור האנושי הוא האיבר הגדול ביותר בגוף האדם ומגן על הגוף מפני רעלים סביבתיים, אלרגנים ולחץ חמצוני. המלנין, המיוצר בעיקר על ידי מלנוציטים, ידוע כממלא תפקיד חשוב במניעת מחלות עור והוא קיים ברקמות שונות בגוף האדם [1,2]. עם זאת, ייצור והצטברות יתר של מיני חמצן תגובתיים (ROS) עקב מתח, קרינה אולטרה סגולה (UV) והזדקנות גורמות להפרעות עור רבות, כגון היפרפיגמנטציה, מלזמה, ובסופו של דבר הפירוק של מלנוציטים. מספר מחקרים על טיפול במלנוגנזה התמקדו בוויסות הביטוי של גורם שעתוק הקשור למיקרופתלמיה (MITF) ופעילות טירוזינאז [3-5]. בנוסף, מחקרים עדכניים הראו שמלנוגנזה בעור מתווכת באמצעות מספר מסלולי איתות מלנוגניים, כולל איתות חלבון קינאז (MAPK), חלבון קינאז A(PKA) ומסלול מתווך אדנוזין מונופוספט (cAMP) [6].

Cistanche יכול אנטי אייג'ינג

מערכת האוטופגיה התאית ידועה כתהליך עיכול עצמי תאי שמפרק חלבונים פגומים או מבודד אברונים לא מתפקדים בתא ואז מפרק אותם בליזוזומים כדי לשמור על הומאוסטזיס של התא [7,8]. מחקרים אחרונים זיהו אוטופגיה כמעורבת בתפקוד התקין של המלנוציטים ובוויסות הביטוי של גורם השעתוק היוצר מלנין MITF. לכן, לגורמים מעוררי אוטופגיה יש פוטנציאל להגביל את הנזק הנגרם על ידי קרני UV וחמצון שומנים ולשמור על הומאוסטזיס במלנוציטים וקרטינוציטים [9-11].אבקת cistanche,עם זאת, יש מעט מידע על היישום של תכשירים טבעיים לגרימת אוטופגיה המגינים על המלנוציטים מפני עקה חמצונית.

Codonopsis pilosula הוא השורש של Codonopsis pilosula (Fr.) Nanny., השייך למשפחת Campanula. הוא גדל או מעובד בהרי גאנגוון-דו, קוריאה, והוא מופץ גם באזורים הצפוניים והמערביים של סין, כגון אזורי גואנשי ושאנקי [12]. ברפואה העממית הוא משמש כתחליף לג'ינסנג כבר מאות שנים, שכן יש לו את אותן פעילויות תרופתיות, כמו חידוש אנרגיה לחיזוק מערכת החיסון, הורדת מחלות מערכת העיכול וויסות לחץ הדם, אך במחיר נמוך יותר. מחקר פיטוכימי מראה כי C. pilosula מכיל כמויות גדולות של סוכרוז, פוליסכרידים, טריטרפנים, ספונינים, פיטוסטרולים, גליקוזידים פנוליים, אלקלואידים ופוליאצטילנים [13]. ביניהם, לובטיולין, האצטילן העיקרי של C. pilosula, ידוע כמפעיל NF-kB ובעל השפעה מגרה חיסונית [14] בנוסף, על פי מחקרים עדכניים על השפעת תמצית C. pilosula, תמצית אתנול של C. pilosula מעכב באופן משמעותי תגובות אלרגיות הנגרמות על ידי אולבומין, בעוד שתמצית מים מפחיתה את רמת הגלוקוז בפלזמה, ותמצית בוטנול מראה פעילות שומרת רדיקלים חופשיים והשפעה מעכבת על חמצון שומנים בהומוגנית מוח של חולדה[15-17] .

בעבר, נמצא כי הפעילות נוגדת החמצון של C.pildsula משתנה עקב הבדלים בתכולת הפוליפנולים בהתאם לממס המיצוי בו נעשה שימוש [18]. לפיכך, חקרנו את ההשפעה המעכבת המלנוגנית של תמצית C. pilosula (CPE) בתנאים רגילים באמצעות מסלולי איתות מכניסטיים, כמו גם את ההשפעה הציטו-פרוטקטיבית נגד מתח חמצוני המושרה על ידי H2O2- במלנוציטים של Melan-a.

2. חומרים ושיטות

2.1. ריאגנטים

RPMI 1640 וסרום בקר עוברי (FBS) נרכשו מ-Welgene (Daegu, קוריאה).תמצית סלסה cistancheפניצילין-סטרפטומיצין נרכש מ-GibcoBRL (Eggenstein, גרמניה). Phorbol 12-myristat 13-אצטט (TPA) נרכש מ-TOCRIS (בריסטול, בריטניה). מי חמצן (HaO2),3-(4,5-dimethylthiazol{{7} }yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)ו-3-MA נרכשו מ-Sigma -Aldrich (סנט לואיס, MO, ארה"ב). כל שאר הכימיקלים והריאגנטים היו בדרגה אנליטית.

2.2.הכנת תמצית Codonopsis Pilosula

שורש C.pilosula (CP) פשוט קצוץ, ו-100 גרם של CP הוטבלו ב-1 Lof 50 אחוז אתנול (w/v); לאחר מכן, הוא חולץ שלוש פעמים באמצעות גלים קוליים ב-30 מעלות. לאחר שכל תמצית עברה צנטריפוגה לאיסוף הסופרנטנט, הסופרנטנט רוכז ויובש בהקפאה להכנת תמצית C.pilosula (CPE).

2.3. תרבות תאים והכנת מלאי של CPE

תאי המלנוציט Melan-a גדלו ונשמרו ב-RPMI 1640 בתוספת של 10 אחוז FBS, פניצילין (100 U/mL), סטרפטומיצין (100 U/mL) ו-200 nM phorbol 12-myristate 13- אצטט (TPA) ונשמר ב-37 מעלות בחממה של 5 אחוז CO2. לאחר גידול של 3×105 תאים לכל באר בצלחת שש בארות, תאי Melan-a הוכנסו לחממה למשך 48 שעות עד שצבע המדיום השתנה לשחור. תמיסות המניות (100 מ"ג/מ"ל) של CPE הומסו במים סטריליים ואוחסנו ב--20 מעלות.

2.4. מדידת כדאיות התא

כדאיות התא של CPE בתאי Melan-a נקבעה באמצעות בדיקה קולורימטרית MT וציטומטריית זרימה. התאים נשמרו עד שהגיעו ל-80 אחוזי מפגש ב96-צלחות באר ולאחר מכן טופלו ב-CPE ו/או 0.5 mMH2O2 למשך 24 שעות. הוסף מדיום תא עם 10 μL של תמיסת MTT (5 מ"ג/מ"ל), והתאים הודגרו למשך 4 שעות נוספות. לאחר הדגירה של התאים, גבישי הפורמזן הבלתי מסיסים הומסו ב-100 ul של דימתיל סולפוקסיד. הספיגה ב-540 ננומטר נמדדה באמצעות ספקטרופוטומטריה באמצעות קורא מיקרו-לוחים. תאים מתים נקבעו עם ערכת זיהוי מוות תאי PI/Annexin V (EMD Millipore Corporation, Billerica, MA, ארה"ב) על פי פרוטוקול היצרן. בקצרה, התאים נשטפו והודגרו במשך 15 דקות ב-RT בחושך המכילים FITC-Annexin V ו-PI. לאחר מכן, תאים מתים נותחו על ידי מנתח התאים MuselM.

2.5. אומדן מלנין במבחנה

כ-2×105 תאים/באר גודלו בצלחת של שש בארים. לאחר טיפול ב-CPE ו/או 0.5 mM H-Op כפי שתואר קודם [19], תאים שנשטפו ב-PBS נקצרו, הוסרו ב-1× PBS המכיל 1 אחוז Triton X-100, ועברו צנטריפוגה ב-4 מעלות ב-13, 000 סל"ד למשך 15 דקות. תכולת המלנין התאית הוסבה באמצעות 1 N NaOH. קורא לוחות ELISA שימש כדי לכמת את המלנין על ידי מדידת הספיגה ב-405 ננומטר. נתונים התקבלו משלושה ניסויים, ותכולת המלנין חושבה וסומנה כשינוי הקפל בהשוואה לתאי הבקרה. 2.6.בידוד חלבונים ובדיקת כתם מערבי

דגימות חלבון חולצו כפי שהוסבר בעבודה הקודמת שלנו [20]. לאחר מכן, ריכוז החלבון של lysate התא נמדד באמצעות ערכת בדיקת חלבון BCA (Thermo Scientific, Waltham, MA, ארה"ב). כמויות מקבילות של lysate תאים מפונפנת (30 ugs של lysate תאים לכל דגימה) הופרדו על ידי 10 אחוז נתרן דודציל סולפט-polyacrylamide אלקטרופורזה ג'ל (SDS-PAGE) והועברו לממברנה ניטרוצלולוזה. הממברנה הודגרה עם הנוגדן הראשוני מדולל ב-5% אבקת חלב רזה ב-PBS המכילה 0.05% Tween 20(PBST) למשך הלילה ב-4 מעלות.

לאחר דגירת נוגדנים ראשונית, הממברנות נשטפו והודגרו בנוגדן המשני המצומד ב-HRP מדולל בחלב רזה של 5% ב-PBST למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. ביטוי חלבון נותח באמצעות מערכת זיהוי כימילומינסנציה מוגברת (ECL) (AI680, GE Healthcare, Uppsala, שוודיה).

2.7. אומדן ROS תוך תאי על ידי צביעת DCFH-DA

רמות ה-ROS התאיות בתאי Melan-a שטופלו בהו נאמדו בשיטת DCFH-DA מיקרוסקופ פלואורסצנטי [21]. רמות הקרינה התוך תאית DCF פרופורציונלית ל-ROS התוך תאי שנוצר. ראשית, 2 × 105 תאים/באר טופלו בריכוזים בודדים של CPE ו/או H-O2 במשך 24 שעות, לאחר מכן נוספו DCFH2-DA 2 שעות לפני סיום התגובה. נתונים נאספו משלושה ניסויים עצמאיים או יותר. 2.8.עיבוד סטטיסטי

כל תוצאות הניסוי מוצגות כאמצעי ± סטיות תקן (SDs) של שלושה שכפולים ביולוגיים.גזע cistancheהמובהקות הסטטיסטית בין הערכים הממוצעים המרובים הוערכה על ידי ניתוח שונות של שונות (ANOVA), ולאחר מכן מבחן ההשוואה המרובה של דאנקן, באמצעות SPSS 18.0(SPSS Inc., Chicago, IL, USA), כפי שמצוין באגדות. ערך p<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

3. תוצאות

3.1. ויסות מטה של ​​מלנוגנזה במלנוציטים על ידי CPE

מלנוציטים מסנתזים מלנין בתגובה לגירויים חיצוניים, כגון קרינת UV. גורמים עיקריים כגון הורמון מגרה א-מלנוציטים (-MSH), גורם תאי גזע (SCF) ואנדותלין-1(ET-1) מופרשים ממלנוציטים ומגבירים את הביטוי של MITF ובכך מעודדים מלנוגנזה [22,23]. ראשית, בדקנו האם טיפול ב-CPE מעכב ייצור מלנין וחלבונים הקשורים למלנוגנזה.

טיפול CPE ב-100,200 ו-300 ug/mL הפחית באופן משמעותי את ייצור המלנין בהשוואה לביקורת השלילית. בפרט, טיפול ב-300 ug/mL של CPE הביא להפחתה דומה לזו המושרה על ידי טיפול בארבוטין (איור 1A, B). בנוסף, חקרנו את חלבוני המלנוגנזה טירוזינאז, TRP-1, TRP{{6 }}, ו-MITF על ידי Western blotting.יתרונות ותופעות לוואי של cistanche tubulosaטיפול ב-CPE בריכוזים של 300 ug/mL הוריד משמעותית את רמות החלבונים MITF, TRP-2 ו-tyrosinase (איור 1C). מאחר שאושר כי CPE מעכב את הביטוי של חלבונים הקשורים ל-MITF, מעכב יצירת מלנין, בדקנו עוד האם CPE משפיע על מסלול האיתות MAPK. CPE הגביר זרחון MAPK באופן תלוי מינון, תוך גרימת זרחון של JNK (איור 1D). תוצאות אלו מצביעות על כך שעיכוב המלנוגנזה על ידי CPE נובע מירידה בוויסות MITF וביטוי טירוזינאז על ידי אינדוקציה של זרחון JNK/MAPK.

3.2. השפעת CPE על H2O2-מוות תאים המושרה במלנוציטים

תאי עור, כגון קרטינוציטים ומלנוציטים, מגיבים ברגישות ל-ROS, כגון מי חמצן (HzOz) ואניון סופראוקסיד, כדי לשמור על מצב תקין. עם זאת, חוסר איזון במצב החמצון-נוגד חמצון עקב ROS תאי מוגזם יכול להוביל להצטברות של חלבונים או אברונים פגומים, בסופו של דבר להוביל למוות תאים אפופטוטי [24,25]. לאחרונה, דווח כי מלנין מקדם הזדקנות העור על ידי גירוי היווצרות מלנין בהתאם לסביבה החיצונית של העור, כמו גם בריאות העור נשמרת על ידי שמירה על תכולת המלנין התוך תאית [26]. לפיכך, חקרנו את ההשפעה של תמצית CPE על תאים נתונים ללחץ חמצוני באמצעות טיפול H2O2. התאים שטופלו ב-HzO2- הראו ירידה בכדאיות התא של 32.8 אחוז בהשוואה לתאים הלא מטופלים. עם זאת, טיפול ב-CPE הפחית את העיכוב של כדאיות התא באופן תלוי ריכוז בטיפול H-O2. בפרט, CPE ב-300 ug/mL החזיר את כדאיות התא ל-91.9 אחוזים (איור 2A). בנוסף, המוות האפופטוטי של התאים שטופלו ב-CPE ו/או H2O2- זוהה על ידי צביעה כפולה עם Annexin V- FITC/PI, ואחריו ניתוח ציטומטרי זרימה. לאחר טיפול ב-H2O2, אחוז התאים האפופטוטיים עלה ל-34.5 אחוזים, בהשוואה ל-14.8 אחוזים בתאים הלא מטופלים. עם זאת, טיפול ב-CPE עיכב במידה ניכרת מוות אפופטוטי המושרה על ידי H2O2-, כאשר אחוז התאים הצבועים ב-Annexin V היה 22.2 אחוזים (איור 2B). מכיוון שזה מראה את אותו דפוס כמו תוכן ה-ROS, תוצאות אלו מראות ש-CPE שומר על כדאיות התא על ידי עיכוב מוות של תאים באמצעות הגנה מפני H2O2--ROS המושרה (איור 2C).

3.3. השפעת CPE על HzO2-מוות תאים המושרה במלנוציטים

כפי שאושר בעבר, CPE שומר על כדאיות התא על ידי עיכוב העלייה באפופטוזיס בעקבות טיפול ב-HzO2. לפיכך, לאחר מכן חקרנו את ההשפעה של CPE על הביטוי של החלבונים המעורבים במוות תאי ושל חלבון MITF, המווסת את ייצור המלנין בנוכחות H2O2. כפי שמוצג באיור 3, בתאים שטופלו ב-H2O2, ביטוי MITF היה מופחת מעט, לעומת זאת, בתאים שטופלו ב-CPE, וביטוי MITF היה כמעט זהה לתאים הלא מטופלים. בנוסף, H2O2 הגביר את הביטוי של חלבון Bax מעורר אפופטוזיס [27,28] אך הפחית את ביטוי Bax באופן תלוי ריכוז בתאים שטופלו ב-CPE. לעומת זאת, H202 הפחית את הביטוי של חלבון Bcl2, המקדם את הישרדות התא [28,29], אך הביטוי של Bel2 הוגבר על ידי טיפול ב-CPE באופן תלוי ריכוז. כאשר חישבנו את הביטוי של שני החלבונים הללו כדי לקבוע את יחס Bax/Bcl2, נצפתה אותה נטייה. לכן, תחת לחץ חמצוני המושרה על ידי H2O2-, הביטוי של MITF הופחת על ידי השראת מוות תאי, בעוד ש-CPE הפגין אפקט הגנה חזק, מונע מוות תאי המושרה על ידי H2Oz ושמירה על הביטוי של MITF.

3.4. השפעת CPE על הפעלת אוטופגיה במלנוציטים המושרים על ידי חמצון

מחקרים אחרונים גילו כי אוטופגיה והרגולטור שלה ממלאים תפקיד מכריע בתגובה נוגדת החמצון כנגד מתח חמצוני המושרה על ידי ROS בתאים אנושיים [26,30]. פנג וחב' [31] הראה שתמצית עלי Apocymum venetum מגינה על נוירונים פצועים מפני אפופטוזיס הנגרמת על ידי H2O2- על ידי הפחתת ההפעלה הנגרמת על ידי ROS של אוטופגיה. מאז שהתבסס הקשר בין אפנון אוטופגיה לאנטי-מלנוגנזה, תפקידה של אוטופגיה בהשפעה המגנה של CPE נגד מתח חמצוני המושרה על ידי H-Oz נחקר בתאי מלאן-א. רמות LC3, חלבון אוטופאגוזום, שימשו כאינדיקטור לאוטופגיה. נתוני ה-Western blot הצביעו על כך ש-CPE הגביר באופן משמעותי את הביטוי של חלבוני LC3-Ⅱ הפרו-אוטופגיים ו-Beclin, שהביטוי שלהם ירד על ידי טיפול ב-H2O2. זה מצביע על כך של-CPE יש אפקט cytoprotective דרך הפעלת אוטופאגיה ללחץ חמצוני תוך תאי (איור 4A). לאחר מכן, הקשר התוך בין ההשפעה הציטו-פרוטקטיבית והאוטופגיה של CPE בתאי Melan-a שטופלו ב-HzOz נותח עוד יותר באמצעות מעכב אוטופגי חזק, 3-MA. בהשוואה לנתונים קודמים, תאים שטופלו מראש ב-3-MA ו-CPE ועוררו ב-H2O2 הראו ירידה ברמות ביטוי LC3-II (איור 4B). בסך הכל, נתונים אלה מרמזים שעיכוב אוטופגיה משפיע לרעה על היעילות הציטו-פרוטקטיבית של CPE בתאים שטופלו ב-HzO2-, מה שמצביע על כך שאוטופגיה חיונית להשפעות הציטו-פרוטקטיביות של CPE.

4. דיון

קבענו בעבר את שיטת המיצוי האופטימלית שהביאה לפעילות נוגדת החמצון הגבוהה ביותר וכן לתכולת פוליפנולים [18]. במחקר זה, יישמנו את שיטת המיצוי האולטרא-סוני בעלת תפוקה גבוהה ומצאנו שהתמצית מציגה אפקט ציטו-פרוטקטיבי על ידי הפעלת אוטופגיה בתנאי עקה חמצונית, כמו גם על ידי עיכוב מלנוגנזה בתאי מלאן-א.

ראשית, חקרנו עוד את ההשפעה האנטי-מלנוגנית של CPE.CPE מווסתת מלנוגנזה על ידי הפחתת הביטוי של גנים הקשורים למלנוגנזה, כגון MITF, טירוזינאז ו-TRP-2. מספר מחקרים הוכיחו כי המנגנונים הביוסינתטיים של מלנוגנזה הקשורים לביטוי אנזים מתווכים על ידי מסלולי איתות שונים, כולל חלבון קינאז המופעל על ידי מיטוגן (MAPK), חלבון קינאז A (PKA) ו-PI3K/Akt [32]. ביניהם, הפעלת מסלול האיתות MAPK דיכאה MITF ברמת יציבות החלבון, כמו גם ברמת התעתיק, במלנוציטים ראשוניים אנושיים [33,34]. הזרחון של MAPK ומפלי האיתות של הקינאז המגיב החוץ-תאי (ERK), c-Jun N-terminal kinase (JNK) ו-p38 גם מסדירים את ייצור המלנין. ביניהם, המפעיל JNK מדכא מלנוגנזה באמצעות עיכוב פוספו של ביטוי MITF תלוי ב-CREB מווסתת שעתוק 3(CRTC3). התוצאות שלנו מראות שהזרחון של MAPK, במיוחד JNK, עולה ביעילות בעקבות טיפול ב-CPE בהשוואה לתאי ביקורת. ממצאים אלו מצביעים על כך שדפיגמנטציה המושרה על ידי CPE במלנוציטים של Melan-a עשויה להתרחש על ידי מסלולי איתות מווסתים MITF/JNK.

מלנוציטים מייצרים את פיגמנט המלנין ומעבירים אותו לקרטינוציטים, שם הפיגמנטים עוזרים להגן על העור מפני גורמי לחץ סביבתיים חמצוניים כגון מזהמי אוויר, מוצרים כימיים ונזקי UV [37-39]. MITF הוא אחד המווסתים התעתיקים העיקריים האחראים לגנים מרכזיים המקדמים התפתחות והתמיינות מלנוציטים, כמו גם מווסתים את המלנוגנזה. יתרה מכך, MITF מווסת את הביטוי של גנים מסוימים השומרים על הומאוסטזיס של התא, כולל אלו המקודדים לחלבונים המעורבים בשגשוג (למשל, CDK2) ואפופטוזיס (למשל, Bcl2)[40-42]. Stein-Grimson et al.[43]זיהו עכברים מוטנטיים MITF כמושפעים מאובדן שמיעה והפרעות פיגמנטריות כתוצאה מאובדן מלנוציטים, כמו גם אוסטאוקלסטים ותאי פיטום פגומים. זה מצביע על כך ש-MITF ממלא תפקיד חשוב בפיתוח של סוגי תאים אלה.

CPE היא נגזרת של תרופות צמחיות המשמשות לטיפול במחלות מערכת העיכול ואלרגיות בשל ההשפעות האנטי-אייג'ינג והאנטי אלרגיות שלה[15,44]. עם זאת, האם CPE יכול להגן על מלנוציטים מלחץ חמצוני עדיין לא ידוע. כדי להעריך את ההשפעה של CPE על הישרדות המלנוציטים בתגובה ללחץ חמצוני, צפינו לראשונה במוות של תאים במלנוציטים שנחשפו ל-H-O2. לאחר טיפול ב-0.5 mM H-O2 למשך 24 שעות, כדאיות התא ירדה בהשוואה לזו של התאים הלא מטופלים. עם זאת, הכדאיות של התאים שטופלו ב-CPE שוחזרה על ידי הפחתת תכולת ה-ROS; אז יחס Bax/Bcl2 וביטוי MITF הוגדלו, בניגוד לתאים שטופלו ב-H2O2-.

אוטופגיה היא מערכת הפירוק התוך-תאית העיקרית שבאמצעותה הנזק של הליזוזומים מביא לפירוק שלהם. מיזושימה וחב'. [45] הוכיח כי בתנאים של רעב, דלקת או עקה חמצונית, התהליך האוטופגי יכול לווסת את הפירוק של חלבונים ואברונים פגומים בתאים, כך שניתן להשיג חידוש תאי והומיאוסטזיס. חלבון 1 שרשרת קלה 3 (LC3) ו-Beclin-1 הקשורים למיקרו-צינוריות ממלאים תפקידים מרכזיים באוטופגיה של יונקים. LC3 קיים בשתי צורות, כלומר, צורה ציטוסולית (LC3 I) וצורה מצומדת של פוספטידיל-אתנולמין (LC3 III) המוכנסת הן לממברנה הפנימית והן החיצונית של האוטופאגוזום הגדל[46,47]Zhang et al.[ 48] השתמש בהמרה של LC3Ito LC3II כסמן ביוכימי כדי לנתח את מצב האוטופגיה במלנוציטים. מחקר נוסף הצביע על כך ש-LC3 הוא סמן להיווצרות אוטופאגוזום סופית, ואילו Beclin-l מעורב בשלב הראשוני של יצירת אוטופגוזום, מפעיל אוטופאגיה [49]. הפעילות האוטופאגית המכוננת ממלאת תפקיד מפתח במניעת נזק חמצוני במלנוציטים, אך היו מעט מחקרים על המנגנונים המולקולריים המווסתים אוטופגיה במלנוציטים תחת עקה חמצונית.

כתוצאה מכך, חקרנו את ההשלכה של אוטופגיה בתיווך CPE על הישרדות תאים במלנוציטים הנתונים ללחץ חמצוני. התוצאות שלנו מראות שלאחר טיפול ב-CPE, אוטופגיה הופעלה באמצעות הביטוי המוגבר של Beclin-1 וגרם להמרה של LC3Ito LC3 II. זה מצביע על כך ש-CPE מפעיל אפקט cytoprotective באמצעות הפעלת אוטופגיה במלנוציטים הנתונים ללחץ חמצוני.

לסיכום, המחקר הנוכחי הוכיח שלטיפול ב-CPE יש לא רק השפעה אנטי-מלנוגנית דרך מסלול MITF/JNK במלנוציטים נורמליים אלא גם, תחת לחץ חמצוני המושרה על ידי HzOg, שמר על הישרדות תאים והפעיל ציטו-הגנה באמצעות MITF, וכתוצאה מכך הפעלה מתמשכת. של אוטופגיה בתאי מלאן-a.

מאמר זה מופק מ-Cosmetics 2021, 8, 67. https://doi.org/10.3390/cosmetics8030067 https://www.mdpi.com/journal/cosmetics