Cistanche Tubulosa מגן על נוירונים דופמינרגיים באמצעות ויסות של אפופטוזיס וגורם נוירוטרופי שמקורו בתאי גליה: in Vivo ו-in Vitro-Ⅱ

מבחני התנהגות

מבחן שחייה (Zhu et al., 2014)

תיאום תנועת הגוף בעכברים נמדד בבדיקת שחייה. העכברים הונחו בנפרד במיכל מים (25 ס"מ גובה ו-10 ס"מ קוטר) המכיל 10 ס"מ מים ונבדקו בסביבה שקטה כדי לתעד את משך הנייח שלהם במשך 5 דקות.

מבחן שדה פתוח (Kawai et al., 1998)

פעילות תנועתית נמדדה באמצעות מבחן השדה הפתוח. העכברים נבדקו בסביבה שקטה ומוארת עמומה והונחו בנפרד במיכל אקרילי שקוף בגודל 30 ס"מ × 30 ס"מ × 15 ס"מ עם רשת הפרדה בגודל 6 ס"מ × 6 ס"מ בתחתיתו. לעכברים ניתנו 10 דקות להסתגל לסביבה ולאחר מכן נמדדו האמבולציה של מספר הרשת ותדירות הגידול של עכברים בודדים חמש פעמים רצופות כדי לקבל ערכים ממוצעים.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA לשיפור התפקוד המיני PHGS75% ECH 30% ACT 12%

דגימת רקמות מוח

לפני דגימת רקמות, העכברים הוזנו באופן חופשי עם גישה חופשית למים וקיבלו התערבות תרופתית במשך 14 ימים רצופים. ארבעה עכברים בכל קבוצה נבחרו ונערפו במהירות. ה-SN (Bregma: -2.75 מ"מ -2.92 מ"מ) מכל חיה בודד והונח על קרח. רקמות המוח נשטפו עם 0.9% תמיסת נתרן כלורי קרה כקרח כדי להסיר כל דם וייבשו על נייר סינון לפני אחסנה ב-80◦C. ארבעה עכברים מכל קבוצה הורדמו תוך צפק והחזה שלהם נפתח. לאחר מכן הוחדרה מחט עירוי לחדר השמאלי של כל חיה. כדי להסיר דם במערכת הדם, נחתך תוספת הפרוזדור הימני ולבעל החיים הוזלף מי מלח נורמלי 4◦C עד שהכבד החוויר כדי להבטיח זלוף עוקב. לאחר שהקולחים של הפרוזדור הימני התבררו, כל חיה סופחה עם 4% מקבע פרפורמלדהיד. לאחר הזילוף, רקמת המוח של כל חיה נותחה בזהירות וקיבועה לאחר מכן ב-4% פרפורמלדהיד למשך 24 שעות. רקמות מוח קבועות נשטפו לאחר מכן תחת מים זורמים, התייבשו בסדרה מדורגת של תמיסות אתנול, ופונו בתמיסת קסילן. לאחר מכן טבילה פרפין והטבעה.

שינויים בכמות DA נמדדת על ידי HPLC

ה-SN באבקת ננו מכל קבוצה הוכנס לאמבט קרח המכילה 0.9% תמיסת נתרן כלורי (יחס 1:9). רקמת המוח הומוגגה באמצעות משבש תאים אולטראסוני וצנטריפוגה ב-1200 סל"ד למשך 20 דקות ב-4 מעלות צלזיוס כדי להשיג את הסופרנטנט. עבור HPLC, נעשה שימוש בעמודת Hypersil AA-ODS (2.1 מ"מ × 200 מ"מ, 5 מיקרומטר) בטמפרטורת עמודה של 30◦C. זיהוי הקרינה בוצע ב-280 ננומטר λex ו-340 ננומטר λem. נפח ההזרקה היה 10 μL.

ביטוי של TH, GDNF, GFR 1 ו-Ret מזוהה על ידי אימונוהיסטוכימיה

חלקי פרפין (עובי 5 מיקרומטר) של רקמת מוח בודדת בודדו מכל חיה והונחו באמבט מים חמים של 40◦C לצורך רידוד והדבקה לשקופיות זכוכית. כל שקופיות הרקמה הודגרו בתנור של 60 מעלות צלזיוס למשך 3-6 שעות, ולאחר מכן הסרת שעווה בקסילן, התייבשות שיפועית של אתנול והחזרת אנטיגן על ידי דגירה במאגר חומצת לימון וחימום במיקרוגל למשך 20 דקות. שקופיות הרקמה הודגרו בתמיסת 3% H2O2 בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. לאחר שטיפה שלוש פעמים ב-PBS, שקופיות הרקמה הודגרו בסרום רגיל בתא סגור בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות. צביעה אימונוהיסטוכימית בוצעה על פי הוראות היצרן. מנתח תמונה של Motic Med 6.0 שימש כדי לחשב את הערך של צפיפות אופטית משולבת בתאים הצבועים באופן חיובי.

ניתוח כתם מערבי ברקמות מוח של עכברים

מחקר זה העריך את ביטוי החלבון של טירוזין הידרוקסילאז (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 ו-Bax. הליסט המוח מכל קבוצה עבר הומוגגן למשך 3{{10}} דקות על קרח, ולאחר מכן צנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה, 20,000 סל"ד, ב-4 ◦C עבור 5 דקות לאיסוף הסופרנטנט. דגימות החלבון הופרדו בלחץ קבוע באמצעות ג'ל 10% SDS-PAGE כמתואר לעיל. ריכוז הנוגדנים העיקרי: TH 0.15 מ"ג/מ"ל, GDNF 0.5 מ"ג/מ"ל, GFR 1 0.8 מ"ג/מ"ל, Ret 0.63 מ"ג/מ"ל, Bcl-2 0.34 מ"ג/מ"ל, ובאקס 0.11 מ"ג/מ"ל. ההליך היה זהה לעיל.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA עבור אנטי אייג'ינג ANTI-ALZHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

ניתוח סטטיסטי

מחקר זה השתמש בתוכנה סטטיסטית SPSS 20.0 לעיבוד וניתוח נתונים. ערכי הפרמטרים הובאו כממוצע ± סטיית תקן (¯ x ± S). ANOVA שימש לניתוח נתונים חד-גורם. נעשה שימוש ב-LSD או במבחן Games-Howell כדי להשוות בין הקבוצות. פ< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

תוצאות

הרכיבים הפעילים של C. tubulosa Nanopowder

בטווח של 200-400 ננומטר סריקה, ל-ECH ב-C. tubulosa ו-VER ב-330 ננומטר היה שיא הספיגה המקסימלי, שהופיע תוך 20 דקות. ל-ICA היו שיאי ספיגה מקסימליים ב-270 ננומטר והופיעו לאחר 20 דקות (איור 1A). התוצאות הראו שהדגימות השליליות לא הפריעו לגילוי (איור 1B). לדגימות ולביקורת היו אותם שיאים כרומטוגרפיים ולדגימה השלילית לא היו כאלה. זה הראה ששאר המרכיבים בדגימה לא הפריעו לרכיב הנמדד. יתרה מכך, שלושת המרכיבים והפסגות הסמוכות יכולים להגיע לקו הבסיס של ההפרדה ודרגת ההפרדה הייתה גדולה מ-1.5.

C. tubulosa Nanopowder מופחת MPP+ -ציטוטוקסיות המושרה בתאי MES23.5

הכדאיות של תאי MES23.5 הופחתה באופן משמעותי עם עלייה בריכוזים של MPP+. איור 2F מציג את הציטוטוקסיות המשמעותית של ריכוזים שונים של MPP+.

C. tubulosa nanopowder הפחיתה מ-MPP+-השראת ציטוטוקסיות והגבירה את הכדאיות של תאי MES23.5. איור 2G מראה שמינוני ננו-אבקת C. tubulosa של 10-250 מיקרוגרם/מ"ל הפעילו השפעות הגנה תלויות מינון על תאי MES23.5 שטופלו ב-MPP+-.

אפקט ציטומורפולוגי של C. tubulosa Nanopowder

לתאי MES23.5 רגילים הייתה היצמדות טובה לתאים והם היו בצורת ציר עם גבולות תאים ברורים וסינפסות. תאי MPP+-פגועים ב-MES23.5 הציגו הידבקות והתכווצות תאים גרועים, ורבים הושעו במדיה עם סינפסות מכווצות. תאים אלה היו מצטברים, מכווצים ועגולים עם ואקוולים בפנים, והגרעינים התפרקו או קרסו. C. tubulosa nanopowder במינונים שונים שיפרה את הציטומורפולוגיה של תאי MES23.5 בדרגות שונות על ידי שיפור היצמדות התא והפינוי הסינפטי של קבוצת הרכב. תאי MES23.5 בקבוצת הטיפול במינון גבוה של C. tubulosa הראו מורפולוגיה שהיתה דומה לקבוצת הביקורת הרגילה (איורים 2A-E).

ההשפעה של C. tubulosa Nanopowder על ביטוי TH ואפופטוזיס בתאים

איור 3 מציג הפחתה משמעותית בביטוי החלבון TH בקבוצת הרכב. ביטוי החלבון TH עלה באופן שונה בקבוצות שטופלו במינונים שונים של C. tubulosa. עם זאת, בדיקת ה-LSD הראתה שאין הבדל משמעותי בין שלוש הקבוצות שטופלו.

איור 4 מציג את תוצאות הערכת האפופטוזיס באמצעות ציטומטריית זרימה. שיעור האפופטוזיס בקבוצת הרכב היה גבוה משמעותית מאשר בקבוצות האחרות. תאים שטופלו במינונים שונים של C. tubulosa nanopowder הראו דרגות שונות של ירידה בשיעור האפופטוטי בהשוואה לקבוצת הרכב. לתאים בקבוצת הטיפול ב-C. tubulosa במינון בינוני ובמינון גבוה היה השיפור המשמעותי ביותר בשיעור האפופטוטיים בהשוואה לקבוצות הטיפול האחרות ב-C. tubulosa. בדיקת LSD הראתה שאין הבדל משמעותי בין שתי הקבוצות שטופלו, אלא הבדל משמעותי גם בין הקבוצה במינון נמוך.

ההשפעה של C. tubulosa Nanopowder על ביטוי חלבון Bcl2/Bax בתאים

איור 5 מראה שהביטוי של חלבון Bcl2 בתאים של קבוצת הרכב היה נמוך משמעותית בהשוואה לקבוצת הביקורת הרגילה. לעומת זאת, הביטוי של חלבון Bax בתאים של קבוצת הרכב היה גבוה משמעותית מאשר בקבוצת הביקורת הרגילה. קבוצות טיפול ב-C. tubulosa הראו ביטוי מוגבר של חלבון Bcl2 וירידה בביטוי חלבון Bax בתאי MES23.5 שטופלו ב-MPP+-. בין שלוש הקבוצות שטופלו, היו הבדלים משמעותיים בבדיקת ה-LSD. תופעות אלו היו תלויות מינון.

מבחני התנהגות

תוצאות בדיקת השחייה העלו כי לעכברים בקבוצת הרכב היו משכי זמן נייחים ארוכים יחסית, שגדלו עם הזמן. ביום 14, לעכברים בקבוצת הרכב היה משך נייח ארוך יותר באופן משמעותי מאשר לעכברים בקבוצת הביקורת הרגילה. משך הנייח של העכברים ב

המינון הנמוךC. tubulosaקבוצת הטיפול לא הייתה שונה משמעותית מזו של העכברים בקבוצת הרכב. עם זאת, משך הזמן הנייח של העכברים בקבוצת הטיפול במינון גבוה של C. tubulosa היה נמוך משמעותית מזה של העכברים בקבוצת הרכב.

תוצאות בדיקת השדה הפתוח מצביעות על כך שלאחר נזק שנגרם על ידי MPTP בעכברים, העכברים בקבוצת הרכב הפגינו ירידה משמעותית ביכולתם לפעילות ספונטנית כפי שמוצגת על ידי תדירות הגידול. לאחר 14-יום ניהול שלC. tubulosa nanopoder, לעכברים בקבוצות הטיפול במינון בינוני וגבוה היו תדירות גידול גבוהות משמעותית בהשוואה לעכברים בקבוצת הרכב (איורים 6A, B).

ההשפעה של C. tubulosa Nanopowder על תוכן DA בעכברים

שינויים בתכולת ה-DA של ה-SN נקבעו על ידי HPLC. נמצא שתכולת ה-DA במוח של קבוצת הרכב הצטמצמה משמעותית. תכולת ה-DA במוחם של עכברי PD בקבוצת הטיפול במינון נמוך של C. tubulosa לא הייתה שונה משמעותית מהעכברים בקבוצת הרכב. למרות זאת,טיפול C. tubulosaהעלה את רמות ה-DA במוחם של עכברי PD באופן תלוי מינון. המוח של עכברי PD שטופלו במינון גבוה של C. tubulosa היה בעל תכולת DA גבוה משמעותית ממוחם של עכברים בקבוצת הרכב (איור 6C).

ההשפעה של C. tubulosa Nanopowder על ביטוי TH בעכברים

מספר התאים החיוביים ל-TH ורמת הביטוי של חלבון TH ב-SN של עכברי PD המושרים על ידי MPTP היו נמוכים יותר בהשוואה לעכברים בקבוצת הביקורת. לאחר הטיפול ב-C. tubulosa, מספר התאים החיוביים ל-TH ורמת הביטוי של חלבון TH ב-SN של עכברי PD המושרים על ידי MPTP עלו, עם הבדל משמעותי בין קבוצת הטיפול במינון גבוה של C. tubulosa לבין קבוצת הרכב. על ידי בדיקת LSD; והיו הבדלים משמעותיים בין שלוש הקבוצות שטופלו (איור 7).

ההשפעה של C. tubulosa Nanopowder על ביטוי חלבון של GDNF והרצפטורים שלו, GFR 1 ו-Ret בעכברים

ביטוי החלבון של GDNF והקולטנים שלו, GFR 1 ו-Ret, בתאים הצבועים באופן חיובי, הוערך באמצעות אימונוהיסטוכימיה. נעשה שימוש בניתוח Western blot כדי להעריך את רמות ביטוי החלבון ב-SN של קבוצות העכברים השונות. הממצאים עבור הקבוצות השונות היו דומים בשתי שיטות הזיהוי. הביטוי של GDNF וחלבוני הקולטנים שלו, GFR 1 ו-Ret, בתאים צבועים חיוביים ב-SN של העכברים בקבוצת הרכב, היה נמוך משמעותית מאשר בעכברים בקבוצת הביקורת הרגילה. מינונים שונים של טיפול ב-C. tubulosa העלו את מספר התאים GDNF-, GFR 1- ו-Ret-positive (איורים 8A-S).

ביטוי החלבון של GDNF, GFR 1 ו-Ret ב-SN של העכברים בקבוצת הרכב היה נמוך משמעותית מאשר בעכברים בקבוצת הביקורת. הגדלת ריכוזי הטיפול שלC. tubulosa nanopowerשיפר משמעותית את הביטוי של חלבונים אלה. ביטוי החלבון של GDNF, GFR 1 ו-Ret ב-SN של העכברים בקבוצת הטיפול במינון גבוה של C. tubulosa היה גבוה משמעותית מאשר בעכברים בקבוצת הרכב (P< 0.01; Figures 8T, U). 

ההשפעה של C. tubulosa Nanopowder על ביטוי חלבון של Bcl2/Bax בעכברים

ביטוי חלבון Bcl2 הופחת משמעותית וביטוי חלבון Bax הוגבר משמעותית ב-SN של עכברים בקבוצת הרכב (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

דִיוּן

PD ואפופטוזיס

PD היא הפרעה נוירודגנרטיבית. לפי ג'אנג ואחרים. (2005), השכיחות היא 10.7% באוכלוסיה הסינית מעל גיל 55 ו-1.67% בגילאי 65. מספר החולים ב-PD גדל מדי שנה עם האצת ההזדקנות העולמית, מה שמטיל עומס כלכלי כבד על משפחות החולים והחברה בכלל. במוח, נוירונים דופמינרגיים מעורבים בעיקר בסינתזה ובהפרשה של DA. הם מופצים באופן נרחב במערכת העצבים המרכזית וממוקמים בעיקר ב-SN (80%). TH הוא האנזים המגביל את קצב המפתח לסינתזת DA. לפיכך, עיכוב פעילות ה-TH מפחית את סינתזת ה-DA (Huot and Parent, 2007). השינויים הפתולוגיים והביוכימיים העיקריים של PD הם אפופטוזיס של נוירונים דופמינרגיים ב-SN, הפחתה משמעותית של DA nigrostriatal, והיווצרות גופי Lewy בנוירונים דופמינרגיים (דקסטר וג'נר, 2013). האטיולוגיה של PD כוללת גורמים גנטיים קשורים, גורמים סביבתיים והזדקנות מערכת העצבים (Allam et al., 2005). הפתוגנזה של PD נותרה לא ברורה ברפואה המודרנית. מאז סוף שנות ה-60 נעשה שימוש מוצלח בטיפול תחליפי לבודופה לטיפול ב-PD והוכר כנקודת מפנה מרכזית בטיפול ב-PD. עם זאת, היישום לטווח ארוך של טיפול זה גורם לתופעות לוואי והטיפול אינו מטפל בגורמים הבסיסיים ל-PD (Del Sorbo and Albanese, 2008). לכן, מחקר פעיל עבור תרופות חדשות או שיטות טיפול המכוונות להגנה על נוירונים דופמינרגיים הוא חיוני לטיפול ב-PD.

במחקרים קודמים, היישום של תיוג dUTP nick end-תווך מתווכת דאוקסינוקלאוטידיל טרמינל הצביע על כך ש-0.6%-4.8% מהנוירונים הדופמינרגיים ב-SN של חולי PD הראו אפופטוזיס (Mochizuki et al., 1996). מיקרוסקופ אלקטרוני הראה מאפיינים אפופטוטיים, כולל עיבוי כרומטי וגופים אפופטוטיים בתאים דופמינרגיים (Anglade et al., 1997). Tompkins et al. (1997) ביצעו ניתוח אולטרה-סטרוקטורלי של נתיחות של רקמות מוח מחולים עם PD, AD ומחלת Lewy מפוזרת (DLBD). הם מצאו גופים אפופטוטיים בשכבה הצפופה של ה-SN בחולי PD ו-DLBD, מה שסיפק עדות חותכת לאפופטוזיס נוירוני ב-PD ומחלות קשורות. לכן, הפחתה או דיכוי של אפופטוזיס בנוירונים דופמינרגיים הם יסודיים לטיפול ב-PD.

מחקרים קודמים הראו ש-MPTP גרם לתסמינים דמויי PD. MPTP חוצה את מחסום הדם-מוח ועובר חילוף חומרים על ידי מונואמין אוקסידאזים מסוג B באסטרוציטים. לאחר מכן הוא מומר ל-MPP+ רעיל, המצטבר במיטוכונדריה של נוירונים דופמינרגיים דרך צריכת החלבון של הטרנספורטר DA. כך הוא יוצר עודף רדיקלים חופשיים של חמצן המעכבים את פעילות קומפלקס I של שרשרת הנשימה המיטוכונדריאלית וסינתזת ATP. אירועים אלה מעודדים עוד יותר היווצרות רדיקלים חופשיים ותגובות עקה חמצונית, ובסופו של דבר מובילים לניוון ומוות של נוירונים דופמינרגיים. לפיכך, מחקר זה השתמש ב-MPP+ כדי להקים כלי במבחנה בנוירונים דופמינרגיים MES23.5 ו-MPTP כדי לגרום לעכבר רכב לאימות הדדי. על פי התוצאות של בדיקת MTT, MPP+ הפחית משמעותית את הכדאיות של תאי MES23.5, דבר המצביע על כך ש-MPP+ היה ציטוטוקסי לנוירונים דופמינרגיים. התוצאות גם הוכיחו ש-C. tubulosa שיפרה ביעילות את הביטוי של חלבונים אנטי-אפופטוטיים ועיכבה את העלייה באפופטוזיס המושרה על ידי MPP+-.

PD ו-GDNF

GDNF הוא גורם נוירוטרופי, שבודד לראשונה על ידי Lin et al. (1993). לין וחב'. (1993) גם הראו של-GDNF היו השפעות תזונתיות ספציפיות על נוירונים דופמינרגיים במוח האמצעי של חולדות. GDNF, נורטורין (NTN), פרספין (PSP) וארטמין (ART) מהווים את משפחת ה-GDNF. הם חלבוני הפרשה דומים מבחינה מבנית וקשורים מבחינה תפקודית (Kotzbauer et al., 1996; Baloh et al., 1998; Milbrandt et al., 1998; Woodbury et al., 1998).

קולטן GDNF מורכב משני מרכיבים. הרכיב הראשון, GFR , מקובע לממברנה החיצונית של glycosylphosphatidylinositol (GPI) ומעוגן לפני השטח של connexin. המרכיב השני הוא חלבון Ret. מחקר הראה כי ישנם ארבעה סוגים שונים של GFR: GFR 1, GFR 2, GFR 3 ו-GFR 4. GFR 1 הוא קולטן בעל זיקה גבוהה של GDNF (Onochie et al., 2000; Chen et al., 2001; Lindahl et al., 2001). חלבון רט הוא קולטן פונקציונלי של GDNF. מולקולת ההומודימר של GDNF נקשרת ישירות ל-GFR 1 ליצירת קומפלקסים ומקיימת אינטראקציה עם Ret, וכתוצאה מכך לדימריזציה והפעלה של Ret. עקב הזרחון האוטומטי של Ret, Ret מפעיל מספר מסלולי איתות נפוצים של TH. בהיעדר חלבון Ret, GDNF גורם לזרחון חלבון של MAPK, PI-3 ו-PLC-, בנוסף לביטוי mRNA ופעילות תפקודית של C-fos דרך חלבון הקולטן שלו, GFR 1 (He et al., 2008).

מחקרים הוכיחו של-GDNF הייתה ההשפעה המגנה החזקה ביותר על נוירונים דופמינרגיים (Rangasamy et al., 2010; Campos et al., 2012). בכלי רכב המשתמשים ב-MPTP ו-6-הידרוקסידופמין (6-OHDA) כדי לגרום נזק בנוירונים דופמינרגיים, GDNF מגן על נוירונים דופמינרגיים על ידי הפחתת אפופטוזיס וקידום צמיחה אקסונלית כדי לגרום להתמיינות תאי גזע (Lucas et al., 2012; Littrell et al., 2013). לין וחב'. (1993) הראו ש-GDNF קידם באופן ספציפי את הכדאיות, הבידול והצמיחה האקסונלית של נוירונים דופמינרגיים כדי לקדם את קליטת DA בנוירונים. המחקר גם הראה ש-GDNF לא רק מנע רעילות חריפה אלא גם הקל על רעילות ארוכת טווח של MPP+ או 6-OHDA בנוירונים דופמינרגיים, בנוסף מונע מוות של תאים בתאים לחוצים או פגומים (Yu et al., 2010). בנוסף, GDNF קידמה שגשוג והתמיינות של תאי גזע עצביים לכיוון נוירונים דופמינרגיים במוח התיכון (Lindsay, 1995) כדי להציל נוירונים דופמינרגיים מניוון רטרוגרדי (Hong-Juan et al., 2011).

מחקרים הראו שביטוי GDNF ב-SN הופחת משמעותית בכלי רכב של בעלי חיים (Yang et al., 2010). זה מצביע על כך שזה עשוי להיות אחד המנגנונים של פתוגנזה בחולדות PD. הזרקת 5-15 מיקרוגרם ליום GDNF לחדר הצידי או הסטריאטום של חית רכב המושרה על ידי MPTP במשך שלושה חודשים רצופים קידמה תיקון ניגרוסטריאטלי של המערכת הדופמינרגית בחיית הרכב (Grondin et al., 2002). מחקרים על טיפול GDNF עבור PD בכלי חיים של בעלי חיים הראו כי הזרקה תוך מוחית של GDNF לאזורי מוח שונים, כגון SN, גרעין caudate והחדר הצדי, שיפרה הפרעות תנועה הקשורות למודלים של PD של בעלי חיים, כולל ירידה בפעילות מוטורית, קשיחות שרירים רעד (Grondin et al., 2002). עם זאת, GDNF לא יכול לעבור ישירות דרך מחסום הדם-מוח. לכן, הזרקה מוחית מקומית של GDNF כרוכה בסיכון משמעותי ובקשיים ביישום קליני. יישומים להחדרת GDNF אקסוגני באמצעות מיקרוספירות בשחרור מבוקר, כמוסות בשחרור מושהה וגנים ויראליים עדיין נחקרים (Liang et al., 2010; Yang et al., 2010; Qiao et al., 2012). בהתחשב במגבלות של טכניקות שונות להחדרת GDNF אקסוגני למוח, סוכנים נוירו-פרוטקטיביים המקדמים שחרור של GDNF אנדוגני חשובים ליישום קליני.

PD וC. tubulosaננו-אבקה

PD שכיח יותר במבוגרים בגיל העמידה ובקשישים. התיאוריה של TCM סבורה ש-PD ממוקמת בעיקר במוח והיא נובעת בעיקר ממחסור בכבד ובכליות, בנוסף לאנרגיה חיונית ואי ספיקת דם. לפי תיאוריה זו, הטיפול ב-PD צריך להתמקד בהעצמת הכליות ומח העצם.יאנג וחב'. (2010)השתמשו בניסויים קליניים אקראיים, כפול-סמיות ומבקרי פלצבו ומצאו שטיפול משולב באמצעות Madopar ומתכונים לחיזוק כליות מקל על הפרעות בתפקוד המוטורי של חולי PD. תוצאת הטיפול הייתה טובה יותר מטיפול בודד באמצעות Madopar. יעילות הטיפול של מונותרפיה מסוג TCM או מרשם תרכובות ב-PD אושרה במודלים של PD של בעלי חיים ויישומים קליניים. יישומי TCM לחיזוק הכליות וקידום זרימת הדם הפחיתו את מינון המונותרפיה ל-PD באמצעות Madopar. כמה מחקרים העלו ש-TCM שיפר את הסימפטומים של PD והגן על נוירונים דופמינרגיים, שאולי היו קשורים קשר הדוק לקידום ביטוי GDNF אנדוגני (Hong-Juan et al., 2011; Qiao et al., 2012).

התרכובת מחזקת הכליות המשמשת במחקר זה,C. tubulosaננו-אבקת, הכילCistanche, אפימדיום, וRhizoma polygonati. מחקר מודרני מצביע על כך שההרכב הכימי שלCistancheהוא ECH, המגן על נוירונים דופמינרגיים ב-SN בעכברי PD המושרה על ידי MPTP ומעכב את הפחתת ה-DA והטרנספורטר של ה-DA (Zhao et al., 2010). בנוסף, הוא מונע 6-הפחתה הנגרמת על ידי OHDA ב-DA ומגן על נוירונים דופמינרגיים סטריאטליים (חן וחב', 2007). אפימדיום מעכב את ההפעלה של קספאז-3 ומפעיל תפקידים נוירו-פרוקטיבים (Liu et al., 2011). פלבנואידים אפי-מדיום מקדמים ביעילות שגשוג והתמיינות של תאי גזע עצביים (Yao et al., 2010).

במחקר זה,C. tubulosaננו-אבקה התנגדו לעלייה ב-MPP+-מושרה אפופטוזיס באופן תלוי מינון. זה שיפר משמעותית את ביטוי ה-TH ב-בַּמַבחֵנָהרכב והיו לו השפעות אנטי-אפופטוטיות משמעותיות בנוירונים דופמינרגיים. עכברי הרכב המושרה על ידי MPTP הראו הפרעות התנהגותיות והפחיתו משמעותית את ביטוי ה-TH ברקמות המוח האמצעי ורמות DA, שהם מאפיינים פתולוגיים אופייניים של PD. מינונים שונים שלC. tubulosaננו-אבקה קיצרה את משך הזמן הנייח, הגבירה את הפעילות האוטונומית, שיפרה הפרעות התנהגותיות, העלתה את רמות ה-DA במוח והגדילה את ביטוי ה-TH בכלי רכב. תוצאות אלו הצביעו על כךC. tubulosaאבקת ננו הפעילה השפעות הגנה בנוירונים דופמינרגיים, ובכך שיפרה הפרעות התנהגותיות של כלי רכב. מינונים שונים שלC. tubulosaננופודר הגביר את הביטוי של חלבון GDNF וחלבוני הקולטנים שלו במוח של עכברי כלי רכב. מינון גבוהC. tubulosaהטיפול הגביר באופן משמעותי את ביטוי Bcl2 והפחית את ביטוי Bax, מה שהצביע על כךC. tubulosaננו-אבקהעשוי לקדם ביטוי והפרשת GDNF במוח העכבר הפגוע ב-MPTP. בנוסף, הוא עשוי להפעיל השפעות נוירוטרופיות בנוירונים דופמינרגיים ולמזער אפופטוזיס נוירוני באמצעות תפקידי התמיכה הנוירוטרופיים של GDNF.

מחקר זה הוכיח זאתC. tubulosaאבקת ננו הפעילה השפעות הגנה בנוירונים דופמינרגיים בשניהםבַּמַבחֵנָהוin vivoוהגדלת ביטוי TH לשיפור תוכן DA. זה גם שיפר הפרעות התנהגות בעכברי רכב המושרה על ידי MPTP, מווסת את ביטוי החלבון של GDNF וחלבוני הקולטנים שלו ב-SN, והיו לו השפעות אנטי-אפופטוטיות בעכברי PD. המנגנון העומד בבסיס ההשפעות הקליניות שלC. tubulosaאבקת ננו ב-PD עשויה להיות כרוכה בהגדלת התוכן של GDNF אנדוגני במוח ובכך להפחית את הנזק לנוירונים דופמינרגיים.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA לשיפור התפקוד המיני PHGS75% ECH 30% ACT 12