Golgi Alpha1,2-Mannosidase IA מקדם פירוק יעיל הקשור לרשתית אנדופלזמית של NKCC2

תַקצִיר

מוטציות בכליה הממוקמת בקודקוד Na-K-2Cl cotransporter NKCC2 גורמות לתסמונת ברטר מסוג I, הפרעת כליות מסכנת חיים. הראינו בעבר שתחבורה מהמיון מייצגת את השלב המגביל במסע של NKCC2 אל פני התא. עם זאת, מעט מאוד ידוע על רכיבי בקרת איכות ה-ER הספציפיים ל-NKCC2 ולמוטנטים הגורמים למחלות שלו. כאן אנו מדווחים על הזיהוי של Golgi alpha1, 2-mannosidase IA (ManIA) כשותף מחייב חדש של הצורה הלא בוגרת של NKCC2. האינטראקציה של ManIA עם NKCC2 מתרחשת בעיקר ברשת cis-Golgi. ביטוי משותף של ManIA הפחית את שפע החלבון הכולל של NKCC2 בעוד שה-ManIA נוקדאון יצר את האפקט ההפוך. חשוב לציין, לביטוי משותף של ManIA הייתה השפעה עמוקה יותר על מוטנטים מתקפלים של NKCC2. בדיקת ציקלוהקסימיד הראתה כי בתאים המבטאים יתר על המידה ManIA, היציבות וההתבגרות של NKCC2 נפגעו מאוד. מחיקת האזור הציטופלזמי של ManIA החלישה את האינטראקציה שלו עם NKCC2 ועיכבה את השפעתו על הבשלת ה-cotransporter. הפחתות הנגרמות על ידי ManIA בביטוי NKCC2 קוזזו על ידי מעכב הפרוטאזום MG132. באופן דומה, טיפול ב-kifunensine הפחית במידה ניכרת את אפקט ה-ManIA, מה שמרמז מאוד על כך שקיזום מנוז מעורב ב-ERAD המוגבר של ה-cotransporter. יתר על כן, שלילת ManIA מהתחום הקטליטי שלה ביטלה לחלוטין את השפעתה על NKCC2. לסיכום, הנתונים שלנו מדגימים נוכחות של מסלול ERAD בתיווך ManIA בתאי כליה המעודדים שמירה ופירוק של חלבוני NKCC2 שגויים מקופלים. הם מציעים מודל לפיו Golgi ManIA תורם ל-ERAD של NKCC2, על ידי קידום שמירה, מיחזור ו-ERAD של חלבונים שלא מקופלים בצורה שגויה שנמלטים בתחילה ממעקב אחר בקרת איכות החלבון בתוך המיון.

מילות מפתח

כִּליָה; NKCC2; בקרת איכות חלבון; ERAD; גולגי; alpha1,2-mannosidase IA; קְרוּם; סחר; תסמונת ברטר; לַחַץ יֶתֶר

לחץ כאן כדי להכיר את היתרונות של Cistanche

מבוא

מאזן הנתרן וויסותו על ידי הכליה, על ידי ויסות הנפח החוץ-תאי, הוא גורם מכריע לשליטה בלחץ הדם לטווח ארוך, כפי שמומחש על ידי תסמונות מונוגניות נדירות המשפיעות על הטיפול במלח כליות ומשנות באופן ניכר את BP [1, 2]. ואכן, למרות שמספר גורמים תורמים לפתוגנזה ולתחזוקה של עליית לחץ דם, מאמינים שמנגנוני הכליות ממלאים תפקיד ראשוני, כפי שהשערה תחילה על ידי Guyton [1]. הגפה העולה העולה של לולאת הנלה (TAL) של הכליה אחראית לספיגה מחדש של 20-30 אחוזים מהעומס המסונן של NaCl [3-5]. ברמה המולקולרית, ספיגה חוזרת של TAL Na-Cl מתווכת על ידי קוטרנספורטר Na-K-2Cl cotransporter NKCC2 [5]. כתוצאה מכך, לתפקוד ההובלה של NKCC2 יש השפעה ניכרת על הפרשת מלחים סופית בשתן, ולאחר מכן משפיעה על מאזן הנתרן בדם לטווח ארוך [3,5]. בהתאם לכך, וריאציות תורשתיות של הקוטרנספורטר ו/או הרגולטורים שלו משפיעות על BP בבני אדם [3,6-8]. אכן, השבתת NKCC2 גורמת לתסמונת ברטר מסוג I (BS1), מחלת כליות מסכנת חיים הכוללת לחץ דם נמוך יחד עם הפרעות אלקטרוליטים [9], בעוד שהפעילות המוגברת של הקוטרנספורטר נקשרה ללחץ דם גבוה [2,10- 13]. יתרה מכך, במספר מודלים של בעלי חיים של יתר לחץ דם רגיש למלח [14,15], ביטוי חלבון NKCC2 מוגבר ותרם להתפתחות יתר לחץ דם. בנוסף לתפקידו בהומאוסטזיס של BP, ​​פעילות NKCC2 חיונית גם לוויסות מאזן המים [5,16]. לתמיכה בתפיסה זו, אי-אקטיבציה של NKCC2 בחולים עם BS1 ו-BS5 גורמת להתפתחות פוליאוריה חמורה [7,8,17]. יתרה מכך, הפגיעה ביכולת ריכוז השתן של הכליות המזדקנות מיוחסת, לפחות בחלקה, לרמה המופחתת של חלבון NKCC2 [18,19]. ראוי להדגיש כי בכל המודלים של בעלי חיים של יתר לחץ דם והזדקנות, נראה כי NKCC2 מווסת בעיקר על ידי מנגנונים שלאחר תרגום [5,16,19], מה שמדגיש אפוא את הצורך לחקור את הגורמים המסדירים את הביוגנזה והסחר של NKCC2. למרות זאת, הידע שלנו על המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הסחר התוך-תאי של חלבוני NKCC2 מסוג פרא ומוטא בתאי יונקים, בפרט ויסותם על ידי אינטראקציה חלבון-חלבון, נותר גרוע מאוד. יתר על כן, הרוב המכריע של הדיווחים הקודמים התמקדו בעיקר בוויסות הטרנספורטרים שלאחר גולגי, בפרט על ידי זרחון [20-22], ולכן מעט מאוד ידוע כיום על ויסות הטרנספורטרים במיון ובקדם גולגי. רָמָה.

כדי לפעול כראוי, NKCC2 חייב להיות ממוקד כראוי למשטח התא האפיקי ולהתבטא במידה מספקת כדי לאפשר לתאי TAL להסתגל כראוי לאתגרים פיזיולוגיים או פתולוגיים [3,23]. כמו כל החלבונים הטרנסממברניים, ההכנה לסחרור מתאים ל-NKCC2 לממברנת התא מתחילה כאשר החלבון הקוטרנספורטר מסונתז ברטיקולום האנדופלזמי (ER) וממשיך כשהחלבון עובר דרך רשת Golgi [24,25]. באופן דומה, בדומה כמעט לכל החלבונים המיועדים לממברנת הפלזמה, חלבוני NKCC2 שהועברו לרשת האנדופלזמית (ER) עוברים בקרת איכות, כך שרק חלבונים מקופלים מועברים דרך מסלול ההפרשה [26,27]. בקרת קיפול החלבון ב-ER קשורה לעתים קרובות ל-N-glycosylation, שינוי פוסט-תרגום המופעל על ידי קישור קוולנטי של אוליגוסכריד ספציפי (Glc3Man9GlcNAc2) לחלבון בהתהוות [28,29]. לאחר העברת האוליגוסכריד הזה, עוקבים אחר מסלול ההפרשה מספר שלבים רצופים של התבגרות חלבון [28,30]. לאחר הסרת שלוש שאריות גלוקוז ותחילת חיתוך מנוז במיון, כחלק מתהליך בקרת האיכות, חלבונים מקופלים נכון מועברים למכשיר הגולגי לצורך התבגרות [26,28]. לאחר מכן נגזם עוד יותר על ידי מנוזידאזות ספציפיות כמו Golgi 1,2-מנוזידאזות ב-cis-Golgi [31,32]. התוספת של סוכרי GlcNAc, גלקטוז, חומצה סיאלית ופוקוז מייצרת N-גליקנים היברידיים ומורכבים בתוך התאים המדיאליים והטרנס-גולגיים [33,34]. לאחר מכן, חלבונים בוגרים בעלי N-glycosylated מכוונים ליעד הסופי שלהם. כאשר תהליך הקיפול נכשל, שאריות המנוז הסופיות ממבנה הגליקן הליבה נגזמות בהדרגה, וחלבונים פגומים מועברים על פני הממברנה לצורך פירוק פרוטאזום ציטוזולי באמצעות מנגנונים הידועים בשם ERAD (השפלה הקשורה לרשת האנדופלזמית [26,35]). שאר החלבונים החריגים, שיכולים ליצור אגרגטים או שאינם ניתנים לזיהוי על ידי מלווה ERAD, מועברים לליזוזומים לפינוי דרך מסלולים המכונים ביחד ER-page [36,37]. עם זאת, חלק מהחלבונים שלא מקופלים יכולים עדיין להימלט מה-ER ולהתקדם ל-Golgi, שם הם נתונים לבקרת איכות של Golgi (GQC) וממוקדים לליזוזום או פרוטאזום לפירוק [38]. גם גרסאות פרא וגם גרסאות מוטנטיות של חלבונים טרנסממברניים מועדים לבקרת איכות ER ופירוק. חלבון תעלת הכלוריד CFTR (רגולטור הולכה על פני ממברנה של סיסטיק פיברוזיס), המאופיין כמצע ה-ERAD של יונק הממברנה האינטגרלי הראשון, הוא הדוגמה הטובה ביותר [39,40]. בתנאים רגילים, עד 70 אחוז מ-CFTR מסוג פראי מתפורר על ידי ERAD [39,40]. אפילו יותר מרשים, המחיקה של פנילאלנין 508 (∆F508) המוטציה של CFTR האחראית לסיסטיק פיברוזיס, מפחיתה את יעילות הקיפול, וכתוצאה מכך כמעט 99 אחוז מה-CFTR המוטנטי מתפורר לפני שהוא יכול להגיע לממברנת הפלזמה [39,40]. בדומה ל-CFTR ולמספר חלבונים טרנסממברניים אחרים כמו HERG [41], ROMK [42] ו-NCC [43], הראינו בעבר שרוב חלבוני NKCC2 שזה עתה מסונתזים נלכדו ב-ER ומיועדים לפירוק, תהליך זה כולל בעיקר את מסלול הפרוטאזום [44-46]. ERAD מתחיל בזיהוי של חלבון מקופל שגוי על ידי מלווים מולקולריים [47]. סוג הצ'פרונים העוסקים בתהליך זה תלוי בעיקר במיקום הנגע המתקפל של המצע שיכול להתרחש בלומן ER, קרום ER או ציטופלזמה [27,47]. כתוצאה מכך, הוצעו שלושה מסלולי ERAD שונים כ-ERAD-L (ERAD של מצעים עם נגעים מקופלים שגויים בתוך לומן ER), ERAD-M (ממברנה) ו-ERAD-C (ציטופלזמה) [27,47,48]. לדוגמה, ה-ERAD של CFTR המתהווה כרוך גם בצ'פרונים ציטופלסמיים וגם ER לומינליים [49]. באופן דומה, NCC, חלבון טרנסממברנלי נוסף, עוסק במספר מלווים ציטופלזמיים עבור ה-ERAD שלו [43,50]. בדומה ל-NCC האלקטרוניטרלי הספציפי לכליה, ל-NKCC2 יש 12 אזורים טרנסממברניים, שני תחומים ציטופלזמיים גדולים ולולאה חיצונית חשופה ל-ER [5]. מכיוון ש-NKCC2 מכיל תחומים ב-ER ובציטופלזמה, אפשר להעלות על הדעת אינטראקציה של הקוטרנספורטר עם צ'פרונים מולקולריים של ER משני הצדדים או משני הצדדים של ממברנת ה-ER. יתר על כן, בהתחשב בכך שהתחום C-טרמינלי של NKCC2 הוא האזור הציטופלזמי השולט [5], סביר להניח שהוא יהיה האתר העיקרי של אינטראקציה בין חלבון לחלבון ולכן ישחק תפקיד מכריע בביוגנזה ובסחר של ה-cotransporter. בהסכמה עם רעיון זה, זיהינו בעבר כמה שותפים מחייבים של NKCC2 C-terminus [46,51-53]. בין אלה, הראינו שאלדולאז B ו- SCAMP2 נקשרים ל-NKCC2 C-terminus ברמת הפוסט-Golgi ומווסתים את ההפצה מחדש התת-תאית של הקוטרנספורטר [51,52]. לאחרונה, סיפקנו ראיות לכך ש-STCH, Hsp70 והחלבון-לקטין OS9 מקיימים אינטראקציה עם הצורה הלא בוגרת של NKCC2 בעיקר במיון כדי לווסת את השפלה הקשורה ל-ER [46,53]. בדוח זה, אנו מתארים אינטראקציה חדשה בין חלבון לחלבון בין הזנב המסוף C של NKCC2 ו-Golgi 1, 2-mannosidase IA (Golgi ManIA, הנקרא גם Man9-mannosidase), חלבון שנמצא בכל מקום שייך למשפחת המנוזידאזות I -1,2 הכוללות את ה-ER -mannosidase I (MAN1B1) ושני Golgi 1,{106}}מנוסידאזות אחרות, Golgi -mannosidase IB [MAN1A2], ו-Golgi -mannosidase IC [MAN1C1] [31,54–56]. מעניין לציין שמספר הוכחות הולך וגובר הצביע על כך ש-1,2-מנוזידאזות לא רק מעורבות בקיפול והבשלה של חלבון, אלא גם ממלאות תפקיד מרכזי בפירוק חלבון שלא מקופל שגוי [57-60]. כאן, אנו מראים כי ManIA מקיים אינטראקציה עם הצורה הלא בשלה של NKCC2 בעיקר ברשת cis-Golgi ומקדם את השפלתה על ידי מסלול הפרוטאזום, ומגלה לכן נקודת ביקורת נוספת במעקב והסרה של חלבוני NKCC2 שלא מקופלים בצורה שגויה. כתוצאה מכך, ממצאים אלה עשויים לפתוח אפיקים חדשים בחקר בקרת האיכות של ER ו-Golgi של חלבוני NKCC2 כדי לסייע בפיתוח אסטרטגיות חדשות למניעה ו/או טיפול בהפרעות כליות הקשורות לסחר וביטוי חריגים של NKCC2.

תוסף Cistanche

חומרים ושיטות

1. בדיקת שמרים דו-היברידית

בדיקת שמרים דו-היברידית (Y2H) בוצעה כפי שתואר בעבר בפירוט [51], תוך שימוש כפיתיון באזור הפרוקסימלי של קצה NKCC2 C (שאריות 661-1095). בקצרה, AH109 המבטא את הפיתיון הותאם עם זן השמרים Y187 שהשתנה עם ספריית cDNA של כליה אנושית. לבחירת שיבוטים חיוביים המקודדים לחלבונים המשוערים אינטראקציה, תאי שמרים מזווגים גודלו תחילה על לוחות בחירה עם קפדנות נמוכה (-Leu, −Trp, −His) ולאחר מכן על לוחות בחירה עם קפדנות גבוהה (-Leu, −Trp, −His, − דה). מושבות נבחרות נבדקו גם עבור פעילות -galactosidase, ו-DNA מהשיבוטים החיוביים בודד מתאי שמרים באמצעות ערכת בידוד פלסמיד שמרים RPM (BIO 101 Systems). לאחר הצלת הפלסמידים הטרף על ידי טרנספורמציה לחיידקי DH5 (Invitrogen) ובידוד באמצעות ערכת Qiagen, פלסמידים של cDNA עברו רצף והערכו באמצעות תוכנית BLAST.

2. בניית פלסמיד ומוטגנזה מכוונת אתרים

יצירת WT Myc-NKCC2, Myc-NKCC2 ללא גליקוזילציה ((N442Q/N452Q) ו-WT EGFP-NKCC2 תואר בעבר [45,46,51]. רצף קידוד ה-ManIA של העכבר עבר שיבוט משנה לתוך וקטור הביטוי של יונקים pcDNA3.1/V5 (Invitrogen, פריז, צרפת) ליצירת מבנה WT ManIA-V5. הפלסמיד הכולל את ManIA חסר זנב C-terminus (ManIA-∆Cter) נוצר באמצעות הגברה ממבנה הביטוי WT MAnIAV5 באמצעות פריימר קדימה 50 CCGGAGCGATGAAGTTCGTGCTGCTGC primer 30 50 TTTCTCTTTGCCATCAATTTC 30. המבנה המכיל ManIA נטול מאזור ה-N-terminus שלו (ManIA-∆Nter) נוצר גם מפלסמיד WT MAnIA-V5 על ידי שיטת QuikChange באתר מכוונת מוטגנזה (Stratagene, Les Ulis, צרפת) באמצעות פריימר קדימה 50 3 0 ו-Reverse primer 50 ATTCCAAGCATGGGTCATCTACTCTTTGATCTTTGCCCTC 30. כל המוטציות והחתכים אושרו על ידי רצף.

3. תרבות תאים

תאי כליות אופוסום (תאי OKP) נשמרו ב-DMEM (Gibco 42430) בתוספת של 10 אחוז סרום בקר עוברי (Eurobio, Les Ulis, צרפת), פניצילין (100 U/mL) ו-streptomycin (100 U/mL) ב-37 ◦ C באווירה לחה המכילה 5 אחוז CO2. תאי כליה עוברית אנושית (HEK) 293 גודלו במדיה DMEM עם תוספת של 10% סרום בקר עוברי ו-1% פניצילין/סטרפטומיצין. עבור טרנספקציה של DNA פלסמיד, תאים גדלו ל-60-70 אחוזי מפגש לפני שעברו טרנספקציה זמנית למשך 5 שעות באמצעות ערכת Lipofectamine plus לפי הוראות היצרן (Invitrogen, פריז, צרפת). עבור ניסויים של פירוק חלבון, תאים טופלו עם MG132 (2 מיקרומטר) או כלורוקין (100 מיקרומטר) 6 שעות לפני תמוגה של התא, כפי שתואר בעבר [53,61]. Kifunensine (Sigma k1140, Saint-Quentin-Fallavier, צרפת) שימש ב-25 µM 6 שעות לפני תמוגה של התא.

4. הכנת חלבון, אימונובלוטינג ומשקעים אימוניים

לאחר טרנספקציה, תאים נשטפו עם PBS קר לפני הפירסום במאגר תמוגה המכיל 12 0 mM Tris/Hepes, pH 7,4; 15 0 מ"מ NaCl, 5 מ"מ EDTA, 3 מ"מ KCl; 1 אחוז (v/v) Triton X-100 ומעכבי פרוטאז (Complete Roche 1697498, Meylan, France). לאחר מכן נקטפו דגימות וצנטריפוגה ב-16,{{10}} סל"ד למשך 15 דקות ב-4 ◦C. עבור משקעים חיסוניים, תאים הומסו עם חיץ תמוגה המכיל 0.4 M NaCl; 1.5 מ"מ MgCl2; 10 mM Hepes, pH 7.9; 5 אחוז (v/v) גליצרול; 0.5 אחוז (v/v) Nonidet P-40) ומעכבי פרוטאז (Complete, Roche Diagnostics). משקעים אימוניים בוצעו באמצעות נוגדן אנטי-V5 (Invitrogen) או אנטי-ManIA (Sigma), וטיהור זיקה באמצעות חרוזי חלבון G-agarose (Dynabeads, Invitrogen, פריז, צרפת). לאחר דגירה עם חרוזי חלבון G-agarose למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר, האימונוקומפלקס נשטף ב-PBS (Invitrogen). דגימות החלבון הורתחו לאחר מכן במאגר טעינה, בוצעו על שיפוע של 7.5 אחוזים או 10 אחוזים, או 15 אחוז ג'לים SDS-polyacrylamide, ונבדקו עם נוגדנים ראשוניים בעלי עניין ונוגדן משני מצומד חזרת פרוקסידאז. חלבונים הוצגו על ידי זיהוי כימי-אור משופר (Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, צרפת) על פי הוראות היצרן.

5. אימונוציטוכימיה

עשרים וארבע עד ארבעים ושמונה שעות לאחר ההעברה, תאים קונפלונטיים נשטפו עם PBS פלוס פלוס (pH 8, 1 mM MgCl2 ו-0.1 mM CaCl2). לאחר מכן תאים קבועים עם 2 אחוז פרפורמלדהיד ב-PBS למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר לפני שהודגרו עם 50 mM NH4Cl, וחוללו עם 0.1 אחוז Triton X-100 למשך דקה אחת. כדי לחסום שום קישור נוגדן ספציפי, תאים הודגרו עם DAKO (מדלל נוגדנים עם רכיבים מפחיתי רקע) למשך 30 דקות. תאים קבועים הודגרו למשך שעה בטמפרטורת החדר עם הנוגדן העיקרי המעניין. הנוגדנים העיקריים שבהם נעשה שימוש במחקר זה הם הבאים: אנטי-V5 עכבר (Invitrogen, פריז, צרפת), אנטי-Myc עכבר (Takara, Clontech, Saint-Germain-en-Laye, צרפת), אנטי-V5 עכברושים (Abcam, פריז, צרפת), ארנב אנטי קלנקסין (אבקאם), ארנב אנטי ג'יאנטין (אבקאם), ארנב אנטי GM130 (אבקאם), ארנב אנטי-ManIA (אבקאם), הנוגדנים המשניים שבהם נעשה שימוש הם הבאים: עז נגד ארנבת Alexa Fluor 555 (Invitrogen), עז נגד ארנבת Alexa Fluor 488 (Invitrogen), עז נגד ארנבת FITC (DakoCytomation, Trappes, צרפת), עז נגד עכבר טקסס אדום (Invitrogen), עז נגד עכברושים Alexa Fluor 555 (Invitrogen), עז Alexa Fluor 488 נגד חולדות (Invitrogen), אנטי עכבר מצומד Alexa Texas Red (Jackson ImmunoResearch, Ely, בריטניה), עוף נגד עכבר Alexa Fluor 647 (Invitrogen). לאחר דגירה עם נוגדנים ראשוניים ומשניים בעלי עניין, תאים נשטפו עם PBS והותקנו עם Vectashield.

הרבה סיסטאנצ'ה

6. מבחני ציקלוהקסימיד-צ'ייס

כדי לעקוב אחר היציבות וההתבגרות של NKCC2, ציקלוהקסימיד נוספה בריכוז של 100 µM לתאי OKP או HEK 14-16 שעות לאחר ההעברה עם פלסמידים NKCC2. לתקופת המרדף נאספו ליזטים של תאים 0, 1, 2 ו-4 שעות לאחר הטיפול בציקלוהקסימיד ונותחו על ידי אימונובלוטינג.

7. סיRNA נוקדאון

ManIA siRNAs נרכשו מ-Dharmacon כפולות ON-TARGET פלוס SMART (L-012174-00-0005). תאי HEK הועברו תחילה עם בקרה או ManIA siRNAs ספציפיים עם Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen) תוך שימוש במפרטי היצרן0 כפי שבוצעו בעבר [46,53]. יום אחד לאחר טרנספקציה של siRNA, תאים הועברו עם פלסמידים של NKCC2. לאחר 24-48 שעות, נותחו ליזאט תאים עבור כל חלבון באמצעות הנוגדנים המצוינים.

8. ניתוחים סטטיסטיים

הנתונים מבוטאים כממוצע ± SE. הבדלים בין האמצעים הוערכו באמצעות מבחני t מזווגים או בלתי מזווגים או ANOVA לפי המתאים. p < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית.

דִיוּן

מחקר זה בוצע כדי לקבל תובנה לגבי המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הרגולציה של השפלה הקשורה ל-ER במהלך ביוגנזה של NKCC2. באמצעות ניתוח שני כלאיים של שמרים ומבחני משקעים משותפים, זיהינו את GolgiMannosidase IA כשותף מקשר חדש ל-NKCC2. האסוציאציה מרמזת רק על הצורה הלא בוגרת וגלוקוזילטית גבוהה של ה-cotransporter ומתרחשת בעיקר ברשת cis-Golgi. מצאנו ש-ManIA נוק-דאון מגביר את שפע החלבון NKCC2 בעוד לביטוי היתר שלו יש השפעה הפוכה. ביטוי משותף של ManIA פגע בהבשלה של NKCC2 על ידי קידום השמירה שלו, מיחזור למיון ופירוק דרך מסלול הפרוטאזום. חשוב לציין, מוטנטים מתקפלים של NKCC2 נוטים יותר למסלול ERAD בתיווך ManIA. ממצאים אלו עשויים לעזור להבין טוב יותר כיצד חריגות בסחר בחלבון NKCC2 מובילות לתסמונת ברטר, אשר חיונית להבהרת הפתופיזיולוגיה של BS1 ולשיפור הטיפולים הזמינים.

כעת התברר בבירור כי זמירת מנוז על ידי מנוסידאזות מסוג I 1,2- מעורבת בשלב ההכרה של ה-ERAD של גליקופרוטאין, מאחר שתהליך זה מופחת מאוד על ידי המעכבים שלהם 1-deoxymannojirimycin ו-kifunensine [67, 70–73]. בתחילה, חשבו, בהתבסס על מחקרים שנערכו בעיקר בשמרים, כי תרכובות אלו פוגעות ב-ERAD על ידי עיכוב ER 1,2-mannosidase I אשר מבקע בעיקר את המנוזה מענף B האמצעי של Man9 ליצירת Man8, אות גליקן. הציע ליזום את ERAD [70,74]. עם זאת, בתאי יונקים, השערה זו לא בהכרח נכונה בהתחשב בכך שגם kifunensine וגם 1-deoxymannojirimycin מעכבים גולגי 1,2-מנוזידאזות. יתרה מזאת, היו עדויות הולכות וגדלות בתאי יונקים המדגימים כי חיתוך נוסף של שלושה עד ארבעה 1,2-שיירי מנוז מקושרים, ליצירת Man6GlcNAc2 (M6) או Man5GlcNAc2 (M5), תורם גם להפעלת הפירוק של גליקופרוטאין מקופל שגוי [ 32,75–77]. עם זאת, לא היה ברור אילו 1,2-מנוזידאזות אחראיות לחיתוך נוסף זה. מועמד אחד הוא ER a 1,2-mannosidase I עצמו שכן ביטוי היתר שלו מוביל לגיזום מנוז מוגבר ול-ERAD מואץ [78-80]. מועמדים אפשריים אחרים יכולים להיות חלבונים דמויי-מאנוזידאז (EDEM) המעודדים פירוק ER מכיוון שגם EDEM1 וגם EDEM3 דווחו כמעוררים זמירה של מנוז ומאיצים את ERAD של גליקופרוטאין כאשר הם מתבטאים יתר על המידה בתאים [81,82]. מועמד אפשרי נוסף יכול להיות Golgi mannosidase IA אשר מקצץ Man9 ל Man6 ו-Man5 [31,54]. אנזים זה ושני מנוסידאזות אחרות של Golgi 1,2 (IB, ו-IC) הוכחו כמגבירים את הפירוק ואת זמירת המנוזה של מצע ERAD-L, NHK 1-אנטיטריפסין, כאשר הם מביעים יתר על המידה בתאים מתורבתים [57]. במחקר הנוכחי, הראינו עדויות לאינטראקציה ספציפית של ManIA עם NKCC2, חלבון כליות טרנסממברנלי. חשוב לציין, הדגמנו שהאסוציאציה של ManIA in vivo עוסקת רק בצורה הבוסרית של ה-cotransporter. והכי חשוב, סיפקנו ראיות לכך שקישור ManIA מעורב בשמירה וההשפלה הקשורה ל-ER של NKCC2.

קפסולות Cistanche

בעבר סיפקנו ראיות לכך ש-ERAD ויצוא מהמיון מהווים את הרגולטור המשמעותי של התבגרות NKCC2 וביטוי פני השטח של התא [8,44-46]. ואכן, הוכחנו שרוב חלבוני NKCC2 שסונתזו לאחרונה מכוונים לפירוק הקשור ל-ER הכולל את מסלולי הפרוטאזום והליזוזום [8,44-46,53]. יתר על כן, הראינו ש-STCH והחלבון lectin OS9 מעורבים בתהליכים אלה על ידי אינטראקציה עם הצורה הלא בוגרת של NKCC2 בעיקר במיון [46,53]. בדומה ל-OS9 ו-STCH, המעורבות של ManIA ב-ERAD של ה-cotransporter הוצעה לראשונה במחקר הנוכחי על ידי מבחני קו-אימוניות משקעים שחושפים שהאסוציאציה של החלבונים כוללת רק את הצורה הלא בוגרת של NKCC2. יש לציין, מחיקת הזנב הציטופלזמי של ManIA הפחיתה אך לא עיכבה לחלוטין את האינטראקציה שלו עם NKCC2, ולכן פתחה את האפשרות לאינטראקציה של הקוטרנספורטר עם אזורים אחרים של חלבון ManIA. חוץ מזה, למרות האינטראקציה של ManIA רק עם צורת הליבה הגלוקוזילית והלא בוגרת של NKCC2, מחקרי האימונוציטוכימיה שלנו גילו ש-ManIA לא משתלבת יחד עם NKCC2 במיון. בהקשר זה, ראוי לציין כי דווח כי ManIA נמצא ב-Golgi או במיון [31,83-85]. מחקר בלתי תלוי אחר דיווח שמנוזידאז IA עשוי להתגורר גם בשלפוחיות בקרת איכות [58]. כתוצאה מכך, מכיוון שהתפוצה התאית של ManIA עשויה להיות תלויה בסוג התא, ערכנו את המחקר שלנו בשתי שורות תאי כליה שונות, תאי OKP ו-HEK. מחקרי הלוקליזציה שבוצעו בתאים אלו הראו בבירור כי ManIA מתבטא במנגנון Golgi בשני שורות התאים וחשפו כי אתר האינטראקציה עם ה-cotransporter הוא רשת cis-Golgi. יש לציין, בהתחשב בכך שה-N-glycan של גליקופרוטאין בכניסה למנגנון Golgi הוא עדיין מסוג גבוה מנוז, ניתן להעלות על הדעת שאינטראקציה של NKCC2 עם ManIA אכן יכולה להתרחש ברשת cis-Golgi. באמצעות גישות siRNA וביטוי יתר, הראינו ש-ManIA מקיימת אינטראקציה עם ה-NKCC2 הבוסרי כדי לקדם את השפלה הקשורה ל-ER. חשוב לציין, השפעת ManIA על הצורה הבוגרת של NKCC2 נמנעה כאשר הזנב הציטופלזמי של ManIA נמחק. אפילו יותר מרשים, השפעת ה-ManIA על צורות לא בוגרות ומבוגרות של NKCC2 בוטלה לחלוטין כאשר האנזים נשלל מהתחום הקטליטי שלו. יתרה מכך, ויסות NKCC2 על ידי ManIA נמנע גם בנוכחות מעכב הפרוטאזום MG132, אך לא עם chloroquine, מעכב תפקוד ליזוזומלי, מה שמעיד על כך ש-ManIA מכוון את הצורה הלא בוגרת של הקוטרנספורטר למסלול ERAD תלוי פרוטאזום. כדי לתמוך עוד יותר בתפקידה של ManIA ב-ERAD של NKCC2, בדקנו גם את ההשפעה של מעכב גזירת מנוז kifunensine. מעניין לציין שטיפול ב-kifunensine עיכב את השפעת ManIA על NKCC2, מה שמעיד על כך שגיזום מנוז הוא תהליך חשוב בהשפלה הקשורה ל-ER הקשורה ל-ManIA של NKCC2. עם זאת, אפקט ManIA לא נמנע במלואו על ידי kifunensine, מה שמרמז שלפחות חלקית, פעולת ManIA על הקוטרנספורטר אינה תלויה לחלוטין ב-N-glycan. לתמיכה בתפיסה זו, מוטציות של אתרי גליקוזילציה של NKCC2 לא עיכבו באופן מלא את השפעת ה-ManIA על ה-cotransporter, מה שמאשר לכן שלפחות בתנאי הניסוי שלנו, חלק מהשפעת ה-ManIA יכול להיות בלתי תלוי ב-N-Glycan. לתמיכה בתפיסה זו, רון וחב'. סיפק ראיות לכך שבתנאי דחק של ER, ביטוי משופר של EDEM1, חלבון אלפא-מאנזידאז נוסף, עוקף את אירוע חיתוך המנוז ומעביר את הגליקופרוטאין ישירות לשלבי ERAD מאוחרים [86]. ואכן, הם הראו בבירור כי לאחר ביטוי יתר של EDEM1, הפירוק של הגליקופרוטאין H2a לא נחסם על ידי kifunensine [86]. זה מעניין במיוחד מכיוון שמסגרת הניסוי שלנו, כלומר, ביטוי יתר הטרולוגי של חלבוני הפרשה וממברנה (NKCC2) גורם ללחץ ER [87-89] שיכול להסביר, לפחות חלקית, את התמשכות ההשפעה של ManIA, ללא תלות בגזירת מנוז. , על הקוטרנספורטר בתנאים אלה. ראוי לציין שהשפעת ManIA שנותרה על חלבון NKCC2 לא מסולק נחסמה במלואה על ידי MG132, מה שמאשר עוד יותר את הרעיון ש-ManIA מקדם את ERAD של NKCC2 במסלול תלוי פרוטאזום.

הצטברות של פוליפפטידים מתקפלים ונוטים להצטברות מזיקה לבריאות התא [90-92]. מספר גדול יותר (יותר מ-70) של מחלות אנושיות נובע מפגמים בקיפול של חלבוני הפרשה וממברנה [91,92]. כדי למנוע קיפול שגוי של חלבון ולשמור על הומאוסטזיס חלבוני במסלול ההפרשה, לתאי אאוקריוט יש מנגנוני בקרת איכות מרובים (QC) [26]. הם כוללים בקרת איכות ER (ERQC) באמצעות מסלול הפירוק האנדופלזמי (ERAD) [36,48] ו-ER-page [93] בקרת איכות Golgi (QCG) [38] ובקרת איכות של ממברנות פלזמה (PM) [94 ]. לפיכך, חלבונים מקופלים שגויים, בפרט חלבונים טרנסממברניים בעלי טופולוגיות מורכבות כגון NKCC2, נבדקים בקפדנות על ידי נקודות ביקורת עוקבות של בקרת איכות לפני שהם מגיעים ליעדיהם הסופיים [26,94]. יתר על כן, מסלולי QC יכולים לשתף פעולה כדי לנטרל ביעילות את הקיפול השגוי של חלבון בודד. לדוגמה, למרות שרוב החלבונים הטרנסממברניים המקופלים שגוי מתכלים על ידי ERAD, חלק מהחלבונים החריגים, במיוחד בתנאי לחץ של ER, יכולים להימלט ממעקב ER כדי להיות ארוזים לתוך שלפוחית ​​COPII עבור סחר אנטרוגרד ל-Golgi [95-97]. עדויות שהתקבלו ממספר מחקרים תומכות ברעיון שמנגנון ה-Golgi משמש כנקודת ביקורת QC [26,38] ואכן, חלבונים מקופלים שגויים או לא מורכבים המתחמקים מ-ERAD ו-ER-page, יוצאים מהמיון והופכים למצעים של GQC המנותבים ל-vacuole/ ליזוזום לפירוק [26,38]. בהקשר זה, זה מאוד לא סביר שמסלול ה-GQC ממוקד הליזוזום/וואקואול הוא המנגנון העומד בבסיס הרגולציה המושרה על ידי ManIA של NKCC2, בהתחשב בכך שמעכבי הליזוזומים chloroquine לא מנע את השפעת ה-ManIA על הקוטרנספורטר. אפשרות נוספת היא שחלק מהחלבונים המקופלים בצורה שגויה הנכנסים ל-Golgi יכולים להיות ממוקדים לפירוק פרוטאזומלי לאחר מסירה חזרה למיון. ליתר דיוק, ה-GQC לוכד את המצעים שנמלטו ככל הנראה ב-cis-Golgi, ומחזיר אותם ל-ER ל-ERAD על ידי הפרוטאזום. זה מעורר עניין רב מכיוון שהדגמנו כי ManIA מתמקם עם NKCC2 בעיקר ברשת cis-Golgi. יתרה מכך, בניגוד לכלורוקין, מעכב הפרוטאזום MG132 ביטל את השפעת ה-ManIA על NKCC2, מה שמצביע על כך שסביר מאוד שה-GQC ממוקד פרוטאזום יהיה המסלול העיקרי השולט בוויסות NKCC2 על ידי ManIA. יש לציין, מחקר עדכני מאוד בשמרים הציע שניתן למקד חלק מהחלבונים שלא מקופלים בצורה שגויה הנכנסים ל-Golgi ישירות לפירוק פרוטאזומלי מבלי שיחזרו אותם ל-ER, מנגנון שנקרא EGAD [98]. עם זאת, למרות שלא ניתן לשלול את המנגנון הנוסף הזה, הראינו בבירור שבביטוי משותף של ManIA, NKCC2 נשמר במידה רבה במיון. לפיכך, הנתונים שלנו מצביעים בתוקף על כך ש-ManIA מקדם את השמירה, המיחזור והתלוי בפרוטאוזום של חלבוני NKCC2 שלא מקופלים בצורה שגויה, שנמלטים בתחילה מבקרה איכות ER.

Cistanche tubulosa

חקירה ממצה של המנגנונים העומדים בבסיס מכונות ה-ERAD סיפקה כמה תובנות חדשות לגבי האופן שבו ERAD תורם לבריאות האדם במצבים נורמליים וחוליים כאחד [48,92]. החשיבות של בקרת איכות ER, בכלל, ותופעת ERAD, בפרט, הוזכרה במספר רב של פתולוגיות אנושיות, הנקראות מחלות קונפורמציה [48,92]. בהתייחס ל-NKCC2, תיעדנו בעבר שתסמונת ברטר מסוג 1 היא בין המחלות הקשורות למסלול ERAD [61]. ואכן, למרות שמסלולים תאיים שונים עשויים להסביר אובדן תפקוד של NKCC2 במחלת BS1, הנתונים שלנו חשפו כי פירוק חלבון הקשור ל-ER הוא המנגנון הנפוץ ביותר בבסיס BS1 [61]. בהתאם לכך, הזיהוי של חלבונים הנקשרים ספציפית לצורות הבלתי בשלות של WT NKCC2 ולמוטנציות המתקפלות שלו חשוב לפענוח המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הוויסות של ה-ERAD שלהם. במחקר הנוכחי, סיפקנו ראיות לכך שבנוסף ל-WT NKCC2, ManIA מקיימת אינטראקציה עם הצורה הלא בוגרת של מוטציות NKCC2 A508T ו-Y998X. יתר על כן, הוכחנו שלביטוי משותף של ManIA יש השפעה עמוקה יותר על המוטנט A508T מתקפל NKCC2 בהשוואה ל-WT NKCC2, מה שמרמז מאוד של-ManIA עשוי להיות תפקיד חשוב ב-ERAD של מוטציות NKCC2 במהלך BS1. זה מעניין במיוחד מכיוון שדיווחנו בעבר ש-A508T ו-Y998X נשמרים במיון [45,61]. בהתחשב בעובדה שניסויי האימונוקליזציה שלנו חשפו כי, ללא תלות במערכת הביטוי, ManIA מתבטאת ברשת cis-Golgi, האינטראקציה של האנזים עם שני מוטציות NKCC2 אלו מעידה מאוד על כך שלמרות שרוב ה-A508T ו-Y998X לכודים במידה רבה במיון, יש העברה משמעותית של שני המוטנטים הללו מהמיון למיון ל-cis-Golgi, שם ניתן ללכוד אותם על ידי ManIA כדי להחזיר אותם למיון. בהקשר זה, Hosokawa et al. הראה גם שלמרות שרוב חלבוני ה-NHK המוטרפים נשמרים ב-ER, חלק מהם התחמקו מבקרה האיכות של ה-ER והגיעו ל-cis-Golgi שם הם נקצצים על ידי Golgi a 1,2-מנוזידאזות למיקוד עבור ERAD [ 57]. יתר על כן, מספר מחקרים עדכניים הוכיחו כי ERManI, אשר נחזה בתחילה לתפקד ב-ER, היה מקומי גם לקומפלקס Golgi בתאי יונקים, שם הוא תורם לנקודת ביקורת איכות מבוססת Golgi המאפשרת אחזור של מצעי ERAD שנתפסו בחזרה. למיון [59,60,99]. יש לציין, בהתחשב בעובדה שבדומה ל-NKCC2, ManIA הוא חלבון טרנסממברני, הוא עשוי גם לקיים אינטראקציה חולפת עם ה-cotransporter במיון המאפשרת לכן לאנזים להשתתף ביצירת האות המכוון לחלבוני NKCC2 שלא מקופלים בצורה שגויה עבור ERAD, גם בזמן שהם עוברים דרך המיון. או בדרכם לגולגי.

לסיכום, מצאנו ש-Golgi ManIA יוצר אינטראקציה עם הצורה הלא בוגרת של NKCC2 ב-cis-Golgi כדי לקדם את שימור ה-ER שלו ולהאיץ את ERAD שלו על ידי מסלול הפרוטאזום. למיטב ידיעתנו, זהו המחקר הראשון המתאר את התפקיד המשמעותי של מנגנון בקרת האיכות של Golgi בביוגנזה של NKCC2. יתר על כן, זהו גם הדו"ח הראשון המספק עדות לכך שמלבד חלבונים luminal, ManIA יכול להיות מעורב גם ב-ERAD של חלבונים טרנסממברניים. הנתונים שלנו מצביעים על כך ש-ManIA מתמרן בתוך נקודת ביקורת איכות מקומית ב-cis-Golgi כדי לשמש כמערכת גיבוי למעקב ERAD במיון, ומספקת, לפיכך, רשת נוספת רבת עוצמה להסרה נאותה של חלבוני NKCC2 לא רצויים, המגנים על כך, תאים מפרוטאוטוקסיות הנגרמת על ידי היווצרות של אגרגטים חלבונים, במיוחד במהלך מחלת תסמונת ברטר. ללא ספק, ManIA לא יכולה לעבוד בבידוד כדי לתווך את ERAD של ה-cotransporter. באופן הולם, ניתן להניח כי ManIA פועלת בשיתוף פעולה, ברצף או בו-זמנית, עם חלבונים קושרים אחרים ל-NKCC2 ורכיבי ERAD, כגון OS9 [46] ו-STCH [53] כדי לתווך את בקרת איכות ה-ER של ה-cotransporter. בהקשר זה, אנו מציעים מודל לפיו, בתנאי לחץ של ER: (1) OS9 מעורב בשמירה של חלבוני NKCC2 שלא מקופלים בצורה שגויה במיון וב-ERAD שלו על ידי הפרוטאזום. (2) STCH ממלא תפקיד מכריע ב-ERAD של NKCC2 על ידי מסלולי הפרוטאזום והליזוזום. (3) Golgi ManIA תורם ל-ERAD של NKCC2 על ידי לכידת חלבוני NKCC2 שלא מקופלים בצורה שגויה שנמלטו מבקרת איכות ER והעברתם חזרה למיון. יש צורך בניסויים נוספים כדי לחשוף את המנגנון המדויק מאחורי מודל זה. האפיון והזיהוי היסודיים של ההרכב המולקולרי הספציפי של בקרות האיכות של ER ו-Golgi של NKCC2 ושל המוטנטים הגורמים למחלות עשויים להציע בסיס להגדרת אסטרטגיות טיפוליות חדשות המכוונות להובלת קוטרנספורטר מרשתות ER ו-Golgi אל פני התא.

הפניות

1. Guyton, AC בקרת לחץ דם - תפקיד מיוחד של הכליות ונוזלי הגוף. מדע 1991, 252, 1813–1816. [CrossRef] [PubMed]

2. ליפטון, RP; Gharavi, AG; גלר, DS מנגנונים מולקולריים של יתר לחץ דם אנושי. תא 2001, 104, 545–556. [CrossRef]

3. קסטרופ, ח.; Schiessl, IM Physiology and pathophysiology of renal Na-K-2Cl cotransporter (NKCC2). אמ. J. Physiol. רן. פיזיול. 2014, 307, F991–F1002. [CrossRef]

4. גרגר, ר.; Velazquez, H. הגפה העבה העולה בקליפת המוח וצינורית מפותלת מוקדמת דיסטלי במנגנון ריכוז השתן. כליות אינט. 1987, 31, 590–596. [CrossRef] [PubMed]

5. Gamba, G. פיזיולוגיה מולקולרית ופתופיזיולוגיה של קוטרנספורטרים של קטיון-כלוריד אלקטרו-נייטרליים. פיזיול. Rev. 2005, 85, 423–493. [CrossRef] [PubMed]

6. Ares, GR; Caceres, נ.ב; Ortiz, PA ויסות מולקולרי של NKCC2 באיבר העולה העולה. אמ. J. Physiol. רן. פיזיול. 2011, 301, F1143–F1159. [CrossRef] [PubMed]

7. קומהוף, מ.; Laghmani, K. פתופיזיולוגיה של תסמונת ברטר לפני הלידה. Curr. דעה. נפרול. יתר לחץ דם. 2017, 26, 419–425. [CrossRef] [PubMed]

8. לגמאני, ק.; בק, ב"ב; יאנג, SS; סיאיפן, ע.; ונזל, א.; רעוש, ב.; ויצטום, ח; פריים, ד.; דמרץ, ש; ברגמן, ק.; et al. פוליהידרמניוס, תסמונת ברטר טרום לידתי חולפת ומוטציות MAGED2. N. Engl. J. Med. 2016, 374, 1853–1863. [CrossRef]

9. סיימון, דב; Lifton, RP הבסיס המולקולרי של אלקלוזה היפוקלמית תורשתית: תסמונות ברטר וגיטלמן. אמ. J. Physiol. 1996, 271, F961–F966. [CrossRef]

10. אביב, א.; Hollenberg, NK; Weder, A. הפרשת אשלגן בשתן ורגישות לנתרן אצל שחורים. יתר לחץ דם 2004, 43, 707–713. [CrossRef]

11. הורן, EJ; Walsh, SB; McCormick, JA; פירסטנברג, א.; יאנג, CL; רושל, ט.; פליאג', א.; האווי, AJ; קונלי, ג'; בכמן, ש.; et al. מעכב הקלציניורין tacrolimus מפעיל את קוטרנספורטר הנתרן כלוריד הכלייתי כדי לגרום ליתר לחץ דם. נאט. Med. 2011, 17, 1304–1309. [CrossRef] [PubMed]

12. בורשבסקי, א.; הימלקוס, נ.; בולדט, סי; בלנקנשטיין, KI; McCormick, JA; לזל, ר.; Willnow, TE; ינקובסקי, ו.; מישור, א.; בלייך, מ.; et al. Calcineurin ורצפטור הקשור למיון עם חוזרות מסוג A פועלות באינטראקציה כדי לווסת את הכליות Na( פלוס )-K( פלוס )-2Cl(-) Cotransporter. ריבה. Soc. נפרול. 2016, 27, 107–119. [CrossRef]

13. טרודו, מ.; יאנס, ש.; לנזני, ג.; Debaix, H.; שייפר, סי; איקהטה, מ.; Citterio, L.; דמרץ, ש; טרוויסאני, פ.; Ristagno, G.; et al. וריאנטים נפוצים של גן UMOD שאינם מקודדים מעוררים יתר לחץ דם רגיש למלח ונזק לכליות על ידי הגברת ביטוי האורמודולין. נאט. Med. 2013, 19, 1655–1660. [CrossRef]

14. Alvarez-Guerra, M.; Garay, RP Renal Na-K-Cl cotransporter NKCC2 בחולדות הרגישות למלח Dahl. J. Hypertens. 2002, 20, 721–727. [CrossRef]

15. קפאסו, ג'; ריזו, מ.; אוונגליסטה, סי; פרארי, פ.; Geelen, G.; לאנג, פ.; Bianchi, G. השתנה ביטוי של קרום פלזמה אפיקית כלייתית Na בתוספת טרנספורטרים בשלב המוקדם של יתר לחץ דם גנטי. אמ. J. Physiol. רן. פיזיול. 2005, 288, F1173–F1182. [CrossRef]

16. פנטון, ר"א; דגמי Knepper, MA Mouse ומנגנון ריכוז השתן במילניום החדש. פיזיול. Rev. 2007, 87, 1083–1112. [CrossRef] [PubMed]

17. קומהוף, מ.; Laghmani, K. MAGED2: צורה חדשה של תסמונת ברטר לפני הלידה. Curr. דעה. נפרול. יתר לחץ דם. 2018, 27, 323–328. [CrossRef]

18. חולות, JM ריכוז שתן ודילול בכליה המזדקנת. סמינר. נפרול. 2009, 29, 579–586. [CrossRef]

19. טיאן, י.; ריאזי, ש.; חאן, או.; קליין, JD; סוגימורה, י. Verbalis, JG; Ecelbarger, CA Renal ENaC, שפע קוטרנספורטר Na-K-2Cl ו-Na-Cl בחולדות F344 x חומות נורבגיה מיושנות ומוגבלת מים. כליות אינט. 2006, 69, 304–312. [CrossRef] [PubMed]

20. Schiessl, IM; Castrop, H. תקנה של שחבור וזרחון NKCC2. Curr. דעה. נפרול. יתר לחץ דם. 2015, 24, 457–462. [CrossRef] [PubMed]

21. דייויס, מ.; פרייזר, ס"א; גאליק, ש.; Choy, SW; קטרלוס, מ.; גלייך, ק.; קמפ, BE; הר, פ.פ; Power, DA מנגנונים חדשים של שימור Na פלוס בהשמנת יתר: זרחון של NKCC2 וויסות SPAK/OSR1 על ידי AMPK. אמ. J. Physiol. רן. פיזיול. 2014, 307, F96–F106. [CrossRef]

22. Gamba, G. ויסות פעילות NKCC2 על ידי איזופורמים קטועים SPAK. אמ. J. Physiol. רן. פיזיול. 2014, 306, F49–F50. [CrossRef] [PubMed]

23. אדוארדס, א.; קסטרופ, ח; לגמאני, ק.; ואלון, ו'; לייטון, AT השפעות של ויסות איזופורמים NKCC2 על הובלת NaCl בגפה עבה ועולה ומקולה דנסה: מחקר דוגמנות. אמ. J. Physiol. רן. פיזיול. 2014, 307, F137–F146. [CrossRef]

24. Vitale, A.; Denecke, J. שער הרטיקולום האנדופלזמי של מסלול ההפרשה. צמח. תא 1999, 11, 615–628. [PubMed]

25. קפלן, MJ קוטביות ממברנה בתאי אפיתל: מיון חלבונים והקמת תחומים מקוטבים. אמ. J. Physiol. 1997, 272, F425–F429. [CrossRef]

26. שמש, ז; Brodsky, JL בקרת איכות חלבון במסלול ההפרשה. J. Cell Biol 2019, 218, 3171–3187. [CrossRef] [PubMed]

27. רוג'אנו, א'; פורסטי, או.; Carvalho, P. בקרת איכות: השפלה הקשורה ל-ER: בקרת איכות חלבון ומעבר לכך. J. Cell Biol. 2014, 204, 869–879. [CrossRef] [PubMed]

28. Ruddock, LW; Molinari, M. N-glycan processing בבקרת איכות ER. J. Cell Sci. 2006, 119, 4373–4380. [CrossRef]

29. Molinari, M. N-glycan מבנה מכתיב הארכה של קיפול חלבון או תחילת סילוק. נאט. Chem. ביול. 2007, 3, 313–320. [CrossRef]

30. הברט, ד.נ.; Garman, SC; Molinari, M. הקוד הגליקני של הרשת האנדופלזמית: פחמימות מקושרות אספרגין כהבשלת חלבון ותגי בקרת איכות. טרנדים Cell Biol. 2005, 15, 364–370. [CrossRef]

31. איגדורה, ס"א; Herscovics, A.; לאל, א.; מורמן, KW; מוראלס, CR; Hermo, L. Alpha-mannosidases המעורבים בעיבוד N-glycan מראים ספציפיות תאים ותת-מחלקות מובהקת בתוך מנגנון Golgi של תאים באשך ובאפידידימיס. יורו J. Cell Biol. 1999, 78, 441–452. [CrossRef]

32. לדרקרמר, ג"ז; גליקמן, MH חלון הזדמנויות: תזמון פירוק חלבון על ידי חיתוך של סוכרים ו-ubiquitins. טרנדים ביוכימיה. Sci. 2005, 30, 297–303. [CrossRef] [PubMed]

33. סטנלי, פ.; Taniguchi, N.; Aebi, M. N-Glycans. ב- Essentials of Glycobiology, 3rd.; Varki, A., Cummings, RD, Esko, JD, Stanley, P., Hart, GW, Aebi, M., Darvill, AG, et al., Eds.; Cold Spring Harbor: ניו יורק, ניו יורק, ארה"ב, 2015; עמ' 99–111.

34. בארלו, סי.קיי; Miller, EA ביוגנזה של חלבון הפרשה ותעבורה במסלול ההפרשה המוקדם. גנטיקה 2013, 193, 383–410. [CrossRef]

35. וו, X.; Rapoport, TA תובנות מכניסטיות לגבי פירוק חלבון הקשור ל-ER. Curr. דעה. Cell Biol. 2018, 53, 22–28. [CrossRef]

36. שמש, ז; Brodsky, JL מסלול הפירוק של חלבון מודל מקופל שגוי נקבע על ידי נטיית צבירה. מול. Biol Cell. 2018, 29, 1422–1434. [CrossRef]

37. פרזנו, I.; Molinari, M. פינוי פרוטאזומלי וליזוזומלי של חלבונים מפרשים פגומים: מסלולי פירוק הקשורים ל-ER (ERAD) ו-ER-to-lysosome-associated degradation (ERLAD). קריט. כומר ביוכים. מול. ביול. 2019, 54, 153–163. [CrossRef] [PubMed]

38. בריאנט, ק.; ג'ונסון, נ.; Swanton, E. מערכות בקרת איכות של תחום טרנסממברנה פועלות ברטיקולום האנדופלזמי ובמנגנון Golgi. PLoS ONE 2017, 12, e0173924. [CrossRef] [PubMed]

39. Jensen, TJ; לו, מ.א.; פינד, ש; וויליאמס, DB; גולדברג, אל; Riordan, JR מערכות פרוטאוליטיות מרובות, כולל הפרוטאזום, תורמות לעיבוד CFTR. תא 1995, 83, 129–135. [CrossRef]

40. וורד, CL; אומורה, ש; Kopito, RR השפלה של CFTR על ידי מסלול Ubiquitin-Proteasome. תא 1995, 83, 121–127. [CrossRef]

41. גונג, ש; קיני, ד"ר; מולינארי, מ.; Zhou, Z. השפלה של תעלות מוטנטיות מסוג II מסוג פגום בתסמונת QT ארוכה על ידי מסלול Ubiquitin-Proteasome. ג'יי ביול. Chem. 2005, 280, 19419–19425. [CrossRef]

42. אודונל, ב.מ.; מאקי, TD; סוברמניה, א"ר; Brodsky, JL השפלה הקשורה לרשתית אנדופלזמית של תעלת האשלגן הכלייתית, ROMK, מובילה לתסמונת ברטר מסוג II. ג'יי ביול. Chem. 2017, 292, 12813–12827. [CrossRef] [PubMed]

43. Needham, PG; מיקולוק, ק.; Dhakarwal, P.; חדם, ש.; סניידר, AC; סוברמניה, א"ר; Brodsky, JL קוטרנספורטר NaCl הרגיש לתיאזיד מכוון לפירוק הקשור לרשת אנדופלזמית תלויה בצ'פרון. ג'יי ביול. Chem. 2011, 286, 43611–43621. [CrossRef] [PubMed]

44. זעאור, נ.; דמרץ, ש; דפונטיין, נ.; ז'ו, י.; Laghmani, K. מוטיבים דמויי Di-leucine שנשמרו מבחינה אבולוציונית מרובים בקצה הקרבוקסיל שולטים בסחר האנטרוגרד של NKCC2. ג'יי ביול. Chem. 2012, 287, 42642–42653. [CrossRef]

45. זעאור, נ.; דמרץ, ש; דפונטיין, נ.; מורדסיני, ד.; Laghmani, K. מוטיב שמור מאוד בקצה ה-COOH מכתיב את יציאת הרשת האנדופלזמית וביטוי פני התאים של NKCC2. ג'יי ביול. Chem. 2009, 284, 21752–21764. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​סיאיפן, ע.; דפונטיין, נ.; דמרץ, ש; זעאור, נ.; Laghmani, K. OS9 חלבון מקיים אינטראקציה עם Na-K-2Cl Co-Transporter (NKCC2) ומכוון לצורתו הבלתי בשלה לנתיב הפירוק הקשור לרשת האנדופלזמית. ג'יי ביול. Chem. 2016, 291, 4487–4502. [CrossRef]

47. Brodsky, JL התפקידים המגנים וההרסניים שמילאו מלווים מולקולריים במהלך ERAD (השפלה הקשורה ל-endoplasmic-reticulum). Biochem. י' 2007, 404, 353–363. [CrossRef]

48. Guerriero, CJ; Brodsky, JL האיזון העדין בין קיפול חלבון מופרש לבין השפלה הקשורה לרשת האנדופלזמית בפיזיולוגיה של האדם. פיזיול. Rev. 2012, 92, 537–576. [CrossRef]

49. אחנר, א.; גונג, X.; Frizzell, RA פירוק מווסת מוליכות טרנסממברנה של סיסטיק פיברוזיס: דיבור צולב בין מסלולי Ubiquitylation ו-SUMOylation. FEBS J. 2013, 280, 4430–4438. [CrossRef]

50. דונלי, BF; Needham, PG; סניידר, AC; רועי, א.; חדם, ש.; ברודסקי, JL; קומפלקסים מולטי-צ'פרונים של Subramanya, AR Hsp70 ו-Hsp90 מווסתים ברצף את הפירוק והביוגנזה הקשורה ל-cotransporter אנדופלזמי של רשתות קוטרנספורטר. ג'יי ביול. Chem. 2013, 288, 13124–13135. [CrossRef]

51. בנציאן, ב.; דמרץ, ש; דפונטיין, נ.; זעאור, נ.; Cheval, L.; בורז'ואה, ש.; קליין, ג; פרויסארט, מ.; בלנשרד, א.; פיילארד, מ.; et al. ביטוי משטח NKCC2 בתאי יונקים: ויסות מטה על ידי אינטראקציה חדשה עם אלדולאז BJ Biol. Chem. 2007, 282, 33817–33830. [CrossRef]

52. זעאור, נ.; דפונטיין, נ.; דמרץ, ש; אזרויאן, א.; Cheval, L.; Laghmani, K. Secretory carrier membrane protein 2 מסדיר את ההחדרה האקסוציטית של NKCC2 לממברנת התא. ג'יי ביול. Chem. 2011, 286, 9489–9502. [CrossRef]

53. באכוס-דואיהי, ד.; סיאיפן, ע.; דמרץ, ש; קומהוף, מ.; Laghmani, K. השפעות דיפרנציאליות של STCH ו-Hsp70 הניתן למתח על היציבות וההתבגרות של NKCC2. Int. י.מול. Sci. 2021, 22, 2207. [CrossRef]

54. הרסקוביץ', א'; שנייקרט, י. אתנאסיאדיס, א.; Moremen, KW בידוד של cDNA של עכבר Golgi mannosidase, חבר במשפחת גנים שנשמרה משמרים ליונקים. ג'יי ביול. Chem. 1994, 269, 9864–9871. [CrossRef]

55. טמפל, ו.; Karaveg, K.; ליו, ZJ; רוז, ג'; וואנג, לפני הספירה; Moremen, KW מבנה של עכבר Golgi alpha-mannosidase IA חושף את הבסיס המולקולרי לספציפיות המצע בקרב סוג 1 (משפחה 47 גליקוזילהידרולאזות) alpha1,2-mannosidases. ג'יי ביול. Chem. 2004, 279, 29774–29786. [CrossRef]

56. טולסיאני, ד"ר; Touster, O. הטיהור והאפיון של mannosidase IA ממברנות כבד גולגי עכברוש. ג'יי ביול. Chem. 1988, 263, 5408–5417. [CrossRef]

57. Hosokawa, N.; אתה, ז.; Tremblay, LO; נאגאטה, ק.; Herscovics, A. גירוי של ERAD של אנטי טריפסין הונג קונג אלפא1- מקופל שגוי על ידי Golgi alpha1,2-mannosidases. Biochem. ביופיס. מילון Commun. 2007, 362, 626–632. [CrossRef] [PubMed]

58. עוגן-שטרן, נ.; אבזוב, ע.; שנקמן, מ.; בניאיר, ר.; Lederkremer, GZ Mannosidase IA עוסק בשלפוחיות בקרת איכות ומשתתף במיקוד גליקופרוטאינים ל-ERAD. י.מול. ביול. 2016, 428, 3194–3205. [CrossRef]

59. יאנוטי, MJ; פיגרד, ל.; Sokac, AM; Sifers, RN A Mannosidase מקומי של Golgi (MAN1B1) ממלא תפקיד שומר סף לא אנזימטי בבקרת איכות ביו-סינתזה של חלבון. ג'יי ביול. Chem. 2014, 289, 11844–11858. [CrossRef] [PubMed]

60. פאן, ש.; צ'נג, X.; Sifers, RN Golgi-situated endoplasmic reticulum alpha-1, 2-mannosidase תורם לשליפה של מצעי ERAD באמצעות אינטראקציה ישירה עם גמא-COP. מול. ביול. תא 2013, 24, 1111–1121. [CrossRef] [PubMed]

61. שאוקאט, א; באכוס-דואיהי, ד.; ז'ו, י.; סיאיפן, ע.; דמרץ, ש; Frachon, N.; וובר, ש.; קומהוף, מ.; ורגאס-פוסו, ר.; Laghmani, K. תובנות חדשות על התפקיד של השפלה הקשורה לרשת האנדופלזמית בתסמונת Bartter Type 1. Hum. מוטאט. 2021, 42, 947–968. [CrossRef]

62. פוג'יטה, E.; קורוקו, י.; איסואי, א.; קומגאי, ה.; מיסוטני, א.; Matsuda, C.; חיישי, י"ק; Momoi, T. שתי מערכות השפלה הקשורות לרשת אנדופלזמית (ERAD) עבור הגרסה החדשה של הדיספרלין המוטנטי: Ubiquitin/פרוטאזום ERAD(I) ואוטופאגיה/ליזוזום ERAD(II). זִמזוּם. מול. ג'נט. 2007, 16, 618–629. [CrossRef]

63. ברנסקוני, ר.; Molinari, M. ERAD ו-ERAD כוונון: סילוק מטענים ושל ווסתי ERAD מ-ER של יונקים. Curr. דעה. תָא. ביול. 2011, 23, 176–183. [CrossRef]

64. ארוואן, פ.; ז'או, X.; ראמוס-קסטנדה, י. Chang, A. בקרת איכות מסלול ההפרשה הפועלת בגולגי, פלזמהלמה ומערכות אנדוזומליות. תנועה 2002, 3, 771–780. [CrossRef]

65. שטולץ, א.; Wolf, DH פירוק חלבון הקשור לרשת אנדופלזמית: מסע בסיוע מלווה לגיהנום. ביוכים. ביופיס. Acta 2010, 1803, 694–705. [CrossRef] [PubMed]

66. וואנג, פ.; שיר, ו.; ברנקאטי, ג.; Segatori, L. עיכוב של השפלה הקשורה לרשת האנדופלזמית מציל את הקיפול הילידים באובדן תפקוד של מחלות מתקפל שגוי של חלבון. ג'יי ביול. Chem. 2011, 286, 43454–43464. [CrossRef] [PubMed]

67. Tokunaga, F.; Brostrom, C.; Koide, T.; Arvan, P. Endoplasmic reticulum (ER) הקשורים לפירוק של גליקופרוטאין N-linked שגוי מדוכא עם עיכוב של ER mannosidase IJ Biol. Chem. 2000, 275, 40757–40764. [CrossRef] [PubMed]

68. גרויסמן, ב.; שנקמן, מ.; רון, ע.; Lederkremer, GZ זמירת מאנוז נדרשת לאספקה ​​של גליקופרוטאין מ-EDEM1 ל-XTP3-B ושלבי פירוק מאוחרים הקשורים לרשת האנדופלזמית. ג'יי ביול. Chem. 2011, 286, 1292–1300. [CrossRef] [PubMed]

69. ורגאס-פוסו, ר.; פלדמן, ד.; וולמר, מ.; קונרד, מ.; קלי, ל.; ואן דן היובל, LP; טבורבי, ל. ברנדיס, מ.; קרולי, ל.; Hebert, SC; et al. וריאנטים מולקולריים חדשים של הגן Cotransporter Na-K-2Cl אחראים לתסמונת ברטר לפני הלידה. אמ. ג'יי המם. ג'נט. 1998, 62, 1332–1340. [CrossRef] [PubMed]

70. הלניוס, א.; Aebi, M. תפקידים של גליקנים מקושרים ל-N ברטיקולום האנדופלזמי. אננו. כומר ביוכים. 2004, 73, 1019–1049. [CrossRef]

71. Spiro, RG תפקידם של אוליגוסכרידים פולימנוזים מקושרים במיקוד לגליקופרוטאינים לפירוק הקשור לרשת האנדופלזמית. תא מול. Life Sci. 2004, 61, 1025–1041. [CrossRef]

72. מרקוס, ניו יורק; Perlmutter, DH מעכבי גלוקוזידאז ומנוזידאז מתווכים הפרשה מוגברת של אנטי-טריפסין אלפא1 מוטנטי ZJ Biol. Chem. 2000, 275, 1987–1992. [CrossRef]

73. ליו, י.; צ'ודהורי, פ.; Cabral, CM; Sifers, RN סילוק תוך-תאי של אנטיטריפסין אנושי אלפא1- מקופל בצורה לא מלאה כרוך בשחרור מקלנקסין ובחיתוך שלאחר תרגום של אוליגוסכרידים מקושרים לאספרגין. ג'יי ביול. Chem. 1997, 272, 7946–7951. [CrossRef] [PubMed]

74. קברל, ס"מ; ליו, י.; Sifers, RN מנתח בקרת איכות גליקופרוטאין במסלול ההפרשה. טרנדים ביוכימיה. Sci. 2001, 26, 619–624. [CrossRef]

75. ארמונבל, מ.; קיצמולר, סי; מיר, אמ; Cacan, R.; Ivessa, NE מבנה N-glycan של וריאנט קצר מועד של ribophorin I המתבטא בקו התאים הפגום בגליקוזילציה MadIA214 חושף את תפקידו של מנוסידאז שאינו ER mannosidase I בתהליך של פירוק גליקופרוטאין. גליקוביולוגיה 2001, 11, 565–576. [CrossRef] [PubMed]

76. Foulquier, F.; שמיכת פוך, ש.; קליין, א.; מיר, אמ; Chirat, F.; Cacan, R. Endoplasmic reticulum-associated degradation של גליקופרוטאין הנושאים Man5GlcNAc2 ו-Man9GlcNAc2 בשורת התאים MI8-5 CHO. יורו J. Biochem. 2004, 271, 398–404. [CrossRef]

77. אבזוב, ע.; פרנקל, ז; ארליך, מ.; Herscovics, A.; Lederkremer, GZ Endoplasmic reticulum (ER) mannosidase אני ממוגן ונדרש לקיצוץ N-glycan ל-Man5-6GlcNAc2 בפירוק הקשור ל-Glycoprotein ER. מול. ביול. תא 2008, 19, 216–225. [CrossRef]

78. Hosokawa, N.; Tremblay, LO; אתה, ז.; Herscovics, A.; וואדה, א.; Nagata, K. Enhancement of degradation endoplasmic reticulum (ER) של Null Hong Kong alpha1-antitrypsin שגוי מקופל על ידי ER mannosidase IJ Biol. Chem. 2003, 278, 26287–26294. [CrossRef]

79. Sifers, RN ביולוגיה של התא. פירוק חלבון נפתח. מדע 2003, 299, 1330–1331. [CrossRef]

80. וו, י.; Swulius, MT; מורמן, KW; Sifers, RN הבהרה של ההיגיון המולקולרי שבאמצעותו נבחר אנטיטריפסין אלפא 1-שקופל בצורה לא נכונה לפירוק. פרוק. נאטל. אקד. Sci. ארה"ב 2003, 100, 8229–8234. [CrossRef] [PubMed]

81. Hirao, K.; נאטסוקה, י.; תמורה, ט; וואדה, א.; מוריטו, ד.; נאטסוקה, ש.; רומרו, פ.; סלנו, ב.; Tremblay, LO; Herscovics, A.; et al. EDEM3, הומלוג EDEM מסיס, משפר את הפירוק האנדופלזמי הקשור לרשתות הגליקופרוטאין ואת חיתוך מנוז. ג'יי ביול. Chem. 2006, 281, 9650–9658. [CrossRef]

82. אוליברי, ש.; קאלי, ט.; סאלו, KE; Paganetti, P.; Ruddock, LW; Molinari, M. EDEM1 מסדיר את השפלה הקשורה ל-ER על ידי האצת דה-mannosylation של פוליפפטידים פגומים מתקפלים ועל ידי עיכוב צבירה קוולנטית שלהם. Biochem. ביופיס. מילון Commun. 2006, 349, 1278–1284. [CrossRef] [PubMed]

83. Bieberich, E.; Bause, E. Man9-mannosidase מהכליה האנושית מתבטא בתאי COS בתור N-glycoprotein טרנסממברני מסוג II תושב Golgi. יורו J. Biochem. 1995, 233, 644–649. [CrossRef] [PubMed]

84. ולסקו, א.; הנדריקס, ל.; מורמן, KW; טולסיאני, ד"ר; טוסטר, או.; Farquhar, MG וריאציות תלויות בסוג התא בהתפלגות התת-תאית של אלפא-מאנזידאז I ו-II. J. Cell Biol. 1993, 122, 39–51. [CrossRef] [PubMed]

85. Bieberich, E.; טרמל, ק.; וולקר, סי; רולפס, א.; קלז-פולר, ב.; Bause, E. Man9-mannosidase מכבד חזיר הוא חלבון ממברנה מסוג II השוכן ברשת האנדופלזמית. שיבוט cDNA וביטוי של האנזים בתאי COS 1. יורו J. Biochem. 1997, 246, 681–689. [CrossRef]

86. רון, ע.; שנקמן, מ.; גרויסמן, ב.; איזנשטיין, י.; לייטמן, י. Lederkremer, GZ מעקף של משלוח גליקופרוטאין תלוי גליקן ל-ERAD על ידי EDEM1 מווסת למעלה. מול. ביול. תא 2011, 22, 3945–3954. [CrossRef]

87. Casagrande, R.; שטרן, פ.; דיהן, מ.; שמו, ג; אוסריו, מ.; זוניגה, מ.; בראון, פו; Ploegh, H. פירוק חלבונים מה-ER של S. cerevisiae דורש מסלול תגובה חלבוני פרוש שלם. מול. תא 2000, 5, 729–735. [CrossRef]

88. שרדר, מ.; קאופמן, מתח RJ ER ותגובת החלבון שהתפרשה. מוטאט. מילון 2005, 569, 29–63. [CrossRef]

89. ליאנג, CJ; Chang, YC; צ'אנג, HC; וואנג, סי.קיי; Hung, YC; לין, YE; צ'אן, CC; חן, CH; צ'אנג, HY; Sang, TK Derlin-1 מווסת פתוגנזה מקושרת VCP מוטנטית ואפופטוזיס הנגרמת על רקע אנדופלזמי. PLoS Genet. 2014, 10, e1004675. [CrossRef] [PubMed]

90. Houck, SA; סינג, ס.; Cyr, DM תגובות סלולריות לחלבונים שקופלו בצורה שגויה ולצבירי חלבון. שיטות מול. ביול. 2012, 832, 455–461. [CrossRef] [PubMed]

91. Chaudhuri, TK; Paul, S. מחלות מתקפל שגוי של חלבון וגישות טיפוליות מבוססות מלווה. FEBS J. 2006, 273, 1331–1349. [CrossRef]

92. ידב, ק.; ידב, א.; ושיסטה, פ.; פאנדי, סמנכ"ל; Dwivedi, מחלות מתקפל שגוי של חלבון של האו"ם וגישות טיפוליות. Curr. חֶלְבּוֹן. פפט. Sci. 2019, 20, 1226–1245. [CrossRef]

93. פרזנו, I.; Molinari, M. Endoplasmic reticulum turnover: ER-page וטעמים אחרים בפינוי ER סלקטיבי ולא סלקטיבי. F1000Res 2018, 7, 454. [CrossRef]

94. Okiyoneda, T.; Apaja, ראש הממשלה; Lukacs, GL בקרת איכות חלבון בממברנת הפלזמה. Curr. דעה. Cell Biol. 2011, 23, 483–491. [CrossRef]

95. Caldwell, SR; היל, ק"ג; Cooper, AA השפלה של מצעי בקרת איכות אנדופלזמית (ER) דורשת הובלה בין ה-ER ל-Golgi. ג'יי ביול. Chem. 2001, 276, 23296–23303. [CrossRef] [PubMed]

96. מוניות, ג.; פוגל, פ.; וולף, DH תעבורת ER-Golgi היא תנאי מוקדם להשפלה יעילה של ER. מול. ביול. תא 2002, 13, 1806–1818. [CrossRef] [PubMed]

97. ושיסט, ש.; Ng, DT חלבונים שגויים מקופלים ממוינים על ידי מנגנון ביקורת רציף של בקרת איכות ER. J. Cell Biol. 2004, 165, 41–52. [CrossRef] [PubMed]

98. שמידט, או.; וייר, י.; באומן, ו.; ווידרין, מ.א.; אייסינג, ש.; אנג'לובה, מ.; שליפר, א.; קרמסר, ל.; לינדנר, ה.; פיטר, מ.; et al. פירוק אנדוזום ו-Golgi-associated (EGAD) של חלבוני ממברנה מווסת את חילוף החומרים של ספינגוליפידים. EMBO J. 2019, 38, e101433. [CrossRef]

99. פאן, ש.; וואנג, ס.; אוטאמה, ב.; הואנג, ל.; בלוק, נ.; אסטס, ח"כ; מורמן, KW; Sifers, RN Golgi לוקליזציה של ERManI מגדירה את ההפרדה המרחבית של מערכת בקרת איכות הגליקופרוטאין של יונקים. מול. ביול. תא 2011, 22, 2810–2822. [CrossRef]

סילבי דמרץ 1,2, אלי סיאייפאן 1,2,† , דלאל בכוס-דואיהי 1,2, נדיה פרחון 1,2, מרטין קומהוף 3 וקאמל לגמאני 1,2,

1 Centre de Recherche des Cordeliers, Sorbonne University, Inserm, Université de Paris, F-75006 פריז, צרפת; sylvie.demaretz@sorbonne-universite.fr (SD); elie.seaayfan@uni-marburg.de (ES); dalal.bakhos_aldouaihy@sorbonne-universite.fr (DB-D.); nadia.frachon@sorbonne-universite.fr (NF)

2 CNRS, ERL8228, F-75006 פריז, צרפת

חטיבה 3 לנפרולוגיה והשתלות ילדים, בית החולים האוניברסיטאי לילדים, אוניברסיטת פיליפ, 35043 מרבורג, גרמניה; Martin.Koemhoff@uk-gm.de