האם סאונות מועילות או מזיקות למחלת כליות פוליציסטית אוטוזומלית דומיננטית? בחינה עם דגם Mouse Ⅰ

רקע תקציר:חלבוני הלם חום (Hsps), שביטוים מושרה על ידיטיפול תרמי, לתפקד בהגנה על הכליותעל ידידיכוי אפופטוזיסושמירה על יכולת הצינורית הכלייתית. יתרה מכך, לאחרונה, הוכח שביטוי של Hsps יכול להוות מטרה טיפולית למחלת כליות פוליציסטית אוטוזומלית דומיננטית (ADPKD). חקרנו אתהשפעה של טיפול בסאונה יבשהעל עכברים מדגם ADPKD.

לחץ כאן כדי לקבל תמצית CISTANCHE אורגנית טבעית עם 25% אכינאקוסיד ו-9% אקטוזיד לתפקוד הכליה

שיטות ותוצאות:העכברים (זכרים עכברי DBA/2FG-pay) סווגו לשלוש קבוצות: ביקורת, TS: עכברים משלמים שהועברו לסאונה ממושכת עם מים מנוהלים המכילים 4% סוכרוז, SW: תשלום לעכברים שקיבלו מים המכילים 4% סוכרוז. קבוצת TS עברה סאונה פעמיים בשבוע במשך ארבעה שבועות. קבוצת ה-TS הגיעה ונשמרה בטמפרטורות פי הטבעת של כ-39.0 מעלות עד שהוסרו בזהירות ממכשיר האינפרא אדום הרחוק. לאחר 4 שבועות של טיפול בסאונה, רמות קריאטינין ודם-אוריאה-חנקן (BUN) נקבעו בשיטה אנזימטית. חלבון הלם חום (HSP) או חלבונים הקשורים לצמיחת תאים ולגודל נותחו על ידי סופג מערבי. קבוצת ה-TS הציגה רמות קריאטינין ו-BUN גבוהות יותר באופן שולי מאשר קבוצות הביקורת וה-SW, עם זאת, ההבדלים לא היו משמעותיים. עם זאת, הגדלת ציסטה בקבוצת ה-TS פחתה משמעותית בהשוואה לזו של קבוצת הביקורת. ביטוי HSP90 ירד מעט בקבוצות TS ו-SW ביחס לקבוצת הביקורת (p < 0.01 או p < 0.001, לעומת בקרה), כמו גם ביטוי Erk , אשר מקושר להתפתחות ציסטה והתפשטות (p < 0.05, TS לעומת שליטה). ביטוי Hsp27 ורמת זרחון בקבוצת ה-SW היו דומים לזו של קבוצת הביקורת. עם זאת, בקבוצת ה-TS היו רמות מוגברות של Hsp27 וזרחון (NS). הביטוי של פרו-קספאז-3 בקבוצת ה-TS היה נמוך במעט מזה בקבוצת הביקורת. עם זאת, הפעילות של caspase-3 בכל הקבוצות לא הראתה הבדלים.

סיכום:הממצאים של מחקר זה הצביעו על כך ש-4 שבועות של טיפול בסאונה עלולים לגרום להתייבשות חולפת ולהפרעות בתפקוד הכליות הקשורות ולהוביל לסיכון לגירוי צמיחת ציסטה על ידי ביטוי מוגבר של Hsp27. יתרה מכך, הגענו למסקנה שניתן לדכא מניעת התייבשות וצמיחת ציסטה על ידי נטילת כמות מתאימה של מים ישירות לאחר טיפול בסאונה.

הקדמה

מחלת כליות פוליציסטית אוטוזומלית דומיננטית(ADPKD) היא הפרעה גנטית המאופיינת בצמיחה של ציסטות רבות בשתי הכליות. ADPKD נגרמת בעיקר על ידי מוטציות בגנים של מחלת כליות פוליציסטית 1 (PKD1) ו-PKD2, המקודדות לפוליציסטין 1 (PC1) ו-PC2, בהתאמה. במהלך עשרות שנים של המחלה, חולים מפתחים ציסטות כליות גדולות מלאות נוזלים הפוגעות בתפקוד הכליות. נכון לעכשיו, מספר החולים עם ADPKD ביפן מוערך ב-31,000, המהווים כ-3-5% מכלל חולי הדיאליזה). כ-50% מהחולים עם ADPKD מפתחים מחלת כליות סופנית עד גיל 602). Tolvaptan, אנטגוניסט לקולטן וזופרסין 2 (V2), אושר כסוכן הטיפולי הראשון ל-ADPKD, והשימוש הקליני בו החל במאי 2014 ביפן). למרות שמדובר בתרופה יעילה המפחיתה את קצב גדילת הציסטות, אין כיום תרופה ל-ADPKD, ולא ניתן לעצור את היווצרות הציסטות בכליות.

טיפול תרמי, כולל בלנאותרפיה (BT) וטיפול ספא (ST), נמצא בשימוש תכוף בעולם כטיפול פיזיותרפי או אלטרנטיבי. במסגרות קליניות, המטרה העיקרית של טיפול תרמי היא להשיג תוצאות טיפול יעילות מבלי לפגוע ברקמות נורמליות. סקירה שיטתית עדכנית הראתה כי BT ו-ST מספקים הקלה משמעותית בכאב ושיפור איכות החיים במחלות כרוניות של מערכת השרירים והשלד או רקמת החיבור). גירוי תרמי גורם לחלבוני הלם חום (Hsps) החיוניים להישרדות התא באמצעות תפקידם כמדריכי חלבון. התפקיד של Hsps בבריאות הכליות ובמחלות משתנה. אינדוקציה של Hsps עשויה להיות מועילה או מזיקה לכליה, בהתאם ל-Hsps הספציפיים, סוג התא והקשר). ברקמת הכליה, Hsps הם חלק חשוב ממערכת ההגנה התוך תאית, המופעלת על ידי סוגים שונים של מתח תאי. ה-Hsps השונים בתוך התא מייצבים את מבני התא ומגבירים את עמידות התא בפני אפופטוזיס ונמק6), 7). בשנים האחרונות דווח כי Hsps ממלאים תפקיד מזיק ב-ADPKD, ולכן הם מטרות טיפוליות8), 9). לפיכך, מטרתנו הייתה לחקור את ההשפעה של סאונות על חיות מודל ADPKD, כאשר עומס החום שמעלה את הטמפרטורה של פי הטבעת בכ-2 מעלות ושומר עליה למשך כ-30 דקות חוזר על עצמו. II חומרים ושיטות 1. מודל עכבר של מחלת כליות פוליציסטית אוטוזומלית דומיננטית (ADPKD) כל ההליכים בבעלי חיים נערכו בהתאם להנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שאושרו על ידי אוניברסיטת Kumamoto Health Science (מס' 18-07) . עכברי DBA/2FG-pcy (pcy) זכרים10), 11) (בני 8 שבועות, n=12) (Kyudo, Kumamoto, יפן) עם משקל גוף התחלתי של 20.9±0.7 גרם שימשו כעכברי ADPKD במודל זה לְנַסוֹת. עכברי DBA זכרים (8 שבועות, n=3) שימשו כהתייחסות למודל העכבר ADPKD. איור 1 מציג את המראה ואת הכליה שנכרתה כדוגמאות טיפוסיות של עכברים pcy (איור 1A, B). כל החיות אוכסנו תחת לחות וטמפרטורה מבוקרת עם מחזור אור/חושך של 12:12- שעות וקיבלו גישה חופשית למאכל עכבר סטנדרטי ולמי ברז.

תשעה עכברי pcy (בני 8 שבועות) חולקו אקראית לשלוש הקבוצות הבאות - קבוצת ביקורת: עכברי pcy כביקורת (n=3), קבוצת TS: עכברי pcy שנחשפו לגירוי תרמי מערכתי חוזר ונשנה (n {{3} }); וקבוצת SW: עכברי pcy שסופקו להם מים המכילים 4% סוכרוז (n=3). לעכברים בקבוצת ה-TS סופקו מים המכילים 4% סוכרוז למשך הלילה, בעקבות גירוי תרמי מערכתי למניעת התייבשות. במחקר קודם, מצאנו שהירידה במשקל הגוף הייתה בערך 3-4% לאחר גירוי תרמי מערכתי12). כאשר 4% מי סוכרוז ניתנו לעכברי pcy, כמות המים שנצרכה עלתה באופן משמעותי מ-5.6 ± 0.6 מ"ל ל-7.4 ± 0.7 מ"ל (p < 0.001 , איור 1C). צריכת מים של 4% סוכרוז במשך לילה הייתה אכן צריכת נוזלים גבוהה שווה ערך ל-14 ± 7% ממשקל הגוף. קבוצת SW צרכה מים במשך הלילה באותה תדירות כמו קבוצת TS.

איור 1 א: עכבר DBA (Lt) ועכבר 2FG-pcy (Rt). ב: כליה של DBA (Lt) או 2FG-pcy (Rt), סרגל קנה מידה=1 ס"מ. ג: צריכת כמות המים או 4% מי הסוכרוז בלילה לאחר סאונה לעכברים חכמים בגיל 8 שבועות. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. n=3. ＊＊＊ p < 0.001 (ניתוח סטטיסטי השתמש במבחן T מצמד).

2. גירוי תרמי מערכתי (סאונה)

עוצמת החום של הסאונה נקבעה בהתייחס למחקר קודם13). עם זאת, הטמפרטורה של פי הטבעת של חלק מעכברי ה-pcy עלתה על 42 מעלות בגלל נפח הגוף הקטן שלהם בהשוואה לאלו של עכברי DBA רגילים ועכברי 129X1/SvJ. לכן, נוסתה העלאת טמפרטורת פי הטבעת ב-1 מעלה, אך בשל מגבלת השליטה במערכת הסאונה היבשה בקרני אינפרא אדום רחוקות (שסופקה על ידי אוניברסיטת קגושימה), הטמפרטורה של פי הטבעת נקבעה לעלות לכ-39 מעלות. לא נמצאו דיווחים על תדירות ה- sau nas עבור ADPKD; לפיכך, אומצה תדירות הסאונה האפקטיבית המינימלית (פעמיים בשבוע) שנקבעה במחקר על הקשר בין רחצה בסאונה ומחלות לב וכלי דם וגורמי תמותה אחרים על ידי Laukkanen et al.14). באופן ספציפי, העכברים קיבלו טיפול בסאונה ב-43 מעלות למשך עשר דקות ולאחר מכן ב-37 מעלות למשך 35 דקות כדי להעלות את הטמפרטורה של פי הטבעת מ-37.1 ± 0.1 מעלות ל-39.3 ± 0.3 מעלות באמצעות מערכת סאונה יבשה מקרן אינפרא אדום רחוקה. טמפרטורות פי הטבעת של עכברים נשמרו על 39.0 מעלות בקירוב, עד שהוצאו ממכשיר הסאונה. קבוצת ה-TS נחשפה לסאונה במשך ארבעה שבועות, פעמיים בשבוע.

3. הליך אנליטי

נתונים פיזיולוגיים התקבלו מכל העכברים בתום תקופת המחקר בת ארבעה שבועות. דגימות שתן של 24 שעות נאספו בכלובים מטבוליים, ונקבעה צריכת נוזלים. דגימות דם נאספו מהווריד הנבוב התחתון, ורמות הקראטינין בפלזמה וחנקן אוריאה בדם (BUN) נמדדו באמצעות מנתח אוטומטי של Hitachi 7180 Biochemistry (Hitachi High-Technologies Corporation, טוקיו, יפן), עם Aqua-auto Kainos CRE ערכת בדיקה -II או ערכת בדיקה של UN-II (Kainos, טוקיו, יפן) בשיטה האנזימטית.

4. מחקרים היסטולוגיים

הכליות נקבעו בתמיסת חיץ פרפורמלדהיד פוספט 4% והוטמעו בפרפין. דגימות כליה נחתכו במרווחים של 2-µm והוצבעו בהמטוקסילין ואאוזין (H&E), והציסטות של הצינוריות כומתו על 2 מקטעים/עכבר (כליה ימנית) באמצעות ImageJ (המכונים הלאומיים לבריאות, בת'סדה, מרילנד, ארה"ב). אזורים עם קרעי רקמה ובועות שזוהו בהגדלה גבוהה יותר (× 40) לא נכללו בניתוח, כפי שדווח בעבר15).

5. סופג ווסטרן

אלקטרופורזה של ג'ל סודיום דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד (SDS-PAGE) והספיגה בוצעו באמצעות נהלים סטנדרטיים. מנות המכילות 15 מיקרוגרם חלבון הועברו ל-SDS-PAGE. נעשה שימוש בנוגדנים שהועלו כנגד החלבונים הבאים: Hsp27 (1:1,000, sc-9012, Santa Cruz Biotechnology), phospho-Hsp27 (1:1,000, #2401S, Cell Signaling Technology), total-Akt (1:1,000, #9272, Cell Signaling Technology), phospho-Akt (1:1,000, #9275, Cell Signaling Technology), Erk1 /2 (1:1,000, #9102, Cell Signaling Technology), phospho-Erk1/2 (1:1,000, #9101, Cell Signaling Technology), mTOR (1:1 ,000, #2972, Cell Signaling Technology), phospho-mTOR (1:1,000, #2971, Cell Signaling Technology), caspase 3 (1:500, ab4051, Abcam, Cambridge, UK), caspase מפוצל-3 (1:1,000, #9661, Cell Signaling Technology), ו-actin (1:1,000, sc-130656, סנטה קרוז ביוטכנולוגיה). כתמים זוהו באמצעות מערכת ECL Prime western blotting זיהוי (GE Healthcare, בריטניה) בהתאם להוראות היצרן. הנתונים הראו כימות יחסי מול -אקטין, ששימש כבקרה פנימית.

6. ניתוח סטטיסטי

לצורך ניתוח סטטיסטי, נתונים בין קבוצות TS ו-SW הושוו באמצעות מבחן Mann-Whitney U. קבוצות הושוו באמצעות ניתוח שונות של שונות (ANOVA) ולאחר מכן הבדיקה של Tukey כדי לזהות הבדלים. הבדלים נחשבו מובהקים סטטיסטית ב-p < 0.05. הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית תקן (SD) או ממוצע ± טעות תקן של הממוצע (SEM). GraphPad Prism 6 (תוכנת GraphPad, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב) שימש לניתוח סטטיסטי.

השירות התומך של Wecistanche - יצואנית ה-cistanche הגדולה בסין:

דוא"ל:wallence.suen@wecistanche.com

ווטסאפ/טלפון:+86 15292862950

קנה לפרטי מפרטים נוספים:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop