פעילות נוגדת חמצון, פרופיל פנולי ופוטנציאל הגנה על נפרו של אנסטטיקה הירושונטיקה תמציות אתנוליות ומימיות נגד CCl4-הנגרמת רעילות נפרוטית אצל חולדות

איש קשר:ali.ma@wecistanche.com

Tariq I. Almundarij et al

תַקצִיר:Kaff-e-Mariam (Anastatica hierochuntica L.) נמצא בשימוש נרחב לטיפול במגוון בעיות בריאותיות, בעיקר כדי להקל על הלידה ולהקל על הפרעות הקשורות למערכת הרבייה. מחקר זה נועד להעריך את ההשפעה של A. hierophantic ethanolic (KEE), וחילוץ מימי (KAE) CCl4-גרמו ללחץ חמצוני ורעילות נפרו אצל חולדות המשתמשות בסמנים ביוכימיים עבורשֶׁל הַכְּלָיוֹתפונקציותומצב נוגד חמצון וכן בדיקות היסטופתולוגיות של רקמת כליה.א. hierophantic הכיל 67.49 מ"ג GAE g−1 מכלל תרכובות פנוליות (TPC), 3.51 מיקרוגרם g−1 מכלל קרוטנואידים (TC), ו-49.78 ו-17.45 מ"ג QE g−1 של סך הפלבנואידים (TF) וסה"כ פלבנולים (TFL), בהתאמה. זה הביא ל-128.71 מיקרומול של TE g−1 של DPPH-RSA ו-141.92 מיקרומול של TE g−1 של ABTS-RSA. A. hierophantic הציג מעולהפעילות נוגדת חמצוןעל ידי עיכוב רדיקלי חומצה לינולאית וקליטציה של מתכות חמצון. ניתוח HPLC הביא ל-9 ו-21 חומצות פנוליות ו-6 ו-2 פלבנואידים בKEEו-KAE עם דומיננטיות של חומצות סינאפיות וסירינגיות, בהתאמה. הזרקה תוך שרירית של vit. E פלוס Se ומתן פומי של KEE, KAE ו-KEE פלוס KAE ב-250 מ"ג ק"ג-1 משקל גוף החזירו משמעותית את רמות הקראטינין, אוריאה, K, סך החלבון והאלבומין בסרום. בנוסף, הם הפחיתו את המלונדידאלדהיד (MOD), החזירו את רמות הגלוטתיון המופחתות (GSH) והגבירו את רמות הסופראוקסיד דיסמוטאז (SOD). KEE, KAE ו-KEE פלוס KAE הגנו עלכליותמ-CCl4-רעילות נפרו שכן הם החלישו בעיקר מתח חמצוני שנגרם. סך הכלנפרוןהסעיף היה בערך 83.27 אחוזים, 97.62 אחוזים ו-78.85 אחוזים עבור KEE, KAE ו-KEE פלוס KAE, בהתאמה. שניהם ויט. תמציות הירופנטיות E פלוס Se ו-A. החלישו את השינוי ההיסטופתולוגי בחולדות שטופלו ב-CCl4-. לסיכום, ל-A. hierophantic, במיוחד ל-KAE, יש יכולת פוטנציאלית להחזיר יציבות חמצונית ולשפרכִּליָהפונקציה לאחר CCl4פגיעה חריפה בכליותיותר טוב מ-KEE. לכן, ל- A. hierophantic יש פוטנציאל להיות סוכן טיפולי שימושי בטיפול בנפרוטוקסיות הנגרמת על ידי תרופות.

מילות מפתח:קפה-א-מרים; פוליפנולים; פעילות ביולוגית; מטבוליטים משניים;סמני כליות; אנזימים נוגדי חמצון;שֶׁל הַכְּלָיוֹתתִפקוּד לָקוּי

Cistanche NZ למניעת מחלת כליות, לחץ כאן כדי לקבל את הדוגמה

1. הקדמה

מחלת כליותהוא גורם המוות ה-9 המוביל עם יותר מ-1 מתוך 7, כלומר, 15 אחוז מהמבוגרים בארה"ב או 37 מיליון אנשים, מוערכיםמחלת כליות כרונית(CKD) [1]. באופן מדהים, הסיבה השכיחה ביותר ל-CKD כפי שתועדה בשנת 2015 היא סוכרת ואחריה לחץ דם גבוה וגלומרולונפריטיס [2]. סיבות אחרות ל-CKD כוללות אידיופטיות (לרוב קשורות לכליות קטנות באולטרסאונד כליות) [3]. בעבר, CCl4 שימש להסרת שומנים מתכת, ניקוי יבש, הכתמת בדים, נוזלי מטפים וחיטוי גרגרים [4]. זה גורם להפרעות חמורות בכבד, בריאות, באשכים וכן בדם על ידי יצירת רדיקלים חופשיים פעילים [5]. על פי הממצאים של Ogeturk et al. [6], חשיפה לממס זה מייצרת נזק כליות חריף וכרוני. מאמינים כי חמצון שומנים המושרה על ידי רדיקלים חופשיים הוא אחד הגורמים העיקריים לפגיעה בקרום התא, המוביל למגוון מצבים פתולוגיים [7]. יצירת רדיקלים תגובתיים הושפעה ברעילות נפרוטוקסית הנגרמת על ידי CCl4-, המעורבת בחמצן שומנים ובהצטברות של חלבונים לא מתפקדים, מה שמוביל לפציעות בכליות [8]. שימושים מדהימים ומסורתיים בצמחי מרפא גדלו בשנים האחרונות, וחקירות רבות אישרו את תפקידם הטיפולי כנגד מספר מחלות [9-12].

2. חומרים ושיטות

2.1. הכנה לדוגמא

דגימה של מפעל Kaff-e-Mariam (A. hierophantic L.) נרכשה משוק מקומי בעיר בוראיידה, אזור קאסים, ערב הסעודית. החומר הצמחי אושר על ידי המחלקה לייצור והגנת הצומח, המכללה לחקלאות ולרפואה וטרינרית, אוניברסיטת קאסים, ערב הסעודית. הדגימה נשטפה במי ברז נקיים כדי להסיר חול ולכלוך מהעלים ולאחר מכן חומר צמחי מיובש באוויר (בטמפרטורה של 28 ± 1 ◦C למשך 48 שעות) עבר אבקה מכנית ונשמר בשקיות פוליאתילן אטומות בטמפרטורה של 4 ± 1 ◦C עד לשימוש.

2.2. הכנת תמציות אתנוליות ומימיות

כ-200 גרם של A. hierophantic מיובש חולצו עם 300 מ"ל 70 אחוז אתנול במחלץ Soxhlet להכנת מיצוי אתנולי (KEE). התמצית רוכזה על ידי מאייד סיבובי ב-40 ◦C כדי לאדות את הממס שנותר, ולאחר מכן לייבוש תחת זרם N2. המיצוי המימי (KAE) בוצע כמתואר על ידי Asuzu [23] עם שינויים קלים. מאתיים גרם של חומר צמחי מיובש נוספו ל-500 מ"ל של מים מזוקקים חמים סטריליים. לאחר מכן התערובת נערה היטב והורתה לעמוד במשך שעה אחת. לאחר מכן הוצמד מעבה ריפלוקס לבקבוק ולאחר מכן חימם עד לרתיחה עדינה למשך 10 דקות, התקרר, נער היטב, וסונן דרך נייר סינון מס' 1 של Whatman. התסנין התאדה על ידי מאייד סיבובי, ולאחר מכן לייבוש תחת זרם N2. התמציות האלכוהוליות והמימיות (250 מ"ג מ"ל-1) עוצבו טרי במים מזוקקים לשימוש למתן דרך הפה.

2.3. תוכן פנולי כולל (TPC)

תוכן ה-TPC של A. hierophantic נקבע על פי השיטה המותאמת על ידי Bettaieb et al. [24]. התוצאות הושוו לעקומה סטנדרטית של חומצה גאלית (GA) שנעשתה בטווח של 50-500 מ"ג mL−1 (R2=0.99), וה-TPC חושב כמ"ג של שווה ערך לחומצה גאלית (GAE) ) לגרם של A. hierophantic (מ"ג של GAE g−1).

2.4. סך קרוטנואידים (TC), סך פלבנואידים (TF) וסה"כ פלבנולים (TFL)

כפי שדווח על ידי אל-קבבה וחב'. [10], 5 גרם של A. hierophantic חולצו שוב ושוב עם אצטון ותערובת אתר נפט (1:1, v/v). תכולת הקרטנואידים הכוללת (TC) נקבעה ספקטרופוטומטרית ב-451 ננומטר. TC הובע כמ"ג g-1 DW. תוכן ה-TF של A. hierophantic נבדק על פי הפרוטוקול המתואר על ידי Mohdaly et al. [25]. תכולת ה-TF חושבה כמ"ג שווה ערך לקוורצטין (QE) לכל 100 גרם-1 DW. באותו הקשר, בוצע תוכן ה-TFL [26]. הספיגה ב-440 ננומטר נרשמה, ו-TFL חושב כמ"ג שווה ערך לקוורצטין (QE) לכל 100 גרם-1 DW.

2.5. קביעת קיבולת נוגדת חמצון

מבחן ניקוי רדיקלי DPPH: ה-RSA נבדק ספקטרופוטומטרית בהתאם להלבנת התמיסה בצבע סגול DPPH לפי טכניקה ששונתה על ידי Lu וחב'. [27]. הקיבולת האנטי-רדיקלית הוצגה כמיקרומול של שווי ערך לטרולוקס (TE) לגרם של A. hierophantic (µmol TE g-1). פעילות ניקוי רדיקליים של ABTS: ה-RSA של A. hierophantic נגד רדיקלי ABTS נבדק בשיטה המותאמת של Lu et al. [27]. התוצאות הובעו כ-µmol TE g-1. מבחן הלבנת חומצה-קרוטן-לינולאית: אחוז נוגדי החמצון של A. hierophantic הוערך במונחים של הלבנת קרוטן בהשוואה להידרוקסיאניזול באטיל (BHA) תוך שימוש בפרוטוקול ספקטרופוטומטרי מותאם שהוגדר על ידי Koleva et al. [28]; התוצאות ניתנו כאחוז הקשור ל-BHA. פעולת הכלאטה של ​​A. hierophantic על יוני ברזל: פעילות הקליטה של ​​A. hierophantic נמדדה לפי פרוטוקול על ידי Zhao et al. [29]. אחוז העיכוב של יצירת ferrozine-Fe2 בתוספת קומפלקס כפעולת קלצית מתכת נמדד והוצג כ-mg mL-1 כאשר נעשה שימוש ב-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) כביקורת חיובית.

2.6. פירוק תרכובת פוליפנולית של תמציות מימיות ואתנוליות A. hierophantic

קביעת פוליפנולים מתמציות אתנוליות ומימיות בוצעה על ידי מערכת HPLC HP1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, ארה"ב) המצוידת בדגימה אוטומטית, משאבה רבעונית וגלאי מערך דיודות (Hewlett Packard 1050) באמצעות עמודה (Altima) C18 150 × 4.6 מ"מ, 5 מיקרומטר) עם עמודת שמירה 5 מ"מ Altima C18 (Alltech, Nettetal, גרמניה) לפי Goupy et al. [30]. מערכת הממס ששימשה הייתה שיפוע של A (חומצה אצטית 2.5 אחוז), B (חומצה אצטית 8 אחוז) ו-C (אצטוניטריל). קצב עמית הממס היה 1 mL min-1, וההפרדה בוצעה ב-35 ◦C. הנפח המוזרק היה 10 μL. תרכובות פנוליות נבדקו על ידי כיול סטנדרטי חיצוני והובאו כמ"ג g-1 DW של שווי ערך (פלוס )-קטצ'ין עבור פלוואן-3-ול וקומרין שווה ערך עבור תרכובות ארומטיות קוטביות. נקבעה שונות של 8 אחוזים בחמש מיצויות של פנולים מאותה דגימה. כל הערכים היו הממוצע של זריקות כפולות. פוליפנולים ונגזרותיהם זוהו וכומתו ב-280 ו-320 ננומטר, בעוד שפלבנואידים זוהו ב-360 ננומטר.

2.7. עיצוב נסיוני

כל הניסויים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לאתיקה של בעלי חיים (IAEC) של QU (מס' {{0}}), KSA, המוסדרת על ידי מטרת הפיקוח והפיקוח על ניסויים בבעלי חיים (CPCSEA) ועדה במסגרת הוועדה הלאומית לביואתיקה (NCBE), תקנות יישום של חוק האתיקה של מחקר על יצורים חיים. בסך הכל נעשה שימוש ב-36 חולדות לבקנים זכרים במחקר הנוכחי וחולקו ל-6 קבוצות של 6 בעלי חיים כל אחת וטופלו באופן הבא: קבוצה I (בקרה) קיבלה זריקה תוך צפקית (ip) של שמן זית (1.0 מ"ל ק"ג-1 פעמיים בשבוע) ו-0.5 מ"ל מים מזוקקים דרך הפה/יום במשך 21 ימים רצופים. קבוצה II קיבלה הזרקת ip של תערובת טריה של נפחים שווים של CCl4 ושמן זית (במינון של 1.0 מ"ל ק"ג-1 פעמיים בשבוע) ו-0.5 מ"ל מים מזוקקים דרך הפה/ יומי לפי אל-קבבה ואח'. [10] עם שינויים קלים. קבוצה III (קבוצת ייחוס) קיבלה זריקה תוך שרירית (im) של 50 מ"ג ק"ג-1 ויט. E plus Se (Selepherol, Vetoquinol Co., Magny-Vernois, צרפת) פעמיים בשבוע, לפי Asuka וחב'. [31] ואל-דסוקי ואח'. [32], ו-0.5 מ"ל מים מזוקקים דרך הפה/יום. קבוצה IV שימשה כמבחן וקיבלה 250 מ"ג ק"ג-1 של KEE דרך הפה/יום יחד עם CCl4 ip פעמיים בשבוע. קבוצה V קיבלה 250 מ"ג ק"ג-1 של KAE דרך הפה/יום יחד עם CCl4 ip פעמיים בשבוע. קבוצה VI קיבלה 250 מ"ג ק"ג-1 של KEE בתוספת KAE (1:1) דרך הפה/יום יחד עם CCl4 ip פעמיים בשבוע. 24 שעות לאחר הטיפול האחרון (יום 21), החולדות הורדמו על ידי התערובת (אלכוהול:כלורופורם: אתר, 1:2:3). דגימות דם מנקב לב נאספו עבור כל החיות, והסרום הופרד על ידי צנטריפוגה ב-4000 סל"ד למשך 10 דקות ונשמר ב-20 מעלות צלזיוס לבדיקה ביוכימית.

2.7.1. ניתוח ביוכימי של הכליות

ריכוזי קריאטינין, אוריאה, סך חלבון ואלבומין בסרום נקבעו בשיטות ספקטרופוטומטריות אוטומטיות (BM/Hitachi autoanalyzer-911; Boehringer Mannheim, גרמניה) לפי הוראות היצרן. רמות האשלגן נקבעו על ידי פוטומטריית להבה ב-766 ננומטר.

2.7.2. הערכה של פעילות נוגדת חמצון כלייתית

לאחר איסוף דגימות הדם, הוקרבו חיות מכל הקבוצות; ימיןכליותבודדו במהירות ונשטפו בתמיסת מלח קרה כקרח. לאחר מכן נקצצה הרקמה, נשטפה בתמיסת מלח קרה, נספג יבשה והונחה על קרח מיד. באמצעות הומוגנית רקמה חשמלית, חלקים מהרקמה (1.0 גרם) נשקלו והומוגגו עם 9 נפחים של חיץ פוספט קר כקרח 0.05 M ב-pH 7.4. פסולת תאים הוסרה בצנטריפוגה ב-12,000 סל"ד (4 ◦C) למשך 20 דקות כדי לאסוף סופרנטנטים לקביעת ריכוז מלונדאלדהיד (MDA) [33], פעילות סופרוקסיד דיסמוטאז (SOD) [34], והפחתה תכולת גלוטתיון (GSH) [35]. ריכוז חלבון בכִּליָההומוגנט נקבע בשיטת ברדפורד [36].

2.7.3. אחוז הגנה על כליות

אחוזי הגנת הכליות (F) של ויט. E פלוס Se, KEE, KAE ו-KEE פלוס KAE חושבו עבור כל פרמטר ביוכימי בנפרד לפי Wakchaure et al. [37] באמצעות המשוואה הבאה:

כאשר T=ערך ממוצע של קבוצת טיפול, C=ערך ממוצע של קבוצת הביקורת החיובית, ו-N= ערך ממוצע של קבוצת הביקורת השלילית. יתרה מכך, אחוז ההגנת הכליות הכולל (אחוז TFP) הושווה לוויט. E plus Seas:

2.7.4. מחקרים היסטופתולוגיים

דגימות נתיחה נאספו משמאלכִּליָהשל קבוצות נפרדות של חולדות ומקובעים ב-10 אחוזי מלח פורמלין למשך 24 שעות. כביסה עם מי ברז הייתה ואחריה התייבשות עם דילולים סדרתיים של אלכוהול (מתיל, אתיל ואתיל מוחלט). דגימות נוקו בקסילן והוטמעו בפרפין למשך 24 שעות ב-56 ◦C בתנור אוויר חם. קוביות רקמות שעוות דבורי פרפין הוכנו לחתוך בעובי 4-מיקרון באמצעות מיקרוטום מזחלת. פרוסות רקמה נאספו על שקופיות זכוכית, עברו דה-פראפין, והוצבעו בהמטוקסילין ואאוזין לצורך בדיקה קבועה במיקרוסקופ חשמלי קל [38].

2.8. ניתוח סטטיסטי

התוצאות מוצגות כממוצע ± שגיאה סטנדרטית (SE). המשמעות של ההבדלים בין הממוצעים בקבוצות שונות נבדקה באמצעות ניתוח שונות של שונות (ANOVA) ולאחר מכן מבחן של דאנקן, וערך p בין הממוצעים ניתן ברמת p < 0.05="" [39]="">

3. תוצאות

3.1. פיטוכימיקלים ונוגד חמצון קיבולת של A. hierophantic

בוצע ניתוח כמותי של פיטוכימיקלים A. hierophantic ופעילויות נוגדות חמצון קשורות באמצעות ניקוי רדיקלי DPPH ו-ABTS, פעילויות הלבנת חומצה-קרוטן-לינולאית ויכולת קלציה (CA). כפי שניתן לראות בבירור בטבלה 1, תכולת ה-TPC הייתה 67.49 מ"ג GAE g-1. תכולת ה-TC הייתה 3.51 מיקרוגרם g-1. תכולת ה-TF ו-TL היו 49.78 ו-17.45 מ"ג QE g-1, בהתאמה. יתרה מכך, DPPH-RSA ו-ABTS-RSA שימשו למדידת התקדמות פעילויות נוגדות חמצון. התוצאות הצביעו על 128.71 מיקרומול של TE g−1 ו-141.92 מיקרומול של TE g−1 עבור DPPH-RSA ו-ABTS-RSA, בהתאמה. בנוסף, הפעילות נוגדת חמצון(AOA) של A. hierophantic מוצג בטבלה 1. אחוז העיכוב של רדיקלי חומצה לינולאית חושב כ-45.74 אחוז בהשוואה ל-BHA באמצעות מבחן -Carotene Bleaching (-CB). יתרה מזאת, הערכת פעילות קלצית המתכות גילתה 42.89 מ"ג g-1, אשר נראה כי הוא מיומן בהפרעה להיווצרות קומפלקס Fe2 plus -ferrozine, מה שמעיד על יכולתו לקלוט מתכות חמצון.

3.2. כימות של A. תרכובות פנוליות הירופנטיות

הניתוח הכמותי של תרכובות פנוליות עבור KEE ו-KAE על ידי ניתוח HPLC בוצע, והנתונים מוצגים בטבלה 2. תשע חומצות פנוליות מופרדות ושישה פלבנואידים זוהו בכמויות ניתנות לזיהוי מה-KEE של A. hierophantic. החומצות הפנוליות הנפוצות ביותר היו חומצות הידרוקסינמיות כגון חומצה סינאפית (28.704 מ"ג 100 g−1) ואחריה חומצה קפאית (6.621 מ"ג 10{ {61}} g-1), חומצה רוסמרינית (2.884 מ"ג 100 גרם-1), חומצה פרולית (1.854 מ"ג 100 גרם-1), וחומצה קינמית (0.094 מ"ג 100 גרם-1); וחומצות הידרוקסיות-בנזואיות כגון חומצה p-hydroxybenzoic (3.440 מ"ג 100 גרם-1), חומצה פרוטוקטכואית (1.811 מ"ג 100 גרם-1), חומצה ונילית (3.326 מ"ג 100 גרם-1), וחומצה סירינגית (1.083 מ"ג 100 גרם) -1). פלבנואידים כגון מיריצין (16.269 מ"ג 100 גרם-1), D-catchin (2.410 מ"ג 100 גרם-1), קאמפרול (0.434 מ"ג 100 גרם-1), רוטין (0.539 מ"ג 100 גרם-1), אפגנין{{56} }גלוקוזיד (0.192 מ"ג 100 גרם-1) וקוורצטין (0.184 מ"ג 100 גרם-1) זוהו כמויות לא יסולא בפז. כמו כן נקבעו התרכובות הפנוליות ב-KAE של A. hierophantic, והנתונים מוצגים בטבלה 2. חומצה סירינגית תועדה כחומצה הפנולית הגבוהה ביותר מבין 21 הפנולים שזוהו. קטכול ופירוגלול היו 2.526 ו-1.589 מ"ג 100 גרם-1, בהתאמה. נתונים

ציינו שחומצות פנוליות מסוימות כגון קפאין, קטצ'ין, כלורוגני, אפיקטכין, e-vanillic, p-hydroxybenzoic, וחומצות פרוטוקטכואיות זוהו בכמויות מתונות של 0.725, 0.256, { {6}}.136, 0.193, {{10}}.443, 0.223 ו-0.454 מ"ג 100 גרם-1, בהתאמה. באותו הקשר, כמויות נמוכות של 3,4,5-זמן אתוקס קינמי, 4-אמינו-בנזואיק, בנזואי, קינמי, קומרין, אלגי, פרולי, גאלי, איזו-פרולי, -קומארי, p-קומארי , וחומצה סליצילית כמתה לאחר זיהוי. Epicatechin ו-D-catechin כפלבנואידים כומתו ב-KAE של A. hierophantic גם כן.

3.3. רמות קריאטינין בסרום, אוריאה, K, סך חלבון ואלבומין

הזרקת CCl4 העלתה באופן משמעותי את רמות הקראטינין, האוריאה וה-k בסרום בחולדות GII בהשוואה לחולדות בקרה (GI). לעומת זאת, רמות החלבון והאלבומין הכוללות ירדו באופן משמעותי בחולדות שטופלו ב-CCl4- (טבלה 3). ויט. תמציות הירופנטיות E פלוס Se ו-A. (G III, IV, V ו-VI) הפחיתו באופן משמעותי את השינויים בקריאטינין ובאוריאה שנגרמו על ידי הזרקת CCl4, בעוד שהם העלו את האלבומין ואת סך החלבונים להיות קרובים לערכים נורמליים ב-GI (טבלה 3 ). רמת k בסרום עלתה באופן ניכר בחולדות שטופלו ב-CCl4-(GII) בהשוואה ל-GI (טבלה 3). הזרקת ויט. E פלוס Se ומתן של תמציות אלכוהוליות ומימיות A. hierophantic (G IV, V ו-VI) השתפרו גם הם באופן חיובי ברמת k בהשוואה ל-GI (טבלה 3).

3.4. סמנים ביולוגיים נוגדי חמצון כליות

כפי שמוצג בטבלה 4, מתן CCl4 הפחית משמעותית את רמות SOD ו-GSH והעלה את רמת ה-MDA ב-GIIכִּליָהרקמה הומוגנית. עם זאת, בהשוואה ל-GI, חולדות טופלו בשני הוויט. תמציות הירופנטיות E plus Se ו-A. (GIII, VI, V ו-VI) הראו שיפור ניכר בפעילות האנזימים נוגדי החמצון SOD ו-GSH, כמו גם הפחתה ברמות MDA (טבלה 4). תמצית אלכוהולית הירופנטית (GIV) עמדה בביצועים טובים יותר מ-A. תמצית מימית הירופנטית (GV) ושילבה תמציות אלכוהוליות ומימיות הירופנטיות בהחלשת רמות נוגדי החמצון, ומאבק בתהליך האוטוקסידציה הביאו לרמות נמוכות של MDA בהשוואה ל-GI.

3.5. אחוז הגנה על כליות

אחוז ההגנת הכליות (ביחס לקבוצות הבקרה השליליות (GI) והחיוביות (GII) שלכִּליָהפונקציות כגון קריאטינין, אוריאה, k, TP ואלבומין, כמו גם פעילות נוגדת חמצון בהומוגנית של הכליות (MDA, SOD, GSH) מומחשות בטבלה 5. אחוז ההגנה על הכליות רשם את הערך הגבוה ביותר כקריאטינין, אוריאה, k ב-GIII, TP, ואלבומין ב-GV, MDA ו-GSH ב-GIII ו-SOD ב-GV (טבלה 5). אחוז ההגנה על הכליות הכולל ביחס לוויט. טיפול E פלוס Se רשם רמות מרביות בקבוצה שטופלה ב-KAE (GV, 97.62 אחוז), לאחר מכן KEE (GIV, 83.27 אחוז), ולאחר מכן KEE פלוס KAE (GVI, 78.85 אחוז), כפי שנחשף בטבלה 5.

3.6. השפעות של תמציות הירופנטיות על ארכיטקטורת הכליות

תוצאות החקירות הביוכימיות נתמכו בבדיקה היסטופתולוגית. טבלה 6 ואיור 1 מציגות את מידת השינויים ההיסטולוגיים במבנה הבסיסי של החולדה.כליותבקבוצות ניסוי שונות שטופלו בתמציות א' הירופנטיות. בחקירה הנוכחית, הכִּליָהמקבוצת הביקורת (GI) נמצא כבעל מבנה היסטולוגי תקין (איור 1(I.1)). ההיסטו-ארכיטקטורה של החולדות שטופלו ב-CCl4- (GII) הראתה חדירת תאים דלקתיים מוקדיים (פלוס פלוס) בין הצינוריות בקליפת המוח, גודש (פלוס פלוס) של כלי דם בין הצינוריות (איור 1(II.2) ), תצורות אאוזינופיליות מרובות (פלוס פלוס) בלומן של חלק מהצינוריות, ודימום מוקד (פלוס פלוס) בין הצינוריות המנוונות בחלק הקורטיקומדולרי (איור 1(II.3), טבלה 6). בג''י הזרקת ויט. E plus Se, מתן התמצית האלכוהולית של A. hierophantic (GIV), תמצית מימית של A. hierophantic (GV), ושילוב של תמציות A. hierophantic (GVI) החלישו את ההשפעות הציטוטוקסיות של CCl4 ורשמו קלות (plus ) עד גודש בינוני (פלוס פלוס) בכלי הדם בין צינוריות בקליפת המוח (איור 1(III.4-VI.8), טבלה 6) עם קפסולת באומן מפותחת עם גלומרולוס וצינוריות מפותלות מוגדלות. בנוסף, התמצית המימית של A. hierophantic (GV) תיעדה חדירת תאים דלקתיים מוקדיים (פלוס פלוס) בחלק הקורטיקומדולרי (איור 1 (V.7), טבלה 6).

4. דִיוּן

פיטוכימיקלים הם בעיקר מונעי רדיקלים חופשיים יעילים ונחשבים נוגדי חמצון מעולים על בסיס צמחי. חומרים פוליפנולים נחשבים כבעלי תכונות אנטי-סרטניות ואנטי-מוטגניות בבני אדם [40]. תוכן TPC בעל ערך ב-A. hierophantic היה מעט גבוה יותר מזה שהתקבל על ידי Mohamed et al. [21] כ-51.97 מ"ג GAE g × 1 ב-A. hierophantic herb ועל ידי AlGamdi et al. [41], שמצא 4 ממול L × 1 GAE בזרעים הירופנטים של A. לאחרונה, צין וחב'. [42] הצביע על נוכחות של טאנינים ב-A. hierophantic כתרכובת ביו-אקטיבית והמליץ ​​על הפעילות הביולוגית שלה, מה שהיה צריך לחקור לעומק. תכולת -קרוטן, כחלק מכלל הקרוטנואידים, הייתה 2.27 מיקרוגרם גרם × 1 כפי שהוזכר על ידי מוחמד וחב'. [21], ואפילו תוצאות עדכניות הציגו את סך הקרוטנואידים כ-3.51 מיקרוגרם גרם × 1. ממצאים דומים בתכולת הפלבנואידים והפלבנול הוכחו על ידי מוחמד וחב'. [21]. קיימים רכיבים פעילים ביולוגית, כגון תרכובות פנוליותפעילות נוגדת חמצוןכמו פירוק של תגובות שרשרת חמצון שומנים על ידי מתן מימן לרדיקלים חופשיים פעילים. פוטנציאל הניקוי הזה של פנולים לעכב רדיקלים הובהר על ידי קבוצות ההידרוקסיל הפנוליות שלהם [8,10,22]. חומצה פנולית זו תוארה כמרכיב נוגד חמצון יעיל, כולל מי חמצן, רדיקל הידרוקסיל, ואניון סופראוקסיד [43]. נראה כי פעילות קלצית מתכת הירופנטית מוכשרת בהתערבות במבנה המורכב של "Fe2 plus –ferrozine", מה שמרמז על יכולתו ללכוד יונים "ברזליים" לפני "פרוזין". קשר חיובי בין עלייה בתכולת התרכובות הפנוליות שלהם מצויין ישירות ביכולת נוגדת החמצון שלהם [42]. Andjelkovic et al. [44] ביסס את פעילותן של חומצות פנוליות רבות ליצירת קומפלקסים עם מתכות. ה-TPC היקר ופעילויות נוגדות החמצון הרלוונטיות תוך שימוש בגישות מדידה שונות מעניקים צלחת ברורה ומאשרים את הפעילות הביולוגית של A. hierophantic כצמח מרפא ליישומי מזון או משקאות.

רכיבים נוגדי חמצון יעילים, כולל מי חמצן, רדיקל הידרוקסיל, ואניון סופראוקסיד [43,45,47]. התרכובות שזוהו ומכומתות על ידי HPLC ב-KAE של A. hierophantic היו גבוהות יותר ממספר התרכובות שזוהו ב-KEE, אך תרכובות שזוהו ב-KEE של A. hierophantic הוצגו בכמויות גבוהות יותר [22]. התוצאות משקפות שה- A. hierophantic הצורך יכול להציג מרכיבים רבים בצורות קוטביות ולא קוטביות כאחד. תוצאות אלו מוצגות באופן דומה על ידי AlGamdi et al. [41] כפי שהם זיהו וכימתו 20 תרכובות פוליפנוליות בזרעים של A. hirochuntica. התמצית הכילה חומצות כלורוגניות וחומצות הידרוקסיבנזואיקות, אך המרכיבים העיקריים היו פלבון C-glycosides, C-diglycosides, O-glycosides ו-O-glycoside-C-glycosides המופיעים בעיקר כמצמידים לוטאולין. בנוסף, הוצגו 14 מתוך 20 התרכובות בתמצית הירופנטית Aפעילות נוגדת חמצוןבאמצעות מערכת HPLC-on-line זיהוי נוגדי חמצון [41]. מעניין לציין כי נתונים עדכניים אישרו כי A. hierophantic עשיר בתרכובות פיטוכימיות ומהווה מקור טוב לנוגדי חמצון טבעיים עם יתרונות בריאותיים פוטנציאליים, כפי שכמעט לא הודגש בעבר בזרעים [41]. לפיכך, תה מוכן מאבקת הצמח כולו הוא צורת הצריכה המסורתית; נתונים המחישו תרכובות ביו-אקטיביות חדשות שזוהו ב-KEE וב-KAE של A. hirochuntica, אשר היו שונות מאלה שנמצאו ב-AlGamdi et al. [41]

במחקרים רבים, CCl4-הרעילות הנפרוטית משמשת כמערכת מודל לבדיקת ההשפעה המגוננת על הכליות של תמציות/תרופות צמחיות [48,49]. המחקר הנוכחי בחן את ההשפעה של תמציות A. hierophantic על CCl4-המושרהכִּליָהנזק, כמו גם ההגנה על הכליות ופוטנציאל נוגדי החמצון שלו בחולדות. במחקר הנוכחי, קבוצת הטיפול ב-CCl4 (GII) העלתה משמעותית את רמות הקריאטינין, האוריאה וה-k והפחיתה את ריכוזי החלבון והאלבומין הכוללים בהשוואה ל-GI. ייתכן שהסיבה לכך היא שהרעלת CCl4 היא מקור עיקרי לייצור רדיקלים חופשיים באיברים רבים, כולל הכבד, הכליות, הריאות, המוח והדם [50]. כמו כן, נצפה שבעקבות הזרקת CCl4 בחולדות, הריכוז של CCl4 מתפזר באופן שווה יותר בכליות מאשר בכבד [51], מאזכִּליָהבעל זיקה גבוהה לCCl4 ומכיל ציטוכרום P450, בעיקר בקורטקס. הרדיקלים החופשיים הנפוצים ביותר מCCl4 הם רדיקל טריכלורומתיל (CCl3•) ורדיקל טריכלורומתיל פרוקסיל (CCl3O2•) [52]. רדיקלים אלו מתחברים לחלבון תוך-תאי, שומנים בקרום התא ול-DNA, וגורמים לדנטורציה של חלבון, חמצון שומנים ונזק ל-DNA חמצוני המוביל למוות של תאים [53]. לעומת זאת, טיפול בחולדות CCl4- באמצעות vit. תמציות E plus Se (GIII) ו-A. hierophantic (GVI: VI) החלישו ביעילות את העליות הללו ברמות הקריאטינין והאוריאה, כמו גם הגדילו את האלבומין בסרום ואת סך החלבונים כדי להיות קרובים מאוד לרמות שלהם ב-GI. ייתכן שהסיבה לכך היא תכונות נוגדות החמצון והתכולה הפנולית העשירה של תמציות A. hierophantic ויכולת נוגדת חמצון ופעילות קלאטית של ויט. E פלוס Se, אשר מסלק רדיקלים חופשיים ובכך מעכב את הנזק הכלייתי. פיטוכימיקלים הם חומרי הניקוי היעילים ביותר של רדיקלים חופשיים ונחשבים לנוגדי חמצון מעולים מצמחים [54]. התרכובות הפנוליות השכיחות ביותר היו חומצות הידרוקסי-צינמיות, כגון חומצה סינאפית, מבין תשע התרכובות הפנוליות שזוהו ב-KEE, בעוד שחומצה סירינגית הייתה החומצה הפנולית הגבוהה ביותר מבין 21 החומצות הפנוליות שזוהו ב-KAE. שישה פלבנואידים זוהו ב-KEE ושניים ב-KAE באמצעות ניתוח HPLC [55]. יתר על כן, כנוגד חמצון, ויט. מאמינים כי E מגן על רקמות מפני נזק הנגרם על ידי מטבוליטים תגובתיים של חמצן. סלניום מוכר היטב גם כמינרל קורט חיוני לבריאות האדם, מגן על תאים מפני ההשפעות המזיקות של רדיקלים חופשיים [22].

במחקר הנוכחי, מתן CCl4 הפחית באופן ניכר את GSH ו-SOD והעלה את רמות ה-MDA בכִּליָהhomogenates ביחס ל-GI. ויט. תמציות הירופנטיות E plus Se ו-A. שיפרו את ההשפעות המגוונות של CCl4 על ידי החזרת הפעילות המשתנה של חומרים נוגדי חמצון כגון SOD ו-GSH ועשויות להשבית את תהליך ייצור ה-MDA, כפי שדווח לאחרונה [15,21,40,41] . GSH הוא נוגד חמצון לא אנזימטי שנמצא בכל תאי היונק. עם צורתו המחומצנת, GSSG, GSH פועל כקו-פקטור עבור אנזימים רבים מסילוק רעלים (GPx, GST ואחרים) נגד עקה חמצונית ושומר על איזון חיזור תאי [47]. ממצא זה מלווה את הממצאים של Khan ו-Sidique [56] ו-Makni et al. [57], אשר דיווחו כי CCl4 הפחית את רמת GSH בכליות חולדה. טיפול בוויט. תמציות הירופנטיות E פלוס Se ו-A. הראו הגנה מפני ירידה ברמת GSH המופעלת על ידי CCl4. באותו הקשר, SOD מזרז את ההפיכה של שתי מולקולות של אניון סופראוקסיד (*O2) למי חמצן (H2O2) ולחמצן מולקולרי (O2), וכתוצאה מכך הופך את אניון הסופראוקסיד שעלול להזיק למסוכן פחות [58,59]. שיכרון CCl4 משנה את רמת ביטוי הגנים על ידי דלדול SOD כלייתי [60]. ירידה בפעילות SOD היא מדד רגיש לנזק תאי. תמציות A. hierophantic שנבדקו שלנו שיפרו את הרעילות הכלייתית על ידי הקלה על רמת SOD. הוא משתתף בתהליכים אנזימטיים שונים להפחתת ריכוז תגובות ניקוי הרעלים [61]. MDA הוא התוצר הראשון של חמצון שומנים והוא אחד מהסממנים החשובים ללחץ חמצוני. תמציות הירופנטיות הפחיתו את העלייה ברמות ה-MDA והחזירו את כוח נוגד החמצון הכולל בכליות החולדות שטופלו ב-CCl4-. השפעות הגנה אלו עשויות לנבוע מפעילות נוגדת חמצון רבת עוצמה של תמציות A. hierophantic [15,21,40,41]. תוצאות אלו מצביעות גם על כך שתמציות A. hierophantic עשויות להחליש את הלחץ החמצוני על ידי הפחתת רמות של שומנים חמצן בכליות החולדות החשופות4-ל-CCl ומניעת נזק לכליות. תוצאות אלו תאמו את התוצאות של פעילות נוגדת החמצון של Zn על CCl4-שגרמה לרעילות חריפה של נפרו [62,63].

תמציות A. hirochuntica הציגו יכולת הגנה על כליות רבת ערך לגביכִּליָהבדיקות תפקוד (קריאטינין, אוריאה, K, TP ואלבומין) ופעילות נוגדת חמצון הומוגנית בכליות (GSH, SOD, MDA) ב-GIV, V ו-IV, בהתאמה. אחוז ההגנה על הכליות הכולל ביחס לוויט. טיפול E פלוס Se רשם רמות מקסימליות בקבוצה שטופלה ב-KAE (GV, 97.62 אחוז), לאחר מכן KEE (GIV, 83.27 אחוז), ולאחר מכן KEE פלוס KAE (GVI, 78.85 אחוז), בהתאמה, בסדר יורד. ייתכן שהסיבה לכך היא הבדלים בכמות ובאיכות של תכולת פנולים ונוגדי חמצון של תמציות A. hirochuntica, שיש להן קשר ליכולת נוגדת החמצון [15,19,22,40,42].

הממצאים ההיסטופתולוגיים בכליותתואמים את ההערכות הביוכימיות של קבוצות הניסוי שנחקרו. מתן CCl4 (GII) גרם לנגע ​​גלומרולרי וצינורי עם גודש כלי דם בכליות. Dogukan et al. [64] גילה דפוס היסטולוגי דומה ברקמת הכליה של חולדה בתגובה לטיפול ממושך ב-CCl4. כמו כן, נחשב ששינויים היסטולוגיים נגרמים מעומס יתר תפקודי של נפרונים, מה שמוביל לתפקוד לקוי של הכליות [65], ו/או נובע מהרס של רקמות הנגרם כתוצאה מיצירת רדיקלים חופשיים באמצעות מטבוליזם של CCl4 [56,66] . ההשפעה של ויט. E plus Se ו-A. תמצית הירופנטית לתיקון ושיקום של הרס הכליות של CCl4 היו בולטות. זה יכול להיות בגלל vit. E פלוס Se (כנוגד חמצון חזק) פועל על ROS המושרה על ידי CCl4 [67]. תמציות הירופנטיות מדכאות CCl4-רעילות חריפה של נפרו בשל התפקיד נוגד החמצון ותכונות ניקוי הרדיקלים החופשיים של התרכובות הפנוליות הקיימות בתמציות A. hirochuntica [22]. הממצאים שלנו עולים בקנה אחד עם אלו של חוקרים אחרים שהראו שלנגזרות צמחיות שונות יש השפעות תרופתיות על ידי ביטול שימוש לרעה ב-CCl4 והחזרה לנורמליות [6].

5. מסקנות

תוצאות מחקר זה הדגימו בבירור שצמח A. hierophantic עשיר בתרכובות פנוליות קוטביות ולא קוטביות עם יכולת נוגדת חמצון מעולה, הקשורה ישירות לתכולת הפיטוכימית. A. hierophantic (במיוחד תמצית מימית) מגן על חולדות מפני סטרס חמצוני4-הנגרמת על ידי CCl וחריףכִּליָהפגיעה, כפי שמעידה על ירידה משמעותית ברמות מד"א ועלייה בפעילות ה-GSH וה-SOD, כמו גם הפסקת השינויים הביוכימיים וההיסטולוגיים בכליות. יעילות ההגנה עשויה לנבוע מתכונות נוגדות החמצון והרדיקלים החופשיים של התרכובות הפנוליות הקיימות בתמציות ההירופנטיות של A.. מאפיינים אלו עוזרים להסביר את יעילותו הרפואית של הצמח כתרופה צמחית. יש צורך במחקר נוסף כדי לתאר לחלוטין את העקרונות הפעילים ב-A. hierophantic, ומחקר זה נועד לעורר מחקר קשור מקיף יותר כדי להציע מספיק נתונים והמלצות להגדרת המנגנונים והמינונים הבטוחים שלו.

תרומות מחבר:המשגה, TIA, YMA ו-HB; מתודולוגיה, חקירה, HB ו-HAA-R.; אוצרות נתונים, TIA ו-YMA; כתיבה - הכנה, סקירה ועריכה של טיוטה מקורית; HB ו-HAA-R. כל המחברים קראו והסכימו לגרסה שפורסמה של כתב היד.

מימון:החוקרים מבקשים להודות לדיקנט למחקר מדעי, אוניברסיטת קאסים, על מימון פרסום פרויקט זה.

הצהרת זמינות נתונים:הנתונים המוצגים במחקר זה זמינים לפי בקשה מהמחבר המקביל.

קיצורים ABTS:2,2'-אזינו-ביס(3-אתיל-בנזן תיאזולין-6- חומצה סולפונית); AOA:פעילות נוגדת חמצון; BHA: hydroxyanisole butylated; BHA: hydroxyanisole butylated; DPPH: 1,1-דיפניל-2-פיקריל הידרזין; DW: משקל יבש; GA: חומצה גאלית; GAE: שווה ערך לחומצה גאלית; GSH: מופחת גלוטתיון; HPLC-DAD: זיהוי מערך דיודות כרומטוגרפיה נוזלי בעל ביצועים גבוהים; KAE: תמצית מימית הירופנטית; KEE: תמצית אתנולית הירופנטית; מד"א: מלונאלדהיד; QE: שווה ערך לקוורצטין; RAA: פעילות נוגדת חמצון יחסית; ROS: מיני חמצן תגובתיים; RSA: פעילות סילוק רדיקלית; Se: סלניום; SE: שגיאת תקן; SOD: superoxide dismutase; TC: סך קרוטנואידים; TC: סך קרוטנואידים; TF: סך הפלבנואידים; TE: מקבילות לטרולוקס; TFL: סך הפלבנולים; TPC: סך התרכובות הפנוליות.

Referמקורות

1. סטטיסטיקה, KD Chronic Kidney Disease בארצות הברית. 2021. זמין באינטרנט: (נגיש ב-20 ביולי 2021).

2. קו, ע.; גלידן, DV; יוהנסן, KL; סרנק, מ.; Tighiouart, H.; גריימס, ב.; Hsu, CY קשר בין בקרת לחץ דם קפדנית במהלך מחלת כליות כרונית ותמותה נמוכה יותר לאחר הופעת מחלת כליות סופנית. כליות אינט. 2015, 87, 1055–1060.

3. Tumlin, JA; Madaio, MP; Hennigar, R. Idiopathic IgA nephropathy: פתוגנזה, היסטופתולוגיה ואפשרויות טיפוליות. קלינ. ריבה. Soc. נפרול. 2007, 2, 1054–1061.

4. עולה, ג.; רדי, סמנכ"ל; פראקש, ג.ס.; תגובות, אנציקלופדיה של FC Kirk-Othmer של טכנולוגיה כימית. עדשות מגע 1978, 720–742.

5. אוזטורק, פ.; אוקר, מ.; Ozturk, IC; ורדי, נ.; Batcioglu, K. פחמן טטרכלוריד הנגרמת רעילות נפרוטית והשפעה מגנה של בטאין בחולדות Sprague-Dawley. אורולוגיה 2003, 62, 353–356.

6. Ogeturk, M.; קוס, I.; קולקוגלו, נ.; זאררסיז, I.; אילהאן, נ.; Sarsilmaz, M. חומצה קפאית phenethyl ester מגן על הכליות מפני רעילות פחמן טטרכלוריד בחולדות. J. Etnopharmacol. 2005, 97, 273–280.

7. סלייטר, TF מנגנונים רדיקליים חופשיים בפציעת רקמות. בתפקוד התא ומחלות; Cañedo, LE, Todd, LE, Packer, L., Jaz, J., Eds.; ספרינגר: בוסטון, MA, ארה"ב, 1988; עמ' 209–218.

8. חאן, מ.ר; ריזבי, ו.; חאן, ג.נ; חאן, ר.א.; Shaheen, S. פחמן טטרכלוריד הנגרמת נפרוטוקסיות בחולדות: תפקיד מגן של Digerati muricata. J. Etnopharmacol. 2009, 122, 91–99.

9. אפסר, ט.; חאן, MR; רז"ק, ש.; Ullah, S.; Mirza, B. פעילות נוגדת חום, אנטי דלקתית ומשכך כאבים של Acacia hydaspica R. Parker וניתוח הפיטוכימי שלה. השלמה של BMC. אלטרנט. Med. 2015, 15, 1–12.

10. אלכבא, מ"מ; אל-מואפי, מ.א.; אלתווב, ס"א; Alfheeaid, HA; Aljutaily, T.; Barakat, H. פרופיל פנולי, פעילות נוגדת חמצון ושיפור היעילות של נבטי Chenopodium quinoa נגד סטרס חמצוני שגרם ל-CCl4 בחולדות. תזונה 2020, 12, 2904.

11. אל ז'ראני, מ"מ; אלתווב, ס"א; Aljutaily, T.; Alfheeaid, HA; אשיש, IS; Barakat, H. אפקט מגן של משקאות מבוססי מורינגה נגד היפרליפידמיה והיפרגליקמיה בחולדות הנגרמות על ידי סוכרת מסוג 2. Food Res. 2021, 5, 279–289.

12. חליפה, א.; נוואז, א.; סובהי, ר.; אלתווב, ס"א; Barakat, H. Polyacylated anthocyanins ברשת בצורה קונסטרוקטיבית עם שאריות דיאדות קטליטיות של 3CLpro של 2019-nCoV מאשר אנתוציאנינים מונומריים: מחקר על פעילות מבני עם 10 אנתוציאנינים תוך שימוש בגישות בסיליקון. י.מול. גרָף. דֶגֶם. 2020, 100, 107690.

13. יוסוף, י. מהדי, ז"א; Noor, RM שימוש ברפואה משלימה ואלטרנטיבית בהריון והשפעתה על תוצאות מיילדות. מַשׁלִים. ת'ר. קלינ. תרגול. 2016, 25, 155–163.

14. סלאח, ש; עבדו, HS; עבד אל-עזים, א. Abdel-Rahim, E. ההשפעות האנטי-אוקסידטיביות של כמה צמחי מרפא כסוכנים היפוגליקמיים על סטייה כרומוזומלית ומטבוליזם חריג של חומצות גרעין הנוצר על ידי לחץ סוכרת בחולדות לבקנים בוגרים זכרים. סוכרת מלית. 2011, 1, 6–14.

15. Daur, I. תכונות כימיות של עשב המרפא קפה מרים (Anastatica hierochuntica L.) והקשר שלו לשימוש ברפואה עממית. אפר. J. Microbiol. מילון 2012, 6, 5048–5051.