פעילות הלבנה של מרכיבים מבודדים מעיסת Trichosanthes

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Rongchao Zhang, 1,2Xiuqin Hu,1Bo Zhang,1ZhenWang,1Chunxiang Hao,1 Jie Xin,1ו-Qingmei Guo 2

תַקצִיר: ההלבנהלשוק הקוסמטיקה יש עתיד מזהיר, ומוצרי הלבנה טבעיים טהורים של הרפואה הסינית המסורתית היו תמיד מוקד מחקר. במחקר זה, החומר הפעיל המלבין של הרפואה הסינית עיסת Trichosanthes בודד וטיהרו לראשונה,הַלבָּנָהמנגנון הובהר. שיטות כרומטוגרפיות כגון סיליקה ג'ל, ODS ו-HPLC שימשו כדי לבודד ולטהר אותם. תאי B16 שימשו למדידת פעילות נוגדת החמצון,טירוזינאזפעילות, ופעילות הסרת מלנין. בסך הכל בודדו 20 תרכובות, כולל p-hydroxybenzaldehyde (1), חומצה סליצילית (2), חומצה ונילית (3), חומצה איזוונילית (4), פרוטוקטשואט (5), חומצה טרנס-קינמית (6), {{9 }}חומצה קומרית (7), חומצה טראנס-פרולית (8), דרכסלרול-B (9), ציקלוהקסנול 3-פלמיטאט (10), 5-אצטוקסימתיל-2-פוראלדהיד (11), 5-הידרוקסי-מתיל-פורפורל (12), דיוסמטין (13), אפיג'נין (14), כריסובריל (15), לוטאולין (16), 4'-הידרוקסיסקוטלרין (17), קוורצטין (18), 3',{{31} }dihydroxy-7-(-D-glucopyranosyloxy)-4'-methoxy flavone (19), וציפרופלוקסצין-7-O- -D-glucoside (20). ביניהם, לתרכובות 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ו-20 יש השפעות טובות לתיקון נוגדי חמצון; לתרכובות 3, 4, 5, 6 ו-7 יש עיכוב שחור גבוה; לתרכובות 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 13,14, 15, 16, 17, 18, 19 ו-20 יש פעילות מעכבת טירוזין אוקסידאז ברורה. תוצאות 1 הניחו את הבסיס להמשך הפיתוח והניצול של משאבי עיסת Trichosanthes וגם מספקים בסיס לפיתוח טבעיהַלבָּנָהקוסמטיקה.

Cistanche herbaהואמרכיב הלבנה טבעי.

1. הקדמה

Trichosanthes kirilowii מקסים. הוא עשב מטפס רב שנתי ממשפחת Cucurbitaceae. הפירות, הזרעים, הקליפה והשורש שלו נמצאים בשימוש נפוץ כתרופות סיניות מסורתיות. במשך זמן רב, העיסה של Trichosanthes מושלכת לעתים קרובות בייצור ועיבוד של זרע Trichosanthis ו-Pericarpium Trichosanthis, וכתוצאה מכך לבזבוז משמעותי. כיום, דיווחים על עיסת Trichosanthes מתמקדים בעיקר בהשוואת התוכן של סוכר, חומצות אמינו, ויטמינים וחומרי מזון אחרים [1-4]. אין דיווח על ההרכב הכימי של עיסת Trichosanthes. 1לכן, יש צורך ללמוד את המרכיבים הכימיים של העיסה באופן שיטתי.

יחד עם זאת, עם ההתפתחות המהירה של הכלכלה, קוסמטיקה היא לא רק מוצרי אורח חיים בעלי צריכה גבוהה, אלא גם הופכת להיות "הצרכים" הפופולריים ביותר עבור נשים. ספרי רפואה סינית קלאסית או materiamedica רבים תיעדו כי לעיסת Trichosanthes יש את הפונקציה שלהַלבָּנָהוהשפעות הסרת קמטים [5-7]. תוצאות קודמות של קבוצת המחקר שלנו מראות שתמצית המים של עיסת Trichosanthes הייתה גבוהה יותרטירוזינאזפעילות מעכבת, ושיעור מעכבי טירוזינאז היה כ-70 אחוזים. 1ecommonהַלבָּנָהחומרים ויטמין C (VC) וארבוטין שימשו כחומרי בקרה [8]. הוכח ראשונית שלתמצית עיסת Trichosanthes הייתה אפקט הלבנה מסוים על ידי עיכוב הפעילות של טירוזינאז. לכן, ישנה חשיבות רבה לחקור את המרכיבים הכימיים ומנגנון ההלבנה של עיסת טריכוסנתס.

ההַלבָּנָהניתן לסכם את המנגנון כמעכב את הסינתזה של המלנין ומאיץ את העברת המלנין. תהליך 1e של יצירת מלנין במלנוציטים הוא כדלקמן:טירוזינאזמחמצן טירוזין לפולימורף BA (DOPA); לאחר מכן הוא מתחמצן לדופקינון. לאחר סדרה של תגובות מטבוליות, מיוצר מלנין. טירוזינאז הוא האנזים המגביל את הקצב היחיד בתהליך התגובה, ופעילותו קובעת את כמות המלנין המסונתז. כאשר פעילות טירוזינאז מוגברת, מלנינסינתזה עולה; כאשר פעילות טירוזינאז מעוכבת, סינתזת המלנין מופחתת [9]. למרכז הפעיל של טירוזינאז יש אתר פעיל נחושת כפול, וכל יון נחושת משתלב עם 3 שאריות היסטידין עם 1 או 2 ערכיות בהתאמה. 1לכן, ההפחתה עם השפעות נוגדות חמצון יכולה לקיים אינטראקציה עם אטום הנחושת באתר הפעיל של טירוזינאז או להפחית את תוצר הביניים בתהליך סינתזת המלנין כדי לעכב את היווצרות המלנין [10, 11]. בנוסף, עיכוב העברת מלנוציטים בוגרים לקרטינוציטים יכול גם למלא תפקיד בהלבנה.

טכנולוגיית תרבית תאים משמשת לקביעת ההשפעה שלהַלבָּנָהחומרים פעילים עלטירוזינאזפעילות וייצור מלנין במלנוציטים במבחנה. קו תאי 1e mousemelanoma (תאי B16) נגזר מתאי עור מלנומה של עכבר, והמבנה הבסיסי שלו, במיוחד לגבי סינתזת מלנין, זהה בעצם לזה של תאי מלנומה נורמליים באדם. מכיוון שקשה מאוד לטפח תאי מלנומה ראשוניים בעור אנושיים, מודל העכבר יכול לשמש כתא בדיקה לקביעתהַלבָּנָהרכיבים פעילים. לכן, נעשה שימוש בתאי B16 למדידת פעילות נוגדת החמצון, פעילות טירוזינאז ופעילות הסרת המלנין, והרכיבים הפעילים המלבינים והמנגנון הקשור נקבעו באופן ראשוני. 1תוצאות הניחו את הבסיס להמשך פיתוח וניצול משאבי עיסת Trichosanthes וגם מספקים בסיס לפיתוח מוצרי קוסמטיקה מלבינים טבעיים.

2. ניסויים

2.1. חומרים.

Trichosanthes trichosanthis נאסף מבסיס שתילת רפואת הצמחים Hebao בפיניין, ג'ינאן. דגימות 1e זוהו על ידי פרופסור QingmeiGuo מאוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית. לאחר הסרת הקליפה והזרעים, התקבל חלק העיסה של הפרי. לאחר ייבוש בהקפאה, העיסה נמחצה, ערבבה, ולבסוף הוכנסה למכונת ייבוש לשימוש נוסף.

סינצ'ה טריעםechinacosideאפקטים

2.2. כדאיות תאים.

תאי B-16 (תאי מלנומה של עכברים) נרכשו מ-KeyGEN ונשמרו במדיום DMEM בתוספת של 10 אחוז סרום בקר עוברי (FBS), ב-37 מעלות באווירה לחה עם 5 אחוז CO2. 1en, B-16תאים נזרעו ב96-צלחות באר (10 × 104 תאים/באר) למשך 24 שעות דגירה.

2.3. הכנת תמציות שונות.

חומר הגלם של העיסה של Trichosanthes kirilowii היה 4.5 ק"ג. עיסת 1e הוספגה פי 10 מהכמות של 95 אחוז אתנול 3 פעמים. 1eextracts שולבו ורוכזו לכ-3.0 ליטר. תמצית אנאתיל אצטט התקבלה על ידי פיזור התמצית אתנול לתוך 15 ליטר מים, מיצוי זה עם אתיל אצטט עד שהתמצית הייתה חסרת צבע. תמציות 1e שולבו ורוכזו בלחץ מופחת.

תמצית האתיל אצטט עורבבה עם סיליקה ג'ל (100-200 רשת) ביחס של 1:2 (תמצית: סיליקה ג'ל, v/ v). הממס התאדה, והג'ל נשמר. עמודה 1e glasschromatography (8{{30}} מ"מ × 1200 מ"מ) הייתה ארוזה ב-200–300 mesh סיליקה ג'ל ו-D101 שרף מאקרו נקבובי, ולאחר מכן העמוד נחלץ עם אתיל אצטט, אתר נפט (10 אחוז, 25 אחוז, 50 אחוז, 75 אחוז ו-100 אחוז), ומתנול, אתיל אצטט (5 אחוז, 10 אחוז, 25 אחוז, 50 אחוז). , 75 אחוז ו- 100 אחוז ), כדי לאסוף כל זרימה. לבסוף, כל חלק נאסף והוגדר לריכוזים הבאים: 0.003125 מ"ג/מ"ל, 0.00625 מ"ג/מ"ל, 0.0125 מ"ג/מ"ל, 0.025 מ"ג/מ"ל, 0.05 מ"ג/מ"ל, 0.1 מ"ג/מ"ל, 0.20 מ"ג/5 מ"ל, מ"ל, 1.0 מ"ג/מ"ל ו-2.0 מ"ג/מ"ל, ולאחר מכן משמשים לעיבוד התאים התרבותיים. בסיום הטיפול, נוספו 20 μL של תמיסת MTT (5 מ"ג/מ"ל) לכל אחד היטב. תאי 1e הודגרו למשך 20 דקות ב-37 מעלות. 1esupernatant הושלך, ו-100 μL של DMSO נוספו לכל באר. ספיגת 1e נמדדה ב-490 ננומטר. ניסוי אחד חזר על עצמו 3 פעמים. שיעור ההישרדות 1e חושב באופן הבא:

אחוז שיעור הישרדות=(קבוצה ריקה בקבוצת ניסוי)/(קבוצת ביקורת - קבוצה ריקה) × 100 אחוז .

הריכוז האופטימלי (C1) של כל חלק חושב על פי הקשר התפקודי בין שיעור ההישרדות וריכוז כל חלק. C1 מדולל 2, 4, 6 ו-8 פעמים כדי להשיג את הריכוזים C2, C3, C4 ו-C5, בהתאמה. תמציות שונות של העיסה מוצגות בטבלה 1.

טבלה 1: תמציות קוטביות של עיסת Trichosanthes והריכוז האופטימלי.

2.4. ניסוי הלבנה

2.4.1. בדיקת נוגדי חמצון.

בדיקת MTT שימשה לקביעת כדאיות התא (MTT Kit, Kaiji Biology). 1en, B-16 זרעו ב96-צלחות באר (10 ×104 תאים/באר) במשך 24 שעות וטופלו בתמציות שונות או בתרכובת במשך 24 שעות. לאחר טיפול, מצע התרבות הושלך ונשטף פעמיים עם PBS. 1en, נוספו 0.05 אחוז H2O2, והתאים תורבו במשך 4 שעות. לאחר מכן, תאי B-16 הודגרו בתמיסת MTT של 20 µL (5 מ"ג/מ"ל) ב-37 מעלות למשך 4 שעות. 1en, סופרנטנט התרבות הוסר, והשאריות הומסו ב-100 μL DMSO. ספיגת 1e זוהתה ב-490 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-לוחות (Tecan Trading AG). 1 ניסויים בוצעו במקביל 3 פעמים.

2.4.2. עיכוב ייצור המלנין.

ייצור המלנין נקבע על ידי זיהוי תאי תכולת מלנין על ידי פירוליזה של NaOH [12]. תאים נזרעו ב96-צלחות תרבות well במשך 24 שעות בצפיפות תאים של 10 ×104 cells/well.1en, התאים טופלו בתמציות שונות או בתרכובות שונות במשך 24 שעות. לאחר מכן, הסופרנטנט של תרבית התא (300 μL) הוסר, והשאריות הומסו ב-NaOH (1 מ"ל, 1.0 מול/ליטר) למשך 24 שעות בטמפרטורת החדר. 1eabsorbance נמדדה ב-475 ננומטר, באמצעות microplatereader (Tecan Trading AG). ניסויים 1e בוצעו במקביל ל-3 שכפולים. 1e IC50 נקבע על ידי תוכנת GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, California), ו-arbutin שימש כביקורת חיובית (IC50 =15.6 µL).

2.4.3. קביעת פעילות טירוזינאז.

תרבית התאים העל-מנתית הוסר, והשאריות הומסו ב-Tritonx-100 (90 µL) וטירוזינאז(10 µL, 1.0 mg/mL,Sigma, T3824 25ku). לאחר ערבוב, התערובת הודגרה ב-37 מעלות למשך 30 דקות. ספיגת 1e נמדדה ב-475 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-לוחות (Tecan Trading AG). 1 ניסויים בוצעו במקביל 3 פעמים. 1e IC50 נקבע על ידי תוכנת GraphPad Prism 5 (GraphPadSoftware, Inc., San Diego, California), ו-arbutin שימש כביקורת חיובית (IC50 =15.6 µL).

2.5. מיצוי ובידוד. תמצית האתיל אצטט הומסה במתנול, והעמודה הייתה ארוזה ב-200-300 mesh סיליקה ג'ל, אשר עבר איזון באמצעות אתר נפט. 1en, פליטת שיפוע המורכבת מפטרולאומיתר ואתיל אצטט ביחסים של 2:1, 1:1 ו-1:2; אתיל אצטט; אתיל אצטט ומתנול ביחסים של 2:1, 1:1 ו-1:2; ובמתנול נעשה שימוש בשילוב עם TLC כדי להשיג תרכובות A (11.5 גרם), B (10.4 גרם), C (12.1 גרם), D (5.2 גרם) ו-E (6.1 גרם).

A הופרד על ידי כרומטוגרפיה של עמודת פוליאמיד, תוך שימוש בדיכלורומתאן ומתנול ביחסים של 2:1, 1:1 ו-1:2 כממס חלוקה. eluate 1e היה במעקב על ידי TLC. כתמים עם אותו גורם שמירה (rf) שולבו, והתקבלו A1 ו-A2. 1en, A1 הוכן על ידי TLC, באמצעות דיכלורומתאן ומתנול ביחס של 1:1 כחומר הפיתוח, וטיהרו מספר פעמים על ידי עמודת הג'ל. לבסוף התקבלו תרכובת 1 (17 מ"ג) ותרכובת 2 (27 מ"ג). A2 טוהר על ידי כרומטוגרפיה של עמודת סיליקה ג'ל, תוך שימוש בדיכלורומתאן ומתנול כחומר הפלט ביחסים של 1:1 ו-1:2. התקבלו תרכובת 3 (11 מ"ג), תרכובת 4 (12 מ"ג) ותרכובת 5 (23 מ"ג). B הופרד על ידי כרומטוגרפיה בלחץ בינוני C18 הפוכה (RP-C18), תוך שימוש במתנול, מים בגלידת שיפוע באופן הבא: 0 אחוז ,10 אחוז , 15 אחוז , 20 אחוז , 25 אחוז , 30 אחוז , 35 אחוז, 40 אחוז, 50 אחוז, 75 אחוז, 90 אחוז ו-100 אחוז. קצב הזרימה של 1e היה 10 mL·min−1. שברי זרימה 1e עם אותו rf שולבו, והתקבלו B1 ו-B2. B1 טוהר שוב ושוב על ידי עמודת הג'ל, עם מתנול כממס חלוקה. תרכובת (24 מ"ג), 7 (21 מ"ג) ו-8 (18 מ"ג) התקבלו לאחר ניקוי חוזר. B2 טוהר על ידי עמודת הג'ל ומתנול, והתקבלה תרכובת 9 (11 מ"ג). C הופרד על ידי RP-C18 ונפלט על ידי מתנול ומים עם קצב זרימה של 10 מ"ל·min-1. חלקי זרימה 1e עם אותו rf שולבו, והתקבלו C1, C2 ו-C3. C1 הוכן על ידי עמודת הג'ל ונשלף על ידי מתנול, והתקבלה תרכובת 10 (13 מ"ג). C2 הופרד על ידי עמודת סיליקה ג'ל ונפלט על ידי אתיל אצטט ומתנול, עם דליית שיפוע ביחסים של 2:1, 1:1 ו-1:2. C2 טוהר על ידי מיצוי שלב נוזלי הכנה, ותרכובות 11 (15 מ"ג) ו-12 (14 מ"ג) התקבלו. C3 הופרד על ידי עמודת הפוליאמיד, נחלץ על ידי מתנול ומים, וטיהור על ידי HPLC. התקבלו תרכובות 13 (34 מ"ג), 14 (42 מ"ג) ו-15 (38 מ"ג). D הופרד על ידי RP-C18 ונשלף עם מתנול ומים. קצב הזרימה 1e היה 10 מ"ל·min-1. תרכובות 16 (36 מ"ג), 17 (19 מ"ג) ו-18 (37 מ"ג) הושגו באמצעות HPLC. תרכובות 19 (29 מ"ג) ו-20 (34 מ"ג) הושגו על ידי שחרור שיפוע באמצעות אתיל אצטט ומתנול ביחסים של 1:1 ו-1:2, ואחריו 100 אחוז מתנול על עמודת סיליקה ג'ל.

herba epimedium sagittatum על העור

3. תוצאות ודיון

3.1. קביעת תמציות פעילות (E1–E11).

1e ריכוז אופטימלי (כלומר, C1) של כל תמצית חושב ומוצג בטבלה 1. ניסוי נוגדי חמצון 1e מראה שלכל התמציות יש אפקט תיקון נוגד חמצון, אך בהשוואה ל-VC, ההשפעה נוגדת החמצון של כל קבוצה חלשה. פעילות נוגדת החמצון של E1, E3, E4, E7 ו-E11 ירדה תוך הגדלת ריכוז, כפי שמוצג באיור 1. בדיקת עיכוב מלנין 1 הראתה שכל הרכיבים הקוטביים ב-pulpof Trichosanthes kirilowii עיכבו את סינתזת המלנין. במיוחד, שיעור עיכוב המלנין היה גבוה משמעותית עבור E2, E3 ו-E4 מזה של ארבוטין ביקורת חיובית, כפי שמוצג באיור 2. תוצאות 1e שלטירוזינאזפעילות מראה שכל המרכיבים הקוטביים בעיסה של Trichosanthes kirilowiii עיכבו את פעילות טירוזינאז, ומגמת העיכוב הייתה דומה לזו של עיכוב המלנין. עיכוב 1e של פעילות טירוזינאז היה גבוה משמעותית עבור E2, E3, E4 ו-E8 מאשר בביקורת החיובית. באופן כללי, לתמציות מאתר נפט יש השפעה מעכבת נמוכה על טירוזינאז. לתמציות מאתיל אצטט יש השפעה מעכבת גבוהה על טירוזינאז, במיוחד הרכיבים הקוטביים מאתיל אצטט. לתמציות 1e מ-n-butanol יש גם השפעה מעכבת גבוהה על טירוזינאז, כפי שמוצג באיור 3.

3.2. בידוד וזיהוי של רכיבים מונומרים.

20 תרכובות הופרדו על ידי סיליקה ג'ל ועמודות כרומטוגרמה ODS וכן HPLC הכנה. על בסיס ניתוח נתוני NMR ו-MS, המבנים שלהם הובהרו.1e 20 תרכובות מוצגות בטבלה 2, והנתונים האנליטיים הספציפיים של מונומרים מוצגים בנספח 1.

3.3. ניתוח אימות של תרכובות יעילות

3.3.1. ניתוח אימות של תרכובות נוגדי חמצון.

ל-E1, E2, E3, E4 ו-E5 יש השפעות נוגדות חמצון. 1e תרכובות עיקריות שבודדו מהרכיבים שלעיל היו דרכסלרול-B (תרכובת 9), ציקלוהקסנול 3-פלמיטאט (תרכובת 10), 5-אצטוקסימתיל-2-פוראלדהיד (תרכובת 11), 5-הידרוקסי-מתיל-פורפורל ( תרכובת 12), דיוסמטין (תרכובת 13), אפיגנין (תרכובת 14), כריסובריל (תרכובת 15), לוטאולין (תרכובת 16), 4'-הידרוקסי-סקוטלרין (תרכובת 17), קוורצטין (תרכובת 18), 3',{{ 25}}התרכובות העיקריות היו גליקוזידים, מה שמצביע על כך שלגליקוזידים יש פעילות נוגדת חמצון טובה. חומצות פנוליות, כגון 5-acetoxymethyl-2-furaldehyde (תרכובת 11), 5-hydroxymethylfurfural (תרכובת 12), diosmetin (תרכובת 13),apigenin (תרכובת 14), chrysoberyl (תרכובת 15) ,לוטאולין (תרכובת 16), 4'-הידרוקסיסקוטלרין (תרכובת 17), קוורצטין (תרכובת 18), ו-3',5-דיהידרוקסי-7-(-Dglucopyranosyloxy)-4'-מתוקסי פלבון, יש גם פעילות נוגדת חמצון טובה, בשל קבוצת ההידרוקסיל הפנולית וקשרים כפולים בלתי רוויים [26, 27]. תוצאות 1e מוצגות באיור 4.

איור 4: שיעור הישרדות תאים (אחוז) של ניסוי נוגדי חמצון של תרכובות שונות מתמציות Trichosanthes

3.3.2. ניתוח אימות של תרכובות מעכבות מלנין.

ל-E11, E12, E13, E16, E17 ו-E18 יש השפעה מעכבת טובה על סינתזת המלנין. תרכובות עיקריות שבודדו מהרכיבים לעיל מוצגות בטבלה 2. לפי השיטה בסעיף 2.4.2, נקבעה ההשפעה של כל תרכובת על סינתזה של מלנין. כל תרכובת הוערכה בריכוזים הבאים: 1000 מיקרוגרם/מ"ל, 800 מיקרוגרם/מ"ל, 400 מיקרוגרם/מ"ל, 200 מיקרוגרם/מ"ל ו-100 מיקרוגרם/מ"ל. כל מדידה בוצעה בשלושה עותקים וחושב קצב העיכוב של סינתזת המלנין.

Protocatechuate (תרכובת 5), 5-acetoxymethyl-2-furaldehyde (תרכובת 11), 5-hydroxymethylfurfural (תרכובת 12), דיוסמטין (תרכובת 13), p-hydroxybenzaldehyde (תרכובת 1), חומצה סליצילית (תרכובת 2), חומצה ונילית (תרכובת 3), חומצה איזוונילית (תרכובת 4), חומצה טרנס-קינמית (תרכובת 6), 4-חומצה קומארית (תרכובת 7), אפיגנין (תרכובת 14), כריסובריל (תרכובת 15 ), לוטאולין (תרכובת 16), 4'-הידרוקסי סקוטלרין (תרכובת 17), קוורצטין (תרכובת 18), 3',5-דיהידרוקסי-7-(-D-glucopyranosyloxy)-4′ -methoxy flavone (תרכובת 19), ofloxacin-7-O- -D-glucoside (תרכובת 20) יכולים לעכב את ייצור המלנין [28]. בפרט, לחומצה ונילית (תרכובת 3), חומצה איזוונילית (תרכובת 4), פרוטוקטשואט (תרכובת 5), חומצה טרנס-קינמית (תרכובת 6), ו-4-חומצה קומרית (תרכובת 7) יש עיכוב מלנין גבוה. תוצאות 1e מוצגות באיור 5.

3.3.3. אימות וניתוח של תרכובות המעכבות פעילות טירוזינאז.

ל-E2, E3, E4, E7, E8 ו-E9 יש השפעות מעכבות טובות עלטירוזינאזפעילות. תרכובות עיקריות מבודדות מהרכיבים לעיל מוצגות בטבלה 2. על פי השיטה המוצגת בסעיף 2.4.3, ארבוטין שימש כביקורת, וריכוז התרכובת היה 1000 מיקרוגרם/מ"ל, 800 מיקרוגרם/מ"ל, 400 מיקרוגרם/מ"ל , 200 מיקרוגרם/מ"ל ו-100 מיקרוגרם/מ"ל. כל מדידה בוצעה 5 פעמים, ושיעור העיכוב של טירוזינאז חושב. תוצאות 1e מוצגות באיור 6.

תוצאות 1e מראות שדיוסמטין (תרכובת 13), אפיגנין (תרכובת 14), כריסובריל (תרכובת 15), לוטאולין (תרכובת 16), 4'-הידרוקסיסקוטלרין (תרכובת 17), קוורצטין (תרכובת 18), 3',{{10} }דיהידרוקסי-7-(-D-glucopyranosyloxy)-4'-מתוקסי פלבון (תרכובת 19), ציפרלקס-7-O- -D-glucoside (תרכובת 20), p-hydroxybenzaldehyde (תרכובת 1), חומצה סליצילית (תרכובת 2), חומצה ונילית (תרכובת 3), חומצה איזוונילית (תרכובת 4), פרוטוקטשואט (תרכובת 5), חומצה טרנס-קינמית (תרכובת 6), 4-חומצה קומרית (תרכובת 7 ), וחומצה טרנס-פרולית (תרכובת 8) לכולם יש ברורטירוזינאזפעילות מעכבת.

צמח Cistanche מעכב פעילות טירוזינאז.

לחצו על התמונה וקבלו פרטים נוספים.

תרכובות תחליפי הידרוקסיל על טבעת הבנזן, כגון p-hydroxybenzaldehyde (תרכובת 1), חומצה סליצילית (תרכובת 2), חומצה ונילית (תרכובת 3), חומצה איזוונילית (תרכובת 4), פרוטוקטקואט (תרכובת 5), חומצה טרנס-קינמית ( תרכובות 6), 4-חומצה קומרית (תרכובת 7), חומצה טראנס-פרולית (תרכובת 8) ופלבונואידים, הפגינו עיכוב טירוזינאז גבוה, ושיעור העיכוב של תרכובות מוחלפות בפארא היה גבוה משמעותית מזה של תרכובות מוחלפות . לדוגמה, הפעילות המעכבת של p-hydroxybenzaldehyde הייתה גבוהה משמעותית מזו של חומצה סליצילית, והפעילות המעכבת של חומצה ונילית הייתה גבוהה משמעותית מזו של חומצה איזוונילילית. יתרה מכך, הפעילות המעכבת של p-hydroxybenzaldehyde הייתה גבוהה משמעותית מזו של סליצילית, חומצה ונילית, חומצה איזוונילית ופרוטוקטקואט. ייתכן שהסיבה לכך היא שהקבוצות הנוקלאופיליות סביב המרכז הפעיל שלטירוזינאז, כגון -SH, -NH2 ו-OH, תופסים את החלל סביב המרכז הפעיל ובכך מונעים מטירוזין לתקוף את המרכז הפעיל. לבסוף, עוכבה סינתזה של מלנין [28]. הפעילות המעכבת של תרכובות המכילות o-די-הידרוקסי הייתה חזקה יותר מזו של תרכובות פארה-הידרוקסי, והפעילות המעכבת של פרוטוקטקואט הייתה גבוהה משמעותית מזו של חומצה ונילית. תופעות 1e לעיל קיימות גם בפלבנואידים. שיעור המעכבים של פלבנואידים המכילים קבוצות הידרוקסיל 7 ו-4' היה גבוה משמעותית מאשר אם יוחלפו קבוצות ההידרוקסיל 7 ו-4'. לדוגמה, הפעילות המעכבת של כריסובריל הייתה גבוהה משמעותית מזו של דיוסמטין, בעוד שהפעילות המעכבת של דיוסמטין הייתה גבוהה מזו של 3′,5-dihydroxy-7-(-D-glucopyranosyloxy)-4 "- methoxy flavone ו- ciprofloxacin-7-O- -D-glucoside. שיעור המעכב של פלבנואידים המכילים 3-הידרוקסי היה גבוה משמעותית מזה של תרכובות ללא 3-הידרוקסי או אם ה3-הידרוקסי הוחלף. לדוגמה, הפעילות המעכבת של quercetin הייתה גבוהה משמעותית מזו של 4'-hydroxyscutellarin, אבל הפעילות המעכבת של 4'-hydroxyscutellarin הייתה גבוהה מזו של quercetin-3-o glucoside. בנוסף, הפעילות המעכבת של קוללין כביסה גבוהה יותר מזו של אפגנין אך נמוכה מזו של לוטאולין. הוצע כי תחליפי הטבעת B, במיוחד קבוצת ההידרוקסיל, יכולים לשפר אתטירוזינאזפעילות מעכבת, ולקבוצת האורתודי-הידרוקסי של טבעת B הייתה פעילות מעכבת רבה יותר [29].