מטבולומי השתן חושפת התאוששות חריגה לאחר מאמץ מרבי בנשים חולות ME/CFS חלק 3

למה נהיה עייפים? כיצד נוכל לפתור את בעיות העייפות?

【צור קשר】 דוא"ל: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501

3. דיון

זו הפעם הראשונה שבה מטבולום השתן של חולי ME/CFS מאופיינ לפני ואחרי אתגר פעילות גופנית כאשר חולי ME/CFS חווים PEM. רבים ממטבוליטים אלו מעולם לא נמדדו בעבר בחולי ME/CFS, מאחר שמחקרי מטבולומיה קודמים של שתן ב-ME/CFS הוגבלו לפחות מ-50 מטבוליטים והמחקר הנוכחי נמדד 1403. יתרה מכך, השימוש בבקרות בריאות בישיבה כדי להסביר רמות הפעילות הגופנית, שיכולות להשפיע על רמות המטבוליטים הבסיסיים ואחרי האימון, היא יתרון מרכזי של תכנון המחקר הנוכחי שלא נוצל במחקרים קודמים. התוצאות שלנו הראו עליות נרחבות ברמות המטבוליטים בשתן של הביקורת 24 שעות לאחר האימון, שלא נראו בחולי ME/CFS, כאשר ל-110 מהתרכובות הללו יש אינטראקציה משמעותית בין מצב המחלה (ME/CFS או ביקורת ) וזמן (בסיס לעומת פוסט אימון) (איור משלים S2). בנוסף לניתוחים רבים של רמות מטבוליטים בשתן, מתאם רמות מטבוליטים בשתן ובפלזמה הניב עדות נוספת לחוסר ויסות מטבולי בחולי ME/CFS לאחר האימון. ניתוח זה סיפק הוכחות נוספות לשינויים פתופיזיולוגיים בתת-מסלולים מרובים וכן עדות להבדלים בתתי-מסלולים נוספים שלא היו הבדלים משמעותיים רבים בין חולי ME/CFS ובקרות כאשר הסתכלו על רמות מטבוליטים בשתן בבודדים.

Cistanche יכול לשמש כמשפר עייפות וסיבולת, ומחקרים ניסיוניים הראו שמרתח של Cistanche tubulosa יכול להגן ביעילות על הפטוציטים של הכבד ועל תאי האנדותל שניזוקו בעכברים שוחים נושאי משקל, להגביר את הביטוי של NOS3 ולקדם גליקוגן בכבד. סינתזה, ובכך מפעילה יעילות נגד עייפות. תמצית Cistanche tubulosa עשירה ב-Penylethanoid glycoside יכולה להפחית באופן משמעותי את רמות קריאטין קינאז בסרום, לקטאט דהידרוגנאז ולקטאט, ולהגביר את רמות ההמוגלובין (HB) והגלוקוז בעכברי ICR, וזה יכול למלא תפקיד אנטי עייפות על ידי הפחתת הנזק לשרירים ועיכוב העשרת חומצת החלב לאגירת אנרגיה בעכברים. Compound Cistanche Tubulosa Tablets האריכו באופן משמעותי את זמן השחייה נושא המשקל, הגדילו את מאגר הגליקוגן בכבד והפחיתו את רמת האוריאה בסרום לאחר פעילות גופנית בעכברים, מה שמראה את השפעתו נגד עייפות. המרתח של Cistanchis יכול לשפר את הסיבולת ולהאיץ את ביטול העייפות בעכברים מתאמנים, ויכול גם להפחית את העלייה של קריאטין קינאז בסרום לאחר אימון עומס ולשמור על מבנה האולטרה של שרירי השלד של עכברים תקין לאחר אימון, מה שמעיד על כך שיש לו את ההשפעות של שיפור כוח פיזי ואנטי עייפות. Cistanchis גם האריך משמעותית את זמן ההישרדות של עכברים מורעלים בניטריט והגביר את הסבילות נגד היפוקסיה ועייפות.

לחץ על תחושת עייפות כל הזמן

3.1. השוואה למחקרים קודמים של מטבולומי השתן בחולי ME/CFS

בסך הכל, התוצאות שלנו אינן עקביות עם מעט המחקרים הקודמים למדידת מטבוליטים בשתן בחולי ME/CFS בהשוואה לנבדקי ביקורת שאינם ME/CFS. כדי להשוות טוב יותר את התוצאות שלנו עם מחקרים קודמים, שמדדו פחות מטבוליטים, השווינו את התוצאות בקו הבסיס של p < 0.05 ב-LMM למחקרים הקודמים. התרכובת היחידה שנמצאה משמעותית במחקר אחר ושלנו הייתה אלנין, אם כי המחקר הקודם מצא שהאלנין נמוך יותר בנשים מאשר בביקורות (BH-adjust p-value < 0.05) וב- במחקר שלנו, הריכוז המנורמל הממוצע היה גבוה יותר בחולי ME/CFS מאשר בביקורות [20]. עם זאת, כמה מהמחקרים מצאו הבדלים בקו הבסיס בתרכובות שמצאנו משתנות באופן שונה בחולי ME/CFS ובבקרות במהלך התאוששות מפעילות גופנית, כולל פנילאלנין (נמוך יותר בחולי ME/CFS [23,24]) ו-וואלין (נמוך יותר ב- חולי ME/CFS [20]). הן פנילאלנין והן ולין עלו משמעותית גם בביקורות בישיבה בעקבות פעילות גופנית במחקר הנוכחי, כך שייתכן שהביקורות במחקרים אחרים היו פעילים יותר וכבר היו עם רמות גבוהות יותר של פנילאלנין בשתן. אף מחקר אחר לא גייס ספציפית נבדקים בישיבה שאינם ME/CFS, אם כי מחקר אחד אכן ביקש להתאים ל"אורח חיים כללי" [23]. ארמסטרונג וחב'. בדק את המתאמים של פירסון בין מטבוליטים של שתן ופלזמה בחולי ME/CFS ובקרות בתחילת הדרך, ומצא הבדלים באצטאט, לקטט ופנילאלנין עם סף של |R| > 0.4 בכל אחת מהקבוצות [20]. אצטט קטן מכדי להתגלות בבדיקה שלנו ולא זיהינו הבדלים בקורלציות של פלזמה ושתן בלקטאט או בפנילאלנין.

מקגרגור ועמיתיו גם חקרו שינויים במטבולומים של השתן והפלזמה בחולי ME/CFS שחווים PEM [19]. הם השתמשו בסקר כדי להפריד בין חולי ME/CFS שחווים PEM בשבעת הימים האחרונים וגילו שלשמונה מתוך שלושים מטבוליטים של שתן שנמדדו היו ריכוזים נמוכים משמעותית בקבוצת ME/CFS בהשוואה לביקורת. מתוכם, רק לסרין היו הבדלים משמעותיים בניתוחים שלנו; זה גדל לאחר פעילות גופנית בקבוצת הביקורת (Supplementary Data File S2—LMM Results). רמות של שני מטבוליטים בשתן, אצטט ומתיל-היסטידין, היו שונות באופן משמעותי גם בקבוצת PEM לעומת קבוצת ללא PEM [19]. רמות המתיל-היסטידינים שנבדקו במחקר זה לא היו שונות באופן משמעותי בניתוח LMM, אך מצאנו הבדלים במתאמים בפלזמה ובשתן של 1-מתיל-היסטידין ו-N-אצטיל-3-מתיל-היסטידין (איור 9). מקגרגור וחב'. מצאו גם קשרים של ציוני PEM של שבעה ימים עם מספר מטבוליטים בפלזמה ובשתן [19].

3.2. העלייה לאחר פעילות גופנית ברמות מטבוליטים בשתן בבקרות בישיבה תואמת למחקרים קודמים

מטבולום השתן אצל נשים 24 שעות לאחר אימון לא אופיינו היטב. למיטב ידיעתנו, אף מחקר לא מדדו את חילוף החומרים בשתן בקו הבסיס בהשוואה ל-24 שעות שלאחר האימון אצל נשים. מחקר אחד מדד 32 מטבוליטים בשתן לפני פעילות גופנית ו-24 שעות לאחר אימון בגברים, תוך השוואה של תשעה רוכבי אופניים תחרותיים לשמונה גברים בריאים אך לא מאומנים בני אותו גיל (50-60 שנים) [48]. בעוד שהמחקר שלהם התמקד בהשוואה בין הספורטאים לנבדקים הבלתי מאומנים, הם אכן ראו שינוי ברמות גבוהות של לאחר פעילות גופנית (משמעותית יותר מפי שניים) בנבדקי הביקורת ברמות לקטט, אצטט והיפוקסנטין. אצטט לא נמדד במחקר שלנו, ולא לקטט ולא היפוקסנטין היו שונים מנקודת ההתחלה ועד לאחר האימון בקבוצת הביקורת הנשית שלנו. Mukherjee et al. מצאו הבדלים משמעותיים בין הספורטאים וקבוצות הביקורת בשמונה מהמטבוליטים הנמדדים הקשורים למגוון מסלולים ביוכימיים [48]. לכן, נקודת החוזק של המחקר הנוכחי היא הבחירה של בקרות בריאות בישיבה, בניגוד לאנשים פעילים יותר, שאולי יש להם שינוי בחילוף החומרים בשתן עקב פעילות גופנית סדירה.

למרות שקיים מחסור בספרות שפורסמה על מטבולום השתן 24 שעות לאחר אימון, ישנם מספר מחקרים המודדים את מטבוליטים בשתן אצל גברים ונשים כאחד בנקודות זמן מוקדמות יותר שלאחר האימון (נסקרו ב-[49]). אחד הממצאים שהיו עקביים בין מחקרים הוא שריכוז רוב השומנים עולה ב-biofluids לאחר אימון, כולל בשתן. בפרט, הוכח כי ריכוזי האצילקרניטין עולים בדם ובשתן בתגובה לפעילות גופנית. זה עולה בקנה אחד עם תוצאות המחקר שלנו שבו מספר תרכובות אצילקרניטין גדלו באופן משמעותי לאחר אימון בשתן של הביקורות (איור 7A).

המחקר הגדול ביותר שכלל נשים (סה"כ 255 נבדקים, 107 נשים) מצא גם שינויים מטבוליים נרחבים בשתן לאחר פעילות גופנית, כאשר 37 מתוך 47 מטבוליטים שנמדדו השתנו באופן משמעותי לאחר תיקון FDR, ו-33 מהם היו מוגברים לאחר פעילות גופנית [50] . זה עולה בקנה אחד עם הממצא שלנו של שינוי מטבולי בקנה מידה גדול לאחר פעילות גופנית בשתן של נבדקי ביקורת, כאשר רוב התרכובות שהשתנו נמצאו בריכוז מוגבר. מחקר זה השלים גם ניתוח השוואתי בשכבות מין, אך מצא רק שני מטבוליטים עם יחס שונה באופן משמעותי שלאחר הפעילות הגופנית/בסיסית אצל נשים וגברים.

בכתב העת שרנר ואח'. סקירה, הממצאים עבור חומצות אמינו אינם עקביים כמו אלה עבור שומנים, אשר בדרך כלל מגבירים לאחר אימון [49]. עם זאת, חלק מהממצאים בשתן היו עקביים בשני מחקרים לפחות (אם כי כל נקודות הזמן שלאחר האימון משולבות), כולל שהתרכובות הבאות עלו בשתן לאחר האימון: אלנין, O-acetyl-homoserine, 5- hydroxyindolepyruvate, xanthurenate, L-metanephrine, N-acetylvanilalanine, ו-N-(carboxyethyl) arginine. התרכובות הבאות נמצאו מופחתות בשתן לאחר פעילות גופנית בשני מחקרים לפחות: גליצין, היסטידין, טרימתילאמין n-אוקסיד. בהשוואה לתוצאות אלו למחקר שלנו, רוב המטבוליטים לא היו שונים באופן משמעותי לפני ואחרי האימון, או שלא נמדדו במחקר שלנו. עם זאת, מצאנו גם עלייה משמעותית ברמות האלנין בביקורות, מה שעולה בקנה אחד עם המחקרים שנסקרו. במחקר שלנו, רמות הגליצין עלו גם לאחר אימון בביקורות, בניגוד לירידה. עם זאת, ה-Kistner et al. מחקר, שכלל נשים רבות, מצא גם שרמות הגליצין גדלו באופן משמעותי לאחר אימון גופני [50].

3.3. הבדלים בין בקרות בישיבה לבין חולי ME/CFS ב-Lipid Superpathway

תת-מסלולי שומנים רבים היו שונים באופן משמעותי בשתן של המטופלים ובבקרות במחקר זה, כולל חילוף החומרים של חומצות שומן אצילקרניטין. מטבוליטים של אציל קרניטין היו מוגברים לאחר פעילות גופנית בשתן בבקרות בריאות והשינויים שנגרמו על ידי פעילות גופנית היו שונים באופן משמעותי בין הביקורות וחולי ME/CFS (איורים 3, 7 ו-S4). בנוסף, למרות שאינו אציל קרניטין, דיאוקסיקרניטין בתת-מסלול השומנים בחילוף החומרים של קרניטין נמצא בקורלציה שונה בין פלזמה לשתן בחולי ME/CFS בהשוואה לביקורות (איור 9). Acyl carnitines חשובים מאוד במטבוליזם האנרגיה, מכיוון שהם נדרשים להעביר חומצות שומן למיטוכונדריה לצורך חמצון. חומצת שומן ארוכת שרשרת - חמצון הוא האופן העיקרי של חילוף חומרים אנרגטי במהלך פעילות אירובית. הפרעה בחילוף החומרים של אצילקרניטין במהלך פעילות גופנית עשויה לתרום לאי סבילות לפעילות גופנית ול-PEM בחולי ME/CFS. במחקר אחר שבחן רק נבדקים בקו הבסיס ושלא גייס ספציפית בקרות בישיבה, נמצא כי תת-מסלול ה-Acylcarnitine שונה באופן משמעותי בחולי ME/CFS לעומת ביקורת, כאשר חמש מתוך שמונה תרכובות נמצאו בריכוז נמוך יותר בחולים [11]. כאשר רק נבדקי בסיס נותחו, מדידות ספציפיות של acylcarnitine בסרום הצביעו על כך שהתרכובת הייתה נמוכה יותר בחולי ME/CFS מאשר הביקורות בדוח אחד [51] אך לא נראו הבדלים ברמות השתן או הפלזמה במחקר אחר [52]. בפלזמה של הקוהורט הגדול יותר שהנבדקים של המחקר הנוכחי הם תת-קבוצה שלו, מקבץ הכימיקלים של קרניטין השתנה משמעותית גם בבקרות בישיבה נשיות במהלך ההתאוששות (מוגדר כהבדל בין 24 שעות לאחר האימון ל-15 דקות לאחר האימון ) כאשר רוב התרכובות עולות לאחר האימון [25]. לא נמצא שהאשכול הכימי של קרניטין השתנה באופן משמעותי במהלך התאוששות מפעילות גופנית בחולי ME/CFS. בעוד שהאשכול הזה כולל יותר מסתם אצילקרניטינים, אצילקרניטינים הם חברים ותורמים למשמעות שלו בניתוח העשרה של דמיון כימי גם במחקר הנוכחי (איור משלים S4). כמו כן, הוכח ex vivo כי פלמיטוילקרניטין, המוגבר בשריר באופן חולף לאחר אימון, עשוי לפעול כאות מאמץ משריר לקבוצת נוירונים [53].

מטבוליטים של חומצת שומן אציל גליצין הם התרכובות היחידות שנמצאו בשתן בריכוזים שונים באופן משמעותי ב-ME/CFS לעומת בקרות בנקודת זמן בודדת (24 שעות לאחר אימון) ובתרכובת אציל גליצין שונה, 3-hydroxybutyroylglycine , היה מתאם שלילי מובהק בחולי ME/CFS בעת מתאם U3/U1 עם P3/P1 (איורים 5 ו-9). בנוסף, cis-3,4-methyleneheptanoylglycine השתנה באופן שונה במהלך התאוששות מפעילות גופנית בחולי ME/CFS לעומת קבוצת ביקורת (LMM, איור משלים S2). בעוד שחילוף החומרים של אציל גליצין אינו אחד מתת-המסלולים שהוגברו באופן משמעותי לאחר אימון בביקורות בלבד, הוא היה שונה באופן משמעותי בחולי ME/CFS לעומת בקרות הן בנקודת הזמן של 24 שעות לאחר האימון והן בעת ​​ניתוח ההבדל. ביחסים שלאחר אימון/בסיס (איור 3). הפרשת השתן של אציל גליצינים מסוימים משתנה גם על ידי הפרעות הקשורות לחמצון חומצות שומן במיטוכונדריה, כולל מחסור באציל-קואנזים A (CoA) דהידרוגנאז (MCAD) בינוני [54]. הקבוצה שלנו הבחינה שחמצון חומצות שומן שונה בתאי מערכת החיסון מחולי ME/CFS לעומת בקרות [55].

3.4. הבדלים בין בקרות בישיבה לחולי ME/CFS בנתיב העל של חומצת אמינו

מצאנו גם הבדלים רבים בשתן בחומצות אמינו בחולי ME/CFS ובקרות לאחר פעילות גופנית. שניים מהמסלולים הללו בלטו מכיוון שהיו להם שינויים משמעותיים בחולי ME/CFS לעומת בקרות בכל הניתוחים שלנו, כולל ניתוח מסלול KEGG, ונדון בהמשך בהמשך.

מחזור האוריאה בכבד הוא חלק חשוב במטבוליזם של פעילות גופנית מכיוון שהוא נחוץ כדי להסיר רמות גבוהות של אמוניה המיוצרות במהלך פעילות גופנית [56,57]. ג'רמן ועמיתיו מצאו גם שמחזור האוריאה ומסלולי מיחזור האמוניה SMPDB השתנו באופן משמעותי בפלזמה בין חולות ME/CFS ובקרות בניתוח מסלול כאשר השוו את ההבדל בין רמות המטבוליטים ב-24 שעות לאחר CPET (P3) ו 15 דקות לאחר CPET (P2) [25]. הצטברות אמוניה נקשרה בעבר לרעילות עצבית ועייפות הנגרמת על ידי פעילות גופנית [56,57]. חוסר הוויסות של מחזור האוריאה במטבולומים של השתן והפלזמה לאחר פעילות גופנית בחולי ME/CFS עלול לגרום להצטברות אמוניה, אבל 1403 התרכובות שנמדדו על ידי Metabolon® בשתן לא כללו אמוניה מכיוון שהיא תרכובת נדיפה וגם קטנה מ- מגבלת הזיהוי של הפלטפורמה של Metabolon®.

ציסטאין, מתיונין, SAM וטאורין הן חומצות אמינו חשובות שכן הן היחידות המכילות גופרית, והציסטאין ייחודי ביכולתו ליצור קשרים דיסולפידים. ציסטאין עשוי להיות מומר לגלוטתיון וטאורין. ציסטאין ומתיונין ממלאים תפקידים רבים במטבוליזם תאי אך הם גם אבני בניין מפתח של חלבונים [37]. בגלל קבוצת התיול שלו, ציסטאין מעורב בזירוז תגובות אנזימטיות רבות ושמירה על הומאוסטזיס חיזור. שינויים במטבוליזם של ציסטאין מתרחשים בהפרעות ניווניות רבות, כולל מחלת אלצהיימר, מחלת הנטינגטון ומחלת פרקינסון [58]. בעוד שחילוף החומרים של ציסטאין, מתיונין, SAM וטאורין הראה הבדלים רבים בין החולים והבקרות בניתוחי מטבולום השתן שלנו, המתאמים בין השתן והפלזמה חשפו תרכובות נוספות עם הבדלים משמעותיים בין חולי ME/CFS ובקרה, כולל בציסטאין, שהוא מיוצר כאשר שני ציסטינים מתחמצנים ליצירת קשר דיסולפידי, וציסטתיונין שהוא תוצר ביניים בייצור ציסטאין במחזור המתיונין [37].

3.5. מגבלות

למחקר שלנו יש מספר מגבלות חשובות. ראשית, התזונה של הנבדקים לא הייתה מבוקרת, וצריכה תזונתית של מטבוליטים יכולה להשפיע על הפרשתם בשתן. שנית, אנו מכירים בכך שהעדר התאמת BMI אינו אידיאלי ומהווה מגבלה של מחקר זה. העוקבה הגדולה יותר שלנו של חולי ME/CFS ובקרות בישיבה בריאה תואמת BMI, ולכן אם מחקר פיילוט זה יורחב, זו לא תהיה בעיה בעתיד. שלישית, התוצאות שלנו מוגבלות לנשים חולות ME/CFS. למרות שחשוב מאוד לחקור את שני המינים ב-ME/CFS ומתגלים מספר גדל והולך של הבדלים בין המינים בפתופיזיולוגיה [25,59,60], בחרנו למקד את מחקר הפיילוט שלנו בנקבות בגלל עומס המחלה הגבוה יותר של ME /CFS בנשים (60-65% נשים) [2]. בנוסף, מכיוון שלכדנו את מטבולום השתן רק בשתי נקודות זמן, בסיס ו-24 שעות לאחר האימון, איננו יכולים לומר אם חולי ME/CFS שינו את רמות ההפרשה של חלק ממטבוליטים אלו במועד מוקדם או מאוחר יותר. נקודה מאשר הפקדים. עליות אלו במוצרי הפרשה עשויות להתרחש בחולים אך עם עיכוב גדול יותר, בדומה לאופן שבו חולי ME/CFS מראים התאוששות כללית מאוחרת לפעילות גופנית. עם זאת, ייתכן גם שחוסר זה בהפרשה מטבולית שונה הוא חלק מהיעדר כללי של תגובה מטבולית בריאה לפעילות גופנית.

4. חומרים ושיטות

4.1. נושאי לימוד

שמונה מטופלים בישיבה בריאים ועשרה חולי ME/CFS נכללו במחקר זה. חולי ME/CFS אובחנו עם קריטריוני הקונצנזוס הקנדיים [3]. 18 הנבדקים שנכללו במחקר זה היו חלק מקבוצה גדולה יותר של 173 משתתפים בסך הכל (זיהוי ClinicalTrials.gov: NCT04026425) [61]. במחקר פיילוט זה, כל הנבדקים שנכללו היו נשים. הנבדקים גויסו לפי הקריטריונים הבאים. כל המשתתפים חייבים להיות בין 18-70 שנים. נבדקים לא נכללו משתי הקבוצות אם היו מעשנים, בהריון או מיניקים, היו חולי סוכרת, צרכו כמויות מופרזות של אלכוהול, או אם הייתה להם מגבלה אורטופדית המונעת מהם לבצע את ה-CPET. אבחנות של סכיזופרניה, הפרעת דיכאון מג'ורי, הפרעה דו קוטבית או הפרעת חרדה היו גם קריטריונים של אי הכללה בשתי הקבוצות. בנוסף, בדיקות בישיבה בריאות לא נכללו אם אובחנו עם הפרעות אוטואימוניות כלשהן. תפקוד הכליות היה תקין בכל הנבדקים במחקר זה, כפי שהוערך על ידי בדיקות הדם הסטנדרטיות הבאות של Quest Diagnostics: קריאטינין בסרום, חנקן אוריאה בדם וקצב סינון גלומרולרי משוער (eGFR).

17 נבדקים ביצעו את בדיקת המאמץ במכללת Ithaca באיתקה, ניו יורק, ונבדק אחד ביצע את בדיקת המאמץ ב-ID Med בטורנס, קליפורניה. כל המשתתפים התבקשו להפסיק תוספי תזונה כולל פרוביוטיקה למשך שבועיים לפני בדיקת המאמץ. המשתתפים התבקשו להפסיק כאבים ותרופות ממריצות למשך יומיים לפני בדיקת המאמץ. כל המטופלים סיפקו הסכמה מדעת בכתב, וכל הפרוטוקולים אושרו על ידי Ithaca College IRB #1017-12Dx2. כל המשתתפים מילאו את סולם נכות פעמון [26], סקר בריאות טופס קצר-36 [62] ושאלונים מותאמים אישית. חולי ME/CFS השלימו בנוסף את מלאי העייפות הרב-ממדית [63].

4.2. בדיקת מאמץ לב-ריאה ואיסוף דגימות שתן

ה-CPET בוצע על ארגומטר מחזורי נייח, עם הפרוטוקול הבא: 3 דקות מנוחה ולאחריה רכיבה רציפה שבה עומס העבודה המצטבר עולה ב-15 וואט לדקת פעילות גופנית עד לתשישות מרצון (כ-8-10 דקות). יחס החלפת הנשימה (RER), שהוא קצב ייצור הפחמן הדו-חמצני חלקי קצב צריכת החמצן, נמדד כדי לוודא שהמשתתפים ביצעו את הבדיקה במאמץ מספק (RER > 1.1 מציין מאמץ מרבי).

כל דגימות השתן נאספו בבוקר: (1) 15-20 דקות לפני ה-CPET ו-24 שעות לאחר מכן. השתן נאסף באמצע הזרם בקולטי שתן סטריליים, מנותק, בוצע בצנטריפוגה של 10,000×g למשך 10 דקות כדי להסיר פסולת תאים, ואוחסן ב-80 ◦C. דגימות שתן עברו מחזור הקפאה/הפשרה אחד למנה נוספת והמנות נשלחו בן לילה ל- Metabolon® על קרח יבש.

4.3. מבחן מטבולומי

מטבוליטים נמדדו באמצעות פלטפורמת מטבולומיקה גלובלית Precision Metabolomics™‎ ב-Metabolon®. שיטות מפורטות תוארו בעבר [64]. בקצרה, דגימות חולצו במתנול (5:1 מתנול: מדגם) ולאחר מכן התאדו. מטבוליטים זוהו בכל דגימה באמצעות ארבע פלטפורמות LC-MS/MS שונות שעברו אופטימיזציה לתרכובות הידרופיליות והידרופוביות ושימוש ביינון חיובי ושלילי כאחד. כל הכרומטוגרפיה השתמשה ב- Waters Acquity Ultra-high performance (UP)LC ונפח הזרקה של 5 μL (עם דגימות ששוחזרו בממסים מתאימים לכל פלטפורמה). כל ספקטרומטריית המסה בוצעה באמצעות ספקטרומטרי מסה ברזולוציה גבוהה/מדויקת ThermoScientific Q-Exactive עם מקורות יינון אלקטרוספריי מחומם (HESI-II) ומנתחי מסה של Orbitrap מופעלים ברזולוציית מסה של 35,000 עם טווח סריקה של 70-1000 מ'/ ז. תוכנה קניינית Metabolon® שימשה כדי להתאים דגימות ניסיוניות עם ספריית ייחוס של תקני זיהוי Tier 1 כפי שהוגדרו על ידי יוזמת הסטנדרטים של Metabolomics, והשטח מתחת לעקומה שימש לכימות שיא. הערכים מנורמלים במונחים של ספירת שטח גולמי, וכל הדגימות הופעלו באצווה אחת כך שלא היה צורך בתיקון אצווה. לתרכובות הלא ידועות אין תקן, ומולקולות מאופיינות חלקית הן כאלו שלא אושרו רשמית על סמך תקן או שאין להן תקן, אך Metabolon® בטוחה במידה סבירה בזהותה.

4.4. עיבוד נתונים

נתונים גולמיים נורמלו על ידי אוסמולאליות עבור כל דגימה והנתונים עבור כל מטבוליט היו במרכז חציון ל-1 (נתונים גולמיים כולל אוסמולליות זמינים בקובץ המשלים S1). ערכים חסרים נזקפו לערך המינימלי, למעט תרופות שנזקפו כ-0. הנתונים עברו טרנספורמציה של log10 עם טרנספורמציה מייצבת שונות (MetaboanalystR) [65,66]. בסך הכל נמדדו במקור 1403 מטבוליטים. מטבוליטים סוננו לפי כלל 80% המשתנה: תרכובת נכללה אם זוהתה בלפחות 80% מהדגימות באחת מקבוצות ה-ME/CFS או הביקורת [27]. בסך הכל, 1154 מטבוליטים עמדו בקריטריונים ונכללו בניתוחים הבאים. הניתוח היחיד שבוצע ללא סינון היה על המתאמים עם מטבוליטים בפלזמה. היחסים שלאחר האימון/בסיס עבור כל מטבוליט חושבו בבסיס log 10 כערך שלאחר האימון פחות הערך הבסיסי עבור כל נבדק. לשרטוט עלילת הר הגעש, השינויים הממוצעים בקפל היומן (חולי ME/CFS לעומת בקרות) הומרו לבסיס יומן 2 באמצעות נוסחת השינוי של הבסיס.

4.5. ניתוח נתונים וסטטיסטיקה

ניתוח סטטיסטי חד-משתני עבור כל מטבוליט בוצע באמצעות מודל מעורב ליניארי עם השפעות קבועות של מצב מחלה, נקודת זמן, גיל ו-BMI והשפעה אקראית של הנבדק (החכמה ביותר [67] והאמצעים [68] חבילות R). שיטת Benjamini–Hochberg (BH) שימשה כדי לתקן את שיעור הגילוי השגוי, כאשר q < 0.1 משמש כסף למובהקות. חבילת EnhancedVolcano R שימשה לחלקות הר געש [69].

ChemRICH ב-R שימש לביצוע ניתוח מסלול שאינו חופף עם מסלולי המשנה המוגדרים של Metabolon® וסדר המסלול [29]. כלי האינטרנט ChemRICH שימש לביצוע ניתוח אשכולות הדמיון הכימי [30]. לניתוח זה, רק תרכובות שהיו להן קוד SMILES ידוע יכלו להיכלל, בסך הכל 516 תרכובות. עבור שני ניתוחי ChemRICH, סטטיסטיקת ההעשרה בוצעה באמצעות מבחן Kolmogorov-Smirnov, שאינו משתמש בחתך מובהקות של ערך p אלא משווה את התפלגות ההסתברות עם התפלגות הסתברות של השערת אפס [70]. עבור תת-מסלולי Metabolon®, q < 0.05 נבחר כסף המובהקות ו-q < 0.15 נבחר עבור האשכולות הכימיים (תיקון BH FDR). עבור שניהם, כל האשכולות מתחת לספי q שנבחרו היו גם הם p < 0.05.

העשרת נתיבים וניתוח טופולוגיה בוצעו באמצעות כלי האינטרנט Metaboanalyst 5.0 [65], הן עבור מטבולומי ההתייחסות האנושיים של KEGG והן עבור SMPDB עם הפרמטרים הבאים שנבחרו: מבחן גלובלי למבחן הסטטיסטיקה ומרכזיות ביניים יחסית כ מדד חשיבות הצומת. תרכובות נכללו בניתוח זה אם מזהה HMDB שסופק על ידי Metabolon® תואם את מזהה HMDB ב- Metaboanalyst. עבור תרכובות כפולות עבור מזהה HMDB אחד, רק הראשון נכלל. זה הביא ל-453 תרכובות נכללות.

מקבץ הנבדקים תוך שימוש בארבע התרכובות שהיו שונות באופן משמעותי בין המטופלים והבקרות לאחר האימון בוצע באמצעות מקבץ היררכי, עם המרחק האוקלידי כמדד המרחק, ובשיטה "Ward.D2" (חבילת heatmap R [71 ]).

מתאמי Pearson בין שתן ופלזמה עבור 727 מטבוליטים שנמדדו בשני הנוזלים הביולוגיים בוצעו ב-R (חבילת hmisc). ערכי p חושבו עבור כל מתאם באמצעות מבחן t עם השערת האפס שמקדם המתאם שווה ל-0, ואחריו תיקון BH FDR עם q < 0.15 כסף המובהקות. עבור איור 8, תרכובות נבדקו כדי להסיר את אלו שהיו להם חריגים קיצוניים באמצעות שיטת ה-z-score המשתנה, המחשבת ציון z תוך שימוש בסטיה המוחלטת החציונית והחציונית (חבילת חריגים R, סף z=6).

אלא אם צוין אחרת, כל הדמיות הנתונים בוצעו באמצעות חבילת ggplot2 R. תיקון BH FDR נבחר עבור כל הניתוחים במקום תיקון ה-FDR המחמיר יותר של Benjamini ו-Yekutieli מכיוון שמספר קטן ביותר של תרכובות נמצאו כקולינאריות (0.75% מהמטרות היו בעלי ערך מוחלט מקדם המתאם של פירסון > { {3}}.7).

5. מסקנות

בסך הכל, היו הבדלים משמעותיים במטבולום השתן בבקרות בישיבה הבריאים ובמטופלי ME/CFS בתגובה לאתגר CPET במגוון גדול של מסלולי על ותת מטבוליים, המתפרשים על פני חומצות אמינו, שומנים, פחמימות, נוקלאוטידים, קסנוביוטיקה ו לא ידועים. מסלולים אלה מעורבים במספר רב של פונקציות פיזיולוגיות כולל אך לא רק חילוף חומרים אנרגטי. זה מצביע על כך שלחולי ME/CFS יש חוסר ויסות מטבולי כללי שהוא חלק מאי-סבילות הפעילות הגופנית שלהם ו-PEM שבהם הפרשה מטבולית שונה היא גורם תורם. הנתונים שלנו מצביעים על כך שחילוף החומרים של אנשים בישיבה שאין להם ME/CFS עוברים שינויים גדולים המאפשרים להם להתאושש ממאמץ, בעוד שחולי ME/CFS לא מצליחים לבצע תגובות אדפטיביות דומות. עבודה עתידית תכלול הרחבת מחקר זה לקבוצה גדולה בהרבה הכוללת את שני המינים כדי לאמת את התוצאות הללו, לבחון הבדלים בין המינים במטבולום השתן, ולבחון האם ישנם הבדלים עדינים יותר במטבוליטים בשתן בחולי ME/CFS בקו הבסיס שעלולים להיות פוטנציאליים. לתרום לבדיקת אבחון למחלה בעתיד.

תרומות מחבר:המשגה, AG, KAG ו-MRH; מתודולוגיה, AG, KAG, YVH ו-MRH; ניתוח פורמלי, KAG, AG ו-YVH; חקירה, KAG, AG ו-YVH; כתיבה-הכנת טיוטה מקורית, KAG, AG ו-MRH; כתיבה - סקירה ועריכה, כל המחברים; הדמיה, KAG ו-AG; ניהול פרויקטים, מר"ח; רכישת מימון, MRH כל המחברים קראו והסכימו לגרסה שפורסמה של כתב היד.

מימון:מחקר זה נתמך על ידי המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מוחי (NINDS), NIH (U54NS105541) וקרן עמאר. המרכז הלאומי לקידום מדעי התרגום של ה-NIH סיפק מימון למרכז למדע קליני ותרגומי של Weill Cornell Medicine (CTSC) כדי לתחזק את מסד הנתונים REDCap באמצעות UL1 TR 002384.

הצהרת ועדת הביקורת המוסדית:המחקר נערך על פי ההנחיות של הצהרת הלסינקי, ואושר על ידי ה-Ithaca College Institutional Review Board, Ithaca, ניו יורק, ארה"ב (פרוטוקול 1017-12Dx2), ו-Will Cornell Medical College Institutional Review Board ( פרוטוקול 1708018518).

הצהרת הסכמה מדעת:התקבלה הסכמה מדעת מכל הנבדקים המעורבים במחקר.

הצהרת זמינות נתונים:כל נתוני המטבוליטים עבור כל נושא זמינים בקבצי הנתונים המשלימים המסופקים.

תודות:קרל פרנקוני ניהל את מסד הנתונים ואת הביובנק באוניברסיטת קורנל. דגימות הדם חולקו על ידי דיוויד וואנג ב-EVMED Research עם תמיכה מ-Workwell Foundation ועל ידי Ivan Falsztyn, Carl Franconi, Ludovic Giloteaux, Madeline McCanne, Jineet Patel, Adam O'Neal, Alexandra Mandarano, Jessica Maya, Shannon Appelquist מאוניברסיטת קורנל. אנו מודים לאנשים הבאים שהשתתפו במיון משתתפים, בביצוע בדיקות מאמץ ו/או באיסוף דם ושתן: בטסי קלר, ג'ון צ'יה, ג'ארד סטיבנס, טיפאני אונג ומריה ראסל.

ניגוד עניינים:המחברים אינם מצהירים על ניגוד עניינים. למממנים לא היה תפקיד בתכנון המחקר; באיסוף, ניתוח או פרשנות של נתונים; בכתיבת כתב היד; או בהחלטה לפרסם את התוצאות.

הפניות

1. ג'ייסון, לוס אנג'לס; מירין, AA עדכון האקדמיה הלאומית לרפואה של ME/CFS נתוני השכיחות וההשפעה הכלכלית כדי להסביר את גידול האוכלוסייה והאינפלציה. עייפות ביומד. התנהגות בריאותית. 2021, 9, 9–13. [CrossRef]

2. Valdez, AR; הנקוק, EE; Adebayo, S.; קירניצקי, DJ; פרוסקאואר, ד.; Attewell, JR; בייטמן, ל. DeMaria, A., Jr.; לאפ, CW; רו, PC; et al. הערכת שכיחות, דמוגרפיה ועלויות של ME/CFS באמצעות נתוני תביעות רפואיות בקנה מידה גדול ולמידת מכונה. חֲזִית. רופא ילדים 2018, 6, 412. [CrossRef] [PubMed]

3. קארות'רס, ב"מ; ג'יין, AK; דה מאירלייר, KL; פיטרסון, DL; Klimas, NG; לרנר, AM; בסטד, AC; פלור-הנרי, פ. ג'ושי, פ.; פאולס, AP; et al. Myalgic Encephalomyelitis/תסמונת עייפות כרונית: הגדרת מקרה עבודה קליני, פרוטוקולי אבחון וטיפול. J. תסמונת עייפות כרונית. 2003, 11, 7–115. [CrossRef]

4. צ'ו, ל.; ולנסיה, IJ; Garvert, DW; Montoya, JG פירוק חולה לאחר מאמץ באנצפלומיאליטיס מיאלגי/תסמונת עייפות כרונית: סקר חתך ממוקד במטופל. PLoS ONE 2018, 13, e0197811. [CrossRef]

5. שטוסמן, ב.; וויליאמס, א.; שלג, ג'; גאווין, א.; סקוט, ר.; נת, א.; Walitt, B. אפיון של חולשה לאחר מאמץ בחולים עם Myalgic Encephalomyelitis / תסמונת עייפות כרונית. חֲזִית. נוירול. 2020, 11, 1025. [CrossRef]

6. סטיבנס, ש.; Snell, C.; סטיבנס, ג'יי; קלר, ב.; VanNess, JM מתודולוגיית בדיקת פעילות גופנית לב-ריאה להערכת אי סבילות למאמץ ב-Myalgic Encephalomyelitis/תסמונת עייפות כרונית. חֲזִית. רופא ילדים 2018, 6, 242. [CrossRef]

7. Vanness, JM; סנל, CR; Stevens, SR ירידה ביכולת הלב-ריאה במהלך חולשה לאחר מאמץ. J. תסמונת עייפות כרונית. 2007, 14, 77–85. [CrossRef]

8. קלר, BA; פריור, JL; Giloteaux, L. חוסר יכולת של חולי אנצפלומיאליטיס מיאלגי/תסמונת עייפות כרונית להתרבות שיא VO(2) מצביע על פגיעה תפקודית. J. Transl. Med. 2014, 12, 104. [CrossRef]

9. Missailidis, D.; אנסלי, SJ; פישר, מנגנונים פתולוגיים של יחסי ציבור העומדים בבסיס Myalgic Encephalomyelitis/תסמונת עייפות כרונית. אבחון 2019, 9, 80. [CrossRef]

10. Huth, TK; איטון-פיץ', נ'; סטיינס, ד.; Marshall-Gradisnik, S. סקירה שיטתית של חוסר ויסות מטבולומי בתסמונת עייפות כרונית / Myalgic Encephalomyelitis / Systemic Exertion Intolerance Disease (CFS/ME/SEID). J. Transl. Med. 2020, 18, 198. [CrossRef]

11. ז'רמן, א.; Barupal, DK; לוין, SM; הנסון, MR מטבולומי מחזור דם מקיפים ב-ME/CFS חושף מטבוליזם מופרע של ליפידים וסטרואידים אציל. מטבוליטים 2020, 10, 34. [CrossRef]

12. ז'רמן, א.; רופרט, ד.; לוין, SM; הנסון, MR פרופיל מטבולי של קבוצת גילוי אנצפלומיאליטיס מיאלגי/תסמונת עייפות כרונית חושף הפרעות במטבוליזם של חומצות שומן ושומנים. מול. ביוסיסט. 2017, 13, 371–379. [CrossRef]

13. ז'רמן, א.; רופרט, ד.; לוין, SM; הנסון, MR פרוספקטיבי סמנים ביולוגיים מ-Plasma Metabolomics של Myalgic Encephalomyelitis/תסמונת עייפות כרונית משפיעים על חוסר איזון חיזור בסימפטומטולוגיה של מחלות. מטבוליטים 2018, 8, 90. [CrossRef]

14. יאמאנו, ע.; סוגימוטו, מ.; Hirayama, A.; קום, ס.; יאמאטו, מ.; ג'ין, ג'; Tajima, S.; גודה, נ.; איוואי, ק.; פוקודה, ש.; et al. סמני אינדקס של תסמונת עייפות כרונית עם תפקוד לקוי של מחזורי TCA ואוריאה. Sci. Rep. 2016, 6, 34990. [CrossRef]

15. ארמסטרונג, CW; מקגרגור, NR; שידי, JR; באטפילד, I.; באט, HL; Gooley, PR NMR פרופיל מטבולי של סרום מזהה הפרעות בחומצות אמינו בתסמונת עייפות כרונית. קלינ. צ'ים. Acta 2012, 413, 1525–1531. [CrossRef]

16. ארמסטרונג, CW; מקגרגור, NR; לואיס, DP; באט, HL; Gooley, PR הקשר בין מיקרוביוטה צואתית לבין מטבוליטים בצואה, בדם ובשתן באנצפלומיאליטיס מיאלגי/תסמונת עייפות כרונית. Metabolomics 2016, 13, 8. [CrossRef]

17. הול, פ.; הול, א.; Pettersen, IK; רקלנד, IG; ריסא, ק.; עלמה, ק.; סורלנד, ק.; פוסה, א.; ליאן, ק.; הרדר, I.; et al. מפה של פנוטיפים מטבוליים בחולים עם אנצפלומיאליטיס מיאלגי/תסמונת עייפות כרונית. JCI Insight 2021, 6, e149217. [CrossRef]

18. Nagy-Szakal, D.; Barupal, DK; לי, ב.; צ'ה, X.; וויליאמס, BL; קאהן, EJR; Ukaigwe, JE; בייטמן, ל. Klimas, NG; קומרוף, אל; et al. תובנות על פנוטיפ אנצפלומיאליטיס מיאלגי/תסמונת עייפות כרונית באמצעות מטבולומיקה מקיפה. Sci. נציג 2018, 8, 10056. [CrossRef]

19. מקגרגור, NR; ארמסטרונג, CW; לואיס, DP; Gooley, PR חולה לאחר מאמץ קשורה להיפר-מטבוליזם, היפואצטילציה, ו-Purine מטבוליזם דה-וויסות במקרי ME/CFS. אבחון 2019, 9, 70. [CrossRef]

20. ארמסטרונג, CW; מקגרגור, NR; לואיס, DP; באט, HL; Gooley, PR פרופיל מטבולי חושף חילוף חומרים אנרגטי חריג ומסלולי מתח חמצוני בחולי תסמונת עייפות כרונית. מטבולומיקה 2015, 11, 1626–1639. [CrossRef]

21. פלוגה, או.; מלא, או.; ברולנד, או.; ריסא, ק.; Dyrstad, SE; עלמה, ק.; רקלנד, IG; סאפקוטה, ד.; Rosland, GV; פוסה, א.; et al. פרופיל מטבולי מצביע על פגיעה בתפקוד פירובט דהידרוגנאז באנצפלופתיה מיאלגית/תסמונת עייפות כרונית. JCI Insight 2016, 1, e89376. [CrossRef] [PubMed]

22. Naviaux, RK; Naviaux, JC; לי, ק.; ברייט, AT; אלניק, וושינגטון; וואנג, ל.; בקסטר, א.; נתן, נ.; אנדרסון, וו.; Gordon, E. מאפיינים מטבוליים של תסמונת עייפות כרונית. פרוק. נאטל. אקד. Sci. ארה"ב 2016, 113, E5472–E5480. [CrossRef] [PubMed]

23. ג'ונס, MG; קופר, ע.; אמג'ד, ש.; גודווין, CS; בארון, JL; Chalmers, RA חומצות אורגניות בשתן ופלזמה וחומצות אמינו בתסמונת עייפות כרונית. קלינ. צ'ים. Acta 2005, 361, 150–158. [CrossRef] [PubMed]

24. ניבלט, ש; קינג, KE; דנסטאן, RH; Clifton-Bligh, P.; הוסקין, לוס אנג'לס; רוברטס, TK; פולצ'ר, GR; מקגרגור, NR; Dunsmore, JC; באט, HL; et al. חריגות המטולוגיות והפרשת שתן בחולים עם תסמונת עייפות כרונית. Exp. ביול. Med. 2007, 232, 1041–1049. [CrossRef] [PubMed]

25. ז'רמן, א.; Giloteaux, L.; מור, GE; לוין, SM; Chia, JK; קלר, BA; סטיבנס, ג'יי; פרנקוני, CJ; מאו, X.; Shungu, DC; et al. מטבולומית פלזמה חושפת תגובה והחלמה משובשים בעקבות פעילות גופנית מקסימלית בתסמונת אנצפלומיאליטיס מיאלגית/תסמונת עייפות כרונית. JCI Insight 2022, 7, e157621. [CrossRef]

26. בל, DS המדריך לרופא לתסמונת עייפות כרונית. הבנה, טיפול וחיים עם CFIDS; חברת ההוצאה לאור אדיסון-וסלי: רידינג, MA, ארה"ב, 1994.

27. יאנג, ג'; ז'או, X.; לו, X.; לין, X.; Xu, G. אסטרטגיית עיבוד מוקדם של נתונים עבור מטבולומיקה להפחתת אפקט המיסוך בניתוח נתונים. חֲזִית. מול. Biosci. 2015, 2, 4. [CrossRef]

28. בנימין, י. הוכברג, י. שליטה בשיעור הגילוי השקרי: גישה מעשית ועוצמתית לבדיקות מרובות. JR Stat. Soc. סר. B 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

29. Barupal, DK; מעריצים.; Fiehn, O. שילוב גישות ביואינפורמטיקה לפרשנות מקיפה של מערכי נתונים מטבולומיים. Curr. דעה. ביוטכנולוגיה. 2018, 54, 1–9. [CrossRef]

30. Barupal, DK; Fiehn, O. Chemical Similarity Enrichment Analysis (ChemRICH) כחלופה למיפוי מסלול ביוכימי עבור מערכי נתונים מטבולומיים. Sci. Rep. 2017, 7, 14567. [CrossRef]

31. גומן, JJ; ואן דה גיר, ס"א; דה קורט, פ.; van Houwelingen, HC בדיקה עולמית לקבוצות של גנים: בדיקת קשר עם תוצאה קלינית. ביואינפורמטיקה 2004, 20, 93–99. [CrossRef]

32. רוסטו, א.; טנורי, ל. קסנטה, מ.; De Atauri Carulla, יחסי ציבור; מרטינס דוס סנטוס, VAP; Saccenti, E. מתאם לסיבתיות: ניתוח נתונים מטבולומיים באמצעות גישות ביולוגיות מערכות. Metabolomics 2018, 14, 37. [CrossRef]

33. Cardounel, AJ; קוי, ה.; סמוילוב, א.; ג'ונסון, וו.; Kearns, P.; Tsai, AL; ברקה, ו.; Zweier, JL עדויות לתפקיד הפתופיזיולוגי של מתילארגינינים אנדוגניים בוויסות ייצור NO אנדותל ותפקוד כלי הדם. ג'יי ביול. Chem. 2007, 282, 879–887. [CrossRef]

34. Chandrasekharan, UM; וואנג, ז.; וו, י.; Wilson Tang, WH; האזן, SL; וואנג, ס.; Elaine Husni, M. רמות גבוהות של dimethylarginine סימטרי בפלסמה ופעילות מוגברת של ארגינאז כאינדיקטורים פוטנציאליים לתחלואה נלווית קרדיווסקולרית בדלקת מפרקים שגרונית. Arthritis Res. ת'ר. 2018, 20, 123. [CrossRef]

35. סירואן, MP; Teerlink, T.; Nijveldt, RJ; פרינס, HA; ריצ'יר, MC; van Leeuwen, PA המשמעות הקלינית של dimethylarginine אסימטרית. אננו. כומר נוטר. 2006, 26, 203–228. [CrossRef]

36. ברטינאט, ר.; Villalobos-Labra, R.; הופמן, ל. בלאונשטיינר, י. Sepulveda, N.; Westermeier, F. הפחתת ייצור NO בתאי אנדותל שנחשפו לפלזמה מחולי ME/CFS. Vasc. פרמקול. 2022, 143, 106953. [CrossRef]

37. ברוסנן, JT; Brosnan, ME חומצות האמינו המכילות גופרית: סקירה כללית. י. נוטר. 2006, 136, 1636S–1640S. [CrossRef]

38. Fernández-García, JC; Martínez-Sánchez, MA; ברנאל-לופס, MR; מוניוז-גרח, א.; מרטינס-גונסאלס, MA; פיטו, מ.; Salas-Salvadó, J.; Tinahones, FJ; Ramos-Molina, B. השפעת תוכנית התערבות בסגנון חיים עם דיאטה ים תיכונית מוגבלת באנרגיה ופעילות גופנית על מטבולום הפוליאמין בסרום אצל אנשים בסיכון גבוה למחלות לב וכלי דם: ניסוי קליני אקראי. אמ. ג'יי קלין. נוטר. 2020, 111, 975–982. [CrossRef]

39. וואנג, ו.; ג'אנג, ה.; שו, ג.; ג'אנג, ל.; ג'אנג, ו.; וואנג, ל.; לו, פ.; לי, ה.; באי, ש; לין, י.; et al. אימון כושר משמר התניה מוקדמת איסכמית בלבבות חולדה מבוגרים על ידי שחזור מאגר הפוליאמינים בשריר הלב. חמצן. Med. תָא. Longev. 2014, 2014, 457429. [CrossRef]

40. Blomstrand, E.; אליאסון, י. קרלסון, HK; Kohnke, R. חומצות אמינו מסועפות מפעילות אנזימים מרכזיים בסינתזת חלבון לאחר פעילות גופנית. י. נוטר. 2006, 136, 269S–273S. [CrossRef]

41. Newsholme, P.; סטנסון, ל.; Sulvucci, M.; Sumayao, R.; Krause, M. 1.02-מטבוליזם של חומצות אמינו. ב-Comprehensive Biotechnology, מהדורה 2; מו-יאנג, מ., עורך; עיתונות אקדמית: ברלינגטון, ON, קנדה, 2011; עמ' 3–14. [CrossRef]

42. לי, ש.; גאו, ד.; Jiang, Y. תפקוד, איתור ושינוי של חילוף החומרים של אצילקרניטין בקרצינומה של הכבד. מטבוליטים 2019, 9, 36. [CrossRef]

43. בראון, TP; Marks, DL הוויסות של מסת השריר על ידי גלוקוקורטיקואידים אנדוגניים. חֲזִית. פיזיול. 2015, 6, 12. [CrossRef] [PubMed]

44. פורמן, BL מינרלוקורטיקואידים. ב-xPharm: The Comprehensive Pharmacology Reference; Enna, SJ, Bylund, DB, Eds.; Elsevier: ניו יורק, ניו יורק, ארה"ב, 2007; ע. 1. [CrossRef]

45. קוויאני, ב.; לידבורי, BA; שלופל, ר.; פישר, יחסי ציבור; Missailidis, D.; אנסלי, SJ; דהאגי, מ.; הנג, ב.; Guillemin, GJ האם מסלול ה-kynurenine יכול להיות החלק העיקרי החסר בפאזל המורכב של Myalgic Encephalomyelitis/תסמונת עייפות כרונית (ME/CFS)? תָא. מול. Life Sci. 2022, 79, 412. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​קוסמן, דא; וויליאמס, ניו יורק; דומצ'ק, SM; קורצר, MS; Stopfer, JE; שמיץ, KH פעילות גופנית מורידה את רמות האסטרוגן והפרוגסטרון בנשים לפני גיל המעבר בסיכון גבוה לסרטן השד. J. Appl. פיזיול. 2011, 111, 1687–1693. [CrossRef] [PubMed]

47. דה סוזה, MJ; Van Heest, J.; דמרס, LM; Lasley, BL מחסור בשלב לוטאלי אצל רצים פנאי: עדות למצב היפומטבולי. ג'יי קלין. אנדוקרינול. Metab. 2003, 88, 337–346. [CrossRef]

48. Mukherjee, K.; Edgett, BA; Burrows, HW; קסטרו, סי; גריפין, JL; Schwertani, AG; גורד, BJ; Funk, CD תעתיק דם מלא ומטבולומישת שתן כדי להגדיר מסלולים ביוכימיים אדפטיביים של פעילות גופנית בעצימות גבוהה אצל ספורטאים מאסטרים בני 50-60-. PLoS ONE 2014, 9, e92031. [CrossRef]

49. שרנר, ד.; קסטנמולר, ג. שונפלדר, מ.; רומיש-מרגל, ו.; Wackerhage, H. שינויים בריכוז המטבוליטים בבני אדם לאחר התקף של פעילות גופנית: סקירה שיטתית של מחקרים על מטבולומי פעילות גופנית. מד ספורט. פתוח 2020, 6, 11. [CrossRef]

50. קיסטנר, ש.; ריסט, MJ; דורינג, מ.; דור, ג; נוימן, ר.; הרטל, ש.; Bub, A. גישה מבוססת NMR לזיהוי מטבוליטים בשתן הקשורים לפעילות גופנית חריפה וכושר קרדיו-נשימה בבני אדם בריאים-תוצאות של מחקר KarMeN. מטבוליטים 2020, 10, 212. [CrossRef]

51. Kuratsune, H.; יאמאגוטי, ק.; טקאהאשי, מ.; מיסאקי, ח.; Tagawa, S.; Kitani, T. Acylcarnitine חוסר בתסמונת עייפות כרונית. קלינ. לְהַדבִּיק. Dis. 1994, 18 (מוסף 1), S62–S67. [CrossRef]

52. ג'ונס, MG; גודווין, CS; אמג'ד, ש.; Chalmers, RA פלזמה וקרניטין בשתן ואצילקרניטינים בתסמונת עייפות כרונית. קלינ. צ'ים. Acta 2005, 360, 173–177. [CrossRef]

53. ג'אנג, ג'; אור, א"ר; Hoppel, CL; קמפבל, סי; Chandler, CJ; ברנט, DJ; סוזה, EC; Casazza, GA; יוהן, ארה"ב; Keim, NL; et al. Acylcarnitines כסמנים של חלוקת דלק הקשורה לפעילות גופנית, קסנומטבוליזם, ואותות פוטנציאליים לנוירונים אפרנטיים לשרירים. Exp. פיזיול. 2017, 102, 48–69. [CrossRef]

54. קוסטה, CG; Guerand, WS; סטרויס, EA; הולוורדה, יו.; ten Brink, HJ; Tavares de Almeida, I.; דוראן, מ.; Jakobs, C. אנליזה כמותית של אצילגליצינים בשתן לאבחון פגמים בחמצון בטא באמצעות GC-NCI-MS. ג'יי פארם. ביומד. אנאלי. 2000, 21, 1215–1224. [CrossRef]

55. מאיה, ג'; לדי, SM; גוטשלק, CG; פיטרסון, DL; הנסון, MR השתנתה חמצון חומצות שומן באוכלוסיות לימפוציטים של אנצפלומיאליטיס מיאלגי/תסמונת עייפות כרונית. Int. י.מול. Sci. 2023, 24, 2010. [CrossRef]

56. וילקינסון, תקליטן; סמיטון, ניו ג'רזי; וואט, PW חילוף החומרים של אמוניה, המוח ועייפות; ביקור מחדש בקישור. פרוג. נוירוביול. 2010, 91, 200–219. [CrossRef]

57. חן, ש.; מינגישי, י. חסומורה, ט.; Shimotoyodome, A.; Ota, N. מעורבות של חילוף החומרים של אמוניה בשיפור ביצועי הסיבולת על ידי קטצ'ינים של תה בעכברים. Sci. Rep. 2020, 10, 6065. [CrossRef]

58. פול, BD; Sbodio, JI; סניידר, SH מטבוליזם של ציסטאין בהומיאוסטזיס של חיזור נוירוני. Trends Pharmacol. Sci. 2018, 39, 513–524. [CrossRef]

59. נקיליסה, א.; פארקס, מ.; צ'רסזניה, א. אוברלין, ש.; אוונס, JE; דארסי, ט.; Aenlle, K.; Niedospial, D.; מולן, מ.; קרופורד, פ.; et al. פרופילי שומנים ספציפיים בפלסמה של חולי ME/CFS והקשר שלהם עם כאב, עייפות ותסמינים קוגניטיביים. J. Transl. Med. 2021, 19, 370. [CrossRef]

60. אוניל, AJ; זכוכית, ק"א; Emig, CJ; ויטוג, א.א.; הנרי, SJ; Shungu, DC; מאו, X.; לוין, SM; הנסון, MR סקר של רמות נוגדנים אנטי-פתוגניים ב-Myalgic Encephalomyelitis/תסמונת עייפות כרונית. Proteomes 2022, 10, 21. [CrossRef]

61. ניתוח של חולשה לאחר מאמץ באמצעות CPET ליומיים באנשים עם ME/CFS.

62. Ware, JE, Jr.; Sherbourne, CD The MOS 36-item shortform health survey (SF-36). I. מסגרת מושגית ובחירת פריט. Med. טיפול 1992, 30, 473–483. [CrossRef]

63. Smets, EM; גארסן, ב.; בונקה, ב.; De Haes, JC איכויות פסיכומטריות של מכשיר להערכת עייפות. ג'יי פסיכוסום. מילון 1995, 39, 315–325. [CrossRef]

64. פורד, ל.; קנדי, לספירה; גודמן, KD; פפן, KL; אוונס, AM; מילר, LAD; Wulff, JE; Wiggs, BR; לנון, ג'יי ג'יי; אלסי, ש.; et al. דיוק של פלטפורמת פרופיל מטבולומית קלינית לשימוש בזיהוי שגיאות מולדות של מטבוליזם. J. Appl. מַעבָּדָה. Med. 2020, 5, 342–356. [CrossRef]

65. פנג, ז.; צ'ונג, ג'; ג'ואו, ג'; de Lima Morais, DA; צ'אנג, ל.; בארט, מ.; גוטייה, סי; ז'אק, PE; לי, ש; Xia, J. MetaboAnalyst 5.0: צמצום הפער בין ספקטרום גולמי ותובנות פונקציונליות. Nucleic Acids Res. 2021, 49, W388–W396. [CrossRef] [PubMed]

66. דורבין, ב"פ; Hardin, JS; הוקינס, DM; Rocke, DM טרנספורמציה מייצבת שונות עבור נתוני מיקרו-מערך של ביטוי גנים. ביואינפורמטיקה 2002, 18 (מוסף 1), S105–S110. [CrossRef] [PubMed]

67. קוזנצובה, א.; Brockhoff, PB; Christensen, RHB lmerTest Package: בדיקות במודלים של אפקטים מעורבים ליניאריים. J. Stat. Softw. 2017, 82, 1–26. [CrossRef]

68. Lenth, R. Emmeans: Estimated Marginal Means, aka Least-Squares Means, 1.8.2; חבילת R. 2022.

69. בליגה, ק.; רנא, ש.; Lewis, M. EnhancedVolcano: עלילות געש מוכנות לפרסום עם צביעה ותיוג משופרים, גרסה 1.16.0; חבילת R. 2022.

70. Smirnov, NV על אומדן הפער בין עקומות התפלגות אמפיריות עבור שני מדגמים בלתי תלויים. שׁוֹר. מתמטיקה. Univ. מוסקבה 1939, 2, 3–14.

71. Kolde, R. Pheatmap: Pretty Heatmaps, 1.0.12; חבילת R. 2019.

כתב ויתור/הערת מפרסם:ההצהרות, הדעות והנתונים הכלולים בכל הפרסומים הם אך ורק של המחבר/ים והתורמים הבודדים ולא של MDPI ו/או העורך/ים. MDPI ו/או העורכים מתנערים מאחריות לכל פגיעה בבני אדם או ברכוש הנובעת מכל רעיון, שיטות, הוראות או מוצרים הנזכרים בתוכן.

【צור קשר】 דוא"ל: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501