UPLC-Q-orbitrap HRMs בשילוב עם עגינה מולקולרית כדי לחקור בסיס חומרי של טעם מרים ויחסי אפקט טעם ב Cistanchia desertica

תַקצִיר

 

בהתבסס על ביצועי אולטרה נוזלים כרומטוגרפיה-קוודרופולי-אלקטרוסטטית שדה אורביטראפ רזולוציה גבוהה ספקטרומטריה (UPLC-Q-orbitrap HRMs) ועגינה מולקולרית, הטעם המרה המציג חומרים של Cistanchis Daserticola נחקרו כדי להניח את בסיס המחקר לתיקון היעילות של טעם הטעם ובייחוס של טעם של טעם של טעם של טעם. ראשית, UPLC-Q-orbitrap HRMs שימש לאפיון המרכיבים של C. deserticola, וזוהו 69 רכיבים כימיים. עגינה מולקולרית של רכיבים כימיים אלה עם קולטן הטעם המרה הביאה להקרנת 20 חומרים המציגים מרים, כולל 6 גליקוזידים של פנילטהנול, 5 פלבנואידים, 3 חומצות פנוליות, 2 טרפנים של ציקלואלניל, 2 אלקלואידים ו -2 מרכיבים אחרים. התמציות ממוצא זהה נאספו מאותו מקום מוצא, והחומרים המציגים מרים נחקרו על ידי עגינה מולקולרית. רכיבים אחרים, תשעה קבוצות של דגימות טריות C. deserticola נאספו מחודשים שונים מאותו מקור, מחולקים לחודשים שונים ולחלקים שונים, והערך הכמותי של מרירות הדגימות נקבע בשיטת הלשון האלקטרונית, ותכולה של שישה רכיבים בדגימות (פינקונוטילוזיד, גליקוזיד טריקוטיד, צינור, טריקניד, טריקניד, טריקו-גליקזיד, טטי-טריקן, טטי-טריקן, Tricicecide, Tricicecine, Tricholin, Tricholin, Tricholin, Tricholin, Tricholin, Tricholin, Trichone, Trichone, Jinshihuaoside ו- Jingnipinoside) נקבעו על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC), וסך הכל גליקוזידים של פנילטהנול בדגימות נקבעו על ידי השיטה הספקטרופוטומטרית הניתנת. שיטה פוטומטרית לקביעת תוכנו של גליקוזידים הכוללים של פנילנול, סה"כ הפוליסכרידים, האלקלואידים הכוללים, סך הכל פלבנואידים, וחומצות פנוליות מוחלטות בדגימות, והיא תשולב עם ניתוח כימומטריה על בסיס זה, ומאומתים על ידי ניתוח מתאם של פירסון, מתאם אפור מתאם לאורטיקונאונטציה של אורתוגונטציה של אורתוגונטונטציה של אורתוגונה, ג. Deserticola, שהיו מסכימים עם תוצאות העגינה המולקולרית; ולבסוף, עם החומרים המציגים מרים כמושא המחקר.

תמצית Cistanchis Deserticola

 

לבסוף, נערכו חיזוי וניתוח פרמקולוגי ברשת עם החומר המר כמטרה, וה- IP היחסים בין יעד החומר המר לבין היעילות המרה נחקר. התוצאות הראו כי יעדי המפתח של חומר ה- B iTter היו EGFR, PIK3CB ו- PTK2, וכי החומר המר עשוי להפעיל את היעילות המרה באמצעות היעילות על יעדי המחלה הרלוונטיים, מה שאומר שהחומר המר של C. desertica הוא הבסיס החומרי של היעילות המרה. לסיכום, מחקר זה הראה כי הגליקוזידים הפנילטנול, בעיקר פניניילוזיד, מוריציאנה גליקוזיד וג'יבה רלין, הם הבסיס החומרי של הטעם המר של C. desertica, וטכנולוגיית העגינה המולקולרית יש תפקיד מנחה בהקרנה של חומרים מרים ברפואה המרבית, וניתן לטעון של טעינה, " בעתיד של הרפואה הסינית המסורתית. לחומרים המרים ב- C. desertica יש טעם ואפקט מרים, אשר יספקו רעיונות והפניות למחקר העתידי על ה- IP של היחסים בין טעם לאפקט ברפואה הסינית המסורתית

 

 

 

מילות מפתח תמצית Cistanchis Deserticola; UPLC-Q-orbitrap HRMS; פרמקולוגיה של רשת; עגינה מולקולרית; לשון אלקטרונית; חומרים מרים;מערכת יחסים עם אפקט טעם

 

Cistanche Deserticola yc ma.הוא טפיל שורש רב שנתי של משפחת Orobanchaceae, הסוג Cistanche, הידוע בדרך כלל בשם Cistanche המדבר [1]. הקלאסיקה של הצמחי המרפא של השנונג קובעת שסיסטנצ'ה טעימה מתוקה וקצת חמה. עם זאת, יש לו למעשה טעם מר מתמשך וקל לאחר שנלקח. "הטעם" של חמשת הטעמים של הרפואה הסינית המסורתית נקבע במקור על סמך הטעם בפועל של התרופה בעת טעמו, אך מכיוון שטעם התרופה קשור קשר הדוק להשפעתו, הוא התפתח בהדרגה להסביר וסיכום השפעת התרופה על ידי "טעם" [2]. Cistanche מוקלט בספרי רפואה קדומים קלאסיים רבים. יש לזה את ההשפעות של הזנת הכליה וחידוש המהות, להרטיב את המעיים ולהקלה על עצירות. מאז ימי קדם, הוא שימש לטיפול במחלות הקשורות למחסור בכליות, כולל תפקוד מיני, עקרות נשית, אובדן מהות ודם, כאב המותניים והברכיים, מעיים יבשים ועצירות וכו '[3]. המרירות של הרפואה הסינית המסורתית היא אחת מחמשת הטעמים של תיאוריית הרפואה הסינית המסורתית והיא בסיס תיאורטי חשוב להנחיית השימוש הקליני ברפואה סינית מסורתית. מרירות היא אחת מחמשת הטעמים של הרפואה הסינית המסורתית. מאפייניו הם מגרש, ייבוש ומוקד [4], והוא ממלא תפקיד חשוב בהנחיית השימוש הקליני ברפואה סינית מסורתית. לרוב התרופות הסיניות המסורתיות ותכשירי הרפואה הסינית המסורתית הם בעלי טעם מר. הרפואה הסינית המסורתית מאמינה כי חומרי הטעם המרים (להלן חומרים מרים) בתרופות מרות הם החומרים היעילים [5]. עם זאת, הקשר בין חומרים מרים בתרופות סיניות מסורתיות ויעילותם המרה עדיין לא ברורה. עדיין קיים חוסר במחקר מדעי רלוונטי בשאלה אם לחומרים המרים בתרופות הסיניות המסורתיות המרות יש יעילות מרה. Cistanche מכיל מגוון של רכיבים כימיים, בעיקר גליקוזידים פנילנול, טרפנים אתר ציקלופנטני, ליגננים והגליקוזידים שלהם, סוכרים וכו '. בנוסף, הוא מכיל גם פלאבונואידים, חומצות פנוליות, אלקלואידים, שמנים נדיפים, חומציות אמוניות, 6]. ביניהם, תרכובות גליקוזיד של פנילנול נחשבות לרכיבים היעילים העיקריים ב- Cistanche [7]. ל- Cistanche Deserticola יש שתי עונות קציר: אביב וסתיו. מחקרים הראו כי תכולת הפוליסכריד של אביב Cistanche Deserticola נמוכה, תכולת הפנילטתנול גליקוזיד גבוהה, והטעם מריר, אך יכולתו הנוגדת חמצון חזקה [8]. ניתן לראות כי למרכיביה המרים יש מתאם מסוים ליעילות התרופה, אך הבסיס החומרי של הטעם המר של Cistanche Deserticola עדיין אינו ברור, מה שעשוי להגביל את התפתחותו נוספת.

על מנת לחקור את בסיס החומר המר שלCistanche Deserticolaויחסיה עם יעילות מרה (יחסי אפקט טעם), מחקר זה לקח תמצית Cistanche Deserticola כאובייקט המחקר, וסקר את החומרים המרים ב- Cistanche Deserticola על ידי אולטרה-גבוהים של כרומטוגרפיה של כרומטוגרפיה-Quadrapole-rectrostic, טכנולוגיית Molcular-orcular; תוכן המרכיבים המרפאים המרים העיקריים נקבע על ידיכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC), והתוכן של כל קטגוריה מרכזית של חומרים מרים נקבע על ידי ספקטרופוטומטריה הנראית לעין. מידת המרירות הוערכה על ידי לשון אלקטרונית, והמרכיבים המרים נמצאו בשילוב עם כימומטריה; וטכנולוגיית פרמקולוגיה ברשת שימשה לביצוע מסלול KEGG ולצאת ניתוח העשרה על יעדי חומרים מרים ברפואה הסינית המסורתית, ויעדי החומרים המרים היו מתואמים עם יעדי יעילותם המרה, כדי לחקור את הקשר בין חומרים מרים ליעילות מרה ברפואה הסינית המסורתית. רעיונות המחקר מוצגים באיור 1. מחקר זה עשה שימוש מלא בשיטות המחקר הטכנולוגיות המודרניות כדי לחקור את מידע הטעם של Cistanche Deserticola, וחשף את בסיס החומרי המר שלו ואת יחסי האפקט הטעם. זה צפוי לספק הפניה לניתוח המדעית של הבסיס החומרי של הטעם של הרפואה הסינית המסורתית, ולספק בסיס להתפתחות ולשימוש מעמיק ומדויק של משאבי Cistanche Deserticola, מה שהופך את חמשת התיאוריה של הטעמים לברורים יותר, אובייקטיביים יותר, וניתן לגיבוש של חומר הסיני והסבירה של חומר הסיני של חומר הסיני.

 

 

איור 1 מסלול המחקר על הקשר בין חומרים המציגים מרים לבין יעילות מרה של תמציות Cistanthe Deserticola

 

1 חומרים

1.1 חומרים רפואיים

דגימות טריות של Cistanthe Deserticola נאספו באקסו, שינג'יאנג מאפריל עד דצמבר 2023. הדגימות זוהו על ידי לי מנג'י, רוקח בבית החולים העממי של מחוז שיא, כגבעולים הפלשניים המיובשים עם עלי קנה מידה של Cistanche Desericola, A Plant of the Genus Cistanche in the Up Frucanchacee. דגימות השובר אוחסנו במעבדת המחקר לרוקחות באוניברסיטה הרפואית שינג'יאנג. הדגימות נוקו מזיהומים, פרוסו טריים ונמרחו במים למשך 5 דקות על פי הספרות, ואז עיבדו, ייבשו בגובה 60 מעלות, נמעכו וננו דרך מסננת רשת 40-, ראו טבלה 1.

 

דגימות טבלה מידע על Cistanche Deserticola

 

לֹא.	קוד	זמן איסוף	טיפול מקדים לפני הייבוש	אתר גילוי
1	M1	2023-04-10	שלם - פרוסות צמחים	צמח שלם
2	M2	2023-05-08	שלם - פרוסות צמחים	צמח שלם
3	M3	2023-06-15	שלם - פרוסות צמחים	צמח שלם
4	M4	2023-07-10	שלם - פרוסות צמחים	צמח שלם
5	M5	2023-08-11	שלם - פרוסות צמחים	צמח שלם
6	M6	2023-09-10	שלם - פרוסות צמחים	צמח שלם
7	M7	2023-10-09	שלם - פרוסות צמחים	צמח שלם
8	M8	2023-11-14	שלם - פרוסות צמחים	צמח שלם
9	M9	2023-12-10	שלם - פרוסות צמחים	צמח שלם
10	P1	2023-08-11	קטע - פרוסות ספציפיות	אפידרמיס עליון
11	P2	2023-08-11	קטע - פרוסות ספציפיות	קליפת המוח העליונה
12	P3	2023-08-11	קטע - פרוסות ספציפיות	פית 'עליון
13	P4	2023-08-11	קטע - פרוסות ספציפיות	אפידרמיס אמצעי
14	P5	2023-08-11	קטע - פרוסות ספציפיות	קליפת המוח האמצעית
15	P6	2023-08-11	קטע - פרוסות ספציפיות	פית 'אמצעי
16	P7	2023-08-11	קטע - פרוסות ספציפיות	אפידרמיס תחתון
17	P8	2023-08-11	קטע - פרוסות ספציפיות	קליפת המוח התחתונה
18	P9	2023-08-11	קטע - פרוסות ספציפיות	פיתון תחתון

 

1.2 מסדי נתונים ותוכנה

Tcmsp (https://tcmspw.com/tcmsp.php), genecards (https://www.genecards.org), omim (https://www.omim.org), uniprot (https://www.uniprot.org), pdbrot (https://www.uniprot.org), pdbog) (http://www.rcsb.org), מחרוזת (https://string-db.org), pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/), David (https: (https://alphafold.ebi.ac.uk/), alphafold2 ו- autodockvina (https://alphafold.ebi.ac.uk/) שימשו לעגינה מולקולרית. IBM SPSS Statistis 25 שימש לניתוח פירסון. תוכנה: ניתוח האגודה האפורה בוצע באמצעות האתר המקוון SPSSPRO (https://www.spsspro.com), אורתוגונלי חלקית פחות ריבועים ניתוח מפלה (OPLS-DA) בוצע באמצעות תוכנת SIMCA14.1, וניתוח פארמקולוגיה ברשת בוצע באמצעות תוכנת ציטוסקאפ.

 

1.3 מכשירים וריאגנטים

WANQUISH כרומטוגרף נוזלי בביצועים גבוהים במיוחד, Orbitrap Exploris 120 ספקטרומטר המוני ברזולוציה גבוהה (Thermofisher Scientific, ארה"ב); SA -402 B לשון אלקטרונית (ארש, יפן); Lc -20 כרומטוגרף נוזלי בעל ביצועים גבוהים (Shimadzu, יפן); ספקטרופוטומטר UV נראה לעין (Shanghai Youke Instrument Co., Ltd.); איזון אלקטרוני AUW2200 (מפעל Shimadzu Philippines); SK250 מנקה אולטרה סאונד (שנחאי קדאו אולטרה סאונד מכשירים ושות 'בע"מ); DHG -9246 תנור ייבוש פיצוץ קבוע בטמפרטורה חשמלית (Shanghai Jinghong ציוד ניסיוני Co., Ltd.); Plusel+Phorusl Ultrapure Water מכשיר (Veolia, France).
חומרי ההתייחסות echinacoside (טוהר גדול או שווה ל 98%, מספר אצווה PCL-#-A003), verbascoside (טוהר גדול יותר או שווה ל 98%, מספר אצווה PCL-#-M235), טובולוזיד A (טוהר יותר או שווה ל 99%, מספר אצווה מספר-#-T003 (טוהר יותר מאשר שוויון שוויון, שוויון שוויון או שוויון שוויון או שוויון שוויון או שוויון גדול יותר או שוויון בו, שוויון גדול יותר או שוויון. PCL-#-D005), ו- iSovalascoside (טוהר גדול או שווה ל 98%, מספר אצווה PCL-#-I236) נרכשו מ- Sichuan Puxi'ao Technology Technology Technology Co. בע"מ; חומרי ההתייחסות גניפוזיד (טוהר גדול או שווה ל 98%, מספר אצווה WP23120502), רוטין (טוהר גדול או שווה ל 98%, מספר אצווה WP32110405), חומצה גלית (טוהר גדול או שוויון ל 98%, מספר אצווה WP32140706), ו"גדול או שוויון ", שוויון, אצווה מספר WP321407), Betaine (Betaine, Betaine, Betaine, Betaine, Betaine, Betaine, Bataine, Bataine, Bataine, Bataine, Betaine, Betaine, Betaine, WP33654874) נרכשו מ- Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., בע"מ; המלח של ריינשטיין, גלוקוז נטול מים (כיתה אנליטית), אצטוניטריל, מתנול (ציון כרומטוגרפי) וחומצה זרחתית נרכשו מ- Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.