אפקט טיפולי ומנגנון של גליקוזידים פניל ​​אתנול ציסטאנצ'י על ספרמטוגנזה הנגרמת על ידי ציקלופוספאמיד בעכברים

איש קשר: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 דוא"ל:audrey.hu@wecistanche.com

ZHAODong-hai1, ZHANGLei2, ZHANGYan3, QILing1, ZOU Xiang-ming4

[סיכום]

מַטָרָה:לחקור את ההשפעה הטיפולית שלCistanche phenylethanoid גליקוזידיםעל עכברים עם spermatogenesis המושרה על ידי ציקלופוספמיד וכדי להבהיר מראש את מנגנון הפעולה שלו.שיטה:שיטת מיצוי אתנול למיצויCistanche phenylethanoid גליקוזידים. 40 עכברי BALB/C חולקו באופן אקראי לקבוצת ביקורת, קבוצת מודל, מינון נמוךCistanche phenylethanoid גליקוזידקבוצה (50 מ"ג·ק"ג-1), וקבוצה במינון גבוה (100 מ"ג·ק"ג-1), עם 10 עכברים בכל קבוצה. מלבד קבוצת הביקורת, לעכברים בקבוצות האחרות הוזרק ציקלופוספמיד (80 מ"ג·ק"ג-1) כל יום במשך 5 ימים רצופים כדי להכין מודלים של עכברים של הפרעות spermatogenesis. לאחר המתן האחרון, עכברים בקבוצות במינון נמוך ובמינון גבוה שלCistanche phenylethanoid גליקוזידיםקיבלו את המינונים המקבילים במתן מתן, והעכברים בקבוצת הביקורת ובקבוצת המודל קיבלו את אותו נפח של תמיסת מלח רגילה במתן, פעם ביום למשך 30 יום. עשרים וארבע שעות לאחר הניתוח האחרון, נלקחה רקמת אשך העכבר. נעשה שימוש במבחן אימונוסורבנט המקושר לאנזים כדי לקבוע את רמת הטסטוסטרון בהומוגנית של רקמת אשך עכבר. הושוו צפיפות הזרע, תנועתיות הזרע ושיעור חריגות הזרע של כל קבוצה. השינויים המורפולוגיים של רקמת האשכים נצפו על ידי צביעת HE. תוצאות: בהשוואה לקבוצת הביקורת, צפיפות הזרע וקצב תנועתיות הזרע של קבוצת המודל ירדו (P<0.01), the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" increased=""><0.01), and="" the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" decreased=""><0.01). 0.01);="" compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" of="" mice="" in="" each="" dose="" group="" of="">Cistanche phenylethanoid גליקוזידיםעלו באופן משמעותי (P<0.01), the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.01), and="" the="" testicular="" tissue="" the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" homogenate="" increased=""><0.05 or=""><0.01). histological="" observations="" showed="" that="" the="" seminiferous="" tubules="" in="" the="" testis="" of="" the="" model="" group="" were="" atrophied="" and="" degenerated,="" the="" seminiferous="" epithelium="" was="" significantly="" thinner,="" the="" arrangement="" of="" spermatogenic="" cells="" was="" disordered,="" and="" the="" number="" of="" sperm="" in="" the="" cavity="" decreased;="" the="" number="" of="" the="" seminiferous="" epithelium="" in="" the="" testes="" of="" the="">Cistanche phenylethanoid גליקוזידהקבוצה גדלה באופן משמעותי, השכבות נבדלות, התאים הזרעונים מסודרים בצורה מסודרת, הדוקה וקבועה, וניתן לראות זרע בלומן.סיכום: Cistanche phenylethanoid גליקוזידיםיש השפעה טיפולית משמעותית על הפרעת spermatogenesis הנגרמת על ידי cyclophosphamide בעכברים, והמנגנון שלה עשוי להיות קשור לשיפור רמות הטסטוסטרון ברקמות האשכים.

[מילות מפתח]Cistanche phenylethanoid גליקוזידים; ציקלופוספמיד; הפרעת spermatogenesis; עכברים, BALB/C

לחץ למוצרי Cistanche

עקב האצת הקצב החברתי, הרגלי חיים רעים וזיהום סביבתי וגורמים נוספים, איכות זרע חריגה כמו אוליגוספרמיה ואסתנוספרמיה הפכה לגורם העיקרי לאי פוריות גברית [1]. כיום יש פחות תרופות לטיפול באוליגוספרמיה ואסתנוספרמיה, והאפקט הטיפולי אינו ברור. למרשמים לרפואה סינית מסורתית או למרכיבים פעילים יש השפעות טובות בשיפור תפקוד הרבייה הגברי [2-6]. עם זאת, בשל המגוון הרחב של תרופות מרשם, הקשר בין ההשפעות התרופתיות לבין המרכיבים היעילים של התרופה אינו ברור, מה שמגביל את הקידום והיישום של תרופות זרעוניות. למחקר ולפיתוח של המרכיבים היעילים של הרפואה הסינית ולמחקר ההשפעות הטיפוליות שלה בפגיעה ברבייה יש ערך יישום טוב.Cistanche phenylethanoid גליקוזידיםהם אחד החומרים הפעילים החשובים ביותר בCistanche deserticola. הם בדרך כלל גליקוזידים טבעיים המכילים קשרי אסטר וקשרים אוקסוגליקוזידיים עם -גלוקוז כגרעין. הם מצויים באופן נרחב בצמחים דו-פסיגיים [7]. מחקרים [8] הראו זאתCistancheפנילתנואידגליקוזידיםיכול להגן על זרע עכברים מפני נזק חמצוני במבחנה, אך אין דיווחים על זרע הזרע שלו. ניסוי זה בוחן את ההשפעה הטיפולית של גליקוזידים פנילתנואידים Cistanche על תפקוד הזרע של עכברים עם spermatogenesis המושרה על ידי ציקלופוספמיד ומספק בסיס ניסיוני ותיאורטי ליישום שלCistanche phenylethanoid גליקוזידיםבטיפול בהפרעות spermatogenesis.

1. חומרים ושיטות

1.1. חיות מעבדה, ריאגנטים עיקריים ומכשירים

40 עכברי BALB/C בוגרים בדרגת SPF, בני 6-8 שבועות, עם מסת גוף של 20-22g, נרכשו מהמרכז לניסויים בבעלי חיים של בית הספר לרפואה בסיסית של אוניברסיטת ג'ילין, ומספר תעודת החיה : SCXK (קירגיזסטן) 2008-005. העכברים גודלו בצורה הסתגלותית במשך 5 ימים לפני הניסוי. תנאי האכלה: 22 מעלות ~ 25 מעלות, קצב יממה (12/12 שעות), מים ואוכל חינם לשתייה. Cistanche הוא מוצר של חברת המסחר Xinjiang Dakang. Cyclophosphamide להזרקה נרכש מחברת Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd (מספר אצווה 11061921). ערכת בדיקת אימונו המקושרת לאנזים טסטוסטרון הומוגנית של רקמת האשכים נרכשה מ-Tianjin Jiuding Medical Bioengineering Co., Ltd. (מספר אצווה) 20120812), ריאגנטים אחרים הם כולם בדרגות אנליטיות מיוצרות מקומיות. קורא מיקרו-צלחות PLUS384 (MDC בארצות הברית), מיקרוסקופ הפוך TE2000U (ניקון, יפן), וצנטריפוגה J-26XP (Nanodrop, ארצות הברית).

1.2 הכנת Cistanche Phenylethanol Glucoside

10 גרם של אבקת cistanche חולצו על ידי ריפלוקס עם 70 אחוז אתנול, פעמיים, 2 שעות בכל פעם, כדי להשיג את תרכיז הגליקוזיד של אלכוהול phenethyl. התמיסה המרוכזת עברה כרומטוגרפיה על עמודת השרף המקרו-פורוסית D101 ונשלפה עם 70 אחוז אתנול לקבלת אלכוהול Cistanche phenecoside. ספקטרופוטומטר UV זיהה את התמצית באורך גל של 333 ננומטר.

1.3 הכנת מודל בעלי חיים ושיטת מתן תרופה

לאחר 40 עכברי BALB/C זכרים הוזנו בצורה אדפטיבית במשך 5 ימים, העכברים חולקו באופן אקראי ל-4 קבוצות (10 עכברים בכל קבוצה): קבוצת ביקורת, קבוצת מודל, CistancheCistanche phenylethanoid גליקוזידיםקבוצה במינון נמוך, וCistanche phenylethanoid גליקוזידיםקבוצה במינון גבוה. מלבד קבוצת הביקורת, לשלוש קבוצות העכברים האחרות ניתנה זריקה תוך צפקית של cyclophosphamide 80 מ"ג·ק"ג-1 לכל עכבר במשך 5 ימים רצופים כדי להכין מודלים של בעלי חיים של הפרעות spermatogenesis. לאחר הכנת המודל, עכברים בקבוצות במינון נמוך וגבוה שלCistancheפנילתנואיד ניתנו 50 ו-100 מ"ג·ק"ג-1·d-1 בהתאמה. העכברים בקבוצת הביקורת ובקבוצת המודל קיבלו נפחים שווים של תמיסת מלח רגילה. פעם ביום למשך 30 יום. כל העכברים הוקרבו 24 שעות לאחר מתן התרופה האחרון ובוצעו בדיקות דו-צדדיות. האשך הימני תוקן עם פורמלדהיד. האפידידימיס והאשך נלקחו מצד שמאל. האשך עבר הומוגנית וצנטריפוגה ב-3,000 דקות למשך 10 דקות. הסופרנטנט נלקח ואוחסן בקופסת קרח ב--20 מעלות לבדיקה. האפידידימיס השמאלי נבדק עבור צפיפות הזרע, תנועתיות הזרע ושיעור העיוותים.

1.4 קביעת צפיפות הזרע, תנועתיות הזרע ושיעור העיוותים

הנח מבחנה המכילה 10 מ"ל של תמיסת זרע זרע [9] באמבט מים בטמפרטורה קבועה כדי לחמם אותה מראש ל-37 מעלות, קח אפידידימיס חד צדדי להסרת רקמת חיבור ושומן, חתוך את הרקמה והכנס אותה למבחנה בשעה 37 מעלות למשך 10 דקות לאחר שהזרע פנוי לחלוטין, קח טיפה אחת על לוחית ספירת תאי הדם וחשב את צפיפות הזרע לפי שיטת ספירת התאים. התוצאה מבוטאת כמספר הזרעונים למיליליטר; בנוסף, קח 5μL של תרחיף זרע ואת אותה כמות של eosin-Y מהמבחנה לערבב היטב, להניח אותו בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות, להוסיף כוס כיסוי ולצפות במיקרוסקופ אור. זרע מת נצבע בוורוד, זרע חי אינו מוכתם והציטופלזמה שקופה. כל דגימה סופרת 200 זרעונים, מחשבת את כדאיות הזרע, התוצאה מבוטאת באחוזים, כדאיות זרע=מספר זרעונים חיים / המספר הכולל של הזרע × 100 אחוז. עוד 5 μL של תרחיף זרע נקבע במתנול למשך 5 דקות, מיובש והוכתם בתמיסה מימית של 2% אאוזין למשך שעה, נשטף ויובש בנשיפה. חפש חלקים עם פחות חפיפת זרע מתחת לעדשה בעלת עוצמה נמוכה, והשתמש בעדשה בעלת עוצמה גבוהה כדי לבדוק את מורפולוגיית הזרע לפי הסדר. כל עכבר בדק 1,{20}} זרע מלא. ראשי הזרע ללא ווים, בצורת בננה, אמורפיים, שמנים וראשים כפולים נשפטו כעיוותים. שיעור העיוותים בזרע חושב והתוצאות הובאו באחוזים. שיעור עיוות זרע=מספר זרע מעוות / מספר כולל של ספירת זרע × 100 אחוז.

1.5 קביעת הורמוני הרבייה

האשך נקלף מהממברנה והונח בצלחת בקבוקון, ואת מדיום ההומוגניות המקורר מראש (0.01mol·L-1 סוכרוז, 0.01mol ·L-1 Tris-HCl, 0.1mmol·L-1 תמיסה של EDTA-Na2, pH 7.4), חותכים את רקמת האשך במספריים עיניים, שופכים אותה לצינור הומוגנית זכוכית, וצנטריפוגה ב-4, 000×g למשך 10 דקות בטמפרטורה נמוכה, ולקחת את הסופרנטנט, השתמש בערכת ניסוי אימונוסורבנט המקושרת לאנזים כדי למדוד את רמת הטסטוסטרון בהומוגנית רקמת האשכים ולבדוק 3 דגימות מקבילות לכל דגימה. השלבים והשיטות הניסויים הושלמו בהתאם להוראות הערכה.

1.6 תצפית מורפולוגית באשך

קח קטעי פרפין של אשך עכבר, מוכתם ב-HE, וצפה בהפצת spermatogonia ותאים spermatogenic ברקמת האשך תחת מיקרוסקופ אור.

1.7 ניתוח סטטיסטי

ניתוח סטטיסטי בוצע באמצעות תוכנה סטטיסטית SPSS17.0. צפיפות הזרע, קצב תנועתיות הזרע, שיעור עיוות הזרע ורמת טסטוסטרון האשכים של עכברים בכל קבוצה הובאו כ-x±s, וההשוואה בין הקבוצות בוצעה על ידי ניתוח חד-פקטור של שונות.

2. תוצאות

2.1. צפיפות הזרע, תנועתיות הזרע ושיעור עיוות הזרע של כל קבוצת עכברים

בהשוואה לקבוצת הביקורת, צפיפות הזרע וכדאיות הזרע של קבוצת המודל ירדו (P<0.01), and="" the="" sperm="" deformity="" rate="" increased=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" rate="" of="" mice="" in="" each="" dose="" of="">Cistanche phenoxyethanol glycosideגדל (עמ'<0.05 or=""><0.01), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05 and=""><0). .01).="" compared="" with="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group,="" the="" high-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" had="" higher="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility=""><0.05), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05). see="" table="">

2.2 רמות טסטוסטרון ברקמות האשך של עכברים בכל קבוצה

רמות הטסטוסטרון בהומוגניות של רקמת האשכים של קבוצת הביקורת וקבוצת המודל היו (10.26±0.57) ו-(5.33±0.84) nmol·L-1, בהתאמה. רמת הטסטוסטרון בקבוצת המודל הייתה נמוכה משמעותית מזו של קבוצת הביקורת (P<0.01). the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" were="" (7.55±1.21)="" and="" (10.35±0.94)="" nmol·l-1.="" the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" low="" and="" high-dose="" groups="" of="" cistanche="" cistanche="" ethanol="" glycosides="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05 or=""><0.01). the="" testosterone="" level="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="">Cistancheקבוצת cistanche phenethyl glycoside במינון גבוה הייתה גבוהה משמעותית מזו של הקבוצה במינון נמוך (P<>

2.3 מורפולוגיה של אשך עכברים בכל קבוצה

נצפו במיקרוסקופ אור, צינוריות הזרע באשכים של הקבוצה הרגילה היו מסודרות בצפיפות, רמת ומספר תאי הנבט היו גדולים, אפיתל הזרע היה מסודר בצורה מסודרת, והאבובות הזרעיות נראו כולן עם היווצרות זרע. בקבוצת המודל, צינוריות הזרע באשכים של עכברים התנוונו והתנוונו, האפיתל הזרע דולל באופן משמעותי, מספר שכבות האפיתל הצטמצם, הסידור היה מופרע ומספר הזרע בחלל הצטמצם. בהשוואה לקבוצת המודל, המינון הנמוך שלCistanche phenethyl alcohol glycoside.

בקבוצה גדל מספר שכבות האפיתל הזרע של צינוריות הזרע, סידור האפיתל היה סדיר יותר, והנזק של צינוריות הזרע השתפר כמובן; המבנה של צינוריות זרע במינון גבוהCistanche phenylethanoid גליקוזידהקבוצה השתפרה באופן משמעותי יותר, ומספר ומספר שכבות האפיתל הזרע גדלו באופן משמעותי. מסודרים בצורה מסודרת, יש זרע בוגר בצינוריות הזרע, והמבנה בעצם חזר לקדמותו. ראה איור 1 (הוספה 6).

3 דיון

Cyclophosphamide הוא תרופה נפוצה נגד גידולים ומדכא חיסוני, המפריע בעיקר למגוון פונקציות ביולוגיות תוך תאיות באמצעות אלקילציה של DNA. רעילות רבייה היא אחת מתופעות הלוואי העיקריות של cyclophosphamide [3], שעלולה להוביל בקלות לנזק ל-DNA לזרע ולהתפתחות לא תקינה של זרע. מחקרים קליניים [10-11] מצביעים על כך שרעילות הרבייה של ציקלופוספמיד עלולה לגרום לאזוספרמיה או אוליגוספרמיה. , המוביל לאי פוריות או להופעת פגמים גנטיים או מומים בצאצאים.

Cistanche tubulosaהוא צמח טפיל גבוה רב שנתי במשפחת ליידן. זוהי רפואה סינית ידועה המזינה את הכליות והיאנג, מזינה את הדם ומזינה את המעיים. זוהי תרופת מרשם נפוצה לטיפול מסורתי בהפרעות בתפקוד הרבייה הגברי [12].פנילתנואידים גליקוזידיםהם אחד המרכיבים הפעילים החשובים ביותר שלCistanche[13] ויש להם מגוון רחב של השפעות פרמקולוגיות, כגון אנטי חמצון, אנטי אייג'ינג ואנטי גידולים [14].

במחקר זה, cyclophosphamide שימש להכנת מודל עכבר של הפרעת spermatogenesis, ונבדקה ההשפעה הטיפולית של Cistanche phenylethanoid glycosides על הפרעת spermatogenesis הנגרמת על ידי cyclophosphamide. התוצאות הראו שבהשוואה לקבוצה הרגילה, צפיפות הזרע של קבוצת המודל ירדה, שיעור ההישרדות ירד ושיעור העיוותים עלה. בהשוואה לקבוצת המודל, כל קבוצות המינון של גליקוזידים של Cistanche phenoxyethanol יכולות להגביר ביעילות את צפיפות הזרע, לשפר את תנועתיות הזרע ולהפחית את שיעור עיוות הזרע. התוצאות לעיל מצביעות על כך שהגליקוזידים של ה-cistanche phenoxyethanol יכולים לקדם spermatogenesis ולהגן על האשך הפגוע. תוצאות מורפולוגיה של האשכים הראו כי לאחר טיפול עםCistanche phenylethanoid גליקוזיד, מספר האפיתל הזרע באשך של עכברי המודל גדל באופן משמעותי, השכבות היו ברורות, התאים הזרעונים היו מסודרים בצורה מסודרת, הדוקה וקבועה, וניתן לראות זרע בלומן, מה שמצביע על כךCistanche phenylethanoidיכול לשנות Shanhe משחזר את המבנה והמורפולוגיה של אפיתל זרע לאחר פגיעה ברבייה.

הטסטוסטרון מווסת את ההתמיינות של תאי הנבט הזכריים ומהווה תנאי הכרחי להתפתחות תקינה של האשך ולהתרחשות תקינה של זרע. כמה מחקרים [15] דיווחו שהנוק-אאוט הסלקטיבי של קולטני אנדרוגן בתאי סרטולי של האשך גרם להפרעות בהתפתחות זרע וסטריליות גברית. במחקר זה, cyclophosphamide שימש לייצור spermatogenic.

לאחר מודל הפגיעה במכשול, רמת הטסטוסטרון ברקמת האשך של העכברים הייתה נמוכה משמעותית מזו שבקבוצה הרגילה. לאחר פעולת Cistanche phenylethanoid glycosides, רמות הטסטוסטרון בכל קבוצת מינון עלו, ורמת הטסטוסטרון בקבוצת המינון הגבוה הייתה גבוהה משמעותית מזו בקבוצת המינון הנמוך. מוצע שהגליקוזידים של ה-cistanche phenoxyethanol עשויים לקדם spermatogenesis על ידי הגדלת רמת הטסטוסטרון ברקמת האשך לטיפול בהפרעה בתפקוד spermatogenic, אך מנגנון השפעתו על טסטוסטרון דורש מחקר ודיון נוספים.

הטסטוסטרון מווסת את ההתמיינות של תאי הנבט הזכריים ומהווה תנאי הכרחי להתפתחות תקינה של האשך ולהתרחשות תקינה של זרע. כמה מחקרים [15] דיווחו שהנוק-אאוט הסלקטיבי של קולטני אנדרוגן בתאי סרטולי של האשך גרם להפרעות בהתפתחות זרע וסטריליות גברית. במחקר זה, cyclophosphamide שימש לייצור spermatogenic.

לאחר מודל הפגיעה במכשול, רמת הטסטוסטרון ברקמת האשך של העכברים הייתה נמוכה משמעותית מזו שבקבוצה הרגילה. לאחר הפעולה שלCistanche phenylethanoid גליקוזידים, רמות הטסטוסטרון בכל קבוצת מינון עלו, ורמת הטסטוסטרון בקבוצת המינון הגבוה הייתה גבוהה משמעותית מזו בקבוצת המינון הנמוך. מוצע שהגליקוזידים של ה-cistanche phenoxyethanol עשויים לקדם spermatogenesis על ידי הגדלת רמת הטסטוסטרון ברקמת האשך לטיפול בהפרעה בתפקוד spermatogenic, אך מנגנון השפעתו על טסטוסטרון דורש מחקר ודיון נוספים.

[הפניות]

[1] וואנג יסין, ג'נג ג'ופן. התקדמות חדשה בחקר פוריות גבר [J]. Chinese Journal of Andrology, 2006, 12(9): 771-774.

[2] Xie Jianxing, Wang Jun, Chen Ming, et al. השפעת קפסולת Guilingji על חולדות עם אוליגוספרמיה. תפקיד ייצור הזרע וההשפעה על הורמוני המין [J]. Journal of Guangzhou University of Chinese Traditional Medicine and Pharmacy, 2011, 28(6): 621-623.

[3] Zhang Changcheng, Jia Liangliang, Li Shouchao, et al. פלבנואידים הכוללים אפי-מדיום גורמים למזעור של cyclophosphamide מחקר על ההשפעה המגנה של מחסום זרע שנולד עכברוש [J]. רפואת פטנטים סינית, 2010, 32 (12): 2052-2055.

[4] Xu Lei, Wang Rui, Zhang Weixing, et al. גרגירי Shengjing על ליקוי זרע המושרה על ידי ציקלופוספאמיד חוסמים את ההשפעה הטיפולית של עכברים [J]. Journal of Zhengzhou University: Medical Science Edition, 2008, 43(2): 267-270.

[5] Wang Rui, Xu Lei, Zhang Weixing, et al. השפעת גרגירי Shengjing של רפואה סינית על עכברים לקויי ספרמטוגנזה מחקר ניסיוני על השפעות טיפוליות [J]. Chinese Journal of Andrology, 2008, 14 (11): 1046-1049.

[6] Guo Kaihua, Gao Fulu, Niu Siyun, et al. השפעת מרתח Heshuwu על רקמת האשך של חולדות מזדקנות השפעת מסלול המרת אותות Rb/p53 של התא [J]. Anatomy Journal, 2010, 41(3): 435-439.

[7] וו האיהונג, שואן גוודונג, ליו צ'ונקוואן. השפעת מיצוי ריפלוקס של Cistanche Phenylethanol Glucoside עם מחקר של גורם אתנול [J]. Jiangsu Agricultural Sciences, 2009 (1): 250-251.

[8] Li Gang, Zhu Wenbin, Niu Fei, et al. השפעות של Cistanche Phenylethanol Glucoside על זרע חולדות מחקר על ההשפעה המגנה של נזק חמצוני חיצוני [J]. Lishizhen Traditional Chinese Medicine and Materia Medica, 2010, 21(9): 2205-2207.

[9] Chen Deyu, Liu Limin, Xie Qingdong וכו'. נוגדנים נגד זרע על תפקוד המיטוכונדריה של הזרע ההשפעה של [J]. Journal of Shantou University Medical College, 2008, 21(1): 4-6.

[10] KenneyLB, Laufer MR, Grant FD, etal. סיכון גבוה למידע Highdoseccyclophaphamiddeforsarcomaduringchildhood [J].Cancer, 2001, 91(3): 613-621.

[11] JahunkainenK, EhmckeJ, Houm, etal. תפקוד האשכים ושימור פוריות במפלגות סרטניות [J]. BestPect ResClinEndocrinol Metab, 2011, 25: 287-302.

[12] גאו ז'ניו, ג'ואו האיטאו, לין צ'יאנג. היכולת של Cistanche להתנגד לעייפות פעילות גופנית בחולדות והשפעת הרדיקלים החופשיים במוח [J]. Anhui Agricultural Sciences, 2011, 39(16): 9592-9595.

[13] Ren Lu, Gu Xiaohong, Tang Jian, et al. פנילטנול גליקוזידים ב-Cistanche cistanche מתורבת מחקר מיצוי וטיהור [D]. Wuxi: Jiangnan University, 2006, 25(3): 33-36. [14] Jinghui, Zuo Jianfeng, Li Jiaoshe. התקדמות במחקר פרמקולוגי של גליקוזידים של פנוקסיאתנול תערוכת [J]. Lishizhen Medicine and Materia Medica, 2006, 17(3): 440-441.

[15] ChangC, ChenYT, YehSD, etal. Infomedia springtime TheandrogenreceptorinSertolicells [J]. ProcNatlAcadSci USA, 2004, 101 (18): 6876-6881.