המחקר של פרוסות Cistanche Deserticola והמוצר המעובד בקיטור יין מ- Cistanche Deserticola

ההבדל בין רכיבים כימיים ופעילויות ביולוגיות של פרוסות מוצרי הגלם והמוצר המעובד בקיטור יין מ- Cistanche

איש קשר: emily.li@wecistanche.com

Ying Zhang,1,2 Yuewu Wang,3 Song Yang,1 Yunfeng Xiao,3 Haibin Guan,2 Xin Yue,2 Xiaoqin Wang,2 ו-Xiangri Li 1

תַקצִיר

בתור רפואת צמחי מרפא סינית ידועה, הCistanche deserticolaמשמש לטיפול בתסמונת מחסור בכליות בסין במשך אלפי שנים. הן מוצר הגלם שלפרוסות Cistanche Deserticola(RCD) ושלומוצר מעובד בקיטור יין(WSCD) משמשים קלינית להשפעות שונות. במחקר זה, ההשפעות של תהליך האידוי עם יין (SPW) מCistanche deserticolaעל הרכבים כימיים והשפעות ביולוגיות נחקרו. ניתוח הרכיבים העיקרי (PCA) וניתוח כמותי שימשו כדי לחקור את ההבדלים בהרכבים הכימיים. ההשפעות של כליות הזנה נחקרו גם כדי להשוות את ההבדלים בין RCD (פרוסות Cistanche Deserticola)וה- WSCD (מוצר מעובד בקיטור יין). תוצאות ה-PCA הצביעו על כך שההפרדה הברורה הושגה ב-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD (מוצר מעובד בקיטור יין). תוצאות הניתוח הכמותי הראו של-WSCD יש כמויות גבוהות יותר של פוליסכרידים, סך PhGs, isoacteoside ואוסמנתוסיד B מאשר RCD(פרוסות Cistanche Deserticola), בעוד שתכולת ה-2'-אצטילקטאוזיד והאקטאוזיד ירדה לאחר ה-SPW. ההשוואה של RCD ו-WSCD על פעילויות ביולוגיות הראתה ששניהם יכולים לשחזר את רמת הורמון המין במודל של מחסור בכליות-יאנג ולשפר את האפקט נוגד החמצון. ה-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)היה הרבה יותר טוב בהגדלת משקל הקרביים של הכִּליָהושלפוחית ​​זרע. התוצאות הצביעו על כך ש-SPW שינתה את הרכיבים הכימיים שלה והעצימה את הפעילות הביולוגית שלה.

1. הקדמה

Cistanche deserticolaהיא רפואה סינית מסורתית נפוצה ושימשה בדרך כלל כטוניק בסין וביפן במשך שנים רבות, הידועה בכינויה "ג'ינסנג מדברי".Cistanche deserticolaתועד לראשונה כציון עליון ב-"Shennong's Herbal Classic of Materia Medica (Shen Nong Ben Cao Jing)" בערך בשנת 100 לפני הספירה ושימש לטיפול במחלות שונות כולל מחסור בכליות, אימפוטנציה, אי פוריות נשית, לויקוריה חולנית, מטרורגיה שופעת (לבנים) , תחושת קור במותניים ובברכיים ועצירות כרונית אצל קשישים [1]. עד כה בודדו מספר מרכיבים עיקריים, כגון פוליסכרידים [2, 3], גליקוזידים פנילתנואידים (PhGs) [1, 4], אירידואידים [1] וליגננואידים [1, 5]. ביניהם, PhGs ופוליסכרידים הוכחו כמרכיבים הפעילים העיקריים ביולוגיתCistanche deserticola[6–9]. ניסויים פרמקולוגיים מודרניים הוכיחו ש-Cistanche deserticola יכולה לשפר את ייצור הטסטוסטרון ולהגן על הזרע, לעורר שגשוג תאים ולשפר את שיעור ההישרדות של התאים, להפגין פעילויות בולטות לעוצמה מינית, לשפר את הזיכרון, למניעת הזדקנות, לניקוי רדיקלים חופשיים והגנה עצבית [10 –13].

על מנת להפחית רעילות ו/או לשפר את ההשפעות, יש לעבד את רוב הצמחים הסיניים המסורתיים לפני המרשם. שלבי התהליך המסורתיים כוללים ניקוי, תהליך מים (טחינה במים, אידוי וצלייה), ותהליך אש (חימום ערבוב עם יין, חומץ, מלח או דבש) [14]. במהלך התהליך, הרכיבים הכימיים עשויים להשתנות: התוכן היחסי של רכיבים מסוימים עשוי להשתנות או להיווצר רכיבים חדשים [15]. התהליך שלCistanche deserticolaיש היסטוריה ארוכה וCistanche deserticolaיש לעבד על ידי השרייה ביין האורז, אידוי כמתואר בפרמקופיה הסינית (מהדורת 2015) [16]. SPW הוכח כמשפיע על השפעותיהם על מרידיאן הכליות על פי התיאוריה של הרפואה הסינית המסורתית (TCM) [17]. WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)מתועד לראשונה ב"מסכת ליי גונג על הכנה והרתחה של Materia Medica (Lei Gong Pao Zhi Lun)" בשושלות הצפונית והדרומית של סין. WSCD משמש טוב יותר לטיפול בחסרי כליות והגנה על זרע כפי שתועד ב"Taiping Shenghui Fang" בשושלת סונג של סין. עם זאת, לא היו מחקרים השוואתיים על הרכיבים הכימיים בין RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)עד כה.

מחקרים פרמקולוגיים מודרניים הצביעו על כך ש-WSCD יכול לחדד את הכליה כדי להבטיח את המהות על ידי גירוי ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-גונדה בדרגות שונות ומשמש לטיפול בחסר בכליה כגון מחסור של כליות-יאנג [18]. עם זאת, עד כה, ההבדלים בפעילויות ביולוגיות בין RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)לא נחקרו. לאחרונה, כדי להקל על המחקר הניסיוני, הוכפל מודל החיות של מחסור בכליות-יאנג על ידי הזרקת עכברושים במינון גבוה של הידרוקורטיזון, שבו חולדות יראו תסמינים הדומים מאוד לאלו המתוארים במחסור בכליות-יאנג של TCM [19, 20] . לחולדות עם מחסור בכליות-יאנג תמיד יש כמה תסמינים כמו ירידה במשקל, הפחתת צריכת מזון, חולשה, צריכת מים מוגברת וירידה בפעילות. בהתבסס על מודל בעלי חיים זה, זוהו ההבדלים של השפעות הזנה-כליות בין RCD ו-WSCD ואף חשפו את המהות המדעית של התהליך הסיני המסורתי.

ל-Cistanche deserticola פונקציות רבות

2. חומרים ושיטות

2.1. חומרים וכימיקלים

החומר הסטנדרטי כגון אקטאוזיד, איזואקטאוזיד, אכינאקוסיד, ציסטאנוסיד A ו-2′- אצטילקטאוזיד נרכש מ-Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (שנחאי, סין). Cistanoside F, Cistanoside C, osmanthuside B ו- tubuloside B נרכשו מ-Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (צ'נגדו, סין). הטוהר של כל התקנים היה לא פחות מ-98 אחוז. מתנול ואצטוניטריל בדרגת HPLC נרכשו מ-Aladdin Chemistry Inc. (שנחאי, סין). מים מפושטים הושגו באמצעות MilliQ50 SP Reagent Water System (Bedford, MA, ארה"ב) להכנת דגימות ופתרונות ניידים. כל הממיסים האורגניים האחרים ששימשו במחקר זה היו בדרגה אנליטית ונרכשו מ-Shanghai Chemical Co. Ltd (Shanghai, סין).

2.2. אוסף דוגמאות

כל הגולמיCistanche deserticola(7 קבוצות של דגימות) נאספו על ידי האוניברסיטה הרפואית של מונגוליה הפנימית ממחוזות מונגוליה הפנימית ו- Ningxia. כולם זוהו כcistanche deserticolaYC Ma מאת Xiao-qin Wang, הפרופסור של המחלקה לפרמקוגנוזה באוניברסיטה הרפואית של מונגוליה הפנימית. דגימת שובר הופקדה בבית הספר לרוקחות, האוניברסיטה הרפואית של מונגוליה הפנימית. לאחר האיסוף, התפרחות שלCistanche deserticolaהוסרו, הגבעולים נחתכו וייבשו בטמפרטורת החדר עם אוויר, ואז הפרוסות חולקו אקראית לשתי קבוצות בכל אצווה: האחת היא RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)והשני משמש להכנת WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין).

ה-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)הוכנו במעבדה לפי פרמקופיה סינית (מהדורת 2015) [16], כלומר ה-RCD הפרוס(פרוסות Cistanche Deserticola)הושרו ביין אורז עם מיכל סגור למשך 6 שעות עד לריכוך, אודו באמבט מים למשך 12 שעות נוספות עד שהמשטח הופך שחור, וייבשו בטמפרטורת החדר עם אוויר.

2.3. ניתוח רכיבים ראשיים (PCA)

ניתוח רכיבים עיקריים (PCA) היא טכניקה מתוחכמת בשימוש נרחב להפחתת הממדים של בעיות רב-משתניות. זה מפחית את הממדיות של מערך הנתונים המקורי על ידי הסבר המתאם בין מספר רב של משתנים במונחים של מספר קטן יותר של גורמים בסיסיים ללא אובדן משמעותי של מידע. במחקר זה, ההבדלים בין RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)בוצעו על ידי PCA ללא פיקוח באמצעות תוכנת SIMCA 13.0 המבוססת על אזורי השיא היחסיים בכרומטוגרפיה של HPLC. בעזרת PCA נמצאו ההשפעות העיקריות של הכימיקלים על הסיווג בין דגימות שונות.

2.4. הכנת דוגמא

2.4.1. הכנת תמצית לבעלי חיים

ה-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)נבחרו מתוך הדגימות שנאספו והוכנו כמתואר בסעיף 2.2.

RCD מיובש באוויר ופרוס(פרוסות Cistanche Deserticola)אבקה על ידי מכתש (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), שקלה במדויק 1.0 ק"ג, והושרה ב-50 אחוז אתנול למשך 30 דקות, והיחסים של צמח/אתנול בשימוש היו 1/ 10 (בשמל). ואז, הוא חולץ תחת ריפלוקס פעמיים במשך שעה אחת בכל פעם. שתי התמציות שולבו וסוננו והאתנול שוחזר תחת לחץ מופחת ב-60 מעלות. התמצית הגולמית הכוללת של PhGs יובשה בוואקום ב-60∘C וטיהרה על ידי שרף מאקרו-פורוס. לבסוף, תמצית PhGs של RCD הושגה ונשקללה במדויק.

תמצית PhGs של WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)הושג בעקבות אותו הליך לעיל.

המשקעים מחילוץ ה-PhGs יובשו באוויר ורוקחו פעמיים במשך 1.5 שעות בכל פעם עם 20 פעמים של מים. שתי התמציות שולבו וצנטריפוגה ב-4000 סל"ד למשך 10 דקות, והסופרנטנט רוכז והושקע עם 95 אחוז אתנול. לאחר צנטריפוגה, המשקע יובש בוואקום ב-60 מעלות. לבסוף, תמצית הפוליסכריד של RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)הושג ונשקל במדויק.

תמצית הפוליסכריד של WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)הושג בעקבות אותו הליך לעיל.

PhGs ותמציות פוליסכרידים של RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)היו תרחיפים מעורבים במים, בהתאמה, כאשר החולדות טופלו דרך הפה.

2.4.2. הכנה לדוגמא לקביעת PhGs

תמציות ה-PhGs בסעיף 2.4.1 נשקלו במדויק כ-0.15 גרם וחולצו באמצעות אולטרסאונד עם 50mL תמיסה מימית של 50 אחוז מתנול למשך 40 דקות. לאחר הקירור, הירידה במשקל התחדשה ב-50 אחוז מתנול. כל הדגימות והממסים סוננו דרך ממברנה של 0.45 מיקרומטר לפני הניתוח. התוכן של ארבעה PhGs ב-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)נקבע באמצעות HPLC, וה-PhG הכולל נקבע באמצעות ספקטרופוטומטריית UV.

2.4.3. הכנה לדוגמא לקביעת פוליסכריד

תמציות הפוליסכרידים בסעיף 2.4.1 נשקלו במדויק כ-0.10 גרם וחולצו על ידי בדיקת אולטרסאונד עם 50 מ"ל מים חמים למשך 40 דקות; לאחר הקירור, הירידה במשקל התחדשה במים. כל הדגימות והממסים סוננו דרך ממברנה של 0.45 מיקרומטר לפני הניתוח.

2.5. מצב כרומטוגרפי של HPLC וקביעת ארבעת ה-PhGs

ההפרדה הכרומטוגרפית בוצעה במערכת HPLC UltiMate 300{{40}} (Thermo Fisher Scientific, ארה"ב), מצוידת במשאבה כפולה שיפוע, תא עמודה , וגלאי DAD. הנתונים נאספו ועובדו באמצעות ChromeLeon Chromatography Data System. הדגימות הופרדו על Agilent Zorbax SB-C18 (250mm×4.6 מ"מ, 5 מיקרומטר) עם עמודת שמירה C18 (4.6 מ"מ×12.5 מ"מ, 5 מיקרומטר). השלב הנייד כלל מאצטוניטריל (A) ו-0.1 אחוז תמיסת חומצה זרחתית (B) בקצב זרימה של 1 מ"ל/דקה. פליטת הגרדיאנט היא כדלקמן: 0-13 דקות ראשוניות, שינוי ליניארי מ- AB (5:95, v/v) ל-AB (15:85, v/v); 13–25 דקות, שינוי ליניארי ל-AB (20:80, v/v); 25–43 דקות, שינוי ליניארי ל-AB (25:75, v/v). אורך הגל של הגלאי נוטר ב-330 ננומטר. טמפרטורת העמודה נקבעה ל-30 מעלות ונפח הדגימה שהוזרק היה 10 μL [21]. תמיסת המניות המכילה ארבעה תקני ייחוס הוכנה על ידי המסת תקני הייחוס ב-50 אחוז מתנול לריכוז סופי של 0.20 מ"ג/מ"ל עבור 2-אצטילקטאוזיד, 0.20 מ"ג/מ"ל עבור אקטאוזיד, 0.05 מ"ג/מ"ל עבור אוסמנטוסיד B, ו-0.10 מ"ג/מ"ל עבור איזואקטאוזיד. התמיסה דוללה לאחר מכן לחמישה ריכוזים שונים עם שלושה שכפולים כדי ליצור עקומות כיול. תכולת המדגם הובעה בגר'/ק"ג של משקל גולמי.

המחקר על פרוסות Cistanche deserticola והמוצר המעובד בקיטור יין מ- Cistanche deserticola

2.6. קביעת סה"כ PhGs

סך ה-PhGs נקבע באמצעות שיטת הספקטרופוטומטריה UV באורך גל של 330nm בספקטרופוטומטר UV1000 (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). תמיסת המניות הוכנה על ידי המסת תקני echinacoside ב-50 אחוז מתנול לריכוז סופי של 0.10 מ"ג/מ"ל ולאחר מכן דילול לחמישה ריכוזים שונים עם שלושה שכפולים כדי ליצור עקומות כיול.

2.7. קביעת פוליסכרידים

קביעת הפוליסכרידים בוצעה בשיטת חומצה פנול-גופרית. 1 מ"ל מתמיסת הדגימה הוכנס למבחנה של 20 מ"ל עם פקק זכוכית, ו-1 מ"ל של תמיסת פנול 6 אחוז ו-5 מ"ל חומצה גופרתית מרוכזת הוספו ונערו במשך 5 דקות. התערובת הועברה לאמבט מים רותחים למשך 10 דקות וקיררה לטמפרטורת החדר לזיהוי אולטרה סגול. ספיגת האולטרה סגול נוטרה ב-480 ננומטר בספקטרופוטומטר UV1000. תקן הייחוס של גלוקוז D נטול מים נשקל במדויק והומס במים מזוקקים לריכוז סופי של 0.10 מ"ג/מ"ל. לאחר מכן התמיסה דוללה לחמישה ריכוזים שונים עם שלושה שכפולים כדי ליצור עקומות כיול.

2.8. ניסויים בבעלי חיים

2.8.1. בעלי חיים ודיור

חולדות SD זכרים בבגרות מינית (180-200 גרם) נרכשו מ-Xinglong (בייג'ינג) חוות בעלי חיים ניסויים (גיל: 6 שבועות) ורישיון חיית המעבדה היה SCXK (Jing):2016-0003. כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לחקר בעלי חיים באוניברסיטה הרפואית הפנימית של מונגוליה ובוצעו על פי הנחיות המכון הלאומי לבריאות לגבי עקרונות הטיפול בבעלי חיים (2004). כל בעלי החיים הוחזקו במערכת מחסום עם טמפרטורה מווסתת של 21-23 מעלות ולחות יחסית של 40-65 אחוז ובמחזור של 12 שעות כהה/אור. החולדות קיבלו מזון ומים באופן חופשי והתאקלמו בסביבה הנ"ל במשך שבוע.

2.8.2. מינון ודגימה

החולדות הועברו לכלובים מטבוליים בודדים וחולקו באופן אקראי ל-6 קבוצות (= 10 בכל קבוצה). הם קיבלו זריקה תוך שרירית של 15 מ"ג/ק"ג הידרוקורטיזון נתרן סוקסינאט (נרכש מ-Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin, סין) למשך שבועיים למעט קבוצה 1 שהוזרקה בכמות שווה של מי מלח פיזיולוגי. ביום ה-14 נאספו משקל הגוף, צריכת המזון, צריכת המים, נפח השתן והפעילות הספונטנית תוך 5 דקות כדי לוודא אם המודל של מחסור בכליות-יאנג נעשה בהצלחה. מהיום ה-15, 6 קבוצות טופלו באופן הבא: קבוצה 1 וקבוצה 2 (קבוצת מודל, M) טופלו בנפח שווה של מים מזוקקים, קבוצה 3 (תמצית PhGs של RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)group, PR) טופלו במיצוי של 0.42 גרם/ק"ג PhGs של RCD, שהיה שווה לכ-1.8 גרם/ק"ג מהחומר הגולמיCistanche deserticolaוהקבוצות האחרות היו זהות, קבוצה 4 (תמצית PhGs של WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)group, PW) טופלו במינון של 0.49 גרם/ק"ג תמצית PhGs של WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין), קבוצה 5 (תמצית פוליסכריד של RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)group, SR) טופלו עם 0.18 גרם/ק"ג תמצית הפוליסכריד של RCD, וקבוצה 6 הייתה (תמצית פוליסכריד של WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)group, SW) טופלו במינון של 0.22 גרם/ק"ג מתמצית הפוליסכריד של WSCD. כל החולדות טופלו על ידי זלוף קיבה ליום. לאחר טיפול של חודש, החולדות לא קיבלו מזון במשך 12 שעות לפני איסוף הדם. למחרת, כל החולדות הורדמו והוקרבו. במהלך הבדיקה, החולדות נשקלו פעם בשבוע לצורך התאמת המינון ונשקלו שוב לפני ההקרבה. דגימות דם נאספו בצינור אפנדורף עם תמיסת EDTA-2Na של 10 אחוזים. הסרום הופרד באמצעות צנטריפוגה ב-2000 סל"ד למשך 15 דקות ואוחסן ב--80 מעלות לשימוש נוסף. בנוסף, כליות, אשכים, אפידידימיס, בלוטת הערמונית ושלפוחית ​​הזרע הוסרו ונשקלו במהירות. לאחר השקילה הוקפאו האשכים בחנקן נוזלי לקביעת SOD ומד"א.

2.9. ניתוח השפעות הורמונים ונוגדי חמצון

רמת הטסטוסטרון (T) ואסטרדיול (E2) נקבעו במרכז בדיקת האיכות של צ'ינגדאו קצ'ואנג לפי רדיואימוניות ושיטה קולורימטרית. האשכים הקפואים נשקלו וערבבו עם 20 פעמים של מי מלח פיזיולוגי קר (W/W). הומוגגת האשכים שהושגה על ידי הומוגנית רקמות באמבט הקרח עברה צנטריפוגה לקבלת הסופרנטנט. תכולת SOD ומד"א של האשך נקבעה על ידי ערכות SOD ומד"א בהתאם להנחיות.

2.10. ניתוח סטטיסטי

המובהקות של ההבדלים בין הקבוצות הושוו באמצעות מבחן ANOVA חד כיווני ואחריו המבחן של Scheffe עם מגבלת מובהקות של 0.05 באמצעות תוכנת SPSS 25.0. כל הנתונים הובאו כממוצע ± סטיית התקן (SD) (n=3).

3. תוצאות

3.1. הניתוח של שינויי PhGs לאחר SPW באמצעות PCA

כדי להשוות את השינויים ב-PhGs לאחר SPW, 9 פסגות כרומטוגרפיות נבחרו כשיאים אופייניים וזוהו. המבנים שלהם הוצגו באיור 1, ששטחי השיא היחסיים שלהם חושבו לביטוי כמותי. כרומטוגרמת HPLC כפי שמוצג באיור 2, שהצביע על כך שהתוכן היחסי של PhGs עיקריים השתנה במהלך SPW. ניתוח PCA על שטחי השיא היחסיים של 9 רכיבים הושג לצורך הבחנה בין דגימות שונות. ה-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)היו רחוקים אחד מהשני בחלקת הציונים (איור 3(א)), מה שהצביע על כך שהדגימות סווגו לשני אשכולות. אז הוא האמין כי התוכן של המרכיבים הכימיים היה שונה. כדי למצוא עוד יותר את הסמנים הכימיים הפוטנציאליים לאבחנה, בוצע ניתוח סטטיסטי מורחב כדי ליצור את חלקת הטעינה Bi (איור 3(ב)). פסגות 2, 3, 4, 6 ו-7 יפחתו לאחר SPW ואילו פסגות 5, 8 ו-9 יגדלו, וכולם היו המרכיבים החשובים ביותר להבחין בין ה-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין). התוכן היחסי של שיא 1 אינו שונה בהרבה לאחר SPW.

איור 1 מבנים כימיים של PhGs בCistanche deserticolaYC Ma.

איור 2 כרומטוגרמה HPLC של חומר סטנדרטי (א), RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)(ב) ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)(ג). פסגות: (1) cistanoside F, (2) echinacoside, (3) cistanoside A, (4) acteoside, (5) isoacteoside, (6) cistanoside C, (7) 2'-acetylacteoside, (8) osmanthuside B, ו (9) tubuloside B.

איור 3 איור 3 PCA ציון חלקה (א) וטעינת חלקת Bi (ב) של RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)(עיגול ירוק) ו-WSCD (עיגול אדום). RCD ו- WSCD סווגו לשני אשכולות. פסגות 2, 3, 4, 6 ו-7 הם המרכיבים החשובים ביותר להבחין בין RCD ו-WSCD, שיפחיתו במהלך SPW; פסגות 5, 8 ו-9 הם גם המרכיבים החשובים ביותר להבדלים בין RCD ל- WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין), שיגדל במהלך SPW.

3.2. התוכן של סך פוליסכרידים ו-PhG השתנה לאחר SPW

כפי שמוצג באיור 3(ב), 8 רכיבים (5, 8 ו-9 עלו ו-2, 3, 4, 6 ו-7 ירדו) השתנו באופן משמעותי והשפיעו רבות על קיבוץ המדגם. ביניהם, איזואקטאוזיד ואוסמנתוסיד B עלו הכי הרבה בעוד ש-2′-אצטילקטאוזיד ואקטאוזיד ירדו הכי הרבה. אז, התוכן של isoacteoside, Osmanthuside B, 2′-acetylacteoside ו-acteoside נקבעו על ידי HPLC. כפי שמוצג באיור 1, שיא 4 היה אקטאוזיד, שיא 5 היה איזואקטאוזיד, שיא 7 היה 2′-אצטילקטאוזיד, ושיא 8 היה אוסמנטוסיד B. סך ה-PhGs ב-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)נקבעו בשיטת UV וסך הפוליסכרידים בוצע בשיטת חומצה פנול-גופרית, התוצאות הוצגו בטבלה 1, איזואקטאוזיד, Osmanthuside B, סך הפוליסכרידים וה-PhGs ב-WSCD עלו באופן משמעותי בהשוואה ל-RCD. 2′-אצטילקטאוזיד ואקטאוזיד ירדו באופן משמעותי.

טבלה 1 התוכן של פוליסכרידים ו-PhGs ב-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)(mg/g) (n=3).

הערה. הבדלים משמעותיים עם RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)סומנו כ-*p < 0.05.

3.3. נוצר המודל של מחסור בכליות-יאנג המושרה בהידרוקורטיזון

בהשוואה לקבוצה רגילה, לאחר שבועיים של הזרקה תוך שרירית של 15 מ"ג/ק"ג הידרוקורטיזון נתרן סוקסינאט, משקל הגוף, צריכת המזון והפעילות הספונטנית ירדו באופן משמעותי (P<0.05) and="" the="" water="" intake="" and="" urine="" volume="" were="" increased;="" the="" results="" were="" shown="" in="" table="" 2.="" the="" t="" and="" e2="" levels="" in="" the="" serum="" of="" the="" model="" group="" were="" lower="" than="" the="" normal="" group="" as="" shown="" in="" figure="" 4.="" from="" the="" above,="" the="" kidney-yang="" deficiency="" model="" was="" successfully="">

טבלה 2 האינדיקטורים השתנו לאחר הזרקה תוך שרירית של הידרוקורטיזון נתרן סוקסינאט, (n=10).

הערה. הבדלים משמעותיים עם קבוצת N סומנו כ^# p<>

איור 4 הרמות של T ו-E2: (א) רמת T ו-(ב) רמת E2. הבדלים משמעותיים עם קבוצת M סומנו כ^∗p < 0.05.="" הבדלים="" משמעותיים="" עם="" קבוצת="" n="" סומנו="">^#p < 0.05.

3.4. ההשפעה של תמציות על משקל ואינדקס הקרביים הממוצעים

כל החולדות והקרביים שלהן נשקלו ולאחר מכן חושב מדד הקרביים הממוצע.

בהשוואה לקבוצת N, קבוצת M הפחיתה משמעותית את משקלי הקרביים של הכליות, שלפוחית ​​הזרע, האפידדימיס והאשך, מה שגם הצביע על כך שהמודל של מחסור בכליות-יאנג המושרה על ידי הידרוקורטיזון נוצר בהצלחה. בהשוואה לקבוצת M, כל משקל הקרביים שנצפה עלה בקבוצת PW ו-SR, לקבוצת PR היה משקל מוגבר של האשך, האפידידימיס, שלפוחית ​​הזרע ובלוטת הערמונית, וקבוצת ה-SW גדלה במשקל הכליות, האשך, האפידידימיס, ושלפוחית ​​זרע. בהשוואה לקבוצות יחסי ציבור, קבוצת ה-PW הייתה טובה יותר בכליות, שלפוחית ​​הזרע ובלוטת הערמונית. לא היה הבדל משמעותי בין קבוצות ה-SR וה-SW במשקל האשך, האפידדימיס, שלפוחית ​​הזרע ובלוטת הערמונית. התוצאות הוצגו בטבלה 3.

טבלה 3 משקל הקרביים (g) (n=10).

הערה. הבדלים משמעותיים עם קבוצת M סומנו כ^∗p < 0.05.="" הבדלים="" משמעותיים="" עם="" קבוצת="" n="" סומנו="">^#p < 0.05.

בהשוואה לקבוצת N, האינדקסים של הקרביים של הכליה, האשך, האפידדימיס ושלפוחית ​​הזרע ירדו בקבוצת M. בהשוואה לקבוצת M, קבוצת ה-PW וה-SR העלו את האינדקס של הכליות, האשך, בלוטת הערמונית ושלפוחית ​​הזרע, קבוצות ה-PR הגדילו את האינדקס של האשך, בלוטת הערמונית ושלפוחית ​​הזרע, ובקבוצת ה-SW העלה את האינדקס של הכליות, האשך ושלפוחית ​​הזרע. בהשוואה לקבוצות יחסי ציבור, קבוצת ה-PW הייתה טובה יותר בכליות, שלפוחית ​​הזרע ובלוטת הערמונית. לקבוצות SW ו-SR היה אינדקס דומה של כליות, אשך, שלפוחית ​​זרע ואפידידימיס. התוצאות הוצגו בטבלה 4.

טבלה 4 אינדקס הקרביים הממוצע (g/100g) (n=10).

הערה. הבדלים משמעותיים עם קבוצת M סומנו כ^∗p < 0.05.="" הבדלים="" משמעותיים="" עם="" קבוצת="" n="" סומנו="">^#p < 0.05.

3.5. השפעת המיצוי על רמת ההורמון (T ו-)

כפי שמוצג באיור 4, בהשוואה לקבוצת M, הרמות של T ו-E2 בכל קבוצות הטיפול (קבוצת PW, PR, SW ו-SR) עלו באופן משמעותי (P<0.05). however,="" the="" pw="" group="" was="" better="" than="" the="" pr="" group="" at="" levels="" t="" and="" e2.="" the="" sr="" and="" sw="" groups="" had="" no="" significant="">

3.6. ההשפעה של תמציות על אפקט נוגד חמצון

SOD הוא אנזים נוגד חמצון חשוב. MDA הוא תוצר של חמצון שומנים המהווה אינדיקטור המשקף את מידת הנזק החמצוני. תכולת SOD ו-MDA משקפת את מידת יכולת החמצון והנוגד חמצון. כפי שמוצג באיור 5, בהשוואה לקבוצת M, ההשפעה נוגדת החמצון בכל קבוצות הטיפול (PW, PR, SW ו-SR) הוגברה. לקבוצת SW היה הכי גדולנוגד חמצוןהשפעה.

איור 5 תכולת מד"א וס"ד: (א) תכולת מד"א ו-(ב) תכולת מד"א. הבדלים משמעותיים עם קבוצת M סומנו כ^∗p< 0.05.="" significant="" differences="" with="" the="" n="" group="" were="" designated="" as=""><>

4. דיון

לפני יישום קליני, החומרים הגולמיים צריכים להיות נתונים לטכניקות תהליך סיניות מסורתיות. אידוי היא אחת מגישות העיבוד המסורתיות של כמה עשבי מרפא סיניים, המעניקה צבע שחור המיוצר על ידי תגובת מיילארד [22], מה שמגדיל את הכמויות של חלק מהרכיבים הביו-אקטיביים [23] ופעילויות פרמקולוגיות. WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)בתור אחד ממוצרי התהליך הוא טוב יותר מבחינת הזנת כליות בהשוואה ל-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)כפי שתועד במהדורת 2015 של הפרמקופיה הסינית. במחקר זה, תוצאות PCA הצביעו על כך שה-SPW שינה את הפרופיל הכימי של RCD(פרוסות Cistanche Deserticola). יתרה מכך, 8 רכיבים ב-PhG השתנו באופן משמעותי. סך ה- PhG, סך הפוליסכרידים, איזואקטאוזיד ואוסמנתוסיד B עלו ביותר, בעוד ש-2'-אצטילקטאוזיד ואקטאוזיד ירדו לאחר SPW. התוצאות הצביעו על כך ש-SPW יכול לשנות את המרכיבים הכימיים של RCD(פרוסות Cistanche Deserticola). התוכן של PhGs עם 1,3,4-חלקי גלוקופירנוסיל משולבים (כגון אקטאוזיד, 2'-אצטילקטאוזיד וציסטנוסיד C) ירד ב-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)עם זאת, הריכוזים של האיזומרים שלהם עם 1,3,5-חלק גלוקופירנוסיל טרי-substituted (כגון isoacteoside ו- tubuloside B) עלו, מה שהצביע על כך שהשינוי של מרכיבים כימיים עשוי להתרחש במהלך SPW, ותגובת הידרוליזה תהיה אחת מהסיבות. מסלולי הטרנספורמציה המוצעים הוצגו באיור 6. העלייה בפוליסכרידים לאחר SPW דווחה גם בג'ינסנג [24].

איור 6 מסלולי טרנספורמציה מוצעים של PhGs ב- Cistanche deserticola YC Ma במהלך SPW.

Cistanche deserticolaתועד כממריץ את הכליה ולהפוך את הירידה ברמת הטסטוסטרון ובעל השפעה נוגדת חמצון ופעולה אנטי דלקתית [25], ו-PhGs ופוליסכרידים היו שני המרכיבים הפעילים הביולוגית העיקריים ב-Cistanche deserticola. כ-PhGs, לאיזואקטאוזיד ולאוסמנטוסיד B היו השפעות נוגדות חמצון ואנטי דלקתיות [26, 27]. אז, ההשוואה של השפעות תרופתיות ברמת הטסטוסטרון והשפעה נוגדת חמצון של RCD ו-WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)נחקר. במודל של מחסור בכליות-יאנג המושרה בהידרוקורטיזון, האנדוקרינית נפגעה ורמת הורמון המין ירדה מאוד בדם. במחקר זה, התוצאות של ניתוח הורמוני מין הראו כי הן RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD יכולים להעלות משמעותית את רמת ה-T וה-E2, וגם PhGs ופוליסכרידים הראו שיפור בהורמוני המין. ה-WSCD היה טוב יותר מה-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola), במיוחד בקבוצות תמצית PhGs. התוצאות של מדדי הקרביים הראו שגם PhGs וגם פוליסכרידים יכולים לשפר את משקלי הקרביים ואת מדדי המשקל שלהם. בקבוצות לחלץ PhGs, ה- WSCD(מוצר מעובד בקיטור יין)עדיף על RCD בהגדלת המשקל והמדדים של הכליות ושלפוחית ​​הזרע. בנוסף,Cistanche deserticolaיש השפעה נוגדת חמצון משמעותית, במיוחד קבוצות מיצוי הפוליסכרידים עם WSCD. כפי שנדון לעיל, הן RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD יכולים לשפר את תסמונת החסר בכליות-יאנג; עם זאת, WSCD עדיף על RCD בהעלאת רמת ה-T, E2, המשקולות והמדדים של האפידימיס והאשך. תוצאות המחקר של ההשפעות התרופתיות הצביעו על כך ש-SPW שינתה את הרכיבים הכימיים של PhGs והגדילה את תכולת הפוליסכרידים, שבתורם העלו את רמת הורמוני המין והגביר אתנוגד חמצוןהשפעה.

5. מסקנה

המחקר נועד לגלות את השינוי של PhGs, סך פוליסכרידים, והאפקט התרופתי ב-RCD(פרוסות Cistanche Deserticola)ו-WSCD על חולדה עם מחסור בכליות-יאנג, במיוחד על רמת ההורמונים והשפעה נוגדת חמצון. מחקר זה הוכיח שהתהליך של צמחי מרפא סיניים מסורתיים עשוי לשנות את המרכיבים הכימיים שלהם ולהשפיע על הפעילות הביולוגית שלהם. זה גם נתמך כי מוצרי גלם ומוצרים מעובדים נרשמו באופן שונה במרפאה.

זמינות נתונים

הנתונים המשמשים לתמיכה בממצאי מחקר זה זמינים מהמחבר המקביל לפי בקשה.

ניגוד עניינים

המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד עניינים.

תרומות מחברים

יינג ג'אנג וסונג יאנג תכננו את הניסויים. Ying Zhang, Yuewu Wang ו- Yunfeng Xiao ערכו את איסוף והכנת הדגימות. יינג ג'אנג ניתח את הנתונים וניסח את המאמר. Xiangri Li ו- Xiaoqin Wang היו אחראים על פיקוח הלימודים. כל המחברים השתתפו בכתיבה ובמתן משוב על המאמר. כל המחברים קראו ואישרו את העבודה הסופית.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהליכי העיבוד לפרוסות מוכנות של סמים גולמיים סיניים (מס' YP-PZ-2014). תודה מיוחדת ל- Wenjia Qu ו- Tianying Jia על עזרתם הרבה באיסוף שלCistanche deserticola.

הפניות

1. Y. Jiang ו-P.-F. טו, "ניתוח של מרכיבים כימיים במינים של Cistanche," Journal of Chromatography A, vol. 1216, מס' 11, עמ' 1970–1979, 2009.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

2. W. Zhao, H. Yan, Z.-Y. ליאנג, Y.-J. ג'אנג, ו-X.-Q. Jiao, "ניתוח מבני של SPA פוליסכריד מסיס במים מבודד מהגבעול שלCistanche deserticolaמא," כתב עת כימי של אוניברסיטאות סיניות, כרך 26, מס' 3, עמ' 461–463, 2005.

צפה ב: Google Scholar

3. Q. Dong, J. Yao, J.-N. פאנג, וק. דינג, "אפיון מבני ופעילות אימונולוגית של שני פוליסכרידים הניתנים למיצוי מים קרים מCistanche deserticolaYC Ma," Carbohydrate Research, כרך 342, מס' 10, עמ' 1343–1349, 2007.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

4. X.-M. וו ו-פ.-פ. טו, "בידוד ואפיון של -(1→6)-גלוקנים מCistanche deserticola" Journal of Asian Natural Products Research, כרך 7, מס' 6, עמ' 823–828, 2005.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

5. B. Košíková, A. Ebringerova, and R. Naran, "אפיון של שברי ליגנין-פחמימות מבודדים מטפיל העץCistanche deserticolaYC Ma." Holzforschung, כרך 53, מס' 1, עמ' 33–38, 1999.

צפה ב: Google Scholar

6. G. Sheng, X. Pu, L. Lei, P. Tu ו-C. Li, "Tubuloside B מ- Cistanche Salsa מציל את תאי העצב PC12 מ-1-מתיל-4- המושרה על ידי יון פנילפירידיניום אפופטוזיס ולחץ חמצוני," Planta Medica, vol. 68, לא. 11, עמ' 966–970, 2002.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

7. M. Deng, J.-Y. ז'או, X.-D. Ju, P.-F. טו, י' ג'יאנג וז'-ב. לי, "השפעה מגינה של טובולוזיד B על אפופטוזיס המושרה על ידי TNF אלפא בתאי עצב," Acta Pharmacologica Sinica, vol. 25, לא. 10, עמ' 1276–1284, 2004.

צפה ב: Google Scholar

8. X. Geng, L. Song, X. Pu ו-P. Tu, "השפעות נוירו-הגנה של גליקוזידים פנילתנואידים מסלסה Cistanches נגד 1-מתיל-4-פניל-1,2,3 ,6-רעילות דופמינרגית הנגרמת על ידי טטרה-הידרופירידין (MPTP) בעכברי C57," Biological & Pharmaceutical Bulletin, vol. 27, לא. 6, עמ' 797–801, 2004.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

9. H. Chen, FC Jing, CL Li, PF Tu, QS Zheng ו-ZH Wang, "Echinacoside מונע מהרמות החוץ-תאיות הסטריאטליות של נוירוטרנסמיטורים מונואמינים מפחתה בחולדות 6-נגע הידרוקסי-דופמין," Journal of Ethnopharmacology, vol. . 114, מס'. 3, עמ' 285–289, 2007.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

10 J. Pan, C. Yuan, C. Lin, Z. Jia, and R. Zheng, "פעילויות פרמקולוגיות ומנגנונים של גליקוזידים טבעיים של פנילפרופנואידים," Die Pharmazie, vol. 58, לא. 11, עמ' 767–775, 2003.

צפה ב: Google Scholar

11. G. Fu, H. Pang ו-YH Wong, "גליקוזידים פנילתנואידים המתרחשים באופן טבעי: מובילים פוטנציאליים לטיפולים חדשים", Current Medicinal Chemistry, vol. 15, לא. 25, עמ' 2592–2613, 2008.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

12. X.-W. וואנג, X.-F. וואנג, ול.-י. וו, "שיפור הזיכרון של עכברים של גליקוזידים פנילתנואידים שלCistanche deserticola," עלון פרמקולוגי סיני, מס' 19, עמ' 41-42, 2002.

צפה ב: Google Scholar

13. J.-X. Xie ו-C.-F. וו, "השפעה של תמצית אתנולית שלCistanche deserticolaעל התוכן של נוירוטרנסמיטורים מונואמין במוח של חולדה", סינית מסורתית ותרופות צמחיות, מס' 24, עמ' 417–419, 1993.

צפה ב: Google Scholar

14. H. Wu ו-C.-J. Hu, Discipline Process Medicine, People's Medical Publishing House, בייג'ינג, סין, 2012.

15. ZZ Zhao, ZT Liang, K. Chan וחב', "נושא ייחודי בסטנדרטיזציה של חומרי רפואה סינית: עיבוד," Planta Medica, vol. 76, לא. 17, עמ' 1975–1986, 2010.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

16. ועדת התרופות הסינית, פרמקופיה של הרפובליקה העממית של סין 2015, כרך. IV, פרמקופיה של הרפובליקה העממית של סין, בייג'ינג, סין, 2015.

17. י.-מ. Chen, Primer מאיר עיניים של Materia Medical, Traditional Chinese Medicine Press Press, בייג'ינג, סין, 2009.

18. ב.-ר. לי וי.-סי. היא, "השפעות של תרופות מחזקות כליות על ציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-גונדה (HPG), Journal of Traditional Chinese Medicine, no. 7, עמ' 63–65, 1984.

צפה ב: Google Scholar

19. M. Chen, L. Zhao, ו-W. Jia, "מחקר מטאבונומי על הפרופילים הביוכימיים של מודל בעלי חיים המושרה על ידי הידרוקורטיזון," Journal of Proteome Research, vol. 4, לא. 6, עמ' 2391–2396, 2005.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

20. ש' חן ונ'-י. Yi, "המודלים והתרופות של בעלי החיים לחוסר Yin ו-Yang-Deficiency," במתודולוגיה ניסויית של מחקר פרמקולוגי ברפואה סינית מסורתית, הוצאת People's Health, בייג'ינג, סין, 1993.

צפה ב: Google Scholar

21. ז.-ג. מא, ז.-ל. Yang, P. Li, ו-C.-H. Li, "קביעה סימולטנית של שמונה גליקוזידים פנילאתנואידים במינים שונים מהסוג Cistanche על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים," Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, vol. 31, לא. 18, עמ' 2838–2850, 2008.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

22. Z. Liu, Z. Chao, Y. Liu, Z. Song, ו-A. Lu, "תגובת Maillard מעורבת בתהליך האידוי של שורש Polygonum multiflorum," Planta Medica, vol. 75, לא. 1, עמ' 84–88, 2009.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

23. W.-T. Chang, YH Choi, R. Van Der Heijden, et al., "עיבוד מסורתי משפיע מאוד על הרכב המטבוליטים על ידי הידרוליזה בשורשי Rehmannia glutinosa," Chemical & Pharmaceutical Bulletin, vol. 59, לא. 5, עמ' 546–552, 2011.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

24. Y. Jin, Y.-J. קים, J.-N. Jeon וחב', "השפעה של ג'ינסנג לבן, אדום ושחור על תכונות פיזיקוכימיות וג'ינסנוזידים," Plant Foods for Human Nutrition, vol. 70, לא. 2, עמ' 141–145, 2015.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

25. T. Wang, X.-Y. ג'אנג, ו-W.-Y. שי,"Cistanche deserticolaYC Ma, 'Desert Ginseng': A review," American Journal of Chinese Medicine, כרך 40, מס' 6, עמ' 1123–1141, 2012.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

26. ש.-י. נאם, ח.-י. קים, מ.-ס. Yoou וחב', "השפעות אנטי דלקתיות של isoacteoside מ-Abeliophyllum distichum," Immunopharmacology and Immunotoxicology, vol. 37, לא. 3, עמ' 258–264, 2015.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

27. S. Chae, JS Kim, KA Kang, et al., "פעילות נוגדת חמצון של isoacteoside מ- Clerodendron trichotomum," Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. Current Issues, vol. 68, לא. 5, עמ' 389–400, 2005.

צפה ב: אתר מוציא לאור|Google Scholar

מתוך: רפואה משלימה ואלטרנטיבית מבוססת ראיות / 2019 / מאמר

כרך 2019 |מזהה מאמר 2167947|https://doi.org/10.1155/2019/2167947