שיטות הגילוי של מחזור חיצוני PD-L1

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ וואטסאפ: 008618081934791

עדיין חסרות שיטות מקובלות ומיינסטרים לזיהוי של PD-L1 אקסוזומלי במחזור. ניתן להשתמש בשיטות מסורתיות לזיהוי אקסוזומים כגון בדיקה חיסונית הקשורה לאנזים (ELISA) וניתוח זרימה כדי לזהות PD-L1 באקסוזומים במחזור הדם, ו- ELISA היא כיום השיטה הנפוצה ביותר. שיטת ELISA יכולה לזהות באופן כמותי את התוכן של PD-L1 באקסוזומים במחזור והיא קלה לתפעול. ניתן להשתמש בציטומטריית זרימה כדי לזהות באופן כמותי PD-L1 אקסוזומלי במחזור בדגימות גדולות, אך היא דורשת ציוד זיהוי גבוה. עם המחקר המעמיק על אקסוזומים, שיטות הגילוי של חלבונים אקסוזומליים וחומצות גרעין מועשרות ומפותחות גם הן, וכמה שיטות חדשות הוכנסו לתחום זיהוי PD-L1 באקסוזומים במחזור הדם (איור).

איתור שלבמחזוראקסוזומליPD-L1

1. PCR דיגיטלי

בשל הכמות הקטנה של חומצת גרעין הכלולה באקסוזומים, קשה לשיטות זיהוי קונבנציונליות לזהות במדויק את מספרי העתקת הגנים שלהם. טכנולוגיית PCR דיגיטלית היא שיטה לזיהוי חומצות גרעין עם רגישות גבוהה במיוחד וכימות מוחלט. הרגישות שלו יכולה להגיע לרמה של מולקולה של חומצת גרעין אחת, ולכן יש לו יתרונות בזיהוי תכולת חומצות הגרעין של אקסוזומים. החוקרים השתמשו בטכנולוגיית PCR דיגיטלית כדי לנתח באופן מדויק באופן כמותי את מספר העותק של PD-L1 mRNA באקסוזומים של פלזמה של חולים עם מלנומה וסרטן ריאה של תאים לא קטנים, וחשפו את הקשר בין מספר העותקים של PD-L1 mRNA של פלזמה לבין מתאם אנטי-PD1 בין השפעות הטיפול. ההקדמה של טכנולוגיית PCR דיגיטלית שיפרה באופן משמעותי את יכולת הגילוי של PD-L1 mRNA אקסוזומלי, שהוא בעל משמעות רבה למחקר של PD-L1 אקסוזומלי. עם זאת, ייתכנו חוסר עקביות בין התוכן של mRNA PD-L1 exosomal לבין הביטוי של חלבון PD-L1. לכן, הגילוי של mRNA PD-L1 חיצוני לבדו עשוי להיות בעל פגמים מסוימים, הדורשים מחקר והבהרה נוספים.

ציסטנצ'ה מדברית אנטי-סרטנית נהנית מתמצית ציסטנצ'ה

2. אליסה

ELISA היא שיטת ניתוח אימונולוגית מסורתית, המשמשת לעתים קרובות לאיתור חלבונים מולקולריים קטנים בפלזמה או במדיום תרבית. יש לו רגישות גבוהה וניתן לנתח אותו באופן כמותי. ELISA יכול לשמש גם לזיהוי חלבון PD-L1 אקסוזומלי ויכול להשיג זיהוי כמותי של קבוצות גדולות של דגימות. ערכת זיהוי החלבון PD-L1 המבוססת על העיקרון של שיטת ELISA יושמה גם על זיהוי כמותי של חלבון PD-L1 אקסוזומלי בפלזמה. Chen et al. בנו מערכת גילוי חלבונים PD-L1 אקסוזומלית המבוססת על העיקרון של ELISA, ששימשה לזיהוי חלבון PD-L1 אקסוזומלי שמקורו במדיום תרבית תאים או בפלזמה. טווח הגילוי הליניארי היה 0.2-12.0 ננוגרם/מ"ל. ELISA היא שיטה טובה לזיהוי חלבון PD-L1 אקסוזומלי, שקל לזהותו באופן כמותי ובעל יכולת חזרה טובה. עם זאת, בשל נוכחות של חלבון PD-L1 חינם בפלזמה, זה יפריע לדיוק שלה. לכן, שיטה זו מזהה את זרימת הדם. עדיין יש לחקור עוד יותר את הרגישות והספציפיות של חלבון PD-L1 אקסוזומלי.

שורש הרבה ציסטנצ'האנטי-סרטן:

3. שיטת ניתוח זרימה

ציטומטריית זרימה משמשת לעתים קרובות כדי להקליד ולספור תאים או חלקיקים ביולוגיים אחרים המרחפים בנוזל, ולכן שיטה זו הוכנסה גם לגילוי וספירה של אקסוזומים. THEODORAKIS et al. השתמשו תחילה בכרומטוגרפיה כדי להפריד בתחילה אקסוזומים בפלזמה של חולי סרטן ראש וצוואר ולאחר מכן השתמשו בניתוח זרימה כדי לזהות ולספור אקסוזומים חיוביים ל-PD-L1. ביטוי החלבון PD-L1 התבטא בעוצמת הפלואורסצנציה. התוצאות מראות כי לשיטה יש יכולת שכפול טובה באיתור חלבון PD-L1 אקסוזומלי, והשונות התוך-אישית שלה היא 7% כאשר מתבצעות בדיקות מקבילות מרובות על דגימת מטופל אחת. יחד עם זאת, על מנת לאמת את דיוק השיטה, החוקרים השתמשו בניתוח פלואורסצנטי קונפוקלי כשיטת הייחוס לזיהוי החלבון PD-L1 האקסוזומלי. שלוש דגימות נבדקו במקביל, והתוצאות הושוו, ונמצא כי התוצאות של ציטומטריית זרימה וניתוח פלואורסצנטי קונפוקלי היו עקביות מאוד, מה שמצביע על כך שציטומטריית זרימה הייתה שיטה מדויקת לניתוח כמותי של PD-L1 אקסוזומלי. בנוסף, LUX et al. גם זיהו בהצלחה את הביטוי של חלבוני PD-L1 ו- c-Met אקסוזומליים בסרום של חולי סרטן הלבלב על ידי ציטומטריה של זרימה, אך יש לחקור עוד יותר את הביצועים של שיטת הגילוי. נכון לעכשיו, הושקו גם מנתחי זרימה המשמשים במיוחד לזיהוי אקסוזומים, כגון מנתח הננו-זרימה האולטרה-רגיש של Apogee, המתאים יותר לזיהוי חלבוני אקסוזומים מאשר מנתחי זרימה מסורתיים.

היתרון של תוסף תמצית cistanche tubulosa: אנטי גידול וסרטן

4. טכנולוגיית פיזור ראמאן משופרת על פני השטח

פיזור ראמאן משופר על פני השטח (SERS) היא טכניקת ספקטרוסקופיית טביעות אצבע רגישה ביותר שנעשה בה שימוש נרחב בתחומים ביו-רפואיים. נכון לעכשיו, חוקרים השתמשו בטכנולוגיית SERS כדי לזהות חלבון PD-L1 אקסוזומלי. החוקרים השתמשו תחילה בחרוזים מגנטיים שעברו שינוי TiO2 כדי לאקסוזומים של סופחים בפלזמה, ולאחר מכן השתמשו בבדיקות SERS המקושרות לנוגדני PD-L1 כדי לשנות ננו-חלקיקי זהב, ולאחר מכן לדגום את דגימות האקסוזומים עם ננו-חלקיקי זהב. הוא יוצר מבנה מורכב של ננו-חלקיקי חרוז-אקסוזום-זהב מגנטי, ולבסוף משתמש בשדה מגנטי כדי להעשיר ולהפריד את המתחם, ולאחר מכן מניח על ספקטרומטר ראמאן קונפוקלי לייזר לגילוי, כדי לממש את הגילוי של אקסוזומים חיוביים PD-L1. זיהוי תוכן הגוף. לשיטה זו יש רגישות גבוהה לזיהוי, ומגבלת הגילוי הנמוכה ביותר שלה יכולה להגיע לפלזמה אחת של PD-L1+ אקסוזום/μL. בנוסף, החוקרים השתמשו בשיטה זו כדי לזהות קבוצה של דגימות עם ריכוזים שונים. התוצאות הראו כי עוצמת ה-SERS קשורה באופן ליניארי ללוגריתם של ריכוז דגימות האקסוזומים, מה שמצביע על כך שלשיטת הגילוי יש יציבות טובה וניתן להשתמש בה ישירות בפלזמה. זהה אקסוזומים ללא שלב בידוד אקסוזומים נוסף. נכון לעכשיו, ישנם מעט מחקרים על היישום הישיר של טכנולוגיית SERS לזיהוי של חלבון PD-L1 exosomal, אך המחקר על היישום של טכנולוגיית SERS לזיהוי של אקסוזומים אחרים בוצע, אשר יש גם התייחסות חשובה לזיהוי של ערך חלבון PD-L1 exosomal.

מצב ציסטנצ'ה מדברי הולך וגובר

5. שיטת הולמס-אקסו-פD-L1

שיטת HOLMES-ExoPD-L1 היא שיטת זיהוי חדשנית של חלבון PD-L1 אקסוזומלי. בשיטה זו תוכנן אפטמר MJ5C חדש המכוון לחלבון PD-L1, שיכול לקשור ביעילות חלבון PD-L1 על קרום האקסוזום ואינו מופרע על ידי גליקוזילציה של חלבון PD-L1. בשיטה זו, האפטמר והאקסוזומים MJ5C המסומנים באופן פלואורסצנטי הודגמו לראשונה יחד בנימים דקים כדי להיקשר זה לזה, והלייזר האינפרא אדום התמקד בנימים הדקים כדי ליצור שיפוע טמפרטורה בקנה מידה של מיקרון. קצבי התרמופורזה של קומפלקסי האפטמר MJ5C החופשיים וקומפלקסי האפטמר MJ5C האקסוזומליים היו שונים באופן משמעותי, והידלדלות התרמופורטית של האפטמר החופשי הייתה מהירה יותר מזו של קומפלקס האקסוזום-אפטמר. מופרדים. לכן, תחת הפעולה של אור עירור, התוכן של חלבון PD-L1 exosomal יכול להיקבע על ידי זיהוי עוצמת הפלואורסצנציה של aptamers מסומן פלואורסצנטי. לשיטה רגישות גבוהה ומגבלת זיהוי של 17.6 pg/mL. בנוסף, יש לו גם את היתרונות של פחות נפח מדגם וזמן זיהוי קצר. זוהי שיטה מקורית ביותר לזיהוי חלבון PD-L1 אקסוזומלי, החשוב מאוד לפיתוח חדש שיטת זיהוי החלבון PD-L1 האקסוזומלית בעלת ערך מאיר עיניים.

אנטי גידול: תוסף ציסטנצ'ה

ל- Exosomal PD-L1 יש סיכויי יישום רחבים בתחום האימונותרפיה של גידולים ממאירים והוא הפך לאחת הנקודות החמות בתחום חקר האקסוזומים. בהשוואה לזיהוי של ביטוי PD-L1 רקמה, קל יותר להשיג דגימות PD-L1 אקסוזומלי במחזור הדם ולבצע זיהוי בזמן אמת, תוך הימנעות מבעיית ההטרוגניות של הרקמות הנגרמת על ידי דגימה פתולוגית; PD-L1 אקסוזומלי מוביל גם לחסינות הגידול. זהו גורם חשוב לבריחה והוא קשור להתקדמות גידולים ממאירים, ועשוי להפוך לאינדיקטור חשוב להערכת מחלות וחיזוי פרוגנוזה. בנוסף, רמות PD-L1 אקסוזומליות בפלזמה צפויות לשמש גם כדי לסנן חולים המתאימים לאימונותרפיה נגד PD-L1 ולחזות את תגובתם לטיפול. עם זאת, עדיין חסרות שיטות מוכרות ויעילות לזיהוי של אקסוזומים במחזור PD-L1. יש צורך ליצור אקסוזום מחזור אידיאלי עם הפרדה פשוטה או ללא הפרדה, פחות ביקוש לדוגמה, רגישות גבוהה, חזרתיות טובה ואותות זיהוי פחות רגישים. שיטה לזיהוי PD-L1 in vivo. שיטת הגילוי של הפצת PD-L1 אקסוזומלי עדיין זקוקה למחקר מעמיק נוסף, אך ההערכה היא כי עם פיתוח ויישום של שיטות גילוי חדשות בעתיד, מחזור PD-L1 אקסוזומלי יוכל להנחות טוב יותר את האימונותרפיה נגד PD1 וישמש לאבחון וטיפול בגידולים ממאירים. לשחק תפקיד חשוב יותר.