צמחים תאילנדים עם רמות גבוהות של נוגדי חמצון, פעילות ניקוי רדיקלים חופשיים, פעילות אנטי-טירוזינאז ואנטי-קולגנאז

איש קשר:

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Moragot Chatatikun1 ו-Anchalee Chiabchalard2

תַקצִיר

רקע כללי:קרינה אולטרה סגולה מאור השמש גורמת לייצור יתר של מיני חמצן תגובתיים (ROS) וכתוצאה מכך להזדקנות העור ולהפרעות היפרפיגמנטציה. תרכובות הלבנה ונוגדות קמטים חדשניות ממוצרים טבעיים הפכו לאחרונה לעניין הולך וגובר. מטרת מחקר זה הייתה למצוא מוצרים המפחיתים את ה-ROS ב-14 תמציות צמחים תאילנדיות.

שיטות:כדי לקבוע סך פנולי ופלבנואידתוֹכֶן,נוגד חמצוןפעילות,אַנְטִיטירוזינאזפעילות, ופעילות נוגדת קולגנאז, השווינו תמציות של 14 צמחים תאילנדים שהוכנו באמצעות ממיסים שונים (אתר נפט, דיכלורומתאן ואתנול).נוגד חמצוןהפעילויות נקבעו על ידי מבחני DPPH ו-ABTS.

תוצאות:התוכן הפנולי הכולל של 14 תמציות הצמחים התאילנדים נמצא ברמות הגבוהות ביותר באתנול ואחריו תמציות דיכלורומתאן ופטרוליום אתר, בהתאמה, בעודפלבנואידתוכן נמצא בדרך כלל בשבריר דיכלורומתאן. פעילות ההשמדה נעה בין 7 ל-99 אחוזי ניקוי כפי שהוערכו על ידי מבחני DPPH ו-ABTS. תמצית עלי האתנול של Ardisia elliptica Thunb. היה בעל תכולת הפנולים הגבוהה ביותר, פעילות נוגדת חמצון ועיכוב קולגן-זין, בעוד Cassia alata (L.) Roxb. לחלץ היה העשיר ביותרפלבנואידתוֹכֶן. מעניין, שלוש תמציות צמחים, שהיו השברים האתנוליים של Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. וסנה אלאטה (ל.) רוקסב. היה גבוהנוגד חמצוןתוכן ופעילות ועיכבו באופן משמעותי את שניהםטירוזינאזוקולגנאז.

סיכום:הממצאים שלנו מראים כי שברי האתנול של Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb. וסנה אלאטה(ל.) רוקסב. מראה הבטחה כמרכיבים פוטנציאליים למוצרים קוסמטיים כגון תרופות נגד קמטים ומוצרי הלבנת עור.

מילות מפתח:Ardisia elliptica Thunb.,נוגד חמצוןתוכן, פעילות ניקוי,אנטי טירוזינאזפעילות, פעילות נוגדת קולגן

פלבנואיד הוא אחד המרכיבים שלcistanche

רקע כללי

קרינה אולטרה סגולה (UVR) מאור השמש היא גורם הסיכון המשמעותי ביותר לסרטן שאינו מלנומה ומלנומסק [1]. חשיפת יתר לאור השמש, בפרט UVA ו-UVB, גורמת לביטוי יתר של מיני חמצן תגובתיים (ROS) אשר פוגעים בשומנים, בחלבונים ובחומצות דיאוקסיריבונוקלאיות. קולגן הוא הבסיס העיקרי של המטריצה ​​החוץ תאית בשכבת הדרמיס של העור. ROS מוגזם מגביר את הביטוי של קולגנאז, פרוטאז שמפרק את הקולגן שעלול לגרום להזדקנות והתקמטות של העור [2]. בנוסף, חשיפה ל-UV גורמת לייצור מלנין וכתוצאה מכך להיפרפיגמנטציה.טירוזינאזהוא האנזים המפתח ליצירת פיגמנטציה של העור. ראשית, L-tyrosine עובר הידרוקסיל ליצירת 3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) על ידי טירוזינאז. לאחר מכן, L-DOPA מחומצן ל-DOPA quinone על ידי טירוזינאז. DOPA quinone הופך עוד יותר ל-DOPAchrome שניתן להמיר ל-5,6-dihydroxyindole(DHI) או 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid (DHICA)[3]. הטיפולים הנוכחיים להזדקנות העור כוללים הידרוקסילאציד לקילוף שכבת האפידרמיס, רטינואידים להפחתת עור מחוספס וחומר מילוי עור הניתן על ידי הזרקת קולגן לעור. עם זאת, לטיפולים אלה יש השפעות שליליות, כגון היפרפיגמנטציה, דלקת, ציטוטוקסיות, גירוי וזיהום חיידקי [4]. חומר הלבנת העור הפופולרי ביותר הוא הידרוקינון, המעכבטירוזינאזאבל תופעות הלוואי שלו כוללות דרמטיטיס, בצקת, תגובות אלרגיות ואוכרונוזה [5]. לאחרונה, החוקרים התמקדו במוצרים טבעיים המעכבים ROS המושרה על ידי UV, מדכא אנזימים ומפחיתים את היווצרות המלנין כחלופות לטיפולים עכשוויים. לדוגמה, תרכובות פיטו פעילות, כגון ארבוטין, אלוזין, חומצה גנטיזית,פלבנואידים, הספרידין, ליקוריץ, ניאצינמיד, נגזרות שמרים ופוליפנולים, מעכבים מלנוגנזה ללא טומלנוציטים ציטוטוקסיות [6]. לפיכך, צמחים עשויים להפחית היווצרות קמטים והיפרפיגמנטציה הנגרמת מחשיפה לאור השמש.

מטרת מחקר זה הייתה לנתח 14 צמחים תאילנדים שחולצו עם שלושה ממסים שונים על הפוטנציאל שלהם כמרכיבים נגד קמטים והלבנת עור. מספר הנוגד חמצוןפנולים ופלבנואידיםהוערך עבור מתאם עם פעולות ניקוי של רדיקלים חופשיים, ואנטי-קולגנאז ואנטי טירוזינאזפעילויות. התמציות היונוגדי חמצוןשחספו רדיקלים חופשיים ועיכבו אנזימים המעורבים ביצירת קמטים ופיגמנטים. אנו מזהים את Ardisia elliptica Thunb.,Annona squamosa L., ו-Senna alata (L.) Roxb הוא מועמד מבטיח מאוד לשימוש במוצרי קוסמטיקה.

פיתוח גוף cistanche

שיטות

כימיקלים וריאגנטים

מגיב הפנול של Folin Ciocalteu, נתרן קרבונט (Na2CO3), חומצה גאלית, קוורצטין, 10 אחוז אלומיניום כלוריד, אתנול, 2, 2-דיפניל-1- פיקרילהידרזיל (DPPH), חומצה אסקורבית, 2,2'-אזינו- bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid)(ABTS), אשלגן פרסולפט, חומצה קוג'ית, טירוזינאז פטריות (EC 1.14.18.1), 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine(L- DOPA), N-[3-(2-furyl) acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), קולגנאז מ-Clostridium histolyticum (EC3.4.24.3), אפיגאלוקאצ'ין גלאט (EGCG) , נתרן כלורי, סידן כלוריד ודימתיל סולפוקסיד (DMSO) נרכשו מ-Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO, ארה"ב). אתר נפט, דיכלורומתאן, אתנול מוחלט, מתנול, דינתרן מימן פוספט ונתרן דימימן פוספט נרכשו מ- Merck (Darmstadt, גרמניה). כל הכימיקלים והריאגנטים היו בדרגות אנליטיות.

חומרי צמחים ומיצוי

13 מינים של עלים תאילנדים נאספו מגן העשבים של הנסיכה סירנדהורן, מחוז ראיונג, תאילנד. המנגוסטינים הושגו ממחוז צ'נטאבורי, תאילנד. צמחים אלה אושרו והופקדו בצמח הרבריום, המחלקה לבוטניקה, הפקולטה למדע, אוניברסיטת צ'וללונגקורן, תאילנד. השמות המדעיים, מספרי השוברים וחלקי הצמח מוצגים בטבלה 1. הצמחים חולצו באמצעות מנגנון Soxhlet. בקיצור, 10 גרם מהצמח המיובש חולצו בנפרד עם נפט, דיכלורומתאן ואתנול. ממסים הוסרו באמצעות מאייד סיבובי ואקום תחת לחץ מופחת באמצעות רכז MiVac Quattro. דגימות מרוכזות הומסו ב-DMSO ב-100 מ"ג/מ"ל ואוחסנו ב--20 מעלות עד לשימוש. התשואות של תמציות יבשות מוצגות בטבלה 1 כאחוז משקל/משקל חומרים צמחיים יבשים.

קביעת התוכן הפנולי הכולל

התוכן הפנולי הכולל של תמציות צמחים הוערך בשיטת Folin-Ciocalteu [7]. בקצרה, 50 ul של תמציות ב-1 mg/ml במים מזוקקים עורבבו עם 50 ul של 10 אחוז מגיב Folin-Ciocalteu ו-50 ul של 0.1 M Na2CO3. תערובת התגובה הודגרה למשך שעה בטמפרטורת החדר בחושך. ספיגה ב-750 ננומטר נמדדה עם קורא צלחות (Biotek, ארה"ב). חומצה גאלית מ-1.56 עד 100 ug/ml שימשה כסטנדרט. התוכן הפנולי הכולל של התמציות מתבטא כמ"ג שווה ערך לחומצה גאלית (GAE) לגרם חומר צמחי יבש. כל הדגימות נותחו בשלושה עותקים.

קביעת תכולת פלבנואידים

סך הכלפלבנואידהתוכן (TFC) נקבע באמצעות בדיקה קולורימטרית של אלומיניום כלוריד (AlCl3) [7]. בקצרה, 50 ul של התמציות ב-1 mg/ml ב-80% אתנול היו מעורבבים עם 50 ul של תמיסת 2% AlCl3 בבאר של לוח 96. הצלחת הודגרה למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. הספיגה ב-435 ננומטר נמדדה באמצעות קורא מיקרו-לוחיות. קוורצטין מ-1.56 עד 100 ug/ml שימש כסטנדרט. תכולת הפלבנואידים הכוללת מתבטאת כמ"ג מקבילי קוורצטין (QE) לגרם חומר צמחי יבש. דגימות נותחו בשלושה עותקים.

פעילות ניקוי DPPH

בדיקת DPPH scavenging activity בוצעה כמתואר על ידי Yamasaki et al. [8]. תמיסת DPPH הוכנה טריה לכל בדיקה. בקצרה, תמציות של 100 ug/ml או 1.56 עד 100 ug/ml סטנדרטי של חומצה אסקורבית במתנול מוחלט עורבבו עם 180 ul של ריאגנט DPPH בצלחת 96 בארות. תערובת התגובה הודגרה למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר בחושך. לאחר מכן, הספיגה ב-517 ננומטר נמדדה עם קורא מיקרו-לוחיות. הניסויים בוצעו בשלושה עותקים. הספיגה ב-517 ננומטר של DPPH הייתה 0.70 ± 0.02 וירידה בספיגה נמדדה פעילות ניקוי. יכולת ההשמדה חושבה כפעילות הסרה (אחוז)=100 אחוז × [(훥A517 של השליטה - 훥A517 של המדגם)/ 훥A517 של הביקורת]. אחוזי הפעילות השולטת DPPH של התמציות הושוו לאלו של חומצה אסקורבית, והם מבוטאים כ-mgvitamin C שווה ערךנוגד חמצוןקיבולת (VCEAC) לכל חומר צמחי יבש. IC50 נקבע על פי גרף של אחוז עיכוב נגד ריכוז (מ-0.78-100 ug/ml מכל תמצית).

פעילות ניקוי ABTS

פעילות ניקוי רדיקלים חופשיים של ABTS בוצעה כפי שתואר בעבר [9]. מגיב העבודה ABTS• פלוס הוכן על ידי ערבוב של 7 מ"מ ABTS• ו-2.45 מ"מ אשלגן פרסולפט ביחס נפח/נפח של 8:12. תמיסת העבודה נשמרה במשך 16 עד 18 שעות בטמפרטורת החדר בחושך. תמיסת ABTS• plus דוללה באתנול מוחלט כדי לתת ספיגה ב-734 ננומטר של 0.70 ± 0.02. לאחר מכן, 100 ul/ml תמציות או 1.56 עד 100 ug/ml חומצה אסקורבית סטנדרטית באתנול מוחלט נוספו ל-180 ul של ABTS• בתוספת ריאגנט עובד בבארות של צלחת 96 well. הצלחת הודגרה למשך 45 דקות בטמפרטורת החדר, והספיגה נמדדה ב-734 ננומטר. ניסויים בוצעו בשלושה עותקים. יכולת ההסרה חושבה כפעילות הסרה (אחוז)=100 × [(훥A734 של הביקורת - 훥A734 של המדגם)/ 훥A734 של הביקורת]. אחוזי פעילות ניקוי ה-ABTS של התמציות הושוו לאלה של חומצה אסקורבית, ומוצגים כשווה ערך לוויטמין Cנוגד חמצוןקיבולת (VCEAC) לגרם חומר צמחי יבש. IC50 נקבע על פי גרף של אחוז עיכוב נגד ריכוז (מ-15.62-1000 ug/ml מכל תמצית).

קביעת עיכוב טירוזינאז פטריות

שיטת הדופאכרום בוצעה בשינוי קל [10]. בקצרה, 20 ul של תמציות צמחים או DMSO (כבקרה), 20 ul של 203.3 יחידות/מ"ל טירוזינאז פטריות ו-140 ul של חיץ פוספט 20 mM atpH 6.8 הודגרו מראש למשך 10 דקות ב-25 מעלות. לאחר הדגירה המוקדמת, נוספו 20 ul של 2.5 mM L-DOPA ואז הדגימות הודגרו למשך 20 דקות נוספות ב-25 מעלות. כמות הדופאכרום נמדדה ב-492 ננומטר עם קורא מיקרו-לוחים. חומצה קוג'ית (KA) שימשה בקרה חיובית לעיכוב. אחוז העיכוב של פעילות טירוזינאז (אחוז) היה מפורשטירוזינאזעיכוב {{0}} × [(훥A492 של שליטה –훥A492 של דגימה)/ 훥A492 של שליטה]. הריכוזים הסופיים של התמציות והחומצה הקוג'ית היו 1 ו-0.1 מ"ג/מ"ל, בהתאמה. IC50 נקבע על פי גרף של אחוזיםטירוזינאזעיכוב נגד ריכוז (מ-15.62-1000 ug/ml מכל תמצית).

פיתוח גוף cistanche

קביעת עיכוב קולגנאז

עיכוב קולגנאז נקבע על ידי שיטה שתוארה בעבר [11]. בקצרה, 40 ul של קולגנאז מ-Clostridium histolyticum ב-0.25 יחידות/מ"ל במאגר 50 mM Tricine המכיל 10 mM CaCl2 ו-400 mM NaCl, ו-10 ul של 50 mM Tricine buffer היו מעורבבים עם 10 ul של התמציות או DMSO (כשליטה). Epigallocatechin gallate (EGCG) שימש כביקורת חיובית. לאחר 15-דקות דגירה בטמפרטורת החדר, נוספו 50 ul של N-[3-(2-furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA). הספיגה נמדדה ב-340 ננומטר באופן מיידי ובמשך 20 דקות. פעילות האנזים הוערכה על ידי ירידה בספיגה במהלך מרווח הזמן. אחוז העיכוב של פעילות הקולגנאז חושב כ-100 × [(פעילות בקרה - פעילות של מדגם)/ פעילות בקרה]. הריכוזים הסופיים של התמציות והאפיגלוקטצ'ין גלאט היו 1 ו-0.1 מ"ג/מ"ל, בהתאמה. IC50 נקבע על פי גרף של אחוז עיכוב קולגנאז נגד ריכוז (מ-15.62-1000 ug/ml מכל תמצית).

ניתוח סטטיסטי

כל הניסויים בוצעו בשלושה עותקים והתוצאות מבוטאות כממוצע ± שגיאת תקן. קו-יעילות המתאם (R2) ביןנוגד חמצוןהתוכן ופעילויות נוגדות החמצון נקבעו באמצעות תוכנת SigmaPlotversion 12.2. ההבדל בין שני האמצעים הוערך באמצעות מבחן t של הסטודנט. הבדלים נחשבו מובהקים כאשר ערך ה-P היה קטן מ-0.05.

תוצאות

תשואות מיצוי

טבלה 1 מציגה את השמות המדעיים, מספרי השוברים וחלקי הצמחים של 14 הצמחים התאילנדים שבהם נעשה שימוש במחקר זה. אחוז התשואות של התמציות נע בין 0.73 אחוז ל-31.11 אחוזים לפי משקל (טבלה 1). Ardisia elliptica Thunb. היה התשואה הגבוהה ביותר באתר הנפט (19.89 אחוזים) ונתנול תמציות (31.11 אחוזים), ואילו Garcinia mangostanaL. היה אחוז התשואה הגבוה ביותר מיצוי דיכלורומתאן (11.07 אחוז).

תוכן פנולי של 14 צמחים תאילנדים

לכן, תכולת הפנולים הכוללת בצמחים נקבעה בשיטת Folin-Ciocalteu. לתמציות היה טווח רחב במספר הפנולים כפי שמוצג בטבלה 2, והערכים השתנו לפי פי 33- בין התמציות. Ardisiaelliptica Thunb. היה בעל תכולת הפנול הגבוהה ביותר בכל שלושת סוגי התמציות, בעוד שהתוכן הפנולי הנמוך ביותר היה קיים ב-Stemona curtissi Hook. ו. תמצית אתר נפט.

תכולת פלבנואידים של 14 צמחים תאילנדים

בדומה לפנולים, סך הכלפלבנואידהתוכן השתנה במידה ניכרת בין מיני הצמחים, נע בין 2.04 ± 0.16 ל-31.38 ± 0.81 מ"ג QE לגרם חומר יבש (טבלה 2). באופן כללי, מיצוי דיכלורומתאן הניב את התשואה הגבוהה ביותרפלבנואידרמה בהשוואה לממסים האחרים. מכל התמציות, כמות הפלבנואידים הגבוהה ביותר נמצאה בתמצית אתנול מעלי Senna alata (L.) Roxb (31.38 ± 0.81 מ"ג QE perg חומר יבש). מצד שני, Ardisia elliptica Thunb.(23.14 ± 1.10 מ"ג QE לגרם חומר יבש). היה בעל תכולת הפלבנואידים העשירים ביותר בשבריר הדיכלורומתאן. יתר על כן, Ipomoea pes-caprae (L.) R.br. היה בעל תכולת הפלבנואידים הגבוהה ביותר מבין תמציות אתר הנפט (27.48 ± 2.59 מ"ג QE לגרם חומר יבש). רמת הפלבנואידים הנמוכה ביותר שניתן לזהות הייתה בתמצית האתנול מ- Daturametel L. בניגוד מוחלט,פלבנואידיםלא נמצאו בתמציות אתר נפט ודיכלורומתאן מStmona curtisii Hook.f., ובתמציות אתר נפט מסטרבלוס אספר לור. ו-Phyllanthus acidus (L.) Skeels. תכולת הפלבנואידים הכוללת לא הייתה בקורלציה עם התוכן הפנולי הכולל (R2=0.0284, איור 1a).

פעילות סילוק רדיקלית של DPPH בתמציות שונות מ-14 צמחים תאילנדים

פעילות ניקוי רדיקלים חופשיים באמצעות DPPH כאינדיקטור היא בסיסנוגד חמצוןבדיקה [12]. כפי שמוצג בטבלה 3, פעילויות הניקוי של התמציות השתנו מאוד, ונעו בין 7.11 ± 0.59 אחוזים ל-96.17 ± 0.05 אחוזים. תמצית האתנול של Ardisia ellipticaThunb הייתה בעלת פעילות הניקוי הגבוהה ביותר ב-96 אחוזים. יתר על כן, הבא החזק ביותרנוגד חמצון activities (>90 אחוזים) נצפו בשברי אתנול מ-Stemonacurtisii Hook.f., Annona squamosa L., Phyllanthus acidus(L.) Skeels. ו-Garcinia mangostana Linn. במונחים של הממסים האחרים, ל- Ardisia elliptica Thunb הייתה גם פעילות הניקוי העשירה ביותר מבין חלקי אתר הנפט, ול-Garcinia mangostana L. הייתה הפעילות נוגדת החמצון הגבוהה ביותר בשברי הדיכלורומתאן. יכולת ההסרה הנמוכה ביותר זוהתה ב- Croton sublyratus Kurz בשבריר אתר הנפט. לא זוהתה פעילות ניקוי ב-7 תמציות אתר נפט ו-2 תמציות דיכלורומתאן.

פעילות ניקוי רדיקלית של ABTS בתמציות שונות מ-14 צמחים תאילנדים

נוגד חמצוןפעילות של שלבים מימיים ושומנים בצמחים הוערכה גם על ידי בדיקת דה-צבע באמצעות ABTS [13]. שוב, חומצה אסקורבית שימשה כסטנדרטנוגד חמצון. As with the DPPH assay, scavenging activity in the ABTS assay varied greatly among the plant preparations with a similarly broad range from 8.03 ± 0.54% to 99.84 ± 0.07% (Table 4). Furthermore, the next strongest scavenging activities (> 90%) were observed in the same 4 ethanol fractions as shown by the DPPH assay. In addition, no scavenging activity was found in the same 5 petroleum ether extracts. In general, the values obtained with the ABTS assay were higher than the DPPH values. Hence, activity in the ethanol extract from Senna alata (L.) Roxb. was now observed as >90 אחוז, ופעילות סוררת זוהתה בכל תמציות הדיכלורומתאן, ותמציות אתר נפט מ-Anona squamosa L. ו-Ipomoea pes-caprae(L.) R.br. אשר לא זוהה על ידי בדיקת DPPH.

עיכוב פעילות טירוזינאז על ידי תמציות צמחים

היכולת של תרכובות מהצמחים התאילנדים לעכב פטריותטירוזינאזהפעילות הוערכה באמצעות ניסוי אינביטרו עם L-DOPA כמצע. חומצה קוג'ית שימשה כמעכב ידוע וגרמה לעיכוב מקסימלי-אנזימטי של 93.38 ± 1.63 אחוזים. כפי שמוצג בטבלה 5, רק תמציות אתנול עיכבו באופן משמעותי את פעילות טירוזינאז, עם Ardisia elliptica Thunb. ההכנות הן היוצא מן הכלל. חלקי אתר הנפט והדיכלורומתאן של Ardisia elliptica Thunb. עיכב את פעילות טירוזינאז בכ-20 אחוזים. שבריר האתנול מ-Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz (ערך IC 50 של 271.50 ug/ml) היה מעכב טירוזינאז החזק ביותר, ואחריו תמציות אתנול מ-Ardisia ellipticaThunb. ו-Phyllanthus acidus (L.) Skeels. שברי אתנול אחרים הפחיתו משמעותית את הפעילות האנזימטית ביותר מ-20 אחוז (טבלה 5), בעוד שלתמציות הנותרות לא הייתה פעילות מעכבת ניתנת לזיהוי (נתונים לא מוצגים).

עיכוב פעילות קולגנאז על ידי 14 צמחים

תמציות נבדקו עבור פעילות אנטי-קולגנאז באמצעות Clostridium histolyticum collagenase, ו-N-[3-(2-furyl)acryloyl]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) כמצע. Epigallatecatechin gallate הוא מעכב קולגנאז ידוע וירידה בפעילות האנזימטית ב-90.51 ± 2.79 אחוזים. כפי שמוצג בטבלה 5, רק 4 תמציות אתנול הכילו פעילות מעכבת קולגנאז ניתנת לזיהוי. מבין אלה הגורמים לעיכוב, Ardisia elliptica Thunb. (ערך IC 50 של 157.78 ug/ml) הפגין את הרמה הגבוהה ביותר של עיכוב קולגן-זין, ואחריו Annona squamosa L. (ערך IC 50 של 426.67 ug/ml), Senna alata (L.) Roxb. ו- Croton sublyratusKurz בדרגה להזמין. תמציות צמחים אחרות לא עיכבו באופן משמעותי את פעילות הקולגנאז בתנאי התגובה שנוצלו במחקר זה (נתונים לא מוצגים).

דִיוּן

קרינת השמש היא גורם סביבתי משמעותי בפגיעה בעור ויכולה לגרום לסרטן העור [14]. קרינת UV גורמת לתגובה פרו דלקתית, פירוק מטריצה ​​חוץ תאית ונוגד חמצוןדלדול [15, 16]. UV גורם ליצירת מיני חמצן תגובתיים (ROS) המעוררים היפרפיגמנטציה וביטוי קולגנאז [17, 18]. המחקר שלנו חקר 14 צמחים תאילנדים שהופקו בשלושה ממסים שונים על הפוטנציאל שלהם כמרכיבים נגד קמטים והלבנת עור. במחקר זה, השתמשנו באתר נפט, דיכלורומתאן ואתנול למיצוי צמחים באמצעות מנגנון Soxhlet. Ardisia elliptica Thunb. היו בעלי התשואה הגבוהה ביותר בתמציות אתר הנפט והאתנול, ואילו ל-Garcinia mangostana L. הייתה התשואה הגבוהה ביותר ממיצוי דיכלורומתאן. ממיסים אלו הם סדרה של ממיסים אורגניים בעלי קוטביות גוברת. השונות בין אחוזי היבול הייתה תלויה במיני הצמחים, וכנראה שיקפה הבדלים בהרכב הכימי של הצמחים.

פנולים הם הקבוצה הגדולה ביותר של פיטוכימיקלים המצויים בצמחים ויש להם פעילויות ביולוגיות שונות בבעלי חיים, כולל בני אדם [19]. התוכן הפנולי הכולל בצמחים נקבע בשיטת Folin Ciocalteu. בסך הכל, לשבר האתנול היה התוכן הפנולי העשיר ביותר, ואחריו דיכלורומתאן, בעוד שלתר נפט עם קוטביות נמוכה היה התוכן הפנולי הנמוך ביותר בהשוואה לממסים האחרים. במחקר זה, Ardisia elliptica Thunb. היה בעל התוכן הפנולי הגבוה ביותר בכל שלושת סוגי התמציות. במחקרים קודמים, לתמציות עלי dichloromethane של Ardisia elliptica Thunb. יש תוכן פנולי של 101 ± 1.3 מ"ג GAE לכל גרם חומר צמחי יבש, שהוא יותר מהתוכן בתמצית זרעים [20]. יתר על כן, תמצית מתנול של פרי ripeArdisia הכילה 5.64 ± 0.37 גרם GAE לכל 100 גרם תמצית [21]. לפיכך, עלים ופירות של Ardisia ellipticaThunb. בעלי תוכן פנולי גבוה שניתן לחלץ בקלות עם מתנול, דיכלורומתאן ואתנול.

פלבנואידיםהם פיגמנטים בפרחים, עלים, פירות וזרעים. תרכובות אלו הן מטבוליטים משניים של צמחים והן מופצות באופן נרחב בין מיני צמחים [22]. לאחר מכן, תכולת הפלבנואידים בצמחים התאילנדים הוערכה באמצעות הבדיקה הקולורימטרית של אלומיניום כלוריד. התוצאות שלנו הראו כי כמות הפלבנואידים הגבוהה ביותר נמצאה בתמצית האתנול מ-Senna alata (L.) Roxbleaves. במחקר קודם, תכולת פלבנואידים גבוהה נמצאה במים (4.25 מ"ג QE ל-100 גרם) ושברי מתנול (3.97 מ"ג QE ל-100 גרם) של Senna alata (L.) Roxb.[23]. לפיכך, תכשירי Senna alata (L.) Roxb הם בעלי תכולת פלבנואידים גבוהה כשהם מופקים עם ממיסים בעלי קוטביות גבוהה כולל אתנול, מתנול ומים. Ardisiaelliptica Thunb. היה בעל תכולת הפלבנואידים העשירה ביותר בשבריר הדיכלורומתאן. לפרי של צמח זה יש גם תכולת פלבנואידים גבוהה של 36.91 ± 2.37 מ"ג QE לגרם תמצית [24]. לפיכך, הפרי והעלים של Ardisia elliptica Thunb. הם עשירים בפלבנואידים. תכולת הפלבנואידים הכוללת לא הייתה בקורלציה עם התכולה הפנולית הכוללת. למרות זאת,פלבנואידיםבעלי פעילויות ביולוגיות רבות כגון הגנת UVB [25], אנטי דלקתית [26], אנטי רעילות בכבד [27] ואנטי סרטן [28].

פעילות ניקוי רדיקלים חופשיים באמצעות DPPH ו-ABTSassay. במבחן DPPH, DPPH מקבל הידרוגנטום מאנוגד חמצון[29]. מצאנו שתמצית אתנול של Ardisiaelliptica Thunb הייתה בעלת פעילות הניקוי הגבוהה ביותר. חוקרים אחרים דיווחו גם על שברי דיכלורומתאן של עלים וגבעולים של Ardisia elliptica Thunb. יש רמות גבוהות שלנוגד חמצוןפעילות כפי שנקבעה על ידי מבחן DPPH, ומכאן, צמח זה מעניין מאוד לחקור אותו עוד יותר כטיפול צמחי [20]. התמציות מחלק האתנול עם קוטביות גבוהה הראו בבירור טוב יותרנוגד חמצוןפעילות מאשר שברים בעלי קוטביות נמוכה יותר המכילים דיכלורומתאן ואתר נפט. תמציות אתנול הכילו את הרמות הגבוהות ביותר של פעילות ניקוי רדיקלים חופשיים בהשוואה לתמציות האחרות, וכל תמציות האתנול היו פעילות. במבחן ABTS, ABTS מומר להקצנה שלו על ידי הוספת אשלגן פרסולפט. בנוכחות נוגד חמצון, קטיון ה-ABTS התגובתי (או ABTS• plus ) הופך לצורתו הטבעית חסרת הצבע [9]. בהסכמה עם מבחן ה-DPPH, תמציות אתנול הכילו את הרמות הגבוהות ביותר של פעילות השואבת בהשוואה לתמציות אחרות. שוב, פעילויות ההסרה הגבוהות ביותר באתנול, דיכלורומתאן, ואתר נפט היו מאותם צמחים כפי שהוצגו על ידי בדיקת DPPH. התוצאות של מבחני DPPH ו-ABTS היו בקורלציה גבוהה כצפוי (איור 1f).

עם זאת, סך הכלפלבנואידהתוכן של תמציות הצמחים לא היה בקורלציה עם פעילות סורקת רדיקלים חופשיים כפי שזוהתה על ידי מבחן DPPH (איור 1c) או על ידי ABTSassay (איור 1ה). הממצאים שלנו ללא קשר משמעותי ביניהםפלבנואידהתוכן והפעילות השואבת באמצעות מבחן ABTS תואמים לתוצאות של חוקרים אחרים [30]. לעומת זאת, התכולה הפנולית הכוללת של הכנת הצמח הייתה בקורלציה חיובית עם פעילות השואבת שנמדדה על ידי שני המבחנים (איור 1b ו-d) לא הסכמה עם מחקר קודם [31]. בולט, פעילות הניקוי הייתה תלויה בתכולת פנולים ובממסים בעלי קוטביות גבוהה, כגון אתנול ודיכלורומתאן. תוצאות אלו מצביעות על כך שהתוכן הפנולי הוא המרכיב העיקרי בונוגד חמצוןפעילות ב-14 המפעלים התאילנדים.

המלנין, הפיגמנט העיקרי של צבע העור והשיער, מסונתז על ידי מלנוציטים בתוך המלנוזומים. ייצור יתר והצטברות של מלנין בעור עלולים להוביל להפרעות טופיגמנטריות ובעיות אסתטיות. היפרפיגמנטציה מתרחשת באזורים חשופים לשמש בעור [32]. במלנוגנזה,טירוזינאזהוא האנזים המרכזי בשלב מגביל הקצב שבו L-tyrosine עובר הידרוקסילציה ל-L-DOPA, אשר מחומצן עוד יותר ל-DOPAquinone. לאחר מכן, הוא הופך ל-DOPAchrome שהוא מצע לסינתזת מלנין [3]. הורדת רגולציה שלטירוזינאזהפעילות הוצעה להיות אחראית לירידה בייצור המלנין. הפיתוח של תרכובות פיטוכימיות מלבינות חדשות ממוצרים טבעיים הפך לאחרונה למגמה גוברת. הממצא שלנו הראה שחלק האתנול מ-Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz was מעכב הטירוסינאז החזק ביותר, ואחריו תמציות אתנול מ-Ardisia elliptica Thunb. ו-Phyllanthus acidus (L.) Skeels. ברור ש-7 צמחים מ-14צמחים היו בעלי תוכן פנולי גבוה, במיוחד Ardisiaelliptica Thunb. ו-Anona squamosa L. יתר על כן, Senna alata (L.) Roxb. היה העשיר ביותרפלבנואידתוכן שיכול לעכב את פעילות טירוזינאז. תרכובות פעילות מהצמחים כגון ארבוטין, אלוזין, חומצה גנטית, פלבנואידים, הספרידין, ליקוריץ, ניאצינמיד, נגזרות שמרים ופוליפנולים, יכולות לעכב מלנוגנזה ללא ציטוטוקסיות למלנוציטים [6].

קולגןאז הוא פפטידאז אבץ טרנסממברני שמנתק את הקשר X-Gly של קולגן. קולגן הוא חלבון מבני בשפע ומרכיב מטריקס חוץ-תאי [33]. ירידה בסיבי הקולגן והאלסטין גדלים עם הגיל ונזק מקרינת UV הגורמת לעור מקומט [34]. עיכוב קולגנאז הוצע למניעת הזדקנות העור. מבין אלו הגורמים לעיכוב במחקר שלנו, Ardisiaelliptica Thunb. הפגינו את הרמה הגבוהה ביותר של עיכוב קולגן-אזין, ואחריו Annona squamosa L., Senna alata(L.) Roxb., ו- Croton sublyratus Kurz בסדר הדרגה. במחקר קודם, תמצית תרמיל קקאו מכילה חומצה פנולית ופלבנואידיםשעיכבו את פעילות אלסטאז וקולגנאז [35]. יש לציין ששלוש תמציות אתנול (Ardisia elliptica Thunb.,Annona squamosa L., ו-Senna alata (L.) Roxb. עיכבו את שניהםטירוזינאזוקולגנאז. לצמחים אלה היו גם רמות גבוהות של פנולים ופלבנואידים, ונוגד חמצוןלמרבה העניין, לתמציות הללו יש שימושים אפשריים כמרכיבים למוצרי קוסמטיקה.

סיכום

התוצאות שלנו מוכיחות שתמציות של 14 צמחים תאילנדים מכילות דרגות שונות של סך פנוליפלבנואידתוכן וכן פעילויות ניקוי רדיקלים חופשיים, תלוי בממסי המיצוי. היה מתאם גבוה בין תוכן פנולי הכולל לבין פעילות ניקוי רדיקלים חופשיים שהוערכו על ידי מבחני DPPH ו-ABTS. חלק האתנול של Ardisia ellipticaThunb. היו בעלי התוכן הפנולי הגבוה ביותר, ואחריו Annona squamosa L. שני הצמחים עיכבו באופן משמעותי את פעילות טירוזינאז וקולגנאז, בעוד Rhinacanthusnasutus (L.) Kurz הראה את העיכוב הגבוה ביותר של טירוזינאז. יתר על כן, Senna alata (L.) Roxb. היה העשיר ביותר בתכולת פלבנואידים, וגם הוצגטירוזינאזוהתנהגות מעכבת קולגנאז. לחלק האתנול משלושה צמחים, כלומר Annona squamosa L., Ardisia elliptica Thunb, ו-Senna alata (L.) Roxb., יש פוטנציאל להיות מרכיבים במוצרים קוסמטיים למניעת קמטים כמו גם להלבנת עור. מחקרים נוספים נחוצים כדי לחקור את הרכיבים הפעילים והבטיחות של תמציות אלה.

פיתוח גוף cistanche

הפניות

1. Moehrle M. ספורט חוץ וסרטן העור. קלינ דרמטול. 2008;26(1):12–5.

2. Lopez-Camarillo C, Ocampo EA, Casamichana ML, Perez-Plasencia C, Alvarez-Sanchez E, Marchat LA. חלבון קינאזות והפעלת גורמי שעתוק בתגובה לקרינת UV של העור: השלכות על קרצינוגנזה. Int J Mol Sci. 2012;13(1):142–72.

3. Iwata M, Corn T, Iwata S, Everett MA, Fuller BB. הקשר בין פעילות טירוזינאז וצבע העור בערלה אנושית. J Investig Dermatol.1990;95(1):9–15.

4. שטרן RS. טיפול בצילום. N Engl J Med. 2004;350(15):1526–34.

5. Levin CY, Maibach H. Exogenous ochronosis. עדכון על מאפיינים קליניים, גורמים סיבתיים ואפשרויות טיפול. Am J Clin Dermatol. 2001;2(4):213–7.

6. Zhu W, Gao J. השימוש בתמציות בוטניות כסוכנים מקומיים להבהרת עור לשיפור הפרעות פיגמנטציה של העור. J Investig DermatolSymp Proc. 2008;13(1):20–4.

7. Zongo C, Savadogo A, Ouattara L, Bassole IHN, Ouattara CAT, Ouattara AS,Barro N, Koudou J, TraoreI AS. תכולת פוליפנולים, נוגדי חמצון ופעילויות אנטי-מיקרוביאליות של Ampelocissus grantii (בייקר) Planch. (Vitaceae): צמח מרפא מבורקינה פאסו. Int J Pharmacol. 2010;6(880–887)

8. Yamasaki K, Hashimoto A, Kokusenya Y, Miyamoto T, Sato T. שיטה אלקטרוכימית להערכת ההשפעות נוגדות החמצון של תמציות מתנול של תרופות גולמיות. Chem Pharm Bull (טוקיו). 1994;42(8):1663–5.

9. Re R, Pellegrini N, Proteggente A, Pannala A, Yang M, Rice-Evans C. פעילות נוגדת חמצון תוך שימוש במבחן קטיון רדיקלי משופר של ABTS. Free Radic Biol Med. 1999;26(9–10):1231–7.

10. Nithitanakool S, Pithayanukul P, Bavovada R, Saparpakorn P. Moleculardocking מחקרים ופעילות אנטי-tyrosinase של kernelextract של זרעי מנגו תאילנדי. מולקולות. 2009;14(1):257–65.

11. Bonvicini F, Antognoni F, Iannello C, Maxia A, Poli F, Gentilomi GA. פעילות רלוונטית וסלקטיבית של Pancratium Illyricum L. נגד מבודדים קליניים של קנדידה אלביקנס: השפעה משולבת על צמיחת שמרים ואסיות. BMCComplement Altern Med. 2014;14(1):409.

12. Sharma OP, Bhat TK. בדיקת נוגדי חמצון של DPPH נבדקה מחדש. Food Chem. 2009;113(4):1202–5.

13. MacDonald-Wicks LK, Wood LG, Garg ML. מתודולוגיה לקביעת יכולת נוגדת חמצון ביולוגית במבחנה: סקירה. J Sci Food Agric. 2006;86(13):2046–56.

14. Armstrong BK, Kricker A. האפידמיולוגיה של סרטן העור המושרה על ידי UV. JPhotochem Photobiol B Biol. 2001;63(1–3):8–18.

15. באשיר מ.מ., שארמה מ.ר., סמנכ"ל וורת'. UVB וציטוקינסינרגיסטי פרו-דלקתי מפעילים ייצור TNF- בקרטינוציטים באמצעות שעתוק גנים משופר. J Investig Dermatol. 2009;129(4):994–1001.

16. Watson RE, Gibbs NK, Griffiths CE, Sherratt MJ. נזק למטריצה ​​חוץ-תאית של העור כתוצאה מחשיפה ל-UV. אות חיזור נוגד חמצון. 2014;21(7):1063–77.

17. D'Orazio J, Jarrett S, Amaro-Ortiz A, Scott T. קרינת UV והעור. Int JMol Sci. 2013;14(6):12222–48.

18. Pittayapruek P, Meephansan J, Prapapan O, Komine M, Ohtsuki M. Role ofmatrix Metalloproteinases in Photoaging and Photocarcinogenesis. Int J MolSci. 2016;17(6):868.

19. Sulaiman CT, Balachandran I. סך הפנולים וסך הפלבנואידים בחריקי צמחי מרפא הודיים. הודי J Pharm Sci. 2012;74(3):258–60.

20. Mamat N, Jamal JA, Jantan I, Husain K. Xanthine Oxidase inhibitory andDPPH פעילויות סילוק רדיקליות של כמה מיני Primulaceae. סינס מלזיה. 2014;43(12):1827–33.

21. Wetwitayaklung P, Charoenteeraboon J, Limmatvapirat C, Phaechamud T. פעילויות נוגדות חמצון של כמה פירות תאילנדים ואקזוטיים המטופחים בתאילנד. Res J Pharm, Biol Chem Sci. 2012;3(1):12–21.

22. Falcone Ferreyra ML, Rius SP, Casati P. פלבנואידים: ביוסינתזה, פונקציות ביולוגיות ויישומים ביוטכנולוגיים. Front Plant Sci. 2012;3:222.

23. Devendra K, Kiran D, Ritesh V, Satyendra B, Abhishek K. להערכת סך הפנולים והפלבנואידים בצמחים שונים של Chhattisgarh. JPharmacognosy Phytochem. 2013;2(4):116–8.

24. Siti-Azima AM, Northam A, Nurhuda M. פעילויות נוגדות חמצון של SyzygiumCumini ו- ArdisiaElliptica ביחס להרכב הפנולי המשוער והתכונות הכרומטיות שלהם. Int J Biosci Biochem Bioinform. 2013;3(4):314–7.

25. Solovchenko A, Schmitz-Eiberger M. משמעות הפלבנואידים בעור להגנת UV-B בפירות תפוחים. J Exp Bot. 2003;54(389):1977–84.

26. Gonzalez-Gallego J, Sanchez-Campos S, Tunon MJ. תכונות אנטי דלקתיות של פלבנואידים תזונתיים. נוטר הוספ. 2007;22(3):287–93.

27. Sudha A, Sumathi K, Manikandaselvi S, Prabhu NM, Srinivasan P. פעילות אנטי הפטוטוקסית של חלק פלבונואיד גולמי של Lippia Nodiflora L. onethanol-induced פגיעה בכבד בחולדות. Asian J Anim Sci. 2013;7(1):1–13.

28. Sak K. ציטוטוקסיות של פלבנואידים תזונתיים על סוגי סרטן אנושיים שונים.Pharmacogn Rev. 2014;8(16):122–46.

29. Kedare SB, Singh RP. התחלה ופיתוח של שיטת DPPH של בדיקת נוגדי חמצון. J Food Sci Technol. 2011;48(4):412–22.

30. Boo HO, Kim TS, Koshio K, Shin JH, Chon SU. סך רמות פנולים ותכונות נוגדות חמצון בתמציות מתנול ממספר צמחי בר וייטנאמיים. קוריאני J Plant Res. 2011;24(6):659–65.

31. Dudonne S, Vitrac X, Coutiere P, Woillez M, Merillon JM. מחקר השוואתי של תכונות נוגדי חמצון ותכולת פנולים הכוללת של 30 תמציות צמחים בעלות עניין תעשייתי באמצעות מבחני DPPH, ABTS, FRAP, SOD ו-ORAC. J AgricFood Chem. 2009;57(5):1768–74.

32. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Melanin פיגמנטציה עור יונקים והוויסות ההורמונלי שלו. Physiol Rev. 2004;84(4):1155–228.

33. כתפיים MD, ריינס RT. מבנה ויציבות קולגן. Annu RevBiochem. 2009;78:929–58.

34. Cua AB, Wilhelm KP, Maibach HI. תכונות אלסטיות של עור אנושי: קשר לגיל, מין ואזור אנטומי. Arch Dermatol Res. 1990;282(5):283–8.

35. קארים AA, Azlan A, Ismail A, Hashim P, Gani SSA, Zainudin BH, Abdullah NA. הרכב פנולי, נוגד חמצון, פעילויות מעכבות נגד קמטים וטירוזינאז של תמצית תרמיל קקאו. BMC משלים Altern Med. 2014;14(381):1–13.