היתרונות של אקטאוזיד - טיפול בגליובלסטומה

איש קשר: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 דוא"ל:audrey.hu@wecistanche.com

TAE WOONG HWANG;DONG HUN KIM; DA BI KIM1;TAE WON JANG;GUN-HWA KIM;MINHO MOON;KYUNG AH YOON;DAE EUN CHO;JAE HO PARK;JWA-JIN KIM

1. הקדמה

גליובלסטומההוא הסוג הנפוץ ביותר של גידול מוחי ראשוני ממאיר והגידול המוח הראשוני הפולשני וההרסני ביותר (1,2), עם שיעור הישרדות חציוני של ~18 חודשים עם טיפול מולטי-מודאלי אגרסיבי. החלטות הטיפול הנוכחיות מוגבלות וכוללות הקרנות, כימותרפיה וניתוח בשילוב עם חומר האלקילציה טמוזולומיד (TMZ) (3,4). למרות הזמינות של טיפולים אגרסיביים, חולים עםגליובלסטומהבדרך כלל יש פרוגנוזה גרועה (5). TMZ היא התרופה הכימותרפית העיקרית המשמשת בטיפול קליני בממאיריםגליובלסטומה(6-8); כחומר אלקילציה בסדרה, הוא מסוגל לחדור את מחסום הדם-מוח (9-11). במהלך התקדמות גליובלסטומה ממאירה ופלישה נרחבת למוח, עלייה מתמדת של עמידות התרופה ל-TMZ מפחיתה את היעילות הטיפולית שלה (12,13). בהתאם לכך, תרופות טיפוליות חדשות לנגדגליובלסטומהמחפשים בדחיפות.

מחקרים קודמים דיווחו שתאי גליומה עוברים מוות תאי באמצעות אוטופגיה, או מוות תאי מתוכנת מסוג II, בתגובה ל-TMZ (14,15). ניתן לעכב אוטופגיה על ידי 3-methyladenine (3-MA) ​​באמצעות המרה של חלבון 1 הקשור למיקרו-צינוריות 1 שרשרת קלה 3 (LC3)-I ל-LC3-II, ובכך להפחיתגליובלסטומהמוות של תאים (16,17); עם זאת, תפקיד האוטופגיה תלוי בהקשר הסלולרי. למעט תפקיד ציטוטוקסי במהלך פעולת TMZ, אינדוקציה של אוטופגיה על ידי לחץ תאי הוא תהליך ציטו-פרוטקטיבי המבטל אגרגטים ציטופלזמיים, אברונים ומקרומולקולות הנגרמות על ידי מתח בתאי יונקים דרך המערכת הליזוזומלית. בתורם, תאים המעורבים בשמירה על הומאוסטזיס מקבלים אנרגיה באמצעות תהליכים קטבוליים אלה (18,19). התפקידים המורכבים של אוטופגיה מצביעים על כך שלמפעיל אוטופגיה עשוי להיות השפעות אנטי סרטניות בשילוב עם טיפול ב-TMZ על ידי גרימתגליובלסטומהאוטופגיה של תאים מבלי להפעיל השפעות מזיקות או לספק יתרונות לרקמות נורמליות. יש לציין, TMZ הפגין השפעות טיפוליות סינרגטיות בשילוב עם ויטמין D, כולל דיכוי כושר התאים ואוטופגיה מוגברת בגליובלסטומהתאים. יתר על כן, הוכח שהשילוב של TMZ וויטמין D מפעיל השפעות נוגדות סרטן in vivo, כולל הקטנת גודל הגידול ושיעור הישרדות ממושך. מחקרים אלו מצביעים על כך שלטיפול משולב עשויות להיות השפעות אנטי-סרטניות סינרגטיות באמצעות מנגנונים אוטופגיים ב-TMZ.גליובלסטומהטיפול (15).

אקטאוזידהוא phenylethanoid glycoside המופץ באופן נרחב במספר תרופות צמחיות סיניות מסורתיות מחזקות (20,21). מספר פעולות תרופתיות, כולל פעולות נוגדות חמצון, אנטי סרטניות, אנטי דלקתיות, אנטי-נפריטיות ואנטי גרורות, נקשרו עםאקטאוזיד(22-24). מחקרים קודמים הוכיחו זאתאקטאוזידיש השפעות הגנה מפני פגיעות כבד הנגרמות על ידי פחמן טטרכלוריד ו-D-galactosamine. המנגנונים העומדים בבסיס השפעות ההגנה של אקטאוזיד קשורים ככל הנראה ליכולתו לעכב הפעלה ביולוגית בתיווך P450 והשפעות ניקוי רדיקלים חופשיים הנגרמות כתוצאה מחשיפה לפחמן טטרכלוריד (25,26).

לכן, עדויות מצביעות על כך שגם וגםאקטאוזידו-TMZ גורמים להשפעות אנטי סרטניות באמצעות מוות של תאים. עם זאת, הקשר שלהם והשפעות אנטי סרטניות בהקשר שלגליובלסטומהנותר להבהיר. לכן, מטרת המחקר הנוכחי הייתה לאמת את ההשפעות האנטי-סרטניות הסינרגטיות שלאקטאוזידבשילוב עם TMZ inגליובלסטומהתֶרַפּיָה. בוצע בדיקת כדאיות תאים כדי לנתח את ההשפעות האנטי סרטניות של הטיפול המשולב ב-C6גליובלסטומהתאים (עכברושגליובלסטומהקו תאים), והתוצאות הושוו לאלה לאחר טיפול ב-TMZ בלבד. לבחון עוד יותר את המנגנון של מוות תאי הנגרם כתוצאה מטיפול משותף עםאקטאוזידו-TMZ, נבדקו גנים הקשורים לאפופטוזיס ואוטופגיה בתאי C6.

אקטאוזיד אנטי גידול

2. חומרים ושיטות

תרבית תאים:

העכברוש C6גליובלסטומהקו תאים נרכש מ- American Type Culture Collection (Rockville, MD, ארה"ב). התאים תורבו בתנאים סטריליים ב-37 מעלות צלזיוס בסביבה לחה עם 5 אחוזים של CO2 במדיום של Dulbecco (DMEM) בתוספת של 10 אחוז נסיוב בקר עוברי (FBS), ו-1 אחוז אנטיביוטיקה ותרופות אנטי-מיקוטיות (כולן Welgene, Daegu) , קוריאה).

חומר צמחי:

Abeliophyllum distichum Nakai [שובר מס. Park1001(ANH)] נאסף בפארק השעשועים Misun-hyang, Seongbul-Mountain Recreation Forest, קוריאה.

אינדוקציה של יבלת:

כדי לגרום להיווצרות קאלוס (27), בודדו עלים בגודל 1-cm2 מהצמחים הטריים. ההשתלה תורבת על מדיום Murachige ו-Skoog (4 אחוז סוכרוז, 0.9 אחוז אגר בתוספת של 1 מ"ג/ליטר חומצה אצטית נפטלין ו-1 מ"ג/ליטר חומצה אצטית 2,4-דיכלורו פנוקסי, pH 5.7) 25 מעלות צלזיוס. הקאלוס הושרה 20 ימים לאחר מכן. כמות מספקת שלאקטאוזידהושג באמצעות תת-תרבות להפרדה ולטהראקטאוזידמהקאלוס (איור 1). קבוצות שונות של מטוהריםאקטאוזידשימשו בכל ניסוי. כל ניסוי בוצע שלוש פעמים באמצעות אצווה אחרת.

בידוד וטיהור:

חלקי האתיל אצטט רוכזו בוואקום ושימשו כדגימה לטיהור אקטאוזיד.אקטאוזידבודד וטוהר על ידי מערכת ה-Accelerated Chromatographic Isolation (Isolera™ Spektra, Biotage, Uppsala, שוודיה) באמצעות SNAP KPHOSPHO-SIL ו-SNAP Ultra Cartridges (Biotage). האקטאוזידמטוהר מהקלוס נותח כמותית באמצעות האקטאוזיד הסטנדרטי על ידי ניתוח HPLC-PDA. לבסוף, אקטאוזיד בטוהר גדול מ-95 אחוזים או שווה ל-95 אחוז הושג מהקלוס והשתמש בו כדגימה לכימותרפיה של טמוזולומיד.גליובלסטומה.

בדיקת 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-l)-,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT):

כדי לזהות את הריכוז המעכב החצי-מקסימלי של TMZ (ערך IC50) כנגד תאי C6, 1x104 תאים בתרחפי תא בודד נזרעו לתוך בארות בודדות של צלחות 96-בארות והודגרו במשך 24 שעות ב-37 מעלות צלזיוס לפני הטיפול ב-TMZ בנקודה המצוינת. ריכוזים (1, 5, 10 ו-20 מ"מ) ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. לאחר קביעת ערך TMZ IC50 כ-5 מ"מ, התאים טופלו במשך 24 שעות עם 5 מ"מ TMZ, 50 מיקרומטראקטאוזיד, או שילוב של השניים (5 mM TMZ ו-50 µMאקטאוזיד). תמיסת MTT (5 מ"ג/מ"ל) נוספה לכל באר (10 µl) ותופחה ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. לאחר מכן, המדיום הוסר ו-DMSO נוסף בנפח של 200 μl כל אחד והגיב בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. הספיגה ב-595 ננומטר נמדדה כדי לקבוע את כדאיות התא.

בדיקת ריפוי פצעים:

תרחיף תאי C6 ב-1 מ"ל תורבת בצלחת בעלת 12 בארים וגדלה עד למפגש. התאים טופלו ב-TMZ,אקטאוזיד, או TMZ plusאקטאוזידולאחר מכן נשרט עם קצה פיפטה סטרילי של 10‑µl כדי ליצור פצע מלאכותי. ב-0 ו-24 שעות לאחר הפצע, נלכדו תמונות דיגיטליות של תהליך ריפוי הפצע באמצעות מיקרוסקופ הפוך. נדידת התאים כמתה על ידי מדידת גודל הצלקת ב-0 ו-24 שעות באמצעות תוכנת ניתוח התמונות, תוכנת ImageJ 1.43u/Java1.6.0_22 (NIH, Bethesda, Maryland, ארה"ב). כל ניסוי בוצע שלוש פעמים והמדידות בוצעו בשלושה עותקים.

אימונובלוטינג:

תאי C6 טופלו ב-TMZ,אקטאוזיד, או TMZ plusאקטאוזידלמשך 24 שעות. תאים עברו ליטוש על קרח על ידי RIPA (25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1% Nonidet P-40, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS) בתוספת קוקטייל מעכבי פרוטאז ופוספטאז (רושה, באזל, שוויץ) למשך 30 דקות. לאחר צנטריפוגה ב-18,341 xg למשך 15 דקות ב-4 מעלות צלזיוס, הושג הסופרנטנט. ריכוז החלבון נקבע באמצעות מבחני חלבון של ברדפורד (Bio-rad, Hercules, CA, ארה"ב). כמויות שוות של חלבונים הכוללים (30 מיקרוגרם) הועמסו לתוך בארות בודדות וחולקו באמצעות אלקטרופורזה באמצעות SDS-PAGE של 10-15 אחוזים. החלבונים הועברו באלקטרו לממברנות פוליווינילידן דיפלואוריד (EMD Millipore, Bedford, MA, ארה"ב). לאחר הדגירה בתמיסת חסימה המכילה 5 אחוז חלב ללא שומן בתמיסת מלח Tween/Tris-buffer למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. הכתמים נבדקו בנוגדנים ראשוניים מדוללים ב-1:1,000 (קטגוריה מס' 9662, קספסה 3; Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, ארה"ב), B0-cell lymphoma 2 (sc-cell 7382, Bcl-2), חלבון X הקשור ל-Bcl-2 (קטגוריה מס' 2772, Bax), פוספוריל (p-)p53 (sc-101762), total-p53 (sc-6243), -אקטין (קט. מס' 4970; הכל; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, ארה"ב), LC-3 (L8918, Sigma; Merck KGaA, Darmstadt, גרמניה), Rab7 (קטגוריה מס' 9367, Cell Signaling Technology, Inc. ), p62 (קטגוריה מס' 114), p-p38 (מספר קטגוריה 9211), total-p38 (מספר קטגוריה 9212), p-c-Jun N-terminal kinase (קטגוריה מס' 9251, p. ‑JNK), total-JNK (קטגוריה מס' 9252), p-extracellular signal-regular kinase (cat. no. 9101, p-ERK), total-ERK (קטגוריה מס' 9102; all Cell Signaling Technology, Inc. .) למשך הלילה ב-4˚C. לאחר מכן דגירה עם נוגדנים משניים מצומדים חזרת פרוקסידאז (1:2,000; LF-SA8001A, Goat Anti-Mouse IgG-HRP) או LF-SA8002A (Goat Anti-Rabbit IgG-AB-HRP) Frontier, Seoul, Korea.) למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, החלבונים הומחזו על ידי חשיפה ל- Chemi-Doc (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, cA, ארה"ב).

צביעה אימונופלואורסצנטית:

חלבון ממברנה 1 (LAMP1) ו-LC3 הקשורים לליזוזומליים הם סמנים לליזוזומלי ואוטופגיה. התאים (1x105 תאים/באר) הוכנו על כיסויי זכוכית מעוקרת (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, ארה"ב) בשלושה עותקים. לאחר טיפול ב-TMZ,אקטאוזיד, או TMZ plusאקטאוזידבמשך 24 שעות, התאים היו מקובעים ב-4 אחוז פרפורמלדהיד למשך 30 דקות, נחסמו עם 5 אחוז סרום עוף רגיל (S-3000; Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, ארה"ב), 0.1 אחוז Triton X ‑100 ולאחר מכן דגירה שעה אחת לצורך חדירות וכדי לחסום אינטראקציות לא ספציפיות בין חלבון לחלבון. לאחר מכן התאים הודגרו עם האנטי-LAMP1 (1:200; sc-19992, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) ואנטי-LC3 (1:400; PM036, MBL International, Woburn, MA, ארה"ב) למשך הלילה ב-4˚ ג. לאחר מכן התאים נשטפו פעמיים עם PBS והודגרו למשך שעתיים נוספות בחושך עם תערובת של נוגדנים משניים של Alexa Fluor 488 ו-594 (1:200; Alexa Fluor 488 (A-11008) ו-594 (A-11007), Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, ארה"ב) ונשטף שוב עם PBS. הגרעינים נצבעו באמצעות 4,6-diamidino-2-phenylindole (Sigma; Merck KGaA), ולאחר מכן נשטפו פעמיים עם PBS. לאחר מכן הרכיבו השקופיות והתמונות נלכדו תחת מיקרוסקופ לייזר קונפוקאלי LSM-700.

איור 1. מבנה כימי של אקטאוזיד.

ציטומטריית זרימה.

התאים נותחו עבור Mitotracker Green ו- MitoSOX על ידי ציטומטריית זרימה באמצעות ציטומטר זרימה FACSCanto II, כפי שצוין על ידי היצרן (BD Biosciences). לאחר שתי שטיפות עם PBS, התאים קובעו ב-4 אחוז פרפורמלדהיד למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר וחוללו עם 0.25 אחוז Triton X-100 ב-PBS למשך 20 דקות. התאים נצבעו בנוגדנים ראשוניים למשך הלילה ב-4°C (1:200) ולאחר מכן בנוגדנים משניים למשך שעה אחת על קרח. לאחר שתי שטיפות עם PBS, התאים נקבעו ב-4 אחוז פרפורמלדהיד ונבדקו מיד. נתוני ציטומטריית הזרימה נאספו באמצעות 10,000 תאים ונותחו באמצעות תוכנת FlowJo 7.6.1 (Tree Star, Inc., Ashland, OR, ארה"ב).

ניתוח סטטיסטי:

כל הנתונים נותחו באמצעות GraphPad Prism 5.0 ומוצגים כממוצע ± שגיאת תקן של הממוצע. הנתונים נותחו באמצעות ניתוח חד כיווני של שונות עם מבחן ההשוואות המרובות של Tukey שלאחר ההשוואה של ערכים ממוצעים בין קבוצות מרובות. פ<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Cistanche Echinacoside: אנטי אפופטוזיס

3. תוצאות

3.1 טיפול משותף עם TMZ ומדכא אקטאוזידגליובלסטומההתפשטות והגירה של תאים.

טיפול משולב עם TMZ ואקטאוזידעיכב את הכדאיות של תאי C6. TMZ הפחית את כדאיות התא באופן תלוי מינון (איור 2A), בעוד לאקטאוזיד לבדו לא הייתה השפעה משמעותית בכל רמת טיפול (איור 2B). לאחר דגירה במצע תרבית המכיל TMZ עם או בלי אקטאוזיד במשך 24 שעות, בוצע בדיקת MTT כדי להשוות את הציטוטוקסיות של רמות טיפול שונות. TMZ דיכא באופן משמעותי את כדאיות התא, בעוד שאקטאוזיד לא דיכא באופן משמעותי את צמיחת התאים. טיפול משולב עם TMZ ואקטאוזיד הפחית באופן ניכר את כדאיות התא (איור 2C). טיפול ב-TMZ או באקטאוזיד לבדו הפחית את יכולת ריפוי הפצעים (איור 3A). מרחק הפצע (אחוז) נמדד באמצעות התוצאות המוצגות באיור 3A עם תוכנת ImageJ. מרחק הפצע גדל באופן משמעותי בעקבות טיפול משולב (איור 3B), בהשוואה לכל אחד מהטיפולים הפרטניים. תוצאות אלו מצביעות על כך שטיפול משותף עם TMZ ואקטאוזיד היה מעכב יעיל שלגליובלסטומההתפשטות והגירה של תאים.

3.2 אקטאוזיד ו-TMZ משפיעים על אפופטוזיס באופן סינרגטי בתאי C6.

התוצאות של ניתוח ה-Western blot גילו שרמות ה-caspase-3 המפוצלות, Bax ו-p53 פוספורילציה היו גבוהות יותר ורמות Bcl-2 היו נמוכות יותר בעקבות טיפול משולב עם TMZ ואקטאוזידמאשר בעקבות טיפול עם TMZ בלבד (איור 4A).אקטאוזידתפקוד מיטוכונדריאלי-מתווך ויצירת מיני חמצן תגובתיים (ROS), שהם מתווכים מרכזיים של איתות אפופטוטי, נצפו אז בתאי C6 שטופלו ב-TMZ. כדי לאמת מסת המיטוכונדריה, בוצע ניתוח מיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנציה באמצעות MitoTracker Green. טיפול משותף עם TMZ ואקטאוזידהביא למסה מיטוכונדריה גבוהה יותר מאשר טיפול ב-TMZ בלבד (איור 4B). יצירת ROS הייתה גבוהה משמעותית לאחר טיפול משותף עם TMZ ואקטאוזיד מאשר טיפול ב-TMZ בלבד (איור 4C). תוצאות אלו מצביעות על כך שיצירת ROS ותפקוד המיטוכונדריה חשובים באפופטוזיס המושרה על ידי טיפול ב-TMZ בתוספת אקטאוזיד. טיפול משותף עם TMZ ואקטאוזיד משרה אוטופגיה בתאי C6. דווח כי TMZ מעורר אוטופגיה (28,29); לפיכך, המחקר הנוכחי בדק את המידה שבה נגרמת אוטופגיה על ידי טיפול ב-TMZ בתוספת אקטאוזיד. תאי C6 טופלו ב-TMZ עם או בלי אקטאוזיד; לאחר 24 שעות, והתאים נצבעו לאימונופלואורסצנציה כדי לזהות LAMP1 ו-LC3 כסמנים של אוטופגיה. רמות ביטוי גבוהות יותר של LAMP1 ו-LC3 נצפו בעקבות הטיפול המשולב (איור 5A). נבדק גם ביטוי חלבון הקשור ל-Autophagy, ונמצא ש-TMZ גרמה להמרה של LC3-I ל-LC3-II, המהווה סימן ליצירת אוטופגוזומים. שיעור גבוה יותר של המרה של LC3-I ל-LC3-II נצפה לאחר טיפול משותף עם TMZ ואקטאוזיד מאשר טיפול ב-TMZ בלבד. רמות הביטוי של Rab7 ו-p62 הצביעו על אינדוקציה של אוטופגיה בתאים שטופלו ב-TMZ (איור 5B). ממצאים אלו מצביעים על כך שטיפול משותף עם TMZ ואקטאוזיד הגביר את התהליך האוטופגי בגליובלסטומהתאים.

3.3 אקטאוזיד גורם לביטוי גנים של מסלול MAPK בטיפול מבוסס TMZ.

מחקרים קודמים הוכיחו ש-TMZ מווסת את מסלול MAPK, כולל p38, JNK ו-ERK (30). לכן, המחקר הנוכחי בדק האםאקטאוזידמשפיע על ביטוי גן MAPK הקשור ל-TMZ. תאי C6 טופלו ב-TMZ עם או בליאקטאוזיד. לאחר 24 שעות, טיפול ב-TMZ הביא לרמות ביטוי גבוהות יותר של p-p38, p-JNK ו-p-ERK. הביטוי של גנים מווסתים על ידי TMZ היה גבוה משמעותית לאחר טיפול ב-TMZ בתוספת אקטאוזיד מאשר טיפול ב-TMZ בלבד (איור 6). תצפיות אלו מצביעות על כךאקטאוזידמשפיע על מנגנונים טיפוליים מבוססי TMZ דרך מסלול MAPK.

אקטאוזיד נגדגליובלסטומה

דִיוּן

תוצאות המחקר הנוכחי קובעות כי הטיפול המשולב עם TMZ עםאקטאוזידמציע פוטנציאל טיפולי עבורגליובלסטומהטיפול, ולספק הוכחות לכך שהרגישות הכימית לשילוב של TMZ ואקטאוזידיכול להתרחש באמצעות שיפור אוטופגיה. כמו מוטציה שלגליובלסטומהתאים יכולים להוביל להשבתת מסלול אפופטוטי, השראת אוטופגיה על ידי TMZ plusאקטאוזידטיפול משותף עשוי לייצג שיטה חלופית עבורגליובלסטומהתֶרַפּיָה. עם זאת, האם אוטופגיה היא המנגנון הבלעדי עבורגליובלסטומהטיפול עם TMZ plusאקטאוזידעדיין יש להבהיר את הטיפול המשותף.

אוטופגיה היא מנגנון תאי חיוני לפירוק חלבונים ואברונים ציטופלזמיים. היתרון הקטבולי של אוטופגיה מושרית עשוי להיות חשוב במצבי לחץ; לכן, אינדוקציה של אוטופגיה עשויה להיות מנגנון הסתגלותי למניעת מוות תאי (31-33). מחקרים קודמים דיווחו כי אוטופגיה מופחתת קשורה לסרטן (34-36). בנוסף, מספר חלבונים ומסלולי איתות הקשורים לאוטופגיה מובטלים במהלך טרנספורמציה ממאירה, וכתוצאה מכך הפחתה בפעילות האוטופאגית. רמות ביטוי גבוהות של LC3 נקשרו גם לעלייה בשיעורי הישרדות בחולים עםגליובלסטומהעם ציוני ביצועים גרועים (37,38). באופן דומה, תוצאות המחקר הנוכחי מצביעות על כך ששיקום אוטופגיה נורמלית עשוי להיות אסטרטגיה סמויה עבורגליובלסטומהטיפול, ועשוי לשמש כמנגנון להגבלת צמיחת תאי גידול לא תקינה.

באוטופגיה רגילה, רכיבים ציטופלזמיים מסוימים מבודדים בתוך אוטופגוזומים אשר לאחר מכן מתמזגים עם ליזוזום כדי להתפרק ולמחזר (39,40). כאשר אוטופאגיה מווסתת, שיעורי היווצרות האוטופאגוזומים עולים על שיעורי הפירוק הליזוזומלי; מצב זה מכונה לחץ אוטופגי. אם מתח או אוטופגיה חריגה נמשכים, מוות תאי יכול להתרחש באמצעות דלדול אנרגיה או שינויים במאזן beclin-1/Bcl-2. אפופטוזיס יכולה להיות מופעלת גם על ידי היפראקטיביות אוטופגוזום, בולעת אברונים ציטופלזמיים כולל המיטוכונדריה או הרשת האנדופלזמית (41). הוצע כי אוטופגיה כללית יכולה לגרום למוות של תאים במהלך תחלופת ציטופלזמה ואברונים תקינים בתאים בריאים. בתהליך זה, התא 'קניבליז' את עצמו מבפנים, מאפיין מפתח של מוות תאי מתוכנת מסוג II. למרות המנגנונים שבהםאקטאוזידמשפר את ההשפעה הטיפולית של מבוסס TMZגליובלסטומהעדיין יש להבהיר את הטיפול במלואו, ההשפעות האנטי-סרטניות המוצגות על ידי הטיפול המשולב שנבדק במחקר הנוכחי עשויות להיות קשורות למנגנונים אוטופגיים אלו.

אקטאוזידהוא גליקוזיד פנילתנואיד שמקורו בצמחים (22,26). מחקרים קודמים דיווחו על הפעילויות הביולוגיות השונות של אקטאוזיד. השינויים ברמות הביטוי של caspase-3 ו-LC3 מפוצלים במחקר הנוכחי מוכיחים שטיפול בשילוב של TMZ ואקטאוזידמושרה אפופטוזיס ואוטופגיה בתאי C6 (איורים 4 ו-5). הטיפול המשולב הוכח כבעל השפעה סינרגטית עלגליובלסטומהתאים. למרות שעדיין נותרו להבהיר מנגנונים אפשריים אחרים של השפעות סינרגטיות אלה, המחקר הנוכחי זיהה את השראת האוטופגיה כמנגנון רצחני מכריע שלאקטאוזידכימו-רגישות במהלך מבוסס TMZגליובלסטומהתֶרַפּיָה.

אקטאוזיד מטפל בגליובלסטומה

הפניות

1. פרידמן HS, Kerby T ו-Calvert H: Temozolomide וטיפול בגליומה ממאירה. Clin Cancer Res 6: 2585-2597, 2000.

2. Mrugala MM וצ'מברליין MC: מנגנוני מחלה: Temozolomide וגליובלסטומה-מבט אל העתיד. Nat Clin Practice Oncol 5: 476-486, 2008.

3. Agarwala SS ו-Kirkwood JM: Temozolomide, חומר אלקילציה חדשני עם פעילות במערכת העצבים המרכזית, עשוי לשפר את הטיפול במלנומה גרורתית מתקדמת. אונקולוג 5: 144-151, 2000.

4.Stevens MF, Hickman JA, Stone R, Gibson NW, Baig GU, Lunt E ו-Newton cG: Antitumor imidazotetrazines. 1. סינתזה וכימיה של 8-carbamoyl-3-(2-chloroethyl)imidazo[5,1-d]-1,2,3, 5-tetrazine-4(3 H)-one, אנטי-גידול חדשני בעל טווח רחב סוֹכֵן. J Med Chem 27: 196-201, 1984.

5. Fulda S: טיפול מבוסס מוות תאי שלגליובלסטומה. מוות תאים דיס 9: 121, 2018.

6. Chen PH, Shen WL, Shih CM, Ho KH, Cheng CH, Lin CW, Lee CC, Liu AJ, ו-Chen KC: מסלול ה-CHAC1-inhibited Notch3 מעורב בציטוטוקסיות הנגרמת על ידי טמוזולומיד. Neuropharmacology 116: 300-314, 2017.

7. Oshiro S, Tsugu H, Komatsu F, Ohmura T, Ohta M, Sakamoto S, Fukushima T ו-Inoue T: יעילות הטיפול בטמוזולומיד בחולים עם גליומה בדרגה גבוהה. Anticancer Res 29: 911-917, 2009.

8. Van den Bent MJ: טיפול אדג'ובנטי בגליומות בדרגה גבוהה. Ann Oncol 17 (Suppl 10): x186‑x190, 2006.

9. Shen W, Hu JA, ו-Zheng JS: מנגנון של השפעות אנטי-גידול הנגרמות על ידי טמוזולומיד על תאי גליומה. J Int Med Res 42: 164-172, 2014.

10. Barciszewska AM, Gurda D, Głodowicz P, Nowak S and Naskręt-Barciszewska MZ: מנגנון אפיגנטי חדש של פעולת טמוזולומיד בתאי גליומה. PLoS One 10: e0136669, 2015.