השפעת פיגמנטציה אנטי-עור סינרגיסטית של Cistanche phenylethanoid glycosides ו- glabridin

תקציר לחקירת הסינרגיסטיתהשפעת Cistancheהצד האתנול של פניל ​​(PHGS) ו- Glabridin (GLA) כנגד פיגמנטציה של העור, יחס המסה של PHGs ו- GLA הוקרן על ידי ניסוי עיכוב טירוזינאז חוץ -גופני, 1, 1- diphenyl {}} trinitrophenylhydrazine (DPPH) ו- DPPH) ו- DPPH) ו- DPPH) ו- DPPH) ו- DPPH) ({}} trinitrophenylhydrhydrhydrhydlhydrhydlhydlhydlhydlhydlhydlhydlhydlhydlhydlhydlhydlhydlhydylhydyl (( 2, 2- diazo-bis (3- אתיל-בנזותיאזול -6- קטיון דיאמוניום חומצה סולפונית (ABTS+) חופשי חפירה רדיקלית והועמדו על ידי מעשה של מעשה של MELAN. כאינדקסים.

THEדַלַקתִימודל של תאי HACAT הנגרמים על ידי ליפופוליסכריד (LPS) הוקם, וההשפעה האנטי דלקתית של התרופה הוערכה על ידי עיכוב שחרורו של אינטרלוקין {}}} (IL -6) וגורם נמק גידול- (TNF-). מודל הלחץ החמצוני של תאי HACAT הנגרמים על ידי Azodiisobuamidine Hydrochloride (AAPH) הוקמה עוד יותר, והפעילות המשופרת של Distutase Superoxide (SOD) וקטלז (CAT) שימשה כאינדקס כדי להעריך את ההשפעה הנוגדת חמצון של התרופה. יחס המסה האופטימלי של PHGs ו- GLA נקבע על ידי שלושת דגמי התא שלעיל. התוצאות הראו כי תמיסות מימיות של PHGs/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) ו- PHGS/GLA (10∶1) שהוכנו עם M (PHGS) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶, 10∶1 הראו פעילות נוגדתית ועיכוב על פעילות נוגדתית. שיעורי העיכוב של PHGS/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) ו- PHGS/GLA (1 0 ∶1) פתרונות מימיים עם ריכוז המוני של 0.4 גרם לליטר היו 94.37%, 92.93%ו- 88.06%, בהתאמה. שיעורי הסיבוב של רדיקלים חופשיים של DPPH היו 89.44%, 88.72,%ו- 88.10%בהתאמה.
שיעורי ההפקה של ABTS+ רדיקלים חופשיים היו 1 0 0.13%, 100.0,1%ו- 99.87%, בהתאמה. כאשר ריכוז המסה של PHGs/GLA היה 25 ug/ml, PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) ו- PHGS/GLA (10∶1) פתרונות מימיים לא הראו ציטוטוקסיות לתאי B16F10 ו- HACAT. עיכוב הפעילות של טירוזינאז בתמיסה מימית של PHGS/GLA (1 ∶1) היה חזק יותר (פעילות טירוזינאז 23.80%), ותכולת המלנין (30.90%) פחתה באופן משמעותי. PHGS/GLA (1∶1) תמיסה מימית הראה את השפעת העיכוב הטובה ביותר על IL -6 ושחרור TNF, ואת היכולת לשפר את הפעילות של SOD ו- CAT. השילוב של PHGS ו- GLA הראה ביצועים סינרגיסטיים טובים, מעולים A לתרופה יחידה וגבוה יותר מ- PHGS/ GLA (5∶1) ו- PHGS/ GLA (10∶1) פתרון מימי. השילוב של PHGs ו- GLA מילא תפקיד סינרגיסטי בשיפור פיגמנטציה של העור על ידי עיכוב ייצור מלנין, והשפעות אנטי דלקתיות ונוגדות חמצון.

 

מילות מפתח cistanche phenylethanoid glycosides; Glabridin; השפעות סינרגיסטיות; פיגמנטציה נגד עור; נוגד חמצון; דלקת דלקתית; חומרי סמים

 

 

 

Cistanche Phenyl Ethanol לצד הלבנה

צור איתנו קשר עכשיו

שירות תומך של WeCistanche-היצואן הגדול ביותר של Cistanche בסין:
דוא"ל: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

למידע נוסף על הנחות פוטנציאליות, אנא אל תהסס לפנות לצוות שירות הלקוחות שלנו. הם ישמחו לעזור לך!

 

פיגמנטציה בעור היא מחלת עור הנגרמת על ידי גורמים כמו פציעה, דלקת בעור וקרינה אולטרה סגולה [1-2]. גורמים אלה עשויים להוביל לעלייה לא תקינה במלנין, מה שבתורו גורם לבעיות כמו קלואסמה, נמשים והיפר-פיגמנטציה פוסט-דלקתית (PIH) [3-4], ומשפיעים על מצבם הנפשי של אנשים ועל איכות החיים. נכון לעכשיו, הטיפול בפיגמנטציה של העור מתמקד בעיקר בעיכוב טירוזינאז, אנזים מפתח ביצירת מלנין [5-6].
המחקר האחרון [7-8] מראה כי פיגמנטציה של העור תלויה בחיבור ההדוק בין קרטינוציטים למלנוציטים באפידרמיס. ברגע שהרדיקלים החופשיים והגורמים הדלקתיים שמשתחררים על ידי קרטינוציטים יגיעו במגע עם מלנוציטים, הם יגרמו לעלייה בפעילות טירוזינאז, מה שיוביל לעלייה בתכולת המלנין. הם גם יאיצו את הובלת המלנין ויגרמו למלנין להפקיד על פני העור. לפיכך, הטיפול בפיגמנטציה של העור דורש מגוון מדדים כמו עיכוב ייצור מלנין, אנטי דלקת ואנטי-חמצון.

נכון לעכשיו, אף כי תכשירים מסורתיים לתרופות, כמו הידרוקינון והידרוקינון, משפיעים על הטיפול בפיגמנטציה של העור, אופני הפעולה שלהם הם בודדים יחסית ועשויים לייצר תגובות שליליות [9-10]. לשם השוואה, תרופות טבעיות הן טבעיות וקלות למעשה ומוכרות יותר ויותר ומנחלות על ידי הצרכנים [11-12]. בפרט, השילוב של תמציות צמחים מרובות [13-14] לא יכול רק לעכב את ייצור המלנין, אלא יש גם השפעות מרובות כמו השפעות אנטי דלקתיות ונוגדות חמצון, ומספק רעיונות ושיטות חדשות לטיפול בפיגמנטציה של העור.
ל- Cistanche Deserticola MA יש ערך רפואי ייחודי והוא ידוע בשם "ג'ינסנג המדבר". מחקרים מצאו כי למרכיב האופייני גליקוזיד הפנילטנואיד הכלול ב Cistanche יש פעילות נוגדת חמצון טובה [15] והשפעות אנטי דלקתיות [16], ויש לה גם השפעה מעכבת טירוזינאזית מסוימת [17]. Glycyrrhizin הוא מרכיב פלבנואידי ב- Glycyrrhiza Glabra L., שיש לו אפקט הלבנה רב עוצמה ומכונה "זהב הלבנה" [18]. טיפול ברפואה סינית מסורתית בפיגמנטציה של העור בדרך כלל מתחיל לחזק את הטחול והכליות, מנקים חום ונימילה, ולחדש את הצ'י והדם [19].
גליקוזידים פנילניים של Cistanche Deserticola יכולים לחדש את יאנג הכליות ולהועיל למהות ודם, ואילו גליציריזה גלאברה יכולה לחדש את הטחול והצי, לנקות חום ולרעלים מרעלים. השניים יכולים לעבוד יחד כדי להתנגד לפיגמנטציה. השילוב של גליקוזידים של Phenylethanoidc של Cistanche deserticola ו- glabridin עשוי להתנגד לפיגמנטציה של העור מממדים רבים ומטרות, להגן מפני קרניים אולטרה סגולות ברצועה כולה, מעכב באופן סינרגיסטית את הפעילות של טירוזינאז, ומפחית את ייצור המלנין, ויכול גם להפחית את הרדיקלים החופשיים ומפחית את המתח הדלקתי. עם זאת, יש מעט דיווחים בספרות על העיכוב הסינרגיסטי של פיגמנטציה של העור על ידי גליקוזידים פנילנואידים של Cistanche Deserticola ו- Glabridin.
מאמר זה מתכוון לבחון האם קיימת השפעה סינרגיסטית בין pphenylethanoidglycosides של Cistanche Deserticola (PHGS) לבין Glabridin (GLA) דרך ניסויים ביוכימיים חוץ -גופיים והקמה של 3 מודלים של תאים, ושיקולו את יחס המסה המורכב האופטימלי לתוצאה סינרגיסטית. זה צפוי לספק תמיכה תיאורטית והנחיות מעשיות לפיתוח מוצרי טיפוח עור טבעיים של צמחים ולסייע בקידום תעשיית טיפוח העור להתפתח בכיוון טבעי, בריא ויעיל יותר.

 

 

איפה: תגובה היא ספיגת תמיסת הדגימה, תמיסת L-tyrosine, PBS ותמיסת טירוזינאז; בקרת תגובה היא ספיגת תמיסת הדגימה, תמיסת L-tyrosine, תמיסת N ו- PBS; ריק הוא הספיגה של תמיסת L-tyrosine, תמיסת PBS ותמיסת טירוזינאז; שליטה ריקה היא ספיגת פתרונות L-tyrosine ו- PBS.

'

1.3.2 קביעת יכולת ניקוי רדיקלית ללא DPPH

ראשית, שוקל במדויק {{0}}. 0 197 גרם (0. 0 5 mmol) של DPPH וממיס אותו ב -25 {}} ml של anhydrous enhydros enodol כדי להכין DPPH של {{}}} out {} goctiply 2}. MMOL/L. לאחר מכן, PHGS ו- GLA הוכנו לתמיסת אתנול PHGS ולפתרון אתנול GLA עם ריכוזי המונים של 0. 0 01, 0.01, 0.1, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.0 מ"ג/מ"ל בהתאמה באמצעות 50% באתנול על ידי נפח, והכין את האתנו באותה דרך. לאחר מכן, תמיסת האתנול של PHGS ותמיסת אתנול GLA היו מעורבבים באופן שווה ב M (פתרון PHGS) ∶ M (פיתרון GLA)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40 כדי להשיג 9 סוגים של PHGS/GLA בפתרונות, עם גלינה במסה, במסה, עם גלינה במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, במסה, (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) פתרונות אתנול. לבסוף, הוסף 100 μl של פתרונות מדגם שונים ו- 100 μl של פתרון עבודה של DPPH לפלטת 96- היטב, מערבבים היטב והתרחקו מהאור בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. מדוד את הספיגה במהירות 517 ננומטר עם סמן אנזים. VC שימש כבקרה החיובית, וכל ניסוי חזר על עצמו 3 פעמים. חשב את שיעור ההילוך הרדיקלי החופשי של DPPH (%) על פי הנוסחה (2).
DPPH Free Radical Scaving Cree/%=(1 −11 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2) איפה: A1 הוא הספיגה של פתרון הדגימה + פתרון עבודה DPPH; A2 הוא ספיגה של 50% אתנול בנפח + פתרון עבודה DPPH; A3 הוא הספיגה של פתרון הדגימה + 50% אתנול לפי נפח.

1.3.3 קביעת ABTS+ יכולת ניקוי רדיקלית חופשית

ראשית, שקלו 1 גרם (1.82 מ"מ) של ABTs וממוססים אותו במים מיובשים להכנת תמיסת עבודה ABTS עם ריכוז סופי של 7.4 מ"מ/ל '; שקלו 0. 5 גרם של אשלגן פרסולפט וממוססים אותו במים מיובשים כדי להכין תמיסת עבודה של אשלגן פרסולפט עם ריכוז סופי של 2.6 מ"מ/ליטר; מערבבים את תמיסת העבודה של ABTS ואת תמיסת העבודה של אשלגן פרסולפט בנפחים שווים, ומגיבים למשך 12 שעות בחושך כדי להכין את פיתרון העבודה+ ABTS. ואז, על פי השיטה בסעיף 1.3.2, הכינו תמיסת אתנול PHGS, תמיסת אתנול GLA, תמיסת אתנול N ו- VC, כמו גם PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) תמיסת אתנול.
לבסוף, הוסיפו 40 μl של פתרונות מדגם שונים ו- 160 μl של ABTS+ פתרון עבודה לצלחת {3}} באר, ערבבו היטב, הגיבו בטמפרטורת החדר בחושך למשך 6 דקות, ומדדו את ספיגת הפיתרון בגובה 734 ננומטר באמצעות קורא ELISA. חשב את ABTS+ שיעור ניקוי רדיקלי חופשי (%) על פי הנוסחה (3).

 

איפה: A1 הוא הספיגה של פתרון לדוגמא + ABTS + פתרון עבודה; A2 הוא ספיגת מים מיובשים + ABTS + פתרון עבודה; A3 הוא ספיגת תמיסת הדגימה + מים מיוניזים.

 

1.4 ניסוי תאים

1.4.1 תרבית תאים

לאחר שתחיה תאי B16F10 ו- HACAT, הם מחוסנים במדיום גבוה של גלוקוז DMEM (המכיל תערובת של 10% סרום שור עוברי ו -1% פניצילין-סטרפטומיצין על ידי שבריר המוני) ומטורפת בחממה של 37 מעלות, 5% שבריר נפח CO2, ו -70% אדים 24 שעות. מצב צמיחת התאים נצפה תחת מיקרוסקופ, והמדיום מוחלף או מתרבות בתת -תרבות בהתאם למצב צמיחת התאים.

 

1.4.2 קיבוץ ניסיוני

תאי B16F10 ו- HACAT בשלב הגידול הלוגריתמי מחוסנים בצלחות באר 96- עם מספרי תאים מתאימים ומתורבת למשך 24 שעות כדי לאפשר לתאים לדבוק בקיר. פתרונות מדגם של ריכוזי מסה שונים מוכנים באמצעות מדיום תרבות DMEM. הקבוצה הרגילה, קבוצת הדגמים, קבוצת PHGS במינון נמוך (125 UG/ML), קבוצת PHGs במינון בינוני (250 UG/ML), קבוצת PHGs במינון גבוה (500 UG/ML), קבוצת GLA במינון נמוך (6.25 UG/ML), קבוצה/מינון בינוני GLA (12.5 UG/ML), קבוצה GLA/מינון גבוה (25, GLA), GLA), GLA) (25 GLA), GLA). הוקמו קבוצת PHGS/GLA (5∶1), וקבוצת PHGS/GLA (10∶1) קבוצת מדיום תרבות.

במודל הפיגמנטציה B16F10 הנגרם על ידי UVB, תאי קבוצת הדגם נוספו עם 30 μl של PBS (pH =7. 4) והונחו 3 ס"מ ישירות מתחת לחרירית UVB במשך 110 שניות; קבוצת הניסוי טופלה מראש עם 100 μL של פתרונות מדגם של ריכוזי מסה שונים למשך שעה אחת, ואז הוסיפה עם 30 μl של PBS והונחה 3 ס"מ ישירות מתחת לחרד UVB למשך 110 שניות; הקבוצה הרגילה השתמשה תמיד במדיום תרבות DMEM גלוקוז גבוה; הקבוצה הריקה לא חוסנה עם תאים, אלא עם כמות שווה של מדיום תרבות במקום זאת.

במודל הדלקת של תאי HACAT הנגרמים על ידי LPS, קבוצת המודל הייתה תרבותית עם תמיסת PBS של LPS בריכוז של 20 ug/ml למשך 24 שעות; קבוצת הניסוי טופלה מראש עם 100 פתרונות מדגם μl של ריכוזי מסה שונים למשך 24 שעות ואז הוסיפה עם תמיסת LPS של 20 אוג '/מ"ל למשך 24 שעות; הקבוצה הרגילה השתמשה תמיד במדיום DMEM גלוקוז גבוה; הקבוצה הריקה לא חוסנה בתאים, אלא עם כמות שווה של מדיום תרבות.

במודל הלחץ החמצוני של תאי HACAT הנגרם על ידי AAPH, קבוצת המודל הייתה תרבותית בתמיסה של 100 מ"ל AAPH (2.5 מ"מול) בריכוז של 25 מ"מ/ליטר למשך 24 שעות; קבוצת הניסוי טופלה מראש עם 100 פתרונות מדגם μL של ריכוזי מסה שונים למשך 24 שעות ואז הוסיפה עם תמיסת AAPH בריכוז של 25 מ"מ/ל"ל למשך 24 שעות; הקבוצה הרגילה השתמשה תמיד במדיום DMEM גלוקוז גבוה; הקבוצה הריקה לא חוסנה בתאים, אלא עם כמות שווה של מדיום תרבות.

כל קבוצה הוקמה עם 3 בארות משוכפלות וטופחה בחממה ב -37 מעלות, שבר נפח של 5% CO2, ו -70% לחות.

1.4.3 בדיקת ציטוטוקסיות

שיטת CCK8 שימשה לקביעת ציטוטוקסיות. B16F1 0 ותאי HACAT בשלב הגידול הלוגריתמי עוכלו עם 0.25% טריפסין למשך 3 דקות. לאחר סיום העיכול, המדיום התרבותי פוצץ שוב ושוב כדי לבצע השעיית תאים עם צפיפות של 1 × 104 תאים/מ"ל. התאים חוסנו באופן שווה בצלחת באר 96-, 100 μl לבאר, ו- PBS נוספה לבארות סביב התאים. לאחר התאים דבקו בקיר, נוספו ריכוזי מסה שונים של תמיסת מדגם, 3 בארות משוכפלות בקבוצה, וטופחו בחממה במרחק של 37 מעלות, שבר נפח CO2 של 5%, ו -70% לחות למשך 24, 48 ו- 72 שעות, ואז הפיתרון הושלך. כל הקבוצות נוספו עם 100 μl של מדיום תרבות שלם המכיל 10% חלק נפח CCK8 ודגרו במשך 60 דקות. ספיגת הפיתרון במהירות של 450 ננומטר נמדדה באמצעות קורא ELISA. כדאיות התא (%) חושבה על פי הנוסחה (4).

 

 

איפה: קבוצת ניסוי היא ספיגת הבארות המכילות תאים ופתרון מדגם תחת הקרנת UVB; קבוצה רגילה היא ספיגת הבארות המכילות תאים ותמיסת דגימה ללא הקרנת UVB; קבוצה ריקה היא ספיגת הבארות המכילה מדיום תרבות אך ללא תאים.

 

1.4.5 קביעת תוכן מלנין

תכולת המלנין נקבעה בשיטת הליזה של NaOH. לאחר טיפול בתאים במשך 72 שעות בהתאם לשיטה בסעיף 1.4.2, הושלך הסופר -נפט ונשטף פעמיים עם PBS, ונוספה 100 μl של תמיסה מימית NaOH המכילה 10% DMSO בנפח (ריכוז של 1 מול/ל). לאחר שהונח בתנור של 90 מעלות למשך שעה, ספיגת התמיסה במהירות 490 ננומטר נקבעה על ידי סמן אנזים. הניסוי חזר על עצמו 3 פעמים. תוכן המלנין (%) חושב על פי הנוסחה (5).

 

1.5 קביעת תכולת הגורמים הדלקתיים ומדד לחץ חמצוני

לאחר טיפול בתאים במשך 48 שעות על פי השיטה בסעיף 1.4.2, נאספו תאי HACAT בכל קבוצה באמצעות מגרד תאים, צנטריפוג, והסופר -נפט נאסף. התוכן של IL -6 ו- TNF- נקבע על פי הוראות ערכת ELISA.
לאחר טיפול בתאים במשך 48 שעות על פי השיטה בסעיף 1.4.2, תאי HACAT בכל קבוצה נאספו באמצעות מגרד תאים, והתאים נשברו על ידי הקפאה והפשרה חוזרת. התאים צנטריפוגו ב 12000 r/min ב -4 מעלות למשך 10 דקות, והסופר -נפט נאסף. פעילות ה- SOD ותכולת החתול נקבעו על פי הוראות ערכת ELISA.

1.6 קביעת המדד המשולב
שיטת האינדקס המשולב (CI) [20] שימשה כדי לקבוע אם PHGS ו- GLA ביחס מסה שונה הייתה השפעה סינרגיסטית על עיכוב פעילות טירוזינאז ואנטי-חמצון. מדד השילוב חושב על פי הנוסחה (6):

Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 מציין השפעה אנטגוניסטית, CI =1 מציין אפקט תוסף, ו- CI<1 indicates a synergistic effect.

 

1.7 ניתוח נתונים

כל הנתונים באים לידי ביטוי כ"ממוצע אריתמטי ± סטיית תקן (𝑥̅ ± 𝑠) ". גרף פריזמה 9.5. 0 תוכנה שימשה לניתוח סטטיסטי. ניתוח חד-כיווני של שונות שימש להשוואה בין קבוצות מרובות. עמ '<0.05 was considered statistically significant.