מחקר על מנגנון היתרונות של ציסטאנצ'ים בטיפול בהגנה על הכבד

תַקצִיר:ללמוד את המנגנון של רכיבים פעילים שלCistanchesהרבה בטיפול בפיברוזיס בכבד מנקודת מבט של תרופות, מחלות ומטרות. המרכיבים היעילים של Cistanches Herba נאספו באמצעות מסד נתונים ופלטפורמת ניתוח פרמקולוגיה של מערכת הרפואה הסינית המסורתית (TCMSP), מסד הנתונים של אנציקלופדיה של הרפואה הסינית המסורתית (ETCM), מסד הנתונים המקיף של מחקר הרפואה הסינית (TCMID), מסד הנתונים של CNKI, PubMed ומאגרי מידע נוספים. גני המטרה של רכיבים פעילים שלCistanches Herbaהושגו על ידי מסד הנתונים של Uniprot, וגנים המחלה של פיברוזיס בכבד נאספו על ידי מסד הנתונים GeneCards ומסד הנתונים של OMIM, מטרות הרכיבים הפעילים נחתכו עםפיברוזיס בכבדמטרות, ורשת הרפואה הסינית המסורתית-רכיבים פעילים-מחלות הוגרלה. רשת אינטראקציית חלבון (PPI) נבנתה על ידי מסד נתונים של String ותוכנת Cytoscape 3.7.1. פונקציית GO ומסלול KEGG הועשרו על ידי מסד נתונים של DAVID.

דגם בעלי חיים שלפיברוזיס בכבדהוקמה, התכולה של LN, HA, PCIII ו- Col IV ברקמת כבד עכבר זוהתה על ידי ערכת ELISA, שינויים היסטופתולוגיים בכבד נצפו על ידי צביעת HE ומאסון, והתעתוק של PI3K ו-AKT mRNA זוהה על ידי הקרנה בזמן אמת PCR כמותי. שמונה רכיבים פעילים של Cistanches Herba, 157 מטרות ו-1 005 מטרות שלפיברוזיס בכבדנאספו ונבדקו, ו-92 מטרות הצטלבו זה עם זה, הכוללות 5 מסלולי אותות עיקריים, כולל מסלול האותות הסרטני, מסלול האותות של וירוס הפטיטיס B, מסלול האות PI3K-AKT, מסלול האותות של גורם נמק הגידול, פרוטאוגליקן וסרטן. הניסוי בבעלי חיים הראה שבהשוואה לקבוצת המודל, קבוצות המינון הגבוה, הבינוני והנמוך בסך הכלפנילטנול גליקוזידים, המכילים אקטאוזיד, של Cistanches Herba (700, 350, 175 מ"ג/ק"ג) יכולים להפחית משמעותית את התוכן של LN, HA, PCIII ו- Col IV ברקמת הכבד של עכברים עם פיברוזיס בכבד. התצפית הפתולוגית של רקמת הכבד הראתה כי סך הכלפנילתנול גליקוזידים של עשבי תיבול Cistanches יתרונות:הָיָה יָכוֹללהפחית פגיעה בכבדולשפרמערכת אנטי אייג'ינג. זיהוי PCR כמותי הקרינה בזמן אמת הראה שביטוי ה-mRNA של PI3K ו-AKT ברקמת הכבד של קבוצת המודל היה מווסת משמעותית בהשוואה לקבוצה רגילה. בהשוואה לקבוצת המודל, ביטוי ה-mRNA של PI3K ו-AKT בקבוצות המינון הגבוה, הבינוני והנמוך של סך הפנילטנול גליקוזידים של Cistanches Herba ירד באופן משמעותי, והמנגנון שלו עשוי לעכב את התקדמות הפיברוזיס בכבד על ידי עיכוב ההפעלה של מסלול PI3K-AKT . סך הגליקוזידים של פנילטנול של Cistanches Herba יש השפעה שלאנטי אייג'ינג של הכבד, אשר מניח בסיס למחקר נוסף על ההשפעות הפרמקולוגיות שלCistanches Herba. 

(לחץ כאן כדי לדעת על יתרונות cistanche)

מילות מפתח:Cistanches Herba; פרמקולוגיה ברשת; עגינה מולקולרית;פיברוזיס בכבד;הגנה על הכבד;

מְחַבֵּר:ZHANG Bo-rui1, MA Qian-qian1, WANG Wen-yi1, ZHANG Shi-lei1, LIU Tao1,ZHAO Jun2, MA Long1*

בית הספר לבריאות הציבור, האוניברסיטה הרפואית של Xinjiang, Urumqi 830054, סין; 2Key Laboratory of Uygur Medicine, Xinjiang Pharmaceutical Research Institute, Urumqi 830004, סין

הכבד הוא בלוטת עיכול חשובה בגוף האדם, וברגע שהמחלה מתרחשת, היא תשפיע על התפקוד המטבולי התקין של גוף האדם. מחקרים הראו כי,דרך חשובה ליצור סרטן כבד היא פיברוזיס בכבד.כאשר הכבד מעורר, תאי מערכת החיסון מפרישים מספר רב של גורמים אימונו-וויסותיים, מה שמוביל להפעלה ושגשוג של תאי סטלט כבד, סינתזה של כמות גדולה של קולגן, ושקיעה של כמות גדולה של מטריצה ​​חוץ-תאית בכבד, וכתוצאה מכך היווצרות של פיברוזיס. לכן, שליטה בכל שלב בתהליך מחלת הכבד עשויה להפחית את הנזק של מחלת הכבד, והמחקר על הטיפול בפיברוזיס בכבד חשוב מאוד.

בשנים האחרונות מחקרים הראו כי,Cistancheיש השפעה מרפאת ברורה בטיפול במחלות כבד, ומראה יתרונות ברורים בטיפול בפיברוזיס בכבד.

Cistanches Herba, חומר מרפא אמיתי בשינג'יאנג, ידוע בשם "ג'ינסנג מדברי" ונמצא בשימוש קליני כבר אלפי שנים.

יתרונות Cistanche

מחקר מודרני הראה שיש לו פעילויות ביולוגיות שונות כגוןאנטי אייג'ינג, הגנה על הכבד, הקלה על עייפות, אנטי אוסטיאופורוזיס, חומר משלשל וכן הלאה.אתה וחב' [8] הראו זאתCistanchephenylethanoid יכול להקל על מידת הפיברוזיס בכבד. Zhang וחב' [9] מצאו כי ניתן לעכב את ההפעלה של תאי סטלט כבד ופיברוזיס בכבד על ידיCistancheליפוזומים פנילתנואידים. עם זאת, ההשפעות הפרמקולוגיות שלCistancheבטיפול בפיברוזיס בכבד והמנגנון שלו עדיין לא ברורים וצריך להבהיר.

במחקר זה, נעשה שימוש בפרמקולוגיה של הרשת לבניית דיאגרמת רשת "רכיב-מחלה-מטרה-מסלול" [10], ולאחר מכן נעשה שימוש באינטראקציה של חלבון וניתוח העשרת מטרות [11] כדי לחזות את המטרות והיעדים הרלוונטיים שלCistancheבטיפול בפיברוזיס בכבד. המסלול, באמצעות טכנולוגיית עגינה מולקולרית וניסויים בבעלי חיים, מספק בסיס להשפעות הפרמקולוגיות של החומרים הפעילים שלCistancheבטיפול בפיברוזיס בכבד.

1 חומר ושיטות של Cistanche

1.1 סקר מטרות הקשורות לרכיבים פעילים של Cistanche deserticola

1.1.1 סינון של הרכיבים הפעילים מבחינה כימית של Cistanche

שימוש ב"Cistanche " כמונח החיפוש, הזמינות הביולוגית האוראלית (OB) גדולה מ-0 אחוזים או שווה ל-30 אחוזים, דומה לתרופה (דמיון לתרופה) נבדקה בפלטפורמה לניתוח פרמקולוגיה של מערכת הרפואה הסינית המסורתית (TCMSP) . , DL) גדול מ-0.18 או שווה ל-0.18 כמרכיבים פעילים, ולאחר מכן בשילוב עם מסד הנתונים של אנציקלופדיית הרפואה הסינית (ETCM), מסד הנתונים המקיף של מחקר הרפואה הסינית (TCMID), מסד הנתונים CNKI, מסד הנתונים של PubMed כדי להשלים את הרכיבים הרלוונטיים של Cistanche.

1.1.2 רכיבים פעילים של Cistanche ויעדי מחלת פיברוזיס בכבד

באמצעות מסד הנתונים של Uniprot, נבדקו יעדי החלבון התואמים לרכיבים הפעילים של Cistanche. לאחר מכן, מסד הנתונים של הערות הגנום ומסד הנתונים הגנטי של מנדל שימשו לחיפוש עם "פיברוזיס בכבד" כמילת המפתח להשגת יעדי החלבון הרלוונטיים במסד הנתונים, ולבסוף להשיג את יעדי החלבון הנפוצים של השניים.

1.1.3 בנייה וניתוח של רשת "רכיבים פעילים של Cistanche - פיברוזיס בכבד - מטרות חלבון" מאגר הנתונים של String שימש לבניית רשת של "רכיבים פעילים של Cistanche - פיברוזיס בכבד - יעדי חלבון" להדמיה. כל צומת מייצג גן, חלבון או רכיב פעיל, והחיבור בין צמתים מייצג את הקשר בין הרכיב הפעיל לבין מטרות קשורות. גנים הליבה ברשת מנותחים לפי מידת הרשת, ולבסוף מתקבלת רשת האינטראקציה של החלבון. .

1.1.4 ניתוח העשרה של GO ו-KEGG

מסד הנתונים של דוד ייבא את המטרות של Cistanche בטיפול בפיברוזיס בכבד, ביצע ניתוח העשרה של GO ו-KEGG, ונבדק לפי ערך ה-Count.

1.1.5 עגינה מולקולרית

השג את המבנה הכימי הדו-ממדי של הרכיבים הפעילים העיקריים של Cistanche Cistanche דרך מסד הנתונים של PubChem, מצא את המבנה התלת-ממדי של חלבון היעד הרלוונטי במסד הנתונים PDB, בצע עגינה מולקולרית באמצעות תוכנת Autodock כדי להשיג את האתר עם אנרגיית הקישור הגבוהה ביותר, וכן לבסוף דמיינו את זה דרך עיבוד תוכנת Pymol.

1.2 ניסויים בבעלי חיים בהטבות Cistanche

1.2.1 חיות ניסוי

60 עכברים זכרים של קונמינג, דרגת SPF, במשקל 18-22 גרם, נרכשו ממרכז החיות הניסוי של האוניברסיטה הרפואית של שינג'יאנג. מספר רישיון הייצור הוא SCXK (חדש) 2018-0002, מספר רישיון השימוש הוא SYXK (חדש) 2018-0003, ומספר אישור האתיקה: IACUC-20210326-10.

1.2.2 ריאגנטים עיקריים

Cistanche phenethanoid glycosides (CPhGs) (נרכש מ-Xinjiang Hetian Dichen Pharmaceutical and Biological Co., Ltd., מספר אצווה: 20180502); Compound Biejia Ruangan Tablets (מוצר של Mongolia Furui Technology Co., Ltd.); עכבר למינין (LN), חומצה היאלורונית עכבר (HA), עכבר סוג III פרוקולגן (PCIII), עכבר סוג IV קולגן (Col IV) ערכת ELISA.

(Beijing Jianglai Reagent Co., Ltd., מספר אצווה: JL20286-96T, JL2406-96T, JL20169-96T, JL20128-96T); פתרון צביעה טריכרום מאסון (Zhuhai Besso, מספר אצווה: 20210115); ערכת צביעה המטוקסילין ואאוזין (HE) (Solebo HE dyedColor Kit G1120); SuperReal Fluorescence Quantitation Master Mix Reagent Color Edition (SYBR Green, Tiangen FP205-02); FastKing RT Kit (עם gDNase, Tiangen KR116-02); Transzol למעלה (Full Gold ET111-01).

1.2.3 מכשירים עיקריים

HZQ-C מנער תרבות טמפרטורה קבועה בלחות מלאה (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); DK-8D אמבט מים לחימום חשמלי בטמפרטורה קבועה (Jiangsu Jinyi Instrument Technology Co., Ltd.); HC-3018R צנטריפוגה מקורר במהירות גבוהה (Anhui Zhongke Zhongjia Science and Technology Co., Ltd.) Instrument Co., Ltd.); קורא מיקרו-צלחות Varioskan Flash, מכשיר PCR בזמן אמת QuantStudio 6 (Thermo Fisher Scientific, ארה"ב); מטחנת רקמות בעלת תפוקה גבוהה של Retsch MM400; ST5020 מכונת צביעה רב תכליתית (Shanghai Leica Trading Co., Ltd.).

1.2.4 שיטה נסיונית

בעלי החיים חולקו באופן אקראי לקבוצת ביקורת רגילה, קבוצת מודל, קבוצת ביקורת חיובית (840 מ"ג/ק"ג), קבוצת CPhGs במינון גבוה (CPhGs-H, 700 מ"ג/ק"ג), קבוצת מינון בינוני (CPhGs-M, 350 מ"ג/ק"ג) , קבוצה במינון נמוך (CPhGs-L, 175 מ"ג/ק"ג);

לקבוצת הביקורת החיובית ניתנו Compound Biejia Ruangan Tablets, בהתייחס להוראות התרופה (4 טבליות בכל פעם, 3 פעמים ביום; 0.5 גרם לטבליה) ו"הדרכה לניסוי פונקציונלי" שפורסם על ידי הוצאת הרפואה הצבאית העממית. הֲמָרָה; קבוצות מינון גבוה, בינוני ונמוך של CPhG מבוססות על ספרות רלוונטית [17] ותוצאות לפני הניסוי, וקבוצות CPhGs גבוהות, בינוניות ונמוכות של חולדות (500, 250, 125 מ"ג/ק"ג) מומרות על סמך המינונים של חולדות ועכברים היחס של 1:1.4, המומר לקבוצות מינון גבוה, בינוני ונמוך של CPhGs (700, 350, 175 מ"ג/ק"ג), 10 עכברים בכל קבוצה; לקבוצת הביקורת הרגילה הוזרקה אותה כמות של תמיסת מלח רגילה, והעכברים בקבוצות האחרות הוזרקו לכל העכברים הוזרק תוך צפק עם תמיסת שמן זית CCl4 (5 מ"ל/ק"ג), פעמיים בשבוע למשך 8 שבועות, להקים מודל עכבר פיברוזיס בכבד; לקבוצת הביקורת הרגילה ולקבוצת המודל ניתנו מים מזוקקים במתן, ולשאר הקבוצות ניתנו מים מזוקקים במתן. כולם ניתנו באמצעות מתן מתן במינון שנקבע במשך 8 שבועות.

1.2.5 זיהוי אינדקס ביוכימי

התכולה של LN, HA, PCIII ו- Col IV בהומוגנית של רקמת כבד זוהתה בשיטת ELISA עם קורא מיקרו-לוחיות, וההוראות של הערכה בוצעו בקפדנות.

1.2.6 תצפית היסטופתולוגית בכבד

רקמת הכבד נקבעה בתמיסת פרפורמלדהיד של 4 אחוז, התייבשה באתנול, הוטבעה בפרפין, ולאחר מכן נחתכה, והוצבעה ב-HE וב-Masson כדי לצפות במקטעי רקמת הכבד.

1.2.7 זיהוי של שעתוק mRNA PI3K ו-AKT על ידי PCR כמותי בזמן אמת

רקמת כבד העכבר הוסרה והוספה עם מגיב Transzol up כדי לחלץ את ה-RNA הכולל של רקמת כבד העכבר. נעשה שימוש ב-RT-PCR כדי לקבוע את שעתוק ה-mRNA של PI3K ו-AKT בכבד עכבר. רצפי הגנים הקשורים מוצגים בטבלה 1

1.2.8 שיטות סטטיסטיות

SPSS 21.0 שימש לניתוח סטטיסטי, והנתונים הובאו כממוצע ± סטיית תקן (x ± s);

ANOVA חד כיווני להשוואת אמצעים בין קבוצות; אחרת, נעשה שימוש במבחן סכום דירוג, ורמת המבחן הייתה=0.05.

2 תוצאות של ניסוי פונקציית Cistanche

2.1 סינון החומרים הפעילים של Cistanche

בסך הכל 75 רכיבים ידועים שלCistancheנבדקו, ו-OB גדול או שווה ל-30 אחוזים ו-DL גדול מ-0.18 או שווה ל-0.18 נקבעו כספי ההקרנה, והתקבלו 8 רכיבים פעילים מתאימים: -סיטוסטרול וארכידונט. , Suzilactone (Suchilactone), Liriodendron resin B dimethyl ether (yangambin), quercetin (quercetin), dipicaine (marckine), verbascoside (acteoside), echinacoside (echinacoside), סך הכל התקבלו 157 בסיסי מטרה ממסד הנתונים של Uniprot

(ראה איור 1).

איור 1 Cistanches מפת מטרה של מרכיב פעיל הרבבה

2.2 בניית רשת וניתוח של "רכיבים פעילים של Cistanche deserticola - פיברוזיס בכבד - מטרות חלבון"

The GeneCards and OMIM databases were searched to obtain 1 005 targets related to liver fibrosis, and the 157 potential protein targets of Cistanche deserticola and 1 005 protein targets related to liver fibrosis were deduplicated, and Venn diagrams were drawn ( See Figure 2), import 92 common targets into the String database, and perform visual processing to construct a network of "active components of Cistanche deserticola - liver fibrosis - protein targets" (see Figure 3), in which the core targets are: AKT, ICAM1, MMP9, BCL-2, ADRB2, CASP3, JUN, PON1, PIK3CG, RXRA, CASP8, PPARG, BAX, NOS3, PRKCA, TGFB1, CASP9, etc. degree>50 שימש כסף, ותרשים רשת האינטראקציה של החלבון שורטטה לפי הערך של ציון תואר ושילוב (ראה איור 4).

איור 2 דיאגרמת Venn של מטרה נפוצה למחלת תרופות של Cistanches Herba בטיפול בפיברוזיס בכבד

איור 3 דיאגרמת רשת של "מחלת מטרה שכיחה" של Cistanches Herba בטיפול בפיברוזיס בכבד

2.2 בניית רשת וניתוח של "רכיבים פעילים של יעדי Cistanche - פיברוזיס בכבד-חלבון"

GeneCards ומסד הנתונים של OMIM השיגו 1 005 יעדים הקשורים לפיברוזיס בכבד, פיטרו 157 יעדי חלבון פוטנציאליים של Cistanche deserticola ו-1 005 יעדי חלבון הקשורים לפיברוזיס בכבד, ושרטטו דיאגרמות Venn (ראה איור 2), ייבוא ​​92 מטרות נפוצות למסד הנתונים של String, ולבצע עיבוד חזותי לבניית רשת של "רכיבים פעילים של Cistanche deserticola - פיברוזיס בכבד - יעדי חלבון" (ראה איור 3), שמטרות הליבה שלהן הן: AKT, ICAM1, MMP9, BCL{ {10}}, ADRB2, CASP3, JUN, PON1, PIK3CG, RXRA, CASP8, PPARG, BAX, NOS3, PRKCA

הערה: אזור הצומת באיור מייצג את ערך התואר, ועובי החיבור מייצג את ערך ניקוד השילוב.

2.3 ניתוח העשרה של GO ו-KEGG

באמצעות מסד הנתונים של דוד יובאו 92 יעדי החלבון בטיפול בפיברוזיס בכבד למאגר לצורך ניתוח העשרה (ראה איור 5). בחר את עשרת הערכים המובילים עם ערכי ספירה של רכיבים תאיים, תהליכים ביולוגיים ופונקציות מולקולריות. ביניהם, תהליכים ביולוגיים כוללים ויסות חיובי של שעתוק דנ"א, ויסות שלילי של אפופטוזיס, הזדקנות, תגובה דלקתית, ויסות חיובי של שגשוג תאים, אפופטוזיס, העברת אותות ועוד. התפקודים המולקולריים כוללים בעיקר קישור של אנזימים, חלבונים, גורמי שעתוק אותם חלבונים, קישור DNA, קישור יוני אבץ וכו'; מרכיבי התא כוללים בעיקר גרעין, ציטופלזמה, סביבה חוץ-תאית, קרום פלזמה, קרום התא, מיטוכונדריה וכו'.

20 המסלולים המובילים נבדקו בהתבסס על מסד הנתונים של David וערך ה-Count, וניתוח העשרת המסלולים בוצע על המטרות הפוטנציאליות של Cistanche deserticola בטיפול בפיברוזיס בכבד (ראה איור 6). המסלולים העיקריים שהתקבלו הם: PI3K-AKT (ראה איור 7), מסלול איתות TNF, מסלול איתות HBV וכו'.

איור 5 ניתוח GO של מטרות פוטנציאליות של Cistanches Herba בטיפול בפיברוזיס בכבד

איור 6 ניתוח העשרה של מסלול האות KEGG

איור 7 מסלול PI3K-AKT של Cistanches Herba בטיפול בפיברוזיס בכבד

2.4 בניית רשת הרכיבים הפעילים-פיברוזיס בכבד-מטרת-מסלול של Cistanche

עיבוד חזותי לבניית רשת של "רכיבים פעילים של Cistanche deserticola-fibrosis-liver-target-pathway" (ראה איור 8).

איור 8 מרכיב פעיל של Cistanches Herba-Fibrosis של הכבד-מסלול יעד חלבון

הערה: אדום מייצג פיברוזיס בכבד; ירוק מייצג רכיבים פעילים של Cistanches Herba; כתום מייצג מסלול, כחול מייצג יעד חלבון, וקטע קו מייצג את הקשר בין ציסטאנצ'ס הרבה ופיברוזיס בכבד

2.5 תוצאות עגינה מולקולרית של רכיבים פעילים של Cistanche בטיפול בפיברוזיס בכבד

שני המרכיבים הפעילים החשובים ביותר שלCistanche, Verascoside ואכינצאה, עוגנו מולקולרית עם יעדי האלבומין המרכזיים ICAM1, AKT1 ו-MMP9 על ידי תוכנת Autodock. אנרגיות הקישור מוצגות בטבלה 2. התוצאות יובאו לתוכנת Pymol להדמיה, ותוצאות העגינה המולקולרית הראו ש-verbasin ו-AKT יצרו קשרי מימן במיקומים של ASN-54, TYR-272, ו-LYS-297; יוצר קשר מימן בעמדה 10; Verbasin ו-MMP9 יוצרים קשר מימן ב-LEU-188, ALA-189, GLU-227, HIS-230, HIS-236, HIS-226 עמדות;

אכינצאה יוצרת קשרי מימן עם AKT במיקומים GLU-356, HIS-297, ASN-296, ALA-226, LYS-294 ו-GLU-228 ; echinacoside יוצר קשרי מימן עם ICAM1 בעמדות DA-7, DT-8, DT-11, DT-12 ו-DC-13 יוצרים קשרי מימן;

Verbasin יוצר קשרי מימן עם MMP9 במיקומים HIS-230, HIS-236, HIS-226, GLU-227, ALA-189, LEU-188, TYR-248 (ראה איור 9).

טבלה 2 אנרגיה קושרת בין רכיבים פעילים עיקריים לבין יעדי חלבון מרכזיים (kJ/mol)

איור 9 תוצאות של עגינה מולקולרית

הערה: AF הם דיאגרמות העגינה המולקולריות של אקטאוזיד ו-AKT, אקטאוזיד ו-ICAM1, אקטאוזיד וMMP9, echinacoside ו-AKT, echinacoside ו-ICAM1, ו-echinacoside ו-MMP9, בהתאמה.

2.6 הבדלים בתוכן של LN, HA, PCIII ו- Col IV בכל קבוצת עכברים

בהשוואה לקבוצה הרגילה, התוכן של LN, HA, PCIII ו- Col IV בקבוצת המודל גדל, וההבדל היה מובהק סטטיסטית (P<0.01). the="" contents="" of="" pciii="" and="" col="" iv="" (p="" <="" 0.01)="" indicated="" that="" cphgs="" had="" an="" anti-hepatic="" fibrosis="" effect="" (see="" table="" 3,="" figure="">

טבלה 3 הבדלים בתכולת LN, HA, PCIII ו- Col IV בעכברים מקבוצות שונות (x  ± s, n = 9)

הערה: בהשוואה לקבוצת ביקורת רגילה,#P<0.01; compared="" with="" model="" group,="">**P<>

2.7 תצפית היסטופתולוגית בכבד

צביעת HE (ראה איור 10): בקבוצה הרגילה, המורפולוגיה של הפטוציטים הייתה תקינה, אונות הכבד היו שלמות, ולא הייתה התפלגות של ניוון ונמק של הפטוציטים ותאי דלקת. אזור השער נראה בבירור, והפטוציטים מסודרים בקפידה סביב הווריד המרכזי. לקבוצת המודל היה נמק ברור של הפטוציטים, שגשוג, בצקת, חדירת תאים דלקתיים ומספר רב של גרגירים אאוזינופיליים. קבוצות מינון גבוה, בינוני ונמוך וזוגות חיוביים

בקבוצת הביקורת, מידת הנמק של הפטוציטים הייתה קלה, והגרגירים האאוזינופיליים הופחתו משמעותית.

צביעת מאסון (ראה איור 11): לקבוצה הרגילה היה מבנה מורפולוגי מלא של הפטוציטים, ורק מעט סיבי קולגן נראו בדופן כלי הדם לאחר צביעת קולגן; בקבוצת המודלים, מספר רב של פסאודולבולולים שנוצרו על ידי סיבים כחולים הקיפו את אזור השער, ונראו מספר רב של ואקוולים. קבוצות המינון הגבוה, הבינוני והנמוך וקבוצת הביקורת החיובית יכלו להפחית באופן משמעותי את רמת הפיברוזיס בכבד ברקמת הכבד, והסיבים הכחולים סביב אזור השער הופחתו באופן משמעותי.

איור 10 השפעת CPhGs על שינויים היסטופתולוגיים בכבד בעכברים עם פיברוזיס בכבד המושרה על ידי CCl4

הערה: ת: רגיל; ב: דגם; ג: קבוצת ביקורת חיובית; D: CPhGs-H; E: CPhGs-M; F: CPhGs-L. אותו דבר למטה.

איור 11 השפעת CPhGs על השינויים של סיבי קולגן ברקמת הכבד של עכברים עם פיברוזיס בכבד המושרה על ידי CCl4

2.8 זיהוי של ביטוי PI3K ו-AKT mRNA על ידי PCR כמותי בזמן אמת

בהשוואה לקבוצת הביקורת הרגילה, הביטוי של PI3K ו-AKT mRNA ברקמת הכבד של העכברים בקבוצת המודל היה מווסת עלייה משמעותית (P<>

בהשוואה לקבוצת המודל, ביטוי ה-mRNA של PI3K ו-AKT בקבוצת הביקורת החיובית ובקבוצות המינון הגבוה, הבינוני והנמוך של גלוקוזידים הכוללים של אלכוהול פניתיל מ-Cistanche deserticola ירד באופן משמעותי (P<0.01) (table="">

טבלה 4 שעתוק של PI3K ו-AKT mRNA ברקמת כבד עכבר (x± s, n = 9)

הערה: בהשוואה לקבוצת ביקורת רגילה, #P<0.01; compared="" with="" model="" group,=""><>

3 דיון ומסקנות

תהליך ההתפתחות של פיברוזיס בכבד הוא מורכב, וציטוקינים ומסלולים תאיים שונים "מתקשרים" ומשפיעים זה על זה, ויוצרים רשת מורכבת של אינטראקציות. לכן קשה לעבוד בטיפול חד-מטרה וחד ערוצית. לרפואה הסינית המסורתית מאפיינים של פעולה מרובה רכיבים, רב מטרות ומורכבת, על מנת לווסת את גוף האדם באופן שיטתי. ל- Cistanche deserticola יש השפעה של הגנה על הכבד. החומרים הפעילים של Cistanche deserticola מתקבלים דרך מסד הנתונים של הרפואה הסינית המסורתית TCMSP ומאגרי מידע נוספים: Verbasin, echinacoside, -sitosterol, arachidonic acid, suzilactone, Liriodendron Resinol B dimethyl ether , quercetin, dipicaine.

מחקרים הראו כי phenylethanoid גליקוזידים שלCistancheהם המרכיבים הפעילים העיקריים שלCistanche, ביניהם echinacoside ו-verbascoside נחשבים למרכיבים הביו-אקטיביים העיקריים שלCistanche. ההשפעה של גליקוזידים חרצית קשורהבעיה בכבד

מטרה ומאומת על ידי עגינה מולקולרית.

אכינצאהוverbascoside, כמרכיבים העיקריים ב- Cistanche, ממלאים אפקט אנטי-כבדי פיברוזיס על ידימסדיר את האפופטוזיסשל תאי כוכבי כבד. ICAM1, AKT ו-MMP9 עשויים להיות המטרות של echinacoside ו-verbasin בטיפול בפיברוזיס בכבד. כגורם היצמדות לתאים, ICAM1 מתבטא בשפע במקרה של פגיעה בכבד. זה יכול לעכב פיברוזיס בכבד על ידי עיכוב ביטוי היתר של ICAM1. התפתחות. Serine/Threonine protein kinase (AKT) הוא קינאז יעד חשוב במורד הזרם של PI3K. מופעל AKT מופעל עוד יותר כדי לקדם שגשוג של תאי סטלט בכבד ולהאיץ את התקדמות הפיברוזיס בכבד.

להיפך, עיכוב AKT יעכב את התקדמות פיברוזיס בכבד; MMP-9 יכול לבזות את מטריצת הקולגן הכבדית הרגילה, להרוס את הסביבה הפנימית של תאי כבד, לקדם את ההפעלה של תאי סטלט כבד, להפריש כמות גדולה של קולגן ולקדם התפתחות של פיברוזיס בכבד. התרחשות של פיברוזיס בכבד; בניסוי זה, השימוש ב-CCl4 ליצירת מודל עכבר של פיברוזיס בכבד הוא אחת משיטות הדוגמנות הקלאסיות. CCl4 מוזרק לגוף החי על ידי הזרקה תוך צפקית. התוכן של PCIII ו- Col IV גדל באופן משמעותי; בהשוואה לקבוצת המודל, קבוצות ה-CPhGs במינון גבוה, בינוני ונמוך הפחיתו באופן משמעותי את התוכן של LN, HA, PCIII ו-Col IV; תוצאות בדיקות HE ומסון הראו כי בהשוואה לקבוצת המודל, ה-CPhGs גבוה, בינוני ובקבוצה במינון נמוך, מידת נמק ההפטוציטים הייתה קלה, הגרגירים האאוזינופיליים הופחתו משמעותית, והסיבים הכחולים סביב אזור השער היו. מופחת משמעותית. התוצאות לעיל הצביעו על כך שעיכוב של פיברוזיס בכבד על ידי סך גלוקוזידים של Cistanche deserticola עשוי להיות קשור למטרות של ICAM1, AKT ו-MMP9, ויש לזהות עוד יותר את הביטוי של חלבונים קשורים.

התרחשות של פיברוזיס בכבד נגרמת על ידי מגוון גורמים. ביניהם, מסלול PI3K-AKT הוא המסלול בדירוג העליון המתקבל על ידי ניתוח העשרת מסלולים. מסלול האיתות PI3K-AKT מעורב בוויסות שגשוג תאים ואפופטוזיס, השראת גידולים אנושיים וגן HBV. זהו אחד המסלולים החשובים לטיפול בפיברוזיס בכבד. מסלול PI3K-AKT יכול להפעיל את היווצרות כלי דם בכבד, לשפר את אספקת הדם, לבנות מחדש את המטריצה ​​החוץ-תאית, לווסת אוטופגיה, לעכב אפופטוזיס של הפטוציטים ולקדם את התפשטות הפטוציטים, ובכך להוביל לפיברוזיס בכבד.

אכינצאהוVerbasicoseיכול לעכב שגשוג והפעלה של תאי כבד על ידי ויסות המטרות של ICAM1, AKT ו-MMP9, בהתאמה, ובסך הכלאקטאוזידבפנילאתיל גלוקוזידיםשֶׁלCistancheעלול להפריע לסיבי כבד על ידי השתתפות במטבוליזם האנרגיה,שגשוג ואפופטוזיס של תאי כבד. בהשוואה לקבוצה הרגילה, רמות הביטוי של PI3K ו-AKT mRNA ברקמת הכבד של העכברים בקבוצת המודל היו מווסתות באופן משמעותי; בהשוואה לקבוצת המודלים, סך הגליקוזידים של פנילטנול של Cistanche deserticola היה גבוה, בינוני ונמוך. ביטויי ה-mRNA של PI3K ו-AKT ירדו באופן משמעותי בקבוצת המינון, והמנגנון עשוי לעכב את ההפעלה של מסלול PI3K-AKT ולעכב את התקדמות הפיברוזיס בכבד.

אקטאוזידנקראים גם ergosteroside ו-verbascoside. שייך לתרכובות גליקוזיד פניל ​​פרופנואיד. הוא מופק מהגבעולים הבשרניים היבשים עם עלים קשקשים שלCistanche tubulosaYC Ma. זהו אחד המרכיבים היעילים העיקריים של תמצית Cistanche.

אקטאוזידהוא מחלקה של תרכובות בעלות פעילות ביולוגית חזקה, בעלות השפעות פיזיולוגיות שונות כגון אנטי דלקתיות, שיפור חסינות, אנטי אנוקסיה, ניקוי רדיקלים חופשיים, תיקון בסיסי DNA וטיפול בפיברוזיס בכבד.

לחץ כאן כדי לדעת את היתרונות של Cistanche על בדיקת כבד

לסיכום, סך הכלפנילטנול גליקוזידים של Cistancheיכול להקל ביעילות על פיברוזיס כבד המושרה על ידי CCl4- בעכברים, והמנגנון עשוי להיות קשור לשגשוג והפעלה של תאי סטלט כבד המתווכים על ידי מסלול איתות PI3K-AKT. הניחו את הבסיס להשפעות הפרמקולוגיות של Cistanche.