מחקר על השפעות שיפור של תמצית פנילתנואידים גליקוזידים מ-Ruchongrong (Cistanche Deserticola) על מטבוליזם שומנים בכבדי ApoE - / - עכברים עם דיאטה עתירת שומן המבוססת על ויסות ACOX1 - ביטויי CPT2

מטרה תקציר:כדי לחקור אתהשפעות של תמצית גליקוזידים של פנילתנואידיםמCistanche deserticola(PGCD) על חילוף החומרים של שומנים בכבד עכברים ApoE-/- המושרה על ידי דיאטה עתירת שומן. שיטות: 70 maleApoE-/- עכברים שניזונו בתזונה עתירת שומן חולקו ל-5 קבוצות, קבוצת מודל (MOD), עכברי קבוצת ביקורת חיובית קיבלו Atorvastatin [20 מ"ג / (ק"ג·ד)] + אזטימיב [20 מ"ג / (ק"ג) ·ד)](A + E), PGCD במינון נמוך, בינוני וגבוה ניתנוPGCD[250, 500, 1000 מ"ג / (ק"ג·ד)]; עוד 14 עכברי C57BL/6J זכרים עם דיאטת achow נקבעו כקבוצת הביקורת הרגילה (CON). בסוף השבוע ה-12 התגלו תכולת ה-TG והפעילות של ALT ו-AST ברקמת הסרום והכבד על פי הוראות ההפעלה. רקמת כבד טריה הומוגגה והתוכן של חומצת שומן סינתאז (FAS), אציל-CoA דהידרוגנאז ארוכת שרשרת (LCAD) וגלוטתיון פרוקסידאז (GSH - Px),סופראוקסיד דיסמוטאז (SOD)פעילויות נבדקו על ידי ELISAmethod, בינתיים, התכולה של malondialdehyde (MDA) ו-lipid peroxide (LPO) זוהתה עם kidmethods. ביטויי ה-mRNA של acyl-co-enzyme A oxidase 1 (ACOX1) וקרניטין palmitoyltransferase 2 (CPT2) זוהו על ידי ניסויי RT-PCR.

לחץ כאן כדי לדעת 80%PHENILETHANOID גליקוזידיםתמצית CISTANCHE אורגני טבעי

השירות התומך של Wecistanche - יצואנית ה-cistanche הגדולה בסין:

דוא"ל:wallence.suen@wecistanche.com

ווטסאפ/טלפון:+86 15292862950

קנה לפרטי מפרטים נוספים:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

תוצאות:בניגוד לקבוצת הדוגמניות,שלוש מנות PGCD הורידו כולם את רמות ה-TGבכבד ובנסיוב באופן תלוי מינון, והוריד את הפעילות של ALT ו-AST בסרום. שלוש מנות PGCD הורידו כולם את תכולת ה-FAS באופן תלוי מינון והעלו את תכולת ה-LCAD בכבד באופן משמעותי.PGCD מקודםהפעילויות של GSH - Px ו- SODand הפחיתו את תכולת ה-MDA וה-LPO בכבד באופן משמעותי. ניסויי RT-PCR הראו ש-PGCD העלה את רמות ה-mRNA של ACOX1 ו-CPT2 ברקמת הכבד.

סיכום:PGCD יכול לשפר את חילוף החומרים של שומנים ותגובת לחץ חמצוני, ולהפחית את שקיעת השומנים ברקמת הכבד על ידי ויסות ביטויי ה-mRNA של ACOX1 ו-CPT2.

מילות מפתח:תמצית פנילתנואידים גליקוזידים מ- Cistanche deserticola; ACOX1; CPT2;חילוף חומרים שומנים;מתח חמצוני; ApoE- / - עכברים

מחלת כבד שומני ללא אלכוהול(NAFLD) היא אחת ממחלות הכבד הנפוצות ביותר בעולם, עם שכיחות של כמעט 30% באוכלוסייה הכללית. מחלת כבד שומני בסין צומחת בקצב שנתי של 0.594% [1]. ההתרחשות וההתפתחות של NAFLD קשורות קשר הדוק לצריכת הקלוריות המוגזמת של הגוף. תזונה עתירת שומן מובילה להצטברות יתר של שומן בכבד ומעוררת NAFLD[2], והשלב הראשוני בפתוגנזה שלה הוא שקיעת טריאצילגליצרול (TG) בתאי כבד[2] 3]. נכון להיום, אין תרופות טיפוליות ספציפיות המכוונות לפתוגנזה של NAFLD. מציאת תרופות בטוחות ויעילות עם מנגנונים ברורים למניעה וטיפול של NAFLD הפכה למשימה חשובה עבור החוקרים. Cistanche deserticola YC Ma הוא צמח טפיל מהסוג Cistanche ממשפחת ה- Orobanchaceae. למרכיב העיקרי שלו, phenylethanoid glycosides, יש את הפונקציות של שיפור התפקוד החיסוני של הגוף, אנטי-אייג'ינג, אנטי-קרינה, נוגדי חמצון והגנה על הכבד, והשפעות אחרות[4-5]. מחקר זה מתכוון לבצע מחקר מקדים על המנגנון שלפנילתנואידים גליקוזידים מ- Cistanche deserticola(PGCD) בשיפור חילוף החומרים השומנים.

1 חומרים ניסיוניים

1.1 תרופות ניסיוניות

הגבעולים הבשרניים של Cistanche deserticola (תכולת לחות 8.5%) נרכשו מחברת Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd; חומרי ההתייחסות של פנילאתנואידים (מרכיבים עיקריים verbascoside ו- echinaceaside) (שניהם טוהר מעל 98%) נרכשו מ-Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.; אטורבסטטין: פייזר שנחאי; Ezetimibe: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 חיות ניסוי

עכברי זכר C57BL/6J ועכברי ApoE-/- בני 6 עד 8 שבועות, משקל גוף (20 ± 2) גרם, נרכש מ-Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., מספר רישיון: SCXK (Su) 2016-0010 , מחזור אור של 12 שעות / 12 שעות, טמפרטורה (22 ± 1) מעלות, לחות 50% ~ 60%, צריכה חופשית של מזון ומים. לפני הניסוי, עכברים הוזנו בדיאטה סטנדרטית במשך שבוע אחד כדי להסתגל. כל הטיפול והניסויים בבעלי חיים פועלים לפי התקנות של ועדת האתיקה של בעלי חיים ניסויים של האוניברסיטה הרפואית הראשונה של שאנדונג (מספר אתיקה: W202107080303).

1.3 ניסוי בנושאסוכנים

הזנה עתירת שומן: הרלן תקלד; ערכות TG, ALT, AST: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; ערכות FAS, LCAD: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; ערכת GSH-Px: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; ערכות SOD, MDA, LPO, BCA: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; ערכת Trizol: Invitrogen, Carlsbad, CA; פריימרים ACOX1 ו-CPT2: תוכנן על ידי Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 מכשירים ניסיוניים Hei - VAP מומחה מאייד רוטרי: גרמניה

היידולף; קורא microplate רב תכליתי Varioskan LUX: ThermoFisher; מייבש הקפאה ואקום FD8508: אילשין, דרום קוריאה; Homogenizer F6/10: Shanghai Fluoroco; כרומטוגרף נוזלי Agilent1260 בעל ביצועים גבוהים, ספקטרופוטומטר Cary 3500 UV: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT - מכשיר PCR: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 מסת גוף ואינדקס כבד

בסוף השבוע ה-12, העכברים צמו ונשקלו. העכברים הורדמו עם נתרן פנטוברביטל והוקרבו. הכבדים נקצרו כדי לחשב את מדד הכבד.

2.3.2 זיהוי מחוון סרום

קח את הסרום וגלה את הפעילויות בסרום אספרטאט אמינוטרנספראז (AST) ואמינין אמינוטרנספראז (ALT) ברצף בהתאם לתפעול הערכה; BCA קובע את תכולת החלבון בסרום ומזהה את תכולת ה-TG.

2.3.3 איתור גורמים הקשורים לחילוף חומרים שומנים ברקמת הכבד

בתנאים של 4 מעלות, שקלו כמות מתאימה של כבד טרי והומוגגו אותו ב-PBS, צנטריפוגה (רדיוס צנטריפוגה 7.5 ס"מ, 3 000 r/min) את ההומוגנית למשך דקה אחת, קח את הסופרנטנט ומדוד את תכולת החלבון של רקמת כבד על ידי BCA. תכולת TG ברקמה, שיטת ELISA לאיתור חומצת שומן סינתאז (FAS) ותכולת acyl-CoA dehydrogenase (LCAD) ארוכת שרשרת ברקמת הכבד.

2.3.4 איתור גורמי חמצון הקשורים לרקמת הכבד

בתנאים של 4 מעלות, שקלו כמות מתאימה של כבד טרי והומוגגו אותו ב-PBS, צנטריפוגה את ההומוגנית (רדיוס צנטריפוגלי 7.5 ס"מ, 3 000 r/min) למשך 15 דקות, קח את הסופרנטנט ומדוד את תכולת החלבון של רקמת כבד עם BCA. בצע את הריאגנטים. הוראות הקופסה מזהות פעילויות של סופראוקסיד דיסמוטאז (SOD) וגלוטתיון פרוקסידאז (GSH-Px), ובו זמנית מזהות רמות של מלונדאלדהיד (MDA) ורמות שומנים חמצן (LPO).

2. 3. 5 זיהוי RT-PCR

ביטוי mRNA ACOX1/CPT2 ברקמת כבד: קח כמות מתאימה של רקמת כבד טרייה, השתמש בערכת Trizol כדי לחלץ את סך ה-mRNA של רקמת הכבד, השתמש ב-MuLV הפוך בתעתיק כדי לסנתז cDNA, והשתמש ב-cDNA כתבנית לביצוע קרינה כמותית בזמן אמת זיהוי PCR (Qpcr). , תנאי התגובה היו: דנטורציה מראש ב-95 מעלות למשך 2 דקות; דנטורציה ב-95 מעלות למשך 10 שניות, חישול: 60 מעלות למשך 30 שניות, הארכה ב-72 מעלות למשך 35 שניות, 34 מחזורים, ולבסוף הארכה ב-72 מעלות למשך 5 דקות, וכימות בזמן אמת על ידי מנתח אוטומטי. ביטוי mRNA של ACOX1 ו-CPT2. תוכנת Rotor-gene Q. 1.7 (Qiagen) שימש לניתוח נתונים, ושיטת 2-△△Ct שימשה לספירת הרמות היחסיות של mRNA ו-GAPDH. כל קבוצת ניסויים בוצעה במקביל > 3 פעמים. רצפי הפריימר הם כדלקמן: GAPDH, במעלה הזרם: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', במורד הזרם: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, במעלה הזרם: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' במורד הזרם: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, במעלה הזרם: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' במורד הזרם: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 שיטות סטטיסטיות

SPSS 20.0 נעשה שימוש בתוכנה סטטיסטית לניתוח נתונים. נתוני המדידה הובעו כ- (x ± s). ניתוח השונות בכיוון אחד שימש להשוואה בין קבוצות. P <0.05 נחשב הבדל מובהק סטטיסטית.