מחקר של היסטופתולוגיה של הכליות ותפקודים פיזיולוגיים

איש קשר:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

אחמד פאוזי ועוד

תַקצִיר.

The purpose of this study was to analyze abnormal changes in kidney histology and physiology in acute kidney injury animal models with multiple doses of gentamicin. Induction of experimental animals was carried out on 20 rats (Rattus norvegicus) Wistar strain which was divided into 4 groups, group I was a negative control group, groups II, III, and IV are gentamicin-induced groups at doses of 30 mg/kg, 40 mg/kg, and 50 mg/kg, respectively. Kidney histopathology was stained with Hematoxylin Eosin (HE), while analysis of serum BUN and creatinine by spectrophotometric method. Data analysis for kidney histopathology was descriptive while BUN and Creatinine were statistically tested with one-way ANOVA. The results of this study showed there was kidney damage in all gentamicin-induced groups, which is necrosis in the contortions tubule and the Bowman's capsule compared to the negative control group. The group of rats with the higher doses of gentamicin showed a more severe level of histopathological changes, however, BUN and creatinine levels were not significantly different (p>0.05). מחקר זה מסיק שאינדוקציה של גנטמיצין עלולה לגרום לשינויים היסטופתולוגיים בכליות אך לא לפיזיולוגיה של הכליות.

מילות מפתח:מודל חיות, אנטיביוטיקה, BUN, קריאטינין, רעילות נפרו.

cistanche בהינדיתיכול לשפר את תפקוד הכליות

1. הקדמה

פגיעה חריפה בכליות היא מחלה של אי ספיקת כליות או נזק לכליות המתרחשת במהירות תוך פרק זמן של כמה שעות או כמה ימים. תסמינים המופיעים בשכיחות של אקוטיכִּליָהפציעותכגון כאבי בטן, פוליאוריה, אוליגוריה ואחרים(1). מחלה זו מאובחנת בעיקר על ידי מדידת רמת סמנים ביולוגיים; כגון Blood Urea Nitrogen (BUN) וקריאטינין. עם זאת, שינויים אלו בסמנים ביולוגיים לרוב אינם מתארים את המצב האמיתי של הכליות. ניתן לראות בבירור מצבי פגיעה כלייתית חריפה על ידי התבוננות מקרוסקופית ומיקרוסקופית של הכליה.פגוםכליותיכול להתאפיין בנפיחות בקליפת הכליה וגם בנמק של התא(2). בעוד שהרמות המוגברות של סמנים ביולוגיים של BUN וקריאטינין בדם מתרחשות כאשר הכליות נפגעות בכ-30% - 59 אחוזים, מלווה באנמיה ותרדמה(3). ידוע כי הכליה מסוגלת להתחדש, אך עם שיעור נזק לתאים של עד 50 אחוז, יהיה קשה לשחזר את התפקודים הפיזיולוגיים שלה כרגיל. זה גרם לחוקרים רבים לחקור חומרים שונים שיש להם השפעה פוטנציאלית לגרום לרעילות נפרו על מנת להפחית את שכיחות המחלה הזו.

בנוסף, חשוב גם ללמוד את המנגנון של פגיעה כלייתית חריפה על ידי שימוש במודלים של בעלי חיים. מודלים של בעלי חיים של פגיעה חריפה בכליות מתרחשים בגלל הנזק של הנפרון בכליות. בנפרון המורכב מהגלומרולוס, קפסולת באומן, קונטרטוס צינורי או קשת הנלה, יתרחש נמק תאים. לפי Halim, (2014) יצירת מודל של פגיעה כלייתית חריפה של בעלי חיים נמשכת כחודש(4). החומר שניתן להשתמש בו כדי לגרום לפגיעה בכליות הוא מגוון כגון תרופות. אחת התרופות שעלולות לגרום לנזק לכליות היא אנטיביוטיקה(2). אנטיביוטיקה המשמשת לעתים קרובות ליצירת מודלים של פגיעה בכליות בבעלי חיים היא אנטיביוטיקה גנטמיצין. מינוני האינדוקציה של אנטיביוטיקה כדי לעורר פגיעה בכליות משתנים מאוד. מחקרים שונים על גנטמיצין נפרוטוקסי דווחו בהרחבה, כגון במינונים נמוכים של 10 מ"ג/ק"ג BW בפרק זמן של חודשים (4), במינונים גבוהים של 60 מ"ג/ק"ג BW תוך 10 ימים (5, 6), מינונים של 100 מ"ג/ק"ג גוף משקל תוך 8 ימים (7).

כיום, השימוש בזריקת גנטמיצין בבעלי חיים עדיין משמש לעתים קרובות, בעוד שבבני אדם החלו לנטוש אותו. המינון הבטוח המשמש לעתים קרובות בבני אדם הוא 5-7 מ"ג/ק"ג BW(8), בשנה שלאחר מכן הוא יורד ל-3-5 מ"ג/ק"ג BW(9). מינון גנטמיצין שפי 10 מהמינון הבטוח ידוע כגורם לרעילות בחיות חולדות. שינוי מינון בטוח זה עשוי לאפשר גם שינויים במינונים רעילים, לכן מחקר זה נועד לנתח את השינויים ההיסטולוגיים והפיזיולוגיים של חולדות כמודלים של בעלי חיים של פגיעה בכליות חריפה עקב הזרקת גנטמיצין במינונים מרובי-רמות מ-30 מ"ג/ק"ג משקל גוף עד 50 מ"ג/ ק"ג משקל גוף.

2. חומר ושיטות

2.1. דגם בעלי חיים

20 חולדות זכר מסוג Wistar, שהתקבלו מ-de Wistar Bandung חולקו ל-4 קבוצות, קבוצה I הייתה קבוצה מבוקרת עם זריקת פלצבו, קבוצה II נגרמה על ידי מינון גנטמיצין של 30 מ"ג/ק"ג BW, קבוצה III הושרה במינון גנטמיצין ב-40 מ"ג/ק"ג BW, וקבוצה IV הושרה על ידי מינון גנטמיצין של 50 מ"ג/ק"ג BW. בעלי חיים הורדמו ביום העשירי. בדיקה היסטופתולוגית בוצעה ברקמת הכליה של חולדות לאחר ההמתה. כל החיה עמדה בהנחיות שהוכרזו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים עם מספר רישום מספר 954-KEP.

2.2. הזרקת גנטמיצין

כל חולדה קיבלה זריקה תוך שרירית יומית (בין חצי קרומי לחצי ממברנה לחצי ממברנה) של גנטמיצין סולפט (Genta-100®) למשך 10 ימים עם מינונים שונים בהתאם לקבוצתם.

2.3. בדיקת תכשירים היסטולוגיים של הכליה

איברי הכליה הוכנסו לפורמלין מבוצר של 10 אחוז לצורך הכנת ההיסטופתולוגיה. הכליה נעשתה לתכשיר היסטולוגי על ידי העברת רקמות ל-70 אחוז אלכוהול כנקודת עצירה. לאחר מכן התייבשה הרקמה עם אלכוהול רב רמות עם ריכוז של 70 אחוז למשך 24 שעות, 80 אחוז אתנול למשך שעתיים, 90 אחוז אתנול, 95 אחוז ואתנול מוחלט למשך 20 דקות. לאחר מכן הושרו האיברים בקסילול I למשך 20 דקות ובקסילול II למשך 30 דקות כדי שהאיברים יהיו נקיים. לאחר מכן הרקמה המסוננת והוטמעה בגוש פרפין 56-58 C. איבר כליה נחתך לפרוסות לעובי של 5 מיקרון באמצעות מיקרוטום סיבובי. כל חזרה נעשתה 4 חתכים במרווחים של 10 חתכים והונחו על הזכוכית של החפץ שקיבל תמיסת אלכוהול של 70 אחוז ולאחר מכן נצבע בצביעה Hematoxylin-eosin (HE)(10).

2.4. איסוף דם בחיות ניסוי

איסוף דם במודלים של בעלי חיים דרך סינוס אינפראאורביטלי באמצעות מיקרו-המטוקריט, ולאחר מכן מוכנס לתוך שואב אבק. הסרום שנוצר הוחדר למיקרו-צינורית לא קרישה לניתוח עבור BUN בסרום וקריאטינין.

2.5. מדידת רמות BUN וקריאטינין

רמות BUN וקריאטינין נבדקו באמצעות ספקטרופוטומטריה (ABX Pentra). הפיזיולוגיה של הכליות הוערכה בשיטת Jaffe הקולורימטרית (ערכות קריאטינין ואוריאה של DiaSys diagnostic systems GmbH Germany) כדי לחשב את רמות הסרום של חנקן אוריאה בדם (BUN) וקריאטינין.

2.6. ניתוח סטטיסטי

התצפיות בהיסטופתולוגיה של הכליות באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים נותחו לאחר מכן באופן תיאורי. נתוני BUN וקריאטינין נותחו באופן כמותי באמצעות החבילה הסטטיסטית לתוכנית מדעי החברה (SPSS, v20). מבחן ANOVA דרך אחת נערך כדי לראות את ההבדלים המשמעותיים בין הקבוצות (<0.05) and="" continued="" with="" the="" tukey="">

3. תוצאות ודיון

3.1. שינויים מאקרוסקופיים בכליה המושרה על ידי גנטמיצין

חולדות המושרות על ידי גנטמיצין הראו תסמינים קליניים של עייפות, חוסר פעילות, ומקרוסקופיה בשתן הראתה צבע מעט אדמדם אך הצואה הייתה תקינה, צריכת מזון ושתייה הייתה עדיין תקינה. מבחינה מקרוסקופית, גודל הכליה של חולדות הביקורת והטיפול לא היה הבדל, אך הבדלים מתרחשים מחוץ לצבע רירית הכליה בקבוצת הביקורת (איור 1a) וקבוצת האינדוקציה של gentamicin (איור 1b).

איור 1. הכליות בחולדות בקרה שליליות הן בצורת שעועית וצבען אדמדם כמו כליות רגילות (א), בעוד שהכליות בקבוצת אינדוקציה גנטמיצין נראות חיוורות יותר (ב)

3.2. שינוי בהיסטולוגיה הכלייתית של מודלים של בעלי חיים עם אינדוקציה של גנטמיצין.

תצפית מיקרוסקופית באמצעות הגדלה של פי 100 ו-400 פעמים הראתה שינוי היסטופתולוגי בקבוצת האינדוקציה של גנטמיצין. בעוד שקבוצת הביקורת שלא הושרה על ידי גנטמיצין לא הראתה שינויים מיקרוסקופיים (איור 2). הגלומרולוס הכדורי מורכב מנימים של תאי אנדותל סימפלקסים, הקפסולות של באומן היו צורה עגולה עם תאי קשקש מפושטים, צינוריות קונטורטוס פרוקסימליות עם תאי סימפלקס קובואידי עם מיקרוווילי, וצינוריות קונטורטוס דיסטליות עם תא קובאי מעוגל ללא מיקרווויליות, של לולאה של Henle עם תא קשקש פשוט מעוגל(11),

איור 2. היסטופתולוגיה של הכליות בקבוצת הביקורת השלילית (צביעת המטוקסילין-אאוזין, הגדלה של פי 100 ו-400). גלומרולוס (חץ) נורמלי עם צורה עגולה ומבנה מוצק, צינוריות פרוקסימליות (ראש חץ) עם תאים עגולים קוביים וווילות.

תמונות מיקרוסקופיות של כליות חולדה עם הזרקת גנטמיצין 30 מ"ג/ק"ג משקל גוף (קבוצה I) נראו שינויים היסטופתולוגיים בהשוואה לקבוצת הביקורת השלילית (איור 3). תאי האנדותל הגלומרולרי נשחקים, הקפסולה של באומן מתרחשת נמק והחלל של הבאומן הופך קלוש יותר. מצבם של תאים צינוריים פרוקסימליים היה נמק, אשר מוצג על ידי פירוק תאי האפיתל הקובאי סימפלקס עם ציטופלזמה וגרעיני תאים שנעלמים. תאים דלקתיים באבובית הפרוקסימלית נמצאים סביב תאי האפיתל הצינוריים המאופיינים בתאים עגולים שחורים-סגולים גדולים.

איור 3. היסטופתולוגיה של הכליה הכלייתית בקבוצת טיפול I עם אינדוקציה של 30 מ"ג/ק"ג BW (צביעת המטוקסילין-אאוזין, הגדלה של פי 100 ו-400). (חץ) גלומרולוס הראה שחיקת תאי אנדותל, (ראש חץ) הכמוסות של באומן הראו נמק ומתיחה, * Tubule contortus הראה נמק והרבה תאי דלקת.

תמונות היסטופתולוגיות של חולדות שהוזרקו עם 40 מ"ג/ק"ג משקל גוף בקבוצה II מציגות רמה חמורה יותר של נזק בהשוואה לקבוצת הביקורת והטיפול I (איור 4). הגלומרולי היו נמק ושחיקה של תאי אנדותל, החלל של באומן הופך קלוש יותר וגרעין תאי האפיתל בקפסולה של באומן היה תמוגה. תאי אפיתל קובואידי סימפלקס בצינוריות הקונטורטוס הפרוקסימליות רואים נמק ופיזור תאי אפיתל מתרחשת הן בציטופלזמה והן בגרעין. תאים דלקתיים נראים לעתים קרובות סביב נפרונים פגומים.

איור 4. היסטופתולוגיה של הכליה בקבוצת טיפול II אינדוקציה של 40 מ"ג/ק"ג BW (צביעת המטוקסילין-אאוזין, הגדלה של פי 100 ו-400). Glomerulus (חץ) הראה ספיחה של תאי אנדותל, נמצאה נמק בקפסולה של באומן (ראש החץ) והחלל של באומן נמתח, Tubular Contortus (*) היו נמק ואחריו תאים דלקתיים (עיגול).

ככל שמינוני אינדוקציה של גנטמיצין גדלו, הנזק לכליות היה חמור יותר כפי שהודגם בתמונות המיקרוסקופיות של חולדות שהוזרקו עם גנטמיצין 50 מ"ג/ק"ג משקל גוף בקבוצה III (איור 5). הנזק התרחש בכל חלקי הנפרון, כלומר גלומרולוס, קפסולת באומן, צינורית פרוקסימלית ואבובית דיסטלית. בגלומרולוס, נמק בתאי האנדותל גורם לרווח גדול יותר באזור החלל של באומן, כמוסות של באומן נראו נמק במבנה דופן תאי הקשקשי הסימפלקס, צינוריות קונטרטוס פרוקסימלית וצינוריות קונטרטוס דיסטליות נראו נמק או מסומן על ידי נמק צינורי חריף (ATN acute tubular necrosis) ), מבנה דופן תאי קשקש סימפלקס היה נמק ונראה מפורק במבנה ההיסטולוגי שלו. בחתכים הצינוריים נראו הרבה תאים דלקתיים חד-גרעיניים בתאים שעוברים נמק.

איור 5. היסטופתולוגיה של הכליות בגנטמיצין אינדוקציה מקבוצה III עם 50 מ"ג/ק"ג BW (צביעת המטוקסילין-אאוזין, הגדלה של פי 100 ו-400). פיזור תאי האנדותל גלומרולוס (חץ), הקפסולה של באומן (ראש החץ) הראתה נמק, והחללים של באומן הופכים ברורים. נמק מתרחש על Tubular Contortus (*).

מתן מינונים גבוהים של הזרקת גנטמיצין עלולה לגרום לפגיעה במבנה הנפרון המאופיין בנמק והתפלשות של תאי אפיתל בגלומרולוס, בקפסולת באומן ובצינורית אשר ישפיעו על תפקוד כליות לקוי של סינון גלומרולרי וספיגה מחדש והפרשה בצינורית הכליה. ההיבט העיקרי של גנטמיצין נפרוטוקסיות הוא ציטוטוקסיות צינורית. טיפול בבעלי חיים עם gentamicin יכול להיות קשור לאפופטוזיס(12) וכן לנמק של תאי אפיתל צינורי(13). גנטמיצין גורם לציטוטוקסיות בתאים שבהם ניתן להצטבר. בכליה, הם בדרך כלל תאי אפיתל צינוריים פרוקסימליים(14) בעוד שתאים צינוריים דיסטליים וצינורות איסוף מושפעים באופן משמעותי פחות מהשפעות ציטוטוקסיות(15). לאחר מכן התרופה מועברת לליזוזום, למכשיר Goldzi ולרשת האנדופלזמית (16). גנטמיצין נקשר לממברנת הפוספוליפידים, משנה את תפקודו וגורם למצב ידוע כפוספוליפידוזיס בבני אדם(17) ובבעלי חיים ניסויים(18). פוספוליפידוזיס ליזוזומלית נגרמת על ידי הפרעות במסלול האיתות פוספטידילינוזיטול (19), הפחתה בתחלופה של פוספוליפידים והצטברותם בממברנת הפלזמה.

פוספוליפידוזיס קשורה ישירות לרעילות גנטמיצין (20). עם זאת, שינויים דומים זוהו בסוגי תאים אחרים שנחשפו לג'נטמיצין אך ללא נזק משמעותי ומוות תאים. כאשר ריכוזי גנטמיצין באנדוזומים מגיעים לרמה מסוימת, הממברנה מופרעת ותכולתה כולל גנטמיצין משתחררת לציטופלזמה(21). בציטופלזמה, גנטמיצין פועל על המיטוכונדריה הן במישרין והן בעקיפין(22) ומפעיל את המסלול האפופטוטי הפנימי, שובר את שרשרת הנשימה, מקטין את סינתזת ה-ATP וגורם ללחץ חמצוני על ידי יצירת אניונים של סופראוקסיד ורדיקלים הידרוקסילים(23) וכתוצאה מכך למוות של תאים. כאשר קיים במספרים גדולים, cathepsin גורם לפרוטוליזה מאסיבית אשר גורמת לנמק, במיוחד בהיעדר ATP. ברטיקולום האנדופלזמי, גנטמיצין מעכב סינתזת חלבון, ומפריע לדיוק התרגום והשינוי של חלבונים לאחר תרגום (24). זה גורם ללחץ רשתית אנדופלזמית והפעלה אפופטוטית על ידי קספאז 12 וקלפין (25).

תוצאות מחקר זה דומות לתוצאות מחקר שנערך על ידי Lintong (2012). מתן גנטמיצין לחולדות מעבדה במינון של 10-20 מ"ג/ק"ג משקל גוף גרם לשינויים אופייניים ובולטים בליזוזומים של תאי אפיתל צינוריים פרוקסימליים(6). שינויים אלה הם חוסר תפקוד צינורי; ניתוק גבול המברשת ושחרור אנזימים ליזוזומליים; הפחתת ספיגה חוזרת של חלבון, סידן, מגנזיום, אשלגן וגלוקוז; phos pholipiduria, והפרשת גבס. מתן גנטמיצין במינונים מעל 40 מ"ג/ק"ג משקל גוף גורם במהירות לנמק בקורטקס הכלייתי המלווה בהפרעה בתפקוד הכלייתי.

3.3. אין שינויים משמעותיים ב-BUN וב-Creatinin בקבוצת gentamicin

One-way ANOVA results showed no significant difference between treatments (p>0.05). לפיכך, מבחן Tukey לא נמשך. ניתן לראות את רמות ה-BUN והקריאטינין הממוצעות בסרום הדם בטבלה 1.1.

לפי Johnson (2014), רמות ה-BUN בחולדות נעות בין 10-21 mg / dL(26). ואילו פגיעה חריפה בכליות מייצרת רמות BUN פי 10 מהרמות הרגילות שלהן(27). בנסיבות רגילות, BUN הוא תוצאה של חילוף חומרים של חלבון המתרחש בכבד. חומר זה יועבר דרך כלי הדם ויפרק דרך מערכת השתן בכליות כך שרמות BUN בכלי הדם יימצאו בכמות קטנה. מהערך הממוצע של כל קבוצה שהתקבל עולה כי אין הבדל משמעותי בתוך הקבוצות, אך ישנה נטייה לעלות בהתאם למינוני הג'נטמיצין הגדלים.

One-way ANOVA test results on creatinine samples showed no difference between treatments (p>{{0}}.05). הערך הממוצע של קבוצת הביקורת וקבוצת הטיפול I עדיין היה בטווח התקין של רמות קריאטינין של חולדה לבנה, שהוא 0.2 - 0.8(26). בדיקות סטנדרטיות נוכחיות לקביעת מצב תפקוד הכליות היו על ידי מדידת קריאטינין בסרום וייצור שתן. עם זאת, המדידה הראשונית של קריאטינין בסרום עשויה שלא לשקף את היקף הפציעה שכן הצטברות קריאטינין תמיד מפגרת אחרי אירועי פציעה (28). העלייה בקריאטינין בסרום יכולה להעיד על פגיעה בכליות אך יש לה יכולת מוגבלת לקבוע את הנזק בשלבים המוקדמים (29). לפי Nguyen & Devarajan (2008), רמות הקריאטינין מתחילות לעלות לאחר שהנזק לכליות מגיע ל-50 אחוז (30), כך שניתן להסיק שהנזק שנצפה בכליה הוא עדיין מתחת ל-50 אחוז.

4. מסקנה

בהתבסס על תוצאות מחקר זה ניתן להסיק ששינויים היסטופתולוגיים בכליות עקב הזרקת גנטמיצין למשך 10 ימים התרחשו בכל קבוצות הג'נטמיצין, אך חריגה זו לא הופיעה בסרום BUN ו-Creatinine. בגלל הסמן הביולוגי של העיכוב במחקר זה, הצענו להוסיף משתנה נוסף כדי לראות את הנזק החריף לכליות.

5. הכרה

הוקרה אסירת תודה מגיעה למשרד המחקר, הטכנולוגיה וההשכלה הגבוהה על תמיכה במימון באמצעות תוכנית PUPT 2017 ועל שיתוף הפעולה בביצוע מחקר זה.

הפניות

1. Alfonso AA, Mongan AE, Memah MF. Gambaran kadar kreatinin serum pada pasien penyakit ginjal kronik stadium 5 non diaalisis. יומן אלקטרוני ביומדיק. 2016;4(1).

2. Chasani S. Antibiotik Nefrotoksik: Penggunaan pada Gangguan Fungsi Ginjal. J Laporan Penelitian. 2008.

3. ק קז. מחלת כליות כרונית. לוס אנג'לס: מערכת הבריאות הנרי פורד; 2011.

4. Halim H, Achadiyani A, Tjahjodjati T. Nigella sativa עירוי כחומר נוגד חמצון נגד כליות הנגרמות על ידי גנטמיצין שנפגעו בעכברים. Althea Medical Journal. 2014;1(2):90-3.

5. MP Padmini, Kumar JV. מחקר היסטופתולוגי על נפרוטוקסיות הנגרמת על ידי גנטמיצין בחולדות לבקנים ניסויים. IOSR J Dent Med Sci. 2012;1(1):14-7.

6. Lintong PM, Kairupan CF, Sondakh PL. Gambaran Mikroskopik Ginjal Tikus Wistar (Rattus norvegicus) Setelah Diinduksi Dengan Gentamisin. יומן ביומדיק. 2012;4(3).

7. ATAMAN N, Mert H, Yildirim S, Mert NJAÜVFD. ההשפעה של פוקואידן על שינויים של כמה פרמטרים ביוכימיים ברעילות נפרו הנגרמת על ידי גנטמיצין בחולדות. 2018;65(1):9-14.

8. Freeman CD, Nicolau D, Belliveau P, Nightingale C. מינון פעם יומי של aminoglycosides: סקירה והמלצות לתרגול קליני. כתב העת לכימותרפיה אנטי-מיקרוביאלית. 1997;39(6):677-86.

9. Gentamicin [אינטרנט]. פרסומי גליון נתונים. 2005.

10. Wulandari S. Ekstraksi Tumor Necrosis Fakcor (TNF- ) dan Gambaran Histopatologi Ginjal Pada Tikus (Rattus Norvegicus) Renal Fibrosis Pasca Induksi Streptokinase. מאלנג: אוניברסיטת ברוויאיה; 2012.

11. Handani AR, Salim MN, Harris A, Budiman H. PENGARUH PEMBERIAN KACANG PANJANG (Vigna unguiculatTERHADAP STRUKTUR MIKROSKOPIS GINJAL MENCIT (Mus musculus) YANG DIINDUKSI ALOKSAN. Jurnal Medika Veterinaria.(21015.).

12. Li J, Li Qx, Xie Xf, Ao Y, Tie Cr, Song Rj. תפקידים דיפרנציאליים של אנטגוניסט סידן דיהידרופירידין ניפדיפין, ניטרנדיפין ואמלודיפין על רעילות צינורית הכלייתית הנגרמת על ידי גנטמיצין בחולדות. כתב העת האירופי לפרמקולוגיה. 2009;620(1-3):97-104.

13. Edwards JR, Diamantakos EA, Peuler JD, Lamar PC, Prozialeck WC. שיטה חדשנית להערכת נמק תאי אפיתל פרוקסימלי של צינורית בכליה שלמה של חולדה באמצעות אתידיום הומודימר. J BMC פיזיולוגיה. 2007;7(1):1.

14. Verpooten GA, Giuliano RA, Verbist L, Eestermans G, De Broe ME. מינון חד-יומי מפחית את הצטברות הכליה של גנטמיצין ונטילמיצין. J Clinical Pharmacology Therapeutics. 1989;45(1):22-7.

15. Fujiwara K, Shin M, Matsunaga H, Saita T, Larsson LI. אימונוציטוכימיה קלה-מיקרוסקופית לג'נטמיצין והשימוש בה לחקר ספיגת התרופה בכליה. J סוכנים אנטי מיקרוביאליים כימותרפיה. 2009;53(8):3302-7.

16. Silverblatt F. פתוגנזה של נפרוטוקסיות של צפלוספורינים ואמינוגליקוזידים: סקירה של מושגים עדכניים. J ביקורות על מחלות זיהומיות. 1982;4(מוסף_2):S360-S5.

17. De Broe ME, Paulus GJ, Verpooten GA, Roels F, Buyssens N, Wedeen R, et al. השפעות מוקדמות של גנטמיצין, טוברמיצין ואמיקצין על הכליה האנושית. J כליות בינלאומי. 1984;25(4):643-52.

18. Nonclercq D, Wrona S, Toubeau G, Zanen J, Heuson-Stiennon JA, Schaudies RP, et al. פגיעה צינורית והתחדשות בכליית החולדה בעקבות חשיפה חריפה לג'נטמיצין: מחקר של זמן. J אי ספיקת כליות. 1992;14(4):507-21.

19. Ramsammy LS, Josepovitz C, Kaloyanides GJ. גנטמיצין מעכב גירוי אגוניסט של מפל הפוספטידילינוזיטול בתרביות ראשוניות של תאי צינור פרוקסימליים של ארנב ובקליפת הכליה של חולדה. J Journal of Pharmacology Therapeutics Experimental. 1988;247(3):989-96.

20. Kaloyanides G. אינטראקציות בין תרופות לפוספוליפידים: תפקיד ברוקסיות נפרוטוקסית של אמינוגליקוזידים. J אי ספיקת כליות. 1992;14(3):351-7.

21. Regec AL, Trump BF, Trifilis AL. השפעת גנטמיצין על המערכת הליזוזומלית של תאים פרוקסימליים אנושיים מתורבתים: פעילות אנדוציטוטית, pH ליזוזומלי ושבריריות ממברנה. J פרמקולוגיה ביוכימית. 1989;38(15):2527-34.

22. Morales AI, Detaille D, Prieto M, Puente A, Briones E, Arévalo M, et al. מטפורמין מונע נפרופתיה ניסיוני הנגרמת על ידי גנטמיצין על ידי מסלול התלוי במיטוכונדריה. J כליות בינלאומי. 2010;77(10):861-9.

23. Cuzzocrea S, Mazzon E, Dugo L, Serraino I, Di Paola R, Britti D, et al. תפקיד לסופראוקסיד בנפרופתיה בתיווך גנטמיצין בחולדות. כתב העת האירופי לפרמקולוגיה. 2002;450(1):67- 76.

24. Horibe T, Matsui H, Tanaka M, Nagai H, Yamaguchi Y, Kato K, et al. גנטמיצין נקשר לאתר הלקטין של קלרטיקולין ומעכב את פעילות המלווה שלו. J Biochemical Biophysical Research Communications. 2004;323(1):281-7.

25. Peyrou M, Hanna PE, Cribb AE. ציספלטין, גנטמיצין ו-p-aminophenol מעוררים סמנים של מתח רשתית אנדופלזמית בכליות החולדות. J Toxicological Sciences. 2007;99(1):346-53.

26. ערכי Johnson D. Normal Lab 2014.

27. Fauzi A, Salasia SIO, Titisari N. Neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) כסמן ביולוגי פוטנציאלי לגילוי מוקדם של אי ספיקת כליות חריפה. J פתולוגיה קלינית השוואתית. 2016;25(2):387-92.

28. Lameire N, Hoste EJCoicc. הרהורים על הגדרה, סיווג והערכה אבחנתית של אי ספיקת כליות חריפה. 2004;10(6):468-75.

29. Devarajan P. סמנים ביולוגיים מתעוררים של פגיעה חריפה בכליות. פגיעה חריפה בכליות. 156: הוצאת Karger; 2007. עמ'. 203-12.

30. Nguyen MT, Devarajan PJPn. סמנים ביולוגיים לגילוי מוקדם של פגיעה כלייתית חריפה. 2008;23(12):2151.